Post on 08-Aug-2020
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Una dieta altoÁcido Fólico/bajaVitamina B12 durante la gestación y lactancia, afecta el estrés oxidativo y el perfil de ácidos
grasos en madres y en sus crías
Erika Castaño-Moreno1,2, Valeska Castillo2, Daphne Álvarez2, Miguel Llanos2, Ana María Ronco2
1Estudiante (c) de Doctorado en Nutrición y Alimentos – Universidad de Chile. 2Laboratorio de Nutrición y Regulación
Metabólica, Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos – Universidad de Chile.
Fondecyt #1130188 (AMR), Beca Abraham Stekel 2016 – INTA (EC-M), CONICYT-PCHA/Doctorado Nacional 2017- 21170259, Chile
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Declaración de Intereses: - No tenemos ningún conflicto de interés que declarar
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Ácido Fólico y Vitamina B12 en Chile
Fortificación de harina de trigo (2000) →
2.5 mg AF/kg de producto (Informe MINSAL 2011)
Más alta de la Región (David, 2004)
Suplementación con AF → 1000 µg/día (Gúia perinatal MINSAL 2015)
↑ OMS (400 µg/día)
Post-fortificación (2003) → >700 Mujeres en
edad fértl → 23% = B12 <185 pmol/L (Hertrampf, et al,
2003)
↑ Folatos/Vitamina B12 en suero de sangre de CU
de recién nacidos pre-término vs término (Castaño, et
al, 2017)
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Desbalance ↑ Folatos ↓ Vitamina B12
↓
Castaño, et al, 2017
↓ SAM
PE-DHA
↓ PEMT
PC-DHA
↓LC-PUFA ➜
Alteraciones en el embarazo y mayor
riesgo de daño metabólico en la
descendencia
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Diseño experimental
Cruza
Preñéz, 19 Días
Cesárea, día 18
Lactancia, 21 días
Destete, día 21
60 días
Eutanasia
Plasma Placentas
Hígado
2 meses
Acondicionamiento
Plasma Hígado
C57BL/6
Growth: Pregnancy, Lactation, young pups (<60 días). (J Nutr. 1993 Nov;123(11):1939-51)
AIN-93 G/M diet. Research Diets, Inc
Control highFA/lowB12
Growth Adults Growth Adults
Calories (Kcal/g) 4.00 3.85 3.96 3.81
Carbohydrates (%) 63.9 75.9 63.9 75.9
Fats (%) 15.8 9.4 15.8 9.4
Proteins (%) 20.3 14.7 20.3 14.7
Folic Acid (mg/kg diet) 2.0 2.0 8.0 8.0
Vitamin B12 (ug/kg diet) 25.0 25.0 5.0 5.0
Homocisteína
TBARS (MDA)
Proteínas oxidadas
Glutatión y Acidos grasos
Crías hembras: C: n= 8. altoAF/bajaB12 : n=13
Crías machos: C: n= 6. altoAF/bajaB12 : n=9
Madres C : n= 5. altoAF/bajaB12 : n=8
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Cuál fue el efecto de la dieta
altoAF/bajaB12 sobre el estrés oxidativo en placentas e hígado de madres y crías?
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En madres, una dieta altoAF/bajaB12 induce hiperhomocisteinemia y mayor lipoperoxidación en hígado
p = 0.033
p = 0.008 Homocisteína Malondialdehido
Proteínas oxidadas Glutatión
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Una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor lipoperoxidación en placentas
p = 0.027
Malondialdehido
Glutation
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En crías, una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor peso corporal al destetete
21 28 35 41 49 56 630
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25
30
Days
Bo
dy W
eig
ht (g
ram
s)
Control highFA/lowB12
*
A
21 28 35 41 49 56 630
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15
20
25
Days
Bo
dy W
eig
ht (g
ram
s)
Control highFA/lowB12
*
B
Curva de Peso
Machos Hembras
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En crías hembras, una dieta altoAF/bajaB12 induce menor estrés oxidativo y mayor respuesta antioxidante en hígado
Homocisteína Malondialdehido Proteínas oxidadas
Glutathione (nmol/mg
protein)
Control altoAF/bajaB12 Males (n=6) Females (n=8) Males (n=9) Females (n=13)
Reduced GSH 0.13 (0.03 - 0.16) 0.08 (0.07 - 0.09) 0.09 (0.06 - 0.11) 0.18 (0.15 - 0.25)* #
GSSG 0.00 (0.00 -0.00) 0.02 (0.01 - 0.10) 0.06 (0.03 - 0.15)** 0.15 (0.13 - 0.18)
Total GSH 0.07 (0.05 - 0.08) 0.09 (0.06 - 0.39) 0.20 (0.15 - 0.31)*** 0.44 (0.43 - 0.57)
Los datos son presentados como mediana (P25-P75). * p= 0.01; ** p=0.013; *** p= 0.018; p= 0.007, Grupo altoAF/bajaB12 vs Control. # p= 0.005,
p=0.002 crías hembras vs crías machos dentro del grupo altoAF/bajaB12 . Test de Mann Whitney.
Control altoF/bajaB12
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Cuál fue el efecto de la dieta
altoAF/bajaB12 sobre los ácidos grasos en hígado de madres y crías?
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En madres, una dieta altoAF/bajaB12 induce menor contenido de AGS, AGM, AGPI, mayor razón n3/n6 y DHA/AαL en hígado
Fatty Acid (mg/100g tissue) Control Group (n=5) highFA/lowB12 Group (n=8) P Value
Total Saturated Fatty Acids 2606 (2283- 2786) 725 (626 - 897) 0.0281
Total Fatty Acid Monounsaturated 2752 (2674 - 2818) 350 (342 - 443) 0.0281
Total Fatty Acids Polyunsaturated 2080 (1864 -2100) 750 (690 - 1034) 0.0281
Total LC-PUFAs 901 (794 - 903) 532 (482 - 715) 0.0570
Total n3 476 (431 - 490) 237 (217 - 323) 0.0281
Total n6 1604 (1433 - 1610) 516 (471 - 711) 0.0281
n3/n6 Ratio 0.30 (0.29 - 0.30) 0.46 (0.41- 0.49) 0.0281
DHA 406.3 (372.1 - 423.3) 221 (205 - 303) 0.0570
EPA 6.4 (6.3 - 11.7) 0.0 (0.0 – 5.1) 0.0160
DHA + EPA 418 (378 - 429) 222 (206 - 305) 0.0404
DHA/Linolenic Acid 10 (9.8 - 11.1) 45 (37 - 49) 0.0446
EPA/Linolenic Acid 0.2 (0.2 - 0.3) 0.1 (0 - 1) 0.4601
AA/Linoleic Acid 0.4 (0.3 - 0.4) 1.4 (1.1 - 1.6) 0.0192
↑ Razón
Producto
Precursor
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En madres, una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor expresión de PPARα y CPT-1 en hígado
Control highFA/lowB120.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Re
lati
ve
Ex
pre
ssio
n (
RQ
) -
CP
T-1
* p=0.0159
n=5 n=4
Control highFA/lowB120.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Re
lati
ve
Ex
pre
ss
ion
(R
Q)
- P
PA
Ra
n=5 n=4
* p=0.0317
Figure 2. Liver of female offspring. (A) PPARα. (B) mRNA expression of CPT-1. (C) mRNA expression of ACOX1.
(D) mRNA expression of FAS.
PPARα y CPT-1 = β-Oxidación mitocondrial.
Control highFA/lowB120.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Rela
tiv
e E
xp
res
sio
n (
RQ
) -
AC
OX
-1
n=5 n=4
Control highFA/lowB120.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Re
lati
ve
Ex
pre
ss
ion
(R
Q)
- F
AS
n=4 n=4
ACOX-1 = β-Oxidación peroxisomal (Sintesis de AGPI-CL). FAS = Síntesis de AG
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En crías hembras, una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor contenido de AGS, AGM, AGPI y menor razón n3/n6 y DHA/AαL en hígado
Fatty Acid (mg/100g tissue) Control Group (n=8) highFA/lowB12 Group
(n=13) P Value
Total Saturated Fatty Acids 640 (575 - 815) 1470 (1327 - 1781) 0.0012
Total Fatty Acid Monounsaturated 442 (415 - 492) 1766 (1437 - 2158) 0.0012
Total Fatty Acids Polyunsaturated 971 (884 - 1219) 1659 (1568 - 2437) 0.0026
Total LC-PUFAs 564 (495 - 674) 766 (661 - 865) 0.0136
Total n3 237 (109 - 286) 325 (293 - 428) 0.0308
Total n6 734 (675 - 918) 1354 (1288 - 2009) 0.0020
n3/n6 Ratio 0.32 (0.29 - 0.33) 0.22 (0.20 - 0.24) 0.0026
DHA 192.8 (156.6 - 219.5) 269.8 (241.8 – 331.2) 0.0026
EPA 3.5 (0.0 – 7-4) 11.7 (9.7 – 16.6) 0.0040
EPA + DHA 219 (191 - 246) 271 (245 - 333) 0.0538
DHA/Linolenic Acid 16 (15 - 18) 5 (4 - 8) 0.0009
EPA/Linolenic Acid 0.1 (0 - 0.4) 0.2 (0.1 - 0.3) 0.5863
AA/Linoleic Acid 0.77 (0.68 - 0.81) 0.35 (0.27 - 0.49) 0.0016
↓ Razón
Producto
Precursor
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En crías hembras con dieta altoAF/bajaB12 mayor expresión de PPARα y CPT-1 en hígado
Figure 2. Liver of female offspring. (A) PPARα. (B) mRNA expression of CPT-1. (C) mRNA expression of ACOX1.
(D) mRNA expression of FAS.
PPARα y CPT-1 = β-Oxidación mitocondrial. ACOX-1 = β-Oxidación peroxisomal (Sintesis de AGPI-CL). FAS = Síntesis de AG
Control highFA/lowB120.0
0.5
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(R
Q)
- C
PT
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n=5 n=4
Control highFA/lowB120.0
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1.5
2.0
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Ex
pre
ss
ion
(R
Q)
- P
PA
Ra
n=5 n=5
Control highFA/lowB120.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Re
lati
ve
Ex
pre
ss
ion
(R
Q)
- F
AS
n=4 n=4
Control highFA/lowB120.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Re
lati
ve
Exp
res
sio
n (
RQ
) -
AC
OX
-1
n=5 n=5
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Madres
Crías hembras
(60 días)
Placentas
Hígado
↑ Estrés Oxidativo
dieta altoFA/bajaB12
↑ AGPI-CL (DHA y AA)
Conclusiones
Hígado ↓ AGPI-CL (DHA y AA)
↓ Estrés Oxidativo
Plasma Hiperhomocisteinemia Proteger a sus
crías y garantizar
el suministro de
AGE al feto
Crías jóvenes sanas
que no han sido
expuestas a un
desafío fisiológico o
metabólico
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Agradecimientos
• Financiamiento e Instituciones • Ana María Ronco, PhD. Fondecyt #1130188
• Beca Dr. Abraham Stekel 2016 – INTA – Universidad de Chile
• CONICYT-PCHA/Doctorado Nacional 2017-21170259
• Beca para asistencia a eventos para estudiantes de Doctorado – CONICYT 2018
• Internacionalización: Una estrategia para el fortalecimiento del programa de Doctorado en Nutrición y Alimentos
• Beca Inscripción SLAN 2018 - IUNS
• Equipo laboratorio de Nutrición y Regulación Metabólica - INTA • Valeska Castillo, Bq
• Cynthia Barrera, ND, MSc, PhD(c)
• Nibaldo Ávila (QEPD), Bioterio
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Una dieta altoÁcido Fólico/bajaVitamina B12 durante la gestación y lactancia, afecta el estrés oxidativo y el perfil de ácidos
grasos en madres y en sus crías
Erika Castaño-Moreno1,2, Valeska Castillo2, Daphne Álvarez2, Miguel Llanos2, Ana María Ronco2
1Estudiante (c) de Doctorado en Nutrición y Alimentos – Universidad de Chile. 2Laboratorio de Nutrición y Regulación
Metabólica, Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos – Universidad de Chile.
Fondecyt #1130188 (AMR), Beca Abraham Stekel 2016 – INTA (EC-M), CONICYT-PCHA/Doctorado Nacional 2017- 21170259, Chile
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