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Mineralizacin de PCB por la cepa modifcadagenticamente Cupriavidus necator JMS34 y su aplicacin
para la biorremediacin de los PCB en el suelo
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Cepas a utilizar
Cepa desarrollada genticamenteel locus pb obtenido del genomaxenovorans Burkholderia
Cepa NativaPresencia de microfora nativa reduce la degrddacion de losPBC por la cepa Bur!olderia "enovorans #B4$$
%ste estudio contribuye al desarrollo de biocatalizadoresme&orados para la recuperacin de ambientes contaminadoscon PCB'
Cupriavidus necator JMP(34 )*3
cepa JMS34
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Construccion de cepasgenticamente mejoradas:
%l pl6smido p789$(: 1ue lleva resistencia a la !anamicina5 .ue trans.erido de %' coli SM($ a C' necator JMP(34) *3
Purifcacin de ,;< y la digestin se realizaron porprocedimientos est6ndares'
) Sac+ para la digestion) sondas biotilizdas2 complementarias a los genes
del bpC =enBan! accession number *>>(::5 y bp;=enBan! accession number *>>(:35
@ueron amplifcadas por PC/ utilizando el pl6smidop789$(: como plantilla
Primers bpC( y y bpC: se utilizaron para amplifcar lasonda BPAC
Primers bp;( y bp;: para amplifcar la sonda bp;
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#a degradacin de PBC por C'nec6tor JMS34 .ue evaluado usando
clulas resistentes de cultivos encrecimiento e"ponencial en mediom0nimo de !sal con bi.enil y carbn
como .uente de energ0a' los tuboscon cada congnere PBC en unaconcentracin fnal de :8$ uM'
no de los tubos de PCB .ue usadoen el an6lisis de CB,s en .ase acuosay el contenido del otro tubo .ue
suministrado para ectraccionor 6nica cuantifcaion de PBCs'
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Anlisis de CBA, PCB , y cloruro
Para la cuantifcaion de de CB, PBCs en medio li1uido se relealizocon un sistema AP#C
Para el an6lisis de PBC/ la .ase mvilconsistio en D$E de acetonitrilo y:$E de agua
Cloruro .ue cuantifcado atraves deun protocolo de especto.otometria7iocianato de de mercurio5
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experimentos de
ioaumentacin en
microcosmos # a muestra del suelo $):$ cmpro.undidad5.ue recolectada en uncampo de agricultura en el Centro
de Cile provincia Fuillota5 en unaplantacin de la .ruta ca1ui
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%l suelo contiene las siguientes
caracter0sticas2 %l suelo es ligeramente acido con pA >'8
Suelo .ranco arenoso GE de arcilla/ 3$'8E
loam y >$'8 de arena5 Contenido de carbono de (3/G g'!g('
Contenido de nitrgeno ('> g'!g)(
elacin nitrgenoHcarbn de D'-Contenido
de materia organica del 4/>E %l suelo no tenia anterior istoria de
contaminacin de PBC' %l suelo se seco a3$IC y luego se tamizo
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Cada microcosmo contiene 38g de sueloseco en :8$ml %rlenmeyer' Microcosmo .ue
establecido usando suelo no esterilizado ysuelo esterilizado autoclave por 3$ min a(:(IC/ ( bar/ 3 tiempos intervalos de :4 5
,dem6s el suelo simple .ue suplementado
con bi.enil como sustrato' #os microcosmos .ueron bioestimulados
gracias a C' nec6tor 9MS34 y B'"enovorans
7odo microcosmos se incubaron a 3$I C/con agitacin :-$ rpm5/ durante >3 d0asestudio por duplicado
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Cuanti!cacin de microorganismos "#$%&'B&(( en el suelo
na alicuota de muestra .ue tomada para
inocular en el medio de agar selectivo1ue conten0a !anamicyna y telurito desodio como marcador' #as clulas eranvisibles por la reduccin del telurito a
teluro elemental
#os PBCs .ueron cuantifcados en suelos
por un cromatgra.o de gases Per!in%lmer acoplado a un espectrmetro demasas y utiilizado para su cuantifcacin
Cuanti!cacin de PBC en suelo
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%S#7,;S
Cepa modifcada era capaz de
cerecer en cuelos con bi.enil como.uente de carbono y energia ypoocos capaz de crecer en varios
compuestos de acuerdo a su numerode cloros'
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Crecimiento de las cepas "#$%&en i)enil y CBAs
Capacidad de la cepa JMS34 encrecer en bi.enil
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;egradacion de CB,s P #, C%P,&ms34
Se utilizo .ructosa como .uente de carbono adi.erentes concentraciones
#as clulas crecieron en la presencia de 3)metil)benzoate m)toluate5 capaz de inducir genes y suconcentracin .ue determinada por un an6lisis deAP#C
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*egradacin de PCBs por C+nector "#$%& en medio liuido+
4 PCB congneres .ueron selccionadospara degradar PBC por la cepa JMS342 dosmonoclorados bii.enil 3)CB y 4)CB y dosdiclorados bi.enilo 3/8)CB y :/4)CB
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Biorremediacion de PCBs en suelos'
Se evaluo la efciencia de C' nec6tor como un biocatalizadorpara la remediacin de PBCs en dos tipos de suelos
Bioamuentacion para me&orar la digestion en la poblacionnatural bacteriana
$-.'/$ N/ .$0.12'.$
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%sta fgura muestra el numero declulas de la cepa JMS34 y la #B4$$
en suelo
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Se analiz el rol de la microbiota nativa en ladegradacion de PBC por las dos cepas en
suelos estriles
#os ensayos con suelos estriles seutilizan para introducirmicroorganismos e"genos y
degradar contaminantes espec0fcos
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;iscusin #as v0as metablicas para PCBs y CB,s pueden ser combinadas en
un microorganismo'
%l locus de la bp de la b' "enovorans lb4$$ codifca uno de lasme&ores v0as de degradacin de los PBC
#a cepa JMS34 suporto el crecimiento usando 3cba y 4cba como.uente de carbon y energ0a
Policlorado se necesita la presencia de un inductor natural m)toluato5
#a cepa JMS34 degrado el GGE de 3)cb y 4)cb y un D:E de :/4)cben una semana en un suelo no esteril' %n el mismo suelo la cepalb4$$ degrado en una semana apro"imadamente el 8$E de estosPBC
#os resultados del estudio indican 1ue la cepa C' necator JMS34tiene competitiva venta&as en suelos no estriles
#a e.cacia de la cepa JMS34 para la biorremediacin de suelos noesteril suguiere un uso potencial para la biorremedaicion desuelos contaminados con PCB
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