Post on 10-Jul-2020
información que garanticen el uso adecuado de la misma y preserve el derecho de todo paciente a la confi-
dencialidad y respeto.
En la actualidad con la moderniza-
ción de los laboratorios, la constante rotación del personal y la demanda de pruebas, la protección de la infor-mación se vuelve un reto que debe-mos superar día a día, haciendo uso del recurso más valioso con el que contamos que es el recurso humano
que labora en nuestros laboratorios.
Es sensibilizando, generando empat-ía y compromiso en nuestros colegas y demás trabajadores de salud, que lograremos el cumplimiento de los principios éticos de respeto, privaci-dad, confidencialidad y justicia, que cada persona que solicita los servi-
cios de salud merece y espera recibir.
Como región centroamericana hemos avanzado mucho en el desa-rrollo de nuestras capacidades tec-nológicas y de mejora continua, pero todavía tenemos la tarea de seguir mejorando el manejo de la informa-ción a través de la implementación de estrategias integrales de desarrollo
humano, técnico y administrativo, que nos permitan brindar servicios
confiables y con calidez.
Licda. Patricia L. Mira Gómez
Directora Laboratorio Regional de
Referencia-VIH/SIDA
Proyecto Regional VIH/SIDA
pmira@sica.int
Dentro del ejercicio profesional, así como en la vida diaria, nuestras ac-ciones deben estar enmarcadas en los principios éticos, que nos permitan
desarrollarnos integralmente sin perjuicio de las personas con las cua-les interactuamos y de nuestro entor-no. Como profesionales de la salud uno de nuestros compromisos y deberes hacia nuestros pacientes, es el garan-tizarles la confidencialidad y protec-
ción de toda la información que nos proporcionan, como parte del proceso de atención que requiere cada caso. En el tema de VIH, este compromiso se vuelve prioritario, por todo el es-tigma y discriminación que conlleva esta patología, impactando el entorno en el que día a día se desenvuelven
las personas que viven con VIH. El Programa Conjunto de las Nacio-nes Unidas para el SIDA (ONUSIDA) en una de sus publica-ciones hace mención a que “Existen tres conceptos interrelacionados que influyen enormemente en el desarro-
llo y la puesta en marcha de la pro-tección de todo tipo de información sensible: privacidad, confidencialidad y seguridad. A pesar de estar relacio-nados entre sí, cada uno tiene un significado distinto, y se desarrolla y se aplica de forma diferente. Privacidad es un concepto jurídico y
ético al mismo tiempo. Desde el pun-to de vista jurídico, hace referencia a la protección legal que se le concede a un individuo, con el fin de controlar tanto el acceso a su información per-sonal como el uso de la misma; dicho aspecto de protección jurídica consti-tuye el marco general en el que se
aplican los conceptos de confidencia-lidad y seguridad. Confidencialidad es un término que está relacionado con el derecho de
los individuos a la protección de sus datos durante las fases de almacena-miento, transferencia y uso, con el objetivo de evitar que se revele dicha información a terceras personas sin autorización previa. En el desarrollo de las políticas y los procedimientos de confidencialidad, también se debe
debatir cuestiones sobre el uso apro-piado y la difusión de información sanitaria, teniendo en cuenta cuestio-nes éticas y jurídicas, tal y como aparece recogido en los reglamentos y las leyes de privacidad. Seguridad es un concepto que recoge
diversos enfoques técnicos que, a su vez, abarcan aspectos físicos, electró-nicos y procedimentales relacionados con la protección de la información recogida como parte de la ampliación de servicios relacionados con el VIH. La seguridad debe estar encaminada a la protección de los datos frente a la
difusión de los mismos (tanto volun-taria como involuntariamente), así como a la falta de disponibilidad de información a causa de fallos del sistema o errores del usuario”. Considerando los conceptos antes mencionados y para dar cumplimien-to a los mismos, cada profesional de
Laboratorio tiene el deber de poner en práctica, sin excepciones, los prin-cipios contemplados en el Código de ética que rige el quehacer diario de-ntro de la Institución, así como implementar estrategias de manejo de
Editorial
Julio 2010 LRR EN ACCIÓN
LRR EN ACCIÓN
Contenido:
LRR implementa
nueva opción ...
2
Validación del uso de
concentrado leucocita-
rio como muestra para
3
La micropipeta:
un instrumento
imprescindible
4
En breve…. 4
Galería fotográfica 5
LRR en acción es publicado por:
Laboratorio Regional de
Referencia de VIH/SIDA para
Centroamérica.
Ciudad de Panamá
(507) 527-4837
http://www.sica.int/lrr/
EL LABORATORIO REGIONAL DE REFERENCIA DE VIH IMPLEMENTA NUEVA OPCIÓN
METODOLÓGICA PARA DETECTAR MUTACIONES EN EL VIH-1 QUE CONFIEREN RESISTENCIA A
LOS MEDICAMENTOS ANTIRETROVIRALES
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LRR EN ACCIÓN
Dalis Mojica
El estudio de la resistencia a los me-
dicamentos de las cepas de VIH es
esencial para determinar la utilidad
de los medicamentos antirretrovira-
les. Actualmente en la región Cen-
troamericana la disponibilidad de
alternativas de tratamiento es limi-
tada, así como la disponibilidad de
recursos de laboratorio para el mo-
nitoreo de la efectividad de la tera-
pia antiretroviral, por lo que el uso
de pruebas especializadas, como
lo son las pruebas de resistencia ha
tenido que ser priorizadas y ade-
cuadas a los recursos disponibles.
La implementación de métodos
genotípicos de detección de resis-
tencia a los medicamentos antirre-
trovirales requiere de una evalua-
ción adecuada a fin de garantizar
al máximo la fiabilidad de los resul-
tados obtenidos. En este sentido,
hemos analizado resultados obteni-
dos con la nueva opción meto-
dológica (ViroSeq HIV-1 System, v
2.0, software 2.8) que utiliza el se-
cuenciador 3130XL, comparándo-
los con el Sistema OpenGene v
4.1 (Trugene HIV-1 Genotyping
Test, Guidelines 14.0) existente en
el LRR. Ambos métodos utilizan
una Secuencias de Referencia
(SR) en particular, B-LAV-1 para
Trugene y HXB2 en el ViroSeq. Uti-
lizamos 16 muestras clínicas
(plasma) pertenecientes a pa-
cientes con historia previa de
ARV, todos con falla terapéutica y
promedio de Carga Viral de
17012 copias de ARN/mL. Ambas
metodologías fueron trabajadas
siguiendo las instrucciones de ca-
da fabricante obteniéndose se-
cuencias de alta calidad para
todas las muestras.
Se obtuvo una concordancia de
100% entre los dos ensayos consi-
derándose 63 sitios de mutaciones
identificados en las muestras (30
correspondientes a la región de la
proteasa y 33 a la RT) con Truge-
ne. Con los resultados obtenidos,
la implementación del Sistema de
ViroSeq en el LRR, ha sido todo un
éxito.
Aunque los protocolos de ambas
pruebas son diferentes, el nivel de
complejidad es comparable y se
requiere personal debidamente
entrenado para la ejecución de
estas pruebas. Es importante se-
ñalar que son diferentes las bases
de datos utilizadas por estos dos
sistemas para asociar mutaciones
con un tratamiento determinado, y
cada uno de ellos utiliza para su re-
porte reglas o guías particulares. Se
recomienda que para la interpreta-
ción clínica de las mutaciones indivi-
duales y patrones de mutaciones
que proporcionan información sobre
resistencia se tomen en cuenta,
además de la historia previa de anti-
rretrovirales, las diferencias en las
bases de datos.
ID TRUGENE VIROSEQ ID TRUGENE VIROSEQL10I + + M41L + +
I13V* + + A62V + +
I15V* + + K65R + +
G16E* + + D67N + +
L19I* + + K70R + +
K20R* + + K70E + +
L33V + + L74V + +
L33F + + V75I + +
M36I* + + V75M + +
E35G + + V75T + +
K43T + + V90I* + +
M46I + + A98G + +
M46L + + L100I + +
I47V + + K101E + +
I54V + + K103N + +
D60E* + + V106I + +
I62V* + + V106M + +
L63P* + + V108I + +
L63T* + + Y115V + +
A71V + + V118I + +
A71T + + V179D + +
G73S + + Y181C + +
L76V + + M184V + +
G73S + + G190S + +
V77I* + + G190A + +
V82T + + H208Y* + +
N83D + + L210W + +
I85V* + + T215Y + +
L90M + + T215F + +
I93L* + + K219Q + +
P225H + +
F227L + +
M230L + +
ID Mutaciones identificadas en el estudio
+ Mutación identificada
* "Mutación Adicional" según informe de ViroSeq
REGIONES
PROTEASA TRANSCRIPTASA REVERSA
TABLA 1
MUTACIONES IDENTIFICADAS EN EL ESTUDIO
Sensibilidad: 100%, Especificidad: 100%
Valor predictivo positivo: 100%, Valor predictivo negativo: 100%
manera: 64 viales de 1 ml de sangre fresca
completa, 64 tiras de papel filtro Whatman 903
impregnada con sangre completa (5 círculos de
50μL en cada tira) y 64 viales con 250μL de
concentrado leucocitario. Los viales con sangre
completa se procesaron inmediatamente, mientras
que las alícuotas de concentrado leucocitario se
almacenaron a -70°C; la sangre impregnada en el
papel filtro se dejó secar por al menos 4 horas a
temperatura ambiente y posteriormente se
almacenó a temperatura ambiente en bolsas
plásticas con cierre hermético y sobres conteniendo
agente desecante; estas muestras de sangre seca
en papel filtro se recopilaron para una validación
posterior.
Materiales: se trabajó con los insumos y reactivos
indicados por Roche AMPLICOR® HIV-1 DNA Test
version 1.5.
Metodología: las muestras de sangre completa y concentrado leucocitario fueron preparadas y extraídas usando el reactivo Amplicor HIV-1 DNA Assay versión 1.5 según las indicaciones del fabricante; siendo la única diferencia en el
procedimiento en el caso del concentrado leucocitario, el uso de 200μL de muestra en lugar de 500μL. El ADN extraído fue amplificado específicamente en
un fragmento de 155 nucleótidos de una región
altamente conservada del gen gag que codifica los
antígenos específicos del core viral del VIH-1. La
detección se realiza mediante la hibridización de
sondas específicas en placas de micropozos y
lectura de absorbancia de la reacción colorimétrica
generada por el cromógeno y las enzimas ligadas a
los ácidos nucleicos hibridizados. Los ensayos
fueron validados e interpretados según las
indicaciones del fabricante3.
Resultados:
Para realizar los análisis de validación de los tipos
Introducción:
El diagnóstico de la infección por el VIH es
usualmente realizado con la detección de
anticuerpos contra el VIH. También es posible el
diagnóstico mediante detección directa del virus;
sin embargo, la detección del virus es necesaria
solo en situaciones muy particulares como el
diagnóstico de bebés nacidos de madres
infectadas por VIH, en quienes aún están
presentes los anticuerpos maternos, en sospecha
de infecciones primarias o en casos de ausencia
de anticuerpos durante el período de ventana
propia de la infección1.
De las alternativas más prácticas y costo-efectivas
que se pueden realizar en los laboratorios para la
detección directa del virus es la determinación de
la presencia de los ácidos nucleicos virales. Las
técnicas cualitativas son de gran utilidad como
marcadores de infección; ejemplo de estas
técnicas es la prueba de detección de ADN
Proviral del VIH en leucocitos, que se basa en el
principio de la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR)1.
El Laboratorio Regional de VIH/SIDA -LRR- utiliza
la prueba comercial Roche AMPLICOR® HIV-1
DNA Test version 1.5 para la detección de ADN
Proviral utilizando como muestra sangre
anticoagulada (EDTA), según indica la prueba 2.
Sin embargo, por razones técnicas y de logística
en el manejo de las muestras, el LRR ha conside-
rado necesario evaluar la efectividad de uso de
muestras alternativas como el concentrado
leucocitario.
Objetivo:
Validar la utilización de concentrado leucocitario
como muestra para la determinación de ADN
proviral de VIH-1, considerando que el
aseguramiento de la calidad de las pruebas de
laboratorio es crítica para el buen funcionamiento
de los Programas Nacionales de VIH/SIDA. Se
consideró como muestra de referencia la sangre
fresca completa, al ser la muestra recomendada
por el fabricante.
Materiales y métodos:
Muestra: se analizaron 64 muestras hemáticas
donadas voluntariamente por individuos cuyo
estado serológico era conocido al haber sido previa-
mente determinado por dos a tres pruebas
inmunodiagnósticas para VIH; estas muestras, 49
positivas y 15 negativas, son parte del banco de
muestras de referencia del LRR. Las muestras
fueron recolectadas en viales con EDTA como
anticoagulante y fraccionadas dentro de las
primeras 6 horas posteriores a la toma de muestra.
El fraccionamiento se realizó de la siguiente
de muestra, se consideró como muestra de referencia
la sangre completa, al ser la muestra recomendada
por el fabricante. Los resultados obtenidos de las
pruebas realizadas a las muestras de concentrado
leucocitario al ser comparados con los resultados de
las muestras de sangre completa correspondiente,
generaron valores para los parámetros de sensibili-
dad, especificidad y valores predictivos positivo y
negativo de 100%, siendo la precisión diagnóstica de
100% (ver tabla No. 1).
Los parámetros estimados en la evaluación de los
tipos de muestras para la detección de ADN Proviral
de VIH-1 utilizando el reactivo Amplicor HIV-1 DNA
Assay versión 1.5 reflejan que es factible el uso del
concentrado leucocitario como muestra; es más, el
uso del concentrado leucocitario facilita la logística de
almacenamiento de la muestra ya que la sangre
fresca debe ser preparada en los 4 días posteriores a
la toma de muestra 2 , no obstante, el concentrado
leucocitario congelado a bajas temperaturas puede
durar por mucho más tiempo, mejorando así la
organización del trabajo en el laboratorio.
Conclusión:
El uso de concentrado leucocitario como muestra
para la detección de ADN Proviral de VIH-1 es viable
y práctico para los laboratorios utilizando el reactivo
Amplicor HIV-1 DNA Assay versión 1.5.
Referencias
1. Hoffman, Rockstroch, Kamps HIV Medicine 2007
2. Jennings Cheryl; Danilovic Aleksandra; Stability of
Human immunodeficiency Virus Type 1 Proviral
DNA in whole blood samples; Journal of Clinicl
Microbiology, Aug 2005, p4249-4250
3. Roche Molecular System , 2005. Roche amplicor
HIV-1 Test manual. Roche Molecular System, Inc.,
Pleasanton, Calif
Validación del uso de concentrado leucocitario como muestra para la detección de
ADN Proviral de VIH-1 utilizando el reactivo Amplicor HIV-1 DNA Assay versión 1.5
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LRR EN ACCIÓN
A. Girón y C. González
Tabla No. 1 Comparación de muestras de sangre completa vs concentrado leucocitario para la detección de ADN Proviral de VIH-1
Sangre Completa
Se detectó ADN proviral
No se detectó ADN proviral
Total
Concentrado Leucocitario
Se detectó ADN proviral
49 0 46
No se detectó ADN proviral
0 15 15
Total 49 15 64
La micropipeta: un instrumento imprescindible
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El Laboratorio Regional de Referencia para VIH/SIDA C.A. visitará a los Laboratorios Centrales de Referencia de la Región
Centroamericana, con la finalidad de apoyarles en el fortalecimiento de la implementación del sistema de gestión de
calidad. En estas visitas se proporcionará asesoría técnica y se diseñarán planes de trabajo para dar continuidad al trabajo
que se ha estado realizando de tan buena manera por estas instituciones. Las visitas a Panamá, Honduras y El Salvador se
realizaron en julio; durante el mes de agosto serán visitados los laboratorios de Costa Rica, Guatemala y Nicaragua.
Durante el mes de julio, el Laboratorio Regional de Referencia para VIH/SIDA C.A. -LRR- continuo con su objetivo de transferir
metodologías a la región, mediante la realización del taller de “Preparación de paneles de suero” que se impartió a los pro-
fesionales del Laboratorio Central de Referencia de VIH de la Secretaría de Salud de Honduras. Así mismo, con estos profe-
sionales se desarrollo un taller sobre el transporte adecuado de las muestras biológicas por vía aérea según lo regulado por
normativas de la Asociación Internacional de Transporte Aéreo (IATA por sus siglas en inglés).
Aunado a estas actividades, el LRR apoyó técnicamente al Laboratorio Max Bloch, Laboratorio Nacional de Referencia, de
El Salvador en la implementación de la metodología para la detección de ADN Proviral de VIH-1.
A manera de acercamiento a los profesionales de los Laboratorios Centrales de Referencia de Centroamérica con las
metodologías de laboratorio para genotipaje de VIH, el LRR ha programado un entrenamiento a realizarse durante el mes de
agosto en la ciudad de Panamá. En esta actividad teórica y práctica, se ensayará mediante el secuenciamiento de
fragmentos amplificados del genoma del VIH (específicamente de la región que codifica para las enzimas Transcriptasa
Reversa y Proteasa), su comparación con la cepa salvaje del virus y su posterior análisis con bases de datos de referencia,
determinando así las mutaciones asociadas a la resistencia a medicamentos ARV del VIH-1.
En breve…
LRR EN ACCIÓN
Iván Ríos V.
A. Girón
La micropipeta es un instrumento de
laboratorio empleado para aspirar y
transferir pequeños volúmenes de
líquidos y permitir su manejo en las
distintas técnicas científicas. Cuando
realizamos una prueba, preparamos un
reactivo o una mezcla depositamos
nuestra confianza en la mayoría de los
casos en este instrumento llamado a
ser preciso, y que ya sea por su uso
diario, golpes o caídas pueden
desajustarse generando errores
sistemáticos que pueden repercutir en
los resultados obtenidos. Por la
importancia y magnitud de los
procedimientos que se realizan en un
laboratorio de VIH, tal confianza
debe sentarse sobre la base de un buen
programa de verificación que involucre
a todos los miembros científicos del
laboratorio, y para el cual utilizamos
herramientas como la media, la exacti-
tud, desviación estándar y el coeficien-
te de variación que nos permiten anali-
zar los valores obtenidos al pesar volú-
menes dispensados. Recalcar que
cada laboratorio debe establecer sus
límites de tolerancia (a falta de registros
por el fabricante) para cumplir con las
políticas de calidad establecidas por la
dirección permitiendo decidir que pipe-
tas necesitan ajuste y cuáles no, logran-
do así un buen monitoreo de las pipetas.
Es grato señalar que miembros de los
Laboratorios Nacionales de Referencia
para VIH de la región centroamericana
han sido entrenados en la metodología
para la verificación de mircopipetas y
quienes son agentes multiplicadores de
estos conocimientos en sus respectivos
países, contribuyendo así a elevar la cali-
dad de los procedimientos realizados
en nuestros laboratorios.
A través del Componente de Vigilancia Epidemiológica del Proyecto Regional de VIH y el LRR-VIH/SIDA, se esta apoyando la
realización de los estudios de Sub-Notificación y Evaluación del cumplimiento del Algoritmo diagnóstico de VIH en Costa Ri-
ca, Nicaragua y El Salvador; estudios que permitiran la implementación de acciones que ayuden a mejorar los sistemas de
notificación con que se cuentan actualmente, así como al fortalecimiento de las redes de laboratorio locales
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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LRR EN ACCIÓN
“Taller Regional de Vigilancia Epidemiológica de Laboratorio”
17 al 21 de mayo 2010, San Salvador, El Salvador
Taller de “Preparación de paneles de suero”
impartido a los profesionales del Laboratorio
Central de Referencia de VIH/SIDA de la
Secretaría de Salud de Honduras
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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LRR EN ACCIÓN
Taller de entrenamiento en el sistema ViroSeq para genotipaje de VIH-1 Personal del área de Biología Molecular del Laboratorio Regional de Referencia para VIH/SIDA C.A. y profesionales del
Laboratorio Central de Referencia de Panamá
Ciudad de Panamá, 25 al 28 de Mayo de 2010
Implementación de la metodología para la detección de ADN Proviral de VIH-1 Laboratorio Max Bloch. San Salvador, El Salvador
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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LRR EN ACCIÓN
Taller de “Preparación de control de calidad interno”
Laboratorio Central Dr. Max Bloch, Laboratorio Nacional de Referencia de
El Salvador. Este laboratorio está preparando paneles de suero, ha imple-
mentado el programa de control interno para VIH por la metodología MEIA
con Axsym y Vironostika de cuarta generación.
Curso de Gestión de Calidad y Buenas Prácticas de Laboratorio de OPS, II edición Personal del Laboratorio Central de Referencia de la Secretaría de Salud de Honduras