Los cromosomas mitticos humanos consisten predominantemente de fibras nucleosomas plegadas irregularmente sin la estructura de la cromatina de 30 nm (Teora fractal)Villaseor Corona Anaestudiante Mdico Cirujano y Parteroprcticas Instituto de Investigacin en Ciencias Biomdicas. Biologa Molecular
GeneralidadesEl DNA no puede empaquetarse directamente en la estructura general de la cromatina
La subunidad fundamental de la cromatina es el nucleosoma
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
niveles de empaquetamiento>primer nivel: nucleosoma>segundo nivel: fibra de 30 nm>tercer nivel: empaquetado de la propia fibra de 30nmLewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
Empaquetamiento de la cromatina -cadena continua de nucleosomas
-representa el nivel menos compactado
-ambiente inico bajo
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
Empaquetamiento de la cromatina- se visualiza en condiciones ionicas altas- estructura enroscada-Aproximadamente 6 nucleosomas por cada vuelta-Constitutiva tanto en interfase y cromosomas mitticos-forma de solenoide donde nucleosomas tienen forma helicoidal
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
ControversialMucha informacin apoya la estructura de 30 nm Estudios con Cryo-Em demuestran que las fibras de 30 nm existen pero en un solo pequeo grupo altamente especializado de clulas*estudios con Cryo-EM*estudios con SAXS
>cromosomas mitticos HeLa>cromosomas mitticos de los eritrocitos nucleados de las gallinas (control +)
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
Mtodo.>fueron aislados en una solucin salina fisiolgica>las muestras fueron puestas en un vidrio de cuarzo con capilaridad>se expusieron a rayos X por un segundo>se grabaron los patrones de dispersin
-varias exposiciones a los rayos X no cambiaron los patrones de dispersin
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
Anlisis eritrocitos nucleadoscon SAXS:-pico alto en 30 nm-2 prominentes en 11nm y 6nm
con cryo-EM:-pico de 30 nmYoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
Anlisis HeLa>Estudio por Langmore y Paulson (1983)-report picos en 30, 11 y 6 nm-utilizando SAXS-6nm igual, 11 nm descendente
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
Qu significan los picos 30, 11 y 6 nm?> de las posiciones de los nucleosomas
6 nm: posicin en su cara plana.11 nm: posicin borde a borde
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
La fibra de 30nm >En un estudio anterior no encontraron evidencia de la fibra de 30nm en cromosomas mitticos
>aislaron cromosomas por el procedimiento de Langmore y Paulson
>se examinaron los cromosomas aislados con cryo-EMYoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
La fibra de 30nm se origina por agregaciones ribosomales
>se encontraron grnulos adheridos a la superficie del cromosoma
La fibra de 30nm se origina por agregaciones ribosomales
Se utiliz otra tcnica llamada Power Spectra, donde las regiones del cromosoma fueron selectivamente analizadas
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30nm chromatin structure .
La fibra de 30nm se origina por agregaciones ribosomales
>se lavaron con buffer isotnico (poliamina y EDTA)>luego fue resuspendida en el buffer original de aislamiento y esto elimin la mayora de los agregados ribosomales, el pico de 30 nm desapareci
Entonces qu forma tiene?>desarrollaron un nuevo instrumento para el SAXS y utilizaron ltex como control porque produca un patrn regular de 50-1000 nm
>se dieron cuenta que haba una relacin entre la dispersin y el vector de dispersin (eran proporcionales) r=-3.12
Sugieren que la organizacin del cromosoma mittico envuelve acomodos irregulares de fibras de nucleosomasla explicacin podra ser la condensina
forma un eje en el cromosoma y da un soporte a las fibras del nucleosoma globalmente alrededor del centro del cromosoma
forman lazos que son hbiles de interactuar unos con otros y son suficientes para formar una cuerda porque se repelen por sus fuerzas entrpicas
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