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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA
VALIDACION DEL METODO ANALITICO PARA LA
DETERMINACION DE AMILASA EN EL LABORATORIO
QUINTANILLA S.R.L.
INFORME DE INTERNADO
PARA OPTAR EL:
TÍTULO
DE QUÍMICO FARMACÉUTICO
AUTOR: Br. PERALTA TINGAL ELENA ELIZABETH
ASESOR: Dr. Q.F. PEDRO MARCELO ALVA PLASENCIA
TRUJILLO – PERU
2009
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DEDICATORIA
A Dios
Porque siempre me guíe e ilumina, agradezco infinitamente por
darme el coraje para seguir adelante.
Te llevo siempre en mi vida y en todo momento…
A mi mamita Lidia
Por su amor incondicional
Me enseñaste el valor de la verdad y confiaste en mí
Gracias por tu apoyo, escuchar tus palabras me llenaron de
coraje para seguir adelante. Te quiero mucho
A mi papito Segundo
Por su apoyo incondicional
Por hacerme sentir fuerte para cumplir mis metas
Gracias de todo corazón, espero nunca defraudarte y ser motivo
de orgullo. Te quiero mucho
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A mi esposo Oliverio
Por ser mi amigo y compañero de vida
Gracias por tu apoyo constante e incondicional, por creer en mí
y hacerme sentir importante, por tu cariño, paciencia y
comprensión, sé que siempre estaremos juntos para apoyarnos.
Te amo
A mi pequeñita Milagros
Por ser la razón de mí existir
Tú llenaste mi vida de dicha e ilusiones. Gracias por ser tan
pequeña y entenderme, por tu cariño, tus abrazos y tu alegría.
Mi vida no sería jamás la misma sin ti. Le ruego a Dios
siempre tengas salud y felicidad.
Te amo
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JURADO DICTAMINADOR
Mg. Q.F. Nelly Jave M. (Presidente)
Mg. Q.F. Jesús Gallardo M. (Miembro)
Dr. Q.F. Pedro Alva P. (Miembro)
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PRESENTACIÓN
Señores miembros del jurado:
Dando cumplimiento a lo establecido por el Reglamento de Grados y
Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional
de Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado criterio profesional el
presente informe internado intitulado “Validación del método analítico para
la determinación de amilasa, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L”., para
optar el Grado de QUÍMICO FARMACEÚTICO.
Es propicia esta oportunidad para manifestar mi más sincero
reconocimiento a nuestra Alma mater y toda su plana docente que, con su
capacidad y voluntad, contribuyen con mi formación profesional.
Dejo a vuestro criterio señores miembros del jurado dictaminador la
calificación del presente Informe de Internado.
Trujillo, Julio del 2009.
Peralta Tingal Elena Elizabeth
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RESUMEN
La validación del método analítico para la determinación de Amilasa se realizó en el
Laboratorio Quintanilla S.R.L – Clínica Peruano Americana. Antes de dar inicio a la
validación se realizó la calificación del Fotómetro BPC BioSed, que incluye: a)
Calificación de la instalación (IQ), b) Calificación Operacional (OQ) y c) Calificación
de la Performance (PQ). Los parámetros validados fueron: Linealidad, Repetitividad,
Precisión intermedia y exactitud, en 2 niveles; parámetros que se deben realizar
para una validación Tipo I, según la USP XXII. De los parámetros evaluados
estadísticamente, se comprobó que no existe diferencia significativa en ambos
niveles, así se puede utilizar 500 ul reactivo, con 10 ul de muestra bajo las mismas
condiciones; es lineal nivel 1 y 2 (> 0.990); Preciso nivel 1 y 2 (C.V < 4.0 %); exacto
nivel 1 y 2 (texp < ttab).
Palabras clave: Linealidad, Precisión, Exactitud
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ABSTRACT
The validation of the analytical method for the determination of amylase was made
in the Quintanilla Laboratory S.R.L. yields of the American Peruvian Clinic. Before
beginning the validation, photometer BPC BioSed qualification was made, it
includes: a) qualification of the installation (IQ), b) operational qualification (OQ) and
c) performance qualification (PQ). The validated parameters that must be made for
a validation type I, according to USP XXII. From the statistically parameters
evaluated, it was verified that significant difference in both levels does not exist,
That way 500 ul can be used reactive, with 10 sample ul under the same
conditions; Level is linear 1 and 2 ( > 0,990 ); Precise level 1 and 2 ( C.V < 4,0 % );
Exact level 1 and 2 ( texp < ttab ).
Key words: Linearity, Precision, Exactness
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ÍNDICE
PAGINAS PRELIMINARES
Dedicatoria………………………………………………………………………………….…… i
Jurado dictaminador …………………………………………………………….………… iii
Presentación…………………………………………………………………………………… iv
Resumen……………………………………………………………………………….………… v
Abstract………………………………………………………………………………..………… vi
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………......……………1
MATERIAL Y MÉTODO…………………...…………………………………………..………5
RESULTADOS ……………………….…………………………………………………..……19
DISCUSIÓN……………………………………………………………........…………...……25
CONCLUSIONES……….…………………………………………………….……….………28
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………….………….…………….…29
ANEXOS……………………………………………………………………..…………….….…32
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I. INTRODUCCIÓN
En el mundo actual donde el interés de las industrias es mantener
controladas todas las variables que intervienen en los procesos productivos,
toman particular importancia los procesos de validación como una herramienta
importante para asegurar la trazabilidad de cada una de las variables que
intervienen en un proceso 7,14.
Para cualquier empresa es de suma importancia contar con sistemas que
demuestren que el producto o servicio final es de calidad. Esto toma una
relevancia aún mayor en un laboratorio de análisis clínicos, en donde deben
contarse con los estándares de calidad adecuados, de lo contrario pudiese tener
consecuencias que perjudiquen al paciente. Debido a esto, en los últimos años ha
tomado fuerza el concepto de “Aseguramiento de la Calidad”, que no es otra cosa
que demostrar que lo que declara de calidad, efectivamente lo posea 11,15.
La validación es la herramienta que nos da la certeza de tener un proceso
más eficiente y con menor ocurrencia de reprocesos y pérdidas. La validación es,
por lo tanto, un procedimiento claramente diseñado para establecer en forma
documentada que un sistema, un equipo, un proceso de producción o una
metodología analítica de control de un producto, cumple con los parámetros de
calidad especificados 2,3.
Para implementar un plan de validación es necesario un trabajo en conjunto
de las distintas áreas de un laboratorio, además, la colaboración y capacitación
del personal encargado. Por esta razón, el personal debe estar debidamente
entrenado y consciente que su trabajo es una gran responsabilidad 6,11.
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El hecho de contar con los procesos validados no sólo significa para un
laboratorio tener procesos de calidad que le permitan garantizar el proceso, sino
también significa un valioso ahorro en tiempo y dinero, ya que se minimizan los
riesgos de errores generados durante el proceso 1,3.
Durante la evaluación de la competencia técnica de los laboratorios clínicos,
la demostración de la validación y verificación de los procedimientos de examen
requiere la aplicación de criterios técnicos uniformes y consistentes 4.
La calidad de los servicios se apoya en la confiabilidad y uniformidad de las
mediciones, cuyo fundamento está establecido en la trazabilidad y en la
evaluación de la incertidumbre de las mismas 10.
Todo lo que se puede medir se puede controlar. Las mediciones recopilan
datos cuyas mediciones generan datos cuya evaluación constituye una de las
funciones más importantes de un sistema de calidad que pueden usarse
efectivamente para el control de procesos. Entre otros, la medición sistemática
puede tener los siguientes propósitos: a) Verificar la conformidad frente a los
requisitos (eficacia), b) Determinar la eficiencia de un proceso (competencia), c)
Suministrar datos con los que se hará un análisis de base (validación) 5.
Las amilasas son enzimas que degradan moléculas hidrocarbonadas
complejas en componentes más pequeños. La amilasa es producida por el
páncreas exócrino y las glándulas salivales para ayudar a digerir el almidón.
También se ha detectado la presencia de amilasa en hígado, trompas de Falopio,
músculo estriado, tejido adiposo, y leche humana. La determinación del nivel de
amilasa sérica se utiliza fundamentalmente para hacer el diagnóstico de
pancreatitis aguda. En este caso, se observa casi siempre un aumento en las
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primeras doce horas, alcanzándose el máximo después de veinte a treinta horas
de producido el ataque. El aumento de la amilasa urinaria esta retardado unas
seis a diez horas frente a la amilasa sérica. La amilasa sérica también esta
aumentada en: afecciones que producen bloqueo de la secreción salival como
parotiditis y paperas, úlcera péptica perforada, obstrucción intestinal, pancreatitis
crónica, carcinoma de cabeza de páncreas, colecistitis y apendicitis 18.
Para desarrollar la validación de la amilasa se aplican ciertos parámetros:
Linealidad, precisión y exactitud; estos parámetros se aplican sobre el analito
para determinar si el método cumple con las especificaciones y los resultados
que se obtengan sean confiables y puedan constituir un apoyo diagnóstico a la
salud de los pacientes
La exactitud expresa el grado de proximidad entre el valor que es aceptado
convenientemente como el valor verdadero, valor nominal, teórico o un valor de
referencia y el valor encontrado experimentalmente. Es la capacidad del método
analítico para proporcionar resultados lo más cercanos posibles al valor teórico o
nominal. Matemáticamente se expresa como el valor numérico del error
sistemático (diferencia entre el valor medio hallado y el verdadero) o bien como el
error relativo porcentual.
La Linealidad mide Capacidad del método para proporcionar resultados que
son directamente o por medio de transformaciones matemáticas proporcionales
a la concentración del analito en la muestra dentro de un rango establecido
La Precisión mide la capacidad de un método para proporcionar resultados
próximos entre sí, grado de dispersión de los resultados analíticos respecto a su
valor medio. Se puede estudiar a 2 niveles: La Repetitividad evalúa la precisión
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del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra en las
mismas condiciones operativas (aparatos, reactivos, analistas) en un mismo
laboratorio y un periodo de tiempo cero; la Precisión intermedia evalúa la
precisión del método frente a las variaciones internas del laboratorio (analito, día,
instrumento, etc).
La validación demuestra que, siguiendo las actividades de un proceso tal y
cómo están descritas, se puede obtener un producto con los requisitos
especificados, ya que cada una de las etapas del proceso es diseñada y
controlada para tener la máxima seguridad que el producto cumple con las
especificaciones 9,15.
Los resultados obtenidos en el presente informe demostraron que el método
es lineal en el intervalo de las concentraciones de 50 % hasta el 150 % de la
muestra; preciso porque cumple la repetitividad (Nivel 1: C.V 2.0384 % y Nivel 2:
0.8572) y precisión intermedia (Nivel 1: C.V 1.5780 %, Nivel 2: 0.7260 %); exacto
porque no hay diferencia significativa entre la recuperación media (Nivel 1:
100.53 % , Nivel 2: 100.01) y el 100 % teórico.
Por lo tanto, al determinar los parámetros de validación, concluimos en dar
como validado al método analítico para la determinación de amilasa, en el
laboratorio quintanilla S.R.L.
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II. MATERIAL Y MÉTODOS
1. MATERIAL
1.1 MUESTRA
Standartrol Wiener 2 niveles, a partir del cual se obtuvieron las
concentraciones deseadas.
1.2 MATERIAL DE LABORATORIO
Baño María
Pipetas volumétricas de 5 mL
Micropipetas de 10 – 100 uL “Boeco”
Puntas descartables
Cronómetro
Calculadora
Tubos de vidrio
Guantes descartables
1.3 EQUIPOS
Los equipos fueron calibrados y verificados
Fotómetro automático BPC Biosed
Marca: “PRIME”
Calificación de la instalación: Enero 2009
Calificación de la operación: Enero 2009
Calificación de la Performance: Febrero del 2009
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1.4 REACTIVOS
Amilasa
Nombre: Amilasa 405 A
Fabricante: Wiener Lab (Argentina)
Lote: 0804007252
Vencimiento: 08/2009
Contenido del Kit de muestras: 3 x 10 mL
Composición
Sol. Contenida CNP – G3 2.25 mmol/l, acetato de calcio 6 mmol/l,
NaCl 70 mmol/l, tiocianato de potasio 90 mmol/L y Buffer MES pH 6,
mmol/l
Standartrol 2 niveles
Nombre: Standartrol 2 niveles
Fabricante: Wiener Lab (Argentina)
Lote: 0801002740
Vencimiento: 05/2009
Contenido del Kit de muestras: 3 x 5 mL
Composición
Standartrol S – E Nivel 1 (Normal): Suero homogeneizado y liofilizado
en viales para 5 mL con concentraciones normales o en los niveles
de decisiones médicas de metabolitos y enzimas
Standartrol S - E Nivel 2 (Patológico): Suero homogeneizado y
liofilizado en viales para 5 mL con concentraciones patológicas o en
los niveles de decisiones médicas de metabolitos y enzimas
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2. MÉTODO
2.1. DESARRROLLO DE PARÁMETROS EVALUADOS PARA LA VALIDACIÓN DEL
MÉTODO
Para validación el método analítico utilizado para la determinación de
amilasa, se tomaron los parámetros adecuados según criterios de
validación que aparecen reportados en la USP
Según la USP XXII, los métodos analíticos se clasifican en varias categorías
para su validación. Los métodos que son objeto de estudio en el presente
trabajo pertenecen a la categoría I y se clasifican como “Métodos
cuantitativos para la determinación de un analito”. Los parámetros de
validación que se deben considerar varían según la literatura consultada
para este tipo de métodos debe evaluarse: Linealidad, precisión y
exactitud.
A. Linealidad
Para evaluar la linealidad se procesaron 3 concentraciones
conocidas (50 %, 100 %, 150 %) del standartrol – 2 niveles, cada
uno por triplicado y por un mismo analista.
B. Precisión
Para determinar la Precisión del método, se tomaron en cuanta 2
parámetro: Repetibilidad y Precisión intermedia, que a continuación
se detalla:
Repetitividad
Se realizaron un número de 10 determinaciones del
standartrol en ambos niveles por un mismo analista, el mismo
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día, con los mismos reactivos y los mismos instrumentos de
medición.
Precisión intermedia
Se realizaron 10 determinaciones del standartrol en ambos
niveles, por 2 analistas diferentes, en días diferentes, pero con
los mismos reactivos y los mismos instrumentos de medición.
C. Exactitud
Se evaluó, tomando 3 concentraciones conocidas en ambos niveles,
se procedió según técnica y cada proceso por triplicado
2.2. PROCEDIMIENTO
A. Fundamento del Método:
La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2 – Cloro – p - nitrofenil
– α – D - maltotriósido (CNP), formándose 2 – cloro – nitrofenil – α
– D - maltósido (CNP –G2), maltotriosGa (G3) y glucosa. El CNP
absorbe a 405 nm y a la velocidad de aparición del color es
directamente proporcional a la actividad enzimática.
El uso de este sustrato definido, sustancia de estructura y peso
molecular conocido, posibilita la expresión de los resultados en U/I
y no requiere enzimas auxiliares.
Cada una de las determinaciones realizadas fue efectuada
empleado la técnica descrita en el inserto del Kit de reactivos; el
cual se describe a continuación:
- Preincubar 1 mL de Reactivo por 3 min. – Baño María–37º C
- Luego agregar 20 uL de muestra, agitar y mezclar bien
- Leer inmediatamente a 405 nm
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2.3. CALIFICACIÓN INSTRUMENTAL DEL FOTÓMETRO AUTOMÁTICO “PRIME”
La calibración del equipo con el cual se desarrolló la validación del método
analítico, es comprobar formal, sistemática y documentadamente de que el
equipo es el adecuado para los fines previstos, de tal forma se procede a la
calibración del equipo.
La validación del Fotómetro automático BPC Biosed “PRIME” es la
verificación del rendimiento del instrumento elegido para la técnica
analítica en particular, así como el software y el hardware que lo controla.
A. Calificación de la instalación (IQ)
Es la verificación documentada de que todos los aspectos claves de
la instalación están de acuerdo con las recomendaciones del
fabricante y corresponden a las especificaciones aprobadas en el
diseño
B. Calificación Operacional: (OQ)
Es la verificación de que los equipos funcionan en la forma
esperada y son capaces de operar satisfactoriamente; sobre todo
en el rango de los parámetros operacionales para los que han sido
diseñados. Se realiza por un técnico calificado (los parámetros
sobre los problemas y posibles soluciones, se pueden observar en
el anexo II del presente trabajo
C. Calificación de la performance (PQ)
Se realiza para demostrar la reproducibilidad del proceso bajo
condiciones normales de operación y bajo condiciones limites de
operación. Se verifica por el usuario, trabajando con estándares
certificados.
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2.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Para asegurar que los diferentes procedimientos de validación se
encuentran dentro de los límites establecidos.
2.4.1 EVALUACION ESTADÍSTICA DE LA LINEALIDAD
2.4.1.1 Cálculos de los parámetros de Regresión
a. Ecuación de la Recta de Regresión
Con los datos obtenidos en este ensayo se procedió a
elaborar la recta de regresión, la cual tuvo la siguiente
fórmula:
abxy
Donde:
ordenadas de eje elcon regresión de recta la de Intercepto a
regresión de recta la de Pendiente b
utilizadas muestras las deón Cocentraci x
niveles- 2 lStandartro departir a obtenidas Lecturas y
b. Fórmula empleada para calcular la pendiente o
coeficiente de regresión (b)
La pendiente o coeficiente de regresión fue
determinada empleando la siguiente fórmula:
n
xx
n
yxxy
b2
2
Donde:
ionesdeterminac de Número n
obtenidas Lecturas y
utilizadas muestras las deión Concentracx
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c. Fórmula empleada para el cálculo del intercepto (a):
n
xbya
d. Fórmula empleada para el Calculo del coeficiente de
Correlación (r):
n
yy
n
xx
n
yxxy
r2
2
2
2
e. Fórmula empleada para el Calculo del coeficiente
Determinación (r2)
22 )(rr
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2.4.1.2 Cálculos efectuados en el test de linealidad de la
Pendiente b
a. Cálculo del Test de Regresión (t de Student) para el
Coeficiente de Correlación
Se calcula el valor de regresión (Test de regresión) con
n – 2 grados de libertad y un intervalo de confianza de
95 % (α=0.05), luego se compara con el valor de la ttabla
(t tabulado) para el nivel de confianza requerido
)1(
)2(
2r
nrtregresion
Donde:
nCorrelació de eCoeficient :r
ionesdeterminac de Número :n
b. Cálculo del valor de la varianza residual( (2,yxS )
2
2
2,
n
xybyayS yx
Donde:
onesdetremiaci de nº n
abcisas de eje elcon Intercepto
regresión de recta la de Pendiente
a
b
c. Cálculo del valor de la varianza de la pendiente b (2bS )
n
xx
SS
yxb 2
2
2,2
)(
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d. Cálculo del valor de la desviación estándar de la
pendiente b (Sb)
Se obtuvo a partir del valor de la varianza de la
pendiente b
2bb SS
e. Fórmula empleada para determinar el Intervalo de
Confianza de la pendiente:
btsbCI .
Donde:
b pendiente la deestándar Desviación : S
libertad de grados 2-ny % 95 del ciasignifican de nivelun parat:t
regresión de recta la de Pendiente :b
b
tab
f. Cálculo del valor de texp
Se determinó empleando la siguiente fórmula
bS
bt exp
Donde:
b pendiente la deestándar Desviación : S
regresión de recta la de Pendiente :b
b
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2.4.1.3 Cálculos efectuados en el test de Proporcionalidad
a. Cálculo de la varianza del Término Independiente ( 2aS ):
n
x
ba SS 2
.22
b. Fórmula empleada para determinar la Desviación
Estándar del Término independiente:
2aa SS
c. Fórmula empleada para determinar el Intervalo de
Confianza del Intercepto a
btsaConfInt .
Donde:
b pendiente la deestándar Desviación : S
libertad de grados 2-ny % 95 del ciasignifican de nivelun parat:t
regresión de recta la de Pendiente :b
b
tab
El método será lineal si texp es mayor al ttab con el 95 % de
confianza y n-2 grados de libertad y el coeficiente de correlación (r)
es igual o mayor que 0.990 2.
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2.4.2 EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE LA PRECISIÓN
2.2.4.1 Repetitividad
a. Determinación de la media
Se utilizó la siguiente fórmula:
n
x
x
n
i
i 1
Donde:
ionesdeterminac de Numero
Media
n
X
b. Determinación de la Desviación Estándar (s)
Se utilizó la siguiente fórmula:
1
1
2
n
xx
s
n
i
i
c. Determinación del coeficiente de variación
Se utilizó la fórmula descrita a continuación
x
sCV
100*
Donde:
Media
estándar Desviación
X
S
d. Determinación del Porcentaje de Recuperación
Se utilizó la fórmula descrita a continuación
100Teórica.CC
Práctica.CC% xR
Donde:
iónConcentrac:CC
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2.2.4.2 Precisión Intermedia
Los valores de concentraciones prácticas, de la media, de
la desviación estándar y coeficiente de variación se
obtuvieron de manera idéntica que en el ensayo de
repetibilidad.
a. Test F (Snedecor)
Este test se realizó con el objetivo de comparar la
semejanza del comportamiento entre los 2 analistas a
través de su varianza obtenida por el tratamiento de los
datos individuales
2
2
1
2
analista
analista
calculadoS
SF
Si F calculado < F crítico (8; 0.05) no hay diferencia
significativa entre las varianzas obtenidas a través de
los 2 analistas
El método será preciso si en los ensayos de repetibilidad y
Precisión intermedia se obtienen coeficientes de variación
menores al 5 % 2.
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2.2.4.3 Evaluación estadística de repetitividad del método en la
reducción de reactivo (de 1 mL a 500 mL)
a. Varianza (S2)
1
)( 2
2
n
xxs
i
Donde:
grupo del ionesdeterminac de nº:n
prueba cada de promedioValor : x
prueba cada de uniarioValor :x
Varianza: S
i
2
b. Valores de Varianza Combinada ( 2, yxs )
2
)1()1(
21
222
212
,
nn
SnSns yx
Donde:
grupo) (2º ionesdeterminac de nº:n
) grupo (1º ionesdeterminac de nº:n
grupo segundo del Combinada Varianza: S
grupoprimer del Combinada Varianza:S
combinada Varianza: S
2
1
22
21
2yx,
c. Determinación de la prueba “t”
2
2,
1
2,
21
n
S
n
S
xxt
yxyx
Donde:
grupo segundo del Tamaño:n
grupoprimer del Tamaño:n
combinada Varianza:S
prueba cada de uniarioValor :x,x
2
1
2yx,
21
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2.4.3 EVALUACION ESTADÍSTICA DE LA EXACTITUD
2.4.3.1 Cálculo del % de recuperación
En la determinación de la exactitud del método los valores
de las concentraciones se expresaron como % de
recuperación de la siguiente forma:
100Teórica.CC
Práctica.CC% xR
1
1
2
2
n
xx
s
n
i
i
100ónRecuperaci (%) Media
Standar Desviación. xVC
2.4.3.2 Cálculos efectuados en la aplicación del t de Student
Para la aplicación de esta prueba fue necesaria la
determinación del valor de texp mediante la siguiente
fórmula:
CV
nRt
%100exp
Donde:
n variacióde eCoeficient CV
ionesdeterminac de nº n
ónRecuperaci de % los de promedio delValor R %
El método será exacto si el valor de ttab es mayor que el texp, al 95%
de confianza y n-2 grados de libertad en la aplicación del Test de
Student 2.
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III. RESULTADOS
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TABLA 1:
Evaluación estadística de repetitividad del método en la reducción de reactivo,
para el método utilizado para la determinación de la Amilasa
RESULTADO
ESPECIFICACIONES NIVEL 1 NIVEL 2
T DE STUDENT
(VARIANZA
COMBINADA)
2,137
1,173
< 2,228*
* Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.005
TABLA 2:
Valores de los parámetros de regresión lineal obtenidos en el ensayo de
Linealidad del método utilizado para la determinación de la Amilasa
RESULTADO
ESPECIFICACIONES NIVEL 1 NIVEL 2
ECUACIÓN DE LA
RECTA
y = 0,6123 x + 10,912
y = 3,1467 x + 115,79
---------------
PENDIENTE B
0,6123
3,1467
---------------
INTERCEPTO A
10,912
115,79
---------------
COEFICIENTE DE
CORRELACIÓN (r)
0,997
0,998
> 0,990*
COEFICIENTE DE
DETERMINACIÓN (r2)
0,994
0,996
> 0,990*
* Tabla de Significación de r para: g/l= n-2 y p=0.05
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TABLA 3:
Tratamiento estadístico de los parámetros del Test de Linealidad de la pendiente
(b), obtenidos en el ensayo de Linealidad del método utilizado para la
determinación de la Amilasa
PARÁMETROS DEL TEST DE
LINEALIDAD DE LA PENDIENTE
RESULTADO
ESPECIFICACIONES NIVEL 1 NIVEL 2
COEFICIENTE DE VARIACIÓN 1,3787 % 0,4758 % < 5 %
TEST DE REGRESIÓN
(T DE STUDENT) 34,0539 43,4153 > 2,3646*
INTERVALO DE CONFIANZA DE LA
PENDIENTE - 0,76 - 1,98 0,59 - 5,70 --------
INTERVALO DE CONFIANZA DEL
INTERCEPTO 10.62 - 11.21
115.48 –
116.11 --------
* Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.05
TABLA 4:
Tratamiento estadístico de los valores obtenidos en el ensayo de Precisión
(Repetibiliad y Precisión intermedia) del método utilizado para la determinación
de la Amilasa
PARÁMETROS DE REGRESIÓN
RESULTADO
ESPECIFICACIONES NIVEL 1 NIVEL 2
REPETIBILIDAD:
COEF. VARIACIÓN
2,0384 % 0,8572 % < 5 %
PRECISIÓN INTERMEDIA:
COEF. VARIACIÓN
1,5780 % 0,7260 % < 5 %
TEST F (SNEDECOR) 0,2165 0,4939 < 3.35*
* Tabla de la distribución F de Snedecor. para: g/l = n-2 y p= 0.05
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TABLA 5:
Tratamiento estadístico de los valores obtenidos en el ensayo de Exactitud del
método utilizado para la determinación de la Amilasa
PARÁMETROS DE REGRESIÓN
RESULTADO
ESPECIFICACIONES NIVEL 1 NIVEL 2
PARÁMETROS DE REGRESIÓN
PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN
REPETIBILIDAD:
COEF. VARIACIÓN PORCENTAJE DE
RECUPERACIÓN
PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN
100,53% 100,01% 98 % - 102 %
COEF. VARIACIÓN 1,3795 % 0,4880 % < 5 %
T DE STUDENT 1.1526 0.0068 < 2.306*
* Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.05
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IV. DISCUSION
La validación de un método analítico se mide con los parámetros que sean
evaluados para el proceso; estos serán dependientes directos de la naturaleza del
método y las especificaciones con las que se debe cumplir. En el método validado
en el presente trabajo, esta clasificado como un método de determinación
cuantitativo, a los que corresponden evaluar Linealidad, Precisión, exactitud y
sensibilidad; sin embargo las características señaladas como requeridas puedan
ser no necesarias y viceversa; así tenemos que la sensibilidad es un parámetro
del análisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos, es decir se emplea
cuando se realizan determinaciones de analitos a nivel de trazas, no siendo este
el caso no se realizó la aplicación en el proceso 5,13.
En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos de la comparación entre
el uso de 1000 uL y 500 uL de reactivo ; se realizaron 10 determinaciones con
cada uno : 1 mL de Reactivo frente a 20 uL de muestra y 500 uL de Reactivo
frente a 10 uL de muestra, bajo las mismas condiciones de reacción indicadas en
el inserto y para ambos niveles (normal y patológico); en la aplicación de la
prueba t de student, se obtuvo 2,137 y 1,173 nivel 1 y 2 respectivamente, siendo
estos menores al valor crítico: 2,228 (0.05; 10); por tanto, no existe diferencia
significativa y se puede aplicar la reducción sin afectar el resultado final 14.
En la tabla 2, se muestran los parámetros que evalúan la linealidad del
método; para ello se analizaron las siguientes concentraciones: 50 %, 100 % y
150 %, luego de efectuar los cálculos se determinó que el método presenta la
capacidad de brindar resultados linealmente proporcionales a la concentración
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del analito en estudio. El coeficiente de correlación, nos indica el grado de
relación entre la concentración (x) y la respuesta (y), se obtuvo un coeficiente de
correlación de 0.997 y 0.998 nivel 1 y 2 respectivamente, y tenemos que en las
tablas de r para n-2 gl (8; 0.005) es 0.990, los valores obtenidos aceptan una
correlación positiva con una probabilidad superior al 95 %. La pendiente b o
coeficiente de regresión está relacionada con la sensibilidad del método, de tal
forma que a mayor pendiente mayor sensibilidad (respuesta del analito frente a
los cambios de la concentración del analito); esto se observa en los gráficos 1 y
2.8, 12.
En la tabla 3, tenemos la aplicación del test de linealidad de la pendiente, se
obtuvo un texp de 34,053 y 43,415 nivel 1 y 2 respectivamente, que es mayor al
ttabla(n - 2 gl) que es de 2,3646 con un nivel de confianza del 95 %, este valor es
tan alto que indica que la probabilidad de que la pendiente “b” sea diferente de
cero es muy elevada. También se determinó que cumplen con las
especificaciones del coeficiente de variación: 1,3787 % y 0,4758 % nivel 1 y 2;
deben ser < 5 %. Sin embargo no son suficientes para demostrar la linealidad del
método, sino que además se demostró mediante el empleo de un Test de
linealidad, siendo uno de los más confiables la prueba t de student, utilizada para
determinar la significancia estadística de la varianza de la pendiente b, la
aplicación demostró que cumple con el criterio de linealidad, pues el valor del texp
(34,0539 y 43,4153 nivel 1 y 2 respectivamente, es mayor al ttab (2.228).
En la tabla 4, para determinar la precisión del método, se evaluó la
repetibilidad, que se define como el grado de concordancia entre los valores de
una serie repetida de ensayos analíticos efectuados sobre una muestra
homogénea por un mismo analista bajo la mismas condiciones, es decir, la
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capacidad de un método para dar resultados semejantes cuando se aplica a una
muestra; para ello se efectuaron 10 determinaciones para ambos niveles (normal
y patológico), la precisión se expresa por la desviación Standard pero la mejor
forma de medirla es mediante el coeficiente de variación, se obtuvo 2,0384 % y
0,8572 nivel 1 y 2, respectivamente, lo cual nos indica que cumple con el criterio
de precisión (CV <5 %). En la determinación de la Precisión intermedia se
efectuaron 10 mediciones similares a los efectuados para la repetibilidad (antes
descritas), definida como la medida de la precisión de los resultados de un
método analítico efectuado sobre la misma muestra homogénea pero con
analistas diferentes. El Coeficiente de variación obtenido en el ensayo fue de
1,5780 % y 0,7260 % nivel 1 y 2; el cual es menor al establecido por la USP para
este tipo validación (CV < 5 %). La precisión está relacionada con la dispersión de
una serie de mediciones, pero no nos indica de lo cerca que esta del valor exacto,
por ello podemos tener mediciones muy precisas pero poco exactas 16, 17.
En la tabla 5, se muestra el tratamiento estadístico aplicado para determinar
la exactitud del método; que expresa la cercanía entre el valor teórico y el valor
práctico obtenido al aplicar el análisis, se realizaron 3 concentraciones (50 %, 100
% y 150 %) por triplicado para cada uno de los niveles; si la diferencia entre el
Valor Teórico y el práctico es grande revela la posible existencia de errores que
deberían ser corregidos. El coeficiente de variación obtenido fue de: 1,3795 % y
0,4880 % (< 5 %); la exactitud se demostró con la aplicación del t de student con
el 95 % de confianza y 8 gl, obteniéndose un valor de texp de 1.1526 y 0,0068
nivel 1 y 2, siendo éste menor al punto crítico 2.306 (ttabla), con la probabilidad de
cometer error de p = 0.05 y n – 1 gl; indicando que no existe diferencia
significativa, por tanto el método es exacto 2, 10,17.
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V. CONCLUSIONES
Luego de haber aplicado los parámetros establecidos de validación del método
analítico para la determinación de amilasa, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L se
concluye lo siguiente:
El método es lineal en el intervalo de las concentraciones de 50% hasta el
150 % de la muestra
El método es preciso porque cumple la repetitividad (Nivel 1: C.V 2.0384 % y
Nivel 2: 0.8572) y precisión intermedia (Nivel 1: C.V 1.5780 % y Nivel 2:
0.7260 %)
El método es exacto porque no hay diferencia significativa entre la
recuperación media (Nivel 1: 100.53 % y Nivel 2: 100.01) y el 100 % teórico.
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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Énfasis en Validación y Auditoría. Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacéuticas. Universidad de Chile. Santiago. Mayo 2006.
2. Castro, M.: Validación de Métodos analíticos. Asociación Española de
Farmacéuticos de la Industria. Sección Catalana 1º ed. Ed Farma
Internacional. España.2000. Pp: 70-74
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para la Cuantificación de Fármacos. Revista Cubana de Farmacia [online].
ene.-abr. 2000, vol.30, no.1. Pp: 2-4. Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034751519960
00100009&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0034-7515.
Consultado 16 de febrero del 2009
4. Castelluci, F.: “Recomendaciones Armonizadas para la validación de
Métodos de Análisis (Informe Técnico)”. París. 2005. Pp: 5-6
5. Fernández, A ; Aguilera.: Validación de los Métodos Analíticos para la
Identificación y Cuantificación del Dextrometorfano Jarabe. Revista
Cubana de Farmacia. 2002. 36(1):28-34.
6. García H ; Aparici, M.: La formación como herramienta de la gestión de
calidad. Industria Farmacéutica 2002 Julio / Agosto. Pp: 71 – 75.
7. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Disponible en:
http://www.ministeriodesalud.go.cr/protocolos/guiavalidacionmetodosana
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Consultado 14 de marzo del 2009
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originalmente en J. Assoc. Off. Anal. Chem. 72, 694-704 (2000).
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http://www.fda.gov/cder/guidance/1320fnl.pdf
Consultado 24 de febrero del 2009
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resultan ", NIST nota técnica 1297, 2001, el Instituto Nacional de
Estándares y la Tecnología.
11. Organización Mundial de la Salud.: Curso de Gestión de Calidad para
Laboratorios. Módulo 1, EE.UU. 2007. Pp: 4-6. Disponible en:
www.paho.org/Spanish/aad/tsh/ev/labs-CGC.htm.
Consultado 17 de marzo del 2009
12. Organización Mundial de la Salud. : Comité de Expertos de la OMS en
Especificaciones para las Preparaciones Farmacéuticas. 2003. 32º
Informe, Anexo 5. Ginebra.
13. Organismo Argentino de Acreditación.: Guía para la Validación de Métodos
de Ensayo. Argentina. 2003. Pp: 1 – 16. Disponible en:
http://www.oaa.org..ar/evaluadores/DC-LE-05.pdf
Consultado 15 de marzo del 2009
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ISO 17 025 en laboratorios químicos y clínicos”. Rev. Costarricense de
Ciencias Médicas. San José, Costa Rica. Vol. 22 (2). 2001. Disponible en:
http://www.ia.csic.es/sea/revista/VOL36-34/03.pdf
Consultado 23 de febrero del 2009
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- 29 -
15. Taylor, J. : Validation of Analytical Methods. Analytical Chemistry, Vol. 55
(6). 2006. Pp: 12 – 15
16. Tapia, M.: Desarrollo y Validación de Metodologías Analíticas. Memoria de
práctica para optar al título de Químico Farmacéutico. Santiago.
Universidad de Chile. 2003.
17. The United States PHARMACOPEA Convention. The United States
PHARMACOPEA XXIX. 29º Edition. USA. 2006. Pp: 1436-1437, 3328-3331.
18. Winn-Deen, E.: DEVELOPMENT OF A DIRECT ASSAY FOR "-AMYLASE, Clin.
Chemistry .Vol. 34 (10), 2005-2008. Pp: 8 - 12
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ANEXOS
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- 31 -
ANEXO Nº I
I. CÁLCULOS PARA COMPARAR ENTRE EL USO DE 1000 uL y 500 uL DE RVO,
SEGÚN PRUEBA t DE Student
a. Cálculo de la varianza (s2); Varianza combinada y t Student
1
)( 2
2.
n
xxs
i
yx
2
)1()1(
21
222
212
,
nn
SnSns yx
2
2,
1
2,
21
n
S
n
S
xxt
yxyx
T Student Punto crítico
NIVEL 1 2,137 < 2,228
NIVEL 2 1,173 < 2,228
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II. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA LINEALIDAD DEL MÉTODO
a. Cálculo de la recta de Regresión
Se determina la curva de regresión, sobre los puntos individuales y sin
promediar
Para el caso de una recta la función toma la forma de la siguiente ecuación
abxy
Tabla 1: Linealidad del método – NIVEL 1
CC
Nominal del
analito (%)
CC
del analito
“x”
Resultado
en CCs
“y”
xy
x2
y2
f(x/y)
50%
42 42,30 1786,4700 1783,6544 1789,2900 1,0016
42 41,90 1769,5767 1783,6544 1755,6100 0,9921
42 42,50 1794,9167 1783,6544 1806,2500 1,0063
100 %
69 42,23 4810,3450 4816,8227 4803,8761 0,9987
69 69,31 4765,9269 4816,8227 4715,5689 0,9894
69 68,67 4874,1961 4816,8227 4932,2529 1,0119
150 %
102 70,23 10482,0005 10496,6855 10467,3361 0,9986
102 69,40 10756,5755 10496,6855 11022,9001 1,0248
102 102,31 10251,4805 10496,6855 10012,0036 0,9766
∑ 642 642,27 51291,49 51291,49 51305,09 8.9735
Promedio 0.9971
Desviación estándar 0,0138
Coeficiente de variación % 1,379 %
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Tabla 2: Linealidad del método – NIVEL 2
CC
Nominal del
analito (%)
CC
del analito
“x”
Resultado
en CCs
“y”
Xy
x2
y2
f(x/y)
50%
279 279,15 77779,5645 77634,6769 77924,7225 1,0019
279 276,18 76952,0334 77634,6769 76275,3924 0,9912
279 280,56 78172,4328 77634,6769 78713,9136 1,0069
100 %
419 419,26 175865,595 175952,284 175778,948 0,9995
419 420,93 176566,104 175952,284 177182,065 1,0035
419 418,21 175425,155 175952,284 174899,604 0,9970
150 %
593 593,47 352107,729 352008,845 352206,641 1,0003
593 595,55 353341,8 352008,845 354679,803 1,0038
593 590,89 350577,007 352008,845 349150,992 0,9959
∑ 3874 3874 1816787 1816787 1816812 8.9735
Promedio 0,9964
Desviación estándar 0,0048
Coeficiente de variación % 0,476 %
De los datos obtenidos de la tabla 1 se obtienen los siguientes
valores:
a (Intercepto) b (Pendiente)
NIVEL 1 10,912 0,6123
NIVEL 2 115,79 3,1467
Ecuación de la recta
Ecuación de la recta
NIVEL 1 y = 0,6123 x + 10,912
NIVEL 2 y = 3,1467 x + 115,79
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b. Cálculo del coeficiente de Correlación “r”
Coef. Correlación (r) Criterio de aceptación
NIVEL 1 0,997 > 0.990
NIVEL 2 0,998 > 0.990
c. Cálculo del coeficiente de Determinación “r2”
Se determinó para evaluar el grado de ajuste de la ecuación
Coef. Determinación
(r2) Criterio de aceptación
NIVEL 1 0,994 > 0.990
NIVEL 2 0,996 > 0.990
d. Cálculos efectuados en el test de linealidad
Cálculo del Test de Regresión ( t de Student )para el Coeficiente de
Correlación)
Test de regresión
t - Student
Criterio de aceptación
NIVEL 1 34,0539 > 2,3646
NIVEL 2 43,4153 > 2,3646
Intervalo de Confianza (rango aceptable) Intervalo de confianza de
la pendiente b
bS Pendiente b Int. Conf.
NIVEL 1 0,5805 0,6123 0,76 - 1,98
NIVEL 2 1,0804 3,1467 0,59 - 5,70
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Intervalo de confianza del intercepto a
Sa Intercepto a Int. conf
NIVEL 1 0.1270 10,912 10.62 - 11.21
NIVEL 2 0.1326 115,79 115.48 – 116.11
e. Calculo del Coeficiente de Variación (C.V) de los factores de respuesta
Coeficiente de variación
(CV) Criterio de aceptación
NIVEL 1 1.3787 % < 5 %
NIVEL 2 0.4758 % < 5 %
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III. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA PRECISIÓN DEL MÉTODO
a. Cálculo de la Precisión
Datos de Repetitividad y Precisión Intermedia
Tabla 3: Repetitividad y Precisión Intermedia del método – NIVEL 1
Ensayo
nº
Analista 1
(13/03/09)
Cant. Recuperada
(98 % - 102 %)
Analista 2
(14/03/09)
Cant. Recuperada
(98 % - 102 %)
1 71,79 104,04% 70,59 102,30%
2 70,82 102,64% 71,11 103,06%
3 69,99 101,43% 70,17 101,70%
4 69,51 100,74% 69,99 101,43%
5 70,14 101,65% 70,08 101,57%
6 68,35 99,06% 68,78 99,68%
7 70,22 101,77% 71,08 103,01%
8 73,77 106,91% 70,29 101,87%
9 70,76 102,55% 69,78 101,13%
10 70,26 101,83% 69,93 101,35%
Tabla 4: Repetitividad y Precisión Intermedia del método – NIVEL 2
Ensayo
nº
Analista 1
(13/03/09)
Cant. Recuperada
(98 % - 102 %)
Analista 2
(14/03/09)
Cant. Recuperada
(98 % - 102 %)
1 419,26 100,06% 423,12 100,98%
2 413,21 98,62% 420,17 100,28%
3 418,21 99,81% 419,68 100,16%
4 423,68 101,12% 425,64 101,58%
5 416,29 99,35% 417,58 99,66%
6 422,25 100,78% 420,65 100,39%
7 423,07 100,97% 420,55 100,37%
8 423,25 101,01% 418,67 99,92%
9 420,08 100,26% 420,08 100,26%
10 423,96 101,18% 424,33 101,27%
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b. Análisis estadístico
Tabla 5: Análisis estadístico
Análisis Estadístico NIVEL 1 NIVEL 2 Criterio de
Aceptación Repetitividad Repetitividad Precisión
Intermedia
Repetitividad Precisión
Intermedia
Nº de determinaciones 10 20 10 20 ...........
Media (Promedio: x) 70,56 70,37 420,33 420,69 ...........
Desviación Estándar (S) 1,44 1,11 3,60 3,05 ...........
Coeficiente de Var. (C.V) 2,038 % 1,578 % 0,857 % 0,726% < 5 %
c. Test F (Snedecor)
Este test fue realizado con el objetivo de comparar la semejanza del
comportamiento entre los 2 analistas a través de su varianza obtenida por el
tratamiento de los datos individuales.
NIVEL 1 NIVEL 2
Analistas Desv. Standard
(S)
Varianza
(s2)
Desv. Standard
(S)
Varianza
(s2)
1 1,4400 2,0736 3,6000 12,9600
2 0,6700 0,4489 2,5300 6,4009
Comparación de las varianzas entre el analista 1 y el analista 2
2
2
1
2
analista
analista
calculadoS
SF
NIVEL 1 NIVEL 2 Punto crítico
F calculado 0,2165 0,4939 < 3.35
Interpretación:
Como Fcalculado < Fcrítico, no hay diferencia significativa entre las varianzas
obtenidas a través de los 2 analistas, por esto podemos considerar que las
varianzas son estadísticamente homogéneas
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IV. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA EXACTITUD DEL MÉTODO
a. Calculo del % de Recuperación, Desviación Standard y Coeficiente de variación
Tabla 6: Exactitud del método – NIVEL 1
Ensayo nº CC del analito CC Nominal
(%)
Cantidad
Recuperada
Cantidad Recuperada
(%)
1
42 50 42,30 100,71%
42 50 41,90 99,76%
42 50 42,50 101,19%
2
69 100 69,31 100,45%
69 100 68,67 99,52%
69 100 70,23 101,78%
3
102 150 102,31 100,30%
102 150 104,99 102,93%
102 150 100,06 98,10%
Media (%) Recuperación 100,53%
Desviación Standard 0,0139
Coeficiente de variación 1,3795 %
Tabla 7: Exactitud del método – NIVEL 2
Ensayo nº CC del analito CC Nominal
(%)
Cantidad
Recuperada
Cantidad Recuperada
(%)
1
279 50 279,15 100,05%
279 50 276,18 98,99%
279 50 280,56 100,56%
2
419 100 419,26 100,06%
419 100 420,93 100,46%
419 100 418,21 99,81%
3
593 150 593,47 100,08%
593 150 595,55 100,43%
593 150 590,89 99,64%
Media (%) Recuperación 100,01%
Desviación Standard 0,0049
Coeficiente de variación 0,4880 %
b. Análisis estadístico según ( t de Student )
NIVEL 1 NIVEL 2 Punto crítico (8;0.05)
t de Student 1.1526 0.0068 < 2.306
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ANEXO Nº III
1. CALIFICACIÓN DEL FOTÓMETRO
Los parámetros a evaluar en un fotómetro, se detallan a continuación:
a. Calificación de Instalación (IQ)
Es la verificación documentada de que todos los aspectos claves d la
instalación están de acuerdo con las recomendaciones del fabricante y
corresponden a las especificaciones aprobadas en el diseño. Las
cuales muestran en la tabla siguiente:
Tabla 1: Criterios para evaluar la calificación de la instalación:
Parámetros Descripción
Nombre del equipo Fotómetro BPC Biosed
Modelo o tipo Prime
Número de serie 022346
Rango de voltaje 85 – 264
Frecuencia 47 – 63 Hz
Condiciones en las que fue
recibido Nuevo
Aspectos verificados para su
aceptación de recepción.
Presición y exactitud
con uso de estándares
Localización del equipo en el
laboratorio Área de Bioquímica
Instructivo de mantenimiento Anexo I - A
Instructivo de operación Anexo I - B
b. Calificación de Instalación (OQ)
Es la verificación de que los equipos funcionen en la forma esperada y
son capaces de operar satisfactoriamente, sobre todo en el rango d los
parámetros operacionales para los que han sido diseñados. Es
realizado por un técnico calificado.
Mediante la calificación operacional (OQ) se verifica y documenta el
funcionamiento del equipo, conforme a las especificaciones y rangos
de operación.
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Esta rutina debe efectuarse por lo menos una vez al año, si no ha
habido cambios en el proceso o reparaciones en los equipos , y cada
vez que se realicen cambios en el proceso o reparaciones o
reemplazados en los equipos. La calificación operacional comprende
las verificaciones siguientes:
Capacitación del personal para operar el equipo.
Documentación completa para operar (manuales de operación,
POEs, calibración de instrumental)- Operatitividad del equipo
(energía eléctrica, agua, aperturas, cierres)
Ausencia de vibraciones
Buen funcionamiento de los controles de operación (alarmas,
termostatos, instrumentos).
Ambiente adecuado.
Secuencia de operaciones, incluidas las automáticas.
Tabla 2: Parámetros a evaluar en un fotómetro
PARÁMETROS EVALUACIÓN
Longitud de onda Exactitud
Absorbancia Presición
Relación señal/ ruido Adecuada
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Tabla 3: Solución de problema a Espectrofotómetro automatizado
PROBLEMA CAUSA PROBABLE SOLUCIÓN
El
espectrofotómetro
no se energiza
Interruptor de
encendido/apagado esta en
posición apagado
Mover el interruptor a la posición
encendido
No hay energía eléctrica en la
toma de alimentación
Verificar alimentación eléctrica
general. Comprobar que no se haya
disparado alguna seguridad
Mal conectado el cable de
alimentación eléctrica
Conectar firmemente el cable de
alimentación
Los botones del
teclado no
responden
Inicialización incompleta del
equipo durante el arranque Apagar el equipo y encenderlo
nuevamente Activación de un comando
equivocado durante el arranque
Puerto serial RS
232 no responde
Inicialización incompleta de
equipo durante l arranque
Apagar el equipo y encenderlo
nuevamente
Cable de interconexión mal
conectado Verificar conexión
Pantalla LCD difícil
de leer
Control de contraste desajustado Ajustar contraste
Sistema de iluminación de fondo
quemado Lamar al representante
Impresora
atascada
Papel término arrugado entre la
cabeza de impresión y la placa
térmica al momento de rasgar o
cortar el papel
Remover el exceso de papel con unas
pinza de punta fina
Apagar el equipo, retirar el papel y
reinstalar nuevamente
El papel de la
impresora no se
auto alimenta o
avanza
Papel de la impresora instalado
erróneamente
Apagar el equipo, reinstalar rollo de
papel
Borde delantero del papel nio
alineado o doblado
Apagar equipo. Reinstalar rollo de
papel. Cortar borde delantero y
alinear nuevamente en el sistema de
alimentación
Control de alimentación de papel Llamar al representante
La lectura presenta
fluctuaciones
Hay interferencia n le recorrido de
la luz
Verificar que la cubeta no presente
rayones
Verificar que no hay partículas
flotando en la cubeta
Frotar las paredes de la cubeta con
un pieza de tela limpia
Verificar que el rango seleccionado de
trabajo es adecuado para la muestra
bajo análisis
La lectura presenta
valores negativos.
No hay lectura de
absorbancia
No hay muestra Añadir una muestra a la solución
Colocación incorrecta de la cubeta Verificar la orientación de la ventana
de la cubeta
Selección errónea de la longitud
de onda
Ajustar la longitud de onda al rango
compatible con el análisis
Equipo calibrado erróneamente
con una muestra en lugar de una
solución estándar
Calibrar con una solución estándar
con agua destilada
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c. Calificación de Performnce - Desempeño (PQ)
Se realiza para demostrar la efectividad y reproducibilidad del proceso,
bajo condiciones normales de operación, y bajo condiciones límites de
operación. Es verificado por el usuario, trabajando con estándares
certificados.
El proceso en donde se demuestra que un instrumento se desempeña
de acuerdo a la especificación adecuada para su uso rutinario.
Conocer la variación normal del proceso es importante para determinar
si esta operando en un estado de control y si es capaz d producir el
resultado específico de manera consistente. Se puede hacer a través
de cartas de control.
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