Post on 11-Mar-2020
CITOMETRIA DE
FLUJO
Y
LMA
José Ángel Díaz Arias
C.H.U.S.
INTRODUCCIÓN
– ¿Qué es la citometría de flujo (CMF)?
Es una tecnología para caracterización y el análisis
de células que mide y analiza simultáneamente
múltiples características físicas de partículas que se
mueven en un fluido a traves de un haz de luz
Un citómetro tiene 3 partes fundamentales:
– Fluídica
– Óptica
– Electrónica
INTRODUCCIÓN
– Puede analizar partículas de 0.2 a 50 micras
– Nos indica el tamaño relativo, complejidad interna
(granularidad) e intensidad de fluorescencia
– De forma general un número conocido de células
(generalmente 2 x 10e6) se incuba con los
monoclonales elegidos tras lo cual se somete a un
proceso de lisado de hematies y posterior lavado
INTRODUCCIÓN
¿Para que sirve la CMF? Se ha convertido en una herramienta indispensable
para el diagnostico, clasificación, estadiaje y
monitorización de neoplasias hematológicas
– Identifica células de diferentes líneas, así como su
maduración
– Detecta células “anormales”
– Nos indica el fenotipo de las células “anormales”, sobre lo
que podemos emitir una diagnostico/sospecha diagnostica
– Identificación pronostica
¿Existe una población “atípica”?
Una vez recibida una muestra con sospecha de LA se
realiza un panel de screening para:
– Determinar si existen células “atípicas”
– Saber si estas células son inmaduras
– Identificar la línea celular (mieloide, linfoide, bifenotipica, bilineal)
MARCADORES A ESTUDIAR
EGIL: Screening y posterior panel orientado
Marcadores en screening:
– CD34, CD33, CD13, CD10, CD19, CD45, CD7, CD14,
MPOcito, CD3cito, CD3s, HLA DR
Posteriormente para serie mieloide,
monocitica,megacariocítica y eritroide:
– CD15, CD11b, CD16, CD10, CD33, CD13, CD56, CD64,
CD65, CD117, CD19, Tdt, CD2, CD7, CD3, CD4, CD14,
CD61, CD41a, CD42b, CD71, CD36, Glicoforina A, CD45
Woods. Cytometry Part B (Clinical Cytometry)
72B:S14–S22 (2007)
Sumeet Gujral Indian J Pathol Microbiol 2008
Ortuño J, Orafo A. Medicina Clinica 2002, 118(11)
J.J.M. van Dongen. Euroflow consortium
LINFOCITOS +
ERITROBLASTOS
MONOCITOS
SERIE
GRANULOCÍTICA
CD45
¿Como sabemos que es mieloide?
EGIL
EGIL, Catovsky et al
Definición de línea
Se precisa una puntuación >2 en esa línea según
EGIL. Para definir una L.A. Bifenotípica (BAL) se
precisan más de 2 puntos en 2 lineas diferente.
Esto es útil para diferenciar las aberrancias de
línea y no confundirlas con BAL
Definición de línea
En la nueva clasificación OMS las BAL se han
“renombrado” y se ha hecho una definición más
estricta:– “Leucemias agudas de fenotipo mixto”
– Linea mieloide: MPO, o en diferenciación monocítica al menos dos
de los siguientes CD11c, CD14, CD64, lisozima, o bien esterasas inespecificas (citología)
– Línea linfoide T: CD3 citoplásmico o de superficie (más raro)
– Línea linfoide B: requiere de varios marcadores.
Si CD19 es fuerte uno de los siguientes CD79a, CD22, CD10
Si CD19 es débil se precisan 2 de los anteriormente mencionados
MADURACIÓN
Loken MR. Et al Leukemia Research 32 (2008) 5-17
MADURACIÓN
Kussick SJ Arch Pathol Lab Med 127, 2003
Brent W. Methos in Cell Biology Vol 75. 2004
Brent W. Methos in Cell Biology Vol 75. 2004
Brent W. Methos in Cell Biology Vol 75. 2004
CFM-FAB
Ortuño J, Orafo A. Medicina Clinica 2002, 118(11)
GENOTIPO-FENOTIPO
Ortuño J, Orafo A. Medicina Clinica 2002, 118(11)
GENOTIPO-FENOTIPO
M3 – t(15;17)
M4/M5 -MLL
EMR
La detección de EMR por CMF presenta algunas dificultadas debido a
la heterogeneidad de los fenotipos leucémicos.
Para su detección se precisa la localización previa de LAP (fenotipos
asociados a leucemia) en los blastos al diagnóstico.
Estos LAP sólo se pueden detectar en un 50-80% de las LAM y se basan
en:
– Asincronismos antigénicos
– Infidelidad de línea
– Sobreexpresión de antígenos
– Ausencia de antígenos específicos de línea
– Alteraciones evidentes en FSC/SSC
La sensibilidad alcanzable habitualmente es de 10e-3 / 10e-4 y hasta
10-6
EMR
Diversos estudios han mostrado que la detección de EMR, así como
su cuantía se asocia a distintos riesgos de recaída
San Miguel et al Post inducción 0.5% (recaida 67% vs 20%), Postintensificación 0.2% (69% vs 32%)
Venditti et al Postconsolidación 0.035% (77% vs 17%)
Al Mawali et al 0.15% postinducción
San Miguel et al 2001 4 categorias:– 1)Muy bajo riesgo recaida: <10-4
– 2)Bajo riesgo 10-4 a 10-3
– 3)Riesgo intermedio 10-3 a 10-2
– 4)Alto Riesgo >10-2
FENOTIPOS LEUCEMICOS(LAP)
Al-Mawali et al Am J Clin Pathol
2009;131:16-26
San Miguel et al 2002
Best Practice &
Research Clinical
Hematology 105-118
Vol 15 No 1
CITOMETRIA DE
FLUJO
Y
LMA
José Ángel Díaz Arias
C.H.U.S.
POBLACIONES NORMALES