ADN

ESTRUCTURA

CROMOSOMAS Y GENOMAS

Los cromosomas son los

portadores de los elementos

hereditarios

Los cromosomas están

compuestos de ADN y

proteínas

Cada cromosoma está

formado por una molécula de

ADN

Breve Historia…

Frederick Griffith,

1928

Streptococcus pneumoniae

Cepa R inocua Cepa S letal

S: cubierta de polisacáridos PRESENTE R: cubierta de polisacáridos AUSENTE

Oswald Avery, Colin MacLeod, and Maclyn McCarty, 1943.

Alfred Hershey & Martha

Chase, 1952.

P32

S35

DNA: P32

proteínas: S35

El ADN es la molécula de la herencia

La naturaleza hereditaria de cada organismo está definida por su genoma, el cuál consiste de largas secuencias de ácidos nucléicos que proporcionan la información necesaria para construir al organismo.

Las bases nitrogenadas

Los DESOXIRIBONUCLEÓTIDOS

Nucleósido Nucleótido

¿Qué reglas aplican para la secuencia de ADN?

Reglas de Chargaff

•La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T

•La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C

•La cantidad de bases púricas es la misma que las bases pirimídicas:

A+G=T+C

Pero la cantidad de A+T G+C

Rosalind

Franklin y

Maurice Wilkins

James Watson y Francis Crick

Estructura del ADN

Surco

mayor

Surco

menor

Surco

menor

Surco

mayor

5’ PO4-

3’ OH

Complementariedad:

A T G C

Bases nitrogenadas: interior

Fosfatos: exterior

Cadenas anti-paralelas

Extremo 5’: PO4

Extremo 3’: OH

La estructura del ADN permite responder dos preguntas claves en la

Genética:

1. ¿Cómo se puede determinar la información de una función

biológica en una forma química?

2. ¿Cómo se puede copiar la información a generaciones sucesivas?

Propiedades del ADN

El contenido de GC influye en las

propiedades del ADN, especialmente

sobre la temperatura de

desnaturalización y alineamiento

% GC Tm

Desnaturalización y

Re-naturalización

Source Lysis Methods

Bacteria

Lysozyme - degrades

polysaccharide cell walls

SDS - detergent for cell

membranes

Freeze/Thaw several times

French Press

Organelles

Osmotic

Sonication

Detergent

Animal Cells

Osmotic

Sonication

Detergent

Plant Cells

Several enzymes to break

down cell walls

Mechanical grinding

Purificación de ADN

1. Concentrar células 2. Romper células 3. Eliminar proteínas

4. Precipitar ADN

• Etanol

• Isopropanol

• Butanol

http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/howto/

Si quieres extraer ADN en casa, consulta:

A260 / A280 Quality

Ratio < 1.8 Contains protein

contamination

1.8 < Ratio < 1.9 no contamination

Ratio > 2 DNA may contain RNA

Absorbance peak or

shoulder at 270 nm Phenol contamination

Nucleic Acid Form NA Concentration at

1 A260

Double -stranded DNA 50 µg/ml

Single-stranded DNA 37 µg/ml

RNA 40 µg/ml

Concentración y calidad del ADN

Separación y visualización de fragmentos de ADN

Bromuro de etidio:

Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV

Gel de Agarosa 0.8% - 2.5%

Bibliografía:

Alberts “Molecular Biology of the Cell” 4ª o 5ª Ed. (2002, 2008)

Lehninger “Principles of Biochemistry” 3ª, 4ª o 5ª Ed. (2000, 2004, 2008)

Lodish “Molecular Cell Biology” 4ª, 5ª o 6ª Ed. (1999, 2003, 2007)

http://learn.genetics.utah.edu/

http://www.youtube.com/watch?v=mHak9EZjySs

Continuará ….