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María V. Geijo Vázquez
ESTUDIO DE VARIABLES INMUNOLÓGICAS Y BACTERIOLÓGICASEN RELACIÓN CON LA INMUNIZACIÓN
FRENTE A PARATUBERCULOSIS EN LOS RUMIANTES
Vitoria-Gasteiz, 2010
TESIS DOCTORALESN.¼ 66
Universidad de Leî n
Estudio dE variablEs inmunolî gicas ybactEriolî gicas En rElaciî n con la
inmunizaciî n frEntE a paratubErculosisEn los rumiantEs
Mar’ a V. Geijo V‡z quez
Edición: 1.ª Febrero 2010
Tirada: 50 ejemplares
© Administración de la Comunidad Autónoma del País Vasco Departamento de Medio Ambiente, Planificación Territorial, Agricultura y Pesca
Internet: www.euskadi.net
Edita: Eusko Jaurlaritzaren Argitalpen Zerbitzu Nagusia Servicio Central de Publicaciones del Gobierno Vasco Donostia-San Sebastián, 1 - 01010 Vitoria-Gasteiz
Impresión: Eusko Printing Service, S.L. www.eps-grupo.com
ISBN: 978-84-457-2992-2
D. L.: VI 38-2010
Un registro bibliográfico de esta obra puede consultarse en el catálogo de la Biblioteca General del Gobierno Vasco: .
INFORME DEL DIRECTOR DE LA TESIS (Art. 11.3 del R.D. 56/2005)
Los Dres. D. Ramón A. Juste Jordán y D. Joseba M. Garrido Urkullu
como Directores de la Tesis Doctoral titulada “Estudio de variables
inmunológicas y bacteriológicas en relación con la inmunización frente a
paratuberculosis en los rumiantes” realizada por Dña. María V. Geijo Vázquez
en el Departamento de Producción y Sanidad Animal del Instituto Vasco de
Investigación y Desarrollo Agrario (NEIKER–Tecnalia), informan favorablemente
el depósito de la misma, dado que reúne las condiciones necesarias para su
defensa.
Lo que firmo, para dar cumplimiento al art. 11.3 del R.D. 56/2005, en León
a 12 de julio de 2007.
Dr. D. Ramón A. Juste Jordán Dr. D. Joseba M. Garrido Urkullu
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Índice
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ÍNDICE GENERAL I. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS ............................................................................... 33
I.1. Introducción..................................................................................................... 35 I.2. Objetivos .......................................................................................................... 39
II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA ..................................................................................... 41
II.1. Etiología .......................................................................................................... 43 II.1.1. El género Mycobacterium..................................................................... 43 II.1.1.1. Características generales ............................................................... 43 II.1.1.2. Clasificación .................................................................................... 43 II.1.2. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis ................................... 53 II.1.2.1. Aspectos generales......................................................................... 53 II.1.2.2. Dependencia de la micobactina.................................................... 57 II.1.2.3. Metabolismo y nutrición ............................................................... 58 II.1.2.4. Estructura antigénica ..................................................................... 59 II.1.2.5. Resistencia ....................................................................................... 62 II.2. Epidemiología ................................................................................................. 65 II.2.1. Rango de hospedadores ..................................................................... 65 II.2.2. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis como potencial agente
zoonótico .............................................................................................. 67 II.2.3. Transmisión ......................................................................................... 74 II.2.4. Distribución y prevalencia ................................................................. 75 II.2.4.1. Prevalencia de la parauberculosis bovina.................................. 76 II.2.4.2. Prevalencia de la paratuberculosis ovina ................................... 78 II.2.4.3. Prevalencia de la paratuberculosis caprina ................................ 79 II.2.5. Importancia económica ...................................................................... 80 II.3. Patogenia .......................................................................................................... 82 II.3.1 Vía de entrada de M. avium subsp. paratuberculosis ....................... 82 II.3.2. Invasión de M. avium subsp. paratuberculosis .................................. 83 II.3.3. Mecanismos patogénicos ................................................................... 84
II.4. Respuesta inmune del hospedador ............................................................. 88 II.4.1. Respuesta inmune innata ................................................................... 88 II.4.2. Respuesta inmune adaptativa ........................................................... 90 II.4.2.1. Respuesta inmune celular ............................................................. 95 II.4.2.2. Respuesta inmune humoral.......................................................... 97 II.4.2.3. Respuesta inmune a la vacunación.............................................. 99 II.4.2.3.1. Respuesta inmune a la vacunación en la especie bovina .... 99 II.4.2.3.2. Respuesta inmune a la vacunación en la especie ovina....... 100 II.4.2.3.3. Respuesta inmune a la vacunación en la especie caprina ... 101
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II.4.3. Factores de resistencia a la enfermedad........................................... 102 II.5. Cuadro clínico y lesional ............................................................................. 104 II.5.1. Cuadro clínico y biopatológico.......................................................... 104 II.5.2. Cuadro lesional.................................................................................... 105 II.5.2.1. Lesiones macroscópicas................................................................. 105 II.5.2.2. Lesiones microscópicas.................................................................. 106 II.5.2.3. Variabilidad de las formas lesionales .......................................... 107
II.6. Diagnóstico..................................................................................................... 112 II.6.1. Diagnóstico clínico-epidemiológico.................................................. 112 II.6.2. Diagnóstico anatomopatológico........................................................ 113 II.6.3. Diagnóstico bacteriológico ................................................................. 115 II.6.3.1. Identificación microscópica en frotis ........................................... 115 II.6.3.2. Aislamiento mediante cultivo ...................................................... 116 II.6.3.2.1. Descontaminación de las muestras......................................... 116 II.6.3.2.2. Enriquecimiento de las muestras ............................................ 117 II.6.3.2.3. Cultivo ........................................................................................ 117 II.6.3.3. Detección del ADN bacteriano..................................................... 121 II.6.4. Diagnóstico inmunológico ................................................................. 123 II.6.4.1. Técnicas de diagnóstico basadas en la inmunidad celular....... 124 II.6.4.1.1. Intradermorreacción (IDR) ...................................................... 124 II.6.4.1.2. Test de detección del interferón-gamma (IFN-γ).................. 125 II.6.4.1.3. Test de transformación linfocitaria (LT) ................................ 128 II.6.4.1.4. Inhibición de la migración linfocitaria ................................... 128 II.6.4.1.5. Test de detección del receptor de interleuquina 2 (IL-2R).. 129 II.6.4.2. Técnicas de diagnóstico basadas en la inmunidad humoral.... 129 II.6.4.2.1. Fijación del complemento ........................................................ 129 II.6.4.2.2. Inmunodifusión en gel de agar (IDGA)................................. 130 II.6.4.2.3. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)........................... 131
II.7. Tratamiento y control ................................................................................. 135 II.7.1. Tratamiento .......................................................................................... 135 II.7.2. Control basado en la detección y sacrificio...................................... 136 II.7.3. Control basado en la vacunación ...................................................... 137 II.7.4. Medidas higiénico-sanitarias ............................................................. 141
III. MATERIALES Y MÉTODOS ..................................................................................... 145
III.1. Animales estudiados .................................................................................. 147
III.2. Toma de muestras ....................................................................................... 150
III.3. Vacunación ................................................................................................... 151
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III.4. Técnicas empleadas .................................................................................... 151 III.4.1. Técnicas serológicas............................................................................ 151 III.4.1.1. Evaluación de la respuesta inmune humoral mediante ELISA
indirecto.............................................................................................. 151 III.4.1.2. Evaluación de la respuesta inmune humoral mediante
detección del interferón-γ ................................................................ 153 III.4.2. Técnicas microbiológicas......................................................................... 156 III.4.2.1. Examen microscópico: Ziehl-Neelsen de muestras fecales ....... 156 III.4.2.2. Cultivo............................................................................................... 157 III.4.2.2.1. Muestras fecales........................................................................ 157 III.4.2.2.2. Muestras ambientales .............................................................. 159 III.4.2.2.3. Tejidos de necropsias............................................................... 160 III.4.2.3. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)................................ 160 III.4.2.3.1. Muestras fecales........................................................................ 160 III.4.2.3.1.1. Concentración y extracción de las micobacerias......... 160 III.4.2.3.1.2 Extracción del ADN micobacteriano............................ 161 III.4.2.3.1.3. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)................ 162 III.4.2.3.1.4. Visualización e interpretación de los resultados ........ 163 III.4.2.3.2. Muestras ambientales .............................................................. 165 III.4.2.3.2.1. Concentración y extracción de las micobacerias....... 165 III.4.2.3.3. Leucocitos.................................................................................. 165 III.4.2.3.3.1. Concentración y extracción de las micobacerias....... 165
III.5. Análisis estadístico....................................................................................... 167 III.6. Modelización ................................................................................................. 167
IV. RESULTADOS ............................................................................................................ 169
IV.1. Resultados de las técnicas serológicas .................................................... 171 IV.1.1. Respuesta inmune humoral .................................................................... 171 IV.1.1.1. Especie bovina................................................................................ 172 IV.1.1.2. Especie ovina.................................................................................. 173 IV.1.1.3. Especie caprina............................................................................... 174 IV.1.1.4. Comparación entre especies......................................................... 175 IV.1.2. Respuesta inmune celular ....................................................................... 182 IV.1.2.1. Especie bovina................................................................................ 183 IV.1.2.2. Especie ovina.................................................................................. 188 IV.1.2.3. Especie caprina............................................................................... 193 IV.1.2.4. Comparación entre especies......................................................... 198 IV.2. Resultados de las técnicas microbiológicas ........................................... 201 IV.2.1. Ziehl-Neelsen de muestras fecales ......................................................... 201 IV.2.2. Cultivos fecales ......................................................................................... 204 IV.2.3. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de muestras fecales...... 204
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IV.2.3.1. Especie bovina................................................................................ 206 IV.2.3.2. Especie ovina.................................................................................. 207 IV.2.3.3. Especie caprina............................................................................... 208 IV.2.3.4. Comparación entre especies......................................................... 210 IV.2.4. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de leucocitos ................ 212 IV.2.4.1. Especie bovina................................................................................ 213 IV.2.4.2. Especie ovina.................................................................................. 215 IV.2.4.3. Especie caprina............................................................................... 217 IV.2.4.4. Comparación entre especies......................................................... 219 IV.3. Resultados de las técnicas complementarias ......................................... 222 IV.3.1. Resultados de los tejidos de necropsias................................................. 222 IV.3.1.1. Cultivos de los tejidos de necropsias....................................... 222 IV.3.1.2. PCR de los tejidos de necropsias.............................................. 223 IV.3.2. Determinación de la carga micobacteriana ambiental ........................ 224
IV.4. Valoración global ........................................................................................ 225 IV.4.1. Correlación entre respuesta inmune celular y humoral...................... 225 IV.4.2. Elaboración de un modelo de patogenia............................................... 230
V. DISCUSIÓN ................................................................................................................ 241 VI. CONCLUSIONES....................................................................................................... 263 VII. RESUMEN. LABURPENA. SUMMARY ................................................................. 267
VII.1. Resumen........................................................................................................ 269 VII.2. Laburpena ..................................................................................................... 273 VII.3. Summary ....................................................................................................... 276
VIII. BIBLIOGRAFÍA ......................................................................................................... 281
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ÍNDICE DE TABLAS II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
Tabla II. 1. Listado de especies y subspecies comprendidas en el género Mycobacterium recogidas en el Bacterial Nomenclature Up-to-date del DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures), Braunschweig, Alemania.
........................................................................................................................................ 44
Tabla II. 2. Características de M. avium y sus subespecies (Thorel et al., 1990)......................... 54
Tabla II. 3. Antígenos micobacterianos (Stanford, 1983) ............................................................. 60
Tabla II. 4. Antígenos identificados en Map. ................................................................................. 61
Tabla II. 5. Rumiantes silvestres afectados por paratuberculosis............................................... 65
Tabla II. 6. Monogástricos afectados por paratuberculosis......................................................... 66
Tabla II.7. Tipos celulares implicados en los diferentes estadios de la paratuberculosis. Tomado de Coussens ( 2001)...................................................................................... 94
Tabla II.8. Clasificación lesional en la especie bovina.................................................................. 108
Tabla II.9. Clasificación lesional en la especie ovina.................................................................... 109
Tabla II.10. Clasificación lesional en la especie caprina............................................................... 111
III. MATERIALES Y MÉTODOS
Tabla III.1. Explotaciones incluidas en el estudio......................................................................... 147
Tabla III. 2. Lotes de animales y muestreos realizados en el estudio ........................................ 148
Tabla III. 3. Tejidos recogidos en las necropsias. .......................................................................... 150
Tabla III. 4. Reactivos empleados en el ELISA indirecto de NEIKER........................................ 152
Tabla III.5. Protocolo del Bovigam™ γ-Interferon ELISA assay ................................................ 155
Tabla III.6. Reactivos empleados en la tinción de Ziehl-Neelsen Kinyoun............................... 156
Tabla III.7. Reactivos empleados en la elaboración de los medios de cultivo para el aislamiento de micobacterias ..................................................................................... 157
Tabla III.8. Procedimiento de elaboración del medio de Löwenstein-Jensen........................... 158
Tabla III.9. Procedimiento de elaboración del medio de Herrold............................................. . 159
Tabla III.10. Procedimiento de elaboración del medio Agar Middlebrook 7H11. ................... 159
Tabla III.11. Reactivos empleados en la extracción de ADN ...................................................... 161
Tabla III.12.Características y posiciones de los cebadores empleados en la PCR de paratuberculosis........................................................................................................... 162
Tabla III.13. Reactivos empleados en la reacción de PCR ........................................................... 163
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Tabla III.14. Programa de ciclos, temperaturas y tiempos de la reacción de PCR ................... 163
Tabla III. 15. Reactivos empleados en la visualización del producto amplificado................... 164
IV. RESULTADOS
Tabla IV.1. Resultados del Ziehl-Neelsen de frotis fecales en los diferentes rebaños ............. 201
Tabla IV.2. Aislamientos positivos de cultivos fecales................................................................. 204
Tabla IV.3. Resultados positivos a PCR de heces en la especie bovina según la edad de vacunación y estatus del rebaño en los grupos de animales vacunados y controles ........................................................................................................................ 206
Tabla IV.4. Resultados positivos a PCR de heces en la especie ovina según la edad de vacunación y estatus del rebaño en los grupos de animales vacunados y controles ........................................................................................................................ 208
Tabla IV.5. Resultados positivos a PCR de heces en la especie caprina según la edad de vacunación y estatus del rebaño en los grupos de animales vacunados y controles ........................................................................................................................ 209
Tabla IV.6. Resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles de los tres grupos de edad en la especie bovina..................................... 214
Tabla IV.7. Resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles de los tres grupos de edad en la especie ovina....................................... 216
Tabla IV.8. Resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles de los tres grupos de edad en la especie caprina.................................... 218
Tabla IV.9. Aislamientos positivos de cultivos de muestras de tejidos ..................................... 222
Tabla IV.10. Resultados positivos de PCR de muestras de tejidos............................................. 223
Tabla IV.11. Resultados positivos de PCR y aislamientos de cultivos de muestras ambientales ................................................................................................................... 224
Tabla IV.12. Valores medios de IFN-γ0 (inespecífico, en respuesta al antígeno nulo PBS) para cada cohorte en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo.................................................................................. 231
Tabla IV.13. Valores medios de IFN-γMap (específico, en respuesta al antígeno PPD aviar) para cada cohorte en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo.................................................................................. 232
Tabla IV.14. Valores medios del índice ELISA para cada cohorte en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo ................................... 233
Tabla IV.15. Frecuencias de resultados positivos en la PCR de sangre expresadas como porcentaje de positivos ± el error estándar de la media para un intervalo de confianza del 95% ........................................................................................................ 234
Tabla IV.16. Resultados de IFN-γ y ELISA en los grupos con PCR de leucocitos positiva y negativa de los animales no vacunados del lote 18M de ambos rebaños bovinos .......................................................................................................................... 235
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Tabla IV.17. Evolución de la inmunidad innata inespecífica tras la vacunación en los dos rebaños bovinos ........................................................................................................... 236
Tabla IV.18. Resultados de IFN-γ y ELISA en los grupos con PCR de leucocitos positiva y negativa de los animales vacunados del lote 18M de ambos rebaños bovinos.......................................................................................................................... 237
Tabla IV.19. Resultados de IFN-γ y ELISA en los grupos con PCR de leucocitos positiva y negativa de las ovejas no vacunados en los cuatro muestreos .......................... 238
Tabla IV.20. Resultados de IFN-γ y ELISA en los grupos con PCR de leucocitos positiva y negativa de las ovejas vacunadas en los tres muestreos post-vacunación....... 238
Tabla IV.21. Resultados de IFN-γ y ELISA en los grupos con PCR de leucocitos positiva y negativa de las cabras no vacunadas en los cuatro muestreos .......................... 238
Tabla IV.22. Resultados de IFN-γ y ELISA en los grupos con PCR de leucocitos positiva y negativa de las cabras vacunadas en los tres muestreos post-vacunación....... 239
V. DISCUSIÓN
Tabla V. 1. Formas o estadios inmunopatológicos propuestos .................................................. 252
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ÍNDICE DE FIGURAS
PORTADA
Copyright© 2004 Dennis Kunkel Microscopy, Inc. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Microfotografía electrónica de escaneado (SEM) x 3000.
II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
Figura II.1. Modelo de patogenia de la IBD planteado por Elguezabal et al., datos sin publicar. IFN-γ0: densidad óptica media de la producción de IFN-γ en respuesta al PBS. IFN-γMap: densidad óptica media de la producción de IFN-γ en respuesta a la PPD aviar ..................................................................................... 73
Figura II.2. Raza Roja Noruega........................................................................................................ 103
Figura II.3. Raza Jersey ..................................................................................................................... 103
Figura II.4. Vaca de raza limousine con caquexia y edema de papada ..................................... 104
Figura II.5. Lesiones macroscópicas de un tramo de yeyuno (izquierda) y aspecto del tramo de yeyuno equivalente de un animal no afectado (derecha)...................... 105
Figura II.6. Ziehl-Neelsen de muestra de heces. ........................................................................... 115
Figura II.7. Aislamientos de micobacterias en medios de Herrold (izda.) y Löwenstein-Jensen (dcha.)................................................................................................................ 118
Figura II.8. Administración de vacuna de paratuberculosis en el pliegue de la papada ........ 137
III. MATERIALES Y MÉTODOS
Figura III.1. Imagen de una PCR. Carriles 1 y 14: marcadores de peso molecular; 2-3: muestra de intestino; 4-5: muestra de nódulo; 6-7: muestra de heces dilución 1/16; 8-9: muestra de heces dilución 1/64; 10-11: control de extracción de ADN; 12: control positivo de PCR; 13: control negativo de PCR.......................... 165
V. DISCUSIÓN
Figura V.1. Modelo de patogenia de la paratuberculosis. IFN-γ 0: densidad óptica media de la producción de IFN-γ en respuesta al PBS. IFN-γ Map: densidad óptica media de la producción de IFN-γ en respuesta a la PPD aviar. ELISA: media del índice ELISA. %ELISA+: porcentaje de resultados positivos al ELISA ......... 255
Figura V.2. Efecto de la vacunación en los animales del lote 18M en base al modelo de patogenia de la paratuberculosis planteado. IFN-γ 0: densidad óptica media de la producción de IFN-γ en respuesta al PBS. IFN-γ Map: densidad óptica media de la producción de IFN-γ en respuesta a la PPD aviar. ELISA: media del índice ELISA. %ELISA+: porcentaje de resultados positivos al ELISA. ........ 259
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ÍNDICE DE GRÁFICAS IV. RESULTADOS
Gráfica IV.1. Índice ELISA (IE) post-vacunación en función de la especie. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ....................................................... 171
Gráfica IV.2. Índice ELISA (IE) post-vacunación en función del estatus del rebaño. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media........................................ 171
Gráfica IV.3. Índice ELISA (IE) post-vacunación en función de la vacunación. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ............................................. 172
Gráfica IV.4. Índice ELISA (IE) post-vacunación en función de la edad de vacunación. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media............................ 172
Gráfica IV.5. Índice ELISA (IE) en la especie bovina. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ................................................................................... 172
Gráfica IV.6. Medias del ELISA (IE) expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0 en los rebaños bovinos en función de las edades de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar de la media............................ 173
Gráfica IV.7. Índice ELISA (IE) en la especie ovina. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ................................................................................... 173
Gráfica IV.8. Índice ELISA (IE) en la especie ovina. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0 en los rebaños ovinos en función de las edades de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar de la media ............................................................................................................. 174
Gráfica IV.9. Índice ELISA (IE) en la especie caprina. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ................................................................................... 175
Gráfica IV.10. Índice ELISA (IE) en la especie caprina. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0 en los rebaños caprinos en función de las edades de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar de la media ............................................................................................................. 175
Gráfica IV.11.Índice ELISA (IE) post-vacunación en rebaños libres y afectados clínicamente de las tres especies. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0 en las tres especies. En las barras de error se representa el error estándar de la media..................................................... 176
Gráfica IV.12. Índice ELISA (IE) post-vacunación en controles y vacunados de las tres especies. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo
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0 en las tres especies. En las barras de error se representa el error estándar de la media ........................................................................................................... 176
Gráfica IV.13. Índice ELISA (IE) en controles y vacunados de las tres especies en los sucesivos muestreos. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media..................................................................................................................... 177
Gráfica IV.14. Índice ELISA (IE) en animales controles y vacunados en relación a la edad del animal. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media..................................................................................................................... 177
Gráfica IV.15. Índice ELISA (IE) en animales controles y vacunados de cada especie en relación a la edad del animal. Medias del IE expresadas como IE muestreo actual / IE muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ........................................................................................... 178
Gráfica IV.16. Proporción de resultados positivos al ELISA en animales controles y vacunados. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......................................................................... 178
Gráfica IV.17. Evolución del % de resultados positivos al ELISA en animales controles y vacunados a lo largo del estudio. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ................................. 179
Gráfica IV.18. Evolución del % de resultados positivos al ELISA en animales controles y vacunados a lo largo del estudio en las diferentes especies.......................... 179
Gráfica IV.19. Proporción de resultados positivos al ELISA en vacas controles y vacunadas. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......................................................................... 179
Gráfica IV.20. Evolución del % de resultados positivos al ELISA en vacas controles y vacunadas a lo largo del estudio según el estatus del rebaño. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ........................................................................................................................ 180
Gráfica IV.21. Proporción de resultados positivos al ELISA en ovejas controles y vacunadas. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......................................................................... 180
Gráfica IV.22. Evolución del % de resultados positivos al ELISA en ovejas controles y vacunadas a lo largo del estudio según el estatus del rebaño. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ........................................................................................................................ 181
Gráfica IV.23. Proporción de resultados positivos al ELISA en cabras controles y vacunadas. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......................................................................... 181
Gráfica IV.24. Evolución del % de resultados positivos al ELISA en cabras controles y vacunadas a lo largo del estudio según el estatus del rebaño. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ........................................................................................................................ 181
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Gráfica IV.25. IFN-γ en función de la especie. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ......................................................... 182
Gráfica IV.26. IFN-γ en función del estatus clínico del rebaño. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media .............. 182
Gráfica IV.27. IFN-γ en función de la vacunación. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ........................................... 183
Gráfica IV.28. IFN-γ en función de la edad de vacunación. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media...................................... 183
Gráfica IV.29. Medias del IFN-γ aviar expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0 en los rebaños bovinos. En las barras de error se representa el error estándar de la media ......................................................... 183
Gráfica IV.30. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0 en los rebaños bovinos en función de la edad de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar de la media .................................................................................................................... 184
Gráfica IV.31. Relación entre el IFN-γ aviar y el IFN-γ bovino pre-vacunación en la especie bovina...................................................................................................... 185
Gráfica IV.32. Relación entre el IFN-γ aviar y el IFN-γ bovino post-vacunación en la especie bovina...................................................................................................... 185
Gráfica IV.33. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en la especie bovina ....................................................................... 185
Gráfica IV.34. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en la especie bovina ....................................................................... 185
Gráfica IV.35 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el rebaño bovino libre de PTBC .............................................. 186
Gráfica IV.36 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el rebaño bovino con PTBC ..................................................... 186
Gráfica IV.37 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el rebaño bovino libre de PTBC .............................................. 186
Gráfica IV.38 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el rebaño bovino con PTBC ..................................................... 186
Gráfica IV.39 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el lote 01M de la especie bovina.............................................. 187
Gráfica IV.40 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el lote 01M de la especie bovina.............................................. 187
Gráfica IV.41 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el lote 03M de la especie bovina.............................................. 187
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
26
Índice
24
Gráfica IV.42 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el lote 03M de la especie bovina.............................................. 187
Gráfica IV.43 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el lote 18M de la especie bovina.............................................. 188
Gráfica IV.44 Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el lote 18M de la especie bovina.............................................. 188
Gráfica IV.45. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0 en los rebaños ovinos. En las barras de error se representa el error estándar de la media.......................................................... 188
Gráfica IV.46. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0 en los rebaños ovinos en función de la edad de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar de la media..................................................................................................................... 189
Gráfica IV.47. Relación entre el IFN-γ aviar y el IFN-γ bovino pre-vacunación en la especie ovina ........................................................................................................ 189
Gráfica IV.48. Relación entre el IFN-γ aviar y el IFN-γ bovino post-vacunación en la especie ovina ........................................................................................................ 189
Gráfica IV.49. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en la especie ovina.......................................................................... 191
Gráfica IV.50. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en la especie ovina.......................................................................... 191
Gráfica IV.51. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el rebaño ovino libre de PTBC................................................. 191
Gráfica IV.52. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el rebaño ovino afectado de PTBC.......................................... 191
Gráfica IV.53. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el rebaño ovino libre de PTBC................................................. 191
Gráfica IV.54. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el rebaño ovino afectado de PTBC.......................................... 191
Gráfica IV.55. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el lote de ovejas del lote 01M................................................... 192
Gráfica IV.56. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el lote de ovejas del lote 01M................................................... 192
Gráfica IV.57. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el lote de ovejas del lote 03M................................................... 192
Gráfica IV.58. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el lote de ovejas del lote 03M................................................... 192
Gráfica IV.59. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el lote de ovejas del lote 18M................................................... 193
Gráfica IV.60. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el lote de ovejas del lote 18M................................................... 193
ê ndice
27
Índice
25
Gráfica IV.61. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0 en los rebaños caprinos. En las barras de error se representa el error estándar de la media ......................................................... 193
Gráfica IV.62. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0 en los rebaños caprinos en función de la edad de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar de la media .................................................................................................................... 194
Gráfica IV.63. Relación entre el IFN-γ aviar y el IFN-γ bovino pre-vacunación en la especie caprina..................................................................................................... 194
Gráfica IV.64. Relación entre el IFN-γ aviar y el IFN-γ bovino post-vacunación en la especie caprina..................................................................................................... 194
Gráfica IV.65. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en la especie caprina ...................................................................... 195
Gráfica IV.66. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en la especie caprina ...................................................................... 195
Gráfica IV.67. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el rebaño caprino libre de PTBC ............................................. 196
Gráfica IV.68. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en el rebaño caprino afectado de PTBC ...................................... 196
Gráfica IV.69. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el rebaño caprino libre de PTBC ............................................. 196
Gráfica IV.70. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en el rebaño caprino afectado de PTBC ...................................... 196
Gráfica IV.71. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en las cabras del lote 01M ............................................................. 197
Gráfica IV.72. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en las cabras del lote 01M ............................................................. 197
Gráfica IV.73. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en las cabras del lote 03M ............................................................. 197
Gráfica IV.74. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en las cabras del lote 03M ............................................................. 197
Gráfica IV.75. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS pre-vacunación en las cabras del lote 18M ............................................................. 197
Gráfica IV.76. Correlación entre el IFN-γ producido frente a la PPD aviar y al PBS post-vacunación en las cabras del lote 18M ............................................................. 197
Gráfica IV.77. IFN-γ en rebaños libres y afectados de las tres especies. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media .............. 198
Gráfica IV.78. IFN-γ en controles y vacunados de las tres especies. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media .............. 198
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
28
Índice
26
Gráfica IV.79. IFN-γ en controles y vacunados de las tres especies en los sucesivos muestreos. Medias del IFN-γ expresadas como IFN-γ aviar muestreo actual / IFN-γ aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media ................................................................................. 199
Gráfica IV.80. IFN-γ en controles y vacunados a lo largo de los 36 primeros meses de vida. Medias del IFN-γ expresadas como IFN aviar muestreo actual / IFN aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media..................................................................................................................... 199
Gráfica IV.81. IFN-γ en controles y vacunados a lo largo de los 36 primeros meses de vida en función de la especie. Medias del IFN-γ expresadas como IFN aviar muestreo actual / IFN aviar muestreo 0. En las barras de error se representa el error estándar de la media.......................................................... 200
Gráfica IV.82. Proporción de animales positivos al Ziehl-Neelsen de muestras de heces según el estatus del rebaño. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%........................................... 202
Gráfica IV.83. Proporción de animales positivos al Ziehl-Neelsen de muestras de heces en animales vacunados y controles pre- y post-vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%. ....................................................................................................................... 202
Gráfica IV.84. Proporción de animales positivos al Ziehl-Neelsen de muestras de heces en las diferentes especies en los grupos de animales vacunados y controles. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%................................................................................................ 203
Gráfica IV.85. Proporción de animales positivos al Ziehl-Neelsen de muestras de heces en las diferentes edades de vacunación en los grupos de animales vacunados y controles en función de la edad de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......... 203
Gráfica IV.86. Proporción de animales positivos a la PCR de muestras de heces en las diferentes especies pre- y post-vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......... 204
Gráfica IV.87. Proporción de animales positivos a la PCR de muestras de heces según el estatus del rebaño. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ........................................................... 205
Gráfica IV.88. Proporción de animales positivos a la PCR de muestras de heces en función de la vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ........................................................... 205
Gráfica IV.89. Proporción de animales positivos a la PCR de muestras de heces en función de la edad de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%. .......................................... 205
Gráfica IV.90. Proporción de animales positivos a PCR de heces en los grupos de animales vacunados y controles de los distintos rebaños (libres de paratuberculosis y clínicamente afectados) de la especie bovina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.......... 206
ê ndice
29
Índice
27
Gráfica IV.91. Proporción de animales positivos a PCR de heces en los grupos de animales vacunados y controles de los distintos rebaños (libres de paratuberculosis y clínicamente afectados) de la especie ovina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ......... 207
Gráfica IV.92. Proporción de animales positivos a PCR de muestras de heces en las diferentes especies en los grupos de animales vacunados y controles de los distintos rebaños (libres de paratuberculosis y clínicamente afectados) de la especie caprina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%........................................................... 209
Gráfica IV.93. Proporción de resultados positivos en la PCR de muestras de heces de los rebaños afectados y libres de paratuberculosis en las diferentes especies. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%................................................................................................ 210
Gráfica IV.94. Proporción de resultados positivos en la PCR de muestras de heces de animales vacunados y controles en las diferentes especies. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%..... ................................................................................................................... 210
Gráfica IV.95. Proporción de resultados positivos en la PCR de muestras de heces de los animales vacunados y controles de los rebaños afectados y libres de paratuberculosis en las tres especies. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%................................. 211
Gráfica IV.96. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de las tres especies. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ......................................................................... 212
Gráfica IV.97. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos según el estatus del rebaño. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ......................................................................... 212
Gráfica IV.98. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos según la vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%. ........................................................................ 212
Gráfica IV.99. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos según la edad de vacunación. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%.................................................................... 213
Gráfica IV.100. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles en la especie bovina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%. ....... 213
Gráfica IV.101. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles de rebaños libres y afectados de la especie bovina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%............................................................................................... 214
Gráfica IV.102. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles en la especie ovina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%. ....... 215
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
30
Índice
28
Gráfica IV.103. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles de rebaños libres y afectados de la especie ovina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%............................................................................................... 216
Gráfica IV.104. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles en la especie caprina En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%......... 217
Gráfica IV.105. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles de rebaños libres y afectados de la especie caprina. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%............................................................................................... 218
Gráfica IV.106. Proporción de resultados positivos en la PCR de muestras de leucocitos de rebaños libres y afectados de paratuberculosis en las diferentes especies. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95%............................................................................................... 219
Gráfica IV.107. Proporción de resultados positivos en la PCR de muestras de leucocitos de animales vacunados y controles en las diferentes especies. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% ....................................................................................................................... 220
Gráfica IV.108. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles sin vacunar de las diferentes especies a lo largo de los cuatro muestreos. En las barras de error se representa el error estándar para un intervalo de confianza del 95% .......................................................... 221
Gráfica IV.109. Proporción de resultados positivos en la PCR de leucocitos de animales vacunados y controles sin vacunar de los dos rebaños de las diferentes especies a lo largo de los cuatro muestreos .................................................... 221
Gráfica IV.110. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar en los bovinos pre-vacunación.................................... 225
Gráfica IV.111. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar en los bovinos post-vacunación .................................. 225
Gráfica IV.112. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar pre-vacunación en el rebaño bovino libre de paratuberculosis ................................................................................................. 226
Gráfica IV.113. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar post-vacunación en el rebaño bovino libre de paratuberculosis ................................................................................................. 226
Gráfica IV.114. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar pre-vacunación en el rebaño bovino afectado de paratuberculosis ................................................................................................. 226
Gráfica IV.115. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar post-vacunación en el rebaño bovino afectado de paratuberculosis ................................................................................................. 226
Gráfica IV.116. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar en los ovinos pre-vacunación ...................................... 227
ê ndice
31
Índice
29
Gráfica IV.117. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar en los ovinos post-vacunación .................................... 227
Gráfica IV.118. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar pre-vacunación en el rebaño ovino libre de paratuberculosis. ................................................................................................ 227
Gráfica IV.119. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar post-vacunación en el rebaño ovino libre de paratuberculosis ................................................................................................. 227
Gráfica IV.120. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar pre-vacunación en el rebaño ovino afectado de paratuberculosis ................................................................................................. 227
Gráfica IV.121. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar post-vacunación en el rebaño ovino afectado de paratuberculosis ................................................................................................. 227
Gráfica IV.122. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar en los caprinos pre-vacunación................................... 228
Gráfica IV.123. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar en los caprinos post-vacunación................................. 228
Gráfica IV.124. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar pre-vacunación en el rebaño caprino libre de paratuberculosis ................................................................................................. 228
Gráfica IV.125. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar post-vacunación en el rebaño caprino libre de paratuberculosis ................................................................................................. 228
Gráfica IV.126. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar pre-vacunación en el rebaño caprino afectado de paratuberculosis ................................................................................................. 229
Gráfica IV.127. Correlación entre el índice de ELISA y el índice del IFN-γ producido frente a la PPD aviar post-vacunación en el rebaño caprino afectado de paratuberculosis ................................................................................................. 229
Gráfica IV.128. Valores medios de IFN-γ0 (inespecífico, en respuesta al antígeno nulo PBS) para las cohortes 18M y total de edades en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo............................. 231
Gráfica IV.129. Valores medios de IFN-γMap (específico, en respuesta al antígeno PPD aviar) para las cohortes 18M y total de edades en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo............................. 232
Gráfica IV.130. Valores medios de índice ELISA para las cohortes 18M y total de edades en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo ..................................................................................................................... 233
Gráfica IV.131. Frecuencias de resultados positivos en la PCR de sangre para las cohortes 18M y total de edades en función de la historia clínica del rebaño, edad al comienzo del estudio y tiempo ........................................................................... 234
i. introducciî n y objetivos
35
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
36
i. introducciî n y objetivos
37
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
38
i. introducciî n y objetivos
39
1.
2.
3.
4.
ii. revisiî n bibliogrç fica
43
( (
( (
( ( (((((
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
44
sps s s usu s uuu b ss uusus
NombreuoresoorerersusuosusNueombeereseroeppomossubspsmoomopoNombreuoressessusssprobseereseroNombreuoresesumursumursusNueespeeNombreresbeoeereseroeppoNombreuoresesumursumursusNueespeeNombreresbeoeereseroeppoNNombreuoresussusNueespeeeereseroeppoNombreuoresoususNueespeeeeresoroboeppo
NombreuoreseseersusssprobseereseroeppoNombreuoresmbsusNueespeeeeresoroboNombreuoressumursusssprobseereseroeppoNNombreuoressumursusNueespeeeereseroeppoNombreuoresesersusssprobseeresero
subspuoreseseremeoresusNuesubspeeeereseroeppo
subspuoresereoresusNuesubespeeeereseroeppomosbsmo
ii. revisiî n bibliogrç fica
45
subspuoresoresausNueasubespecieeerenciansacerioepaipo
NombreuorescinssausNueaespecieeerenciansoicrobioepaipoNombre
uoreseiscsausNueaespecieeerenciansacerioepaipoNombreuoresambisausNueaespecieeerenciansoicrobioNombreuoresorosausNueaespecieeerenciansoicrobioepaipoNombresausisasaprobaaseerenciansacerioinnimossubsp
subspuoresKarsonessesausNueasubespecieeerenciansoicrobiosubspuoresranaNiemannsausNueacombinacineerenciansoicrobioinnimos
subspNombreuoresKouiaKsausNueaespecieeerenciansacerioepaipoNombreuorescinssausNueaespecieeerenciansoicrobioepaipoNombreuoresuuinsausNueaespecieeerenciansacerioepaipoNombreuoresimenesausNueaespecieeerenciansoicrobioepaipoNombreuoresranaranasausNueacombinacineerenciansoicrobioinnimossubspsubspbasnimoNombreuoresuersausNueaespecieeerenciansacerioepaipoNombreuoresereKubicasausisasaprobaaseerenciansacerio
subspuoresoorerericsKubicasausasnimoeerenciansacerio
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
46
iimossubspuoresBergeKubicasausisasaprobaaseereciasBaceriolepaipoTTNTT
NombresausNombreorogricameeicorrecoiimossubspNombreuoresTorolisausNueaespecieeereciasolicrobiolepaipoNombreuoresTsukamurasausisasaprobaaseereciasBaceriolepaipoTNombreuorespaalaiHäggblomsausNueacombiacieereciasBaceriolBrigliaBepaipoTNBNBiimosbasimoNombreuoreseTsukamuraTsukamurasausNueaespecieNombreresablecioeereciasBaceriolepaipoTNTNombreuoresurciasausNueaespecieeereciasolicrobiol
NombreuoreskambisausNueaespecieeereciasolicrobiolNombreuoresKirscersausNueaespecieeereciasBaceriolepaipoTNombreuoresprigersausNueaespecieeereciasBaceriolepaipoNombreuoresKaasausNueaespecieeereciasBaceriolepaipoTNombreuoresooksesausNueaespecieeereciasolicrobiolepaipoTBNombreuoreseBickeuasTsukamurasausNueaespecieNombreresablecioeereciasBaceriolepaipoTNombreuoresTorolisausNueaespecieeereciasolicrobiolepaipoNombreuoresaoruorpesausisasaprobaaseereciasBaceriolepaipoTNTNombre
ii. revisiî n bibliogrç fica
47
oreoeNeeeeeereoroboeoNombreoreerebNeeeeeereeroeoNombreoremoerobeereeroeoNNombreoreorobeereeroeoNombreoreoroNeeeeeereoroboeoNombreoreormNeeeeeereoroboNombreoreorrobeereero
subsporemrNebeeeeereeroeosubsporeorrobeereero
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NombreoremeNeeeeeereoroboeoNNombreoreerorobeereeroeoNombreoreerobeereeroeoNombreoreerNeeeeeereeroNombreoreororerobeereeroeoNNombreoreroNeeeeeereeroeoNombreoreorobeereeroeoNNombreoreomorobeereeroeo
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
48
ii. revisiî n bibliogrç fica
49
estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
50
NombreuoresoesusNueespeeeereseroeppoNombreuoresesumuruosumuruosusNueespeeNombreresbeoeereseroeppoNNombreuoresorosusNueespeeeeresoroboeppoNombreuoressumursusssprobseereseroeppoNNNombreuoresureesusNueespeeeeresoroboeppoNombreuoreseresussmoeereseromossubspNombreuoressusNueespeeeeresoroboeppoNombreuoreseousuosusNueespeeNombre
resbeoeereseroeppoNNombreuoresemNeumsusssprobseereseroeppoNNombreuoresmbsusNueespeeeeresoroboNombreuoresousssusNueespeeeeresoroboNombreuoressumursusNueespeeeereseroeppoNombreuoresosersusNueespeeeereseroeppoNNombreuoresoessusNueespeeeeresoroboNombreuoresruosusNueespeeeeresoroboeppoNombreuoressumursusNueespeeeereseroeppo
ii. revisiî n bibliogrç fica
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estudio de variables inmunolî gicas y bacteriolî gicas en relaciî n con la inmunizaciî n frente a paratuberculosis en los rumiantes
52
sppbusubsussspbssppbuspusussspbssssubspusubsp
subspussusssssubspsubspuspusususubspss
bussususpspp
bususussspbssbusussussspbssppbussususpsbppbussususpsppbusbsussspbsspp
bsspssubspspss upususuuu b us
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Controles sanosCsanre
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Daño tisularDaño tisular
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