Evaluación de la Inmunidad

INMUNODEFICIENCIASHIPERSENSIBILIDAD

AUTOINMUNIDAD

EvaluaciónInmunidad humoral

• Medición de la concentración Ig en suero

• Linfocitos B CD19 y CD20

Inmunidad celular(CMI)

• Pruebas cutanéas de hipersensibilidad Paperas, PPD, candida, toxoide tetánico, toxoide

diftérico

• Estimulación in vitro de linfocitos PHA, PWM, Con A, antígenos, superantígenos, células alogénicas, anticuerpos anti CD3, CD2, CD43, (CD11a,CD18). Linfocitos activados con PMA, ionomicina, CD40L

• Fagocitos Ingestión de partículas Prueba de reducción del NBT

OTROS

Sangre: leucocitos totales

Médula ósea: biopsia

Biopsia: intestinal, piel, timo

Complemento

TÉCNICAS (FUNDAMENTOS)

EIAAplicaciones Ig, CD, Citocinas

Ag - Ab + E S P desarrollo color

2oAb S S PP

2oAb

antiCD4 - CD4 + antiCD4 -E S P desarrollo color

SS PP

2oAb

anti1L-12 - IL12 + antiIL-12 -E S P desarrollo color

SS PP

Hemólisis Localizada en Gel

• La Técnica de Jerne demuestra la funcionalidad de las células plasmáticas antígeno específicas

SEPARACIÓN DE CÉLULAS

MONONUCLEARES

SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE

5 mL + Heparina

Diluir 1:2 con BSS

2.5 mL sangre + 3 mL Ficoll-Hypaque

1500 rpm x 45 min

Estratificar

Plasma

Células mononucleares

Ficoll-Hypaque

GR y Granulocitos

EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD

• El sistema inmunológico se evalúa mediante pruebas que permiten su identificación, cuantificación y caracterización funcional

INMUNIDAD CELULAR

• Pruebas cutáneas• Cuantificación de linfocitos T y B• Respuesta proliferativa a mitógenos

(fitohemaglutinina, concanavalina A)• Pruebas para macrófagos y neutrófilos

(Fagocitosis : movilidad, quimiotaxis, reconocimiento, ingestión, digestión, muerte intracelular)

• Expresión y producción de citocinas

3 ml BSS

1500 rpm x 10 min

resuspender con 3 mL BSS

resuspender en 0.5 mL BSS

Se cuenta y se ajusta 4 x 106

cel/ml

desechar sobrenadante

1500 rpm x 10 min

0.25 mL de células 4x106 + 0.25 mL GRC al 1%

500 rpm x 3 min

37 C x 3 min 4 C, 4 horas OBSERVAR LA FORMACIÓN DE ROSETAS

INMUNOFLUORESCENCIACITOMETRÍA DE FLUJO

FACS APLICACIONES: CD, MHC,

CITOCINAS INTRACELULARES

Permite identificar células individuales por sus Ag superficiales

Marcaje flujo laser detección CPU histograma

continuo desviación luz #

emisión eventos

fluorescencia

SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE

DE DENSIDAD Y ENSAYOS DE PROLIFERACIÓN

+ proliferación

C mononucleares microplaca PHA

3HTdr

FAGOCITOS

Fagocitosis

PRUEBA DE REDUCCIÓN DEL NBT

Prueba funcional. Capacidad para producir anión superóxido

NBT compuesto amarillo Formazan

oxidado reducido

hidrosoluble

PMA

LPS

Partículas O2 + NBT Formazan

1.Where are macrophages found in the human body? 2.What cells carry out phagocytosis? 3.What is a phagosome? 4.What is in a lysosome? 5.How is a phagolysosome formed? 6.What happens during an “oxygen burst”? 7.What are the end products of phagocytosis? 8.What happens to the products of phagocytosis?