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CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA Y MICROBIOLÓGICA DE LECHE CRUDA BOVINA CON CETOSIS Y MASTITIS EN EL MUNICIPIO DE POPAYÁN
JENIFFER ALEJANDRA COLLAZOS CÓRDOBA
UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA POPAYÁN
2020
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CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA Y MICROBIOLÓGICA DE LECHE CRUDA BOVINA CON CETOSIS Y MASTITIS EN EL MUNICIPIO DE POPAYÁN
JENIFFER ALEJANDRA COLLAZOS CÓRDOBA
Proyecto de Trabajo de Grado en la modalidad de Investigación para optar al título de Médico Veterinario
Director
Fredy Javier Angarita Alonso Médico Veterinario y Zootecnista
UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA POPAYÁN
2020
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Nota de aceptación:
Aprobado por el Comité de Trabajos de Grado en cumplimiento de los requisitos exigidos por la Universidad Antonio Nariño, para optar al título de Médico Veterinario
______________________________ Fredy Javier Angarita Alonso
Director
______________________________ María Isabel Arteaga Orozco
Co-Directora
______________________________
Diego Tomás Hurtado Jurado
____________________________
Luis Gabriel Rivera Calderón Jurado
Popayán, 03 de julio de 2020
4
CONTENIDO
Pág.
LISTA DE TABLAS 7
LISTA DE ANEXOS 8
1. 7
1. 8
3. OBJETIVOS 14
3.1 OBJETIVO GENERAL 14
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 14
4. MARCO REFERENCIAL 15
4.1 ANTECEDENTES 15
4.2 MARCO TEÓRICO 23
4.2.1 Cetosis 23
4.2.1.1 Etiología 23
4.2.1.2 Fisiopatología 23
4.2.1.3 Clasificación. 24
4.2.1.4 Formas de cetosis y signos clínicos. 25
4.2.1.5 Factores de riesgo 27
4.2.1.6 Diagnóstico 27
4.2.1.7 Tratamiento 30
4.2.2 Mastitis 31
4.2.2.1 Etiología 31
4.2.2.2 Clasificación de la mastitis 33
4.2.2.3 Métodos diagnósticos. 35
4.2.2.4 Tratamiento 40
4.2.2.5 Propiedades físico-químicas de leche cruda. 41
4.3 MARCO CONTEXTUAL 47
5. METODOLOGÍA 49
5.1 TIPO DE ESTUDIO 49
5.2 LINEA DE INVESTIGACIÓN 49
5.3 LOCALIZACIÓN 49
5
5.4 SELECCIÓN DE PREDIOS LECHEROS 49
5.5 MUESTRA SEMOVIENTES BOVINOS 49
5.5.1 Criterios de inclusión. 49
5.6 MATERIALES Y MÉTODOS 50
5.6.1Toma de muestras: 50
5.6.2 Pruebas fisicoquímicas 51
5.6.2.1 Conductividad eléctrica 51
5.6.2.2 Determinación de densidad (AOAC 925.22, 1990): 51
5.6.2.3 Acidez (AOAC, 947.05, 1990): 52
5.6.2.4 Determinación de pH 53
5.6.2.5 Prueba de alcohol reductasa 53
5.6.3 Pruebas microbiológicas 53
5.6.4 Prueba de cromatografía 56
5.7 ANÁLISIS ESTADÍSTICOS 57
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. 58
7. CONCLUSIONES 71
BIBLIOGRAFÍA 92
6
LISTA DE TABLAS
Pág.
Tabla 1. Producción de leche en Colombia (millones/litros). 9
Tabla 2. Pérdidas ocasionadas por mastitis. 11
Tabla 3: Niveles de sensibilidad y especificidad de las diferentes pruebas
diagnósticas. 28
Tabla 4: Clasificación de la mastitis en vacas. 32
Tabla 5: Interpretación grados de mastitis 36
Tabla 6: Requisitos para la leche cruda. 41
Tabla 7: Requisitos de la leche cruda tomada en hato. 42
Tabla 8: Medidas para preparación de medios de cultivo. 53
Tabla 9: Resultados de condición corporal, N° días postparto y niveles de B-
hidroxibutirato (mmol/L) en 18 vacas localizadas en el municipio de Popayán. 57
Tabla 10: Prueba de California Mastitis Test (CMT) en campo. 59
Tabla 11: Prueba de conductividad eléctrica tomada en campo. 61
Tabla 12: Descripción resultados de la prueba de alcohol resistente a 20°C y 25°C.
64
Tabla 13: Resultados de prueba de pH tomado por cuarto mamario a 20 y 25°C. 65
Tabla 14; valores de Densidad tomada por pul a 20 y 25°C. 66
Tabla 15: Valor prueba conductividad eléctrica por cuarto mamario a 20 y 25°C. 67
Tabla 16: Resultados para cultivos en agar sangre. 68
Tabla 17: resultados de Acetona y BHB analizados por cromatografía. 69
7
LISTA DE ANEXOS
Pág.
Anexo A: Resultados de las variables, tomadas en campo. 74
Anexo B: Valores de conductividad eléctrica por triplicado a 20°C, tomadas en
laboratorio. 76
Anexo C: Resultados de prueba de cromatografía realizada por la Universidad del
Cauca.
8
1. INTRODUCCIÓN El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo identificar las características
fisicoquímicas y cromatográficas de la leche cruda bovina con y sin cetosis/mastitis
en vacas 18 lecheras de unidades ganaderas del municipio de Popayán que se
encontraban entre los primeros 150 días posparto, a las cuales se les tomaron
muestras de sangre por vena coccígea para luego ser analizadas mediante un
ketómetro para determinar los niveles de B-Hidroxibutirato, tomándose como
positivas aquellas que presentaron un valor de 1.2 mmol/L en adelante, también, se
tomaron muestras de leche de aquellas que dieron positivo para cetosis, se les
realizaron muestras en condición de campo como lo fueron CMT (California Mastitis
Test) y conductividad eléctrica, y se llevaron tanto para el laboratorio de Biología de
la Universidad Antonio Nariño, con el fin de realizarle las pruebas fisicoquímicas y
microbiológicas a las muestras por cuarto mamario, como para el laboratorio de
Química de la Universidad del Cauca, para realizarle las pruebas de cromatografía.
Con el desarrollo de esta investigación se busca contribuir al mejoramiento de la
productividad y competitividad del sector lechero, aportando tanto conocimiento
como las herramientas necesarias para que sean adaptadas mejores prácticas
ganaderas a nivel de pequeños, medianos y grandes productores, en cuanto al
manejo de la cetosis y las enfermedades secundarias que esta puede acarrear,
influyendo de manera positiva, en la economía del productor y en el bienestar del
animal.
9
1. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN. “La ganadería bovina es la actividad económica con mayor presencia en el campo
colombiano, la hay en todas las regiones, en todos los pisos térmicos, en todas las
escalas de producción y también en diversas especialidades: cría, levante, ceba,
lechería especializada y doble propósito”1.
En la tabla 1, se observa la producción de leche en Colombia (millones/litros) en los últimos 6 años. Tabla 1. Producción de leche en Colombia (millones/litros).
Fecha Producción
(millones lts)
2014 6.718
2015 6.623
2016 6.391
2017 7.094
2018 7.257
2019 7.301 Fuente: Fedegan, 2020.
“La producción de leche para el 2019 alcanzó un total de 7.301 millones de litros
con un crecimiento de 0.6%, en comparación al 2018 donde se registró un total
7.257 millones de litros” 2
La ganadería de leche especializada presenta una mayor predisposición a tener,
una gran variedad de enfermedades que se pueden dar en las vacas, debido al
estado del Balance Energético Negativo (BEN), durante el periodo de transición,
“periodo comprendido entre tres semanas antes y tres semanas después del parto,
donde la producción de leche aumenta rápidamente mientras que el consumo de
materia seca se encuentra limitado; esta situación ocasiona un desbalance entre los
nutrientes requeridos y los consumidos, dando lugar a una movilización de reservas
1 FEDEGAN. Ganadería colombiana. En: hoja de ruta 2018-2022. Noviembre de 2018, Bogotá D.C
Colombia. 2018. p. 1-126. 2 FEDEGAN. Ganadería colombiana. En: Fedegan producción y acopio de leche en Colombia. [en
línea]. Popayán Cauca. [consultado: 01 de junio de 2020]. Disponible en: https://www.fedegan.org.co/estadisticas/produccion-0
10
corporales y una considerable pérdida de peso” 3, conllevando a la presentación de
cetosis; “enfermedad metabólica que afecta las vacas lecheras que tienen una alta
producción”4, “caracterizándose por un aumento de cuerpos cetónicos (β-
hidroxibutirato, ácido acetoacético y acetona) en sangre”5.
“La cetosis es considerada una enfermedad de importancia dentro de las
explotaciones ganaderas debido a las pérdidas económicas derivadas de sus
efectos sobre la salud, la producción y la eficiencia reproductiva de los animales,
donde la cetosis se relaciona con la presentación de patologías concomitantes
como: desplazamiento abomasal, mastitis y metritis; además de una disminución en
el desempeño productivo”6. Esta enfermedad, ocasiona pérdidas económicas para
el productor, porque la vaca disminuye su producción de 2 a 4 litros de leche al día”3,
el equivalente a $672.200 y $1.344.440 por vaca, “con un precio promedio de 0.34
dólares ($1.102) por litro de leche (enero de 2019)”7 con lactancias en promedio de
305 días. En el 2018, se realizó un estudio sobre la incidencia y prevalencia de
cetosis en el altiplano Cundiboyacense, donde “la prevalencia de cetosis subclínica
fue del 42.6%, con una incidencia de 4.6% para vacas de primer parto y 31% para
multíparas, y una prevalencia de cetosis clínica del 6%.”8, por otra parte Cuellar y
Zúñiga, (2017) registraron para los municipios de Cajibío y Popayán, prevalencias
de cetosis subclínica de 14.9% y cetosis clínica de 6.5%. y finalmente Pérez, (2019)
reportó para la Meseta de Popayán prevalencias de cetosis subclínica de 4.7% y
cetosis clínica 21.47%.
3 GARRO, C.J; MIAN, L.; COBOS R., M. Subclinical ketosis in dairy cows: prevalence and risk factors.
En: Grazing Production System. Journal of animal physiology and animal nutrition, 2014, vol. 98, no. 5, pág. 838-844. 4 McSHERRY, B.J.; MAPLESDEN, D.C.; BRANION, H.D. Ketosis in cattle. A review. En: The
Canadian Veterinary Journal, 1960, vol. 1, no. 5, pág. 208-213. 5 MAINAR, F. et al. Cetosis Subclínica. Incidencia en explotaciones lecheras de Asturias. Citado por
SEPULVEDA-MENA, S.V. y RENDON-BETANCOURT, M. Frecuencia de cetosis subclínica en vacas de la hacienda Asturias en la vereda el Aguacate del municipio de Pereira. Trabajo de grado Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Tecnológica de Pereira. Facultad Ciencias de la Salud. Pereira: 2015, 62 p. 6 DUFFIELD, T. Subclinical Ketosis in Lactating Dairy Cattle. Citado por GARZON-AUDOR, A.M.
Incidencia y prevalencia la cetosis clínica y subclínica en vacas lecheras durante el posparto temprano en el Altiplano Cundiboyacense. Trabajo de grado Maestría en Salud Animal. Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Bogotá: 2018, 104 p. 7 COLOMBIA. MINISTERIO DE AGRICULTURA. Precio de Leche Cruda Países [en línea].
Federación Colombiana de Ganaderos FEDEGAN: s.f. [citado 3, mayo, 2019]. Disponible en internet en: https://www.fedegan.org.co/estadisticas/precios 8 GARZÓN, A. et al. Incidencia y prevalencia de cetosis clínica y subclínica en ganado en pastoreo
en el altiplano Cundiboyacense, Colombia. En: CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 2018, vol. 13, no 2, p. 121-136.
11
Por otro lado, está la mastitis, “que es una enfermedad altamente prevaleciente en
el ganado lechero y es una de las enfermedades más importantes que afecta
mundialmente la industria lechera; porque ocasiona pérdidas económicas muy
fuertes”9; “y es reconocida como la enfermedad más costosa en los hatos
lecheros”.10
“Los costos asociados a la mastitis incluyen disminución en la producción y calidad
de leche, leche descartada, gastos derivados de honorarios veterinarios, compra de
medicamentos, trabajo extra, descarte de vacas y ocurrencia de enfermedades
concomitantes”11 con un costo aproximado de US$170/caso”12 (aproximadamente
$630.000); en la siguiente tabla se muestra el valor de la pérdida económica
ocasionada por la mastitis en vacas lecheras.
Tabla 2. Pérdidas ocasionadas por mastitis.
Ítem
US$/vaca/ año
porcentaje
Reducción en la producción 121 66
Leche de descarte 10,5 5,7
Reemplazo antes de tiempo 41,7 22,6
Mano de obra extra 1,1 0,1
Medicamentos 7,4 4,1
Servicio veterinario 2,7 1,5
Total 184,4 100
9 WELLENBERG, G.J. et al. Viral infections and bovine mastitis: a review. En: Veterinary
microbiology, 2002, vol. 88, no. 1, pág. 27-45. 10 CORREA, M. G. P.; MARIN, J. M. O-serogroups, eae gene and EAF plasmid in Escherichia coli
isolates from cases of bovine mastitis in Brazil. En: Veterinary Microbiology, 2002, vol. 85, no 2, p. 125-132. 11 HALASA, T., et al. Economic effects of bovine mastitis and mastitis management: A review.
En: Veterinary quarterly, 2007, vol. 29, no 1, p. 18-31. 12 CEBALLOS, M.A. importancia económica de la mastitis. En: Proleche.com. charla XVI, 2015.
Caldas, Colombia. Universidad de Caldas. p. 1-33.
12
Fuente. Cabrera, V. 2013.
Basándose en estos argumentos es evidente la utilidad que tendría para los
productores el hecho de tener un método diagnóstico que resulte práctico, no
invasivo y exacto para la identificación y control de la cetosis en los hatos lecheros.
De ahí la necesidad de generar una prospección de un medidor electrónico portátil
(sensor) para analizar las concentraciones especialmente de β-hidroxibutirato en
leche cruda con cetosis y mastitis del ganado de producción de leche, con el fin de
controlar y prevenir este trastorno, incrementando el porcentaje reproductivo y
evitando así pérdidas económicas por disminución del mismo. Para esto es
importante identificar las características fisicoquímicas y cromatográficas de la leche
cruda de vaca con y sin cetosis/mastitis, dado que los resultados arrojados por estas
pruebas serán gran utilidad para la prospección del sensor.
13
3. OBJETIVOS 3.1 OBJETIVO GENERAL
Caracterizar las propiedades fisicoquímicas y microbiológicas de la leche cruda
bovina con cetosis y mastitis en unidades ganaderas localizadas en el municipio de
Popayán, Cauca.
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Caracterizar parámetros fisicoquímicos de muestras de leche cruda de vacas con y
sin cetosis/mastitis.
Describir los niveles de acetona y β- Hidroxibutirato en leche cruda de vacas
diagnosticadas con cetosis mediante cromatografía de gases acoplado a masas.
Identificar agentes patógenos bacterianos (Staphylococcus sp. y Streptococcus sp.)
en leche cruda de vaca con y sin cetosis/mastitis.
14
4. MARCO REFERENCIAL 4.1 ANTECEDENTES
CALDERON. A. et al. (2008). Prevalencia de mastitis bovina y su etiología
infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano
Cundiboyacense (Colombia).13
Mediante la prueba del California Mastitis Test (CMT), se evaluaron 11.416 cuartos
pertenecientes a 2.854 vacas de 40 fincas especializadas en la producción de leche
en el altiplano cundiboyacense, escogidas mediante un muestreo no probabilístico.
De los cuartos positivos (reacciones desde trazas hasta casos clínicos) se tomó una
muestra de leche para aislar los microorganismos involucrados en la mastitis bovina.
El 34.40% (3.931) de los cuartos fueron positivos al CMT. El 49.01% de los
aislamientos involucraron microorganismos infecciosos. Staphylococcus aureus, fue
aislado en el 29.09% y se convirtió en el principal patógeno encontrado.
Streptococcus agalactiae aislado en el 6.84% de las muestras. Las infecciones
mixtas representaron el 1.2% y la asociación más frecuente fue la de
Staphylococcus aureus y S. agalactiae. Los Staphylococcus coagulasa positivos
(SCP), diferentes al Staphylococcus aureus se encontraron en el 4.04% de las
muestras y en realidad no se tiene mucha información sobre ellos. Los
Staphylococcus coagulasa negativos (SCN) fueron aislados en el 11.75%. S. uberis
fue aislado en el 5.74% y S. Dysgalactiae en el 2.62%. Corynebacterium bovis
fueron aislados en el 8.44% y el Corynebacterium pyogenes en el 5.92%. El
Staphylococcus aureus está siendo propagado por la realización de malas prácticas
ganaderas en la implementación de programas de prevención y control de agentes
infecciosos y por presentar múltiples factores de virulencia.
13 CALDERÓN, A. et al. Prevalencia de mastitis bovina y su etiología infecciosa en sistemas
especializados en producción de leche en el altiplano Cundiboyacense (Colombia). En: revista colombiana de ciencias pecuarias. 2008, vol. 21, no 4, p. 582-589.
15
RAMIREZ, VASQUEZ. N. (2011). Factores asociados a mastitis en vacas de la
microcuenca lechera del altiplano norte de Antioquia, Colombia.14
Se efectuó un estudio de corte sobre la prevalencia de mastitis bovina en una
muestra representativa de las granjas lecheras del altiplano norte de Antioquia,
Colombia. Se evaluaron los resultados del California Mastitis Test (CMT), Recuento
de Células Somáticas (RCS) y cultivo bacteriológico de leche, y se analizaron los
factores de riesgo asociados a mastitis bovina. El análisis estadístico de la
información se efectuó por medio de estadística descriptiva, análisis de razón de
prevalencias y regresión logística multinivel. Con la prueba de CMT se detectó un
20% de cuartos afectados con mastitis, la prevalencia de mastitis subclínica por
vaca fue del 39,5% y la de mastitis clínica fue del 1,7%. Se efectuaron 648 cultivos
de muestras de leche, de las cuales 23,9% fueron negativas, 34% positivas a
Streptococcus agalactiae y 10,2% a Estafilococo Coagulasa negativo. El análisis de
regresión revelo que las vacas que tuvieron más de seis meses de lactancia
presentaron una Odds Ratio (OR) (razón de oportunidades, medida estadística
usada en estudios epidemiológicos transversales y de casos controles) de 2,65 en
comparación con las de un mes de lactancia (p < 0,05). Se halló un OR de 1,24 para
la asociación de la edad y la mastitis (p < 0,05). Para el lavado de manos se encontró
un OR de 0,36 en comparación con no hacerlo (p < 0,05). En conclusión, se halló
una alta frecuencia de mastitis por vaca. El microorganismo más hallado fue el
Streptococcus agalactiae. El trauma podría ser una causa importante de mastitis
dado que no se observó crecimiento bacteriano en 23,9% de los cultivos de
muestras de leche de cuartos con mastitis.
14 RAMIREZ. V. et al. Factores asociados a mastitis en vacas de la microcuenca lechera del altiplano
norte de Antioquia, Colombia. En: Rev. Med. Vet. Septiembre de 2011, no 22, p. 31-42.
16
CALDERÓN, A. et al (2012) Calidad fisicoquímica y microbiológica de leches
crudas en empresas ganaderas del sistema doble propósito en Montería
(Córdoba).15
La mastitis es la inflamación de las glándulas mamarias, como respuesta para
neutralizar agentes infecciosos y retornar a la función normal. Esta respuesta
inflamatoria afecta la síntesis de los diferentes componentes, lo que reduce la
calidad de la leche. El propósito de este estudio fue determinar calidad fisicoquímica
y microbiológica de la leche cruda de tanques y la sanidad de las ubres, en 15
empresas del sistema doble propósito, en Montería (Córdoba), escogidas por
muestreo no probabilístico y un estudio transversal. Se recolectó una muestra de
leche de tanque en cada una de las empresas involucradas en el estudio. Se
determinó densidad, porcentajes de acidez, proteína, lactosa, mesófilos, recuento
de células somáticas y la prevalencia de la mastitis, por medio de la prueba del
CMT. Por extrapolación, se calcularon las pérdidas económicas. El análisis
estadístico, se realizó mediante el programa SAS. Los valores fisicoquímicos, se
encontraron dentro de los valores normales. El recuento de mesófilos fue de
160.347 ± 213.354 Ufc/mL y el de células somáticas de 345.133 ± 302.241 CS/mL.
En todas las empresas, la prevalencia de la mastitis varió desde el 13,8% hasta el
74,7%. Se encontró regresión lineal entre la prevalencia de la mastitis y el recuento
de células somáticas (R2=0,867). En siete de estas empresas, el recuento de
células somáticas fue mayor a 250.000 CS/mL, lo cual, amerita la implementación
inmediata de programas de prevención y de control de la mastitis bovina.
15 CALDERÓN, A. et al. Calidad fisicoquímica y microbiológica de leches crudas en empresas
ganaderas del Sistema doble propósito en Montería (Córdoba). En: revista U.D.C.A actualidad & divulgación científica. 2012, vol. 15, no 2, p 399-407.
17
CUCUNUBO, G. et al. (2013) Diagnostico de cetosis subclínica y balance
energético negativo en vacas lecheras mediante el uso de muestras de sangre,
orina y leche.16
El objetivo de este trabajo fue comparar y asociar la presentación de cetosis
subclínica y balance energético negativo (BEN), diagnosticados mediante las
concentraciones de - hidroxibutirato (HB) plasmático, con indicadores sanguíneos,
urinarios y lácteos de energía en vacas lecheras. Setenta y cuatro vacas Holstein-
Friesian fueron empleadas desde la tercera semana pre-parto hasta la octava
posparto, obteniéndose muestras de plasma, orina y leche semanalmente; en
plasma se determinó las concentraciones de HB, ácidos grasos no esterificados
(NEFA) y glucosa; en orina se realizó la prueba de Rothera y se determinó la
excreción de HB y el pH; en leche se determinó el contenido de grasa y proteína.
Se consideró como puntos de corte para cetosis HB >1,0 >1,2 y >1,4 mmol/L y para
la presentación de BEN cuando NEFA >300 µmol/L en preparto y HB >0,6 mmol/L
en el posparto. La intensidad de la reacción de la prueba de Rothera y la
concentración de HB urinario se relacionaron con las concentraciones de HB
plasmático (r=0,57, P0,05) con los indicadores lácteos y el pH urinario. Se concluye
que las reacciones leve y moderada de la prueba de Rothera en orina son
indicadores de BEN, mientras que las reacciones moderada e intensa son
indicadoras de cetosis subclínica.
16 CUCUNUBO. L, G.; STRIEDER-BARBOZA. C.; WITTWER.F.; NORO. M. Diagnóstico de cetosis
subclínica y balance energético negativo en vacas lecheras mediante el uso de muestras de sangre, orina y leche. En: Revista Científica, FCV-LUZ. 2013, vol. 23, no 2, p. 111-119.
18
Cuellar y Zúñiga. (2017) Estudio piloto para la determinación de cetosis en
vacas hasta 120 días de lactancia en 12 fincas localizadas en los municipios
de Cajibío y Popayán.17
La afectación en los mecanismos de compensación energético de las vacas en las
primeras semanas de lactancia, que ocurre cuando la absorción o producción de
cuerpos cetónicos, excede la capacidad del rumiante en utilizarlos como fuente de
energía, generando un incremento plasmático de ácidos grasos no esterificados
(NEFA). Esto sumado a la disminución del consumo de materia seca en la etapa
postparto produce un desbalance energético negativo (BEN) y da origen a la
enfermedad denominada cetosis.
Los estudios sobre la cetosis bovina datan del año 1849, y se han intensificado en
los últimos años, donde muchos investigadores han realizado diversos aportes
teóricos conceptuales para su comprensión. Un aporte fundamental es elaborado
por Saborío, quien logro determinar que el 4.27% de una población de 203 vacas
de diferentes razas en etapa de postparto, tenían cetosis subclínica, y el 3.51%
presentaban cetosis clínica. Al aporte anterior se suma el ejecutado por Rovers,
quien a partir de una investigación de tipo cuantitativa concluyo, que la prevalencia
de cetosis subclínica era de un 14.3% en un rango de 0 – 60% en la población sujeta
a estudio.
Entonces los aportes mencionados, permiten evidenciar que la cetosis es una
enfermedad muy frecuente en vacas en periodo de transición independientemente
del tipo de raza. Esta situación se vuelve compleja, puesto que, al afectarse la salud
del animal, también se provoca una disminución en la producción de leche hasta en
un 25%, que se traduce en pérdidas económicas para los productores lácteos. Los
municipios de Popayán y Cajibío, son considerados una zona ampliamente propicia
para la producción de leche, sin embargo, hasta el momento no cuentan con un
estudio sobre determinación de la cetosis en vacas, que sirva de referente para el
direccionamiento de actividades preventivas y de control, para un manejo adecuado
en los procesos de producción de leche. El presente estudio tiene como objetivo
determinar la cetosis en vacas de hasta 120 días de lactancia en 12 fincas en los
17
CUELLAR Y ZUÑIGA. Estudio piloto para la determinación de cetosis en vacas hasta 120 días de lactancia en 12 fincas localizadas en los municipios de Cajibío y Popayán. Trabajo de grado Medicina Veterinaria. Popayán, Cauca: Universidad Antonio Nariño. Facultad de Medicina Veterinaria. 2017. 64 p.
19
municipios mencionados, a fin de contribuir a la documentación teórica conceptual,
lo cual resulta útil para los productores de leche e instituciones como Comité de
Ganaderos del Cauca, FEDEGAN, Unidad de Asistencia Técnica Agropecuaria
(UMATA).
El alcance del estudio está dirigido a determinar la cetosis en vacas de hasta 120
días de lactancia, realizando un análisis individual (por finca) y global (todas las
fincas), sobre la presencia de cetosis; posteriormente se realiza un análisis de
distribución respecta a la raza y los días de lactancia. Con relación a la metodología
utilizada, se recurre al enfoque cuantitativo de carácter no experimental de tipo
descriptivo, el cual permitió recolectar medir los datos de forma numérica. El diseño
es de tipo transversal, dado que se recolectaron datos en un mismo tiempo, además
de describir variables y establecer su relación. La población estuvo conformada por
vacas de hasta 120 días de lactancia en 12 fincas, localizadas en los municipios de
Cajibío y Popayán y fueron seleccionadas por muestreo por conveniencia. Para la
toma de muestras se acude a la prueba de cuerpos cetónicos en sangre mediante
la utilización del ketómetro (Kit Freestyle Optium®).
,
20
PERÉZ, F. (2018). Caracterización físico y química de leche cruda bovina con o sin cetosis de la meseta de Popayán.18
La cetosis bovina es un trastorno metabólico que afecta al ganado bovino lechero
durante el periodo de transición y con un mayor énfasis en las primeras tres
semanas de lactancia, y se caracteriza por la producción y acumulación de cuerpos
cetónicos (acetona, acetoacetato y el β-hidroxibutirato) dando como resultado la
disminución de productividad y calidad lechera, costos en el tratamientos y
enfermedades reproductivas de los animales. El proyecto de investigación se titula
“Caracterización física y química de la leche bovina con o sin cetosis de la meseta
de Popayán”. El objetivo de dicho trabajo investigativo consiste en identificar y
analizar los componentes físicos y químicos de la leche bovina con presencia de
cuerpos cetónicos y animales sanos, con la finalidad de diagnosticar cetosis clínica
y subclínica. El muestreo comprendió un grupo de 42 animales de diferentes fincas
productoras de leche bovina de la meseta de Popayán certificadas por Buenas
Practicas Ganaderas y de ordeño. La metodología de campo que se implemento fue
prueba de sangre, la cual evidencio el grado de B-hidroxibutirato presente en los
animales y de manera simultánea se realizó la conductividad eléctrica de las
glándulas mamarias de cada animal. En el trabajo de laboratorio se analizó los
parámetros organolépticos y valores correspondientes al pH, densidad, acidez
titulable, prueba de alcohol y reducción de azul de metileno de la leche. Los datos
obtenidos se presentan en forma descriptiva revelando de manera general la
prevalencia del B-hidroxibutirato presentes en el plasma de los animales, indicando
un porcentaje de 42% normal, un 21% de balance energético negativo, 4,7% de
cetosis subclínica y 21,47% de cetosis clínica. Los resultados referentes a las
características físicas y químicas de la leche fueron ponderados de acuerdo a lo
descrito por la literatura.
18 PEREZ, F.E. Caracterización físico y química de la leche bovina con o sin cetosis de la meseta
de Popayán. Trabajo de grado tecnología agroambiental. Popayán, Cauca: Corporación Universitaria Comfacaucau-Unicomfacauca. Faculta de Ingeniería programa de Tecnología Agroambiental. 2018. 60 p.
21
REDROVAN, D. (2019) Identificación de factores de riesgo para la presentación
de cetosis subclínica mediante análisis de registros en ganado bovino lechero
de la hacienda el Placer.19
La relación entre la cetosis (clínica o subclínica) y el periodo de transición, puerperio,
alimentación, manejo producción y reproducción representa un desafío para las
personas que enfrentan la enfermedad en sus vacas, porque esta sub diagnosticada
generando gran impacto económico. El objetivo del presente estudio es analizar la
producción lechera, la condición corporal y número de partos como factores de
riesgo para la presencia de cetosis subclínica en vacas lecheras, determinar su
asociación y elaborar un procedimiento operativo estandarizado de la utilización de
las tiras reactivas combina 10 M HUMAN en la hacienda el Placer. Mediante
criterios de inclusión y exclusión, se seleccionaron registros con un muestreo de
orina en el preparto, parto, 15, 30, 60 y 90 días post parto de los cuales 29 fueron
vacas considerados. Cada registro debió contar con el diagnostico de cetosis
subclínica con tiras reactivas combina 10 M HUMAN, medición de condición
corporal y de producción lechera. La información obtenida se analizó mediante
medidas de tendencia central, frecuencias, la prueba de Friedman, chi cuadrado de
Pearson y la prueba V de Cramer. Los resultados muestran que la presencia de
cetosis subclínica depende de la producción lechera a los 60 días post parto (p <
0.05) y a los 90 días post parto (p < 0.05) con 57% - 61% de asociación entre sí,
considerando a la producción lechera como factor de riesgo. En relación a las
variables de condición corporal y número de partos, frente a la presencia de cetosis
subclínica, los resultados no tuvieron diferencia significativa (p >0.05) y se los
categorizó como independientes y sin asociación entre sí. Se concluyó que la
producción lechera tiene relación directa con la enfermedad, indicando que las tiras
reactivas combina 10 M HUMAN pueden identificar cetosis subclínica en bovinos.
19 REDROVAN, D. identificación de factores de riesgo para la presentación de cetosis subclínica
mediante el análisis de registros en ganado bovino lechero de la hacienda el placer (Quito). Trabajo de grado Médico veterinario y Zootecnista: Universidad de las Américas. Faculta de ciencias de la salud. 2019. 87 p.
22
4.2 MARCO TEÓRICO 4.2.1 Cetosis. “la cetosis es una enfermedad metabólica que afecta principalmente
a vacas lecheras de alta producción, entre la 2da Y 8va semana posparto, donde se
caracteriza por presentar una disminución de la glicemia y aumento de la
concentración de cuerpos cetónico en los tejidos y fluidos orgánicos”20
“Se conoce como periodo de transición al tiempo donde ocurren mayores cambios
a nivel metabólico, endocrino y nutricional en la vaca y está comprendido entre las
tres semanas antes y las tres semanas después del parto”21, “esta enfermedad
metabólica está asociada al balance energético negativo que sufren las vacas
dedicadas a la producción láctea al inicio de la lactancia y se caracteriza por un
aumento en la concentración de cuerpos cetónicos circulantes”22.
4.2.1.1 Etiología. “Uno de los cambios fisiológicos que experimenta el animal al
acercarse a la lactancia es el aumento de sus requerimientos energéticos, los que
pueden incrementarse hasta en un 23% durante el último mes preparto”23, “en esta
etapa preparto hay una disminución en el consumo de materia seca que puede
llegar hasta un 30% para el día del parto, llevando a una movilización de grasa para
mantener la producción de leche hasta por 7 semanas posparto haciéndose más
notoria en las primeras semanas”24.
4.2.1.2 Fisiopatología. “Cuando la alta demanda de glucosa y ácidos grasos para
la producción de leche se suma a la disminución en el consumo de materia seca la
vaca entra en BEN”(balance energético negativo)25, “Llevando a la vaca a tratar de
compensar este, movilizando las reservas de lípidos, que a su vez aumenta la
20 DE ROOS, A. P. W., et al. Screening for subclinical ketosis in dairy cattle by Fourier transform
infrared spectrometry. En:Journal of dairy science, 2007, vol. 90, no 4, p. 1761-1766. 21 BLOCK, E. Transition Cow Research–What Makes Sense Today? En: Arm & Hammer Animal
Nutrition, High Plains Dairy Conference. Amarillo Texas. Church & Dwight Co., Inc, pág. 75-98. 22 GARZÓN, A. y OLIVER, O. Epidemiologia De la Cetosis en Bovinos: Una Revisión En: CES
Medicina Veterinaria y Zootecnia, 2018, vol. 13, no. 1, p. 42-61. 23 NATIONAL RESEARCH COUNCIL. Nutrients Requirements of Dairy Cattle: Seventh Resvised
Edition, 2001. 7a. ed. Washintong, D.C: National Academy Press, pág. 381. 24 DANN, H.M. y DRACKLEY, J.K. Carnitine Palmytoyltransferase I in Liver of Periparturient Dairy
Cows: Effects of Prepartum Intake, Pospartum Induction of Ketosis, and Periparturient Disorders. En: Journal of Dairy Science, 2005, vol. 88, no, 11, pág. 3851-3859. 25 NORO. M. y BARBOZA. C. Cetosis en Rebaños lecheros: Presentación y control. En: Revista Spei
Domus, 2012, vol. 8, no. 17, pág. 48-58.
23
concentración de ácidos grasos no esterificados (NEFA) en plasma”26 “las vacas en
este estado poseen un flujo muy limitado de glucosa para producir energía debido
a la ausencia del oxalacetato mitocondrial, este déficit activa la enzima CPT I
(carnitina palmetoyl trasnferasa I), la cual induce el transporte de los NEFA (ácidos
grasos libres) a la mitocondria, para su oxidación en la formación de cuerpos
cetónicos, siendo los principales: acetoacetato, Betahidroxibutirato (BHB) y
acetona, cuando se presenta un déficit de oxalacetato en la mitocondria del
hepatocito, el acetil-CoA es metabolizado a acetoacetato, el cual ingresa en el
citosol para ser oxidado a β-HB”27, “predisponiendo a la vaca a presentar
enfermedades como retención de placenta, desplazamiento de abomaso, distocias,
cetosis y mastitis en el periodo posparto”28.
4.2.1.3 Clasificación. “La cetosis se clasifica conforme su presentación en:
espontánea o primaria, secundaria y alimentaria”29.
● Cetosis espontánea o primaria. “Esta se define como un trastorno metabólico
que afecta a las vacas lecheras de alta producción con BEN, durante el final de
la preñez e inicio de la lactancia, debido al incremento de la producción láctea,
previo al máximo consumo voluntario de alimentos y se subdivide en dos formas:
cetosis tipo I y cetosis tipo II”30.
● Cetosis tipo I. “Se presenta generalmente cerca al pico de lactancia debido al
incremento de la producción láctea (4 semana de lactancia), previo al máximo
consumo voluntario de alimentos (6-8 semana de lactancia)”31,
“caracterizándose por tener concentraciones extremadamente bajas de glucosa
e insulina en sangre, una relación insulina – glucagón baja y alta concentración
26 GARCIA, K.; CAMPOS, R. y GIRALDO. L. Suplementación vitamínica y mineral como estrategia
para reducir la indecencia cetosis bovina en el trópico bajo. En: Revista Colombiana de Ciencia Animal, 2016, vol. 8, no. 2, pág. 204-213. 27 KANEKO. J. Carbohydrate Mestabolism and Its Diseases, 2008. Citado por Barboza et al.
Indicadores Energéticos de Vacas Lecheras a Pastoreo en Periodo de Transición y Lactancia Temprana con Alta o Moderada Condición Corporal Preparto. En. Revista Científica, FVC-LUZ, 2014, vol. 24, no. 1, pág. 73-82. 28 VANDEHAAR, et al. Effect of energy and protein density of prepartum diets on fat and protein
metabolism of dairy cattle in the periparturient period. En: Journal of Dairy Science, 1999, vol. 82, no. 6, pág. 1282-1295. 29 GARZON y OLIVER, 2018. Op. Cit., pag.23. 30 ANDERSSON, L. Subclinical Ketosis in Dairy Cows. Veterinary Clinics of North America: Food
Animal Practice. Citado por GARZON, A. y OLIVER, O. Epidemiologia de la cetosis en bovinos: una revisión En: CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 2018, vol. 13, no. 1, pág. 42-61. 31 NORO. M y BARBOZA. C. Op. Cit., p. 23.
24
de la enzima carnitil palmitil transferasa I, lo cual da como resultado la lipolisis
del tejido graso y un incremento en la formación de cuerpos cetónicos”14.
● Cetosis tipo II. Generalmente se presenta más temprano en la lactancia, en las
dos primeras semanas posparto, cuando la gluconeogénesis y cetogénesis no
están totalmente estimuladas debido al excesivo aporte de energía en el
preparto, similar a la diabetes mellitus tipo II no insulino dependiente en
humanos, de aquí su nombre en bovinos”17.
“Relacionada con la sobrealimentación en el periodo seco, presentación de
enfermedades concomitantes que disminuyan la ingesta de alimento,
presentándose identificándose hiperglicemia e hiperinsulinemia, una gran cantidad
de movilización grasa, alta concentración en hígado de ácidos grasos no
esterificados (Agnes), los cuales no son transportados a la mitocondria para la
síntesis de cuerpos cetónicos si no que son re-esterificados en el citosol a
triglicéridos acumulándose en el hígado y como la lipoproteína encargada de su
transporte de muy baja densidad a su vez su síntesis y secreción es baja en los
rumiantes, esto conlleva a la presentación de hígado graso en los animales”32.
● Cetosis secundaria. “Esta, al igual que la que se presenta por ayuno como la
que es por ayuno, es decurrente de cualquier enfermedad que produzca
disminución del consumo de alimento o ayuno durante el inicio de la lactancia”33.
● Cetosis alimentaria. “Asociada al consumo de ensilajes con fomentación butírica
y presencia de ácido butírico preformado, el cual se metaboliza a β-HB en la pared ruminal”34 “estos ensilajes presentan olor agrio y se caracterizan por aumentar la producción de grasa láctea; otros ensilajes considerados cetónicos presentan aminas biogénicas como putrescina, triptamina, cadaverina e histamina, los cuales desencadenan cetosis”35.
4.2.1.4 Formas de cetosis y signos clínicos.
32 HERD, T.H.; HOLTENIUS, P. & HOLTENIUS, K. Ruminant adaptation to negative energy balance,
New aspects of ketone bodies in energy metabolism of dairy cows. Citado por GARZON, Adriana y ESPINOSA, Juan. Epidemiologia de la cetosis en bovinos: una revisión. CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 2018, vol. 13, no. 1, pág. 42-61. 33 MCART, J.A.A.; NYDAM, D.V. y OETZEL, G.R, Op. Cit., p. 24. 34 DUFFIELD, Op. Cit., p. 24. 35 FLEMING, S.A. Disturbios Metabólicos. En: Medicina Interna de Grandes Animales. 2006. Citado
por NORO, M Y BARBOZA, C. Cetosis en Rebaños Lecheros: Presentación y Control. En: Revista Spei Domus, 2012, vol. 8, no. 17, pág. 48-58.
25
● Cetosis inaparente o subclínica. “La presentación de cetosis subclínica se
caracteriza por el incremento de las concentraciones sanguíneas de cuerpos
cetónicos, sin la presencia de signos clínicos, un 92% de los casos de cetosis
subclínica surge en los primeros 65 días de la lactancia”36, “con prevalencias que
fluctúan entre un 7 y un 34%”37. “En la cetosis subclínica los valores de
concentración de β-HB en sangre son mayores a 1.4 mmol/L (milimol por litro),
se describe que, concentraciones plasmáticas ≥1,2 mmol/L incrementan 4.7
veces la presentación de cetosis clínica y que concentraciones ≥1.0 mmol/L en
la primera semana posparto reduce un 25% la tasa de preñez en la primera
inseminación”38.
● Cetosis clínica. “Su incidencia varía entre un 2 y 15%, afectando las mejores
vacas del rebaño, generando la secreción de leche ácida”39, a este tipo de
cetosis pertenecen dos formas clínicas: la digestiva y la nerviosa.
● Cetosis digestiva. “Representa un 85-95% de los casos clínicos”40, “esta se
caracteriza por presentar un apetito selectivo con mayor avidez por leguminosas
que por concentrados; posteriormente evitan los ensilajes y finalmente los
forrajes”41 “las vacas afectadas reducen su producción láctea, incrementan la
pérdida de peso con la consecuente reducción de la CC (perdidas sobre 1 punto
de cc, escala 1 a 5)”42 “en muchos casos es posible identificar el olor a acetona
36 DOHOO, I.; MARTIN, S.W. Subclinical ketosis prevalence and associations with production and
disease. En: The Canadian Journal of Comparative Medicine, 1984, vol. 48, pág. 1-5. 37 RADOSTITIS. O.M. et al. Tratado de las enfermedades del ganado bovino, ovino, porcino, caprino
y equino, Madrid: McGraw-Hill Interamericana. 2002, p. 683-752. Citado por NORO, M, BARBOZA, C. Cetosis en Rebaños Lecheros: Presentación y Control. En: Revista Spei Domus, 2012, vol. 8, no. 17, pág. 48-58. 38 SEIFI et al. Metabolic Predictors of Post-partum Disease and Culling Risk in Dairy Cattle. Citado
por CUCUNUBO et al. Diagnóstico de cetosis subclínica y balance energético negativo en vacas lecheras mediante el uso de muestras de sangre, orina y leche. En: Revista Cientifica FCV-LUZ, 2013, vol. 23, no. 2, pág. 111-119. 39 DUFFIELD, T. subclinical ketosis in lactating dairy cattle. Vet Clin North Am Food Anim Pract,
2000. Citado por GARZON, Adriana y ESPINOSA, juan. Epidemiologia de la cetosis en bovinos: una revisión. CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 2018, vol. 13, no. 1, pág. 42-61. 40 COTE. J, F. et al. Bovine Ketosis: frequency of clinical signs, complications and alterations in blood
ketones, glucose and free fatty acids En: The Canadian Veterinary Journal, 1969, vol. 10, no. 7, pág. 179-187. 41 HERD. TH. Ruminant Adaptation to Negative Energy Balance: Influences on The Etiology of
Ketosis and Fatty Liver En: Vet Clin North Am Food Anim Pract.,2000, vol.16, no. 2, pág. 215-30. 42 GILLUND, P. et al. Body Condition Related to Ketosis and Reproductive Performance in Norwegian
Dairy Cows. En: Journal of Dairy Science, 2001, vol. 84, no. 6, pág. 1390-1396.
26
durante la expiración o en la leche; otros hallazgos son heces secas, depresión
moderada y algunas veces reluctancia al caminar” 43.
● Forma nerviosa. “Esta representa un 5 a 15% de los casos”44, “se presenta por
la oxidación de β-HB a alcohol isopropílico en el sistema nervioso central de
animales no adaptados a la metabolización de β-HB”45 “se evidencian signos de
inicio agudo, incluyendo salivación, masticación, andar tambaleante,
incoordinación motora, ceguera, caminar el círculos, déficit propioceptivo,
presión de la cabeza contra objetos, ceguera aparente, pica, hiperestesia,
vocalización constante, tremores moderados y tetania; algunas vacas pueden
tornarse agresivas con las personas u objetos”46.
4.2.1.5 Factores de riesgo. “Se relaciona con la selección genética de vacas que
alcanzan un rápido incremento en la producción y en el contenido de grasa láctea
en el inicio de la lactancia”47.
“Un alto índice de CC (condición corporal) al momento del parto y enfermedades
concomitantes que inducen a la presentación de cetosis secundaria como la
hipocalcemia, acidosis ruminal subaguda, metritis, endometritis, retención
placentaria, mastitis, desplazamiento de abomaso (principalmente a la izquierda),
peritonitis, laminitis, pielonefritis y lesiones musculares asociadas con el parto”48.
“También se considera un factor de riesgo, la carencia de Cobalto, puesto que este
se requiere para la síntesis de la vitamina B12, necesaria para la conversión de
propionato a glucosa”27
4.2.1.6 Diagnóstico. “Los programas de monitoreo para la detección de animales
positivos a cetosis subclínica deben iniciarse al parto, especialmente durante el
43 FLEMING, 2012. Op. Cit., p. 26. 44 COTE, 1969. Op. cit., p. 26. 45 KANEKO, 2014. Op. Cit., p. 26. 46 OSPINA et al. Association between the proportion of sampled transition cows with increased
nonesterified fatty acids and β-hidroxybutyrate and disease incidence, pregnancy rate, and milk production at the herd level. Citados por NORO, M. y BARBOZA, C. Cetosis en Rebaños Lecheros: Presentación y Control. Revista Spei Domus, 2012, vol. 8, no. 17, pág. 48-58. 47 DUFFIELD, T. Subclinical Ketosis in Lactating Dairy Cattle. Citado por NORO, M. y BARBOZA, C.
Cetosis en Rebaños Lecheros: Presentación y Control. Revista Spei Domus, 2012, vol. 8, no. 17, pág. 48-58. 48 OSPINA, et al. Citados por NORO y BARBOZA, 2012. Op. cit., p. 26.
27
primer mes posparto, periodo de mayor riesgo para la enfermedad”49;“La anamnesis
es de gran importancia, ya que da un indicio de la presentación de cetosis en la
vaca, los signos más apreciables son: inapetencia, rápido adelgazamiento, olor a
acetona y la presencia de cuerpos cetónicos en orina o leche”50. Siendo “la prueba
de oro, la determinación de la concentración por espectrofotometría de β-HB en
suero”51.
“Se han utilizado, además otras pruebas como las de razón grasa: proteína, al igual
que varios equipos portátiles (Cow-Side Test) que permiten realizar el diagnóstico
en campo, obteniendo resultados inmediatos y a menor costo como la
determinación de la concentración de β-HB en sangre completa (Presicion Xtra
Meter, Option Exceed), o en leche (Ketolac BHB) o la determinación
semicuantitativa en orina de acetoacetato (Ketostrix, Acetest) y leche (Ketostix, Pink
Test), en la tabla se resume la especificidad y sensibilidad de estos métodos
diagnósticos”52 (Ver Tabla 1).
“La determinación de las concentraciones de acetoacetato tanto en leche como en
orina, son pruebas semicuantitavtivas, cuyo principio es la reacción química por
colorimetría entre el nitroprusiato de sodio y el acetoacetato”53, “en lo que refiere a
la prueba de leche, esta tiene una baja sensibilidad de 10-41% pero una buena
especificidad de 93-100%, la prueba en orina tiene una sensibilidad aceptable de
50-78%, y una buena especificidad de 96-100%”54.
49 DUFFIELD, T. Monitoring strategies for metabolic disease in transition dairy cows. En: 23rd World
Buiatrics Congress, 2004. 50 DIRKSEN, et al. Medicina interna y cirugía del Bovino. Editorial Intermédica Citado por MEZA, M,
Uso de B-hidroxibutirato como herramienta de diagnóstico de balance energético negativo y cetosis bovina en vacas lecheras jersey, en el Establo Fundo Buen Pastor, La Joya. 2015. 51 DUFFIELD, 2004. Op. Cit., p. 27. 52 FRIEDEMANN, T. et al. An assessment of the value of the nitroprusside reaction for the
determination of ketone bodies in urine. En: Quarterly Bulletin of Northwestern University Medical School, 1946, vol. 20, no. 3, pág. 301-310. 53 ENJALBERT, F, NICOT,MC, BAYOURTHE, C, MONCOULON, R. Ketone Bodies in Milk And
Blood Of Dairy Cows: Relationship Between Concentrations And Utilization For Detection Of Subclinical Ketosis En: Journal Of Dairy Science. 2001, vol. 84, no 3, p. 583-589 54 CARRIER et al. Evaluation and use of three cowside tests for detection of suclinical ketosis in early
postpartum cows En: Journal of Dairy Science, 2004, vol. 87, no. 11, pág. 3725-3735.
28
Tabla 3: Niveles de sensibilidad y especificidad de las diferentes pruebas diagnósticas.
Prueba diagnostica p Sp Valor Ref* (mmol/L)
Valor ** (mmol/L)
Referencia
Prueba diagnostica
Acetest 91% 61% ≥1200 1 33
100% 59% ≥1200 2 33
Ketostix 78% 96% ≥1400 ≥1500 37
50% 99% ≥1400 ≥4000 37
Ketostix 67% 97% ≥1400 ≥1500 45
67% 100% ≥1400 ≥4000 45
Nitropusiato en leche
Ketocheck 41% 99% ≥1400 ≥trazas 37
10% 100% ≥1400 ≥moderado 37
Pink Test 76% 93% ≥1400 ≥100 34
38% 98% ≥1400 ≥300 34
βHB en leche
Ketotest 73% 96% ≥1400 ≥100 37
27% 99% ≥1400 ≥200 37
95.8% 63.4% ≥1400 ≥100 46
Ketolac 80% 76% ≥1400 ≥100 34
59% 90% ≥1400 ≥200 34
Ketolac 89% 82% ≥1400 ≥100 47
96.3% 98.2% ≥1200 ≥1200 38
Presicion
xtra 85.2% 99.4% ≥1400 ≥1400 38
88% 96% ≥1200 ≥1200 45
βHB en sangre 96% 97% ≥1400 ≥1400 45
Optium Exceed
85% 94% ≥1200 ≥1200 48
90% 98% ≥1400 ≥1400 48
NovaVet 97% 82% ≥1200 ≥1200 49
Fuente: Garzón y Oliver, 2018.
**mmol/L: Mili moles por litro.
29
“La prueba de B-HB en leche es también una prueba semicuantitativa con una
sensibilidad aceptable de 27-89% y una especificidad igual de 76-99%, sin embargo,
en una prueba realizada por Enjalbert et al., (2001), al comparar la prueba con la
determinación cuantitativa del metabolito, la prueba sobreestimó la concentración
de BHB en la muestra lo que demostró que su sensibilidad fue buena, de 95.8%
pero su especificidad fue baja, de 63.4%”55.
“La determinación de las concentraciones de BHB en sangre se realiza por medio
de un equipo portátil, el cual fue creado para medir las concentraciones de este
cuerpo cetónico en pacientes diabéticos humanos, por medio de una tira reactiva
que contiene la enzima β-hidroxibutirato deshidrogenasa, esta actúa oxidando el
BHB a acetoacetato, reduciendo el NAD a NADH, luego el NADH se re oxida a
NAD, produciendo una corriente eléctrica que es directamente proporcional a la
concentración de BHB en la muestra”56, “esta prueba tiene una muy alta
sensibilidad y especificad para el diagnóstico de la hipercetonémia en sangre”57, por
lo que la hace actualmente el método diagnóstico más utilizado; esta es una prueba
fácil, rápida, económica y precisa que permite realizar un diagnóstico rápido en
campo cuando no hay disponibilidad para realizar la prueba por medio de
espectrofotometría.
4.2.1.7 Tratamiento. “Los cuadros clínicos se deben tratar de manera rápida con
suministro oral de propilenglicol o glucosa endovenosa (500 ml de solución al 40%),
la cual produce una mejora inmediata y temporánea, sin embrago el uso de la
glucosa administrada por vía endovenosa causa flebitis”58.
55 OETZEL, G. y McGUIRK, S. Fact Sheet- Cowside Blood BHBA Testing with a Hand –Held
“ketometer”. En: University of Wisconsin –Madinson, School of Veterinary Medicine. 2015, WI 53706. 56 KONKOL, B,S; GODDEN, S.; RAPNICKI, P. ;OVERTON, M. & ROLLIN, E. Validation of a rapid
cow-side test for the measurement of blood beta-hydroxybutyrate in fresh cows. University of Minnesota College of Veterinary Medicine. Minnesota Dairy Health Conference. St Paul Minnesota: 2009, pág. 86-87. 57 GEISHASEN, T.; KEN, L.; KELTON, D. & DUFFIELD, T. Monitoring for subclinical ketosis in dairy
herds. En: Compendium on continuning education fort the practising veterinarian –North American Edition, 2001, vol. 23, no. 8, pág. 65-71. 58 NIELSEN, N. & INGVARTSEN, K. Propylene glycol for dairy cows: A review of the metabolism of
propylene glycol and its effects on physiological parameters, feed intake, milk production and risk of ketosis. En: Animal Feed Science and Technology Citado por NORO. M. y BARBOZA. C. Cetosis en Rebaños lecheros: Presentación y control. En: Revista Spei Domus, 2012, vol. 8, no. 29.
30
“Administración de glucocorticoides como la dexametasona (40mg) ha sido
cuestionada en el tratamiento de la cetosis, pues aumentan la glucemia, el apetito
y reducen la producción láctea temporariamente, por otro lado, incrementan la
lipolisis; en la presentación de cuadros nerviosos se recomienda el uso de hidrato
de cloral, un bolo de 30g en agua o la administración de 7g dos veces al día por 3
a 5 días; este medicamento no deprime la motilidad ruminal y aumenta la producción
de propionato en el rumen”59.
4.2.2 Mastitis. “La mastitis bovina, es una reacción inflamatoria de la glándula
mamaria, y produce alteraciones físicas y químicas en la leche, aumento del número
de células somáticas por la presencia de microrganismos patógenos y finalmente
cambios como es la pérdida de la funcionalidad. Esta reacción inflamatoria ocurre
como consecuencia de la respuesta de los tejidos a lesiones traumáticas, a
sustancias irritantes o la presencia de agentes infecciosos y sus toxinas que han
logrado colonizar el tejido secretor”60.
4.2.2.1 Etiología. “En la actualidad se han reportado más de 100 microorganismos
como causantes de infección intramamaria. La mayoría de las infecciones, incluidas
de importancia económica, son ocasionadas por especies de estafilococos,
estreptococos y bacterias Gram-negativas. Las últimas son esencialmente
coliformes”61.
Clásicamente estos microorganismos causantes de infección intramamaria o
mastitis han sido divididos en patógenos contagiosos y ambientales; en base a su
asociación epidemiológica con la enfermedad y a su proclividad de causar la
infección oportunista, persistente o transeúnte, respectivamente. Dependiendo,
asimismo, de su reservorio primario y el ambiente contra el cuarto de la glándula
mamaria infectada”62.
“Los patógenos contagiosos de la mastitis como el Staphylococcus aureus y
Streptococcus agalactiae que son infecciosos a nivel individual y a nivel de
59 NORO y BARBOSA, 2012. Op. Cit., p. 30. 60 MILLER, G. & BARTLETT, P.C. Economic effects of mastitis prevention strategies for dairy
producers. En: Journal of the American Veterinary Medical Association, 1991, vol. 198, no. 2, pág. 227-231. 61 BEDOLLA, C. Pérdidas económicas ocasionadas por la mastitis bovina en la industria lechera.
En: REDVET: Revista Electrónica de Veterinaria, 2008, vol. 9, no. 4, pág. 1-26. 62 BRADLEY, A.J. & GREEN, M.J. Adaptation of Escherichia coli to the bovine mammary. En: Journal
of clinical microbiology, 2001, vol. 39, no. 5, pág. 1845-1849.
31
población”63;“han sido reportados bajo control en los hatos lecheros a través del uso
de prácticas de manejo que utilizan la desinfección de los pezones después de la
ordeña, terapia de la vaca seca, desecho, mantenimiento del equipo de ordeño, y
terapia antibiótica de las infecciones intramamarias”64.
“Los patógenos ambientales a diferencia de los contagiosos son transmitidos entre
las ordeñas por el ambiente que sirve como la fuente primaria de estos organismos.
Los patógenos principales en este grupo son los bacilos entéricos Gram-negativos
(Escherichia coli, klebsiella spp), Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis
y Enterococcus spp”65.
“A pesar de que la mastitis por organismos contagiosos (especialmente
Streptococcus agalactiae) ha disminuido por mejoramiento en el manejo, las
pérdidas económicas debido a la enfermedad pueden continuar porque los
organismos causales no pueden ser erradicados del medio ambiente de las vacas
lecheras puesto que pertenecen a la micro biota normal del ambiente y se
encuentran en cada establo”66.
Además de los patógenos ya mencionados anteriormente, existen otros poco
comunes, causantes de mastitis clínicas como lo son las levaduras, prototecas y
nocardias. “Las principales levaduras causantes de la mastitis son Cryptococcus
neoformans y Cándida albicans. Esta mastitis se desarrolla principalmente en 80%
de los casos relacionados con una terapia inmoderada de antibióticos o como
consecuencia de heridas en los pezones”67.
“Los prototecas principalmente Prototheca zopfii, son algas sin color que se
encuentran cercanas a las vacas; no tienen propiedades patógenas. En
inflamaciones de la ubre pueden ser introducidas durante un tratamiento local con
antibióticos especialmente cuando la punta del pezón no es correctamente
desinfectada-contaminados o almacenados por largo tiempo. La curación de una
63 ZADOKS, R.N. Molecular and mathematical epidemiology of Staphylococcus aureus and
Streptococcus uberis mastitis in dairy herds. 2002. Tesis Doctoral. 64 ROSSITTO, P.V. et al. Antibiotic susceptibility patterns for environmental streptococci isolated from
bovine mastitis in central California dairies. En: Journal of dairy science, 2002, vol. 85, no. 1, pág. 132-138. 65 Ibid., p. 31. 66 NASH, D.L. et al. Heritability of intramammary infections at first parturition and relationships with
sire transmitting abilities for somatic cell score, udder type traits, productive life, and protein yield. En: Journal of dairy science, 2003, vol. 86, no. 8, pág. 2684-2695. 67 WOLTER, W. & CASTAÑEDA, H. Mastitis bovina, prevención, diagnóstico y tratamiento. Mastitis
bovina. Editorial Universitaria. Guadalajara, Jalisco: 2004, pág. 62-72.
32
vaca con mastitis por prototecas en general no es posible. Se recomienda sacrificar
los animales infectados”68.
4.2.2.2 Clasificación de la mastitis. “La mastitis bovina normalmente se da como resultado de la infección intramamaria por bacterias que pueden producir la enfermedad de manera clínica o subclínica”69, es decir puede ir acompañada de signos clínicos o no (Ver Tabla 2).
● Mastitis clínica. “La mastitis clínica es la enfermedad más común y más costosa
en la producción de leche en los países industrializados”70. “Es definida como
una anormalidad observada por los ganaderos en cualquiera de los dos casos:
la leche y/o la ubre”71.
Tabla 4: Clasificación de la mastitis en vacas.
Forma de mastitis Vaca Ubre Leche
Clínica Hiperaguda
Muy enferma, puede morir, no tiene
coordinación muscular Fibrosis mamaria, puede
agravarse Frecuentemente aguada y con manchas de sangre
Clínica aguda No hay cambios observables
El cuarto afectado se muestra duro, rojo e
inflamado Purulenta como suero y
acuosa
Clínica subaguda No hay cambios observables
El cuarto afectado puede estar inflamado
No se ven cambios, pero la producción puede
reducirse
Subclínica No hay cambios observables
No hay cambios observables
No hay cambios observables
Fuente: Bolaños et al. 2012.
68 Ibid., p. 32. 69 DOS SANTOS, N. et al. Phenotypic and genetic characterisation of bacteriocin-producing strains
of Staphylococcus aureus involved in bovine mastitis. En: Veterinary microbiology, 2002, vol. 85, no. 2, pág. 133-144. 70 Østerås. O. mastitis epidemiology practical approaches and applications. En: world buiatrics
congress, XXIV. 2006. Nice –France. P. 14 71 TOLLERSRUD, T. Staphylococcus aureus mastitis. Bacterial characteristics and host immune
responses. Tesis de doctorado en Medicina VeterinariaNational Veterinary Institute. Oslo: 2001, pág. 9.
33
“Se caracteriza por la tumefacción o dolor en la ubre, enrojecimiento, la leche
presenta una apariencia anormal y, en algunos casos, hay aumento de la
temperatura rectal, letargo, anorexia e incluso la muerte. Además, las bacterias
están presentes en la leche, el rendimiento es muy reducido, y su contenido está
alterado considerablemente”72.
“En algunos casos la inflamación de los cuartos mamarios es acompañada de
signos clínicos (signos pronunciados de inflamación mamaria y de enfermedad
sistémica), por lo que es diagnosticada entonces como mastitis clínica”73, la cual
puede presentarse de manera aguda y crónica.
“Las pérdidas causadas por mastitis clínica se clasifican como sigue:
. Pérdida por baja producción del animal enfermo.
. Pérdida de producción de leche por desecho de la misma, durante la
eliminación del medicamento.
. Frecuentemente hay un perjuicio duradero en el rendimiento lechero de la
vaca, por el uso de medicamentos o la presencia de la enfermedad.
. Costo de medicamentos y/o del médico veterinario.
. Aumento en los costos de la mano de obra”74.
● Mastitis subclínica. “La mastitis subclínica es definida como la presencia de un
microorganismo en combinación con un conteo elevado de células somáticas de
la leche”75 “La mastitis subclínica es sutil y difícil de corregir, la vaca parece
saludable, la ubre no muestra ningún signo de inflamación y la leche parece
normal, sin que existan cambios organolépticos en la misma. El número de
células somáticas en la leche, indicativo de la respuesta inflamatoria, se
encuentra elevado, al igual que el número de bacterias, lo que va acompañado
de una disminución del nivel de producción de la secreción láctea, así como de
la alteración de la composición de dicho producto”76.
72 HERINGSTAD et al. Selection for mastitis resistance in dairy cattle: a review with focus on the
situation in the Nordic countries. En: Livestock Production Science, 2000, vol. 64, no. 2-3, pág. 95-106. 73 DJABRI, B. et al. Quarter milk somatic cell count in infected dairy cows: a meta-analysis. En:
Veterinary research, 2002, vol. 33, no. 4, pág. 335-357. 74 WOLTER & CASTAÑEDA, 2004. Op. Cit., p. 33. 75 TOLLERSRUD. Op. Cit., p. 33. 76 HERINGSTAD, et al. Op. Cit., p. 33.
34
“Cuando los signos no son visibles, la presencia de patógenos y las modificaciones
citológicas de la leche traen como resultado una mastitis subclínica”77 “por lo que
las técnicas de laboratorio como la medición del conteo de células somáticas y el
cultivo bacteriológico son necesarios para detectar inflamación e infección”78.
La mastitis subclínica ocurre frecuentemente y puede conducir a grandes pérdidas
económicas debido al reducido rendimiento de leche, y multas a causa de los
elevados conteos de células somáticas presentes en los tanques de leche, “en la
práctica, los casos de mastitis subclínica con frecuencia no son detectados
rápidamente, o pueden incluso no ser reconocidas por el ordeñador”79.
4.2.2.3 Métodos diagnósticos.
● Observación y palpación de la ubre. “En la mastitis subclínica, la ubre de la vaca
permanece aparentemente sana, la leche que produce, a simple vista, es una
leche normal, pero una infección incipiente puede estar dañando el tejido
glandular y provocando por lo tanto una alteración en la leche que esta produce.
La infección puede provocar inflamación de uno, varios cuartos o de toda la
glándula, aumento de la temperatura en el área afectada, así como
enrojecimiento de la zona y dolor, estos eventos provocan que el sistema inmune
del animal actué tratando de aliviar el problema, además de lograr la mayoría de
las veces mantener la infección únicamente en el área afectada sin alterar otros
órganos o sistemas del animal”80.
“Cuando se encuentran todos o alguno de los síntomas enumerados se puede
interpretar como un caso de mastitis clínica, donde además se encuentran cambios
importantes en la leche que produce el tejido afectado, estos cambios pueden
consistir en alteración del color, aparición de grumos, coágulos sanguinolentos,
coágulos con puso una leche más acuosa, entre otros”81.
77 DJABRI, B, et al. Op. Cit., p. 34. 78BARBER, M.R. & YANG, T.J. Chemotactic activities in nonmastitic and mastitic mammary
secretions: presence of interleukin-8 in mastitic but not nonmastitic secretions. En: Clin. Diagn. Lab. Immunol., 1998, vol. 5, no. 1, pág. 82-86. 79 WELLENBERG, G.J. et al. Op. Cit., p. 34. 80 BOLAÑOS, F. et al. Mastitis bovina: generalidades y métodos de diagnóstico. En: revista
veterinaria REDVET. 2012, vol. 13, no. 11, pág. 11. 81 PÉREZ, C.G. et al. Métodos de detección de la mastitis bovina. En: Revista Veterinaria
REDVET.2007, vol. 8, no. 9.
35
● Pruebas químicas. “Entre éstas se encuentran: la conductividad eléctrica de la
leche, papel indicador de mastitis y la prueba de Whiteside. Respecto a la
conductividad eléctrica CE, el procedimiento químico es muy variable y hasta
cierto punto subjetivo por lo que no es recomendable como prueba única”82.
Conductividad eléctrica de la leche. “La Prueba de Conductividad Eléctrica (PCE)
se ha utilizado como un indicador de la mastitis durante la última década, se basa
en el aumento de conductividad eléctrica de la leche debido a su mayor contenido
electrolítico especialmente iones de sodio y de cloro y se ha desarrollado como un
método para monitorear el estado de la mastitis en la vaca. Se le encuentra como
parte de algunos equipos de ordeño computarizados dentro de las salas de ordeño,
así como también en forma de medidores portátiles, lo que permite el monitoreo
individual por cuarto”83.
“Esta técnica es importante porque mide la lesión, como es el caso del recuento
celular. Sin embargo, sus limitaciones probablemente restringen su uso a vacas de
producción elevada que se mantienen en rebaños pequeños, o en laboratorios con
auto analizadores. Se puede emplear una combinación de la detección de mastitis
subclínica tomando como base la conductividad eléctrica de la leche, la producción
láctea, el número de parto y los días de lactación, como un modelo logístico de
regresión como instrumento de análisis en un rebaño con una incidencia alta de
mastitis subclínica. El aparato disponible que se promociona con más frecuencia,
basado en la medición de la conductividad eléctrica de la leche, es un dispositivo
que se sostiene con la mano y tiene una copa empotrada donde se lanzan los
chorros de la leche”84; “Permite la identificación de la mastitis clínica con precisión,
pero en el caso de las mastitis subclínicas, la precisión es solo del 50% en
comparación con los métodos estándar. Este instrumento proporciona una lectura
digital del resultado de la PCE y representa una alternativa a la Prueba de California
para Mastitis (CMT) como prueba de monitoreo de la mastitis subclínica al lado de
la vaca”85. “Aunque a veces da como resultado un gran número de falsos positivos
o de falsos negativos, por lo que no es muy confiable”86.
82 Ibid., p. 35. 83 MEDINA, C.M. y MONTALDO, V.H. El uso de la prueba de conductividad eléctrica y su relación
con la prueba de california para mastitis CNM. Congreso nacional de control de mastitis (5: Aguas Calientes – México: 29-31, mayo, 2003). 84 RADOSTITIS, O.M. et al. Medicina veterinaria: mastitis bovina. 9 Ed. Mcgraw Hill. Madrid, España:
2002, pág. 728-810. 85 MEDINA y MONTALDO, 2003. Op. Cit., p. 35. 86 WOLTER y CASTAÑEDA, 2004. Op. Cit., p. 35.
36
● Pruebas biológicas. “Dentro de estas se encuentran: la prueba de california
mastitis test, prueba de catalasa, prueba de Wisconsin, prueba de CAMP
(Christie- Atkins- Munch-Peterson test) y el monitoreo de células somáticas, así
como el diagnostico bacteriológico por los métodos de aislamiento, cultivo,
tinción bioquímica e identificación”87.
Prueba de California para Mastitis (CMT): “Es una prueba sencilla que es útil para
detectar la mastitis subclínica por valorar groseramente el recuento de células de la
leche, no proporciona un resultado numérico, sino más bien una indicación de si el
recuento es elevado o bajo, por lo que todo resultado por encima de una reacción
vestigial se considera sospechoso”88, “los resultados pueden ser interpretados en
cinco fases, desde el resultado negativo en el que la leche y el reactivo siguen
siendo acuosos, hasta el recuento de células más elevado en el que la mezcla de
la leche y el reactivo casi se solidifica”89
En la siguiente tabla se observa la descripción para la interpretación de la muestra
CMT.
Tabla 5: Interpretación grados de mastitis
Resultado Descripción
Negativo El estado de la solución permanece inalterado, la mezcla sigue en estado líquido. El 25% de las células son leucocitos polimorfonucleares
Trazas Se forma un precipitado en el piso de la paleta que desaparece pronto. Un 30% son leucocitos polimorfonucleares
+ Hay mayor precipitado, pero no se forma gel, de un 30 a 40% son leucocitos polimorfonucleares
++ El precipitado se forma denso y se concentra en el centro, de un 40 a 70% son leucocitos polimorfonucleares
++ Se forma un gel muy denso que se adhiere a la paleta. De un 70 a un 80% son leucocitos polimorfonucleares
87 PEREZ et al., 2007 Op. Cit., p. 36. 88 BLOWEY, Roger et al. Control de la mastitis en granjas de vacuno de leche: guía ilustrada y
práctica. 1999. 89 BEDOLLA, 2014. Op. Cit., p. 36.
37
Fuente: DVG, 2002.
Prueba de Wisconsin para mastitis: “Esta prueba fue diseñada para el uso en el
laboratorio y es utilizada para el conteo de células somáticas en muestras de leche
fresca mezclada o leche de tanques de enfriamiento, así como para muestreo de
vacas individuales, se usa una solución similar a la que se emplea con la prueba de
California (CMT), pero en contraste con esta última, los resultados se miden
cuantitativamente dependiendo de la viscosidad”90.
● Pruebas bacteriológicas.
Conteo de células somáticas por microscopia directa: “El recuento microscópico
directo de células somáticas de la leche denominado también método óptico, si bien
es de referencia, actualmente es de poca utilidad cuando se trata de un gran número
de muestras y se debe trabajar con metodología más rápida, sin embargo, aún
mantiene su utilidad para los trabajos de investigación”91.
“El método tradicional de recuento de células somáticas es el recuento directo por
microscopio utilizando un agrandamiento de 500x, es un ensayo cuantitativo de
laboratorio por el cual se examina bajo el microscopio utilizando frotis teñidos de
leche problema y se cuenta el número de células somáticas, los tanques de leche a
granel con más de un millón de células por ml (mililitro) de leche sugieren que por
lo menos el 40% de las vacas de la explotación tienen mastitis”92.
“Este método es más preciso, pero también el que consume más tiempo y requiere
además de un equipo costoso, sin embargo, es difícil que una persona alcance a
contar más de 10 muestras por hora, es por eso que los procedimientos directos de
recuento por microscopios deben considerarse anticuados, ya que no se pueden
utilizar para analizar un gran número de muestras en poco tiempo y con alta
precisión”93.
● Métodos de conteo electrónico celular. “Los métodos electrónicos tienen en la
actualidad, sobre todo en los laboratorios de control lechero o dedicado a
90 Ibid., p. 37. 91 SARAN, A. y CHAFFER, M. Mastitis y calidad de leche. Ed. Intermédica. Buenos Aires- Argentina:
2000, 11 p. 92 BOLAÑOS, 2012. Op. Cit., p.37. 93 Ibid., p. 37.
38
diagnóstico o la investigación de la mastitis, utilizándose aparatos de recuentos
celulares como el Bactoscan, Fossomatic y el Counter coulter”94.
Método fluoro opto-electrónico (Fossomatic) y Counter coulter: “Estos dos aparatos
poseen alta correlación con la microscopia óptica, por lo que proporcionan una
medida segura en el recuento de células somáticas; Sin embargo, se pueden
presentar variaciones en el recuento en las mismas muestras cuando se realizan
con los dos aparatos debido a la diferencia de operación de cada uno de ellos”95.
“El Fossomatic basa su cálculo en la tinción fluorométrica del material nuclear,
mientras que el Counter coulter cuenta el número de impulsos eléctricos resultantes
de las partículas que pasan entre dos electrodos”96, es decir, cuenta partículas de
un diámetro determinado, que para el caso serían las células, pero en el rango de
recuento entrarían otras partículas, aumentando ligeramente el valor en
comparación con el Fossomatic”97.
“El Fossomatic es un contador específico de ADN basado en un principio óptico de
fluorescencia. Debido a que el bromuro de ethidio penetra en la célula y forma un
complejo fluorescente con el ADN nuclear, cada célula produce un pulso eléctrico
que se amplifica y se registra”98
“Procedimiento: Se coloca una muestra de leche de 5 ml de leche a 40º C. En el
Fossomatic se tiñen las células somáticas con un colorante fluorescente para
obtener una reacción solo con el ADN de las células. Es por eso que las partículas
sucias y los glóbulos de los lípidos no se suman al número de las células somáticas.
La muestra pasa frente a una luz especial y un detector registra cada célula
somática; Entre cada muestra el aparato limpia su sistema de flujo para evitar el
efecto del arrastre de una muestra a otra”99, todas estas funciones son automáticas.
De Laval cell counter: “Es un equipo portátil, que funciona con batería y posee un
medidor óptico de células somáticas de la leche. Esto permite estudiar el estado de
salud de la ubre de la vaca, también posibilita el estudio de los estándares higiénicos
en la leche del tanque. El equipo utiliza casettes los cuales succionan cantidades
pequeñas de leche, ya dentro del casette, la leche se mezcla con reactivos que
94 SARAN y CHAFFER, 2000. Op. Cit., p. 37. 95 BOLAÑOS et al., 2012. Op. Cit., pág. 38. 96 DJABRI, et al. Op. Cit., p. 38. 97 SARAN y CHAFER, 2000. Op. Cit., p. 38. 98 MARTÍNEZ, J.R. et al. Effect of freezing on fossomatic cell counting in ewe milk. En: Journal of
Dairy Science. 2003, vol. 86, pág. 2583-2587. 99 BOLAÑOS et al. 2012. Op. Cit., p. 38.
39
llegan al núcleo de las células somáticas, permitiendo su conteo, mediante un
sensor de fluorescencia, esto se traduce en el número de células somáticas en
leche, que aparece rápidamente en la pantalla del equipo”100.
4.2.2.4 Tratamiento. “En el caso de la terapia de la mastitis, se utilizan en primera
línea los antibióticos, la vía de aplicación puede ser sistémica o local (aplicación
intracisternal). Adicionalmente se tomarán medidas de protección con el propósito
de lograr reducir la inflamación; Una medida profiláctica de tratamiento, se puede
realizar mediante la aplicación del secado de las vacas”101 “El éxito de un
tratamiento antibacteriano contra la mastitis, está determinado por una elección
adecuada del antibiótico, teniendo en cuenta la resistencia de la bacteria y las
regulaciones farmacocinéticas, donde debe alcanzarse una concentración efectiva
antibacterial en el tejido, de acuerdo con el patógeno que se trate y durante un
periodo adecuado de tiempo. Básicamente para la terapia antibacterial de Mastitis
se recomiendan: ßlactamatos, Aminoglicósidos, lincosamidas, macrólidos,
tetraciclina, polipéptidos, trimetoprím-sulfonamidas combinadas, polipéptidos y
flouquinolona”102.
Condiciones para la administración de substancias antimicrobianas efectivas vía
parenteral: “El objetivo en el uso parenteral de un medicamento debe ser; alcanzar
el tejido de la ubre y obtener una concentración efectiva sobre un periodo de tiempo
lo suficientemente largo, un cálculo de la concentración efectiva de un antibiótico,
se puede hacer conociendo el valor de la concentración mínima inhibitoria (MCI).
De una gran importancia es el conocimiento de las propiedades farmacocinéticas
del antibiótico utilizado, para poder decidir si desde el punto de vista fármaco
dinámico, se aplica una cantidad suficiente de antibiótico para que después de una
administración sistémica, pueda llegar al tejido de la ubre”103. “Las bases débiles
regularmente alcanzan bien el tejido de la ubre, mientras que los ácidos débiles
prácticamente en un estado no febril (mastitis subclínica) no difunden al tejido de la
glándula mamaria, en este caso es determinante además de la lipofilia, el grado de
ionización del material utilizado, el cual depende por una parte del valor pK del
material y por otra del valor de pH de la sangre”104.
“Las llamadas formulas secadoras, las cuales tienen efecto principalmente en
bacterias Gram positivas, deben de liberar muy lentamente el material activo. Una
100 Ibid., p. 39. 101 WOLTER y CASTAÑEDA, 2004. Op. Cit., p. 39. 102 Ibid., p. 39. 103 Ibid., p. 39. 104 Ibid., p. 39.
40
afinidad al tejido y la secreción lo suficientemente alta, significa un correspondiente
efecto durable. El efecto antibacterial debe ser sostenido a lo largo de varias
semanas”105.
● Tratamiento de la mastitis subclínica.
“Para el tratamiento de estas se ha utilizado exitosamente en los casos de
Staphylococcus resistente a la penicilina, el uso de espiramicina inyectable por 5
días, y el mismo producto vía intramamaria en el último día de secado; y para los
sensibles a la penicilina se usa el producto por 5 días vía parenteral y el ultimo día
intramamario”106.
“Un tratamiento retardado con antibióticos será inútil, ya que los agentes causales
después de 12 horas no se pueden detectar en la ubre. Es muy importante realizar
una terapia dirigida a los efectos tóxicos, para evitar los daños permanentes al tejido
glandular, la pérdida de un cuarto o de la vaca”107.
3.2.3 Calidad de la leche. “La calidad de la leche comercial y sus derivados en una
industria láctea depende directamente de la calidad del producto original o materia
prima, proveniente de las zonas de producción y de las condiciones de transporte,
conservación y manipulación en general hasta la planta, por lo tanto, el éxito y buen
nombre de la industria y en última instancia la calidad del producto que llega al
consumidor, dependen del control que se lleve sobre la leche cruda”108, en este caso
la leche cruda bovina.
Para asegurar la idoneidad de la leche cruda se deben realizar una serie de pruebas
con el fin de establecer la calidad sanitaria, algunas de estas se realizan in situ y
otras en un laboratorio de microbiología.
4.2.2.5 Propiedades físico-químicas de leche cruda.
● NTC Productos lácteos. Leche cruda: Esta norma tiene como objetivo establecer
los requisitos que debe cumplir la leche cruda como materia prima para su
105 Ibid., p. 40. 106 Ibid., p. 40. 107 WOLTER y CASTAÑEDA, 2004. Op. Cit., p. 40. 108 UNIVERSIDAD DE ZULIA. Introducción al control de calidad de la leche cruda guía práctica.
Universidad de Zulia. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Producción e Industria Animal. Cátedra de Ciencia y Tecnología de la leche. Maracaibo: 2003. 24 p.
41
industrialización. La siguiente información es basada en la Norma Técnica
Colombiana NTC 399 cuarta edición 2002-11-22: para productos lácteos.
Leche: “Producto de la secreción mamaria normal de animales bovinos lecheros
sanos, obtenida mediante uno o más ordeños diarios, higiénicos, completos e
ininterrumpidos, sin ningún tipo de adición o extracción”109.
Leche cruda: “Leche que no ha sido sometida a ningún tipo de calentamiento, es
decir su temperatura no ha superado la de la leche inmediatamente después de ser
extraída de la ubre, no más de 40°C”110.
Requisitos generales: “La leche cruda debe presentar un aspecto normal, estar
limpia y libre de calostro, preservativos, colorantes, materias extrañas y olores
extraños; este debe ser obtenida de animales sanos libres de enfermedades tales
como: la Fiebre Aftosa, Brucelosis, Tuberculosis, Estomatitis Vesicular y Rabia”111.
“Para los límites máximos de Aflatoxina M1, residuos de medicamentos veterinarios
y de plaguicidas se tendrán en cuenta las normas nacionales de carácter oficial o
en su defecto lo establecido en el Codex Alimentaruis (FAOSTAT AGRICULTURE
DATA) o de otras normas nacionales”112.
Requisitos específicos: La leche deberá cumplir con los requisitos indicados en la
siguiente tabla.
Tabla 6: Requisitos para la leche cruda.
Requisitos Mínimos Máximos
Densidad 15°/15°C (gravedad especifica)
1,030 1,033
Materia grasa, en % m/m 3,0
Sólidos totales en % m/m 11,3
Sólidos no grasos (extracto seco desengrasado), en % m/m
8,3
109 INSTITUTO COLOMBIANO DE NORMAS TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN ICONTEC. Edición 4.
Bogotá D.C.: 2002. 110 Ibíd., p. 41. 111 Ibíd., p. 41. 112 ORGANIZACIÓN DE LAS NACIONES UNIDAS PARA LA AGRICULTURA Y LA
ALIMENTACION, ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD. Codex Alimentarius alimentos producidos orgánicamente. 2 ed. Roma. 2005. 74 p.
42
Acides expresada como ácido láctico 0,13 0,18
Impurezas macroscópicas (sedimentos), en ml
Disco B
Índice crioscópico -0.530 °C) -0.510 °C
(-0.550 °H) ( -0.530°H )
Proteínas de leche en los sólidos no grasos de la leche (Nx6,38). % m/m
33
Índice lacto métrico, en °L 8,4
No se coagulara por la adición de un volumen igual de alcohol de 68% en peso o 75% en volumen
Estabilidad proteica al etanol
Presencia de conservantes Negativa
Presencia de adulterantes Negativa
Presencia de neutralizantes Negativa
Plomo en mg/kg máx. 0,02 Fuente: Icontec. NTC 399 (2002).
Calidad microbiológica: la calidad microbiológica de la leche cruda tomada en hato
debe cumplir con los requisitos establecidos en la siguiente tabla.
Tabla 7: Requisitos de la leche cruda tomada en hato.
Requisito Límite
Recuento de microrganismos mesófilos, UFC/ml, máx.
700 000
Recuento de células somáticas/ml, máx. 700 000 Fuente: Icontec. NTC 399 (2002).
Reductasa: “El ensayo de reductasa para la leche cruda tomada en hato debe ser
mínimo de 4 horas, esta prueba es una medida fisicoquímica indirecta del grado de
contaminación de una leche”113.
Toma de muestras: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la NTC (Norma
Técnica Colombiana) 666. Los planes de muestreo y toma de muestras, diferentes
113 Op. Cit. INSTITUTO COLOMBIANO DE NORMAS TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN ICONTEC.
2002. P. 42.
43
a los especificados en esta norma pueden ser acordados entre las partes teniendo
en cuenta lo establecido en las normas NTC 4425 Y NTC 4518”114.
Aceptación o rechazo: “Si la muestra ensayada no cumple con uno o más de los
requisitos en esta norma, se rechazará el lote. En caso de discrepancia, se repetirán
los ensayos sobre la muestra reservada para tales efectos. Cualquier resultado no
satisfactorio en este segundo caso, será motivo para rechazar el lote”115.
Determinación de la materia grasa: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la
NTC 4722:1999, o en la ISO (International Standard Organization) 1211:1999, o en
la IDF (International Dairy Federation) Standard 1D-1996 (Materia grasa6 %), o en la
IDF Standard 16 C:1987 (Materia grasa >6 %) o en la IDF Standard 22B:1987”116.
Determinación de sólidos totales: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la
NTC 4979:2001, o en la ISO 6731:1989 (Confirmada en1998), o en la IDF Standard
21 B:1987”117.
Determinación de solidos no grasos (extracto seco desengrasado): “Se efectuará
por diferencia entre los sólidos totales y el contenido de grasa, de acuerdo con la
siguiente formula de Richmond”118.
%𝐸𝑆𝐷 = 250(𝐷 − 1) + 0,2𝐺 + 0,14
En donde:
“ESD: extracto seco desengrasado
D: densidad de la leche a 15/15 °C
G: porcentaje de materia grasa m/m en la leche.
114 Ibid., p. 43. 115 Ibid., p. 43. 116 INTERNATIONAL STANDARD. Milk- determination of fat content- gravimetric method (reference
method). ISO 1211, IDF 1. E ed. Switzerland. ISO and IDF. 2010. 8 p. 117 Op. Cit., INSTITUTO COLOMBIANO DE NORMAS TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN ICONTEC.
2002. P. 43. 118 Ibid., p. 43.
44
“La diferencia máxima recomendada entre duplicados debe ser igual 0.06% m/m de
los sólidos no grasos.”119.
Determinación de la acidez: “Esta se efectuará de acuerdo con lo indicado en la
NTC 4978:2001, o en la AOAC (Association of Offcial Analytical Chemists) 33.2.06
(974.05)”120.
Determinación de impurezas macroscópicas (sedimento): “Se efectuará de acuerdo
con lo indicado en la AOAC 16.3.01 (952.21) o 33.2.42 (960.28)”121.
Determinación del índice crioscópico: “Se efectuará por el método del crioscópio
termistor, de acuerdo con lo indicado en: proyecto de norma DE568/2001, o la
ISO/FDIS 5764, o en la IDF Standard 108B:1991 o en la AOAC 33.2.35(961.07), o
en la AOAC 33.2.04 (990.22), o el Documento 391D0180 métodos de análisis y
prueba de la leche cruda y de la leche tratada térmicamente, Legislación comunitaria
vigente, Anexo II, numeral I”122.
Recuento de organismos mesófilos: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la
NTC 4519 o en la ISO/DIS 4833 o en la ISO 6610, o en la IDF Standard 161A, o en
la IDF Standard 100B, o en la IDF Standard 169 o en el Documento 391D0180.
Métodos de análisis y de prueba de la leche cruda y de la leche tratada
térmicamente, Legislación comunitaria vigente, Anexo II, numeral IV”123.
Recuento de Células Somáticas: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la ISO
13366-1/2/3, o en la AOAC 33.2.05 (975.16) movido al AOAC 17.13.0, o en la IDF
148A, o en el documento 391D0180.
Métodos de análisis y de prueba de la leche cruda y de la leche tratada
térmicamente, Legislación comunitaria vigente, Anexo II, numeral VI”124.
119 Ibid., p. 44. 120 OFICIAL METHODS of ANALYSIS. Associationof of Official Analytical Chemists. 15 ed. United
States of America. Association of Official Analytical Chemists, INC. 1990. 771 p. 121 Ibid., p. 44. 122 INTERNATIONAL ORGANIZATION OF STANDARDIZATION (ISO). Milk- determination of
freezing point – termistor cryoscope method (reference method). ISO/TC 34/ SC 5. 3 ed. mayo de 2005. 17 p. 123 NORMA TECNICA COLOMBIANA. Microbiología de los alimentos para consumo humano y
animal, método horizontal para el recuento de microorganismos, técnica de recuento de colonias a 30°c. NTC 4519. Abril de 2009. 9 p. 124 INTERNATIONAL STANDARD. Milk- enumeratios of somatic cells – part 1 microscopic method
(reference method). ISO 13366-1, IDF 148-1. 2 ed. Switzerland. ISO and IDF. 2008. 8 p.
45
Determinación de conservantes: Se determinarán los conservantes que se deban
investigar de acuerdo con lo establecido en la legislación nacional vigente.
“18.8.1 Determinación de peróxido de hidrógeno: Se efectuará de acuerdo con lo
indicado en la AOAC 47.3.22. (957.08)”125
18.8.2 Determinación de formaraldehído: Se efectuará de acuerdo con lo indicado
en la AOAC 47.3.20 (931.08)”126.
Determinación de adulterantes: “Se efectuará de acuerdo con los métodos para
investigar la adición de harinas y almidones, sueros, sacarosa y cloruros
establecidos por la autoridad sanitaria competente”127.
Determinación de neutralizantes: “En el caso de agentes neutralizantes se efectuará
de acuerdo con los métodos para investigar la adición de alcalinos a la eche
establecidos por la autoridad sanitaria competente, entre los más sencillos están las
pruebas colorimétricas que dan indicadores de pH como el ácido rosálico o rojo de
fenol”128.
Determinación de la gravedad especifica (Densidad): “Se efectuará de acuerdo con
lo indicado en la AOAC 33.2.03 (925.22) con picnómetro o hidrómetro calibrados”129.
Determinación de plomo: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la AOAC
9.2.19 (AOAC 975.25) o en AOAC 9.1.09(AOAC 999.11)”130.
125 OFICIAL METHODS of ANALYSIS. AOAC Oficial Method 957.08 hydrogen Peroxide in Milk. 15
ed. United States of America. Association of Official Analytical Chemists, INC. 2000. 1 p. 126 OFICIAL METHODS of ANALYSIS. AOAC Officil Method 931.08 Formaldehyde in food. 15 ed.
United States of America. Association of Official Analytical Chemists, INC. 2000. 1 p. 127 Op. Cit., INSTITUTO COLOMBIANO DE NORMAS TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN ICONTEC.
2002. P. 45. 128 Ibid., p. 45. 129 OFFICIAL METHODS of ANALYSIS. AOAC official method 925.22 Specific Gravity of Milk
Pycnometer Method Procedure. 15 ed. United States of America, association of Official Analytical Chemists, INC. 2000. 1 p. 130 OFFICIAL METHODS of ANALYSIS. AOAC official method 999.11 Lead, Cadmiun, Cooper, Iron
and Zinc in Foods. United States of America, association of Official Analytical Chemists, INC. 2006. 3 p.
46
Determinación de proteína: “Se efectuará de acuerdo con lo indicado en la NTC
5025:2001, IDF Standard 141B:1996, o en IDF Standard 98A:1985, o en la AOAC
33.2.17 (975.18). o en la AOAC 33.2.31 (972.16”131.
Métodos de rutina: “Podrán utilizarse métodos de rutina para los análisis previstos
en la presente norma siempre que dichos métodos sean validados con respecto al
método de referencia, en caso de litigio, los resultados obtenidos con el método de
referencia serán los determinantes” 132.
Envase: “La leche cruda se transportará y almacenará en recipientes higiénicos”133.
4.3 MARCO CONTEXTUAL
“La investigación se realizó en el municipio de Popayán (Cauca), el cual cuenta a
una altitud de 1.738 metros sobre el nivel del mar, con una temperatura media de
19°C, se localiza a los 2°27´ norte y 76°37'18" de longitud oeste del meridiano de
Greenwich, la población estimada es de 270.000 habitantes aproximadamente en
su área urbana”134.
“La extensión territorial es de 512 km, debido a que cuenta con una altura de 1.737
msnm, muy cerca al Ecuador tiene una temperatura media de 18° a 19°C en horas
de la madrugada en verano”135.
“Popayán limita al oriente con los municipios de Totoró, Puracé y el departamento
del Huila, al occidente con los municipios del Tambo y Timbío, al norte con Cajibío
y Totoró y al sur con los municipios de Sotará y Puracé. La mayor extensión de
suelo corresponde a los pisos térmicos templado y frío” 136.
131 OFFICIAL METHODS of ANALYSIS. AOAC official method 975.18 Protein in Milk. United States
of America, association of Official Analytical Chemists, INC. 2000. 1 p. 132 Op. Cit., INSTITUTO COLOMBIANO DE NORMAS TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN ICONTEC.
2002. P. 46. 133 Ibid., p. 46. 134 ALCALDÍA DE POPAYÁN. Nuestra geografía [en línea]. Alcaldía de Popayán, [citado 6 mayo,
2019]. Disponible en internet: <http://www.popayan.gov.co/ciudadanos/popayan/nuestra-geografia> 135 Ibid., p. 46. 136 Ibid., p. 46.
47
“Popayán se asienta en dos zonas de vida a saber, bosque andino y sub andino,
por lo que su biodiversidad es bastante amplia, la ciudad es atravesada por el río
Cauca, a lo largo de más de 10 km de urbe alcanzando a tener 40 m de ancho
promedio”.137
137 Ibid., p. 47.
48
5. METODOLOGÍA
5.1 TIPO DE ESTUDIO
Se plantea realizar una investigación descriptiva exploratoria.
5.2 LINEA DE INVESTIGACIÓN
Salud pública y Medicina Veterinaria
5.3 LOCALIZACIÓN
“La investigación se realizó en doce unidades ganaderas del municipio de Popayán
(Cauca), el cual presenta una extensión de 49.050 hectáreas y está localizada a
una latitud media de 1760 msnm”138.
5.4 SELECCIÓN DE PREDIOS LECHEROS
Se realizó con el apoyo de la Asociación de Productores Lácteos y Ganaderos del
Municipio de Popayán – ASPROLGAN, las variables de inclusión que se tendrán en
cuenta para esta selección son: predios certificados por el ICA (Instituto Colombiano
de Agricultura) libres de brucelosis y tuberculosis, que cumplan con la
implementación de Buenas Prácticas de Ordeño (BPO) y Buenas Prácticas
Ganaderas (BPG).
5.5 MUESTRA SEMOVIENTES BOVINOS
Se seleccionarán todas las hembras bovinas que para el momento de la toma de
muestras cumplan con los siguientes criterios de inclusión:
5.5.1 Criterios de inclusión.
Edad: 3 a 8 años.
Hasta primeros 150 días de lactancia
Producción láctea ≥ 15 Litros/leche/día.
Realización de dos ordeños (AM – PM).
Reciban suplemento de concentrado.
Vacas diagnosticadas con cetosis bovina en la unidad ganadera
Cabe señalar que todas las unidades ganaderas de leche que se visitarán serán
evaluadas desde el punto de vista sanitario.
138 Ibíd., p. 48.
49
En total se utilizaron 18 semovientes.
5.6 MATERIALES Y MÉTODOS
5.6.1Toma de muestras: Al llegar al lugar del muestreo se seleccionó las vacas
que estaban dentro de los criterios de inclusión y se procedió a llevarla una por una
a un lugar donde poder realizarle las pruebas de B-hidroxibutirato y la toma de leche
por cuarto mamario. Para esto se sujetó al animal de la cabeza y de las patas con
la ayuda de brete, apretadero, cabezal o lazos, tomando la cola del animal con
suavidad hasta colocarla casi en posición vertical y sujetándola en el tercio medio,
se procedió a limpiar la zona con alcohol al 70% en el sitio de punción.
Por último, se realizó la punción, craneal a la protuberancia ósea del proceso
laminar en la línea media obteniendo una cantidad de aproximadamente 0.2 ml de
sangre, por último, se instaló una gota de sangre en la tira reactiva para cetonas y
se insertó en el ketómetro, se esperó 10 segundos y se leyó el resultado tomando
como positiva para cetosis aquellas que arrojaron un valor de 1.2 mmol/L en
adelante como ya se había mencionado con anterioridad.
Por otro lado, se procedió a tomar la prueba de California Mastitis Test antes de la
recolectar la leche, tomando una muestra de leche de cada cuarto en la raqueta
limpia, que tiene cuatro compartimientos marcados como A, B, C Y D, para
identificar los cuartos de los que proviene cada muestra, se adicionaron
aproximadamente 5 ml de reactivo para cada cuarto, se mezcló suavemente con
movimientos circulares y se leyó inmediatamente la prueba, observándose si se
presentó o no aglutinación del contenido e interpretándolo según lo indica la tabla
3.
Y por último en un envase de plástico se recolectaron 250 ml por cuarto mamario
de leche cruda y se trasportaron bajo condiciones de refrigeración por medio de
neveras de icopor con bolsas de gel congeladas hasta el laboratorio de biología de
la universidad Antonio Nariño.
Por último para medir la condición corporal se evaluaron las “apófisis óseas en la
parte posterior del animal (cintura pélvica), apreciando el grado de cubrición con
tejido adiposo, ubicando al animal en una escala de 1 a 5, donde 1 es demacrado y
5 es obeso”139
139 SAKAGUCHI, Minoru. Differences between body condition scores and body weight changes in
postpartum dairy cows in relation to parity and reproductive indices. En: The Canadian Veterinary Journal, 2009, vol. 50, no 6, p. 649.
50
5.6.2 Pruebas fisicoquímicas. La detección de estas pruebas se realizó por duplicado a temperaturas de 20°C y 25°C; donde se utilizó un baño maría con capacidad de 15 litros para llevar la leche a la temperatura deseada. 5.6.2.1 Conductividad eléctrica: esta se realizó en cada cuarto mamario por
triplicado; in situ a temperaturas: ambiente, 20 °C y a 25 °C en el laboratorio. se hizo
por medio de un medidor multi parámetro, “tomando como referencia la NTE (norma
técnica ecuatoriana) INEN 009 donde se indica el valor normal de conductividad
eléctrica de la eche de 5.49 mS/cm con una temperatura de 25°C”140.
Figura 2: Conductímetro.
5.6.2.2 Determinación de densidad (AOAC
925.22, 1990): “Esta medida se tomó por pul
mediante un lactodensímetro, para esta se
vertió la leche en una probeta, con cantidades
iguales de 62.5 ml por cuarto para un total de
250 ml, evitando la formación de espuma e incorporación de aire; se introdujo el
lactodensímetro de modo que ocupara la parte central del líquido, se hizo un giro
cuidadosamente la parte apical del lactodensímetro y se esperó que alcanzara el
nivel correspondiente, luego se leyó la densidad cuidando que el visual enrasara
con la superficie libre de la leche”141.
“Un tipo difundido de lactodensímetro, es el Quevenne, cuyo vástago con escala
graduada comprende valores entre 15 y 40 que corresponden a las milésimas de
densidad por encima de la unidad, es decir, que el número 32 del lactodensímetro
indica la densidad 1,032, el instrumento está calibrado a 15ºC y a esa temperatura,
140 OCHOA. F. Detección de residuos de antibióticos en leche cruda fluida en la parroquia chicana
del Canton y Yantzaza de la provincia de Zamora Chinchipe. Tesis Medicina Veterinaria y Zootecnia. Loja-Ecuador: Universidad nacional de Loja. Área agropecuaria y de recursos naturales renovables. 2016. 74 p. 141 ASSOCIATION of OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. OFFICIAL METHODS of ANALYSIS.
15th edition. Arlington, Virginia USA. Association of Official Analytical Chemists, 1990. 771 p.
Fuente: Google, 2019.
51
por lo tanto, el número leído representa la densidad de la leche. A temperaturas
diferentes, debe recurrirse a tablas especiales de corrección”142
Figura 3: Lactodensímetro de Quevenne.
Fuente: Google, 2019.
5.6.2.3 Acidez (AOAC, 947.05, 1990): según el Instituto Nacional de la Salud en su manual de procedimientos para análisis físico químico y microbiológico de la leche el valor de acidez en la leche mínimo es de 0.13 y máximo de 0.17 expresado como ácido láctico %m/v. “se utilizó solución de NaOH 0.1 valorada y fenolftaleína 0.5% en etanol 95% y se midió con la pipeta aforada 10,0 ml de muestra, los cuales fueron puestos en una cápsula de porcelana, se procedió a añadir 1 ml de fenolftaleína, titulándose con una bureta de 10,0 ml con NaOH 0,1 N hasta que se vióaparecer un color rosa débil persistente (utilizar como contraste el interior blanco de la cápsula). Los resultados se expresaron en ácido láctico % de muestra (p/v). 1 ml de NaOH 0,1 N = 0,0090 g de ácido láctico. Como se trabajó la acidez en grados Dornic (forma corriente en la industria láctea),
se multiplica por 100 el resultado anterior”143 y se hicieron las correspondientes
correcciones para las temperaturas de 20 y 25°C.
5.6.2.4 Determinación de pH. (CAA, Tomo II, 13.10,1989): “se midió el pH con
pH-metro, su calibración se realizó por medio de buffers adecuados (pH 4,00 - 7,00),
142 Universidad de Buenos Aires. Bromatología: guía de trabajos prácticos. Buenos Aires Argentina:
departamento de química orgánica: facultad de ciencias exactas y naturales, 2007. 33p. 143 ASSOCIATION of OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. OFFICIAL METHODS of ANALYSIS
1990. Op. Cit., p. 52.
52
y luego se procedió directamente a la medición del valor de pH correspondiente de
la muestra”144
Figura 4: pH metro.
Fuente: Google, 2019.
5.6.2.5 Prueba de alcohol reductasa: la leche tiene un valor de acidez mínimo de
0.13 y máximo de 0.17 y un pH de 6.5-6.7, valores superiores de la acidez, con la
consiguiente disminución del pH, se debe generalmente a descomposición
bacteriana propia de leches de baja calidad, esta condición se demuestra
mezclando la leche con igual volumen de etanol de 72°, debido a que el alcohol
produce coagulación del producto”145.
En una caja de Petri se tomaron 5 ml de leche y 5ml de alcohol que se mezclaron
suavemente observando si había coagulación o no de la mezcla.
5.6.3 Pruebas microbiológicas: en la siguiente tabla se observan las medidas a utilizar para la realización de los medios para cultivos microbiológicos, los cuales fueron realizados en el laboratorio de microbiología de la universidad Antonio Nariño Popayán. Tabla 8: Medidas para preparación de medios de cultivo.
Medio Agar base Diluyente
144 C.A.A., Código Alimentario Argentino. De La Canal & Asociados, SRL. Tomo II. Metodología Analítica Oficial. 1989. 145 UNIVERSIDAD DEL ZULIA, 2003. Op. Cit., pág. 52.
53
25 ml de sangre de cordero + 410 ml de agua destilada Sangre 20 gramos
MacConkey 25 gramos 475 agua destilada
Sal manitol 55 gramos 450 ml de agua destilada
LIA 10,37 gramos 300 ml de agua destilada
TSI 19,35 gramos 300 ml de agua destilada
SIM 9 gramos 300 ml de agua destilada Fuente: Universidad de Zulia, 2003.
En el siguiente flujograma se aprecian los pasos usados para la realización y
montaje tanto de los medios, como de los cultivos microbiológicos.
54
Figura 5: Flujograma de instrucciones para la realización y montaje de medios y cultivos microbiológicos.
Fuente: Propia del autor.
“En caso de no haber crecimiento de colonias en los medios se reporta de la
siguiente manera: menos de 1/d microorganismos por mililitro o menos de 1/d
En un Erlenmeyer adicionar las medidas de los medios,
mezclar y realizar un tapón en la boca del mismo, por capas de algodón, aluminio y una
última de papel kraft
Asegurar con cinta de
enmascarar, cinta testigo y llevar a autoclave.
Dejar reposar un poco hasta que este a una
temperatura de entre 40-50°C.
Se servirán los medios en cajas de petri siempre cerca de un mechero de Bunsen, y revisar
que no haya burbujas en la superficie del medio.
tapar y dejar solidificar a temperatura ambiente.
Guardar las placas boca abajo en la nevera a una
temperatura de 8°C hasta su uso.
INOCULACIÓN DE
MUESTRAS
Descontaminar la punta del asa en el mechero y enfriar en un tubo de ensayo con solución de hipoclorito de
sodio.
Colocar en la caja de petri la muestra de leche
diferencialmente dispersa (en este caso se dividirá la caja
en cuatro sesiones, una por muestra de cada cuarto
mamario)
Invertir la caja previamente tapada y llevar rápidamente a
incubar a una temperatura promedio de 37.5 °C.
Se pondrán a incubar por 24 horas en los agares sangre y
macConkey.
Pasado el periodo de incubación establecido,
realizar el conteo de colonias para cada sección de la caja de
Petri.
Si es necesario realizar el repique en el medio necesario y llevar de nuevo a incubación
por un periodo de 48 y 72 horas
55
microorganismo por gramo, donde d es el factor de dilución de la suspensión inicial
o de la primera dilución inoculada”146
5.6.4 Prueba de cromatografía. La metodología implementada para el análisis de
muestras se realizó por medio del método de extracción Head Space (espacio de
cabeza); método utilizado para analizar compuestos orgánicos volátiles en muestras
tanto liquidas como sólidas, con un cromatógrafo de gases acoplado a
espectrómetro de masas. Una vez las muestras fueron recibidas por parte del
laboratorio de Química de la Universidad del Cauca, se refrigeraron hasta el
momento del análisis, en donde se agitaron por medio de un vortex y se tomó un
volumen de 500 µl de leche en un vial de 2 ml. Luego de uso la aplicación de sal o
proceso de salting-out (técnica de extracción de proteínas que consiste en
concentrar la fase liquida tanto como sea posible con el fin de que las proteínas se
precipiten), para mejorar la distribución de los compuestos volátiles en el Head
Space; cada muestra se saturo con 200 mg de cloruro de sodio. Y las muestras
fueron analizadas por triplicado, aplicando el método descrito.
Esta es una prueba que fue estandarizada por parte del laboratorio de química de
la Universidad del Cauca, por lo tanto, el procedimiento completo es ajeno a nuestra
investigación. En el anexo C, se observa el informe del análisis de acetona y B-
hidroxibutirato en leche de vaca por HS-CG-EM preparado por el PhD Fernando J.
Hernández Blanco. Profesor del Área de Analítica, responsable del Cromatógrafo
de Gases
146 Ibid., p. 55.
56
5.7 ANÁLISIS ESTADÍSTICOS
Se tendrá en cuenta que para la medición de la cetosis clínica y subclínica se
consideraran como unidad a las vacas, mientras que para los análisis de asociación
se consideraran las muestras.
Los datos se analizarán mediante estadística descriptiva empleando promedio,
desviación estándar y coeficiente de variación
57
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. En la tabla 9 se observan los resultados de condición corporal, número de días
postparto, y niveles de B-hidroxibutirato (mmol/L) en sangre en 18 vacas localizadas
en el municipio de Popayán. (En el anexo A, se observa la descripción y datos
recolectados de cada vaca - in situ – unidad ganadera).
Tabla 9: Resultados de condición corporal, N° días postparto y niveles de B-hidroxibutirato (mmol/L) en 18 vacas localizadas en el municipio de Popayán.
Raza Condición Corporal
Nº de días postparto
B-Hidroxibutirato
(mmol/L) Vacas
1 Yerhol 3 11 0,8
2 Holstein 2,75 120 0,9
3 Yerhol 3 120 1,2
4 Yerhol 2,75 23 1,4
5 Gyr / pardo 4 55 3,8
6 Gyrolando 3 15 3,5
7 Jersey 3,5 30 1,1
8 Yerhold 3 150 0,7
9 Yerhol 3 12 4,0
10 Yerhol 3 30 1,2
11 Yerhol 3,25 37 3,5
12 Mestiza 3,25 90 0,4
13 Jersey 3 26 3,1
58
14 Yerhol 3,25
90 0,6
15 yerhol 3,75 30 0,7
16 Jersey 3,5 11 2,0
17 Mestiza 3 5 0,4
18 Mestiza 3 10 1,3
19 Yerhol 3 21 1,5
20 Yerhol 3 30 0,9
X ± DS / CV 3,15 ± 0,32 45,8 ± 43,4 1,65 ± 1,21
Fuente: Propia del autor.
Se registró un promedio de 3.15 y una desviación estándar de ± 0.32 para la variable
de condición corporal, para la variable de número de días postparto un promedio de
45.08 y una desviación estándar de ± 43,4, y para la variable del β- Hidroxibutirato
en sangre se registró un valor promedio de 1.65 con una desviación estándar de ±
1,21.
“la evaluación de este parámetro es de suma importancia porque permite estimar la
cantidad de energía metabólica que se almacena como grasa subcutánea y que se
pierde en el periodo de transición en respuesta a los cambios producidos”147, a
pesar de que no se ha establecido con certeza la cantidad máxima de grasa que el
animal puede perder sin afectar sus funciones vitales.
Según Kim y Suh (2003), las vacas que tienen mayor pérdida de condición corporal
en el postparto, presentan una incidencia de desplazamiento de abomaso, mastitis
y cetosis. En el presente estudio la condición corporal encontrada fue de 3.15 ± 0.32
en una escala de 1 a 5. Para Holtenius y Holtenius (2007) y Oetzel (2007),
relacionan que el desequilibrio en los mecanismos de adaptación metabólica
durante el periodo de transición y lactancia temprana interfiere en la homeostasis
147 MONTIEL, F.; AHUJA, C. Body condition and suckling as factors influencing the duration of
postpartum anestrus in cattle: a review. En: Animal Reproduction Science, 2005, vol. 85, no 1-2, p. 1-26.
59
corporal y predispone a la presentación de cetosis que se evidencia en el presente
trabajo con una incidencia de cetosis de 55%.
Para el presente trabajo, la cetosis subclínica se estableció con una concentración
de BHBA de 1,2 a 2,9 mmol/L; y para cetosis clínica con un valor de BHBA ≥ 3,0
mmol/L (Oetzel, 2004). Para los niveles de β-Hidroxibutirato en sangre tomados en
condiciones de campo, se encontró un promedio de 1,65 ± 1,21, donde la incidencia
de cetosis fue del 55% (11 / 20), con una cetosis subclínica de 54,55% (6 / 11), y de
cetosis clínica de 45,45% (5 / 11).
Según, Duffield, et al. (2009), La cetosis subclínica (≥1.4 mmol/L), indica que para
los semovientes que presenten estos valores en las primeras semanas posparto, el
riesgo de presentar desplazamiento de abomaso a la izquierda será de 3 a 8 veces
mayor, 3 veces mayor el riesgo de metritis, 4 a 6 veces el riesgo de cetosis clínica
y un aumento de la duración y severidad de la mastitis.
La cetosis subclínica de la presente investigación (54,55%), fue mayor, a la
registrada por Radostitis, et al. (2012), quienes reportan valores entre 7 a 34%.
En la siguiente tabla, se exponen los resultados de la prueba de California Mastitis Test realizada en campo. Tabla 10: Prueba de California Mastitis Test (CMT) en campo.
Vacas California Mastitis Test
AI* AD* PI* PD*
1 Negativo Negativo Negativo Negativo
2 Negativo Negativo Negativo Negativo
3 Negativo Negativo Negativo Negativo
4 Negativo Negativo Negativo Negativo
5 Positivo Positivo Positivo Negativo
6 Negativo Negativo trazas Negativo
60
7 Negativo + Negativo ++
8 + ++ ++ +
9 Negativo Negativo Negativo ++
10 Negativo ++ Negativo ++
11 Negativo Trazas Negativo Negativo
12 ++ Negativo Negativo Negativo
13 Negativo + Negativo Negativo
14 + + + +
15 + + + +
16 Negativo + Negativo Negativo
17 Negativo Negativo Negativo Negativo
18 Negativo Negativo Negativo Negativo
Fuente: Propia del autor.
*AI: anterior izquierdo, AD: anterior derecho, PI: posterior izquierdo, PD: posterior derecho
Por otro lado, 12 de 18 vacas fueron diagnosticadas con mastitis a través del CMT,
que corresponde a un 66,6%, resultado interpretado siguiendo los indicadores de la
tabla 4 (indicador de los grados de mastitis). Este resultado es importante, si
tenemos en cuenta que la presentación de esta patología enfermedad es la causa
más común para un sacrificio temprano, como lo indica Wolter (1996), quien afirma
que el 26.5% de las vacas lecheras sacrificadas en el continente americano se debe
a trastornos ocasionados por la mastitis.
En total se evaluaron 72 cuartos de 18 vacas en ordeño y se encontró que el 62,5%
(45 cuartos), fueron negativos o libres de mastitis y que el 34,7% (25 cuartos)
presentaron mastitis, con referencias que van desde trazas hasta +++, como lo
reportado por Calderón y Rodríguez (2008).
61
En la tabla 10, se exponen los resultados de la prueba de conductividad eléctrica (CE), tomada en campo. Tabla 11: Prueba de conductividad eléctrica tomada en campo.
vaca
Conductividad Eléctrica mS*/cm
AI AD PI PD
1 5,09 4,99 5,11 5,05
2 5,55 5,56 5,44 5,46
3 5,25 5,3 5,1 5,6
4 5,47 5,43 5,36 5,35
5 8,87 9,32 9,42 8,49
6 7,99 8,31 8,02 8,21
7 8,00 8,58 7,34 6,73
8 7,1 7,09 7,00 7,36
9 6,65 6,97 7,99 9,68
10 7,29 7,44 6,99 7,31
11 6,75 6,68 6,76 6,81
12 9,58 6,67 6,65 9,9
13 6,78 7,69 7,46 7,84
14 9,07 9,05 8,39 7,95
15 7,07 7,9 7,01 7,64
62
16 7,15 7,04 7,3 7,54
17 8,06 8,51 7,39 6,77
18 6,96 6,97 6,93 6,96
19 8,53 8,63 9,00 9,16
20 6,46 6,53 6,65 6,64
x ± DS 7,18 ± 1,28 7,23 ± 1,28 7,07 ± 1,19 7,32 ± 1,37 Fuente: Propia del autor.
Adicionalmente, se registraron los valores de conductividad eléctrica por cuarto
mamario, donde el cuarto anterior izquierdo presentó una media y desviación
estándar de 7,18 ± 1,28; para el cuarto anterior derecho presento una media y
desviación estándar de 7,23 ± 1,28; para el cuarto anterior izquierdo presento una
media y desviación estándar de 7,07 ± 1,19 y para el cuarto posterior derecho
presento una media y desviación estándar de 7,32 ± 1,37. Hay que tener en cuenta,
que al evaluar la conductividad eléctrica de la leche cruda en pool para los cuatro
cuartos, se corre el riesgo de reducir la eficacia de la detección, por lo tanto se
decidió registrar la conductividad eléctrica por cada cuarto mamario. Además,
Linzell & Peaker. (1972), determinan que el uso del conductímetro detecta la
alteración de la composición iónica de la leche causada principalmente por la
inflamación de la glándula mamaria, manifestada por un aumento de la
concentración de sodio y cloro, que determina un incremento en la CE
(conductividad eléctrica).
Por otra parte, Ochoa, (2016), referencia como valor normal de conductividad
eléctrica 5,49 mS/cm en la leche cruda, el presente estudio tuvo valores medios en
los cuatro cuartos mamarios superiores a lo reportado por Ochoa, (2016), donde se
puede inferir que las vacas en producción al momento de la muestra estarían
presentando algún proceso inflamatorio. De la misma forma Tinsky, et al (1995),
hace referencia que el proceso inflamatorio establecido en la ubre, resulta también
en un cambio de la composición iónica de la leche, como los electrolitos de sodio y
calcio que aumentan y el potasio que disminuye, incrementando la CE de la leche.
63
Así mismo, Barbano (1998), expresa que la leche procedente de una vaca con
inflamación a nivel de la ubre es mejor conductora de corriente.
En las tablas a continuación se describen las pruebas fisicoquímicas realizadas en
el Laboratorio de Ciencias Básicas de la Universidad Antonio Nariño Sede Popayán
Cauca: Grados Dornic, pH, acidez, alcohol resistencia, densidad y conductividad
eléctrica tomada en mS/cm (mili siemens / centímetro), a temperaturas de 20 y
25°C.
En la tabla 11, se exponen los resultados de la prueba de grados Dornic (°D), a 20 y 25°C Tabla 11: Valores prueba grados Dornic a 20 y 25°C.
Grados Dornic 20°C Grados Dornic 25°C
Vaca AI AD PI PD AI AD PI PD
1 2,5 2,5 2,5 1,5 2,5 2,3 2,2 2.0
2 2.0 1,9 1,7 1,8 2.0 2.0 2.0 2.0
3 1,5 2.0 1,6 1,5 1,8 2.0 1,5 1,5
4 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 1,3 2.0
5 2,3 1,2 2.0 1,8 1,7 1,5 1,5 1,5
6 1,5 2.0 1,5 2.0 1,5 1,3 1,3 1,5
7 2.0 3.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
8 1,5 2.0 2.0 2.0 1,5 2.0 1,5 1,7
9 2,1 2,2 2.0 2.0 2,1 2,2 2.0 2.0
10 1,7 1,7 2.0 1,6 1,6 2,5 2,1 2,2
11 2.0 1,7 0,9 1,8 2,1 1,9 2,1 2.0
12 1,5 2.0 2,2 1,3 2,5 2.0 2.0 2,2
13 2.0 1,7 1,9 2,2 1,5 1,5 3.0 1,7
14 2.0 2.0 3.0 2.0 2,2 2,6 2,5 2,1
15 2.0 1,5 2,1 2.0 2,5 2.0 2,2 2.0
16 2,3 2,5 2,5 2.0 2,5 2,7 2,1 2,2
17 2,7 2,5 2,5 2.0 2.0 2,6 2,5 2,7
18 1.0 2,5 1,5 1,5 1,5 2.0 1,5 2.0
X ± DS 1,9 ± 0,4
2,05 ± 0,4
2,0 ± 0,5
1,8 ± 0,2
2,0 ± 0,4
2,1 ± 0,4
2,0 ± 0,5
2,0 ± 0,3
Fuente: Propia del autor
64
Se entiende por acidez en la leche natural, certificada, higienizada, pasteurizada y
esterilizada, al contenido aparente de ácido, expresado en gramos de ácido láctico
por 100 ml de leche (porcentaje%) en grados Dornic.
En esta prueba de grados Dornic, la leche por cuarto mamario dio un resultado para
el cuarto anterior izquierdo 1,9 ± 0,4, cuarto anterior derecho 2,05 ± 0,4, posterior
izquierdo 2,0 ± 0,5, posterior derecho 1,8 ± 0,2 a 20°C y anterior izquierdo 2.0 ± 0.4,
anterior derecho 2.0 ± 0.5, posterior izquierdo 2.0 ± 0.5 y posterior derecho 2.0 ±
0.3.
teniendo como referencia un valor mínimo de 0,13 y máximo de 0,18 (NTC 399,
2002) (13 – 18 °Dornic) para (López, A.L, et al. 2015), quien considera que un valor
de acidez menor de 13 °Dornic puede indicar procedencia de animales enfermos
con mastitis, leches calostrales o alteradas (aguadas) y una acidez por encima de
los 18 °Dornic nos indican leche procedente de ordeños poco higiénicos o que han
pasado más de 10 horas sin refrigeración.
En la siguiente tabla se describen los resultados de la prueba de alcohol reductasa
tomadas a temperaturas de 20 y 25°C.
Tabla 12: Descripción resultados de la prueba de alcohol resistente a 20°C y 25°C.
Vaca
Alcohol Reductasa 20°C Alcohol Reductasa 25°C
AI AD PI PD AI AD PI PD
1 N N N N N N N N
2 N N N N N N N N
3 N N N N N N N N
4 N N N N N N N N
5 P P P P P P P P
6 N N N N N N N N
7 N N N N N P N N
8 N N N P N N N N
9 N N N N N N N N
10 N N N N N N N N
11 N N N N N N N N
12 N P N P N P N P
13 N N N N N N N N
14 P P P P P P P P
15 N N N N N N N N
16 N N N N P N P N
17 N N N N N N N N
65
18 N N N N N N N N Fuente: Propia del autor.
*P: Positivo, N: negativo
5 de los 18 semovientes dieron positivo para la prueba, correspondiente al 27,8%;
Para estas 5 vacas esta prueba positiva es un indicador de poca estabilidad de la
leche al calor, lo cual es muy importante para (MIF, 1964), si este producto ha de
ser esterilizado o pasteurizado. Además, hay que mencionar que la prueba también
es útil para la detección de leche anormal como calostro o leches con alteraciones
en el balance salino, lo que las hace más susceptibles a la congelación
A continuación, se muestran los resultados de la prueba de pH realizada por cuarto
mamario a temperaturas de 20 y 25°C.
Tabla 13: Resultados de prueba de pH tomado por cuarto mamario a 20 y 25°C.
pH 20°C pH 25°C
Vaca AI AD PI PD AI AD PI PD
1 7,06 7,12 7,09 7,06 7,02 6,98 6,98 6,94
2 7,11 7,08 7,07 7,11 6,99 6,93 7,01 6,96
3 7,13 7,16 7,16 7,18 7,01 7,03 6,99 7,02
4 7,21 7,18 7,16 7,20 7,01 7,01 7,01 6,98
5 7,01 7,07 7,01 7,08 6,97 6,95 7,00 6,96
6 7,17 7,10 7,12 7,13 6,96 6,99 6,96 6,95
7 7,08 7,04 7,11 7,11 7,14 7,16 7,13 7,16
8 7,12 7,12 7,13 7,12 6,99 7,14 7,01 7,04
9 7,05 6,99 7,05 7,06 7,00 6,98 6,98 7,01
10 7,07 7,06 7,08 7,08 6,99 6,96 6,97 6,97
11 7,08 7,09 7,07 7,08 6,90 6,91 6,94 6,90
12 7,10 7,05 7,05 7,11 7,14 7,16 7,10 7,12
13 7,04 7,06 7,10 7,08 7,04 7,06 7,10 7,08
14 7,12 7,09 7,10 7,09 7,12 7,09 7,10 7,09
15 7,10 7,08 7,15 7,12 7,10 7,06 7,11 7,11
16 7,01 7,01 7,04 7,03 7,05 7,03 7,09 7,07
17 7,10 7,06 7,11 7,11 70,7 7,09 7,06 70,7
18 6,94 6,97 6,93 6,96 7,00 6,94 6,96 7,2
X ± DS
6,74 ± 0,61
7,07 ± 0,05
7,05 ± 0,05
7,08 ± 0,05
10,56 ± 15
7,03 ± 0,07
7,02 ± 0,06
10,6 ± 15
66
Fuente: Propia del autor.
El pH normal de la leche fresca es de 6,5 a 6,7, valores superiores generalmente
se observan en leches mastíticas, mientras que valores inferiores indican presencia
de calostro o descomposición bacteriana según (La universidad de Zulia, 2003). En
este caso los resultados de pH arrojaron valores de entre 7 y 10; lo que nos sugiere
que las vacas en sus cuatro cuartos tuvieron grados elevados de mastitis
En la siguiente tabla se muestran los resultados de la prueba de densidad por pull
tomada a 20 y 25°C.
Tabla 14; valores de Densidad tomada por pul a 20 y 25°C.
Densidad por pul
67
Vaca 20°C Densidad corregida 25°C
densidad corregida
1 30 1,030 30 1,030
2 33 1,029 29 1,033
3 31 1,029 29 1,031
4 34 1,032 32 1,034
5 27 1,024 24 1,027
6 28 1,027 27 1,028
7 32 1,031 31 1,032
8 28 1,027 27 1,028
9 31 1,029 29 1,031
10 28 1,027 27 1,028
11 32 1,032 32 1,032
12 27 1,029 29 1,027
13 30 1,029 29 1,030
14 31 1,032 32 1,031
15 30 1,027 27 1,030
16 31 1,030 30 1,031
17 33 1,033 33 1,033
18 33 1,034 34 1,033
X ± DS 30,5 ± 2,8 1,030 ± 0,0025 29,5 ± 2,55 1,031 ± 0,002
Fuente: Propia del autor.
El lactodensímetro usado en esta prueba fue el de Quevenne, cuyo vástago con
escala graduada comprende valores entre 15 y 40 que corresponden a las
milésimas de densidad por encima de la unidad, es decir, que el número 32 del
lactodensímetro indica la referencia de densidad, de 1,032 para la Universidad de
Buenos aires (2007), basados en esta referencia podemos inferir que los valores
corregidos arrojados, están entre un 99.8% (1.032) y 99.9% (1.031), cerca de esta
referencia.
Cuando la discrepancia con respecto a los 15 ºC no es mucha (no más de ± 5 ºC),
se puede obtener la corrección sumando o restando 0,0002 a la densidad hallada,
o bien 0,2 a los grados leídos en el lactodensímetro, por cada grado de temperatura
respectivamente superior o inferior a 15º,
En la siguiente tabla, se observan los resultados de conductividad eléctrica (mS/cm), tomados por cuarto mamario a temperaturas de 20 y 25°C.
68
Tabla 15: Valor prueba conductividad eléctrica por cuarto mamario a 20 y 25°C.
Conductividad Eléctrica 20°C
*(mS/cm) Conductividad Eléctrica 25°C
(mS/cm)
Vaca AI AD PI PD AI AD PI PD
1 7,1 7,2 7,2 6,2 7,3 6,8 7,4 7,2
2 5,4 5,3 5,3 5,4 7,8 7,3 7,4 7,6
3 7,3 6,8 7,5 7,3 7,1 7,3 7,4 7,6
4 7,7 7,6 7,7 7,5 7,2 6,6 7,5 7,2
5 8,9 9,1 9,3 8,5 8,3 8,3 8,1 7,9
6 7,9 8,1 8,0 8,2 7,3 6,8 7,4 7,5
7 5,4 5,6 5,6 5,8 5,5 5,2 6,0 5,4
8 5,7 5,9 5,8 6,4 5,6 5,9 5,4 5,4
9 6,6 6,6 7,8 9,6 6,6 6,8 7,9 9,7
10 7,2 7,3 6,8 7,0 7,1 7,4 6,9 7,2
11 6,6 6,6 6,4 6,6 6,8 6,7 6,7 6,6
12 9,3 6,5 6,9 9,7 7,2 7,0 6,9 7,5
13 6,7 7,3 7,2 7,7 6,7 7,5 7,4 7,8
14 8,9 9,1 8,3 8,7 9 9,1 8,4 7,9
15 6,8 7,0 6,9 7,3 9,4 6,7 6,9 9,8
16 7,0 7,1 7,2 7,5 7,1 7,1 7,3 7,6
17 7,9 8,3 7,3 6,9 8,0 8,6 7,4 7,0
18 6,5 6,6 6,7 6,6 7,9 7,2 7,0 7,2
X ± DS 7,2 ± 1,14
7,1 ± 1,06
7,1 ± 0,97
7,4 ± 1,19
7,3 ± 1,0
7,1 ± 0,9
7,2 ± 0,7
7,45 ± 1,1
*mS/cm: Mili siemens / centímetro Fuente: Propia del autor.
Adicionalmente, se registraron los valores de conductividad eléctrica entre 7.1 – 7.4,
como ya se había mencionado anteriormente en la conductividad eléctrica tomada
en campo, según lo mencionó Ochoa, (2016), se referencia como valor normal de
conductividad eléctrica 5,49 mS/cm en la leche cruda, el presente estudio tuvo
valores medios en los cuatro cuartos mamarios superiores a lo reportado por Ochoa,
(2016), donde se puede inferir que las vacas en producción al momento de la
muestra estarían presentando algún proceso inflamatorio.
69
En la siguiente tabla, se observan los resultados de los cultivos realizados en agar sangre. Tabla 16: Resultados para cultivos en agar sangre.
Cultivos Microbiológicos
vaca AI AD PI PD
1 N N N N
2 N N N N
3 N N N N
4 N N N N
5 Staphylo Staphylo Staphylo Staphylo
6 N N Streptococco N
7 Streptococco N Streptococco N
8 Staphylo Staphylo Staphylo Staphylo
9 N N Streptococco N
10 Streptococco N Streptococco N
11 N Streptococco N N
12 Streptococco N N N
13 N Streptococco N N
14 Staphylo Staphylo Staphylo Staphylo
15 Staphylo Staphylo Staphylo Staphylo
16 N Streptococco N N
17 N N N N
18 N N N N Fuente: Propia del autor.
N: Negativo
Al analizar los resultados de los cultivos microbiológicos, se obtuvo que de los 72
cuartos mamarios el 63.9% (46 – 72), resultaron negativos en el examen, dentro de
los organismos aislados se encontró un total de 22,2% (16-72), para staphylococos,
y 13,9% (10-72) positivos para Streptococcos.
En la siguiente tabla se presentan los resultados obtenidos de las muestras de leche
con cetosis, llevados a cromatografía.
Tabla 17: resultados de Acetona y BHB analizados por cromatografía.
vaca
70
Acetona mmol/L
BHB mmol/L
3 3,9 1,9
4 1,5 1,2
5 1,4 NR
6 3,8 0,2
9 3,8 0,4
10 3,9 1,9
11 1,2 0,4
13 3,4 3,9
16 2,2 6,5
18 1,1 3,1
19 2,2 NR Fuente: Propia del autor.
Esta muestra es el resultado de una estandarización realizada por la Universidad
del Cauca para el presente estudio, el cual fue financiado por el fondo para la
investigación InnoVación Cauca, donde se implementó para el análisis de muestras
por medio del método de extracción Head Space (espacio de cabeza) analizado en
un cromatógrafo de gases acoplado a espectrómetro de masas.
La cuantificación se realizó por el método de estándar externo donde se analizó
siguiendo el mismo procedimiento el estándar de acetona e 𝛽-hidroxibutirato. El
proceso de calibración para estimar la precisión de las determinaciones se realizó
de la siguiente forma: Se agregó 100 μL de acetona 1% y 𝛽-hidroxibutirato 7,91
mg/mL a 500 μL de la muestra de leche saturando con 200mg cloruro de sodio y se
analizó en las condiciones estándar anteriormente mencionadas y los coeficientes
de variación del área del pico de acetona (Estándar: Acetona 1% (v/v) = 7,91
mg/mL).
71
7. CONCLUSIONES
La presentación de cetosis en las unidades ganaderas es conocida por los
productores, sin embargo, puede pasar desapercibida en muchas ocasiones por
falta de seguimiento de la misma, causando pérdidas por baja producción láctea,
disposición de recurso humano, tratamiento y muchas veces hasta descarte del
animal, además, de conllevar a la presentación de enfermedades concomitantes,
elevando los costos.
En este estudio se encontró que la incidencia de cetosis en las unidades ganaderas
muestreadas en el municipio de Popayán, Cauca, mostraron un nivel de cetosis
subclínica de 54.55% y clínica de 45.45%, lo que equivale al 55% de la población
total muestreada.
En cuanto a los parámetros fisicoquímicos evaluados en las muestras de leche, se
encontró que el 34.7% de los cuartos presentaros mastitis, la conductividad eléctrica
promedio fue de 7.2 mS/cm, en comparación al estándar de 5.49 mS/cm, lo que
indica que las vacas estaban pasando por algún proceso inflamatorio, con un pH
promedio de 8.01 (alcalino), debido al desequilibrio del ácido base en el cuerpo.
Por último, para los organismos identificados se halló una prevalencia total de 22.2%
para Staphylococcos y 13.9% para Streptococcos.
72
Anexo A
En la siguiente tabla, se observan los datos recolectados de las variables: número
de vaca, raza, condición corporal, número de días postparto, valor de
Betahidroxibutirato y conductividad eléctrica, en condición de campo.
Anexo A: Resultados de las variables, tomadas en campo.
Raza
Condición
Corporal
Nº de días
postparto
B-Hidroxibutira
to (mmol
/L)
Conductividad Eléctrica mS*/cm Vaca
AI AD PI PD
1 Yerhol 3,00 11 0,8
5,09 4,99 5,11 5,05
2 Holstein 2,75 120 0,9 5,55 5,56 5,44 5,46
3 Yerhol 3,00 120 1,2 5,25 5,3 5,1 5,6
4 Yerhol 2,75 23 1,4 5,47 5,43 5,36 5,35
5 Gyr / pardo 4,00 55 3,8 8,87 9,32 9,42 8,49
6 Gyrolando 3,00 15 3,5 7,99 8,31 8,02 8,21
7 Jersey 3,5 30 1,1 8,00 8,58 7,34 6,73
8 Yerhold 3,00 150 0,7 7,1 7,09 7,00 7,36
9 Yerhol 3,00 12 4,0 6,65 6,97 7,99 9,68
10 Yerhol 3,00 30 1,2 7,29 7,44 6,99 7,31
11 Yerhol 3,25 37 3,5 6,75 6,68 6,76 6,81
12 Mestiza 3,25 90 0,4 9,58 6,67 6,65 9,9
13 Jersey 3,00 26 3,1 6,78 7,69 7,46 7,84
14 Yerhol 3,25 90 0,6 9,07 9,05 8,39 7,95
73
15 yerhol 3,75 30 0,7 7,07 7,9 7,01 7,64
16 Jersey 3,5 11 2,0 7,15 7,04 7,3 7,54
17 Mestiza 3,00 5,00 0,4 8,06 8,51 7,39 6,77
18 Mestiza 3,00 10 1,3 6,96 6,97 6,93 6,96
19 Yerhol 3,00 21 1,5 8,53 8,63 9,00 9,16
20 Yerhol 3,00 30 0,9 6,46 6,53 6,65 6,64
X ± DS 3,15 ± 0,32
45,8 ± 43,4
1,65 ± 1,21
7,18 ± 1,28
7,23 ± 1,28
7,07 ± 1,19
7,32 ± 1,37
74
Anexo B:
En las siguientes se observan los resultados de la prueba de conductividad eléctrica
a temperaturas de 20 y 25°C, tomadas en el laboratorio.
Anexo B: Valores de conductividad eléctrica por triplicado a 20°C, tomadas en laboratorio.
Conductividad eléctrica mS/cm* 20°C
# vaca AI AD PI PD
7,41 7,21 7,22 6,21
1 7,40 7,18 7,21 6,21
7,40 7,16 7,18 6,18
5,36 5,36 5,29 5,41
2 5,35 5,34 5,29 5,40
5,38 5,30 5,3 5,45
7,28 6,73 7,61 7,23
3 7,28 6,80 7,52 7,31
7,40 6,75 7,30 7,37
7,77 7,67 7,66 7,66
4 7,58 7,51 7,65 7,31
7,85 7,58 7,77 7,38
9,0 9,13 9,30 8,43
5 8,96 9,15 9,40 8,23
8,84 9,1 9,09 8,68
7,85 8,1 7,86 8,06
6 7,90 8,10 8,0 8,20
7,94 8,23 8,11 8,18
5,44 5,39 5,51 5,71
7 5,41 5,63 5,64 5,70
5,39 5,70 5,49 5,83
5,6 5,87 5,55 5,6
8 5,66 5,83 5,99 6,86
5,69 5,97 5,85 6,58
6,56 6,74 7,82 9,53
9 6,6 6,88 7,79 9,60
6,54 6,94 7,79 9,57
7,24 7,3 6,86 6,97
10 7,22 7,31 6,77 7,06
7,20 7,34 6,88 7,09
6,62 6,61 6,57 6,63
11 6,64 6,62 6,47 6,58
6,66 6,62 6,29 6,51
75
9,31 6,28 6,89 9,61
12 9,36 6,65 6,87 9,73
9,35 6,62 6,87 9,72
6,65 7,37 7,29 7,67
13 6,66 7,31 7,19 7,65
6,66 7,30 7,03 7,68
8,73 9,02 8,35 8,99
14 8,90 9,10 8,26 9,08
8,93 9,10 8,27 8,02
6,85 6,80 6,89 7,28
15 6,83 7,05 6,82 7,36
6,82 7,03 6,85 7,20
7,08 7,07 7,21 7,51
16 6,69 6,99 7,21 7,58
7,14 7,09 7,11 7,48
7,86 8,32 7,31 7,00
17 7,89 8,24 7,26 6,94
7,93 8,35 7,31 6,82
6,46 6,50 6,65 6,64
18 6,46 6,70 6,67 6,63
6,44 6,62 6,65 6,61
X ± DS / CV 7,17 ± 7,13 /
15,76 7,12 ± 1,03
/ 14,47 7,09 ± 0,96 /
13,54 7,37 ± 1,19
/ 16,15 Fuente: Propia del autor.
Anexo B1: Valores de conductividad eléctrica por triplicado a 25°C, tomadas en laboratorio.
Conductividad eléctrica mS/cm* 25°C
# vaca AI AD PI PD
7,27 6,79 7,35 7,17
1 7,25 6,74 7,32 7,22
7,30 6,74 7,39 7,28
7,90 7,34 7,45 7,67
2 7,84 7,30 7,42 7,54
7,80 7,31 7,37 7,54
7,18 6,80 7,37 6,68
3 7,09 7,01 7,36 6,65
6,89 6,86 7,21 6,66
7,19 6,52 7,51 7,27
4 7,03 6,65 7,54 7,20
76
7,29 6,66 7,57 7,23
8,24 8,23 8,17 7,86
5 8,32 8,24 8,27 7,85
8,35 8,35 7,96 7,94
7,27 6,80 7,37 7,50
6 7,29 6,82 7,31 7,54
7,19 6,85 7,46 7,54
5,52 5,26 5,68 5,41
7 5,43 5,10 6,10 5,46
5,43 5,25 6,13 5,44
5,61 5,84 5,40 5,42
8 5,55 5,97 5,41 5,49
5,56 5,94 5,332 5,38
6,68 6,41 7,91 9,63
9 6,66 6,89 7,94 9,79
6,60 7,02 7,95 9,72
7,08 7,41 6,91 7,3
10 7,04 7,24 6,94 7,21
7,20 7,42 6,97 7,19
6,79 6,51 6,70 6,72
11 6,78 6,75 6,66 6,48
6,72 6,75 6,65 6,70
6,96 7,01 6,92 7,54
12 6,98 7,01 6,89 7,54
7,55 6,95 6,88 7,54
6,65 7,30 7,42 7,78
13 6,59 7,52 7,37 7,83
6,72 7,53 7,37 7,75
8,99 9,09 8,41 7,85
14 9,11 9,2 8,42 7,94
9,03 9,13 8,30 8,02
9,41 6,63 6,91 9,80
15 9,39 6,70 6,90 9,79
9,38 6,69 6,83 9,84
7,06 7,15 7,29 7,6
16 7,19 6,99 7,27 7,61
7,15 7,17 7,29 7,64
8,01 8,58 7,36 7,02
17 8,01 8,59 7,4 7,04
8,05 8,54 7,42 7,07
77
9,68 6,75 6,97 7,99
18 6,81 7,29 6,68 6,76
7,31 7,56 7,44 6,99
X ± DS / CV 7,32 ± 1,04
/ 14,21 7,10 ± 0,90
/ 12,68 7,18 ± 0,70
/ 9,75 7,42 ± 1,10
/ 14,82 Fuente: Propia del autor.
78
Unidad de Análisis
Industrial(UAI)
Departamento
de Química
Universidad
del Cauca
Análisis de acetona y β
hidroxibutirato en leche de vaca
por HS-CG-EM
Preparado por PhD
Fernando J. Hernández
Blanco Profesor del Área
de Analítica Responsable
del Cromatógrafo de
Gases
17 de febrero de 2020
Anexo SEQ Anexo \* ALPHABETIC C: Resultados de prueba de cromatografía realizada por la Universidad del Cauca.
79
Introducción
El presente informe se establece a solicitud del profesor Fredy Javier
Angarita de la Universidad Antonio Nariño. Se presentan a continuación la
metodología y resultados obtenidos de muestras tomadas por parte del
investigador y entregadas en los laboratorios de la Unidad de Análisis
Industriales.
Metodología
Preparación de la muestra:
La metodología implementada para el análisis de muestras es por medio del
método de extracción Head Space (espacio de cabeza) analizado en un
cromatógrafo de gases acoplado a espectrómetro de masas. Una vez la
muestra es entregada por parte del investigador, fueron refrigeradas y en el
momento de análisis se agitan en vortex, se toma un volumen de 500µL de
leche en un vial de 2mL. Se usó la aplicación de sal (proceso de salting-out)
para mejorar la distribución de los compuestos volátiles en el espacio de
cabeza; cada muestra se saturó con 200 mg de cloruro de sodio. Las
muestras se analizan por triplicado, aplicando el método descrito.
Reactivos.
Acetona grado-HPLC MERCK, agua desionizada tipo I, Cloruro de Sodio
Equipos:
Cromatógrafo de gases serie TRACE 1300 acoplado con un espectrómetro
de masas ISQLT. Marca Thermo Scientific con automuestrador operado con
el modo de impacto electrónico, columna HP5MS.
Análisis Cromatográfico.
Para el análisis de las muestras de leche se empleó un Cromatógrafo de
gases serie TRACE 1300 acoplado con un espectrómetro de masas ISQLT.
Marca Thermo Scientific con automuestrador operado con el modo de
impacto electrónico. El método implementado para el análisis se establece
de la siguiente manera:
1. Las temperaturas del inyector y del detector se ajustaron a 200° y
230°C respectivamente. 2. La columna HP5MS se empleó en modo isotérmico con una
temperatura de 50°C, como gas de arrastre se empleó helio a un
flujo de 1 mL/min, flujo de Nitrógeno 8.0 mL/min 3. Para el análisis por espacio de cabeza se aplicó temperaturas de
calentamiento entre 60-120°C durante un tiempo de 30 a 60min.
Donde se obtuvo como resultado que las condiciones adecuadas
para espacio de cabeza fueron las siguientes: temperatura del baño
95°C, tiempo de equilibrio 30min, inyectando 10 μL.
80
4. Temperaturas de la línea de transferencia y surco de iones en 230°C
81
5. El monitoreo de la formación de los compuestos de interés se realizó
por escaneo entre 40 a 200 m/z
Patrones:
La cuantificación se realizó por el método de estándar externo donde se
analizó siguiendo el mismo procedimiento el estándar de acetona e 𝛽-
hidroxibutirato. El proceso de calibración para estimar la precisión de las
determinaciones se realizó de la siguiente forma:
Se agregó 100 µL de acetona 1% y 𝛽-hidroxibutirato 7,91 mg/mL a 500 µL
de la muestra de leche saturando con 200mg cloruro de sodio y se analizó
en las condiciones estándar anteriormente mencionadas y los coeficientes
de variación del área del pico de acetona. Los resultados obtenidos se
muestran en la Tabla 1. Por medio de los cuales se establece el % Recobro.
Tabla 1. Determinación de la respuesta de acetona
Numero de análisis Leche+ 100 uL Acetona
1% [AU.min] Acetona 1% [mAU*min]
1 41359,7216 99124,6155
2 39519,5981 98662,4259
3 42597,7391 103104,735
Promedio 41159,0196 100297,259
1. Determinación de acetona en las muestras de leche
Como se mencionó el proceso de cuantificación fue por estándar externo y
se emplearon las siguientes ecuaciones: S = kC
S = kC SE = k SM = k SE
= SM
82
E E M M
CE
𝐂𝐌
CM
= 𝐒𝐌
𝐤
CE CM
SE = Señal del estándar
𝑘 =
Constan
te de
equivale
ncia CE
=
Concent
ración
del
estánda
r
SM = Señal de la muestra
CM = Concentración de la muestra
Estándar: Acetona 1% (v/v) = 7,91 mg/mL
83
𝑘 = 100297,259
𝑚𝑔 𝑚𝐿
= 12679,81 𝑚𝐿/𝑚𝑔
Teniendo en cuenta que se usa igual volumen para el estándar y la
muestra. Para la muestra llamada por el investigador ANDREA tendremos:
CM = 7033,30
= 0,5547 mg Acetona/mL 12679,81 mL/mg
En la Tabla 2, se muestran los niveles de acetona en leche para las demás
muestras. Teniendo como punto de corte 250 µmol/L se tiene que las
muestras clasifican como mínimo para cetosis subclínica [1]
Tabla 2. Acetona en las muestras de leche, expresada como mg/100mL, μmol/L y mmol/L.
Muestra Área media mAU*s
mg/mL μmol/L mmol/L
1 ANDRE
A
2885,89 0,23 3919 3,9
2 GUAPA 1112,59 0,09 1511 1,5
3 NEGRA 1056,81 0,08 1435 1,4
4 VACA 5 2811,75 0,22 3818 3,8
5 SIMONA 1372,32 0,11 1863 1,9
6 VIVIAN
A
2832,93 0,22 3847 3,8
7 YOLIMA 2839,11 0,22 3855 3,9
8 SORAYA 851,78 0,07 1157 1,2
9 JERSEY 2497,71 0,20 3392 3,4
10 MONA 1586,49 0,13 2154 2,2
11 JAIRO 833,68 0,07 1132 1,1
12 MARTIN
A
1647,28 0,13 2237 2,2
2. Determinación de la respuesta del 𝜷-hidroxibutirato
Se realizó el mismo procedimiento descrito anteriormente para las
muestras en la determinación del 𝛽-hidroxibutirato
7,91
84
Concentración mg/mL Señal k
7,91 18591,0707 2350,324994
7,91 25223,6670 3188,832743
7,91 22256,21465 2813,680740
22023,6508 2784,27949 mL/mg
85
Teniendo en cuenta que se usa igual volumen para el estándar y la
muestra. Para la muestra ANDREA:
CM =
549,5715 = 0,197 mg 𝛽 − hidroxibutirato /mL
2784,27949 mL/mg
Tabla 3. 𝛽-hidroxibutirato en las muestras de leche, expresada como mg/100mL,
μmol/L y mmol/L.
86
Muestra Área
media mAU*s
mg/mL μmol/L mmol/L
1 ANDRE
A
549,572 0,197 1916 1,9
2 GUAPA 357,205 0,13 1246 1,2
3 NEGRA N
R
---- ---- ----
4 VACA 5 49,350 0,02 172 0,2
5 SIMONA 1372,32 0,11 1863 1,9
6 VIVIAN
A
101,383 0,04 354 0,4
7 YOLIMA 557,264 0,20 1943 1,9
8 SORAYA 124,389 0,04 434 0,4
9 JERSEY 1139,107 0,41 3972 3,9
10 MONA 4808,90 0,38 6530 6,5
11 JAIRO 2249,28 0,18 3054 3,1
12 MARTIN
A
N
R
---- ---- ----
De acuerdo con los analisis contratados a este momento se han cumplido
12 quedando pendientes 10 muestras, las cuales se realizan de acuerdo
con el interés del investigador.
Cordialmente
Fernando
J.
Hernández
B.
Profesor
encargado
87
Se presentan a continuación los ejemplos de los resultados del
análisis de masas. Patrón acetona 1% + 𝛽-hidroxibutirato 7,91
mg/mL
MUESTRA 1 ANDREA
88
MUESTRA 2 GUAPA
MUESTRA 3 NEGRA
89
MUESTRA#4 VACA5
MUESTRA 5 SIMONA
90
MUESTRA 6 VIVIANA
MUESTRA 7 YOLIMA
91
MUESTRA 8 SORAYA
MUESTRA 9 JERSEY
92
93
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