CULTIVO, SEROLOGÍA, PRUEBAS DE SENSIBILIDAD, TINCIÓN DE GRAM

Dra. Roxana Blanco Villarte

DOCENTE PATOLOGIA CLINICA Dra Roxana Blanco Villarte 1

CASO CLINICO

• Paciente de sexo masculino, 34 años de edad acude al servicio de urgencias inconsciente, piel y mucosas deshidratadas

• A referencia de familiar presento convulsiones

• Signos vitales: – PA 80/50 mmHg

– FR: 32 rpm

– T: 35ºC

– FC: 110 lpm

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CULTIVOS

• DETECTA BACTERIAS

• HONGOS

SEROLOGIA

• DETECTA VIRUS

• ACTUALMENTE PARASITOS Y BACTERIAS

TINCION GRAM

• DETECTA SOLO BACTERIAS

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CULTIVOS

UROCULTIVO

COPROCULTIVO

HEMOCULTIVO OTROS: CULTIVO DE

SECRECION DE HERIDA, SECRECION NASAL,

OCULAR, OIDO

CULTIVO DE HISOPEADO FARINGEO

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SE LO REALIZA DE CUALQUIER MUESTRA

SOLICITUD DE CULTIVOS

• VA A DEPENDER DE LA CLINICA QUE PRESENTA EL PACIENTE Y DEL CRITERIO MEDICO.

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HEMOCULTIVO

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Toma de Muestra:

• Preparación de la piel

LIMPIEZA CON ALCOHOL

70% ( 2 VECES MISMA DIRECCION)

ESCOGER SITIO VENOPUNCIÓN

SE RECOMIENDA LA MUESTRA INDEPENDIENTE DEL PICO FEBRIL

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Toma de Muestra:

• Volumen de la muestra

Bacteremias <1 a 10 UFC/ml a mayor volumen de muestra obtenido, mayor es la sensibilidad del examen

Se recomienda 3 MUESTRAS DE SANGRE

Relación volumen muestra y medio de cultivo= 1/5 a 1/10

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Adultos 10 ml

Pediátricos 3 a 5 ml

RN 1 a 3 ml

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FOCO

DE INFECCION

• Extravascular Vasos capilares Vías linfáticas • Intravascular Endocarditis (20-40%

mortalidad)

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HEMOCULTIVOS

¿Cuando solicitar Hemocultivos?

• Paciente febril sin Foco

• Estado de shock sin causas hemodinámicas

• Infecciones aparente o inaparente: Neumonía nosocomial, pielonefritis, meningitis, infección abdominal, infecciones complicadas piel

• Leucopenia o leucocitosis no relacionada con enfermedad Hematológica

• Paciente inmunodepremido

• Paciente usuario de catéter venoso

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DIFERENTES MORFOLOGÍAS COLONIALES

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Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

MEDIO SELECTIVO Y DIFERENCIAL

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GRAM POSITIVO COAGULASA (+)

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COCO GRAM POSITIVO

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ANTIBIOGRAMA

• ES UTIL PARA DETERMINAR LA:

– SENSIBILIDAD

– RESISTENCIA

DE UN DETERMINADO GERMEN A LA TERAPEUTICA EMPLEADA

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ANTIBIOGRAMA

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ANTIBIOGRAMA

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TINCION GRAM

UTILIDAD DE LA TINCIÓN DE GRAM

• PERMITE ENTREGAR INFORME PRELIMINAR EN LAS

BACTEREMIAS

• ACELERAR EL INICIO DE TERAPIA ANTIBIOTICA

• ESCOGER O BIEN CAMBIAR TERAPIA EMPÍRICA

• DEFINE EL TIPO DE MEDIO DE CULTIVO ADECUADO PARA

AISLAMIENTO

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Frotis y fijación

1.- Poner una gota

de agua en un porta

2.- Tomar la muestra

con el asa de siembra

3.- Extender sobre el

agua y fijar a la llama

del mechero

Tinción

1.- Cubrir la

preparación con

Cristal Violeta 2’

2.- Añadir Lugol

(mordiente) durante 1’

3.- Decolorar con

Alcohol 96º hasta que

no suelte colorante

4.- Lavar con agua 5.- Teñir con Safranina 1’ 6.- Lavar con agua,

dejar secar y observar

al microscopio

Tinción de Gram

Lunes

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Tinción de Gram

Paso 1

Paso 2

Paso 3

Paso 4

Tinción del frotis Previamente fijado al calor,

con cristal violeta

Durante 1 minuto.

Todas las células se tiñen

de color azul-violeta.

Añadir Lugol,

dejar actuar 2 minutos

Todas las células siguen

de color azul-violeta.

Decolorar con alcohol Las células Gram +

siguen de color azul-violeta.

Las Gram negativas

se decoloran.

Tinción de contraste Con safranina 2 minutos.

Las células G+

se ven azul-violeta.

Las G- rosas o rojas.

Gram +

Gram - Dra Roxana Blanco Villarte 42

PROCEDIMIENTO COLORACION GRAM

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Cocos Gram - Bacilos Gram -

Tinción de Gram

Lunes

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Diferencias Gram positivos

y Gram negativos

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Gram positivos Gram negativos

Morfología bacteriana

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COCOS BACILOS

MORFOLOGÍA BACTERIANA

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Diplococos

Estreptococos

Estafilococos Dra Roxana Blanco Villarte 48

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SEROLOGIA

DEFINICION

• La serología es el estudio que permite comprobar la presencia de anticuerpos en la sangre.

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ELISA

INMUNOFLUORESCENCIA

WSTERN BLOT

AGLUTINACION

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VIRUS

PARASITOS

HONGOS

BACTERIAS

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PARASITOS TOXOPLASMOSIS CHAGAS TOXOCARIOSIS HIDATIDOSIS CISTICERCOSIS AMEBIASIS LEISHMANIASIS PALUDISMO

VIRUS HTLV 1 Y 2 HEPATITIS B,C, HIV RUBEOLA VIRUS EPSTEIN BARR

HONGOS CRIPTOCOCUS NEOFORMANS

BACTERIAS HELICOBACTER PYLORI TREPONEMA PALLIDUM

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CASO CLINICO

• En la reevaluación del paciente, una vez el paciente se encuentra fuera de peligro:

– Refiere antecedente de relaciones sexuales sin protección, sintomas B (+) los cuales incluyen fiebre, sudoración nocturna y perdida de peso aproximadamente 6 kilos, ademas presencia de deposiciones liquidas en varias oportunidades de consistencia liquida

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• Al examen físico presencia de placas blanquecinas en cavidad oral, adenopatias region cervical e inguinal de aproximadamente 5 x 2 cm, no dolorosas a la palpacion. No se palpa visceromegalias

• Pulmones se auscultan estertores crepitantes diseminados en ambos campos pulmonares

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QUE SOLICITO

• PANCULTIVOS (Hemocultivo, cultivo y ATB de hisopeado faringeo, coprocultivo y ATB, urocultivo)

• RX PA TORAX

• Serologia hepatitis B, C, HIV, chagas, VDRL

• Hemograma, quimica sanguinea

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• Cultivo de hisopeado faringeo se aisla candida albicans • Serologia HIV positivo • Coprocultivo se aisla proteus mirabilis sensible

ceftazidima, cefotaxima, imipenem, resistente a amoxcicilina, amoxicilina mas acido clavulanico

• RX PA torax compatible con imagen miliar sugestiva de Tuberculosis pulmonar

• Hemograma leucopenia de 3, 000 con neutrofilos absolutos de 1,000, anemia normocitica normocromica, trombocitopenia de 100,000

• Hipokalemia k 2,5 mEql Na 135 mEql

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GRACIAS

• PROXIMA CLASE LEER ANTICUERPOS ANTINUCLEARES, ANTI-ADN, FACTOR REUMATOIDEO

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