INVESTIGACIÓN SALMONELLA

IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA

Permite la identificación genérica de los cultivos de Salmonella y eliminación de cultivos sospechosos falsos

CARACTERISTICAS El genero Salmonella es de la familia Enterobacteriaceae , bacilos Gram Negativos, aerobios y anaerobios facultativos producen ácido a partir de la glucosa.

METODO TSI LIA Y MIO

Se toman 2 colonias aisladas sospechosas y se transfiere a los tubos:

TSI: siembra en picadura al fondo y estriado en la superficie

LIA: Por picadura al fondo y estriado en superficie

MIO: Por picadura al fondo y estriado en superficie

INCUBAR POR 24h a 35°C

RESULTADOS TSI

SUPERFICIE (Rojo=alcalino ; Amarillo=ácido)

Superficie roja/fondo amarillo: el microorganismo solamente fermenta la glucosa. *

Superficie amarilla/fondo amarillo: el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

Superficie roja/fondo rojo: el microorganismo es no fermentador de azúcares.

La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.

El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.*

Las Salmonella dan la siguiente reacción sobre TSI:

Alcalina (rojo) en la superficie inclinada.

Acida (amarillo) en el fondo.

Con o sin producción de SH2: (ennegrecimiento o no del medio)

*Solo fermenta Glucosa

RESULTADOS LIA

1- Decarboxilación de la lisina:

-Prueba Positiva: Superficie violeta/fondo violeta.

-Prueba Negativa: Superficie violeta/fondo amarillo.

2-Desaminación de la lisina:

Superficie rojiza/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.

3-Producción de ácido sulfhídrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite de la superficie y fondo)

Las Salmonella dan la siguiente reacción sobre LIA:

Alcalina (violeta o rojizo) en el fondo del tubo = Lisina Descarboxilasa positiva

Producción de H2S (ennegrecimiento del medio)

NOTA

SI SE PRESENTA UN TSI NEGATIVO Y H2S POSITIVO EN LIA: RETENGA ESTE ULTIMO PARA Salmonella arizonae UTILIZANDO CALDO MALONATO

GUARDAR CULTIVOS CARACTERISTICOS DE Salmonella PARA PRUEBAS ADICIONALES (SIM, SIMMONS, CALDO MANITOL, MR-VP)

RESULTADOS MIO

1-Movilidad:

-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra.

-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.

2-Ornitina decarboxilasa:

-Resultado positivo: color púrpura.

-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio.

3-Prueba del indol:

La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.

-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo Kovac.

-Resultado negativo: el color del reactivo Kovac permanece incoloro-amarillento.

Las Salmonella dan la siguiente reacción sobre MIO:

Puede presentarse:

-Resultado positivo: Turbidez o intensificación del color (Ornitina descarboxilasa) y crecimiento mas allá de la siembra (movilidad)

-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra

INDOL NEGATIVA, SON INMOVILES PERO PRESENTAN MOVIMIENTO OSCILANTE, POSITIVAS A LA DESCARBOXILACION DE ORNITINA

CHRISTENSEN MEDIO (UREA AGAR BASE)

Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica.

Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Las Salmonella NO hidrolizan la Urea, Son UREASA NEGATIVA, presentan el color amarillo

REPORTE DE RESULTADOS

REPORTAR COMO PRESENCIA O AUSENCIA DE Salmonella por gramo o mL de muestra

En general Salmonella es negativa a las pruebas de: ureasa, indol, lactosa y sacarosa, oxidasa, xilosa y positiva a las pruebas de descarboxilación de lisina y ornitina, glucosa y catalasa, así como generalmente producen H2S , citrato y TSI positiva, pero existen variantes atípicas con reacciones positivas a lactosa o no descarboxilación de lisina.