RESULTADOS
- Se observo bacterias de muestras de abono líquido orgánico, biofowling y agua
estancada.
- Utilizándose la técnica de tinción simple se observo bacterias muertas, levadura y
se distinguió sus asociaciones.
DISCUSIONES
Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisión binaria. La
mayoría son de vida libre, a excepción de algunas que son de vida intracelular obligada,
como Chlamydias y Rickettsias. Tienen los mecanismos productores de energía y el
material genético necesarios para su desarrollo y crecimiento. Las bacterias integran el
reino procariota (pro de primitivo y cariota de núcleo). (Pírez & Mota, 2006).
Hay técnicas que permiten observar los microorganismos en vivo. Según Granados y
Villaverde (1996) éstas son: Examen en fresco, que incluye examen en fresco entre
portaobjetos y cubreobjetos y examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado;
y tinción vital.
En la práctica de laboratorio se realizó un primer ejercicio en examen en fresco entre
portaobjetos y cubreobjetos.
Esta consiste en suspender el microorganismo objeto de estudio en agua destilada o
cualquier otro medio líquido transparente colocándolo en un portaobjetos a fin de poder
posteriormente, mediante microscopía, visualizar su morfología, disposición y motilidad.
(Granados y Villaverde, 1996).
Además, Granados y Villaverde (1996) agrega que en esta técnica se extenderá la
muestra en el portaobjetos con el fin de homogeneizar la mezcla colocando con cuidado
sobre la suspensión un cubreobjetos formando inicialmente un ángulo de 45° evitando
que se formen burbujas de aire (en nuestra muestra de agua estancada se formaron
pequeñas burbujas de aire) al caer el cubreobjetos sobre la suspensión.. Luego se
sellaran con parafina (vaselina) los bordes de los cubreobjetos para disminuir la
evaporación y evitar corrientes en la preparación.
En la microscopía óptica se toma en cuenta el factor contraste, porque sin un contraste
adecuado es difícil diferenciar una estructura del fondo que la rodea.
Es así que se usan coloraciones para incrementar el contraste entre el espécimen y el
fondo que lo rodea, pero desafortunadamente las coloraciones dificultan la observación de
los microorganismos vivos. (Atlas, 1990).
En la mayor parte de las técnicas de coloración se pone una suspensión de
microorganismos en un portaobjetos y se deja secar. A la preparación así obtenida se le
pasará rápidamente sobre una flama para que el calor fije las células que se encuentran
allí, esto es, las células se fijan al portaobjetos de tal manera que no pueden ser
arrastradas al lavar la preparación. Más adelante, se agrega colorante, se deja actuar por
algún tiempo, se enjuaga para quitar el exceso de colorante y se observa. (Atlas, 1990).
El segundo ejercicio realizado en la práctica de laboratorio fue de observación de
bacterias por la técnica de tinción simple.
En un procedimiento de coloración simple, se usa un solo reactivo colorante que no
intenta producir reacciones de coloración diferenciales para los distintos tipos de
microorganismos o estructuras. Las técnicas de coloración simple para microorganismos
son de utilidad cuando el colorante es fijado por las células y así los microorganismos
aparecen de color oscuro o coloreados sobre un fondo luminoso o claro, y son negativas
cuando los microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tiñe
y los microorganismos aparecen brillantes sobre el fondo oscuro.
Estas dos técnicas dependen del hecho de que las bacterias y otros microorganismos
poseen carga negativa asociada a la capa externa de la célula, principalmente debido a
los grupos PO43- de la membrana celular. (Atlas, 1990).
En los procedimientos de coloración positiva un colorante ácido (catiónico), que tiene
cromóforo (porción colorida de la molécula de colorante) cargado positivamente, es
atraído hacia la cubierta externa de la célula cargada negativamente. Colorantes como el
azul de metileno (que fue el colorante utilizado en el ejercicio de laboratorio) tienen una
porción de la molécula de color azul, que es atraída a la superficie de la célula, dando
como resultado una tinción positiva del microorganismo. (Atlas, 1990).
CONCLUSIONES
- En la observación de bacterias en forma directa; para las muestras del abono
líquido orgánico, biofowling y agua estancada se observaron colonias de bacterias
de diferentes formas desplazándose. Se distinguían formas de cocos y bacilos,
pero no claramente.
- En la observación de bacterias utilizándose la técnica de tinción simple se observo
cocos (en forma aislada, diplococos, estreptocos) y bacilos (aislados, diplobacilos
y estreptobacilos). También se observaron levaduras aisladas y en conjunto.
Todas las especies estaban quietas y de un color azul violeta. Se distinguían
claramente.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las asociaciones más frecuentes en bacterias?
Según Burdon y Williams (1971) entre los cocos, y también con menor frecuencia
entre bacilos y espirilos, las células que crecen rápidamente tienden a ordenarse
en gurpos características. El aspecto de cada agrupamiento según se observa en
el microscopio, es una importante ayuda para reconocer las especies.
Tenemos:
- Diplococos: Cocos en parejas. Generalmente los lados adyacentes de los
organismos apareados son achatados.
- Estreptococos: Cocos en cadena.
- Estafilococos: Cocos en masas irregulares que semejan racimos de uvas. Se
dividen en más de un plano del espacio y permanecen fuertemente adheridos,
formando masas irregulares.
- Tétradas: Cocos en grupos de cuatro. Estos cocos se dividen en dos planos que
forman ángulo recto entre sí.
- Sarcinas: Cocos en bloques cúbicos.
- Grupos de bacilos y espirilos: El crecimiento característico de algunas especies de
bacilos es por parejas (diplobacilos). Otros pueden formar largas cadenas
(estreptobacilos). Algunos muestran una disposición muy sorprendente de células
paralelas; otros crecen en una masa entretejida y enmarañada. Los espirilos no se
agrupan en ninguna forma característica, sino que crecen en forma de cadenas
largas y ondulantes. A veces el espirilo no logra encadenarse y aparece el
filamento como una forma de ovillo retorcido.
2. ¿En qué rango de tamaño se definen las bacterias?
Según Granados y Villaverde (1996), el tamaño de las bacterias se mide en µm
(0.000001 m) y oscila entre 0.2 y 2 µm.
El tamaño de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 µm, pudiendo llegar en algunos
tipos a 10 µm. Solo son visibles entonces, al microscopio óptico o microscopio
electrónico. Para observarlas con el microscopio óptico se usa el objetivo de
inmersión (100X), sumergiendo esta lente en una gota de aceite (aceite de
inmersión) en el preparado a observar. A modo comparativo, una célula eucariota
mide más de 5 µm, mientras que un reo virus mide menos de 0.1 µm. (Pírez &
Mota, 2006).
BIBLIOGRAFÍA
ATLAS, R. 1990. Microbiología. Fundamentos y aplicaciones. Compañía
Editorial Continental, S.A de C.V. México D.F, México. Pp 55-62.
BURDON, W & WILLIAMS, R. 1971. Microbiología. Primera edición en
español. Publicaciones Cultural. México D.F, México. Pp 131-135.
GRANADOS, R & VILLAVERDE, C. 1996. Microbiología. Bacteriología.
Características y clasificación bacteriana. Virología. Características y
técnicas bioquímicas. Editorial Paraninfo. Madrid, España. Pp 9-10, 216-
220
PÍREZ, M & MOTA, M. 2006. Temas de Bacteriología y Virología médica.
Capítulo 2: Morfología y estructura bacteriana. Segunda edición corregida.
Universidad de la República. Facultad de Medicina. Departamento de
Bacteriología y Virología. Instituto de Higiene. Montevideo, Uruguay. Pp 23-
26.
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