UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA SENYAWA BIOAKTIF EKSTRAK METANOL DAUN SENGGANI (Melastoma candidum D. Don)
TERHADAP Shigella flexneri DAN Micrococcus luteus SERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA
SutiknoM0406061
Pembimbing :Estu Retnaningtyas N., STP, M.Si.Dr. Artini Pangastuti, M.Si Rabu, 2 Juni 2010
LATAR BELAKANGS. flexneri M. luteus
Penyakit infeksi
Penyakit infeksi
Resistensi thd antibiotik
M. candidum D. DonSecara empiris :-Berkhasiat obat-Aktivitas antimikroba
PEMISAHAN LANJUT :-Esktraksi-Partisi-Fraksinasi
Golongan senyawa kimia
RUMUSAN MASALAH
TUJUAN
MANFAAT
SENGGANI
aktivitas antimikroba
tumbuh liar pada tempat-tempat yang mendapat cukup sinar matahari seperti di lereng gunung, semak belukar, lapangan yang tidak terlalu gersang
(Suparjo, 2009; Susan, 2006; Cushnie, 2005)
Mempunyai khasiat obat:-Menghentikan pendarahan-mengobati wasir-disentri, diare-Jerawat
-sakit perut-infeksi kuman-Antivirus-Antimikroba
Kingdom: PlantaeDivisi : SpermatophytaKelas : DicotyledoneaeOrdo : MyrtalesFamili : Melastomataceae Genus : MelastomaSpesies : Melastoma candidum D. Don
Shigella flexneri
- Gram negatif- Bentuk batang ramping- Susunan antigen kompleks- Mengeluarkan lipopolisakarida yang
toksik
Penyebab Shigellosis : disentri basiller
Hasil survei pada balita di rumah sakit di Indonesia menunjukkan proporsi spesies Shigella sebagai etiologi diare; S.dysentriae 5,9%; S.flexneri 70,6%; S.boydii 5,9%; S.sonnei 17,6% (Santoso, 2004)
Micrococcus luteus- Gram positif- Bentuk bulat / coccus- Dinding sel tersusun atas 2 polimer
seperti peptidoglikan dan asam teikuronat (TUA), yang tersusun atas N-asetil-D-manosaminuronat dan residu D-glukosa yang berikatan secara kovalen
Menyebabkan abses intracranial, meningitis, pneumonia, dan septik artritis
Spesies Micrococcus sp dapat menyebabkan abses intracranial, meningitis, pneumonia, dan septik artritis
KERANGKA PEMIKIRAN
Perlunya pencarian senyawa baru dari alam
Pemisahan senyawa (ekstraksi, partisi, fraksinasi)
Hasil pemisahan tiap proses dimonitor dengan uji aktivitas
antimikroba (metode difusi agar) dan KLT
Fraksi teraktif
Penentuan nilai MIC-MBC golongan senyawa kimia
Daun
Senggani
Uji pendahuluan : Memiliki aktivitas antimikroba
(Retnaningtyas dan Mulyani, 2008)
Perlu adanya penelitian lanjutan untuk mengetahui adanya
senyawa bioaktif daun senggani sebagai antimikroba
Dimonitor kandungan senyawa aktifnya dengan uji KLT
Penyakit infeksi & peningkatan
resistensi terhadap antibiotik meningkat
preparasi sampel
HIPOTESIS
METODE
ALAT
BAHAN
• Bahan utama: daun senggani• Maserasi : metanol absolut• Partisi : eter
• Fraksinasi : Silika gel 60 GF254 , kloroform-etil asetat-metanol
• KLT & penentuan gol.senyawa :
plat silika gel 60 GF254, serium (IV) sulfat, AlCl3, FeCl3, LB, SbCl3, dan Vanillin-H2SO4
• Uji antimikroba : S. flexneri ATCC 12022 dan M. luteus ATCC 40732, Media (NA, MHA,MHB), CMC
CARA KERJA
Daun Senggani
Serbuk daun senggani
Maserasi dgn metanol absolut(3x ulangan, @24 jam), filtrasi
Maserat
Evaporasi dengan rotavapor
Ekstrak Metanol
CARA KERJAEkstrak Metanol
Uji antimikroba dengan difusi agar
Partisi dengan eter
- Analisis profil KLT- Uji Antimikroba dengan difusi agar
Bagian larut Bagian tidak larut
Bagian tidak larut merupakan bagian teraktif
CARA KERJABagian teraktif hasil partisi
Fraksinasi dg VLC
F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11
FI FII FIII FIV FV FVI
Uji antimikroba dg difusi agar
FV dan VI (fraksi V dan VI) sebagai fraksi teraktif
Uji MIC dan MBC Deteksi senyawa dengan KLT
Polifenol, Rf 0,21; 0,79; 0,94Polifenol, Rf 0,21; 0,79; 0,94
ANALISIS DATA
• Deskriptif : profil KLT komponen kimia hasil tiap pemisahan
• Perbandingan hasil uji antimkroba : diameter zona hambat, MIC dan MBC
HASIL DAN PEMBAHASAN
Konsentrasi ekstrak(mg/mL)
Diameter zona hambat (mm)S. flexneri M.luteus
100 7,99 7,37200 11,12 9,77300 11,65 10,37400 11,44 12,74500 13,79 13,04600 13,60 12,92700 12,29 12,32800 13,24 13,84900 12,85 13,75
1000 13,45 14,32Kontrol Amoxicilin (2,5) 11,97 12,03
Kontrol CMC (1) 0 0Kontrol Metanol (960) 0 0
Hasil uji difusi agar ekstrak metanol daun senggani terhadap bakteri
211 1
2
(A) S. flexneri ; (B) M. luteus(1) 900 mg/mL ; (2) 800 mg/mL
A B
0
2
4
6
8
10
12
14
16
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000D
iam
eter
zo
na
ham
bat
(mm
)
Konsentrasi ekstrak (mg/mL)
S.flexneri
M.luteus
Hasil partisi(1) UV366. (2) UV254 , (3) serium (IV) sulfat
a. Bagian tidak larut eter; b. bagian larut eter
Fase diam = silika gel GF254
Fase gerak = CHCl3 : EtOAc (1:9)(v/v)
Jarak pengembangan = 6 cm
Kromatogram hasil partisi ekstrak daun senggani pada pelarut eter absolut
A. S. flexneri : konsentrasi ekstrak 500 mg/mL
B. S.flexneri : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg/mL
C. M. luteus : konsentrasi ekstrak 500 mg/mL
D. M.luteus : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg mL
Hasil uji difusi agar bagian tidak larut eter senyawa hasil partisi
Konsentrasi ekstrak (mg/mL) Diameter zona hambat (mm)Shigella flexneri Micrococcus luteus
100 12,10 9,85 200 14,10 11,19 300 16,20 14,25400 15,83 14,24500 18,35 14,48600 18,72 15,07700 19,07 16,67800 18,67 15,84900 18,88 16,44
1000 18,10 17,27Kontrol Amoxicillin (2,5) 15,50 16,60
Kontrol CMC (1) 0 0Kontrol Metanol (960) 0 0
Kontrol Eter (1000) 0 0
Hasil uji difusi agar bagian tidak larut eter senyawa hasil partisi
Hasil uji difusi agar bagian tidak larut eter senyawa hasil partisi
0
5
10
15
20
25
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Dia
met
er z
on
a h
amb
at (
mm
)
Konsentrasi ekstrak (mg/mL)
S.flexneri
M.luteus
Hasil uji difusi agar bagian larut eter senyawa hasil partisi
A.S. flexneri : konsentrasi ekstrak 500 mg/mLB.S.flexneri : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg/mLC.M. luteus : konsentrasi ekstrak 500 mg/mLD.M.luteus : konsentrasi ekstrak 1000 mg/mL dan kontrol amoxicillin 2,5 mg/mL
Konsentrasi ekstrak (mg/mL) Diameter zona hambat (mm)
Shigella flexneri Micrococcus luteus
100 9,67 4,78
200 11,93 8,07
300 11,25 8,93
400 13,85 10,23
500 16,24 9,24
600 15,40 12,50
700 15,22 12,10
800 15,75 12,89
900 16,09 13,60
1000 10,77 9,30
Kontrol Amoxicillin (2,5) 14,50 12,20
Kontrol CMC (1) 0 0
Kontrol Metanol (960) 0 0
Kontrol Eter (1000) 0 0
Hasil uji difusi agar bagian larut eter senyawa hasil partisi
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Dia
met
er z
on
a h
amb
at (
mm
)
Konsentrasi ekstrak (mg/mL)
S.flexneri
M.luteus
Hasil uji difusi agar bagian larut eter senyawa hasil partisi
Hasil Fraksinasi
Fraksi I : Kloroform 100%Fraksi II : Kloroform-Etil Asetat (2:1) (v/v)Fraksi III : Kloroform-Etil Asetat (1:1) (v/v)Fraksi IV : Kloroform-Etil Asetat (1:3) (v/v)Fraksi V : Kloroform-Etil Asetat (1:5) (v/v)Fraksi VI : Kloroform-Etil Asetat (1:9) (v/v)Fraksi VII : Kloroform-Etil Asetat (1:15) (v/v)Fraksi VIII : Kloroform-Metanol (1:1) (v/v)Fraksi IX : Kloroform-Metanol (2:1) (v/v)Fraksi X : Kloroform-Metanol (3:1) (v/v)Fraksi XI : Metanol absolut
P 1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 9
P 1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 9
Kromatogram fraksi ekstrak daun senggani dengan deteksi (1) UV366; (2) UV254; dan (3) serium (IV)
sulfatFase diam: silika gel GF254
Fase gerak : MeOH : EtOAc (1 : 7) (v/v)Jarak pengembangan : 6 cm
Kromatogram fraksi akhir ekstrak daun senggani
FI FII FIII FIV FV FVI
UV366; (2) UV254; dan (3) serium (IV) sulfat Fase diam : silika gel 60 GF254
Fase gerak : MeOH : EtOAc (1:7) (v/v)Jarak pengembangan : 6 cm
• S.flexneri • M.luteusA = Fraksi VB = Fraksi VI
Sampel Uji Diameter zona hambat (mm)
S. flexneri M. luteusFraksi I 0 0Fraksi II 4,07 6,27Fraksi III 6,15 13,14Fraksi IV 9,09 11,55Fraksi V 10,22 12,78Fraksi VI 9,75 14,04Kontrol Amoxicillin 2,5 mg/mL 6,30 16,50
Kontrol CMC 1 mg/mL 0 0Kontrol Metanol 960 mg/mL 0 0Kontrol Eter 1000 mg/mL 0 0
0
2
4
6
8
10
12
14
16
F1 F2 F3 F4 F5 F6
Fraksi
Dia
met
er z
on
a h
amb
at (
mm
)
S.flexneri
M.luteus
MIC - MBCBakteri K
(mg/mL)OD1
(nm)OD2
(nm)∆OD(nm)
Pertumbuhan Bakteri AktivitasPasca
Inkubasi Uji Lanjut
S. flexneri(Fraksi V)
100 0,2932 1,7963 1,5031 Tumbuh - -
200 0,9045 1,4127 0,5082 Tumbuh - -
300 1,0585 2,0275 0,969 Tumbuh - -
400 2,1279 2,8341 0,7062 Tumbuh - -
500 2,7668 3,6123 0,8455 Tumbuh - -
M. luteus(Fraksi VI)
100 0,2932 1,3694 1,0762 Tumbuh - -
200 0,9045 1,7407 0,8362 Tumbuh - -
300 1,0585 2,5151 1,4566 Tumbuh - -
400 2,1279 2,9597 0,8318 Tumbuh - -
500 2,7668 2,6833 0,0835 Tidak tumbuh
Tumbuh Bakteriostatis
PENENTUAN GOL.SENYAWA KIMIA
• (1)UV366
• (2) UV254
• (3) AlCl3• (4) FeCl3• (5) LB
• (6) SbCl3• (7) serium (IV) sulfat
• (8) Vanillin-H2SO4
Fase diam = silika gel GF254
Fase gerak = metanol : kloroform : wash benzen (2:1:1) (v/v)Jarak pengembangan 7 cm
No Deteksi HasilWarna Rf
1 UV366 - -2 UV254 -3 AlCl3 - -4 FeCl3 Kehitaman 0,21; 0,79; 0,945 Lieberman burchard - -6 SbCl3 - -7 Serium (IV) sulfat - -8 Vanillin- H2SO4 - -
Perkiraan senyawa Fenolik
• (1)UV366
• (2) UV254
• (3) AlCl3• (4) FeCl3• (5) LB
• (6) SbCl3• (7) serium (IV) sulfat
• (8) Vanillin-H2SO4
Fase diam = silika gel GF254
Fase gerak = metanol : kloroform : wash benzen (2:1:1) (v/v)Jarak pengembangan 7 cm
No Deteksi Hasil
Warna Rf
1 UV366 - -
2 UV254 - -
3 AlCl3 - -
4 FeCl3 Kehitaman 0,21; 0,79; 0,94
5 Liberman Burchard - -
6 SbCl3 - -
7 Serium (IV) sulfat - -
8 Vanillin- H2SO4 - -
Perkiraan senyawa Fenolik
KESIMPULAN
– Hasil partisi ekstrak metanol daun senggani (Melastoma candidum D.Don) menunjukkan aktivitas antimikroba paling kuat terhadap :
S. flexneri 700 mg/mL (diameter penghambatan 19,07 mm).
M.luteus 1000 mg/mL (diameter penghambatan 17,27 mm).
Hasil fraksinasi :
fraksi V mampu menghambat S.flexneri (diameter penghambatan terbesar 10,22 mm)
fraksi VI mampu menghambat M.luteus (diameter penghambatan terbesar 14,04 mm).
– Profil kandungan kimia dari fraksi V dan fraksi VI menunjukkan adanya bercak pada Rf 0,21; 0,79; 0,94.
– Fraksi V dan fraksi VI dapat diperkirakan sebagai senyawa fenolik.
TERIMA KASIH