INTRODUCCIÓN
Proliferación y viabilidad celular
Tripsinizar
Contaje (método
de exclusión del
azul tripano)
Resuspender
Ciclo celular
Ambas urolitinas bloquearon el ciclo celular
en las fases G2/M y S.
El bloqueo en G2/M fue significativamente
mayor con Uro-A.
Cel
l d
istr
ibu
tio
n (
%)
0
10
20
30
40
50
60
70
Treatment (48h)
a
a a a,b
a
a,b
G0/G1
S
G2M
Control Uro-A IsoUro-A
La proporción de células apoptóticas se evaluó mediante citometría de flujo y
usando el kit de la Anexina-yoduro de propidio.
Apoptosis
Tanto Uro-A como IsoUro-A indujeron apoptosis (temprana y tardía).
Cel
l n
um
ber
(%
)
0
10
20
30
40
a
Treatment (48 h)
a
a
a
Late apoptosis
Early apoptosis
Control Uro-A IsoUro-A
6%
4%
12%
17% 14%
10%
Conversión del ARN a
ADN complementario
(retro-transcripción) Extracción y cuantificación
del ARN Medida de expresión génica
mediante PCR cuantitativa a
tiempo real ‘RT-qPCR’
HIPÓTESIS Y OBJETIVOS
OBJETIVO PRINCIPAL
Comparación de la actividad anticancerígena de Uro-A e IsoUro-A en un modelo
celular de cáncer colorrectal.
O O HO
OH
Isourolitina A (IsoUro-A)
O O
OH
HO
Urolitina A (Uro-A)
CONCLUSIONES
RESULTADOS
La inhibición con Uro-A fue significativamente
mayor que con IsoUro-A.
Ni Uro-A ni IsoUro-A afectaron a la viabilidad
celular. Ambas urolitinas inhibieron el crecimiento de
las células. a
a,b
0
20
40
60
80
100
120
Cel
l p
roli
fera
tion
(%
)
Control Treatment (48 h)
Uro-A IsoUro-A
68,4% 58,1%
Expresión génica por RT-PCR
Rel
ati
ve
chan
ge
exp
ress
ion
Genes 0
1
2
3
4
5
Control Uro-A
IsoUro-A
a
a Uro-A: 3,7 veces IsoUro-A: 3,2 veces
Ambas urolitinas indujeron la expresión del gen CDKN1A, que codifica la proteína p21.
Un aumento de su expresión bloquea la célula en fase S y G2/M.
El posible metabolismo de Uro-A e IsoUro-A en Caco-2 se evaluó, tras 48 h, mediante el
análisis del medio celular por HPLC-MS/MS.
Metabolismo celular de urolitinas
Time (min)
0 5 10 15 20 25 30
mA
bs
(305
nm
)
0
100
200
300
400
500
600
Uro-A
(80%)
Uro-A
glucurónido
(mA
bs
(305
nm
)
IsoUro-A
(50%)
Time (min)
0 5 10 15 20 25 30
0
100
200
300
400
500
600 IsoUro-A 9-glucurónido
La mayor conversión de IsoUro-A a su derivado glucurónido podría explicar su menor
actividad respecto a Uro-A.
Uro-A e IsoUro-A, a concentraciones fisiológicamente relevantes, ejercen una potente
acción antiproliferativa frente al modelo de línea celular de cáncer colorrectal Caco-2.
Ambas urolitinas bloquean el ciclo celular en fase G2/M y S (el bloqueo en G2/M es
mayor con Uro-A).
Uro-A e IsoUro-A inducen apoptosis.
El mecanismo de acción de ambas urolitinas parece estar mediado por un aumento de p21.
La mayor transformación metabólica de IsoUro-A por estas células podría explicar su
menor actividad respecto a Uro-A.
Evidencias científicas sugieren el papel protector de los polifenoles de alimentos vegetales
en la prevención de enfermedades degenerativas como el cáncer colorrectal (1).
Alimentos como granada, fresas o nueces contienen elagitaninos, unos polifenoles que no se
absorben en el organismo sino que son transformados por la microbiota intestinal en
urolitinas, metabolitos biodisponibles que ejercen efectos anticancerígenos y anti-
inflamatorios (2).
Las personas, debido a su diferente microbiota intestinal, pueden clasificarse en tres grupos
principales según su capacidad para producir urolitinas: Fenotipo 0 (no producen urolitinas),
Fenotipo A (producen Uro-A) y Fenotipo B (además de Uro-A, también producen IsoUro-A
y Uro-B) (3).
Uro-A e IsoUro-A son las más relevantes. Sin embargo, no se ha descrito la actividad
anticancerígena para IsoUro-A, ni se ha comparado con la de Uro-A para ver si difieren
debido a su estructura molecular.
Mª José Alegría Marcos , Irene López Ruiz y Ana María Dólera Pertusa. IES-Alcántara (Alcantarilla, Murcia). Tutor-IES: Jesualdo Ibáñez.
Tutores-investigadores: Dr. Juan Carlos Espín y Dr. Antonio González-Sarrías. Ciencia y Tecnología de Alimentos (CEBAS-CSIC); Espinardo (Murcia).
HIPÓTESIS
La diferencia en la estructura molecular de ambas urolitinas (posición del grupo
hidroxilo, -OH, en posición 8 en Uro-A frente a posición 9 en IsoUro-A) podría reflejarse en
una distinta acción anticancerígena.
Se incubaron los metabolitos Uro-A e IsoUro-A (obtenidos por síntesis química), a concentraciones fisiológicamente relevantes (100 mM), en la línea celular de cáncer
colorrectal Caco-2 y se evaluaron efectos en: proliferación, viabilidad y ciclo celular, apoptosis, expresión de 12 genes marcadores de cáncer colorrectal y metabolismo celular.
La cuantificación del contenido de ADN de las células por citometría de flujo permite
determinar la distribución de una población celular a lo largo de las distintas fases del ciclo.
Esta técnica permite identificar si los tratamientos inducen un bloqueo del ciclo celular.
AGRADECIMIENTOS: Agradecemos el apoyo de la Fundación Séneca y la
financiación del Proyecto AGL2011-22447 del grupo del CEBAS-CSIC que ha
supervisado esta investigación.
Importancia de la estructura molecular en la acción anticancerígena de los
metabolitos biodisponibles de la granada, las urolitinas, en un modelo
celular de cáncer colorrectal.
BIBLIOGRAFÍA
1. Núñez-Sánchez et al. (2015). Dietary phenolics against colorectal cancer-From promising preclinical results to poor
translation into clinical trials: Pitfalls and future needs. Mol. Nutr. Food Res. doi: 10.1002/mnfr.201400866.
2. Espín et al. (2013). Biological significance of urolithins, the gut microbial ellagic acid-derived metabolites: the evidence so
far. Evid Based Complement Alternat Med. 2013:270418.
3. Tomás-Barberán et al., (2014). Ellagic acid metabolism by human gut microbiota: consistent observation of three urolithin
phenotypes in intervention trials, independent of food source, age, and health status. J Agric Food Chem. 62:6535-8.
Células Caco-2
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