Post on 09-Nov-2018
EL CARIOTIPO
1. Introducción2. Metodología3. Clasificación de los cromosomas4. Técnicas de bandeado cromosómico5. Citogenética molecular
MetodologíaEL CARIOTIPOTejido sólido
MetodologíaEL CARIOTIPOSangre periférica
G-bandingFitohemaglutinina
EL CARIOTIPO Metodología
Metafase humana teñida con Giemsa
Clasificación de los cromosomas
Los cromosomas se clasifican por pares de homólogos y se ordenan atendiendo a:
• Tamaño• Posición del centrómero (constricción primaria)• Presencia de constricciones secundarias
En el cariotipo humano los cromosomas se clasifican en siete grupos: A, B, C, D, E, F y G
EL CARIOTIPO
Cariotipo estándar
EL CARIOTIPO Clasificación de los cromosomas
Técnicas de bandeado cromosómico
1. Bandas que marcan todo el cromosomaBandas QBandas GBandas RBandas G de alta resolución
2. Bandas que marcan regiones específicasBandas CBandas TBandas NOR
EL CARIOTIPO
Bandas que marcan todo el cromosomaBandas Q ADN rico en AT
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas Q Quinacrina patrón similar a las bandas G se observan con el microscopio de fluorescencia
Bandas G
Bandas que marcan todo el cromosoma
Resultan de interacciones del ADN y proteínas con los colorantes que componen la tinción Giemsa. Se desnaturalizan proteínas con tripsina.
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
ADN rico en AT
Bandas-G
• Las bandas G oscuras son regiones de replicación tardía en la fase S, contienen cromatina más condensada
• Las bandas G claras se replican generalmente más tarde en la fase S. Cromatina menos condensada.
Los cromosomas se tiñen en zonas oscuras y claras
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan todo el cromosoma
Bandas R
La técnica de bandas R supone la desnaturalización de regiones del cromosoma por calor seguida por tinción de Giemsa
ADN rico en GC
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan todo el cromosomaEL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas de alta resolución
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas de alta resolución
Nº Bandas 400 550 850
• Bandas de alta resolución Sincronización en prometafase (methotrexate) bandas G
Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas C
Bandas centroméricas tiñe la heterocromatina
Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas t
Se tiñen los telómeros
Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma
EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas NOR
Se tiñen los organizadores nucleolares de los cromosomas acrocéntricos
Citogenética molecular
Aplicación de las técnicas de biología molecular a preparaciones citogenéticas.Identificación de reestructuraciones producidas “de novo” y de cromosomas marcadores.Detección de anomalías cromosómicas en células en interfase.Estudio de la estructura y función de regiones cromosómicas específicas.
EL CARIOTIPO
Citogenética molecularEL CARIOTIPO
Hibridación “In Situ” con fluorescencia (FISH)
Una o varias sondas de ADN, unidas a moléculas de marcaje fluorescentes, se hibridan con cromosomas en una preparación, que se visualizan n un microscopio de fluorescencia.
Cromosoma en el portaobjetos
Marcaje de la sonda con una molécula fluorescente
desnaturalización
ADN doble hélice
Hibridación de la prueba con el cromosoma desnaturalizadodesnaturalización
Hibridación “In Situ” Fluorescente (FISH)
Tipos de sondas de ADNCentroméricas (α-satélite)
•Metafase: Identificación de cromosomas
•Interfase: Recuento de cromosomas
Sonda α-satélite específica de centrómero
Tipos de sondas de ADN
Sonda específica de locus con sonda control para el cromosoma
Sonda para identificar la región delecionada
Sonda para identificar el cromosoma
específica de locus
Sitio de sondas FISH
(TTAGGG)n
Altas concentraciones de genesdeleciones microscópicas o submicroscópicas pueden tener un impacto significativo.
Juegan un papel crítico en el apareamiento de los cromosomas en meiosis
Teloméricas y subteloméricasTipos de sondas de ADN
Tipos de sondas de ADN
Marcaje del cromosoma entero: pintado
Identifica el material de un determinado cromosoma
En translocaciones
cromosoma 8
Pintado
Multiplex FISH: Multi-FISH
El ADN de cada cromosoma humano se marca directamente con uno o más fluorocromos, de una manera combinatoria, resultando un color único para cada uno de los 24 cromosomas
Cromosoma 1Cromosoma 2Cromosoma 3
Los 24 tonos de color no pueden ser distinguidos por el ojo humano
Se captura un conjunto de imágenes en la escala de grises, uno por cada uno de los cinco filtros distintos
Las imágenes son procesadas por el ordenador para dar una imagen pseudocoloreada de la metafase y del cariotipo
METAFASE
Azofeifa et al.
CARIOTIPO
Azofeifa et al.