TECNICAS DE TECNICAS DE BIOLOGBIOLOGÍÍA MOLECULARA MOLECULAR
ENDONUCLEASASENDONUCLEASASO ENZIMAS DE RESTRICCIO ENZIMAS DE RESTRICCIÓÓNN
Generan cortes internos en la molGeneran cortes internos en la moléécula de cula de ADNADN
Pueden generar extremos romos o Pueden generar extremos romos o cohesivoscohesivos
Enzimas de Restriccion
Extremos cohesivosExtremos cohesivos
Extremos romosExtremos romos
ClonaciClonacióón y uso de enzimasn y uso de enzimas
SeparaciSeparacióón de fragmentosn de fragmentos
Geles de AgarosaGeles de Agarosa
Geles de Geles de poliacrilamidapoliacrilamida
CLONACICLONACIÓÓNN
PCR (PCR (reaccireaccióón en cadena de n en cadena de polimerasapolimerasa) Componentes de la ) Componentes de la
reaccireaccióónnPolimerasaPolimerasaPrimersPrimersDNTPDNTP’’ssCloruro de magnesioCloruro de magnesioAguaAguaBuffer Buffer
SOUTHERN BLOTSOUTHERN BLOT
1) Blood sample. 2) DNA is extracted from blood cells. 3) DNA is cut into fragments by a restriction enzyme. 4) The DNA fragments are separated into bands during electrophoresis in an agarose gel. 5) The DNA band pattern in the gel is transferred to a nylon membrane. 6) Radioactive DNA probe, designed to recognise specific DNA sequences, is prepared. 7) Probe DNA binds to the specific DNA sequences on the membrane. 8) Excess DNA is washed off, but the DNA pattern is invisible at this stage. 9) X-ray film is placed next to the membrane & exposed to the radioactive DNA. 10) The developed X-ray shows the pattern of DNA bands
SECUENCIACISECUENCIACIÓÓNN
VNTR
DNA fingerprinting in Argentina to establish kinship of the 'disappeared', the children, often born in captivity, of parents kidnapped and assassinated by the former military regime there. Here a geneticist uses a multi-channel pipette to prepare samples for the process. A bank of blood samples, taken from all the potential relatives, provides the DNA for comparison with that from the child in question. Fragments of DNA are seperatedinto bands by electrophoresis in an agarose gel. Every human being produces a unique pattern of DNA bands, hence its potential as a kind of genetic
CLONACICLONACIÓÓN EN ANIMALESN EN ANIMALES
COPYCOPY--CAT (EE.UU 2002) CAT (EE.UU 2002)
PAMPA (Argentina 2002)PAMPA (Argentina 2002)
PROMETEA (Italia 2003)PROMETEA (Italia 2003)
Ian Wilmut and Dolly. In 1996, British embryologist Professor Ian Wilmut created, the world's first sheep cloned from an adult sheep cell. The research was conducted at the Roslin Institute in Edinburgh, Scotland.
Marcadores molecularesMarcadores molecularesY sus aplicacionesY sus aplicaciones
Tipos de MarcadoresTipos de Marcadores
Directos o sea dentro del gen Directos o sea dentro del gen ((intragintragéénicosnicos))Indirectos usando a otro gen o marcador Indirectos usando a otro gen o marcador cercano en el cromosoma para poder cercano en el cromosoma para poder identificar sus diferencias entre individuosidentificar sus diferencias entre individuos
RFLPRFLP’’ss
Pueden hacerse por Pueden hacerse por SouthernSouthern blotblotPueden hacerse por PCRPueden hacerse por PCR
Por Southernblot
Por PCR y luego restricción
VNTRsVNTRs o microsato microsatééliteslites
Pueden hacerse por Pueden hacerse por SouthernSouthern blotblotPor PCR y geles de poliacrilamida o Por PCR y geles de poliacrilamida o agarosaagarosaPor SSCPPor SSCP
UtilidadUtilidad
DetecciDeteccióón de individuos portadores de un n de individuos portadores de un gen recesivo.gen recesivo.TestTest de paternidad o de paternidad o trazabilidadtrazabilidad..SelecciSeleccióón asistida por n asistida por marcadores,etcmarcadores,etc