Regional Distrito CapitalSistema de Gestión de la Calidad
Informe de Laboratorio No 03ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD CON SEMILLAS DE LECHUGA LACTUCA
SATIVA L EMPRESA CUART’S LTDA.
AprendicesGINA LIZZETH MORENO CORDERO
ELIANA MILENA SANCHEZ JUISAMAYRA ALEJANDRA SOTO TABIMBA
InstructorSONIA MARCELA BUITRAGO MORALES
Centro de Gestión Industrial
Marzo 2015
MARCO TEORICO
Introducción.........................................................................................................2Objetivos.............................................................................................................3Objetivo General................................................................................................3Objetivos Específicos.......................................................................................3Procedimiento.....................................................................................................43.1 Preparación de la solución ácido bórico al 2,5% p/v...............................43.2.2 Calculos....................................................................................................7Solucio acido borico al 2.5 % p/v.....................................................................83.3 Lectura de resultados.................................................................................84. Resultados......................................................................................................94.1.2 control negativo.......................................................................................94.1.2 control positivo........................................................................................94.1.3 Dilución 0.3%..........................................................................................104.1. dilución 10 %............................................................................................114.1.3 Dilución 30%...........................................................................................125. Análisis de resultados...................................................................................13Conclusiones.....................................................................................................13Anexos..............................................................................................................14Anexo A “Análisis Fisicoquímico de agua residual industria curtiembres”14Bibliografía........................................................................................................15
Introducción
Se tomó una muestra de agua en el proceso de pelambre de la empresa Cuart’s
Ltda. Para realizar un bioensayo de ecotoxicidad con semillas de lechuga
Lactuca sativa L, a fin de determinar el grado de afectación que puede producir
los vertimientos de la organización sobre una especie vegetal en su entorno
natural.
La lechuga Lactuca sativa L es una es una planta herbácea propia de las
regiones semitempladas que se cultiva con fines alimenticios, tiene unas
condiciones óptimas de crecimiento, a una temperatura entre -6°C y 30°C, pH
entre 6 - 7, humedad del 60 - 80%. Se utilizan semillas de lechuga para el
montaje del ensayo debido a que en el período de germinación y los primeros
días de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos en los
que la presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la
supervivencia y el desarrollo normal de la planta, lo cual facilita medir los efectos
morfológicos sobre el crecimiento e inhibición de la misma. (Feliz Perez Garcia-
Universidad politecnica de madrid)
Los bioensayos de eco toxicidad se realizan con la finalidad de conocer los
efectos tóxicos de sustancias químicas puras o complejas, sobre organismos
vivos, y las concentraciones a las cuales se pueden ver una mortalidad del 50%
de una población. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco, 2008)
Objetivos
Objetivo General
Realizar un bioensayo de ecotoxicidad en la muestra de agua de la empresa
Cuart’s Ltda. con semillas de lechuga Lactuca sativa L, para determinar grado
de toxicidad de los vertimientos de la organización.
Objetivos Específicos
Realizar la metodología y procedimientos para la siembra de las semillas
en las cajas Petri, con las diferentes concentraciones de la muestra.
Realizar el conteo de las semillas germinadas y la caracterización de los
efectos citotóxicos, a fin de determinar el grado de toxicidad de la muestra.
Determinar la concentración efectiva 50 en la muestra.
Procedimiento
A continuación se presentan mediante diagramas de flujo los pasos a seguir para
llevar a cabo el montaje del bioensayo de eco toxicidad, además del control
positivo y negativo.
3.1 Preparación de la solución ácido bórico al 2,5% p/v
Se prepara la para el control positivo, donde la inhibición de las semillas debe
ser de un 99 a 100%.
Fuente: autores
3.2 Preparación de la muestras a evaluar
Se realizan diluciones de la muestra, para poder determinar a qué
concentraciones es afectada la población, y a cual se da la inhibición de un 50 %
de los organismos.
Fuente: autores
3.2.1 Montaje de la prueba
En el montaje de la prueba se realizó un control positivo con ácido bórico, para
tener una inhibición de la germinación, y un control negativo con solo agua
destilada para el crecimiento normal de la población una inhibición total
Fuente: autores
3.2.2 Cálculos
Preparación de solución ácido bórico para el control negativo.
Solucion acido borico al 2.5 % p/v
Cantidad: 50 ml solución
2.5 g x 50 ml: 1.25 g ácido bórico a pesar.
100 ml
Preparacion diluciones de la muestra
Preparación de solución ácido bórico para el control negativo.
Solucion acido borico al 2.5 % p/v
Cantidad: 50 ml solución
2.5 g x 50 ml: 1.25 g ácido bórico a pesar.
100 ml
Preparacion diluciones de la muestra
Prepara 5 diluciones de 10 ml cada una
Se realizaron concentraciones de 100, 30, 10, 3 y 1 % v/v respectivamente.
Para realizar los calculos se multiplaca el volumen de la dilucion (10ml) por el
porcentanje (100,30,10,1%) dividido en cien, dando como resultado la cantidad
de muestra a pipetear en cada tubo de ensayo, posteriormente aforar con agua
destilada.
10x 100/ 100= 10 ml
10x30/100= 3 ml
10x10/100=1 ml
10x3/100=0.3 ml
10x1/100=0.1 ml
Porcentajes de germinación
A continuación se muestran los cálculos de las diluciones de referencia los
cuales serán control negativo y control positivo
Control Negativo: (control de referencia)
Promedio de semillas germinadas.
Control negativo
% de germinación 59
3
X 100 = 19.6 %
Control positivo
Porcentaje de inhibición
Se determina el porcentaje de inhibición a partir de la siguiente fórmula:
% de inhibición = % de germinación de control (+) - % de germinación de la
dilución 30%
Porcentaje de germinación
A partir de los datos obtenidos se determina de la siguiente manera:
% de germinación = = 0
Dilución 0.1%
X 100
Dilución 0.1 %
% de germinación 33
3
X 100 = 11%
Dilución 0.1% sobre muestra de referencia
% de germinación 11
19.6
X 100 = 56.1%
Dilución 0.1%
% de inhibición 100- 56.1 X100 = 43.9%
Dilución 0.3%
X 100
Dilución 0.3%
% de germinación 59
3
X100 =19.6%
Dilución 0.3 %
% de inhibición No se obtiene ya que él % de germinación es
de 100%
Dilución 10 %
X 100
Dilución 10%
% de germinación 57
3
X 100 = 19.0%
Dilución 10% sobre muestra de referencia
% de germinación 19
19.6
X 100 = 97%
Dilución 0.3 % sobre muestra de referencia
% de
germinación
19.6
19.6
X100 = 100%
Dilución 10%
% de inhibición 100- 97 X100 = 3%
Dilución 30%
Dilución 30%
% de germinación 50
3
X100 =16,6
Dilución 30% sobre muestra de referencia
% de germinación 16,6
19,6
X 100 = 84.6
Dilución 30%
% de inhibición 100 – 84.6 X100 = 16.4
Dilución 100
X 100
Dilución 100%
% de germinación 1
3
X 100 = 0.33%
Dilución 100% sobre muestra e referencia
% de germinación 0.33
19.6
X100 = 1.70%
Dilución 100%
% de inhibición 100- 1.70 X100 = 98.3
3.3 Lectura de resultados
Pasado el tiempo de exposición de la semilla con la muestra, se procede a
cuantificar los efectos sobre la plántula, (cambios en el crecimiento normal del
hipocotilo y radícula, daños morfológicos o inhibición).
Fuente: autores
4. Resultados
Terminado el tiempo de exposición se procedió a cuantificar los efectos sobre
las plántulas, a continuación se presentan los resultados obtenidos
4.1.2 Control negativo
Se realizó el montaje en tres cajas Petri de solo agua destilada, y se colocaron
20 semillas por caja.
Porcentaje de germinación
Control
negativo
Número de semillas
germinadas
Replica 1 20
Replica 2 20
Replica 3 19
Total 59
Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo (promedio de las dos
plántulas más grandes por replica)
4.1.2 Control positivo
Se realizó el montaje de tres cajas Petri con ácido bórico y se colocaron 20
semillas por caja.
Porcentaje de germinación.
Control positivo Número de semillas
germinadas
Número de
semillas no
germinadas
Replica 1 0 20
Replica 2 0 20
Replica 3 0 20
Total 0 60
4.1.2. Dilución 0.1%
Porcentaje de germinación
Dilución
0.1 %
Número de
semillas
germinadas
Número de
semillas no
germinadas
Replica 1 13 7
Caja Hipocótilo 1 Radícula 1
Replica 1 3,5 cm 7 cm
Replica 2 2,5 cm 5 cm
Replica 3 2,5 cm 3,2 cm
Replica 2 20 0
Replica 3 0 20
Total 33 27
Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo
Replica Radícula Hipocotilo
1 7 cm 3,5 cm
2 0 cm 0 cm
3 5 cm 3 cm
4.1.3 Dilución 0.3%
Porcentaje de germinación.
Dilución
0.3%
Número de
semillas
germinadas
Número de
semillas no
germinadas
Replica 1 19 1
Replica 2 20 0
Replica 3 20 0
Total 59 1
Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo
Replica Radícula Hipocotilo
1 4.4 cm 4 cm
2 3.5 cm 3 cm
3 5.5 cm 4 cm
4.1. Dilución 10 %
Porcentaje de germinación.
Dilución 10% Número de
semillas
germinadas
Número de
semillas no
germinadas
Replica 1 19 1
Replica 2 19 1
Replica 3 19 1
Total 57 3
Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo
4.1.3 Dilución 30%
Porcentaje germinación
Dilución 30% Número de
semillas
germinadas
Número de
semillas no
germinadas
Replica 1 18 2
Replica 2 15 5
Caja Radícula 1 Hipocótilo 1
Replica 1 2.5 2.5
Replica 2 5 3
Replica 3 6 2.5
Replica 3 17 3
Total 50 8
Además se toma en cuenta el porcentaje de germinación del control negativo
que en este caso fue de 59 semillas germinadas
.
Dilución 30% Hipocolito 1 Radícula 1
Replica 1 5 cm 1,5 cm
Replica 2 4,5 cm 1,5 cm
Replica 3 5 cm 1,5 cm
Dilución 100%
En esta dilución la cual es la más concentrada hubo un % de germinación del 0%
y % de inhibición del 100%
Dilución Número de
semillas
germinadas
Número de
semillas no
germinadas
Replica 1 1 19
Replica 2 0 20
Replica 3 0 20
Tabla de resultados
Concentración
de la muestra
Calculo
1
Calculo 2 Resultado
semillas
germinadas
Resultado
semillas no
germinadas
100% 1/3 0,33%/19,6*100 1,70 98,3
30% 50/3 16,67%/19,6%100 85,03 14,47
10% 57/3 19%/19,6%100 97 3
0,30% 59/3 19,6%/19,6%100 100 0
0,10% 33/3 11%/19,6100 56,12 43,88
Descripción cambios morfológicos
Dentro de las características encontradas se observó un color marrón en las
semillas germinadas, enrollamiento del hipocolito en algunos casos,
engrosamiento de la radícula, por otra parte se pudo observar que habían
algunas que tenían radículas y cotiledones demasiado secos que presentaban
rompimiento, en otros casos se presentaron radículas e hipocolitos muy cortos.
5. Análisis de resultados
El control negativo es usado como punto de referencia para el crecimiento
adecuado de las semillas, según el protocolo para ensayos de toxicidad con
lechuga Lactuca Sativa L, el porcentaje de germinación debe ser superior al
95%. (Patricia Ramirez Romero - Ania Mendoza Cantú, 2008). En el ensayo
realizado se obtuvo un porcentaje de germinación del 98.33%, esto es debido a
que las semillas, estuvieron en su medio óptimo de crecimiento como lo es el
sustrato húmedo, temperatura, disponibilidad de oxígeno y oscuridad para el
crecimiento de la raíz. (Casanova, 2013)
En el control positivo se obtuvo una inhibición del 100% las semillas, estas
presentan mayor sensibilidad en su etapa de germinación, donde empiezan los
procesos metabólicos para su transformación en plántula, en esta etapa se da
la absorción de nutrientes y agua. Cuando están en una solución de ácido bórico
este inhibe su crecimiento debido a que es un compuesto químico, ligeramente
ácido que es usado como antiséptico. Los antisépticos son sustancias
antimicrobianas, que inhiben el desarrollo de microorganismos por medio de
desnaturalización de proteínas (es un cambio estructural de las proteínas o
ácidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo
funcionamiento), rotura de membrana celular, eliminación de grupos sulfhídricos
y oxidación. Lo que indica que las semillas son un buen indicador de toxicidad en
una muestra. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco)
En la concentración del 1% de la muestra se obtuvo un resultado del 56.12% de
semillas germinadas, esto es debido a que el medio es extremo para el
crecimiento de la plántula, ya que las condiciones de disponibilidad de oxígeno,
pH, y contenido de químicos tóxicos (Ver anexo A) que presenta la misma,
afectan los procesos de metabolización de la plántula, por absorción y
acumulación de sustancias toxicas (UNIVERSIDAD POLITECNICA DE
VALENCIA, 2003).
En la réplica número dos de la dilución del 1% se presentó contaminación
cruzada, la cual se evidencio en el crecimiento de hongos y la inhibición total de
las semillas, por lo tanto para conservar la integridad y veracidad de los
resultados no se toma en cuenta para la concentración efectiva 50.
(Autores, 2015)
En la concentración de 3% de la muestra, se presentó un crecimiento del 100%
de las semillas, lo que indica que el contenido de contaminante por cada ml no
es lo suficientemente alto como para afectar el desarrollo normal de la
germinación.
En la concentración de 10% de la muestra, se presentó un crecimiento del 97%
de las semillas, lo que indica que el contenido del contaminante no afecta el
crecimiento normal de la plántula. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco).
En la concentración de 30% de la muestra, se presentó un crecimiento del 85%
de las semillas, lo que indica que a pesar de la toxicidad presente se necesitan
mayores concentraciones para lograr alterar de forma significativa las
condiciones óptimas de crecimiento de la población vegetal. Para una
concentración efectiva 50, se deben sobre pasar una concentración del 50% de
la muestra.
En la concentración 100% de la muestra, se presentó una inhibición del 98.33
de las semillas, esta es la concentración efectiva 50, ya que logra inhibir a más
del 50% de la población, lo que indica que el agua tiene un alto grado de
toxicidad para el desarrollo de una población vegetal. (Maria Cecilia Sombrero y
Alicia Ronco)
Conclusiones
Se realizó el bioensayo con semillas de lechuga lactuca sativa L, donde se
determinó la toxicidad de los vertimientos generados por la organización y se
encontró una concentración efectiva 50 en la concentración del 100% de la
muestra, esto nos indica que se deben tratar los vertimientos de la organización
antes de ser dispuestos a fin de reducir o eliminar las concentraciones de los
contaminantes debido a que estos vertimientos pueden degradar de manera
significativa un ecosistema.
Anexos
Anexo A “Análisis Fisicoquímico de agua residual industria curtiembres”
Parámetro Método Resultado Límites
permisibles
PH 4500 H 9.5 4.5-9
Conductividad 2510 10 siemens
OD 4500-O 4.03 ppm
SAAM 5540-C 0.44 mg/l 10 mg/l
Cr (V) 3500-Cr 155 mg/l 0.1 mg/l
Grasas y aceites 5520 155 mg/l 100 mg/l
Sol. Sedimentadles 2540 D 3 mg/l 2 mg/l
Sol. Disueltos 2540 D 400 mg/l 600 mg/l
Sol. Totales 1191 mg/l 800 mg/l
DQO 5220 2400 mg/l 1500 mg/l
DBO 1000 mg/l 800 mg/l
Fuentes: autores.
Bibliografía
Felix Perez Garcia- Universidad politecnica de madrid. (s.f.). Vitalidad, vigor,
longevidad y conservación de semillas. Obtenido de
http://servicios.educarm.es/templates/portal/ficheros/websDinamicas/20/
conservaci%C3%B3n%20semillas.pdf
M. Macedo, M. Vola . (2008). Principales grupos de bacilos Gram positivos
aerobios . btenido de
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/grampositivosaerobios.pdf
Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco. (s.f.). Ensayo de toxicidad aguda con
semillas de lechuga Lactuca Sativa L. Obtenido de
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/573/cap4.pdf
Salle, D. E.-U. (2009).
Obtenido de
http://repository.lasalle.edu.co/bitstream/handle/10185/14030/
T41.09%20D85d.pdf?sequence=1&isAllowed=y
Universidad politecnica de valencia. (2003).
Lección 17 Germinación de Semillas.
Obtenido de http://www.euita.upv.es/varios/biologia/temas/tema_17.htm
Top Related