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Universidad nacional de ingeniería
facultad de ingeniería ambiental
Microbiología ii
IDENTIFICACION DE PROTOZOARIOS ,
ROTIFEROS,MICROCRUSTACEOS,HONGOS,ARTROPODOS,LARVAS DE
INSECTOS,HELMINTOS,VIRUS,PECES,PLANTASACUATICAS,PECES Y VIRUS
Alumna:
Jara Huamanñahui Litza
Sección:
“F”
26 DE JUNIO DEL 2013
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INTRODUCCION………………………………………………………………………………………………..1
OBJETIVOS……………………………………………………………………………………………………….1
FUNDAMENTO TEORICO…………………………………………………………………………………..1-2
MATERIALES Y EQUIPOS…………………………………………………………………………………..2-3
PROCEDIMIENTO……………………………………………………………………………………………..3-5
RESULTADOS…………………………………………………………………………………………………….5-8
CONCLUSIONES ,DISCUSIONES Y RECOMENDACIONES………………..…………………..8-9
CUESTIONARIO………………………………………………………………………………………………….9-11
ANEXOS…………………………………………………………………………………………………………….11-12
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1. INTRODUCCIÓN:Las algas son habitantes comunes y normales de aguas poco profundas y se encuentran
en todo suministro de agua expuesto a la luz del sol –aunque algunas algas se encuentranen el suelo y en superficies expuestas al aire .Conocer el numero y clase de algas
presentes en estanques de aguas negras es de gran utilidad para ver el proceso deoxidación.
La metodología empleada es la que utilizan la gran mayoría de los laboratorios ;consiste
en un análisis cualitativo y cuantitativo , en este ultimo se emplea la cámara de Sedwick–Rafter.
2. OBJETIVOS:Determinar la concentración promedio de microorganismos por los métodosde celda Sedgwic - Rafter y la franja, y hallar el número de campos de cada uno de
ellos, con los objetivos 10X y 43X.
Comprender los métodos para determinar la concentración demicroorganismos, observar
y determinar cuál de los dos métodos es el máspreciso.- Hallar la cantidad de campos para ambas celdas por medio del microscopio óptico.- Determinar la concentración de los microorganismos encontrados en la muestra.
3. FUNDAMENTO TEORICO:El recuento de microorganismos , para la avaliacion (valoración) de su concentración en
1ml de agua , se hace por varios procedimientos .Los mas usuales son los que utilizan lacelda contadora de Sedwick – Rafter .Esta celda es un porta objeto que contiene un
recipiente rectangular, con dimensiones de 20x50mm , con una profundidad de 1mm
(volumen total de 1ml).La colocación de la muestra de agua en la celda de Sedwick–
Rafter se hace como se ve en la
figura
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En general , se emplea para la observación, un objetivo 10x .Objetivos más potentes no
pueden ser empleados con la celda de recuento , pues esta tiene un espesor muy grande
.El numero de microorganismos enfocados en un campo visual debe ser multiplicado por
el numero de campos existente en toda la celda (osea en un área de 20x50mm , o mejor
dicho en 1ml de muestra).Los procedimientos principales , para conocer el numero decampos existentes en la superficie de la celda.
a)método de whipple (ver anexo1)
b)método de la celda de S-R (del recuento por hileras):En este método se cuentan todoslos mo que se encuentran en una faja del ancho del campo , en toda la longitud de lacelda de S-R .La concentración de mo po ml se obtiene simplemente multiplicando el
numero obtenido de mo por el numero de campos existentes en el ancho de la celda .Elnumero de campos puede ser contado directamente , al microscopio, sin auxilio de
retículos o de micrómetros.
c)método de la franja : para muestras que contienen una gran concentración de mo (porejemplo lagunas de estabilización) se puede emplear el mismo método anterior , pero
utilizando solamente una gota de la muestra , la cual es colocada sobre un porta objeto y
recubierto por un cubre objetos de 22x22mm .En este caso es necesario conocer elvolumen de la gota .Eso se puede medir contando e numero d egotas necesario para
llenar un aprobeta de 10 0 50ml .
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4. MATERIALES Y EQUIPOS:
5. PROCEDIMIENTO :
Método de la franja:
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Medir las gotas que hay en 5 ml Tomar 1 gota de la muestra
Observar los campos y realizar verter la gota sobre elel conteo de mo. portaobjetos , y colocar
sobre ella el cubreobjetos
Método de la Celda - SEDGEWICK RAFTER
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Tomar 1 ml de muestra Verterlo en la celda
Realizar el conteo de Observar los campos a
mo en cada campo través del microscopio
6.RESULTADOS
Objetivo 10x:
T = 27°C
N° CAMPOS N° DEMICROORGANISMOS
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1 1 2 0 3 0 4 0 5 0
6 0 7 0 8 1 9 010 0 11 0 12 1 Total de N° decampos: 12
Total de N° demicroorganismos: 3
CALCULAR EL PROMEDIO DE MO POR CAMPO:
X = 3/12 = 0.833 mo/campo
DETERMINACIÓN DE NO DE CAMPOS EN TODO EL CUBREOBJETOS.
Numero de campos a lo ancho (lado) del cubre objeto = 12 campos Numero de campos a lo largo (lado) del cubre objeto = 12campos
Total N°campos = 12*12 =144
DETERMINACIÓN DEL VOLUMEN DE UNA GOTA
85 gotas <> 5 mL 1 gota <> X mL
Volumen de una gota: X = 85
X = 0.0588ml
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE MICRORGANISMOS
Concentración de mo: 0.833*144*0.0588 = 7.053 N° de mo /ml
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Método de la celda sedwwick –rafter
Calcular el promedio de mo po campo:
N° DE CAMPOS N° DEMICROORGANISMOS
1 02 03 14 15 06 07 08 09 210 011 0
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12 013 0Total de N° decampos: 13
Total de N° demicroorganismos: 4
X = 4/ 13 = 0.3076 mo/campo
Total de N° campos = 13*33 = 429 campos
Concentración de mo : 0.3076 * 429 /ml = 131.9 N° d emo /ml
5 .DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES
6 .RECOMENDACIONES*Hacer el recuento no en una sola franja , sino en 2 franjas perpendiculares
Ejemplo: si en un recuento se encuentran 20 algas en un sentido y 30 en otro , el promedio es 25
organismos.
*Si se encontró en un sentido 110 campos y el otro 90 campos , el factor de multiplicación será
100(promedio de 100 y 90)
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7 .CUESTIONARIO
8 .ANEXOS
Anexo1:
a)método de whipple:En este metodo se mide el area del campo visual(el cual es variable para
cada objetivo y ocular utilizado)con auxilio del micrómetro ocular de Whipple.Este es un disco de
vidrio , que contiene un retículo quebrado que divide el campo en cien partes o cuadraditos
iguales .El valor , en micras , del área de cada uno de esos cuadraditos varia según el objetivo
utilizado .Por ese motivo , dicho valor debe ser previamente medido , para cada objetivo del
microscopio , con auxilio de un micrómetro de objetivo .Se coloca ese micrómetro en la platina del
microscopio , del mismo modo como se colocaría un portaobjeto.Se focaliza la línea , colocándose
el micrómetro de whipple en el ocular , se hace la superposición de ambos y , de esa manera se
puede se puede medir el lado de uno de los cuadraditos .Una vez conocida el área del cuadradito ,
se obtiene el área del campo , multiplicando ese valor por 100, y por lo tanto el numeor de
campos comprendido en toda la celda de Sedwick-Rafter.
Por ejemplo , si el cuadradito mide 10 divisiones osea 100u de lado , se tiene que su área es de
100x100=10000u2 y el área del campo será: 100x10000 u2 =1000000u2 .La celda de S-R mide
2x5x108 u2 = 1000000000 u2 , osea , que contiene mil campos .Luego se multiplica el numero de
microorganismos promedio .Luego se multiplica el numero de mo promedio , contado digamos en10campos , por el numero de campos que hay en la celda
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9 .BIBLIOGRAFÍA
http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/.pdf
http://www.bvsde.ops-oms.org/ pdf