CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO

INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 224

PRÁCTICAS DE LABORATORIO

BIOQUÍMICA

ING. MARÍA XOCHITL MORALES GONZÁLEZDOCENTE

ÍNDICE

PP

AGUA------------------------------------------------------------------------------------ 1

CARBOHIDRATOS------------------------------------------------------------------- 4

PROTEÍNAS---------------------------------------------------------------------------- 8

ENZIMAS------------------------------------------------------------------------------- 12

LÍPIDOS--------------------------------------------------------------------------------- 16

BIBLIOGRAFÍA------------------------------------------------------------------------ 18

REGLAMENTO------------------------------------------------------------------------ 19

EL AGUA Y SU RELACIÓN CON LOS SERES VIVOS

INTRODUCCIÓN.La inmensa mayoría de las células son soluciones acuosas al 20%, esto es, están compuestas por 80% de agua y 20% de todas las demás moléculas. Así, la vida en la Tierra se presenta como una solución acuosa, por lo que la molécula de agua es la más abundante de todas las que integran a los seres vivos. En consecuencia con lo anterior, el organismo humano intercambia con su medio externo, mayor número de moléculas de agua que de todas las demás moléculas juntas.Además de su abundancia, las características de la molécula de agua ejercen una profunda influencia en la estructura, organización y funcionamiento de los seres vivos. Las propiedades fisicoquímicas del agua y el hecho de ser el solvente del resto de los componentes celulares, influyen decisivamente en la organización y disposición espacial de todas las demás moléculas depositarias de la vida: los lípidos, las proteínas, los ácidos nucleicos y los polisacáridos. De lo que se desprende la importancia de conocer las propiedades de la molécula de agua, su participación como solvente y las repercusiones que las propiedades de ésta tienen en los sistemas biológicos.

Además, el conocimiento adecuado del metabolismo del agua y los electrolitos es de gran interés médico, como los casos de pérdida de líquidos y sales por vómitos y diarreas, traumatismos y quemaduras, o los de retención de agua y sales en la insuficiencia cardiaca congestiva, la insuficiencia renal del síndrome nefrótico, etcétera.

Los líquidos corporales muestran una gran constancia en la concentración de sus componentes iónicos, pH, temperatura; además tienen mecanismos muy efectivos para su regulación y sistemas protectores contra la pérdida de agua, como la piel y el riñón, cuyo fin es el conservar constante, al grado máximo posible, la concentración de los distintos componentes del medio interno; esto es, en rigor, la expresión del clásico aforismo de Bernard: “La constancia del medio interno es la condición de la vida libre”

De igual manera, en organismos vegetales, el conocimiento del papel del agua en fenómenos de gran trascendencia como la germinación, imbibición, la deshidratación, el estrés por sales, la adaptación al medio, así como en todos los procesos metabólicos de éstas, reviste gran importancia, en áreas como la agricultura, disciplinas afines, o bien en el área de alimentos.

La distribución del agua y los solutos en las células está regida por las leyes de la presión osmótica, las cuales se ven influidas por dos fenómenos: a) las macromoléculas normalmente no atraviesan las membranas celulares, por lo tanto influyen poderosamente en la presión osmótica, b) las membranas celulares requieren energía para distribuir selectivamente un gran número de solutos a ambos lados de la membrana.

Las presiones osmóticas del plasma sanguíneo, las secreciones digestivas como el jugo gástrico, el pancreático, el intestinal y la bilis, otros líquidos como el cefalorraquídeo, el sinovial, etc., son prácticamente idénticas; en general, estos líquidos tienen una concentración de partículas disueltas equivalente a 0.3 molal, comprendiendo tanto sustancias ionizadas como sus electrolitos.

La distribución del agua y de los solutos a ambos lados de una membrana depende de diversos factores, entre los cuales destaca la difusibilidad de los diversos componentes, muy elevada para determinadas sustancias, compuestos orgánicos no electrolitos como la urea, etc. en este caso, estas sustancias están igualmente distribuidas y no ejercen efectos osmóticos netos en ningún lado. En el caso de otras moléculas, por ejemplo, la glucosa, podría aumentar la presión osmótica efectiva entre el líquido intersticial y las células, pues su distribución en células como las musculares y los adipositos depende de la actividad de la célula para captarla y no de un proceso de simple difusión.

PROCEDIMIENTO.

PARTE I. ÓSMOSIS

Poner 15 ml de cada una de las soluciones de sacarosa que se te proporcione en bolsas de diálisis y ciérralas perfectamente como se te indique.

En otra bolsita de diálisis coloca 15 ml de agua destilada Coloca cada bolsita sobre una toallita para retirar el exceso de humedad Pesa cada una de las bolsas en una balanza granataria y registra los datos. En 3 vasos desechables coloca aproximadamente ¾ partes de agua y coloca en el interior de cada uno,

una bolsa de diálisis (de las que acabas de preparar). Deja transcurrir 15 minutos y pesa una a una, todas las bolsas, quitando el exceso de agua con un

papel absorbente. Registra este nuevo peso. Compara los pesos de todas las bolsas ¿qué ocurrió? Registra y analiza los resultados en equipo y explícalos en tus notas.

BOLSA CONCENTRACIÓN DE SACAROSA

PESO DE LAS BOLSASINTERPRETACIÓN

ANTES DESPUÉS(A los 15 min)

1 0.25

2 0.5

3 1.0

4 H2 O

PARTE II. POTENCIAL HÍDRICO

A) A NIVEL TEJIDO Corta 9 cilindros de papa del tamaño indicado por el maestro, pésalos y mídelos en grupos de 3.

Registra tus datos. Coloca cada grupo de 3 cilindros en los vasos que contienen las distintas concentraciones de sacarosa

que te proporciona el maestro. Recuerda: 3 cilindros por cada concentración. Deja transcurrir 15 minutos y vuelve a pesar y a medir cada grupo de 3 cilindros. Antes de pesar o

medir sécalos con papel absorbente. No exprimas. Registra y analiza los resultados en equipo y explícalos en tus notas.

GRUPOTejidos

CONC.SACAR.

LONGITUDINTERPRETAC.

PESO INTERPRETACIÓNINICIAL FINAL INICIAL FINAL

1 0.25

2 0.5

3 1.0

4 H2 O

B) A NIVEL CELULAR Prepara una serie de soluciones de sacarosa como te indique el maestro y ponlas en vasos de

precipitado pequeños. Cada concentración se hará tantas veces como tejidos diferentes se deseen valorar.

Sumerge los tejidos por 5 minutos en cada una de las soluciones a prueba. Transcurrido este tiempo saca las muestras de tejido y colócalas en un portaobjetos Coloca una gota de la solución de la muestra sobre ésta y ponle un cubreobjetos, presionando

suavemente sobre él Coloca tu preparación en el microscopio y observa detalladamente las células Verifica la presencia de células plasmolizadas y turgentes. Compara tus muestras y determina en cuál de éstas (concentración) aparecen mayor número

de células turgentes y en cuál mayor número de células plasmolizadas. Registra tus resultados Esquematiza en los recuadros de abajo, una célula plasmolizada y una célula turgente.

CÉLULA TURGENTE CÉLULA PLASMOLIZADA

CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos son fisiológicamente importantes ya que realizan en nuestro organismo diversas funciones: sirven como fuente de energía, forman parte de los componentes estructurales de las células, por ejemplo: glucolípidos y glucoproteínas. Además pueden formar carbohidratos de almacenamiento como el glucógeno y participan en la estructura de los ácidos nucleicos.

Los carbohidratos se clasifican en tres clases:

1. Los monosacáridos (unidades monoméricas), a veces mencionados como azúcares simples,2. Los oligosacáridos (de dos a ocho monómeros en enlace glucosídico)3. Polisacáridos (son sustancias con altísimo peso molecular, con 100 a unos pocos miles de unidades

monoméricas)

El término sacárido (derivado del griego sakchar, que significa azúcar o dulzura) está relacionado con el sabor característico de muchos de los carbohidratos simples.

Dada la importancia de estas moléculas, existen pruebas para su identificación y caracterización, en la que los resultados positivos se manifiestan por la aparición de un producto coloreado o la formación de un precipitado, esto ocurre mediante reacciones especiales en las que juega un papel importante la estructura y propiedades químicas de los carbohidratos. Algunos de los carbohidratos estudiados serán: glucosa (dextrosa), fructosa, maltosa, lactosa, sacarosa, ribosa, desoxirribosa y almidón.

Entre las pruebas más comunes se encuentran las siguientes:

LA PRUEBA DE BENEDICT. Empleada para identificar azúcares reductores o algunas otras sustancias con poder reductos. Esta prueba puede ser utilizada para la detección de este tipo de compuestos en orina, como por ejemplo: ácido ascórbico presente en ésta según su ingestión y monosacáridos como glucosa, fructosa, galactosa, etc., que se encuentran presentes en la orina en cantidades detectables bajo circunstancias patológicas.

PRUEBA DE SELIWANOFF. Se utiliza para la identificación de cetoazúcares. La fructosa por ser cetoazúcar, puede ser detectada en orina en la fructosuria esencial, padecimiento hereditario causado por la deficiencia de la fructocinasa hepática, lo que ocasiona un aumento en la concentración de fructosa en sangre excretándose en cantidades elevadas en orina.

LA PRUEBA DE BIAL. Se utiliza para la identificación de pentosas.

LA PRUEBA DE LUGOL. También conocida como la prueba del yodo, es utilizada para la identificación de algunos polisacáridos incluyendo el almidón y el glucógeno, formando complejos coloreados.

PROCEDIMIENTO.

PARTE UNO: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS EN ALIMENTOS

A) DETECCIÓN DE POLISACÁRIDOS:1. En la serie de tubos etiquetados como a del 1 al 6 coloca 0.5 gr de:

TUBO A1: almidón TUBO A4: harina de trigoTUBO A2: harina de arroz TUBO A5: papa ralladaTUBO A3: harina de maíz TUBO A6: jugo de naranja

2. A cada tubo agrega 1 ml de agua y 1 gota de lugol.3. Agita, observa y registra el resultado en el cuadro anexo

B) DETECCIÓN DE MONOSACÁRIDOS Y DISCÁRIDOS REDUCTORES1. En la serie de tubos etiquetados como B del 1 al 8 coloca de 5 a 10 gotas de:

TUBO 1B: glucosaTUBO 2B: jugo procesadoTUBO 3B: manzana ralladaTUBO 4B: zanahoriaTUBO 5B: papa ralladaTUBO 6B: granadinaTUBO 7B: vinoTUBO 8B: ginseng

2. A cada uno de los tubos agrega 1 ml de agua y agita3. Añade 1 ml de Benedict en cada tubo, agita y somete a baño María a ebullición. Observa y registra.

HOJA DE REGISTRODETECCIÓN DE CARBOHIDRATOS EN ALIMENTOS

SERIE A(TUBOS) MUESTRA

RESULTADO E INTERPRETACIÓ

N

SERIE B(TUBOS) MUESTRA

RESULTADO E INTERPRETACIÓ

N

A1 B1

A2 B2

A3 B3

A4 B4

A5 B5

A6 B6

B7

B8

PARTE DOS: IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CARBOHIDRATOS

NOTA: Con la finalidad de que las pruebas sean lo más precisas posibles, se trabajará a razón de una prueba por equipo, pero los resultados deberán ser socializados por todos los equipos, de tal forma que todos puedan llenar su tabla registro completamente, cuidando incluso de anotar con mayor énfasis los resultados positivos de cada prueba.

PRUEBA SELIWANOFF:

1. Coloca el frasco gotero con el reactivo de Seliwanoff en un baño María hirviente, durante dos minutos.

2. Enumera 9 tubos de ensayo.3. En cada tubo, coloca 3 gotas de uno de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidón,

fructosa, lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc.4. En el tubo 9 coloca 3 gotas de agua destilada (blanco)5. Agrega a cada uno 2.5 ml del reactivo de Seliwanoff (al que previamente hayas sometido a baño

María hirviente por al menos 2 minutos). Mezcla perfectamente.6. Somete todos los tubos a baño María hirviente durante 1 minuto7. Extrae los tubos, deja enfriar y observa. Registra tus resultados.

PRUEBA DE BIAL:

1. Enumera 9 tubos de ensayo2. Agrega a los 8 primeros tubos 1 ml de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidón, fructosa,

lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc.3. En el tubo 9 coloca 20 gotas de agua destilada (blanco)4. Añade 2 ml de Reactivo de Bial.5. Mezcla y somete a baño María a ebullición durante 1 min.6. Extrae los tubos, deja enfriar y observa. Registra los resultados.

PRUEBA DE BENEDICT:

1. Enumera 9 tubos de ensayo2. Agrega a los 8 primeros tubos 1 ml de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidón, fructosa,

lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc.3. En el tubo 9 coloca 20 gotas de agua destilada (blanco)4. Añade 1 ml de Reactivo de Benedict.5. Mezcla y somete a baño María a ebullición durante 3 min.6. Extrae los tubos, deja enfriar y observa. Registra los resultados.

PRUEBA DE YODO:

1. Enumera 9 tubos de ensayo2. Agrega a los 8 primeros tubos 1 ml de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidón, fructosa,

lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc.3. En el tubo 9 coloca 10 gotas de agua destilada (blanco)4. Agrega a cada tubo una gota de lugol5. Mezcla y observa. Registra los resultados.

HOJA DE REGISTROIDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CARBOHIDRATOS

EQUIPO:REACCIÓNMUESTRA

I II III IV

TUBO SELIWANOFF BIAL BENEDICT YODO

1 GLUCOSA

2 SACAROSA

3 FRUCTOSA

4 ALMIDÓN

5 LACTOSA

6 MALTOSA

7 RIBOSA

8 DESOXIRRIBOSA

9 AGUA DESTILADA

INTERPRETACIÓN

NOTA: Recuerda resaltar con algún color los resultados positivos en cada una de las pruebas. En la línea de interpretación anota el tipo de carbohidrato que te reconoce cada prueba o bien una nota general sobre el sabor, caramelización y solubilidad de los carbohidratos probados.

PROTEÍNAS

Las proteínas son polímeros de alto peso molecular, compuestos por aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos, que cuando se solubilizan son de dimensiones coloidales. Presentan propiedades físicas y químicas que dependen directamente de factores intrínsecos del propio polímero, como son su estructura y composición de aminoácidos, o bien de factores extrínsecos, como pueden ser el pH, la temperatura, las sales, etc.

Existen varios métodos para la identificación y cuantificación de las proteínas, pero la mayoría tiene como principio alguna reacción química característica de los grupos R de los diferentes aminoácidos.Puede decirse que las proteínas reflejan las propiedades químicas de los residuos de aminoácidos que contienen, por lo que la mayoría de las reacciones coloridas de identificación dependen de la existencia de un aminoácido específico en ellas.

Así, la reacción de plomo es característica para grupos sulfihidrilos. La reacción de la ninhidrina es característica para grupos amino libres. El reactivo de millón contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos en ácido concentrado. Debido a la presencia del grupo fenólico, se produce un compuesto de color rojo. La reacción xantoproteica es positiva para aminoácidos aromáticos activados como proteínas en solución, aunque es mucho más sensible cuando éstas se encuentran probablemente secas. Esta reacción depende de la nitración de los anillos bencénicos activados produciendo un color amarillo (incluso anaranjado). La prueba resulta negativa para proteínas que no contengan aminoácidos aromáticos activados. Aunque ciertos derivados del benceno, como el ácido pícrico, reaccionan formando los nitro derivados amarillos. La reacción de biuret, es una prueba general para proteínas y péptidos de cadena no menor de 3 unidades de aminoácidos. Una utilidad de esta reacción es seguir el proceso de una hidrólisis proteica, ya que la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea completa.

Bajo determinadas condiciones, las proteínas pueden experimentar cambios irreversibles en su conformación. Cuando esto ocurre, las propiedades catalíticas se pierden hay un descenso brusco en la solubilidad y cambios en las propiedades físicas y químicas que pueden ser observados. Por medio de la desnaturalización, la estructura completa de la proteína, que previamente mantenía un estado de riguroso orden, cambia a un estado de desorden drástico, llamado "enrollamiento azaroso".

PROCEDIMIENTOPARTE UNO: IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS

NOTA. Con la finalidad de que las pruebas sean lo más precisas posibles, se trabajará a razón de una prueba por equipo, pero los resultados deberán ser socializados por todos los equipos, de tal forma que todos puedan llenar su tabla registro completamente, cuidando incluso de anotar con mayor énfasis los resultados positivos de cada prueba.

REACCIÓN DEL PLOMO:1. Adiciona a 1 ml de las soluciones problema (*), 2 ml de NaOH al 10% y calienta ligeramente a baño

María.2. Añade de 3 a 5 gotas de acetato de plomo al 5% y calienta nuevamente hasta ver la aparición de un

precipitado negro.3. Anota tus resultados en la tabla correspondiente.

REACCIÓN DE LA NINHIDRINA:1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 5 gotas de solución de ninhidrina. Observa a

temperatura ambiente la aparición de color azul o violeta que se debe a la presencia de grupos amino libres.

2. Si es necesario, calienta a baño María 1 o 2 minutos los tubos en los que no aparece el color.3. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

REACCIÓN DE MILLÓN:1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 5 gotas de solución de 2 a 5 gotas del reactivo de Millón2. Calienta a baño María a ebullición. La aparición de un color rojo será una prueba positiva.3. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

REACCIÓN XANTOPROTEICA:1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 1 ml de ácido nítrico concentrado.2. Calienta la mezcla y enfría3. Agrega cuidadosamente 1 ml de hidróxido de amonio concentrado. La aparición de un color amarillo o

naranja en la interfase será una prueba positiva.4. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

REACCIÓN DE BIURET:1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 2 ml de NaOH y de 3 a 5 gotas de solución de reactivo de

biuret, mezcla bien. La formación de un color violáceo o la precipitación de hidróxido cúprico será una prueba positiva.

2. Si la reacción de biuret no se presenta inmediatamente, deja reposar de 10 a 15 minutos.3. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente

(*) Las soluciones de prueba son las siguientes:

1. Leche 5. Peptona2. Gelatina sin sabor (grenetina) 6. Caseína3. Caldo de pollo (u otra carne) 7. Aspartame (canderel)4. Albúmina de huevo 8. Aminoácido (el profesor lo proporciona)

HOJA DE REGISTROIDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS

EQUIPO: REACCIÓNMUESTRA

I II III IV VTUBO PLOMO NINHIDRINA MILLÓN XANTOPROTEICA BIURET

1 GELATINA

2 LECHE

3 CALDO

4 ALBÚMINA

5 PEPTONA

6 CASEÍNA

7 ASPARTAME

8 TIROSINA

9 CISTEÍNA

10 ARGININA

11 ALANINA

12 AGUA

INTERPRETACIÓN

NOTA: Recuerda resaltar con algún color los resultados positivos en cada una de las pruebas. En la línea de interpretación anota el tipo de aminoácido que te reconoce cada prueba.

PARTE DOS: DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS

1. Etiqueta 8 tubos de ensaye2. Agrega a cada uno 1 ml de albúmina de huevo3. En el tubo 1 agrega 1ml de base débil4. En el tubo 2 agrega 1 ml de base fuerte5. En el tubo 3 agrega 1 ml de ácido acético6. En el tubo 4 agrega 1 ml de ácido acético y unos granitos de sal que te proporcione el instructor7. Calienta suavemente los tubos 3 y 4. Observa y anota (¿qué ocurrió?)8. El tubo 5 se somete a ebullición (con precaución)9. En el tubo 6 agrega 2 ml de alcohol etílico. Mezcla10. En el tubo 7 añade 10 gotas de acetato de plomo11. Al tubo 8 añade 2 ml de detergente biológico12. En el vaso de precipitado coloca una pequeña porción de albúmina y agita vigorosamente13. En el vidrio de reloj, coloca un poco de albúmina y sométela a radiación ultravioleta siguiendo las

indicaciones del instructor (este paso es opcional, sobre la marcha se te indicará)14. Observa, interpreta y registra en el cuadro anexo, lo ocurrido en cada caso. Preferentemente saca el

coágulo formado y siente su textura entre tus dedos, para que se te facilite la interpretación.HOJA DE REGISTRO

DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNASEQUIPO:

REACCIÓNMUESTRA

RESULTADOS INTERPRETACIÓN DE RESULTADOSTUBO

1 BASE DÉBIL

2 BASE FUERTE

3 ÁCIDO DÉBIL

4 ÁCIDO+SAL

5 EBULLICIÓN

6 ALCOHOL

7VENENO

METABÓLICO

8DETERGENTEBIOLÓGICO

9AGITACIÓN

FUERTE

10RADIACIÓN

UV

11 UREA

ENZIMAS

Las enzimas son sustancias de naturaleza proteica que actúan como catalizadores de las reacciones químicas que se lleven a cabo en el citoplasma celular.Cada célula produce las enzimas necesarias para el funcionamiento del organismo en el cual se encuentran de acuerdo con las "instrucciones" contenidas en el ADN. El número de enzimas en un organismo puede ser muy grande, dependiendo de su complejidad.Las enzimas se caracterizan por sus propiedades catalíticas, contienen uno o más centros de acción capaces de transmitir la información de su entorno.Estos centros son:

De adhesión al sustrato o co-sustrato Activos (donde se cataliza la reacción) De regulación

Asimismo, contienen componentes proteicos, aunque la gran mayoría de las enzimas contienen componentes de otras familias. Las enzimas pueden contener iones metálicos sólidos o coenzimas tales como el NAD+ ó FAD formando parte del centro activo. NH2

O=C + H2O

NH2

La reacción de la ureasa produce una hidrólisis y causa que el pH de la solución de reacción se eleve. La elección de un indicador adecuado, en este caso la fenolftaleína, permite que la ruptura de urea sea visible.Existen varios métodos de hidrólisis de urea, de entre los cuales, los más empleados son los básicos y aquellos que utilizan a la enzima ureasa.Las proteínas contienen grupos -SH libres en sus cadenas laterales, los cuales pueden ser directa o indirectamente responsables de la acción catalítica de la enzima.Bajo determinadas condiciones las enzimas pueden experimentar cambios irreversibles en su conformación. Cuando esto ocurre, las propiedades catalíticas se pierden, hay un descenso brusco en la solubilidad y cambios en las propiedades físicas y químicas que pueden ser observados. Por medio de la desnaturalización, la estructura completa de la enzima que previamente mantenía un estado de riguroso orden, cambia a un estado de desorden drástico, llamado "enrollamiento azaroso". Hay numerosas vías de desnaturalización de las enzimas, siendo éstas utilizadas de acuerdo a los fines que se tengan, en Biotecnología generalmente se utiliza el calor, la acetona y el peróxido de hidrógeno.Las enzimas son extremadamente específicas, es decir, únicamente reaccionan con una sustancia en particular, y no con otras sustancias a pesar de que la estructura de ésta sea muy similar.Algunas enzimas reaccionan lentamente a concentraciones elevadas de sustrato que a concentraciones bajas del mismo. En este caso se asume que más de una sola molécula de sustrato se adhiere al centro activo de la enzima, inhibiendo la reacción.La inhibición competitiva de una reacción enzimática ocurre cuando una molécula con estructura similar a la del sustrato empleado, compite por adherirse al mismo centro activo, obteniendo como resultado que la reacción enzimática disminuya.

PROCEDIMIENTO

UREASA2NH2 + CO2

UREA

PARTE A EFECTO DEL CALOR SOBRE EL SUSTRATO (Testigo negativo)1. Calienta en un tubo de ensayo 2 ml de la solución de sustrato, exponiéndola a la flama de un mechero

durante 2 minutos.2. Añade dos gotas del indicador y mezcla por medio de ligeros golpecitos3. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

PARTE B. HIDRÓLISISBÁSICA

1. Pesa aproximadamente un gramo de urea en un vaso de precipitado de 30 ml2. Agrega una pequeña cantidad de NaOH sólido3. Adhiere una tira de papel indicador de pH a un vidrio de reloj por medio de agua4. Tapa el vaso de precipitado con un vidrio de reloj5. Calienta cuidadosamente el vaso de precipitado6. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

CON ENZIMA NATIVA1. Muele unos granos de la semilla (cualquier semilla) en un mortero2. Añade a un tubo de ensayo 2 ml de la solución del sustrato3. Con la punta de una espátula, agrega una pequeña cantidad de la semilla molida4. Agrega una gota de indicador5. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

CON ENZIMA COMERCIAL (testigo positivo)1. Añade a un tubo de ensayo 2 ml de la solución del sustrato2. Con la punta de una espátula, agrega una pequeña cantidad de la enzima comercial3. Agrega una gota de indicador4. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

PARTE C DESNATURALIZACIÓNPOR CALOR

1. Calienta un tubo de ensayo que contenga 2 ml de solución de la enzima2. Agrega 2ml de solución de sustrato3. Agrega una gota de indicador4. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

CON ACETONA1. En un tubo de ensayo coloca 1 ml de suspensión de enzima2. Añade 2 ml de acetona3. Anota tus observaciones4. Agrega 2 ml de solución de sustrato y un gota de indicador5. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

CON PERHIDROL1. En un tubo de ensayo coloca 1 ml de suspensión de enzima2. Añade 2 ml de perhidrol3. Anota tus observaciones4. Agrega 2 ml de solución de sustrato y un gota de indicador5. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

PARTE D ESPECIFICIDAD POR SUSTRATO1. Realiza una reacción de tiourea con ureasa2. En otro tubo de ensayo agrega 2 ml de solución de tiourea3. Añádele 1 ml de solución de ureasa y 1 gota del indicador4. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

PARTE D INHIBICIÓN

POR SUSTRATO Efectúa una hidrólisis de urea al 30% con ureasa:

1. En un tubo de ensayo coloca 2 ml de solución de urea al 30%2. Añádele 1 ml de solución de ureasa y 1 gota del indicador3. Compara con el control positivo4. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

COMPETITIVA1. En un tubo de ensayo coloca 2 ml de solución de urea al 2%2. Agrégale 2 ml de solución de tiourea, 1 ml de solución de ureasa y 1 gota de indicador3. Anota tus observaciones y tu interpretación en la tabla de registro

HOJA DE REGISTROENZIMAS

PARTE PRUEBAOBSERVACIÓN

(tipo de reacción: positiva o negativa)

INTERPRETACIÓN

ATestigo

negativoEfecto del calor

sobre el sustrato

BHidrólisis

Básica

Con enzima nativa

Con enzima comercial

(testigo positivo)

CDesnatura

lización

Por calor

Con acetona

Con perhidrol

AHidrólisis

Con enzima comercial (testigo

positivo)

BEspecificidad Con tiourea

Cinhibición

Por concentración de sustrato

competitiva(entre sustratos)