UNAM FACULTAD DE PSICOLOGÍA.SUA

Maestro José Méndez Venegasjosemv@unam.mx

Unidad 2

Técnicas de Imagenología

CerebralTinciones

Ciudad de México, 2012

Para utilizar el contendio de esta presentación, favor de citar la fuente

Análisis de imágenes de células

nerviosas obtenidas mediante

técnicas de tinción.

Nitrato de plata

Violeta de cresil

Otras técnicas de tinción

Tinciones para el análisis de

células cerebrales

Tinción de Nissl

Es un método fundamental que utiliza colorantes

acidófilos como el azul de metileno, el violeta de

cresilo, la tionina, la hematoxilina, el azul de

toluidina o el rojo neutro, que se unen al ARN

contenido en los ribosomas, tiñendo el núcleo, el

nucléolo y los ribosomas del retículo

endoplasmático rugoso o sustancia de Nissl.

En las células gliales solamente se tiñen los

núcleos.

Con esta tinción no se logran visualizar las

ramificaciones de las neuronas.

Tintura de Nils Cuerpos de tres neuronas multipolares del asta

ventral de la materia gris de la médula espinal, con las características

típicas del soma incluyendo los nucleolos prominentes (flecha verde)

dentro de un gran núcleo leptocromático y grumos de sustancia de

Nissl o poliribosomas rER (flecha roja). La sustancia de Nissl o

cromática se extiende desde la base de cada dendrita (D) pero no

dentro del promontorio que da nacimiento al axon

Tinción de Nils que ilustra la tinción en neuronas,

células gliales y células endoteliales de los

capilares sanguíneos de la corteza cerebral

humana

Hipocampo humano con tinción de Nissl mostrando

la citoarquitectura y la distribución de los campos

neuronales.

Hipocampo humano con Tinción de Nissl, procedente

de un paciente epiléptico, se observa un patrón de

esclerosis de hipocampo, con extensa muerte neuronal

(marcada con asteriscos).

Soma neuronal del asta ventral de la médula

espinal de rata.

Las estructuras basófilas aparecen teñidas de

color azul.

Tinciones por medio de

impregnación con metales

Técnicas con nitrato de plata

reducido : Bielschowsky, Bodian,

Cajal, Glees, Nauta, que

utilizan compuestos con nitrato

de plata para posteriormente

tratarse las muestras con alguna

sustancia reductora.

Tinción de Cajal del

nucléolo y otros

componentes de una

célula piramidal.

Tinción de Cajal en donde se observan

fibras y axones colaterales en células de

Purkinje.

Neurona del bulbo raquídeo

Tinción de Cajal

Tinción de Golgi

Se basa en la adición de nitrato de plata y

dicromato potásico en un tejido, formando

un denso precipitado marrón oscuro que

impregna completamente las células del

sistema nervioso. Con este método se

obtiene acceso a la morfología completa de

las neuronas y células gliales, y asimismo

el marcaje de los axones de las neuronas

permite obtener información acerca de la

conectividad de las distintas regiones

cerebrales.

Permite diferenciar

morfológicamente cada una de

los tipos celulares del cerebro y

además ayuda a agruparlas

según sus características

externas. La técnica tiñe

selectivamente un porcentaje

muy bajo de células

Tinción de Golgi para células piramidales.

Neurona piramidal de la corteza cerebral

teñida con una

modificación del método de Golgi.

Tinción de Golgi de la corteza cerebral en donde

el precipitado negro permite observar a las

neuronas y los astrocitos

A. Neurona piramidal que exhibe el soma y su arborización

dendrítica en diferentes planos de profundidad (Técnica

de Golgi y Colonnier)

B. Neurona piramidal a partir del soma .Abajo en el centro,

se desprende hacia arriba la dendrítica apical (Tinción de

hematoxilina y eosina)

En esta imagen se observa

un corte delgado de

cerebro de gato teñido por

dos procedimientos:

la Tinción de Nissl, que tiñe

TODOS los cuerpos

celulares de violeta y la

Tinción de Golgi que

muestra los perfiles de

algunas neuronas teñidos

de negro observándose las

siluetas de los cuerpos

celulares y sus

prolongaciones. El método

de Golgi tiñe el 5 % o

menos de las neuronas.

Si se tiñeran todas las

neuronas del tejido el corte

parecería casi totalmente

negro.

Tinciones para mielina

Se basan en el uso de colorantes con

afinidad por las proteínas unidas a los

fosfolípidos. Sirven para identificar

tractos de fibras. En neuropatología se

utilizan combinaciones de tinciones

para Nissl y mielina.

1. Con tetróxido de osmio. Tiñe tejidos grasos

de color pardo.

Muestra de una fibra

de mielina preparada

con tetróxido de

osmio Se observa un

nodo de Ranvier a

través de la mitad de

ella. La tinción más

oscura de la mielina

se interrumpe en el

nodo, donde la fibra

está cubierta sólo por

el citoplasma de la

célula de Schwann.

Fibras separadas teñidas con tetróxido de osmio,

mostrando degeneración axonal.

Corte semifino teñido con colorante de Richardson

mostrando engrosamiento de dos fibras nerviosas,

una de ellas mielinizada y la otra con una lámina fina

de mielina.

2.Klüver-Barrera

Utiliza reactivos como azul de luxol rápido,

ácido periyódico de Schiff (PAS) y

hematoxilina. Permite marcar de un color los

somas y de otro color la mielina de los

axones, permitiendo detectar las principales

rutas por las que las neuronas se proyectan

a otras áreas. El colorante rojo neutro se

utiliza para teñir los cuerpos de la sustancia

gris y el colorante azul de luxol pone de

manifiesto las vías de la sustancia blanca.

Núcleos y grumos de Nissl color rojo-violeta. Vainas

de mielina azul oscuro.

Método de Klüver- Barrera para núcleos,

grumos de Nissl y vainas de mielina

Fragmento de

corteza cerebral

que contiene

neuronas

corticales,

piramidales

(flechas). Tinción de

Klüver-Barrera.

Intoxicación aguda por disolventes. Corte

hemisférico del cerebro con necrosis del centro

oval. Tinción de mielina, luxol fast blue-KIüver

Barrera.

Tinciones para la glía

Tinción de Cajal que utiliza oro

sublimado. Este método permite

identificar los dos tipos de células

neurogliales de la corteza cerebral,

especialmente, los astrocitos

protoplásmicos rebeldes a la tinción con

otros métodos. Esta técnica posibilitó

describir detalles como los pies

chupadores de las células de la astroglía

en la sustancia blanca de cerebros

humanos

Sección del cerebro de un paciente con la

enfermedad de Alzheimer teñido con el método de

Cajal con oro sublimado

Proximidad a una vena sanguínea

Tinción de Cajal con oro sublimado

Para revelar neurotransmisores

Fluorescencia inducida por formaldehído

y ácido glioxílico.

Este método permita la visualización de

monoaminas debido a su unión con el

formaldehído y provee una estimación

semicuantitativa de las terminales

monoaminérgicas y la distribución de la

densidad de los cuerpos celulares en los tejidos

del Sistema Nervioso Central de los mamíferos.

Neurona de rata marcada con fluorescencia

Foto tomada con microscopía laser confocal; tinción

con anticuerpos contra tubulina en neuronas cultivadas

in vitro.

Inmunocitoquímica

Las técnicas inmunocitoquímicas son un tipo de

técnicas histológicas que permiten identificar

elementos del Sistema Nervioso como orgánulos

celulares, neurotransmisores, enzimas de síntesis

o de degradación de neurotransmisores,

receptores para neurotransmisores, etc.

La técnica consiste en crear artificialmente

sustancias químicas que reconozcan

específicamente al elemento que se quiere

estudiar; estas sustancias reciben el nombre de

anticuerpos.

Detección de la molécula tirosina hidroxilasa mediante

inmunocitoquímica usando un anticuerpo primario sin

marcar, un anticuerpo secundario conjugado con biotina y

el complejo avidia-biotina-peroxidasa.

Detección con inmunofluorescencia de dos antígenos en una

sección de tejido nervioso: la molécula tirosina hidroxilasa (a la

izquierda) y el neuropéptido Y (a la derecha), usando fluoresceína y

texas red como fluorocromos, respectivamente, mediante un

método de marcaje indirecto. En esta sección la tirosina hidroxilasa

aparece en cuerpos celulares (flecha) mientras que el neuropéptido

Y aparece en fibras. El asterisco indica donde está la célula con

tirosina hidroxilasa, pero no emite luz visible porque la foto se ha

tomado iluminando la sección con una longitud de onda que no

excita a la fluoresceína.

Una vez extraído del cerebro y

preparado el tejido, se incuba en una

solución que contiene el anticuerpo que

se unirá al elemento a estudiar.

Posteriormente, se procede a la

localización del anticuerpo porque éste

emite señales bajo cierta condiciones,

por ejemplo, señales radioactivas u

fluorescentes o porque lo exponemos a

un segundo anticuerpo que reconoce al

primero y que emite una señal.

Estas técnicas pueden utilizarse

también para medir la actividad

cerebral a través de detectar

proteínas que se sintetizan

cuando las neuronas se activan

gracias a los genes de acción

inmediata

Secciones del cerebro del ratón inmunoteñidas con un anticuerpo

antineuroglobina.

A. Corteza

B. Hipocampo y surco dentado

C. Tallo cerebral

D. Cerebelo y células de Purkinje.

Cerebro, neuronas y células gliales teñidas

con una técnica inmunohistoquímica

Células de Purkinje del Cerebelo con tinción de Golgi,

fotografía obtenida de una preparación original del

laboratorio de Golgi en el Istituto di Patologia nella

Università di Pavia

Estas imágenes se obtuvieron de cortes de tejido nervioso tratados

con impregnaciones argenticas

Las células que observamos en la imagen A son neuronas

piramidales y en la B astrocitos fibrosos

BIBLIOGRAFÍA

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