BIENVENIDOS……..

HISTOLOGÍA Y

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

Objetivos de un estudiante de Medicina VeterinariaOrganismos

AnatomíaRamas de la Anatomía:

Macroscópica y Microscópica

NIVELES DE ORGANIZACIÓN DELOS ORGANISMOS ANIMALES

Átomos Moléculas Células Tejidos Órganos Sistemas

HISTOLOGÍA Definición Importancia Métodos o técnicas histológicas: Definición Tipos:

Cultivo de células InjertosColoraciónExcisión

MicrodisecciónMicroincineraciónFotografíaInyecciones

CULTIVO DE CÉLULAS

DEFINICIÓNCONDICIONES IDEALES PARA EL CULTIVO DE CÉLULAS:

Medio nutritivo

pH

Medio estéril

Temperatura

INJERTOS

DEFINICIÓN

TIPOS:

Autoinjerto Homólogo Heterólogo Isólogo

MÉTODO DE COLORACIÓN

DEFINICIÓN

COLORANTESALES SOLUBLES EN AGUA Colorantes con carga ( - )= Ácidos Colorantes con carga ( + )= Básicos

CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES

SEGÚN SU ORIGEN 1. NATURALES: Animal (Carmín) Vegetal (Hematoxilina)

2. ARTIFICIALES: Pigmentos minerales (Azul de Prusia) Derivados anilínicos (Eosina)

CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES

Según su radical químicoÁcidos (Eosina)Básicos (Hematoxilina)Neutros (Giemsa)

Según su afinidad por los componentes celulares:Citoplasmáticos (Eosina)Nucleares (Hematoxilina)

Núcleos EucromáticosNúcleos Heterocromáticos

TIPOS DE COLORACIONESORTOCROMÁTICA

METACROMÁTICA

PROGRESIVA

RETRÓGRADA

POR IMPREGNACIÓN

VITAL

Intravital Supravital

MÉTODOS DE COLORACIÓN

Coloración de rutina

Coloraciones especiales

Histoquímica

COLORACIÓN DE RUTINA

DEFINICIÓN

HEMATOXILINA y EOSINA (H-E)

COLORACIONES ESPECIALES

DEFINICIÓN

TIPOS

GIEMSA: Frotis sanguíneos

TRICRÓMICA MALLORY-AZAN: Fibras colágenas (azul)

TRICRÓMICA DE MASSON: Fibras colágenas (azul)

GRAM: Bacterias ( + ) violeta ( - ) rosado

GROCOTT: Hongos (Negro)

VON KOSSA: Calcio (Negro)

HISTOQUÍMICA

DEFINICIÓN

CLASIFICACIONHistoquímica enzimáticaInmunohistoquímica

HISTOQUÍMCA ENZIMÁTICA DEFINICIÓN PROCEDIMIENTO

TEJIDO + ENZIMASUSTRATO PRODUCTO

INCOLORO

PRECIPITADOINSOLUBLE

COLOREADO

INMUNOHISTOQUÍMICA

DEFINICIÓN

PROCEDIMIENTO

ANTÍGENO ANTICUERPO ANTICUERPO + COLORANTES FLUORESCENTES

REACCIÓNANTÍGENO-ANTICUERPO

HISTOLOGÍA Definición Importancia Métodos o técnicas histológicas: Definición Tipos:

Cultivo de células InjertosColoraciónExcisión

MicrodisecciónMicroincineraciónFotografíaInyecciones

Técnica para la preparación de tejidos

Técnica de la Parafina

Técnica de la Celoidina

Técnica de Congelación

TÉCNICA DE LA PARAFINA

DEFINICIÓN

PROCEDIMIENTO TÉCNICO

1. Recolección de la muestra2.Fijación3.Lavado4.Deshidratación5.Aclaración6.Inclusión en parafina

1) RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA

BIOPSIANECROPSIA:

Muerte del animal (Natural o Eutanasia)Extracción de los órganosReducción de las piezas:

TamañoRecolección rápida

2) FIJACIÓN

DEFINICIÓN

FIJADORTipos: Físicos Químicos

FIJADORES FÍSICOS

POR DESECACIÓN

POR CALORSecoHúmedo

POR FRÍO

POR CONGELACIÓN

FIJADORES QUÍMICOSSIMPLES

Formol bufferado al 10%Formol al 4%Alcohol etílicoAlcohol metílicoÁcido ósmico del 1 al 2 %Oxidantes:

Bicloruro de mercurio y potasioÁcido acéticoÁcido pícricoÁcido crómico

…FIJADORES QUÍMICOS

COMPUESTOS

Líquido de BouinLíquido de Zenker

Líquido de HellyLíquido de Fleming

…FIJADORES QUÍMICOS

VOLUMEN 1:10

CONDICIONES QUE DEBE TENER UN BUEN FIJADOR:

Alto poder de penetración

Evitar los procesos autolíticos

Endurecimiento

3) LAVADO

DURANTE 1 HORA

AGUA CORRIENTE

4) DESHIDRATACIÓNPRINCIPIO

TIPO DE ALCOHOL

EN GRADOS CRECIENTES DE CONCENTRACIÓN

1 HORA CADA UNO

AUTOTECNICÓN

5) ACLARACIÓNDEFINICIÓN

TIPOS DE AGENTES ACLARANTES

XilolCloroformoBencenoTolueno

3 PASES

1 HORA CADA PASE

6) INCLUSIÓN EN PARAFINAINCLUSIÓN: 2 pasos

Impregnación o preinclusión

Inclusión definitiva (Formación del bloque)

FIGURA N° 3

PREPARACIÓN DE LAS LÁMINAS

CORTE DEL TEJIDO

RECOLECCIÓN DEL CORTE O CINTA

ESTUFA (37°C)

CORTE DEL BLOQUE DE PARAFINA

DEFINICIÓN

MICRÓTOMO

CORTES DE LAS CINTAS

RECOLECCIÓN DEL CORTE O PESCA

BAÑO DE FLOTACIÓN (37°C)

FINALIDAD

PESCA

FIG. N° 6

ESTUFA

PROCESO DE COLORACIÓN

DESPARAFINACIÓN

HIDRATACIÓN

TINCIÓN

DESPARAFINACIÓN

XILOL

3 PASES

5 MINUTOS c/u

HIDRATACIÓN

DEFINICIÓN

5 MINUTOS

COLORACIÓN DE RUTINADEFINICIÓNPROTOCOLO:Hematoxilina 10´Lavado con agua 15´Diferenciar los componentes con alcohol ácido.Virar al color azul sustancias AlcalinasLavado con agua corrienteEosina acuosa 3 deepsLavado con agua 15´Deshidratación 5´Aclaración 3 pases 5 minutos c/u

FIG. N° 7

MONTAJE

Mar-texEntellánPermount

SECADO AL AIRE

MICROSCOPIO

HISTORIAHISTORIADEFINICIÓN DEFINICIÓN CLASIFICACIÓN Según el tipo de luz:CLASIFICACIÓN Según el tipo de luz: Óptico o de LuzÓptico o de Luz ElectrónicoElectrónico

MICROSCOPIO

MICROSCOPIOS ÓPTICOS propiamente dichoMICROSCOPIOS ÓPTICOS propiamente dicho

MICROSCOPIOS ÓPTICOS especialesMICROSCOPIOS ÓPTICOS especiales

MICROSCOPIOS ÓPTICOS

Microscopio óptico simpleMicroscopio óptico simple

Microscopio óptico compuestoMicroscopio óptico compuesto Partes: Partes:

MICROSCOPIO ÓPTICOPROPIAMENTE DICHO

MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES

DE LUZ ULTRAVIOLETA

DE FLUORESCENCIA

DE CAMPO OSCURO

CONTRASTE DE FASE

DE LUZ POLARIZADA

INTERFERENCIA

MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

De transmisión

De barrido

De fuerza atómica

…MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

Microscopio Electrónicode Transmisión

…MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

Microscopio Electrónicode Barrido

…MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

Microscopio de Fuerza Atómica

Recomendac i ónDedícate, al menos, una hora del día para

aprender otro idioma, música, arte o practicar algún deporte ……..