IMPACTO DE LA INMUNOLOGIA EN EL LABORATORIO DE DIAGNOSTICO CLINICO

TEMA 3. LA INMUNOLOGÍA EN EL LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO CLINICO EN EL SIGLO 21.

Dr. Javier Carbone

Metodología del Laboratorio Diagnóstico de Inmunología

Las pruebas analíticas de base inmunológica que se realizan en los laboratorios, reflejan los avances producidos en la Inmunología en los últimos años.

Metodología del Laboratorio Diagnóstico de Inmunología

Estos avances se deben a:La investigación básica.A una mejor comprensión de las bases inmunológicas y moleculares de las enfermedades.A las observaciones empíricas y de investigación clínica efectuadas en los pacientes.

Definición de la Inmunología: OMS

La Inmunología es una disciplina que trata del estudio, diagnóstico y tratamiento de pacientes con enfermedades causadas por alteraciones de los mecanismos inmunológicos y de las situaciones en las que las manipulaciones inmunológicas forman una parte importante del tratamiento y/o de la prevención.

Metodología del Laboratorio Diagnóstico de Inmunología

El Enfoque traslacional: Debe haber una proyección del dato de laboratorio hacia su uso en el paciente.

La investigación básica debe estar orientada a su potencial aplicabilidad en el diagnóstico y tratamiento de enfermos

La investigación clínica debe servir para orientar las pruebas que son necesarias y útiles.

El Enfoque traslacional: Debe haber una proyección de la clínica hacia el laboratorio.

INMUNOQUIMICA-I

Inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM, IgD, IgE. Subclases de IgG e IgA.IgA secretora.Anticuerpos específicos (anti-antígenos proteicos y polisacáridos).Inmunoglobulinas en otros fluidos biológicos.Complemento: componentes y funcional.Proteina ligadora de manosa.Productos de activación del complemento.

INMUNOQUIMICA-II

Proteínas inflamatorias (Proteina C Reactiva).Inmunocomplejos circulantes.Inmunoglobulinas y bandas oligoclonales de IgG en líquido céfalo raquídeo.Paraproteínas. Crioglobulinas. Citocinas, quimiocinas y receptores solubles en el plasma y en fluidos del organismo.Adenosindesaminasa y purín-nucleótido fosforilasa.

INMUNOALERGIA

Métodos in vitroCuantificación de IgE total IgE específica.IgG específica

Métodos in vivoPruebas cutáneasHipersensibilidad inmediata y tardíaProvocaciones

INMUNIDAD CELULAR-I

Subtipos y estado funcional de linfocitos.Fenotipo y función de fagocitos (neutrófilos, monocitos/macrófagos)Fenotipo de células stem. Clonalidad de las células linfoides.

INMUNIDAD CELULAR-II

Respuesta proliferativa in vitro (Proliferación, CFSE).Producción de inmunoglobulinas, citocinas.Pruebas cutáneas de hipersensibilidad retardada.Citotoxicidad. Apoptosis linfocitaria.Quimiotaxis.Fagocitosis.

AUTOINMUNIDAD

Ac. No órganoespecíficos

Ac. Organospecíficos

Células T autoreactivas

Células B autoreactivas

Inmunogenética

Diagnóstico prenatal y herencia de enfermedades inmunitarias de origen genético.Diagnóstico molecular de inmunodeficiencias:Expresión y actividad de proteínas alteradas.Inactivación del cromosoma X.Polimorfismo de conformación de cadenas sencillas.Polimorfismos de la longitud de fragmentos de restricción.

Diagnóstico de síndromes linfoproliferativosReordenamiento de las cadenas pesadas de inmunoglobulinas y del receptor de célula T.

Inmunogenética e inmunología del trasplante Tipaje HLA (técnicas serológicas y moleculares).

Ac. citotóxicos anti-antígenos HLA:Prueba cruzada. PRA, citometría de flujo, Luminex, ELISA.Respuesta celular específica frente a antígeno de donante (ELISPOT).

Sistema KIR

Genómica y proteómica

• Diagnóstico de enfermedades.• Predisposición a enfermedad.• Genes y proteinas implicados en

mecanismos de enfermedad.• Genes y proteinas implicados en

mecanismos de la respuesta inmune.

Técnicas de base inmunológica en Hematología

Hematologia

• Aglutinación: Test de coombs, grupos sanguíneos.

• ELISA: serología VHB, VHC: Bancos de sangre.

• Citometría de flujo: subpoblaciones linfocitarias: TMO, leucemia, linfoma.

Técnicas de base inmunológica en Anatomía Patológica

Anatomía PatológicaInmunohistoquímica I • Diagnóstico, clasificación y estadiaje de

tumores sólidos y sindromes linfoproliferativos.

• Antígenos asociados a tumores (ACE).• Predicción del comportamiento del tumor,

potencial invasor, potencial metastásico (catepsina D).

• Expresión de oncogenes (N-myc, c-myc) o genes supresores.

Anatomía Patológica

Inmunohistoquímica II • Analisis de moléculas de adhesión,

proliferación tumoral (Ki-67, PCNA)• Angiogenesis tumoral.• Predicción de respuesta a tratamiento

(receptor estrógeno, receptor de progesterona).

Anatomía Patológica

• Inmunofluorescencia directa e indirecta: diagnóstico de enfermedad cutánea o renal (vasculitis).

• Microscopía inmunoelectrónica• Depósitos de C4d en injertos.

Técnicas de base inmunológica en Bioquímica Clínica

Bioquímica clínica• Radioinmunoensayo: hormonas (PTH),

receptores de hormonas, peptidos (péptido C), digoxina, beta-2-microglobulina.

• Inmunoensayo de polarización fluorescente (FPIA): ciclosporina, bilirrubina.

• ELISA con detección de fluorescencia: hormonas.

• ELISA con detección de quimioluminiscencia: hormonas.

Técnicas de base inmunológica en Microbiología

Microbiología

• ELISA: Serología IgG o gM: anticuerpos anti-CMV, toxoplasma, rubeola, herpes, etc.

• Inmunoensayo en fase sólida• Inmunoblot: Western-blot: confirmación

VIH; RIBA: VHC.• Fluorescencia: IFD: treponema.

Microbiología

• DTH: tuberculosis, lepra.• Ac. Neutralizantes anti antígenos

virales.• Aglutinación (anti-H, anti-O salmonella)• Fijación del complemento.• Citometría de flujo: detección de células

infectadas, detección directa de virus.