DETERMINACION DE LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO
DE TRAMETES sp. A DIFERENTES CONDICIONES: pH
(ACIDO, DEL MEDIO Y BASICO), TEMPERATURA, Y MEDIO
DE CULTIVO (PDA Y YPD).
“DISEÑO DE EXPERIMENTOS”
PRESENTAN:
NOMBRE 1 2 3 4 5 6 PROMEDIO FIRMA
Azpeitia Neri Jesús 90 95 100 95 95 100 95.83 ENTERADO
Leyva Castro Rosalba 95 90 90 90 80 75 86.66 ENTERADA
López Gutiérrez Bihari
Nathanael 100 100 95 100 95 100 98.33 ENTERADO
Luna Ayala Miriam Ivette 85 90 90 90 85 70 85 ENTERADA
Nava García Bernabé 100 90 90 90 95 90 92.5 ENTERADO
Tovar Zúñiga Eliseo 85 90 85 85 85 85 85.83 ENTERADO
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
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Zempoala Hgo. A 27 de Julio de 2013
MARCO TEORICO
1. HONGOS Y ANTECEDENTES HISTORICOS
Antes del desarrollo de los análisis moleculares de ARN y su aplicación en la dilucidación
de la filogenia del grupo, los taxónomos clasificaban a los hongos en el grupo de las plantas
debido a la semejanza entre sus formas de vida (fundamentalmente, la ausencia de locomoción y
una morfología y ecología similares). Como ellas, los hongos crecen en el suelo y, en el caso de
las setas, forman cuerpos fructíferos que en algunos casos guardan parecido con ejemplares de
plantas, como los musgos.(1)
Sin embargo, en 1969 Whitaker , fundamentó el nivel de organización celular y el tipo de
nutrición de los seres vivos, sirviendo así al sistema sostenido por Nolan y Margoliash (1968), en
el cual se contemplaban los cinco reinos en los que se clasificarían los seres vivos (Mónera,
Protista, Fungí, Plantae y Animalia), en donde los hongos fueron colocados en el reino Fungí
porque sus características morfológicas, fisiológicas y taxonómicas son diferentes a las
contempladas en el reino vegetal y animal. Por otro lado, los hongos se encuentran ampliamente
distribuidos por toda la tierra y viven en cualquier sitio que presente materia orgánica, agua y
temperaturas apropiadas, comprendidas generalmente entre 4 y 60°C. Los hongos se encuentran
clasificados como saprobios, parásitos y simbiontes.(3)
Los saprobios utilizan sustancias orgánicas inertes, muchas de ellas en descomposición,
que pueden ser reservas de otros organismos, productos de excreción y excrementos de los
mismos, o restos de vegetales y animales. Los hongos parásitos se desarrollan en otros
organismos vivos en los cuales son sus huéspedes y se nutren de las sustancias que hay en sus
células vivas. Por último, los simbiontes se asocian con otros seres, prestándose mutua ayuda en
sus funciones.
En la clasificación más simple de los hongos se divide en micromicetos y macromicetos,
estos últimos se diferencian de los micromicetes por presentar cuerpos fructíferos. Los hongos
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producen micelio, el cual es un conjunto de filamentos, y cada filamento se denomina hifa. A
veces las células que forman el micelio pueden parecer falsos tejidos. Las células de los hongos
tienen una pared celular de quitina, sustancia propia de los animales artrópodos. Raramente
acumulan también celulosa (1,2).
Los hongos tienen alimentación heterótrofa, puesto que no pueden realizar la fotosíntesis
porque no tienen clorofila. Tienen digestión externa, pues vierten al exterior enzimas digestivas,
sustancias proteicas que actúan sobre los alimentos dividiéndolos en moléculas sencillas, que
atacan a los alimentos. Los hongos absorben los alimentos después de digerirlos. Su reproducción
puede ser asexual, por esporas, y sexual. Las hifas haploides pueden dar lugar por mitosis, es
decir, asexualmente, a unas esporas llamadas conidios o conidiosporas. Las hifas diploides
resultante de la unión de dos hifas haploides pueden dar lugar, por reproducción sexual, a esporas
en unas estructuras tipo asca o tipo basidio. Hay dos clases de hifas: hifas cenocíticas, sin
tabiques de separación entre células, e hifas tabicadas, con ellos.(1,6)
Figura 1. A) Estructura plasmodial de hongos inferiores dentro de una célula hospedadora. B) hifas conociticas. C)
Hifas septadas o tabicadas (1)
Los hongos se presentan bajo dos formas principales: hongos filamentosos (antiguamente
llamados "mohos") y hongos levaduriformes. El cuerpo de un hongo filamentoso tiene dos
porciones, una reproductiva y otra vegetativa. La parte vegetativa, que es haploide y
generalmente no presenta coloración, está compuesta por filamentos llamados hifas (usualmente
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microscópicas); un conjunto de hifas conforma el micelio (usualmente visible). A menudo las
hifas están divididas por tabiques llamados septos.(5,8)
CARACTERISTICAS PARTICULARES DE LOS HONGOS
Los hongos en sentido estricto son unos organismos eucariotas heterótrofos (ya que carecen de
clorofila), que tienen digestión externa con absorción^ y que producen un micelio (salvo raras
excepciones ya que algunos son unicelulares), formado por hifas septadas o sifonales cuyas
paredes celulares están revestidas por quitina y glucanos. Muchos se reproducen de forma sexual
y asexual y sus células o compartimentos tienen por lo general varios núcleos haploides.(7)
Las levaduras, un grupo de hongos, presentan al menos una fase de su ciclo vital en forma
unicelular; durante ésta, se reproducen por gemación o bipartición. Se denominan hongos
dimórficos a las especies que alternan una fase unicelular (de levadura) con otra miceliar
(con hifas).
La pared celular de los hongos se compone de glucanos y quitina; los primeros se
presentan también en plantas, y los segundos, en el exoesqueleto de artrópodos; esta
combinación es única. Además, y a diferencia de las plantas y oomicetos, las paredes
celulares de los hongos carecen de celulosa.
La mayoría de los hongos carecen de un sistema eficiente de transporte a distancia de
sustancias (estructuras que en plantas conforman el xilema y floema. Algunas especies,
como Armillaria, desarrollan rizomorfos, estructuras que guardan una relación funcional
con las raíces de las plantas.
En cuanto a rutas metabólicas, los hongos poseen algunas vías biosintéticas comunes a las
plantas, como la ruta de síntesis de terpenos a través del ácido mevalónico y
elpirofosfato. No obstante, las plantas poseen una segunda vía metabólica para la
producción de estos isoprenoides que no se presenta en los hongos. Los metabolitos
secundarios de los hongos son idénticos o muy semejantes a los
vegetales. La secuencia de aminoácidos de los péptidos que conforman
las enzimas involucradas en estas rutas biosintéticas difieren no obstante de las de las
plantas, sugiriendo un origen y evolución distintos.
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Carecen de fases móviles, tales como formas flageladas, con la excepción de
los gametos masculinos y las esporas de algunas formas filogenéticamente “primitivas”
(los Chytridiomycota).
No poseen plasmodesmos.
CONDICIONES DE CULTIVO
Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples,
una fuente de carbono orgánico, generalmente en azúcar, y de nitrógeno suelen ser los elementos
suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte sólido, el agar, permite a
los hongos filamentosos el desarrollo del micelio aéreo, donde se localizan las estructuras
reproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo más
utilizado para los hongos es el medio glucosado de Sabouraud. que reúne estas características y
un pH de 5'6, que dificulta el crecimiento bacteriano.(4,7)
Los medios de cultivo después de sembrados, se incuban en anaerobiosis y la temperatura
óptima suele ser 25-30°C para los agentes de micosis superficiales y los oportunistas y de 35-
37°C para los que producen infecciones profundas.
Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfología
similar a las bacterianas. El desarrollo de las colonias de los hongos filamentosos es mucho más
variable: algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy características y en general
se diferencian fácilmente de las levaduras.
HONGOS FILAMENTOSOS
Los hongos filamentosos, designados más comúnmente como mohos, han sido de gran
importancia en la vida del género humano a lo largo de su historia, inicialmente en la parte
gastronómica y, a partir de este siglo, en la industria farmacéutica.(8)
Los hongos filamentosos se dividen en inferiores y superiores según las características de
sus hifas.
Los hongos inferiores poseen hifas anchas sin o con escasas tabicaciones, por lo que tiene
muchos núcleos para una misma unidad citoplasmática.
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Los superiores están formados por hifas compartimentadas por septos transversales que
separan las células, pero que poseen poros que permiten una comunicación del citoplasma
Los hongos filamentosos se identifican a nivel de género especie por la morfología del
micelio, pero sobre todo por las características microscópicas de sus esporas asexuadas y los
elementos que las originan. Para conseguir la producción de esporas a veces se requieren medios
de cultivo especiales que facilitan la esporulación. Las estructuras reproductoras asexuadas
(conidióforos) son muy frágiles y para poder observarlas al microscopio sin distorsionarlas o
destruirlas se emplean técnicas especiales (microcultivo). (3)
PASOS PARA LA IDENTIFICACION DE LOS HONGOS
Aspecto macroscópico de la colonia
Tipo de hifa
Colocación del o los esporóforos
Presencia de esterigmatas (esporangióforo o conidióforo) y el orden que presentan
Forma tamaño y distribución de las esporas
Presencia o no de rizoides. Sólo se presentan en hongos de hifa no septada. Por
ejemplo: Rihizopus, Rhizomucor, Absidia
Practicar pruebas de identificación bioquímica.(6)
IMPORTANCIA DE LOS HONGOS
Los hongos tienen una gran importancia económica: las levaduras son las responsables de
la fermentación de la cerveza y el pan, y se da la recolección y el cultivo de setas como las trufas.
Desde 1940 se han empleado para producir industrialmente antibióticos, así
como enzimas (especialmente proteasas). Algunas especies son agentes de biocontrol de plagas.
Otras producen micotoxinas, compuestos bioactivos (como los alcaloides) que son tóxicos para
humanos y otros animales. Las enfermedades fúngicas afectan a humanos, otros animales y
plantas; en estas últimas, afecta a la seguridad alimentaria y al rendimiento de los cultivos.(1,3)
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CLASIFICACION ACTUAL
Quitridiomicetes (división Chytridiomycota).
Zigomicetes (división Zygomycota).
Glomeromicetes (división Glomeromycota).
Basidiomicetes (división Basidiomycota).
Ascomicetes (división Ascomycota).(5)
BASIDIOMICETOS
Los hongos basidiomicetos aparte de ser una extraordinaria fuente de proteína y una excelente
opción para la alimentación humana presentan características enzimáticas únicas. Su compleja
batería enzimática extracelular es la principal responsable del proceso de degradación y está
compuesta por lignina peroxidasa (I.iP). Manganeso peroxidasa (MnP). Lacasa. y otras enzimas
como glucosa oxidasa y glioxal oxidasa que generan el peróxido necesario para la actividad
catalítica de la LiP y MnP.(2,4)
La clase de los basidiomicetos pertenecen a la división Eucomycota (hongos verdaderos
con pared) en el reino Fungí, estos incluyen a las setas y los hongos, que forman cuerpos
fructíferos en forma de repisas sobre la madera; estas características también incluyen producción
de esporas sexuales en una célula especial llamada basidio y la reproducción asexual se realiza
por conidios o esporas cuando existen estos dos tipos de estructuras. Los basidiomicetos a su vez
se dividen en los siguientes órdenes: Auricular ales, Aphyllophorales, Agaricales y
Gasteromicetes.(4,5)
2. TRAMETES
Trametes como un género representativo de Polycoracae fue establecido por Elías Magnus
Fries in 1835.(9)
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Fig. 1. Cuerpo fructífero silvestre de Trametes sp
CARACTERÍSTICAS
El hongo Trametes sp, en la actualidad se le adscribe dentro de esta clase de los
basidiomicetos en el orden Aphyllophorales y la familia Polyporaceae. Una de las propiedades
de los hongos del genero Trametes, es la degradación de la lignina para facilitar la digestión de la
celulosa y entre las enzimas que emplean estos hongos para ese fin se encuentran las llamadas
lacasas. Porque tienen la capacidad de oxidar a la lignina por medio de la acción de diversos
mediadores.(3)
Este hongo se encuentra dentro de los macromicetes, y como todos los de su orden gozan
de una mala reputación, ya que son considerados como hongos parásitos o patogénicos de los
bosques; crecen atacando a varias especies de árboles. Son imputrescibles, conservando su
integridad y algunos de ellos crecen en forma laminar sobre la madera, por lo cual son conocidos
como repisas de la madera. En el género Trametes frecuentemente su receptáculo es estacionario,
la trama espesa y clara; los tubos huecos son de dimensiones considerables, frecuentemente
lameladas, separados por tabiques algo espesos. Sus esporas son hialinas, lisas y sin cistides. Se
pueden clasificar este género según el color de su trama (3,4):
Rojo, siendo característico Trametes cinnabarium con los poros rojo bermellón, produce
una podredumbre blanca sobre numerosos árboles frondosos.
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Leonado, de olor anisado, principalmente el Trametes odorata, cuyo sombrero velloso,
rojizo, pardo y con un margen de color vivo, este es de podredumbre parda, el cual
destruye abetos y alerces de la montaña.
Pardo-ocre, inodoro, involucra al Trametes trabea, con sombrero abollado y fomentoso,
leonado con himenio color gamuza común sobre todos los bosques muertos.
Blanco, este se encuentra en numerosas especies, entre las cuales se encuentran: Trametes
hispida con sombrero gris pardo, erizado, leonado, propio de bosques frondosos.
Trametes gibosa, muy común, el cual tiene sombrero pubescente, con zonas
blanquecinas, poros frecuentemente alargados.
Trametes rubescens que tiene su sombrero menos espeso y oscuro, lo que permite que se
distinga menos, se identifica bien por el color y la forma plana del sombrero con poros
encarnados rosas o rojizos propiamente se encuentran sobre sauces y alisos.
Los Lenzites son otro tipo de hongos que pertenecen a la familia de los polyporaceae y
tienen la apariencia muy semejante a Trametes sp. Lencitas tricolor se encuentran sobre
los cerezos, los poros son alargados, con desviaciones lamelados lineares, su sombrero es
pardo púrpura, frecuentemente con franjas más claras y triple carácter (hymenia, palique y
estacional) que lo distingue del Trametes rubescens, pero que muestra la proximidad
estrecha al género Trametes.
Lencitas zapearía cosmopolita y fuerte se encuentra comúnmente en los bosques de
confieras, producen una podredumbre parda y ceniza se reconoce por su bello color
azafranado o leonado, marrón y su sombrero erizado con algunas zonas desnudas, en sus
laminas rígidas, aserradas, dentadas, estriadas a lo ancho, azafranadas, su carne es
herrumbrosa, la distingue de su especie vecina L. abietina en las fructificaciones por otras
partes menos vivas y coloreadas, por la ausencia de cistides emergentes y al parecer
espesas que es lo último que revela.
El Trametes del roble (T. quercina) es una de los poli foros más comunes en los
robledales de Europa pero no daña los postes de las casas y los bosques. Son propios de
los bosques muertos y el castaños, es reconocido por sus almohadillas espesas, distones
ramificados y sus diversas formas, se puede colocar, ya sea en los Trametes o en los
Lencitas.
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CONDICIONES DE CRECIMIENTO DE Trametes sp
En cultivo líquido y sólido, para la producción de enzimas lignocelulolíticas por el género
Trametes, se ha estudiado principalmente el efecto de la fuente de nitrógeno y la fuente de
carbono, pero hay poca información sobre el efecto de la temperatura en la producción de sus
enzimas dado que este género sólo las produce a temperaturas entre 28 y 30 °C. Levin y
Forchiassin (1998) indicaron que la temperatura entre 30 y 37 °C tiene poco efecto en la
producción de xilanasas en medio líquido por Trametes gallica, incluso por arriba de este
intervalo, encontraron que el hongo fue incapaz de crecer y de producir enzimas.(10,11)
IMPORTANCIA BIOTECNOLOGICA Y APLICACIONES.
El género está ampliamente distribuido en la naturaleza y algunas especies de trametes han
sido utilizadas en la medicina tradicional china. Sin embargo es difícil identificar muchas
especies de trametes debido a sus similares características morfológicas. Por esto trametes es
considerado como uno de los más confusos géneros de Polyporaceae. (5)
El género trametes tiene 64 especies de las cuales se puede destacar las siguientes
aplicaciones. Por ejemplo Trametes hirsuta cepa SKU804 es capaz de producir celulasa y
también un método de sacarificación. Debido a que el método puede garantizar un alto
rendimiento de sacarificación, las celulasas producidas a partir de la cepa, encuentran
aplicaciones en diversas industrias, incluyendo la industria de la energía, la industria de la fibra,
la industria de la fabricación de papel, la industria de los forrajes y la industria alimentaria, donde
se encuentran aplicaciones en la producción de alimentos bajos en calorías bio-energía y la y la
fermentación de los residuos de alimentos. (6)
En general Trametes, ya sea el organismo intacto o enzimas aisladas del mismo, puede tener
una gran variedad de aplicaciones biotecnológicas. Por sus propiedades catalíticas de
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oxidorreductasas lacasas purificadas, aplicaciones con bajos volúmenes y de alto costo como el
uso en biosensores se han desarrollado. (5,6)
Otro campo de aplicación es la bioremediación o para el tratamiento de residuos. Sin duda,
la presión para tratamientos de bajo costo es más pronunciada en estas aplicaciones de gran
volumen, lo que favorece el uso de todo el microorganismo o caldo de cultivo no purificado.
Como se ha demostrado en varios artículos de opinión, el ataque concertado de enzimas
ligninolíticas Trametes puede manejar sustancias que de otra manera serían difíciles de degradar.
Es bastante razonable proponer que, en base a las numerosas propiedades catalíticas de las
enzimas descritas, muchas nuevas aplicaciones se pueden encontrar en el futuro próximo,
poniendo de manifiesto un género versátil de los hongos de Trametes; Trametes pubescens MB89
ha sido estudiado por su producción de lacasas, una enzima que puede ser utilizada en procesos
de remediación (Fig. 2). (7,8)
JUSTIFICACIÓN
Actual mente existen un gran número de industrias textiles distribuidas por todo el mundo, estas
fábricas generan un gran número de desechos, los cuales ocasionan un gran impacto ambiental,
específicamente en los mantos acuíferos. Por tal motivo se han llevado a cabo distintas
investigaciones que ayuden a la remediación de agua con compuestos fenólicos.
Fig.2. decoloración de colorantes textiles por hongos basidiomicetos. Trametes sp.,
colorante verde placa control (A), y placa inoculada (B) con siete días de incubación
(42°C); colorante amarillo placa control (C), y placa inoculada (D) con 15 dias de
incubación (42°C).(9)
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Una manera de degradar los compuestos fenólicos es mediante el empleo de enzimas generadas
por Trametes SP. Por lo cual se han evaluado su velocidad de crecimiento a diferentes
condiciones como: pH: 3.5-del medio-8.5, Temperatura (28 y 37 °C), Medio de cultivo (PDA y
YPD)
OBJETIVO GENERAL
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp a diferentes condiciones (pH,
Temperatura y medio de cultivo).
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°c, pH del medio en PDA
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°c, pH del medio en YPD
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°C Y 37°C, pH 3.5 en PDA
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°C Y 37°C, pH 8 en PDA
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp .a 28°C Y 37°C, pH 3.5 en YPD
Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28°C Y 37°C, pH 8 en YPD
Comparar las velocidades de crecimiento de los diferentes tratamientos mediante pruebas
estadísticas (ANOVA, ANOVA A 2 VIAS, TUKEY Y DMS)
MATERIALES Y METODOS
Manejo de cada tratamiento.
Se realizaron tratamientos a el hongo filamentoso Trametes sp bajo diferentes condiciones para
determinar su velocidad de crecimiento. Manejando los medio YPD constituido de 1% (masa /
volumen) de extracto de levadura, 2% de peptona, 2% de glucosa / dextrosa, 2% de agar, con el
resto siendo agua destilada; y medio PDA constituido de 39 g de polvo PDA Comercial. Se
sometieron a temperaturas de 28°C y 37°C, ajustando a pH acido de 3.5, sin ajustar con pH del
medio de cultivo y ajustando a un pH básico de 8. Se midió el crecimiento en placa, tomando la
longitud de expansión en del hongo en la placa, durante 5 días con dos mediciones por día.
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El ajuste de pH en los tratamientos se hizo con soluciones de acido clorhídrico y Hidróxido de
Sodio, Agregándole HCl para acidificar el medio a pH 3.5 y monitoreando constantemente con
un potenciómetro. Para alcanzar pH de 8 de uso la solución de NaOH de igual manera con ayuda
de potenciómetro.
Materiales y equipos
Se utilizaron cajas Petri y material para prepara medios de cultivo( bascula analítica, probeta,
espátula y vaso de precipitado) para los inoculo, potenciómetro para ajustar pH, y olla de precio
para la esterilización de cajas Petri y medios de cultivo.
Diseño experimental y análisis estadístico.
El experimento fue realizado con 5 repeticiones (inoculos) por cada tratamiento, y el tiempo de
de monitoreo del crecimiento fue de 5 días. Al final de cada tratamiento se calculaba la media
aritmética y la desviación estándar de las cinco cajas del crecimiento de expansión en placa
por un intervalo de tiempo. Después de los 5 días y teniendo por lo menos 5 medias aritméticas
de diferentes intervalos de tiempo se armo una regresión lineal, calculando la pendiente de la
recta generada, siendo esta la velocidad de crecimiento del tratamiento. Los factores fueron: el
medio de cultivo(dos niveles: YPD y PDA), el pH (tres niveles: pH 3.5, pH del medio, pH 8) y
Temperatura (dos niveles: 28°C y 37°C). Los datos se analizaron con el método de análisis de
varianza ANOVA para aceptar o rechazar hipótesis estadísticas. Las medias de velocidad de
crecimiento por placa se utilizaron para la comparación por la prueba Tukey, DMS y análisis
factorial [12].
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ESQUEMA
Preparar medio de
cultivo PDA o YPD
según el tratamiento
sembrar por picadura e incubar
según sea el tratamiento (28°C o
37°C)
Esterilizar cajas Petri
y medio de cultivo
Esperar a que baje la temperatura
del medio, vaciar en cajas (20 mL
aprox.) y esperar gelificación
Ajustar o medir el pH, según sea el caso:
pH del medio
pH acido: 3.5
pH básico: 8
Después de 24 horas monitorear
crecimiento por lo menos 2 veces al
día, hasta obtener por lo menos 5
datos y determinar velocidad de
crecimiento mediante la graficacion
de los datos
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RESULTADOS Y DISCUCIONES
A continuación presentamos las regresiones generadas a partir de cada tratamiento y los
obtenidos.
Medio de cultivo PDA a 28°C
Tabla 2. Velocidad de crecimiento de Medio de cultivo PDA a 28°C
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
1 2 3 4 5 MEDIA
0 0 0 0 0 0
0.01920424 0.01920424 0.02562169 0.02241296 0.02401733 0.02209209
0.03203915 0.02883042 0.03043478 0.03043478 0.03203915 0.03075566
0.03524787 0.03364351 0.03364351 0.0384566 0.0384566 0.03588962
0.04166533 0.04166533 0.03524787 0.03685224 0.0384566 0.03877747
Tabla 1. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación
CRECIMIENTO (cm)
TIEMPO (h) caja 1 caja 2 caja 3 caja 4 caja 5 MEDIA DESV
ESTANDAR
0 0 0 0 0 0 0 0
27 0.7 0.7 1.1 0.9 1 0.85072428
2
0.178885438
43 1.5 1.3 1.4 1.4 1.5 1.41597510
4
0.083666003
48.5 1.7 1.6 1.6 1.9 1.9 1.72958500
7
0.151657509
71 2.1 2.1 1.7 1.8 1.9 1.90658671
4
0.178885438
93 3.1 2.9 2.8 2.8 2.9 2.89599631
8
0.122474487
97 3.1 3.1 2.9 3.1 3 3.03784636
2
0.089442719
PENDIENT
E
0.0302335
3
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0.05770897 0.05450024 0.05289588 0.05289588 0.05450024 0.05450024
0.05770897 0.05770897 0.05450024 0.05770897 0.0561046 0.05674635
Tabla 3. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación
estándar del hongo trametes sp en condiciones de: YPD, 28°C, Ph del medio
CRECIMIENTO (cm)
TIEMPO CAJA1 CAJA2 CAJA3 CAJA4 CAJA5 MEDIA S
0 0 0 0 0 0 0 0
28 0.2 0 0 0.2 0 0.08 0.1095445
1
47 1.2 1.2 1.4 1.2 1.3 1.26 0.0894427
2
51 1.5 1.4 1.7 1.2 1.6 1.48 0.1923538
4
66 1.6 1.5 1.7 1.6 1.8 1.64 0.1140175
4
70 1.8 1.7 1.8 1.7 1.9 1.78 0.083666
96.5 2.4 2.3 2.3 2.5 2.8 2.46 0.2073644
1
PENDIENT
E
0.02785379
y = 0.6233x - 0.497 R² = 0.9778
-1.5
-1
-0.5
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
0 27 43 71 93 97
CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
TIEMPO (h)
Figura 1. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones
de: medio de cultivo PDA, pH del medio y 28 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
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Tabla 4. Velocidad de crecimiento Medio en YPD a 28°C.
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
1 2 3 4 5 MEDIA
0 0 0 0 0 0
0.01383342 0.00881586 0.00881586 0.01383342 0.00881586 0.01082288
0.03892122 0.03892122 0.04393879 0.03892122 0.04143001 0.04042649
0.04644757 0.04393879 0.05146513 0.03892122 0.04895635 0.04594581
0.04895635 0.04644757 0.05146513 0.04895635 0.05397391 0.04995986
0.05397391 0.05146513 0.05397391 0.05146513 0.05648269 0.05347215
0.06902659 0.06651781 0.06651781 0.07153537 0.07906172 0.07053186
Medio PDA, 28°, pH 3.5.
Tabla 5.- valores de crecimiento con respecto al tiempo (h), y valores de media y desviación
estándar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 28°, pH 3.5.
CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
tiem
po
(t)
1 2 3 4 5 Me
dia
s 1 2 3 4 5 Medi
a
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
25 0 0 0 0 0 0 0 0.017
5889
0.017
5889
0.017
5889
0.017
5889
0.017
5889
0.017
5889
y = 0.3986x - 0.3514 R² = 0.9113 -2
-1
0
1
2
3
0 28 47 51 66 70 96.5
CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
TIEMPO(h)
Figura 2. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a
condiciones de: medio de cultivo YPD, pH del medio y 28 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 18
4 4 4 4 4 4
51 0.5 0.
6
0.
6
0.9 0.7 0.6
6
0.15
1657
5
0.022
7298
0.023
7579
7
0.023
7579
7
0.026
8424
8
0.024
7861
4
0.024
3748
7
69 1.5 2 2.
5
1.5 2 1.9 0.41
833
0.033
0115
2
0.038
1523
8
0.043
2932
3
0.033
0115
2
0.038
1523
8
0.037
1242
76 2 3.
5
2.
7
2.4 2.4 2.6 0.56
1248
6
0.038
1523
8
0.053
5749
5
0.045
3495
8
0.042
2650
6
0.042
2650
6
0.044
3214
1
194 5 5 5 5 5 5 0 0.068
9975
3
0.068
9975
3
0.068
9975
3
0.068
9975
3
0.068
9975
3
0.068
9975
3
Pendi
ente
0.02
774
Medio PDA, 37°C, pH 3.5.
Tabla 6.- valores de crecimiento con respecto al tiempo (h), y valores de media y desviación
estándar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 37°C, pH 3.5
CRECIMIENTO
(cm)
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
tiemp
o (h) 1 2 3 4 5 me
dia
s 1 2 3 4 5 Media
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
25 0.6 0
.
7
0
.
8
0
.
8
0
.
5
0.6
8
0.1303
8405
0.015
4654
0.0161
4295
0.016
8205
0.0168
2046
0.0147
8794
0.0160
0745
56 3.4 3
.
3
2
.
9
3
.
2
2
.
3
3.0
2
0.4438
4682
0.034
4356
0.0337
5813
0.031
0481
0.0330
8062
0.0269
8306
0.0318
6111
y = 0.9726x - 1.7107 R² = 0.8899
-2
-1
0
1
2
3
4
5
6
00:00 25 51 69 76 194 CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
TIEMPO(h)
Figura 3. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a
condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 3.5 y 28 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 19
69 5 5 4 5 4 4.6 0.5477
2256
0.045
2757
0.0452
7575
0.038
5007
0.0452
7575
0.0385
0068
0.0425
6572
76 5.5 5
.
4
6
.
3
5
.
5
4
.
5
5.4
4
0.6387
4878
0.048
6633
0.0479
8577
0.054
0833
0.0486
6328
0.0418
8821
0.0482
5678
99 6.8 9 7
.
5
6
.
5
6 7.1
6
1.1631
8528
0.057
4709
0.0723
7602
0.062
2134
0.0554
3835
0.0520
5081
0.0599
0989
Pendi
ente
0.076
0168
Medio en PDA a 28°C, pH 8
Tabla 7. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación
estándar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 28°C, pH 8
CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
tiemp
o (h) 1 2 3 4 5 × s 1 2 3 4 5 x
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
23 0.2 0 0.2 0.2 0.3 0.18 0.109
5445
1
0.015
9620
6
0.013
2520
3
0.015
9620
6
0.015
9620
6
0.017
3170
7
0.015
6910
6
53 1.7 1.3 1.1 1.3 1 1.28 0.268
3281
6
0.036
2872
6
0.030
8672
1
0.028
1571
8
0.030
8672
1
0.026
8021
7
0.030
5962
1
84 1.9 2.1 1.7 2 1.7 ×1.8
8
0.178
8854
4
0.038
9972
9
0.041
7073
2
0.036
2872
6
0.040
3523
0.036
2872
6
0.038
7262
9
118 2.5 3 2.5 3.4 2.8 2.84 0.378 0.047 0.053 0.047 0.059 0.051 0.051
y = 1.476x - 1.6827
R² = 0.9826
-2
0
2
4
6
8
10
0 25 56 69 76 99
CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
TIEMPO (h)
Figura 4. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones
de: medio de cultivo PDA, pH 3.5 y 37 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 20
y = 0.738x - 0.978 R² = 0.967
-2
-1
0
1
2
3
4
0 23 53 84 118 CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
tiempo (h)
Figura 5. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de Trametes Sp. a
condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 8 y 28 °C
1534
1
1273
7
9024
4
1273
7
3224
9
1924
1
7344
2
Medio PDA, 37°C, PH 8
Tabla 8. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación estándar del hongo Trametes Sp en condiciones de: PDA, 37°C, pH 8
CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
tiempo (h)
1 2 3 4 5 X s 1 2 3 4 5 X
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
23 1.6 1.2 1.2 1.4 2 1.48
0.3346640
1
0.0175587
3
0.0155158
3
0.0155158
3
0.0165372
8
0.0196016
3
0.0169458
6
53 4.7 4.9 5.3 5.1 5.3 5.06
0.2607681
0.0333912
2
0.0344126
7
0.0364555
7
0.0354341
2
0.0364555
7
0.0352298
3
84 6.1 5.7 6.5 6.4 6.4 6.22
0.3271085
4
0.0405413
7
0.0384984
7
0.0425842
7
0.0420735
4
0.0420735
4
0.0411542
4
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 21
118 6.8 6.4 7.4 8.1 8.4 7.42
0.8438009
2
0.0441164
5
0.0420735
4
0.0471808
0.0507558
7
0.0522880
5
0.0472829
4
PENDIENTE
0.0652566
2
Medio YPD, 28°C, pH 3.5
Tabla 9. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacion estandar del hongo trametes sp en condicions de: YPD, 28°C, pH 3.5
CRECIMIENTO (cm) VELOCIAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
tiempo (h)
1 2 3 4 5 MEDIA
s 1 2 3 4 5 MEDIA
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
21 0.5 0.3 0.5 0.7 0.5 0.5 0.1414213
6
0.0171058
8
0.0147529
4
0.0171058
8
0.0194588
2
0.0171058
8
0.0171058
8
51 1.4 1.9 2.3 1.5 1.3 1.68
0.4147288
3
0.0276941
2
0.0335764
7
0.0382823
5
0.0288705
9
0.0265176
5
0.0309882
4
105 1.7 2.7 3.3 2.7 2.6 2.6 0.5744562
6
0.0312235
3
0.0429882
4
0.0500470
6
0.0429882
4
0.0418117
6
0.0418117
6
y = 1.958x - 1.838 R² = 0.9562
-2
0
2
4
6
8
10
0 23 53 84 118
CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
tiempo (h)
Figura 6. Evaluación de la velocidad de crecimiento de Trametes Sp. a
condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 8 y 37 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 22
120 2.6 3.6 3.6 3.2 3 3.2 0.4242640
7
0.0418117
6
0.0535764
7
0.0535764
7
0.0488705
9
0.0465176
5
0.0488705
9
PENDIENTE
0.0257887
2
Medio YPD, 37°C, pH 3.5
Tabla 10. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviación estándar del hongo trametes sp en condicions de: YPD, 37°C, pH 3.5
CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
tiempo (h)
1 2 3 4 5 MEDIA
s 1 2 3 4 5 MEDIA
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
21 2 1.4 1.8 1.6 1.8 1.72
0.2280350
9
0.0281677
9
0.0214110
4
0.0259155
4
0.0236632
9
0.0259155
4
0.0250146
4
45 2.4 2.2 2.2 2.6 2 2.28
0.2280350
9
0.0326723
0.0304200
5
0.0304200
5
0.0349245
5
0.0281677
9
0.0313209
5
51 3.3 2.5 2.8 3 3 2.92
0.2949576
2
0.0428074
3
0.0337984
2
0.0371768
0.0394290
5
0.0394290
5
0.0385281
5
66 4.1 3.7 4.2 3.9 4.1 4 0.2 0.0518164
4
0.0473119
4
0.0529425
7
0.0495641
9
0.0518164
4
0.0506903
2
71 4.7 4.3 4.9 4.8 4.9 4.7 0.248 0.058 0.054 0.060 0.059 0.060 0.058
y = 0.85x - 0.954 R² = 0.9848
-2
-1
0
1
2
3
4
0 21 51 105 120 CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
tiempo (h)
Figura 7. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones
de: medio de cultivo YPD, pH 3.5 y 28 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 23
2 99799
5732 06869
82545
69932
82545
79842
PENDIEN
TE
0.0605353
y = 0.888x - 0.5013 R² = 0.9723
-2
-1
0
1
2
3
4
5
6
0 21 45 51 66 71
CR
ECIM
IEN
TO (
cm)
tiempo (h)
Figura 8. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones
de: medio de cultivo YPD, pH 3.5 y 37 °C
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 24
ANALISIS DE VARIANZA ANOVA
A continuación presentamos análisis de varianza entre los tratamientos del experimento:
ANOVA 1
Se realizó ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de
Trametes sp a condiciones de: pH de medio y 28°C
Tabla 11.- Anova de tratamientos con pH del medio a 28°C
Fuente de
variación
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
Cuadrados
medios
Valor F
Tratamientos 0.000075 1 0.000075 0.150928
Error 0.005961 12 0.00049675
Total 0.006036 13
Ho:Hi= µ 2 µ 3 µ 4 µ 5
Ha Se acepta
Regla de
decisión
No se rechaza si Fexp ≤ 4.75
Se rechaza si Fexp > 4.75
Conclusión con
respecto a F
Se acepta Ho debido a que .150928 < 4.75 a un L.C 95%. La
velocidad de crecimiento no se se ve afectado por el medio de
cultivo.
Discusión de ANOVA1
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 25
En anova realizada a dos tratamientos diferentes para ver el efecto que logran tener en la
velocidad de crecimiento de Trametes sp utilizando medios PDA a 28ºC cuando la temperatura
aumenta, las velocidades de las reacciones químicas, que ocurren en el interior de las células de
los microorganismos, se vuelven cada vez más rápidas, podemos ver que en nuestras mediciones
existe una variación no muy considerable en cuanto al crecimiento es algo más constante en el
cual es un poco más inestable, se puede notar que en un comienzo el crecimiento es menos por la
temperatura pero posteriormente este aumenta su tamaño considerablemente esto podría darse por
que el medio le es más favorable ya que la temperatura está dentro de sus estándares al
crecimiento o su adaptación a este es mejor.[13,14]
Conclusiones ANOVA 1
En la anova realizada a este dos diferente tratamiento pudimos darnos cuenta que el desarrollo de
Trametes sp no se ve afectado totalmente ya que en ambos medios su desarrollo es óptimo en
ninguno de los medios se puede decir que no hubo variación de crecimiento ambos crecieron de
forma normal a que el pH del cultivo sólido está por abajo de 5 ó por arriba de 7 y esto lo
podemos corroborar con los datos de nuestra anova ya que nuestras hipótesis son aceptadas al ver
que nuestro valor de F experimental es menor que al F de tablas a un L.C de 95% teniendo en
cuenta todas estas variables descritas en la anova podemos concluir que la velocidad de
crecimiento de Trametes sp no se ve afectado drásticamente cuando el pH es acido del medio de
cultivo en el que se desarrolla.[15]
ANOVA 2
Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento
de Trametes sp a condiciones de: pH 3.5, en medio PDA.
Tabla 11. Velocidad de crecimiento con respecto a su temperatura.
Velocidad de crecimiento (mm/h). Velocidad de crecimiento (mm/h).
28° 37°
0 0
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 26
0.01758894 0.01600745
0.02437487 0.03186111
0.0371242 0.04256572
0.04432141 0.04825678
0.06899753 0.05990989
Tabla 12. Tabla de ANOVA de los tratamientos a pH 3.5, en medio PDA.
Fuente de variación Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios Valor F
Tratamientos 0.000003 1 0.000003
Error 0.005264 10 0.0005264 0.00607
Total 0.005267 11
Discusión ANOVA 2
Con respecto en los datos se muestra que en las temperaturas de 28°C y 37°C, se tiene que en los
dos tratamientos presentan y se observa un efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp
a condiciones de: pH 3.5, en medio PDA. En el desarrollo de las anovas con respecto a la
temperatura como análisis de varianza la utilizamos para comprobar si existe o tenemos
Ho: µ1=µ2
Ha: Todas son diferentes
Regla de decisión : Si F experimental ≤ F tablas, no se rechaza la
Ho
Si F experimental>F tablas, se rechaza la Ho
Conclusión con respecto a F
experimental:
No se rechaza Ho ya que el valor de F
experimental es menor 0.00607 a F de tablas
de 4.96 teniendo un límite de confianza del
95% es entonces que en el medio de PDA no
presenta diferencia en las temperaturas de
28°C y 37°C sobre la velocidad de
crecimiento son diferentes.
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 27
estadísticamente alguna diferencia significativa característica para tener entre las medias
obtenidas las cuales son de (F experimental de 0.00607 mientras que en F de tablas se obtiene un
valor de 4.96) esto se determina cuando en el análisis experimental se cuenta con dos o más
tratamientos [6].
Es entonces que para el desarrollo de esta ANOVA teniendo como variable las diferentes
temperaturas que se están utilizando las cuales son de 28°C y 37°C en medio de cultivo PDA con
un pH de 3.5 la ANOVA obtenida anteriormente se muestra que la Ho no se rechaza porque
tenemos una diferencia de medias obtenidas en el análisis experimental que se realizo en la anova
anterior y que empleando las medias obtenidas de los resultados en los tratamientos, es por esta
razón que al analizar los tratamientos no se afecta su crecimiento pero el crecimiento en cada
temperatura es diferente significativamente en el medio de cultivo PDA y nuestro hongo
Trametes sp presenta un mejor crecimiento en pH de 3.5, en medio PDA a 37°C que se considera
que son condiciones optimas para su crecimiento[16,17].
Conclusión ANOVA 2
La anova nos hace concluir que a pH 3.5 en medio PDA, la temperatura no es un factor que
afecte significativamente el crecimiento del hongo Trametes sp.
ANOVA 3
Se realizó la ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento
de Trametes Sp a condiciones de: pH 8 y PDA.
Tabla 13.- Velocidad de crecimiento de los tratamientos a pH 8 en medio PDA.
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
28°C 37°C
0 0
0.01569106 0.01694586
0.03059621 0.03522983
0.03872629 0.04115424
0.05173442 0.04728294
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 28
Tabla 14.- ANOVA 3 entre tratamientos a pH 8 en medio PDA
Fuente de
variación
Suma de cuadrados Grados de
libertad
Cuadrados
medios
Valor F
Tratamientos 0.000001 1 0.000001 0.003828
Error 0.003122 8 0.00039025
Total 0.003123 9
Ho:Hi= µ1=µ2=µ3=µ4=µ5
Ha Los tratamientos no son
iguales
Regla de
decisión
No rechazar HO si Fexp ≤ 0.003828
Rechazar sí Fexp >0.003828
Conclusión con
respecto a F
La H no se rechaza porque Fexp
Discusiones ANOVA 3
La velocidad de crecimiento a temperatura de 37°C es más elevada que a 28 °C, pues presenta
un buen crecimiento a esta temperatura con respecto al tiempo por lo cual se establece que el
hongo Trametes Sp bajo estas condiciones presenta una buena velocidad de crecimiento en el
medio de cultivo PDA.
Se realizaron mediciones dos veces al día durante una semana en los tratamientos y se concluye
que son diferentes, por lo cual se pudo observar la diferencia en el crecimiento del hongo
Trametes sp a las temperaturas de 28° C y 37 °C. Favoreciendo el crecimiento a Trametes Sp
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 29
a 28 °C ya que no se ve afectada puesto que se encuentra en el intervalo de su temperatura
óptima de entre los 28 y 30 °C para favorecer su crecimiento.
Conclusión ANOVA 3
La Anova nos permite concluir que a pH 8 en medio PDA, la temperatura no es un factor que
haga variar significativamente la velocidad de crecimiento de Trametes sp.
ANOVA 4
Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de
Trametes sp a condiciones de: pH 3.5 y YPD
Tabla 15. Velocidades de crecimiento en los dos tratamientos a pH 3.5 en medio YPD.
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
28°C 37°C
0 0
0.01710588 0.02501464
0.03098824 0.03132095
0.04181176 0.03852815
0.04887059 0.05069032
0.05879842
Tabla 16.- ANOVA tratamientos a pH 3.5 en medio YPD.
Fuente de
variación
Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios Valor F
Tratamientos 0.000108 1 0.000108 0.263903
Error 0.003696 9 0.000410667
Total 0.003804 10
Ho:Hi= µ1=µ2
Ha Todas son diferentes
Regla de
decisión
Si F experimental ≤ F tablas, no se rechaza la Ho
Si F experimental >F tablas, se rechaza la Ho
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 30
Conclusión
con respecto a
F
la Ho se rechaza porque el valor de f experimental (0.263903) es menor al de f
de tablas (F= 5.12) con un intervalo de confianza de 95%
DISCUSIÓN
Los Medios de cultivo afectarán la morfología de la colonia y el color, pueden afectar incluso el
crecimiento del hongo en el cultivo, la mayoría de los hongos crecen en agar de dextrosa de papa
(PDA), pero esta puede ser demasiado rica para muchos hongos.
Otro aspecto que puede crear un ambiente desfavorable en el medio de aislamiento, es un pH
elevado e incluso la temperatura.[20]
Al comparar dos tratamientos para determinar la velocidad de crecimiento del hongo trametes
sp. Se puede apreciar en la tabla 1, que la velocidad de crecimiento fue mayor a una temperatura
de 37°C: pH 3.5 y medio de cultivo YPD. Aun así no son las condiciones óptimas para el
desarrollo del hongo, por lo tanto no tubo diferencias significativas es decir que la temperatura no
influye de manera muy notable en el crecimiento de este hongo en un medio de cultivo YPD.
Con el análisis de varianza (ANOVA) comprobamos si existe una diferencia estadísticamente
significativa entre tratamientos.[24]
Para el desarrollo de esta ANOVA se tuvieron coma variables en un medio de cultivo YPD, la
temperatura, PH 3.5. se pudo determinar que la velocidad de crecimiento es favorable en una
temperatura de 37°C, para poder tener las condiciones óptimas de crecimiento es necesario
realizar el monitoreo del crecimiento en el medio de cultivo PDA.[23]
CONCLUCIÓN
Al trabajar y comparar los tratamientos realizados : (pH 3.5, YPD, 28°C y 37°C) se llegó a la
conclusión de que el hongo Trametes sp tiene mayor desarrollo bajo las circunstancias de pH
ácido (3.5) con una temperatura de 37°C en un medio de cultivo solido (PDA), porque estas
condiciones son óptimas para el desarrollo del hongo, se estima que tiene un crecimiento
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 31
prolongado en pocos días, el motivo de por qué se menciona su pH es porque actúa con su acidez
o alcalinidad del medio [23, 24].
La Ho se acepta porque el valor de f experimental es menor al de f de tablas con un intervalo de
confianza de 95%. [20]
ANOVA 5
Se realizo ANOVA a los tratamientos para ver efectos en la velocidad de crecimiento de
Trametes sp a condiciones de temperatura de 28°C.
Tabla17.-Tratamientos a 28°C
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
PDA YPD PDA pH 3.5 PDA pH 8 YPD pH 3.5
0 0 0 0 0
0.02209209 0.01082288 0.01758894 0.01569106 0.01710588
0.03075566 0.04042649 0.02437487 0.03059621 0.03098824
0.03588962 0.04594581 0.0371242 0.03872629 0.04181176
0.03877747 0.04995986 0.04432141 0.05173442 0.04887059
0.05450024 0.05347215 0.06899753
0.05674635 0.07053186
Tabla 18.- ANOVA de tratamientos a 28°C
Fuente de
variación
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
Cuadrados
medios
Valor F
Tratamientos 0.000536 4 0.000134 0.28049
Error 0.011954 25 0.00047816
Total 0.01249 29
Ho:Hi= PDA =YPD =PDA pH 3.5 =PDA pH 8= YPD pH 3.5
Ha Son diferentes todos los tratamientos
Regla de
decisión
No rechazar si F experimenta </= 2.74*
Rechazar si F experimental >2.74
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 32
Conclusion con
respecto a F
Ya que el valor de F experimental es menor a F de tablas (2.74)
teniendo un límite de confianza del 95% es entonces que no hay
diferencia entre los tratamientos.
Discusión ANOVA 5
Los medios de cultivo generalmente contienen una fuente de carbono, nitrógeno y vitaminas. La
glucosa (dextrosa) es la fuente de carbono más ampliamente utilizable, y por lo tanto es el más
comúnmente utilizado en los medios de crecimiento [18]. Ambos medios de cultivo utilizados en
los tratamientos tienen como fuente de carbono la dextrosa. Así se explica que el crecimiento sea
similar en los tratamientos a la temperatura de 28°C.
El pH puede ser inhibidor de otros microorganismos que compitan con el hongo Trametes sp
[19]. Por lo que el pH acido y básico puede que sea beneficioso en algunos casos, siendo así que
no se note una diferencia significativa entre la velocidad de crecimiento a pH del medio de un pH
básico o acido, todo eso en la temperatura 28°C.
Conclusión ANOVA 5:
Nuestro análisis de varianza indica que son similares nuestros tratamientos a 28°C por lo que el
pH del medio y el medio de cultivo no son factores que causen diferencias significativas en el
crecimiento de Trametes sp.
ANOVA 6
Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de
Trametes sp a condiciones de: temperatura 37°C.
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 33
Tabla 20.- Tratamientos a temperatura de 37°C
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
PDA pH 3.5 PDA pH 8 YPD pH 3.5
0 0 0
0.01600745 0.01694586 0.02501464
0.03186111 0.03522983 0.03132095
0.04256572 0.04115424 0.03852815
0.04825678 0.04728294 0.05069032
0.05990989 0.05879842
Tabla 20.- ANOVA de los tratamientos a 37°C. Fuente de variación
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Cuadrados medios Valor F
Tratamientos 0.000108 2 0.000054 0.123999
Error 0.006089 14 0.000434929
Total 0.006197 16
Ho:Hi= PDA pH 3.5 = PDA pH8 = YPD pH 3.5
Ha Son diferentes
Regla de decisión No rechazar si F experimenta </= 3.81
Rechazar si F experimental >3.81
Conclusión con respecto a F
Ya que el valor de F experimental es menor a F de tablas (3.81) teniendo un límite de confianza del 95% es entonces que no hay diferencia entre
los tratamientos.
Discusión ANOVA 6.
El pH ha de ser ligeramente ácido para facilitar el crecimiento de los hongos e inhibir al mismo
tiempo el desarrollo de otros microorganismos.[20] Pero en nuestra anova observamos que no
hay diferencias significativas entre medio y pH usando una misma temperatura de 37°C. Asi
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 34
podemos observar que Trametes sp. Se adapta bien al pH de 3.5 y el de 8, además que el cambio
de cultivo no afecta considerablemente.
Conclusiones ANOVA 6.
La anova muestra que no hay diferencias significativas entre usar un pH de 3.5, pH del medio o
usar pH 8 cuando se tiene una temperatura de 37°C. y que tampoco el factor del medio afecta
significativamente la velocidad de crecimiento de Trametes sp.
ANOVA 7
Se realizo ANOVA a los tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de
Trametes sp a condiciones de las variables: temperatura, pH, medio de cultivo.
Tabla 21. Medias con respecto a la velocidad de crecimiento en los tratamientos del hongo Trametes sp
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h)
PDA 28°C YPD 28°C PDA, pH 3.5, 28°C
PDA, pH 8, 28°C
YPD, pH 3.5, 28°C
PDA, pH 3.5, 37°C
PDA, pH 8, 37°C
YPD, pH 3.5, 37°C
0 0 0 0 0 0 0 0
0.02209209
0.01082288
0.01758894
0.01569106
0.01710588
0.01600745
0.01694586
0.02501464
0.03075566
0.04042649
0.02437487
0.03059621
0.03098824
0.03186111
0.03522983
0.03132095
0.03588962
0.04594581
0.0371242 0.03872629
0.04181176
0.04256572
0.04115424
0.03852815
0.03877747
0.04995986
0.04432141
0.05173442
0.04887059
0.04825678
0.04728294
0.05069032
0.05450024
0.05347215
0.06899753
0.05990989
0.05879842
0.05674635
0.07053186
Tabla 22. ANOVA 7 de todos los tratamientos.
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 35
Fuente de
variación
Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios Valor F
Tratamientos 0.000648 7 9.25714x10-5
Error 0.018042 39 0.000462615 0.200254
Total 0.01869 46
Discusión
En los tratamientos que analizan de acuerdo a las medias obtenidas y utilizando como variables al
medio de cultivo, pH y temperatura para la determinación de velocidad de crecimiento con
respecto a los datos obtenidos en el hongo Trametes sp. Se realiza un análisis de varianza en
tratamientos (mostrados en la tabla 22). Y se tiene que (F experimental es de 0.200254 y F de
tablas es de 2.25) Con respecto a los análisis obtenidos se muestra que las variables (medio de
cultivo YPD, PDA, pH, temperatura), que son las determinantes para el crecimiento con respecto
al tiempo de incubación son diferentes entre sí porque se muestran que en los medios de cultivo
YPD y PDA con respecto a una temperatura de 37°C con un pH de 3.5 son similares a diferencia
del resto de los tratamientos donde varia su velocidad de crecimiento demostrando que en su
Ho: µ1=µ2=µ3
Ha: Todas son diferentes
Regla de decisión : Si F experimental ≤ F tablas, no se rechaza la Ho
Si F experimental >F tablas, se rechaza la Ho
Conclusión con respecto a F
experimental:
Se acepta la Ho porque en el análisis estadístico
tenemos que F experimental ≤ F tablas, no se
rechaza la Ho, porque en la F experimental es de
0.200254 y F de tablas es de 2.25 en el análisis
estadístico se encuentra que en los medios YPD,
PDA a los diferentes factores pH, temperatura y
medios de cultivo son diferentes
significativamente.
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 36
análisis de varianza el crecimiento del hongo Trametes sp es mas favorecedor con las
condiciones optimas que ya se establecieron anteriormente en la (tabla 22). Los hongos crecen
muy rápido en ocasiones va de 2 a 3 días y conforme van creciendo llegan a cubrir en las cajas
petri donde se encuentran inoculados es cuando estos crecen, así se puede realizar la
determinación de la velocidad de crecimiento, puede ser la medida más útil cuando se examina el
cultivo del hongo pero es posible que tenga un valor limitado por que la velocidad de
crecimiento de ciertos hongos varían en función de la cantidad de medio de cultivo en donde se
encuentran (PDA, YPD). En resultado, la velocidad de crecimiento de un hongo es importante
pero debe utilizarse junto con otras características o registros en el monitoreo de su crecimiento
que se realiza por el tiempo que se desee antes de realizar una identificación definitiva, es por
eso que el hongo Trametes sp. Se someterá a diferentes tratamientos, para identificar como es el
comportamiento en cada uno de ellos [14,21].
Conclusiones
Al trabajar con los tratamientos realizados que fueron sometidos a un análisis estadístico se
concluye que el hongo Trametes sp tiene mayor efecto cuando se localiza a circunstancias de pH
ácido (3.5) con una temperatura de 37°C en un medio de cultivo solido agar de dextrosa y papa
(PDA). El agar de dextrosa y papa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras a
partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos cosméticos [22].
El agar de dextrosa y papa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el
crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También
puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica.
La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos
en algunos dermatofitos. Algunas ocasiones es recomendable disminuir el pH del medio a 3.5 ±
0.1 con ácido tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de papa
promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el medio de cultivo (PDA) agar
de dextrosa y papa es adicionado como agente solidificarte. Una de las propiedades de los
hongos del genero Trametes sp es la degradación de la lignina para facilitar la digestión de la
celulosa y entre las enzimas que emplean estos hongos para ese fin se encuentran las llamadas
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 37
lacasas; estas son glicoproteínas producidas por algunos hongos y bacterias, que catalizan la
oxidación de diferentes compuestos fenólicos. Son enzimas excepcionalmente versátiles, que
pueden ser empleadas en diversos procesos industriales (bioblanqueo y depuración de los
efluentes de industrias papeleras, degradación de compuestos fenólicos contaminantes, etc.).
Porque tienen la capacidad de oxidar a la lignina por medio de la acción de diversos mediadores,
porque bajo estas condiciones optimas dicho hongo tiene una mayor actividad y se estima que
tiene un crecimiento prolongado en pocos días y es así como se puede utilizar para las
perspectivas que se propongan en el uso del hongo filamentoso Trametes sp por tal motivo se
menciona que con respecto a su pH es porque actúa con su acidez o alcalinidad del medio que lo
contiene y es como actúa en donde se cuenta con poblaciones de microorganismo para que el
hongo crezca en el medio de cultivo adecuadamente debe contar con algunas condiciones como
son temperatura, pH, la humedad la presencia de O2 en este la concentración de iones hidrógeno
afecta directamente a los microorganismos que influyen en la disociación y solubilidad de
moléculas que requiera de agente como pH es por eso que algunos microorganismos se han
adaptado a las diferentes condiciones de alcalinidad y acidez, como Trametes sp que crece a pH
ácidos cada microorganismo tiene un rango de temperatura y pH en el cual pueden crecer, de tal
manera que al modificarse estos factores se puede alterar la velocidad de crecimiento y en
algunas ocasiones causar la muerte de los mismos, por lo que se puede utilizar como factores de
control de crecimiento en el hongo Trametes sp para su disposición de N2, P, Ca y Mg [16,
17,18].
PRUEBA TUKEY Y DMS
Se realizo prueba Tukey y DMS [12] entre los tratamientos para observar que tratamientos eran
similares y cuales tenían diferencias significativas. El análisis se hizo a partir de las velocidades
de crecimiento de cada caja de cada uno de los tratamientos. Se obtuvo la siguiente tabla:
Tabla 23.- Velocidades de crecimiento por caja para prueba Tukey y DMS.
28 °C 37°C
Unidad Experimental
PDA YPD PDA 3.5 PDA8 YPD 3.5 PDA 3.5 PDA 8 YPD 3.5
Caja 1 0.03253361
0.026911
0.02769353
0.02245971
0.018856
0.07511355
0.06017018
0.06038261
Caja 2 0.03187058
0.02635577
0.02806145
0.02747483
0.02898792
0.08948651
0.05748431
0.05617927
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 38
Caja 3 0.02769117
0.02703288
0.0278169
0.02199476
0.03049551
0.07931176
0.06697287
0.06240345
Caja 4 0.02956433
0.02737883
0.02749378
0.02923532
0.02564017
0.07208807
0.07090462
0.06162206
Caja 5 0.02922036
0.03159048
0.0276502
0.02376879
0.02496397
0.06408427
0.07075114
0.0620891
MEDIAS 0.03017601
0.02785379
0.02774317
0.02498668
0.02578872
0.07601683
0.06525662
0.0605353
A partir de los datos de la tabla 23 obtuvimos los valores teóricos de comparación para los
tratamientos:
Tabla 24.- Datos teóricos calculados para prueba Tukey y DMS
nc= 28
R= 5
CME= 0.000021
T= 4.58
DMS= 2.037
T= 0.00938621
DMS= 0.00590379
A partir de los datos de la tabla 24 se genero la siguiente tabla de comparación entre los
tratamientos:
Tabla 25.- Tabla de comparación con los métodos Tukey y DMS de los tratamientos del experimento.
Comparación Diferencia TUKEY DMS
X1-X2= 0.00232222 A A
X1-X3= 0.00243284 A A
X1-X4= 0.00518933 A A
X1-X5= 0.0043873 A A
X1-X6= 0.04584082 R R
X1-X7= 0.03508061 R R
X1-X8= 0.03035929 R R
X2-X3= 0.00011062 A A
X2-X3= 0.00286711 A A
X2-X5= 0.00206508 A A
X2-X6= 0.04816304 R A
X2-X7= 0.03740283 R R
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 39
X2-X8= 0.03268151 R R
X3-X4= 0.00275649 A A
X3-X5= 0.00195446 A A
X3-X6= 0.04827366 R R
X3-X7= 0.03751345 R R
X3-X8= 0.03279213 R R
X4-X5= 0.00080203 A A
X4-X6= 0.05103015 R R
X4-X7= 0.04026994 R R
X4-X8= 0.03554861 R R
X5-X6= 0.05022812 R R
X5-X7= 0.03946791 R R
X5-X8= 0.03474658 R R
X6-X7= 0.01076021 R R
X6-X8= 0.01548153 R R
X7-X8= 0.00472133 A A
*A= comparación aceptada por el método. R=comparación rechazada por el método.
ANALISIS FACTORIAL.
Se realizo análisis factoriales comparando lo siguiente:
Tabla 26. Velocidades de crecimiento por placa de cada tratamiento par análisis factorial con factor A (pH) y factor B (temperatura).
FACTOR A (Ph 3.5)
FAC
TOR
B (T 2
8°C
)
PDA 3.5 YPD 3.5
0.02769353 0.018856
0.02806145 0.02898792
0.0278169 0.03049551
0.02749378 0.02564017
0.0276502 0.02496397
MEDIAS 0.02774317 0.02578872
FAC
TOR
B (T 3
7°C
)
PDA 3.5 YPD 3.5
0.07511355 0.06038261
0.08948651 0.05617927
0.07931176 0.06240345
0.07208807 0.06162206
0.06408427 0.0620891
MEDIAS 0.07601683 0.0605353
Determinación de la velocidad de crecimiento de Trametes sp
Universidad Politécnica de Pachuca Página 40
Figura 9. Grafico del análisis factorial de pH y Temperatura.
Tabla 27.- Velocidades de crecimiento por placa de cada tratamiento par análisis factorial con factor A (pH) y factor B (temperatura)
FACTOR A PH
FAC
TOR
B (T 2
8°C
)
YPD PDA 3.5 PDA8 YPD 3.5 PDA
0.026911 0.02769353 0.02245971 0.018856 0.03253361
0.02635577 0.02806145 0.02747483 0.02898792 0.03187058
0.02703288 0.0278169 0.02199476 0.03049551 0.02769117
0.02737883 0.02749378 0.02923532 0.02564017 0.02956433
0.03159048 0.0276502 0.02376879 0.02496397 0.02922036
MEDIAS 0.02785379 0.02774317 0.02498668 0.02578872 0.03017601
FAC
TO
R B
(T
37
°C)
PDA 3.5 PDA 8 YPD 3.5
0.07511355 0.06017018 0.06038261
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
0.08
1 2
MED
IAS
FACTOR A
Analisis Factorial
FACTOR B (37°C)
FACTOR B (28°C)
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0.08948651 0.05748431 0.05617927
0.07931176 0.06697287 0.06240345
0.07208807 0.07090462 0.06162206
0.06408427 0.07075114 0.0620891
MEDIAS 0.07601683 0.06525662 0.0605353
Figura 11. Grafico del análisis factorial de la tabla 27
Conclusión del análisis factorial.
A partir del análisis factorial podemos ver que los tratamientos a 28°C y 37°C son diferentes.
PERSAPECTIVAS
Es así como con el estudio de dichos hongos si se establece las condiciones de crecimiento es
posible tener una relación de que nos indique cuales son los niveles de producción de enzimas
producidas por el hongo Trametes sp. De acuerdo al estudio que se ha realizado a los hongos
filamentosos y estos por lo normal son degradadores de la madera Trametes sp es capaz de
degradar la lignina y se puede emplear para el uso de fabricas textiles para la pigmentación del
algodón, hilo, telas para el desarrollo de prendas de vestir o colores versátiles empleados en las
pinturas textiles utilizadas en la comunidad para el arte de pintar la ropa en el hogar o lugares de
manejo industrial.
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
0.08
1 2 3 4 5
MED
IAS
FACTOR A
Analisis Factorial
FACTOR B (28°C)
FACTOR B (37°C)
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