SINDY LORENA BENAVIDEZ VANEGASERIKA GARCÍA

ALEXANDRA MELÉNDEZDANIELLA QUINTERO

GEONEY SANABRIA CALDERÓN

PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS

La separación de las proteínas presentes en sangre se consigue al adicionar ciertos electrolitos. La precipitación salina “SALTING OUT” es un método en el cual se logra la separación de las proteínas y el plasma.

Para ésta precipitación se uso el sulfato de amonio en dos concentraciones al 0.88gr al 30% de saturación y al 1.48 gr en una saturación del 70%.

El procedimiento Salting Out precipita e insolubiliza las proteínas, pero sin que se de lugar a la desnaturalización de las mismas

SALTING OUT EN EL LABORATORIO

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1. Una vez conocidas las normas de bioseguridad y contando con personas capacitadas, se procede a la extracción de sangre de uno de los participantes de la práctica utilizando el método Vacutainer.

2. Previamente se ha dispuesto de 5 tubos de ensayo de tapa color lila; Además 10 tubos de centrífuga y dos pipetas desechables para usar una en plasma y otra en hemoglobina.

1

2

3.Se centrifugan inmediatamente los 5 tubos a 2400 r.p.m.

4.Luego de que se ha centrifugado se separa todo el plasma en un tubo, con una pipeta de plástico sin mezclar el plasma con los componentes celulares.

5.Se toma 1mL de los componentes celulares que han quedado en el fondo del tubo a lo cual se adicionan 9 mL de agua destilada

9 mL

Se observa el proceso de Hemólisis

6.Se toman dos tubos de centrífuga, se adiciona en uno 5mL de plasma y en el otro 5 mL de solución de hemoglobina.

Acto seguido se adiciona progresivamente a cada uno de los tubos sulfato de amonio; inicialmente 0.44 gm aproximadamente de Sulfato de amonio en concentración 30% de saturación. Debe mezclarse muy bien la solución de cada uno de los tubos, cuando ya se haya mezclado perfectamente la solución debe añadirse los otros 0.44 mg de sulfato de amonio a cada uno de los tubos, así se habrá completado los 0.88 gr requeridos en ésta practica.

Una vez adicionados en su totalidad los 0.88 mg de sulfato de amonio a los dos tubos se lleva a centrifugado durante 10 minutos.

plasma

Sln de hemoglb.

(0.44 gr

aprox

(0.44 gr

aprox

2

2

Del centrifugado anterior se pasa el sobrenadante a otro tubo sin descartarse el mismo.

7.Al sobrenadante resultante se le añade ahora sulfato de amonio 1.48 gr de igual forma dividido en su mitad a cada uno de los dos tubos de solución de hemoglobina y plasma. Éste tiene una concentración al 70%.

Se centrifuga cada tubo 10 minutos, se separan los sobrenadantes y se añaden 4mL de agua destilada a cada uno. Ahora, se mezclan los precipitados tanto de la concentración del 30% con la concentración del 70% y se observa que la hemoglobina no se desnaturaliza, si se solubiliza dado la adición de los electrolitos provenientes del sulfato de amonio, pero, al final del método de precipitado Salting out se ve nuevamente la hemoglobina en su apariencia inicial

2 En cada tubo tanto en el de solución de hemoglobina como en el de plasma.