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CUESTIONARIO PARA IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS-

GRUPO UNO

1. Caracteres morfológicos, antigénicos y hemolíticos.

Cocos Gram. + agrupados en cadenas que puede ser diplococos o cadenas muy largas porque se replican en 1 solo plano.

Anaerobios aerotolerantes catalasa – (a diferencia de Staphylococcus).

Algunos son patógenos estrictos de origen ambiental y otros forman parte de la microbiota intestinal y del tracto respiratorio superior.

No tienen cápsula excepto aquellos que viven en la faringe.

El medio de cultivo idóneo es agar–sangre enriquecido con aminoácidos.

2. Hay varias especies que se clasifican según 3 criterios- Menciónelos.

1) Hemólisis

2) Estructura Ag

3) Pruebas fisiológicas

3. De los tipos de hemolisis del estreptococo describa cada una de ellas

Hemólisis:

α-hemolíticos: la hemólisis es parcial porque sólo utilizan Fe consiguiendo un color verdoso debido a la oxidación de hemoglobina en biliverdina.

β-hemolíticos: hemólisis completa (Fe + aminoácidos) que deja un halo transparente alrededor de las colonias. Casi todas las especies patógenas son β-hemolíticas y casi todas las β-hemolíticas son patógenas.

γ-hemolíticos: no hay hemólisis.

4. Describa la estructura antigénica de los Estreptococos

Son antígenos localizados en la pared celular y en la cápsula, con 3 variedades:

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Ag. de grupo: situados encima de los péptidoglucanos, son polisacáridos o ac. teicoicos que permiten dividir a los Streptococus en los grupos de Larcefield, muy útiles en diagnóstico (destacan A, B y D). Algunas especies como el Neumococo no tienen este Ag.

Ag. de tipo: situados encima, son proteínas muy relacionadas con la virulencia.

Ag. capsulares: por encima, son polisacáridos o dextranos (polímeros de ac. hialurónico).

5. Mencione las pruebas fisiológicas /laboratorio que se utilizan para identificar a los estreptococos

Hemólisis en agar–sangre:

α: Solubles en bilis.

Sensibles a optoquina:

+: S. pneumoniae o Neumococo.

–: S. viridans.

β: Según sensibilidad a bacitracina:

+: GRUPO A à S. pyogenes.

–: NO GRUPO A.

γ: Tolerantes a altas concentraciones de sal. Según su crecimiento en biliesculina:

+: Enterococos.

–: No Enterococos.

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6. Realice un dibujo de la pared celular de los estreptococos e identifique lo siguiente

- Los componentes que determinan los antígenos de grupo y que utilidad tienen en el laboratorio, cuál de los estreptococos carecen de estos antígenos. Algunas especies como el Neumococo no tienen este Ag.

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- Los antígenos de tipo y con que característica están relacionados

- Los antígenos capsulares como están compuestos químicamente)

7. Que es la Optoquina?

se usa el disco de optoquina para diferenciar entre S. pneumoniae (sensibles) y otras especies de estreptococos α hemolíticos (resistentes). La sensibilidad a la optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana celular bacteriana. La optoquina, que es el clorhidrato de etilhidrocupreína, se utiliza en una dilución acuosa de 1 / 4000 para impregnar los discos, quedando en éstos 5 µg de la droga.

8. Mencione las especies de estreptococos que son sensibles a la Optoquina y quienes no lo son, que utilidad tiene esta prueba en la identificación de los cocos gran positivos.

Streptococcus pneumoniae (sensible) y de especies de estreptococos α hemolíticos (Streptococcus viridans -resistente).

9. Que es la Bacitracina? La bacitracina es el nombre de un antibiótico producido por una mezcla de polipéptidos cíclicos de síntesis no ribosomal relacionados unos con los otros y producidos por cepas de la variedad Tracy de la bacteria Bacillus subtilis aislado en 1945. El nombre del fármaco proviene del nombre de una niña llamada Tracy de cuya tibiase extrajo el microorganismo

10. Que utilidad tiene la prueba de sensibilidad a la bacitracina

11- que determina el crecimiento en el medio de bilisescualina.

se conoce como prueba de bilis esculina y en esta se identifican especies de enterococos y estreptococos del grupo D. en general se realiza un agar inclinaado. Los microorganismos que son bilis esculina positivos pueden crecer en presencia de bilis al 40% e hidrolizar la esculina. la mayoría de las especies de los enterococos y estreptococos del grupo D ennegrecen el medio de bilis-esculina dentro de 24hrs; algunas raras cepas pueden requerir una incubación de 48 horaad antes de que se aprecie la hidrolisis. Cuando las colonias son numerosas y llegan a confluir, puede llegar a oscurecerse todo el medio. Si al cabo de tres días no se ha producido oscurecimiento, se acepta que el material sembrado no contenía enterococos.

12-complete el siguiente cuadro.

Streptococcus pyogenes:

Streptococcus pneumoniae o Neumococo:

Streptococcus agalacti

Enterococcus faecalis

Streptococcus viridans:

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ae: / faecium:

Características generales

Estreptococo β-hemolítico del grupo A y encapsulado.Forma parte de la microbiota de la rinofaringe en el 5 – 10% de la personas

Diplococos α-hemolíticos más alargados que otros cocos.Cápsula voluminosa pero carecen de Ag. de grupo.Colonias como gotas de rocío que se lisan fácilmente.50% de personas portadoras.

Son β-hemolíticos del grupo B.A veces (10%) forman parte de la microbiota de vagina e intestino.

Streptococcus γ-hemolíticos del grupo D que forman parte de la microbiota intestinal.

Familia α-hemolíticos (resistentes a optoquina) y sin cápsula.

Factores de virulencia

Ag. superficiales: Proteína M y cápsula, propiedades antifagocitarias.Enzimas:Estreptoquinasa: fibrinolisis.EstreptoDNAasa: no es una verdadera DNAasa porque desdobla el ADN.Hialuronidasas y proteasas (necrosis tisular).Toxinas:Toxina eritrogénica o exotoxina pirógena: sus genes están codificados en fagos y son responsables del exantema de la escarlatina.

Cápsula: propiedades antifagocitarias.Neumolisina: hemolisina antigénica muy similar a estreptolisina O.Neuoaminidasa: enzima exocelular que hidroliza el ácido neuroamínico de los glucolípidos y glucoproteínas de la membrana plasmática.PSP: responsable de la adherencia y se cree que también tiene funciones citotóxicas.

Sin cápsula .

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Estreptolisina O: responsable de la hemólisis en profundidad, tiene gran afinidad por el colesterol degradando las membranas plasmáticas de hematíes y leucocitos. Es antigénica y sensible al O2.Estreptolisina S: responsable de la hemólisis en superficie, tiene gran afinidad por los fosfolípidos y no es antigénica.

Cuadros clínicos

Faringoamigdalitis: es contagiosa y frecuente en niños, caracterizada por fiebre, dolor de garganta, exudado con bacterias y PMN (si tiene origen vírico aparecen más mononucleares).Escarlatina: afecta a niños cuando las cepas de S. pyogenes son lisogenizadas por un fago productor de toxina eritrogénica, causando

Neumonía clásica: es de tipo lobular y puede afectar a personas sanas (contagiadas por un portador). Sin embargo, son más frecuentes las autoinfecciones endógenas en situaciones de inmunodepresión, ya que la persona aspira los Neumococos y se instalan en sus alvéolos pulmonares. La sintomatología se caracteriza por fiebre y esputo purulento.Meningitis: afecta a niños y adultos, es la 3ª causa de meningitis. Meningococo > Haemophylus > Neumococo.Artritis y endocarditis

Producen meningitis neonatales y septicemias a partir de madres portadoras.

Producen infecciones nosocomiales (infecciones urinarias, bacteriemias, endocarditis….).

La especie más importante es Streptococcus mutans, productor de la caries porque degrada azúcares en a. láctico y esta acidificación destruye el esmalte.

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exantema generalizado.Fiebre reumática: aparece en faringoamigdalitis o escarlatina mal curadas

Diagnostico de laboratorio

Debe ser bacteriológico.Exudados rinofaríngeos que se siembran en agar–sangre para observar colonias β-hemolíticas.Catalasa – a diferencia de Staphylococcus.Resistencia a optoquina y β-hemolisis a diferencia del Neumococo.Sin embargo puede utilizarse un diagnóstico indirecto buscando antiestreptolisina O en el suero del enfermo, en ese caso se incuba en una placa y se inhibe la hemolisis.

Bacteriológico con varias opciones:Siembra de esputos (neumonía) o LCR (meningitis) en agar–sangre con antibióticos inhibidores de la microbiota y con optoquina, obteniendo a su alrededor un halo de inhibición.Mezcla de una suspensión de colonias con sales biliares produciendo su lisis.Demostración de Ag. capsulares por aglutinación de látex y contrainmunoelectroforesis

Tratamiento

Los antibióticos de elección son cefalosporinas y macrólidos.Antes se utilizaba estreptomicina,

El Neumococo suele ser resistente a las penicilinas, se utilizan cefalosporinas o macrólidos.

Los antibióticos de elección son β-lactánicos y

Resistente a β-lactámicos. Antibiograma: macrólidos y

Muy sensibles a penicilinas y macrólidos.

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pero se prohibió por sus efectos tóxicos.A veces se usa augmentine (amoxicilina + ácido clavulánico).

aminociclitoles.

teicoplanina.

S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus

Características generales

Staphylococcus aureus pertenece a la familia

Staphylococcaceae. Es Gram positivo,

aunque las cepas viejas o los microorganismos

fagocitados se tiñen como Gram negativo.

Tiene forma de coco y puede aparecer

en parejas, en cadenas o en racimos.

Su tamaño oscila entre 0,8 a 1,5 micras de

diámetro, es inmóvil y algunas cepas producen

una cápsula externa mucoide que

aumenta su capacidad para producir infección.

es anaerobio

facultativo, coagulasa positivo, catalasa

positivo y oxidasa negativo

cocos Gram-positivos 

arreglados en grupos.

coagulasa-negativa, 

termonucleasa-negativoque a veces varia,

hábitat: piel de humanos y de animales y en membranas mucosas. Es sensible al antibiótico novobiocina; un concepto que lo distingue de otros organismos comunes de coagulasa negativa como S. saprophyticus.

Es la causa menos común

en infecciones oportunistas.

Es un mediador de

infecciones nosocomiales.

Su crecimiento no produce

hemolisis.

No fermenta manitol.

No es pigmentado.

Coagulasa negativo.

Es saprofita.

es un coco gram positivo, coagulasa -, anaerobio facultativo, no formador de cápsula, no formador de espora e inmóvil. Es catalasa y oxidasa +.

Posee la enzima ureasa y es capaz de adherirse a las células epiteliales del tracto urogenital

Su hábitat normal no se conoce con exactitud

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Factores de virulencia

- Catalasa- Coagulasa- Leucocidina- Hialuronidasa- Toxina exfoliativa- Penicilinasa- Hemolisina- Toxina TSST-1- Estafiloquinasa- Enterotoxina- Proteína A- Lipasas-

La producción de Slime (exopolisacáridos) o biofilm le confiere una adherencia muy eficiente a la bacteria, por lo tanto se puede unir a superficies como catéteres vasculares, sondas, prótesis, además este biofilm forma una barrera que dificulta el paso de los antibióticos.

Dudosos y poco estudiados

Cuadros clínicos

- Infección con el S. aureus por contaminación directa con la herida: osteolielitis crónica subsecuente a fractura abierta, meningitis después de fractura de cráneo

- Infección en la piel y tejidos subcutáneos: abscesos, furúnculos, impétigo, celulitis,etc

- Endoarditis.- Síndrome de

choque toxico estafilococico

- Infecciones de cateter.

- Infección de implante de

prótesis.

- Infección de herida.

- Cistitis

- Septicemia

- Endocarditis

- Endoftalmitis

Generalmente causa infecciones urinarias en mujeres jóvenes sexualmente activas.

Diagnostico de laboratorio - Microscopía: En

frotis teñidos con gram,.

- cultivo : aagar en sangre, Medio Baird-Parker Agar

- pruebas bioquímicas : La

un hemocultivo o cultivo de orina no son suficientes para una correcta detención de la bacteria en este caso, y es importante realizar pruebas de catalasa y coagulasa, pero podemos realizar extendidos y revisarlos por medio de la microscopia, o un cultivo, o metodologias bioquímicas.

Bioquimicas:

Agar

sales y

manitol:

negativo o

positivo

(variable).

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característica más confiable para la identificación de Staphylococcus aureus es la prueba de la coagulasa. Catalasa,etc

Prueba

de

coagulasa:

negativo.

Sensibili

dad a

vancomicina

: resistente.

DNAasa:

negativo.

tratamiento Como para la mayoría de enfermedades trasmitidas por alimentos autolimitadas, las medidas de sostén son la base del tratamiento. No está indicado tratamiento con antimicrobianos.

Tiene una alta tasa de resistencia a múltiples antibióticos. Son resistentes a la meticilina y se ha demostrado que tiene sensibilidad a la vancomicina y el paciente evoluciona favorablemente, pero el fármaco debe dar elecciones.

Profilaxis: Debe haber una correcta limpieza de la mujer al ir al baño, Buenos hábitos de aseo personal.

14- lea el documento anexo en pdf llamado medios de cultivo para cocos gram positivos, seleccione los medios de cultivo y su utilidad para identificar cocos gram positivos.

aislamiento e identificación :

- medios de cultivo ordinarios: agar nutritivo, agar sangre

- medios selectivos: agar baird-parker, agar manitol sal

colonias redondas, lisas (hasta 4 mm de diámetro)

pigmentación variada (crema hasta amarillo)

- pruebas de catalasa, coagulasa en porta y tubo

- sistemas de identificación comerciales

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- tipificación por fagos (estudios epidemiológicos)

PIGMENTACIÓN VARIADA (CREMA HASTA AMARILLO)

15- mencione las infecciones mas frecuentes del género estreptococo y enterococo

infecciones mas frecuentes del género streptococcus

Estreptococos del grupo A: Streptococcus pyogenes producen amigdalitis e impétigo. ncluyendo faringitis estreptocócica ("amigdalitis"), fiebre reumática aguda, fiebre escarlata, glomerulonefritis aguda y fascitis necrotizante.

Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en neonatos y trastornos del embarazo en la mujer. causa neumonía y meningitis en neonatos y en las personas más jóvenes, con bacteremia sistémica ocasional.

Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumonía adquirida en la comunidad. causante de neumonía bacteriana, otitis media y meningitis

Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos dentales.

Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de estreptococos viridans.

infecciones mas frecuentes del género enterococos:

Enterococcus causa importantes infecciones clínicas incluyendo:

- infección del tracto urinario,

- bacteremia,

- endocarditis,

- infecciones intraabdominales y pélvicas

- infecciones de piel y tejidos blandos

- infecciones neonatales y pediátricas: Las bacteriemias neonatales y la sepsis

- diverticulitis y

- infecciones misceláneas: meningitis

16- cuando los estreptococos son cultivados en agar sangre se púede observar:

a) características de crecimiento (macroscopica y microscópica) expliquelasmacroscópica: esta en denpendencia de las cepasObservar las características de las colonias.Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis:Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos.

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Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en estudio.Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio.Microscopica: Suelen verse como cocos grampositivos agrupados en cadenas asociados con leucocitos es relevante ya que los estreptococos no suelen colonizar la superficie cutánea

b) los patrones de hemolisis según especies en el medio de cultivo

Cuando los estreptococos son cultivados en agar sangre se puede observar, además de lamorfología macroscópica característica de cada cepa, la presencia de un halo transparente alrededor de la colonia donde los glóbulos rojos han sido completamente lisados. este patrón es designado hemólisis de tipo beta y es de considerable importancia ya que la exhibeStreptococcus pyogenes y muchos otros Streptococcus patógenos humanos. Un segundo grupo de microorganismos, produce hemólisis parcial o hemólisis alfa, observándose como un halo verdoso alrededor de la colonia; perteneciendo a este grupo S. pneumoniae así como otros Streptococcus que habitan el tracto respiratorio superior y gastrointestinal del hombre. Finalmente, el término hemólisis gamma se utiliza para designar aquellas especies que no producen hemólisis, aunque el término estreptococo no hemolítico es preferible.

c) la identificación de los estreptococos betahemoliticos creada por Rebeca Lancefield

. Esta clasificación en serogrupos esta basada en las diferencias antigénicas de los carbohidratos de la pared celular. Los antígenos de grupo son rápidamente extraíbles de la pared celular e identificables por reacciones de precipitación usando antisueros específicos. Los estreptococos que carecen de antígeno de grupo reconocible son identificados por características fenotípicas (reacciones de fermentación, producción de enzimas) y por hibridación del DNA.

subgrupo Antígeno grupo especifico de pared celula

Aspectos clínicos/enfermedades

A Ramnosa-N-acetil-glucosamina

Faringitis, amigdalitis, escarlatina,erisipela, impétigo,

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celulitis, secuelasno supurativas: fiebre reumática,

glomerulonefritis

B Ramnosa-glucosamina Corioamnionitis, sepsis puerperal y

neonatal, meningitis neonatal

C Ramnosa-N-acetil-galactosamina

Infecciones respiratorias altas

D Ácido glicerol teicoico Infecciones del tracto genitourinario,

heridas, endocarditis

G Ramnosa-galactosamina Infecciones respiratorias altas, celulitis,

Sepsis

17- en un medio de cultivo de agar sangre, describa las diferencias entre las colonias de estreptococos y estafilococos.

colonias de estreptococos Colonias de estafilococos.

Colonias medianas 2-3 mm o pequeñas 1mm

Colonias grandes de3-5mm

Agrupación celular en cadenas Agrupación celular en racimos

Color transparente o ligeramente opacas Color opacas, blancas o amarillentas

En general no hemoliticas son generalmente β hemolítica

La mayoría no crecen o forman colonias diminutas a las 48-72hrs

Crecen bien en agar sangre a las 18-24hrs

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18- describa que observaría en la tinción de gram de cada una de las colonias antes descritas

estaphylococos: Características microscópicas y de tinción

Las bacterias pertenecientes a esta especie son cocos, con forma casi esférica. Forman masas arracimadas, viéndose como bacterias Gram positivas . No tienen flagelos, no forman esporas y excepcionalmente pueden tener cápsula.En los cultivos viejos los estafilococos pueden aparecer como bacterias Gram negativas. Características de cultivo

Son poco exigentes en sus necesidades; crecen bien en cualquier medio ordinario, aunque lo hacen mejor en los medios enriquecidos. Son aerobios y anaerobios facultativos, con una temperatura óptima entre 30-37ºC.

Una particularidad de los miembros de este género es que crecen en medios con una concentración de ClNa que no soportan el resto de los microorganismos (bacterias halófilas). Esto permite la creación de medios de cultivo casi específicos para los estafilococos.

Las colonias son visibles fácilmente, sobre todo en agar sangre, con forma redonda y aplanada, bordes netos, superficie lisa y brillante, consistencia variable, sin olor y en algunas ocasiones, hemolíticas.

Algunas cepas pueden producir un pigmento carotenoide que les da una coloración amarillenta (S. aureus). La producción de este pigmento es mucho más evidente en agar chocolate o a temperatura ambiente

estreptococos: Características microscópicas y de tinción

Los miembros de estos géneros son bacterias cocoides Gram positivas que generalmente se presentan formando cadenas de longitud variable, sobre todo cuando se cultivan en medios líquidos. En ciertas condiciones de crecimiento las células bacterianas pueden alargarse, semejando bacilos al microscopio.

Cuando se realiza una tinción a partir de una colonia procedente de un medio sólido, es muy frecuente ver agrupamientos en forma de racimos, lo cual deberemos tener muy en cuenta para no caer en la tentación de identificarlos rápidamente como estafilococos.

Los estreptococos no tienen flagelos ni forman esporas, aunque frecuentemente pueden presentar una cápsula .

19- describa el fundamento de la prueba de catalasa, para que se usa en la identificación de cocos gram positivos y como se reporta.

Fundamento

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El peróxido de hidrógeno es el producto final del metabolismo oxidativo de carbohidratos, a esta vía metabólica recibe el nombre de metabolismo aerobio-oxidativo.

La acumulación del peróxido es muy toxico por lo que la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus sp. producen una enzima llamada catalasa que degrada el peróxido de hidrógeno obteniendo agua y oxigeno gas.

Pone de manifiesto la presencia del enzima catalasa en una bacteria. Esta enzima es capaz de descomponer el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) en agua y oxígeno, con la consiguiente aparición de burbujas.

su objetivo es Separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa -).

Si se presenta formación de burbujas, se considera positiva la prueba, esto es que sí contiene la enzima catalasa. En caso de no formarse burbujas la prueba se interpretará como ausencia de esta enzima.

20. Que observa la realizar la prueba de catalasa en la identificación de cocos

positivos.

Esta prueba detecta la presencia de enzimas catalasa capaces de convertir el peróxido de

hidrógeno en agua y oxígeno. Se encuentra presente en la mayoría de los

microorganismos aeróbicos y anaeróbicos facultativos que contienen citocromo,

excluyendo los estreptococos.

La prueba se considera positiva cuando se produce una efervescencia rápida con

desprendimiento de burbujas, la enzima catalasa convierte el peróxido de hidrógeno en

agua y oxígeno molecular. Esta prueba se emplea para diferenciar los géneros

Micrococcus y Staphylococcus (catalasa positivo) del género Streptococcus (catalasa

negativo). Si se trata de cocos Grampositivos, catalasa positiva, entonces se utiliza la

prueba de Oxidación Fermentación de la glucosa para diferenciar los géneros

Micrococcus y Staphylococcus.

21. Que es la prueba de la coagulasa.

La prueba de la coagulasa se usa para diferenciar el Staphylococcus

aureus del coagulase-negative staphylococci. Permite separar S.aureus, que posee

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coagulasa, de las otras especies de estafilococos que genéricamente se denominan

coagulasa negativos. Comprueba la capacidad de un microorganismo de coagular el

plasma porla acción de la enzima coagulasa (estafilocoagulasa)Esta prueba se usa para

diferenciar especies dentro del géneroStaphylococcusLa prueba de la coagulasa se utiliza

para la identificación definitivade S. aureus y con frecuencia se usa para indicar virulencia

opatogenicidad

22. Que prueba de laboratorio nos permite evidenciar la conversión del fibrinógeno

en fibrina. Porque puede realizar esto. Q coco gram positivo lo hace.

La prueba de la reptilasa que es un tiempo de coagulación similar al tiempo de trombina

pero donde el coágulo es producido por la acción de una enzima del veneno de víbora

denominada reptilasa.

La reptilasa activa y transforma al fibrinógeno.

La reptilasa tiene una acción similar a la de la trombina. Se aísla del veneno de la víbora

Bothrops Atrox. Difiere de la acción de la trombina sobre el fibrinógeno en que libera

solamente fibrinopéptido A. En cambio la trombina hidroliza los fibrinopéptidos A y B del

fibrinógeno.

El tiempo de reptilasa no es inhibido por heparina y puede utilizarse en lugar del tiempo

de trombina en la evaluación del fibrinógeno en pacientes heparinizados.

Cuando se evalúan estados de hipercoagulabilidad, un resultado normal del tiempo de

reptilasa excluye la presencia de fibrinógeno anormal.

Si el efecto de la heparina es la única causa de tiempo de protrombina prolongado, el

tiempo de reptilasa será normal. Su utilidad radica en que nos ayuda val diagnóstico

diferencial entre hipofibrinogenemias y contaminación con heparina o productos de

degradación de la fibrina.

S. aureus se diferencia del resto porque tiene capacidad de coagular el plasma citratado

debido a la producción de coagulasa. El resto de especies no son capaces de hacerlo y

se las agrupa como estafilococos coagulasa negativos (SCN). Coagulasa: convierte el

fibrinógeno en fibrina, coagulando el plasma, creando un foco donde es difícil que

accedan los leucocitos y los antimicrobianos.

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23. Que importancia tien obtener una prueba de coagulasa positiva. O bien para q

se usa la prueba de la coagulasa.

Se utiliza de manera especifica para diferenciar especies dentro del genero

estaphilococos .un resultado positivo de la prueba coagulasa constituye por lo comun el

criterio de diagnostico definitivo para la identificación de stafilococos aureas, subesp.

Aureus y con frecuencia se utiliza para indicar la virulencia o patogenicidad.

24. Cuantos tipos de coagulasa se dtectan en estos MO positivos ala prueba

Fundamento: S. aureus posee dos tipos de coagulasa: a) Una endocoagulasa o

coagulasa ligada o clumping factor, que está unida a la pared celular. Esta actúa

directamen te sobre el fibrinógeno provocando la formación de coágu los o grumos

cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado (test en lámina). b)

Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor sérico

(CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno pro

duciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

Mientras el test en tubo es definitivo, el test en lámina nos sirve como una rápida y

económica técnica de tamizaje (screening). Entre un 10 a 15% de las cepas de S. aureus

se mostrarán negativas en el test en lámina, por lo cual en esos casos se hace necesario

realizar un test en tubo.

25. Que es el factor de cumpling

Es la coagulasa ligada también conocida como "factor de Clumping " se puede detectar

mediante la realización de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una

prueba de coagulasa de tubo.

26. Describa la prueba de la coagulasa en portaobjeto y en tubo cual es la

diferencias entre las dos pruebas.

Prueba de portaobjetos

Prueba del portaobjetos se hace conjuntamente con un control negativo para descartar

auto aglutinación. Se ponen 2 gotas de solución salina en el portaobjetos microescópico

rotulado con un número de muestra, Test (T) y control (C). Las 2 gotas son emulsionadas

con la prueba de organismo mediante el uso de un cable de lazo, cable recto, o un palo

de madera. Se pone una gota de plasma (plasma de conejo con anticoagulante (EDTA)1 )

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en la gota de solución salina inoculada correspondiente a la prueba y se mezcla bien con

un una varilla de madera. Agitar el portaobjeto con cuidado unos 10 segundos.

Si es positivo: Se podrá observar aglutinación macroescopica en el plasma en los

10 segundos mientras que no se observara aglutinamiento en la gota de solución

salina.

Si es negativo: No se observara aglutinamiento.

NOTA: Si la prueba de la coagulasa de portaobjetos fuera negativa, deberìa hacerse una

prueba de tubo como confirmación. El aglutinamiento en las dos gotas es un indicativo de

auto aglutinación y por lo tanto debemos descartar la prueba de tubo.

Prueba del tubo de ensayo

coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo

La prueba se utiliza plasma que ha sido incoculado con una colonia de staphylococcal

(por ejemplo, con un coco gram positivo catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37

grados Celsius en 1½ horas. Si es negativo entonces continuamos la incubación por unas

18 horas.

Si sale positivo (por ejemplo, la colonia problema es S. aureus), el suero

coagulará,2 dando como resultado un coágulo (a veces el coágulo esta tan

desarrollado que el líquido se solidifica completamente).

Si sale negativo, el plasma permanece líquido. Un resultado negativo podría

indicar que se podría tratar de S. epidermidis pero solo con unas pruebas más

precisas se puede confirmar este hecho, como por ejemplo el API o métodos deBBL

CRYSTAL.

27. Mencione 4 pruebas de identificación rápida para cocos Gram positivos.

Prueba de la catalasa

Prueba de la coagulasa

Prueba de PYR = pirrolidonil-arilamidasa

Prueba de oxidasa.

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28. Mencione 6 pruebas para la identificación de cocos grama positivos .

DN asa

Prueba de manitol salado

Bilis esculina

CAMP

Hidrolisis del hipurato

Voges-proskauer

29. Mencione 3 pruevas para medir la sensibilidad a los antibióticos y establecer diferencias entre especies de ccos gran positivos.

30. Por que no debemos realizar la prueba de la catalasa en los medios de agar sangre.

PRUEBA DE LA CATALASA

Objetivo: Separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa-).

Fundamento: La enzima catalasa descompone elperóxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo lafórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera lasbacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que esun producto final del metabolismo aerobio de losazúcares.

Procedimiento: Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobreun portaobjetos y luego se transfiere una porción decolonia sobre el H2O2 realizándose una emulsión. En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasay pueden falsear los resultados.Esta prueba también puede realizarse en un aislamiento en tubo, simplemente colocando unas gotas de H2O2 dentro del mismo.

31. Por que en la prueba de coagulasa debemos Utilizar plasma con EDTA y no citrato

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La prueba de la cogulasa.

Objetivo: Permite separar S.aureus, que posee coagulasa, de las otras especies de estafilococos que genéricamente se denominan coagulasa negativos.

Fundamento: S.aureus posee dos tipos de coagulasa:

a. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la pared celular. Esta actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación de coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado (test en lámina).los oraganism diferentes a los estafilococos pueden coagular el plasma de conejo, pero no por que sean p`roductores de cagulasa sino por que utilizan el citrato epleado como anticoagulante en la obtención del plasma Para obviar esta posible fuente de error, se recomienda utilizar plasma en el cual se ha utilizado EDTA como anticoagulante.

Recomendado plasma de conejo con EDTA , no se debe usar el plasma citratato por que los Mos que pueden usar citrato ej especies de Enterococcus produciran resultados positivos confundiendose con staphylococcus.

b. Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor (CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

32. Explique por que algunos cocos gram positivos dan las prueba de coagulasa negativas después de 4 horas de incubación a 35 grados centígrados y que debemos hacer para estar seguros del resultado.

Las pruebas negativas luego de 4 horas de incubacion a 35ºc dejar a temperatura ambiente y leer luego de 18 a 24 horas a fin de evitar la fibrinólisis que producen algunas cepas al ser incubadas por tiempo prolomgado a 35ºc.

33. Que es la Prueba del PYR, como se realiza, cual es su fundamento,para que se utiliza.

Prueba rápida y simple utilizada fundamentalmente para la identificaciónde Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.Permite la caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcusy de microorganismos símil estreptococos.

Fundamento

La prueba del “PYR” permite la identificación presuntiva de ciertas bacterias en base a la actividad enzimática l-pirrolidonilarilamidasa(PYRasa). Los microorganismos que contienen esta enzima hidrolizanen forma rápida el sustrato presente en los discos y liberan ungrupo pirrólico que reacciona con el reactivo cinamaldehído originándoseun compuesto de color rosado-rojizo.

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Constituye una prueba altamente sensible y de utilidad como losdiscos de Bacitracina 0.04 U (REF B1240427) y la prueba de toleranciaa la sal (REF Enterococos Medio Hipertónico).También se la utiliza junto con la prueba de leucinoaminopeptidasa (Discos de L.A.P. REF B1241424) y los discos de Vancomicina30 μg (REF B1134027) para la identificación de de cocos Grampositivos catalasa negativa no productores de beta hemólisis.

Debe tenerse en cuenta que algunas especies de estafilococos (Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus scheleiferi, Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus intermedius) son generalmente PYRasa positivo, por lo que se puede utilizar esta prueba en su identificación.

Contenido y composición

Código B1240624: envase x 25 discos y reactivo revelador.Discos impregnados con el sustrato pirrolidonil-β-naftilamida.

Reactivo revelador: solución de p-dimetilamino cinamaldehído.

Instrucciones:

Almacenamiento A 2-8 °C.

Procedimiento

Siembra

A partir de un cultivo puro en agar sangre del microorganismo enestudio, del cual se ha identificado que son cocos Gram positivoscatalasa negativa, hacer una suspensión densa en 50 μl de soluciónfisiológica estéril, y agregar un disco de PYR-A-ENTEROCOCOS.

Incubación

En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 30 minutos.Cuando se utiliza para diferenciar Staphylococcus, la incubación sedebe realizar, según algunos investigadores, en aerobiosis, a 35-37ºC durante 2 horas.

Interpr etación de los resul tados

Agregar dos gotas de reactivo cinamaldehído y dejar a temperaturaambiente hasta 5 minutos. Observar el color desarrollado:

- Positivo: presencia de actividad enzimática pirrolidonilarilamidasa:disco color rosado a rojo.

- Negativo: ausencia de actividad enzimática pirrolidonilarilamidasa: disco y/o solución color amarillo o incoloro.

Page 22: CUESTIONARIO-IDENTIFICACION DE COCOS GRAM + resuelto

34. Que es la Prueba de la DNAsa, cual es su fundamento, como se reporta, para que la utilizamos.

Uso

Medio de cultivo utilizado para la detección de enzimas desoxirribonucleasas.Es especialmente útil para la diferenciación entre especies de estafilococos, así como para la diferenciación de Serratia spp. de especies de Klebsiella y Enterobacter.

Fundamento

En el medio de cultivo, la tripteína es la fuente de nitrógeno, aminoácidos, y aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.

El ácido desoxirribonucleico (DNA), se encuentra en grado altamente polimerizado, y es el sustrato de la enzima desoxirribonucleasa(DNAsa), la cual lo hidroliza. El cloruro de sodio mantiene elbalance osmótico y el agar es el agente solidificante.Este medio de cultivo, permite diferenciar bacterias que poseen la enzima desoxirribonucleasa de aquellas que no la poseen.La presencia de la enzima, se puede detectar mediante el agregadode ácido clorhídrico 1N.

El ácido desoxirribonucleico hidrolizado presenta transparencia, mientras que el ácido desoxirribonucleico polimerizado, precipita y torna opacidad al medio de cultivo.

Almacenamiento

A 2-8 ºC.

Procedimiento

Siembra: A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar un inóculo denso, ya sea en estría o por la técnica de spot

Incubación

En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-48 horas.

Interpretación de los resultados

Observar el crecimiento microbiano y cubrir la placa con de ácido clorhídrico 1N, y observar dentro de los primeros 5 minutos.

Positivo: halo claro, transparente alrededor del crecimiento bacteriano.

Negativo: el medio se observa opaco.

35. Paraqué se utiliza la placa de Agar manitol Sal.

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Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.

Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria.

También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.

Fundamento

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH.

Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.

Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.

Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.

Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o púrpura.

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36. En que se basa la Prueba de la bilis-esculina, porque es importante la concentración de bilis en el medio de cultivo, que ocurre en el medio de cultivo .

USO

Medio utilizado para el aislamiento e identificación presuntiva de estreptococos del grupo D.

FUNDAMENTO

Medio de cultivo nutritivo por la presencia de extracto de carne y peptona de carne que aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. Los estreptococos del grupo D crecen rápidamente en el agar bilis esculina e hidrolizan la esculina, que en presencia de iones hierro forman un compuesto de color verde oliva hasta negro. La bilis de buey inhibe el desarrollo de la flora acompañante. El agar es el agente solidificante.

Algunos bacterias son capaces de hidolizar el glucósido esculina una sustancia de origen vegetal que presnta una cadena glucosidica y un anllo aromatuco. Su hidrolisisi libera glucosa y esculetina.en el edio de cutivo agar bilis esculina, la esculetina liberada se combina con los iones ferrics del medio para formar un cmplejo de color negro que videncia la reacción positiva de hidrólisis. También la esculina pero no los productos de su hidroliss tienen la capacidad de florecer en presencia de luz UV a 360nm por tanto también se interpreta como positiva la prueba si el medio cultivo ha perdido fluorescencia.

Su dteerminacion es imporante para identificar especies del genero pseudomonas, asi como otras bacteria Gram negativas no fermentadoras, además si la prueba se hace en presencia de bilis su determinacon es muy útil para identificación presuntiva de streptococcus del grupo D y de enterococcus, ls cuales dan la prueba posiivia.la mayoriad e streptococcus del grupo viridans son capaces de hidrolizar la esculina, pero no crecen bien en presencia de bilis por el contrario otras bacterias que podrían crecer en el medio no hidrolizan la esculina en amnos asos la prueba se considera negativa.

37. Que es el Factor CAMP, que significan las siglas, cuál de las especies de las familias en estudio la tienen.

La prueba de CAMP se utiliza para la identificación presuntiva de S Agalactiae (grupo B deLancefield). En esta prueba se observa un efecto sinérgico que se produce al interactuar el factor CAMP producido por cepas de S Agalactiae con la hemolisina β de Staphylococcus aureus.

Ambos son productos extracelulares que difunden en el medio de cultivo para producir dicho efecto en forma deflecha cuando se utilizan placas de agar sangre preparada con eritrocitos ovinos o bovinos.

FUNDAMENTO

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Algunos microorganismos sintetizan una proteína que produce un efecto sinérgico con la betahemolisina de S. aureus sobre eritrocitos ovinos ybovinos. Si ambos microorganismos se siembran próximos en un medio de agar sangre, se producirá un fenómeno lítico en el punto de intersección de los dos microorganismos.

La proteina se denominó factor CAMP por las iniciales de los nombres de los autores que descubrieron este fenómeno con la proteina B de Streptococcus agalactiae, y esta prueba permite identificar presuntivamente este microorganismo.

38. Para que la prueba de positiva que debemos hacer (procedimiento)

Procedimiento: Se realiza estriando un cultivo de estreptococo ß-hemolítico en forma perpendicular a una estría de un estafilococo productor de ß-lisina en agar sangre. Se incuba 18-24 horas a 37ºC.

Interpretación de los resultados: La prueba positiva se evidencia por la presencia de una zona de potenciación de la hemólisis en forma de puntas de flecha en el lugar donde se contactan las dos estrías.

39. Como se observa un CAMP test positivo

Interpretación de los resultados: La prueba positiva se evidencia por la presencia de una zona de potenciación de la hemólisis en forma de puntas de flecha en el lugar donde se contactan las dos estrías.

40. Describa la Prueba del hipurato de sodio, fundamento, utilidad, y procedimiento, como se reporta

Fundamento:Detectar la capacidad del la bacteria de hidrolizar el hipurato mediante la enzima hipuricasa.La hidrólisis del hipurato dará como resultado glicina, que reaccionará con la Ninhidrina provocando un cambio de color. Método:- Realizar una suspensión bacteriana en 0.01 ml de agua destilada- Añadir un disco de hipurato- Incubar durante 2 horas a 37ºC- Revelar la suspensión añadiendo II gotas de Ninhidrina para detectar la formación de       glicina- Incubar durante 30 minutos a 37ºC

Interpretación de los resultados:La aparición de un color púrpura intenso pondrá de manifiesto la presencia de glicina, dando como resultado una prueba positiva.

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Si el hipurato no se hidroliza a glicina, tras  la adición del reactivo de Ninhidrina no habrá cambio de color dando como resultado una prueba negativa.

41. Que es la Prueba de la susceptibilidad a la Novobiocina, fundamento, procedimiento e interpretación.

Objetivo: Separar S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa negativos.

Fundamento: Varias especies del Género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina (disco de 5 µg).

Procedimiento: Se siembra una placa de agar sangre con un hisopo embebido en una suspensión de la cepa a estudiar. Luego se aplica el disco de novobiocina y se incuba a 35º por 18 horas.

Interpretación de resultados: Un halo de inhibición de crecimiento menor o igual a 16mm corresponde a S.saprophyticus. Un halo de inhibición mayor de 16mm corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.

42. Que es la Prueba de la Bacitracina, cual es su fundamento, procedimiento , interpretación, consideraciones a tener

Prueba utilizada para la diferenciación de estreptococos beta hemolíticos del grupo A de otros estreptococos beta hemolíticos..

FundamentoLa bacitracina es un antibiótico que inhibe la síntesis de pared celular bacteriana, y a la concentración que se encuentra en los discos (0.04 U) inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolíticos del grupo A de Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos.

Los micrococcus y los estomatococcus también son inhibidos, mientras que los estafilococos coagulasa negativo son resistentes. Un resultado sensible, es presuntivo de la presencia de estreptococo grupo A, y se puede incrementar además el valor diagnóstico mediante la realización de la prueba del PYR (PYR-A-Enterococos, código B12-406-24

Siembra1-Realizar una suspensión densa del microorganismo en estudio (de turbidez igual a la del estandard 0.5 de la escala de Mac Farland).

2-Utilizando un hisopo estéril, hisopar una placa de agar sangre.

3-Aplicar un disco de Bacitracina de 0.04 U sobre la superficie de la placa.

IncubaciónIncubar durante 24 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera5-10% de CO2. 

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Resultados

Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibición del desarrollo alrededor del disco de bacitracina.

Sensible: presencia de halo de inhibición del desarrollo alrededor del disco.

Informar: estreptococos beta hemolíticos presuntivamente del grupo A por la prueba de bacitracina.

Resistente: ausencia de halo de inhibición del desarrollo alrededor del disco.

Informar: estreptococos beta hemolíticos que presuntivamente no pertenecen al grupo A por la prueba de bacitracina.

43. Esplique la prueba de la optoquina, a su utilidad y resultados que nos indican

Discos embebidos en clorhidrato de etilhidrocupreína (optoquina) útil para diferenciar Streptococcus pneumoniae (sensible) de Streptococcus viridans (resistente). 

Fundamento Las colonias de Streptococcus pneumoniae son inhibidas por 5 µg de optoquina contenida en un disco de papel de filtro aplicado sobre la superficie de una placa de agar sangre. Las colonias de S. pneumoniae son mucoides o crateriformes. Colocar un disco de optoquina sobre el inóculo. Incubar toda la noche en CO2 5-10% a 35°C. Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibición alrededor del disco de optoquina. Medir el diámetro de la zona de inhibición incluyendo el diámetro del disco.

Interpretación Una zona de inhibición mayor o igual de 14 mm es presuntiva para Streptococcus pneumoniae. Si no se observa zona de inhibición es compatible con estreptococos alfa hemolíticos diferentes al Streptococcus pneumoniae (generalmente S. viridans). Las zonas de inhibición inferiores a 14 mm de diámetro son cuestionables para Streptococcus pneumoniae y deben ser confirmadas por la prueba de solubilidad en bilis. 

44. Describa brevemente lo que la optoquina, bacitracina, novobiocina

La novobiocina es un curioso y viejo antibiótico natural (obtenido en 1956) al que se reconocen varios tipos de mecanismos de acción, que al haberse aislado de varias fuentes ha recibido varios nombres. Un disco de papel con una carga de 5 microgramos permite diferenciar Staphylococcus saprophiticus que es resistente, de Staphylococcus epidermidis. Como el 98% de los estafilococos coagulasa negativos aislados en clínica son de las especies S. epidermidis y S. saprophyticus, el uso dos pruebas sencillas.

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Coagulasa (S. aureus es coagulasa +) y sensibilidad a novobiocina facilita la identificación de los estafilococos patógenos. La optoquina (etilhidrocupreina), derivado de la quinina se propuso para el tratamiento de neumonías. Ha quedado reducido su uso al diagnóstico de laboratorio por la alta toxicidad en el hombre. Los aislados de Streptococcus sensibles a la optoquina depositada en un disco de papel cargado con 5 microgramos corresponderán a Streptococcus pneumoniae. La bacitracina es uno de los primeros antibióticos conocidos. Producido por cepas de Bacillus se ha usado tópicamente y en veterinaria. Al inhibir selectivamente a los Streptococcus pyogenes se utiliza de forma similar a la optoquina para el diagnóstico de en el laboratorio.

45. De las pruebas de sensibilidad utilizadas en la identificación de cocos gram positivos, mencione los niveles de cortes para dar un resultado como sensible o resistentes

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA Es un ATB que inhibe el crecimiento de Staphylococcus epidermides. Técnica: Efectuar una siembra masiva en Agar Mueller Hinton colocar el disco de Novobiocina de 5 ug. Incubar 35ºC x 24h. Resultados: SENSIBLE: RESISTENTE: ≥ 16 <16

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA La Optoquina inhibe selectivamente al desarrollo del Streptococcus Pneumoniae. Técnica: Hacer un inoculo equivalente al tubo 0.5 de la escala de MC. Farland Hisopar el inoculo en Agar MH sangre al 5% colocar el disco de optoquina Incubar a 35º C de 20 – 24h en lata con vela para proporcinar 5% de CO2 Resultados: SENSIBLE: Mayor 14 mm Halos entre 9 – 14 deben ser Confirmado con la prueba de Solubilidad en Bilis.

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA Es un ATB que inhibe el desarrollo del Estreptococos pyogenes a bajas concentraciones 0.02 a 0.04 unidades. Técnica: Hacer una siembra masiva en placa de Agar sangre, colocar el disco de Bacitracina. Incubar a 35ºC por 24h. Resultados: SENSIBLE: Cualquier halo de inhibición.

46. Realice un cuadro con todas las pruebas, enumera para cada una de ellas los reactivos a utilizar y la función que tienen en los procedimientos que realizaremos en el laboratorio

Esa en la guia

http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2019.pdf

Page 29: CUESTIONARIO-IDENTIFICACION DE COCOS GRAM + resuelto

http://paratecnicosdelaboratorio.blogspot.com/2012/12/hidrolisis-del-hipurato.html

http://www.britanialab.com.ar/espanol/BACITRACINA.htm

http://britanialab.com.ar/espanol/k08_03.html

http://www.seq.es/component/content/434?task=view

http://es.slideshare.net/Albamarina7/cocos-gram-positivos-31650030

https://books.google.com.ni/books?id=jyVQueKro88C&pg=PA684&lpg=PA684&dq=que+es+la+bilis+esculina+en+microbiologia&source=bl&ots=5OHj_19NgE&sig=kKTutqGyPgz7zl27GN7fkSAcbro&hl=es&sa=X&ei=BZMRVeK2BtP3yQT_oICADg&ved=0CDgQ6AEwBg#v=onepage&q=que%20es%20la%20bilis%20esculina%20en%20microbiologia&f=false

http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/StreptococcusyEnterococcus.pdf

conferencia.

http://www.codeinep.org/control/Enterococcus.pdfv

https://books.google.com.ni/books?id=TdsoWPEYaoUC&pg=PA36&lpg=PA36&dq=agar+sangre+en+estreptococos+y+estafilococos+diferencias&source=bl&ots=9NlC0sWOvT&sig=XhxHieLo2qldgtbu-s7UyrH40ys&hl=es&sa=X&ei=OKoRVb3uN4KzyAT13YDYBA&ved=0CDoQ6AEwBQ#v=onepage&q=agar%20sangre%20en%20estreptococos%20y%20estafilococos%20diferencias&f=false

https://quimicoclinico.wordpress.com/2008/04/19/articulo-sobre-cocos-gram-positivos-estafilococo-y-estreptococo/

https://microral.wikispaces.com/Cocos+Gram+positivos+II+y+cocos+Gram+negativos

http://britanialab.com.ar/espanol/k08_03.html