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FACULTAD DE BIOANALISIS
LIC QUIMICA CLINICA
NOMBRE MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL
INMUNOHEMATOLOGIA
CATEDRATICA QC RUTH ESTRADA MARQUEZ
DIVULGACION CIENTIFICA DE
LA QUIMICA CLINICA
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CONTENIDO
1 ldquoDETERMINACIOacuteN DE GRUPO SANGUIacuteNEO ABO Y RHrdquo
2 DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
3 DETERMINACION DE RH
4 DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
5 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
6 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA (TEacuteCNICA SALINA)
7 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUIacuteNEA (TEacuteCNICA ALBUMINA)
8 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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9 DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
10IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Practica No 1
ldquoDeterminacioacuten de grupo sanguiacuteneo ABO y Rhrdquo
Introduccioacuten
Un grupo sanguiacuteneo es una forma de agrupar ciertas caracteriacutesticas de la sangre quedependen de los antiacutegenos presentes en la superficie de los gloacutebulos rojos y en el suero de lasangre
Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto alsistema ABO grupo A grupo AB grupo B y grupo O y en dos con respecto al sistema Rh Rhnegativo o Rh positivo Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinacionesposibles entre ambos sistemas
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccioacuteninmunoloacutegica que puede desembocar en muerte
Las personas con sangre del tipo A tienen gloacutebulos rojos que expresan antiacutegenos de tipo A ensu superficie y anticuerpos contra los antiacutegenos B en el suero de su sangre
Las personas con sangre del tipo B tiene la combinacioacuten contraria gloacutebulos rojos con antiacutegenosde tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antiacutegenos A en el suero de su sangre
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antiacutegenos (A o B) en lasuperficie de sus gloacutebulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos mientrasque las personas con tipo AB expresan ambos antiacutegenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos
A causa de estas combinaciones el tipo O puede ser transfundido sin ninguacuten problema acualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles El grupo O- escompatible con todos por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universalPor otro lado una persona cuyo grupo sea AB+ podraacute recibir sangre de cualquier grupo y sedice que es un receptor universal
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Material y equipo
bull 40 tubos de ensayo de 12 x 75
bull 4 pipetas Pasteur
bull 1 gradilla de unicel
bull 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA
bull 1 tubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante
bull Antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B y Anti-D
bull Eritrocitos con antiacutegenos conocidos A1 A2 B y O
bull 1 centrifuga
Reactivos
Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal LafonLote9662 Lote 8764Cad 09NOV08 Cad 31OCT08Aspecto transparente AspectotransparenteColor azul Color incoloro
Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE
Lote 9762A Lote NDMG04305Cad09NOV08 Cad 29MAR08Aspecto transperente Aspecto transperenteColor amarillo Color incoloro
Teacutecnica
Meacutetodo directo
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B oacute Anti-D Ejemplo 113 Anti-A 113 Anti-AB etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 En cuatro tubos limpios hacer una dilucioacuten de 2-5 de eritrocitos con agua destiladade cada muestra La dilucioacuten tomara un color rojo tenue similar a la sangriacutea
4 Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilucioacuten de eritrocitos preparada y unagota de antisuero seguacuten corresponda
5 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundosa una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
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6 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Metodo inverso
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido A 1 A2 B y OEjemplo 113 A1 113 A2 etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero seguacuten corresponday una gota de los eritrocitos con antigeno conocido
4 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
5 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Resultados
Muestra Meacutetodo directo Meacutetodo inverso
Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O
Grupo y
Rh1 - - - + + + + - O +
2 - + + + + + - - B +
3 + + - + - - + - A +
4 + + + + + - - - AB +
InterpretacioacutenPara el meacutetodo directo la loacutegica fue si en un tubo hay formacioacuten de botoacuten (reaccioacuten antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con losanticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo y si no presentan aglutinacioacuten querraacutedecir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero o que el
antigeno esta ausente en esos eritrocitos De ahiacute que pueda observarse que una muestrasanguiacutenea muestre un solo tipo de antiacutegenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B)ambos antiacutegenos (AB) o ninguno de ellos (O) lo mismo sucede para el sistema Rh alpresentarlo (Rh +) o no (Rh -)Para el meacutetodo inverso el razonamiento fue si en un tubo hay formacioacuten del botoacuten (reaccioacutenantigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerposque reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido los cuales sirven de reactivo paraesta prueba Por lo tanto una reaccioacuten positiva en este meacutetodo definitivamente indica que elpaciente no tiene eritrocitos con antiacutegenos que reaccionariacutean con los anticuerpos de su plasmaDe ahiacute que el meacutetodo se le nombre inverso
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ConclusioacutenConcluyo que Para realizar una transfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguiacuteneo porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA Nordm 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguiacuteneo
INTRODUCCION
El sistema de grupos sanguiacuteneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusioacutende sangre Los antiacutegenos A y B son productos geacutenicosfaacutecilmente detectables y constituyen marcadoresgeneacuteticos de gran valor Entre los individuos A se
distinguen 2 categoriacuteas A1y A2
La diferenciacioacuten entre ambas se realiza mediante lautilizacioacuten de anticuerpos monoclonales y lectinasespeciacuteficas de grupo sanguiacuteneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H)
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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CONTENIDO
1 ldquoDETERMINACIOacuteN DE GRUPO SANGUIacuteNEO ABO Y RHrdquo
2 DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
3 DETERMINACION DE RH
4 DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
5 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
6 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA (TEacuteCNICA SALINA)
7 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUIacuteNEA (TEacuteCNICA ALBUMINA)
8 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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9 DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
10IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Practica No 1
ldquoDeterminacioacuten de grupo sanguiacuteneo ABO y Rhrdquo
Introduccioacuten
Un grupo sanguiacuteneo es una forma de agrupar ciertas caracteriacutesticas de la sangre quedependen de los antiacutegenos presentes en la superficie de los gloacutebulos rojos y en el suero de lasangre
Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto alsistema ABO grupo A grupo AB grupo B y grupo O y en dos con respecto al sistema Rh Rhnegativo o Rh positivo Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinacionesposibles entre ambos sistemas
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccioacuteninmunoloacutegica que puede desembocar en muerte
Las personas con sangre del tipo A tienen gloacutebulos rojos que expresan antiacutegenos de tipo A ensu superficie y anticuerpos contra los antiacutegenos B en el suero de su sangre
Las personas con sangre del tipo B tiene la combinacioacuten contraria gloacutebulos rojos con antiacutegenosde tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antiacutegenos A en el suero de su sangre
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antiacutegenos (A o B) en lasuperficie de sus gloacutebulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos mientrasque las personas con tipo AB expresan ambos antiacutegenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos
A causa de estas combinaciones el tipo O puede ser transfundido sin ninguacuten problema acualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles El grupo O- escompatible con todos por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universalPor otro lado una persona cuyo grupo sea AB+ podraacute recibir sangre de cualquier grupo y sedice que es un receptor universal
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Material y equipo
bull 40 tubos de ensayo de 12 x 75
bull 4 pipetas Pasteur
bull 1 gradilla de unicel
bull 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA
bull 1 tubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante
bull Antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B y Anti-D
bull Eritrocitos con antiacutegenos conocidos A1 A2 B y O
bull 1 centrifuga
Reactivos
Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal LafonLote9662 Lote 8764Cad 09NOV08 Cad 31OCT08Aspecto transparente AspectotransparenteColor azul Color incoloro
Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE
Lote 9762A Lote NDMG04305Cad09NOV08 Cad 29MAR08Aspecto transperente Aspecto transperenteColor amarillo Color incoloro
Teacutecnica
Meacutetodo directo
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B oacute Anti-D Ejemplo 113 Anti-A 113 Anti-AB etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 En cuatro tubos limpios hacer una dilucioacuten de 2-5 de eritrocitos con agua destiladade cada muestra La dilucioacuten tomara un color rojo tenue similar a la sangriacutea
4 Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilucioacuten de eritrocitos preparada y unagota de antisuero seguacuten corresponda
5 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundosa una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
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6 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Metodo inverso
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido A 1 A2 B y OEjemplo 113 A1 113 A2 etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero seguacuten corresponday una gota de los eritrocitos con antigeno conocido
4 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
5 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Resultados
Muestra Meacutetodo directo Meacutetodo inverso
Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O
Grupo y
Rh1 - - - + + + + - O +
2 - + + + + + - - B +
3 + + - + - - + - A +
4 + + + + + - - - AB +
InterpretacioacutenPara el meacutetodo directo la loacutegica fue si en un tubo hay formacioacuten de botoacuten (reaccioacuten antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con losanticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo y si no presentan aglutinacioacuten querraacutedecir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero o que el
antigeno esta ausente en esos eritrocitos De ahiacute que pueda observarse que una muestrasanguiacutenea muestre un solo tipo de antiacutegenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B)ambos antiacutegenos (AB) o ninguno de ellos (O) lo mismo sucede para el sistema Rh alpresentarlo (Rh +) o no (Rh -)Para el meacutetodo inverso el razonamiento fue si en un tubo hay formacioacuten del botoacuten (reaccioacutenantigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerposque reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido los cuales sirven de reactivo paraesta prueba Por lo tanto una reaccioacuten positiva en este meacutetodo definitivamente indica que elpaciente no tiene eritrocitos con antiacutegenos que reaccionariacutean con los anticuerpos de su plasmaDe ahiacute que el meacutetodo se le nombre inverso
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ConclusioacutenConcluyo que Para realizar una transfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguiacuteneo porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA Nordm 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguiacuteneo
INTRODUCCION
El sistema de grupos sanguiacuteneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusioacutende sangre Los antiacutegenos A y B son productos geacutenicosfaacutecilmente detectables y constituyen marcadoresgeneacuteticos de gran valor Entre los individuos A se
distinguen 2 categoriacuteas A1y A2
La diferenciacioacuten entre ambas se realiza mediante lautilizacioacuten de anticuerpos monoclonales y lectinasespeciacuteficas de grupo sanguiacuteneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H)
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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9 DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
10IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Practica No 1
ldquoDeterminacioacuten de grupo sanguiacuteneo ABO y Rhrdquo
Introduccioacuten
Un grupo sanguiacuteneo es una forma de agrupar ciertas caracteriacutesticas de la sangre quedependen de los antiacutegenos presentes en la superficie de los gloacutebulos rojos y en el suero de lasangre
Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto alsistema ABO grupo A grupo AB grupo B y grupo O y en dos con respecto al sistema Rh Rhnegativo o Rh positivo Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinacionesposibles entre ambos sistemas
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccioacuteninmunoloacutegica que puede desembocar en muerte
Las personas con sangre del tipo A tienen gloacutebulos rojos que expresan antiacutegenos de tipo A ensu superficie y anticuerpos contra los antiacutegenos B en el suero de su sangre
Las personas con sangre del tipo B tiene la combinacioacuten contraria gloacutebulos rojos con antiacutegenosde tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antiacutegenos A en el suero de su sangre
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antiacutegenos (A o B) en lasuperficie de sus gloacutebulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos mientrasque las personas con tipo AB expresan ambos antiacutegenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos
A causa de estas combinaciones el tipo O puede ser transfundido sin ninguacuten problema acualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles El grupo O- escompatible con todos por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universalPor otro lado una persona cuyo grupo sea AB+ podraacute recibir sangre de cualquier grupo y sedice que es un receptor universal
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Material y equipo
bull 40 tubos de ensayo de 12 x 75
bull 4 pipetas Pasteur
bull 1 gradilla de unicel
bull 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA
bull 1 tubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante
bull Antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B y Anti-D
bull Eritrocitos con antiacutegenos conocidos A1 A2 B y O
bull 1 centrifuga
Reactivos
Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal LafonLote9662 Lote 8764Cad 09NOV08 Cad 31OCT08Aspecto transparente AspectotransparenteColor azul Color incoloro
Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE
Lote 9762A Lote NDMG04305Cad09NOV08 Cad 29MAR08Aspecto transperente Aspecto transperenteColor amarillo Color incoloro
Teacutecnica
Meacutetodo directo
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B oacute Anti-D Ejemplo 113 Anti-A 113 Anti-AB etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 En cuatro tubos limpios hacer una dilucioacuten de 2-5 de eritrocitos con agua destiladade cada muestra La dilucioacuten tomara un color rojo tenue similar a la sangriacutea
4 Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilucioacuten de eritrocitos preparada y unagota de antisuero seguacuten corresponda
5 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundosa una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
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6 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Metodo inverso
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido A 1 A2 B y OEjemplo 113 A1 113 A2 etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero seguacuten corresponday una gota de los eritrocitos con antigeno conocido
4 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
5 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Resultados
Muestra Meacutetodo directo Meacutetodo inverso
Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O
Grupo y
Rh1 - - - + + + + - O +
2 - + + + + + - - B +
3 + + - + - - + - A +
4 + + + + + - - - AB +
InterpretacioacutenPara el meacutetodo directo la loacutegica fue si en un tubo hay formacioacuten de botoacuten (reaccioacuten antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con losanticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo y si no presentan aglutinacioacuten querraacutedecir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero o que el
antigeno esta ausente en esos eritrocitos De ahiacute que pueda observarse que una muestrasanguiacutenea muestre un solo tipo de antiacutegenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B)ambos antiacutegenos (AB) o ninguno de ellos (O) lo mismo sucede para el sistema Rh alpresentarlo (Rh +) o no (Rh -)Para el meacutetodo inverso el razonamiento fue si en un tubo hay formacioacuten del botoacuten (reaccioacutenantigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerposque reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido los cuales sirven de reactivo paraesta prueba Por lo tanto una reaccioacuten positiva en este meacutetodo definitivamente indica que elpaciente no tiene eritrocitos con antiacutegenos que reaccionariacutean con los anticuerpos de su plasmaDe ahiacute que el meacutetodo se le nombre inverso
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ConclusioacutenConcluyo que Para realizar una transfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguiacuteneo porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA Nordm 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguiacuteneo
INTRODUCCION
El sistema de grupos sanguiacuteneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusioacutende sangre Los antiacutegenos A y B son productos geacutenicosfaacutecilmente detectables y constituyen marcadoresgeneacuteticos de gran valor Entre los individuos A se
distinguen 2 categoriacuteas A1y A2
La diferenciacioacuten entre ambas se realiza mediante lautilizacioacuten de anticuerpos monoclonales y lectinasespeciacuteficas de grupo sanguiacuteneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H)
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Material y equipo
bull 40 tubos de ensayo de 12 x 75
bull 4 pipetas Pasteur
bull 1 gradilla de unicel
bull 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA
bull 1 tubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante
bull Antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B y Anti-D
bull Eritrocitos con antiacutegenos conocidos A1 A2 B y O
bull 1 centrifuga
Reactivos
Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal LafonLote9662 Lote 8764Cad 09NOV08 Cad 31OCT08Aspecto transparente AspectotransparenteColor azul Color incoloro
Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE
Lote 9762A Lote NDMG04305Cad09NOV08 Cad 29MAR08Aspecto transperente Aspecto transperenteColor amarillo Color incoloro
Teacutecnica
Meacutetodo directo
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de antisuero Anti-A Anti-AB Anti-B oacute Anti-D Ejemplo 113 Anti-A 113 Anti-AB etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 En cuatro tubos limpios hacer una dilucioacuten de 2-5 de eritrocitos con agua destiladade cada muestra La dilucioacuten tomara un color rojo tenue similar a la sangriacutea
4 Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilucioacuten de eritrocitos preparada y unagota de antisuero seguacuten corresponda
5 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundosa una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
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6 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Metodo inverso
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido A 1 A2 B y OEjemplo 113 A1 113 A2 etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero seguacuten corresponday una gota de los eritrocitos con antigeno conocido
4 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
5 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Resultados
Muestra Meacutetodo directo Meacutetodo inverso
Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O
Grupo y
Rh1 - - - + + + + - O +
2 - + + + + + - - B +
3 + + - + - - + - A +
4 + + + + + - - - AB +
InterpretacioacutenPara el meacutetodo directo la loacutegica fue si en un tubo hay formacioacuten de botoacuten (reaccioacuten antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con losanticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo y si no presentan aglutinacioacuten querraacutedecir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero o que el
antigeno esta ausente en esos eritrocitos De ahiacute que pueda observarse que una muestrasanguiacutenea muestre un solo tipo de antiacutegenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B)ambos antiacutegenos (AB) o ninguno de ellos (O) lo mismo sucede para el sistema Rh alpresentarlo (Rh +) o no (Rh -)Para el meacutetodo inverso el razonamiento fue si en un tubo hay formacioacuten del botoacuten (reaccioacutenantigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerposque reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido los cuales sirven de reactivo paraesta prueba Por lo tanto una reaccioacuten positiva en este meacutetodo definitivamente indica que elpaciente no tiene eritrocitos con antiacutegenos que reaccionariacutean con los anticuerpos de su plasmaDe ahiacute que el meacutetodo se le nombre inverso
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ConclusioacutenConcluyo que Para realizar una transfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguiacuteneo porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA Nordm 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguiacuteneo
INTRODUCCION
El sistema de grupos sanguiacuteneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusioacutende sangre Los antiacutegenos A y B son productos geacutenicosfaacutecilmente detectables y constituyen marcadoresgeneacuteticos de gran valor Entre los individuos A se
distinguen 2 categoriacuteas A1y A2
La diferenciacioacuten entre ambas se realiza mediante lautilizacioacuten de anticuerpos monoclonales y lectinasespeciacuteficas de grupo sanguiacuteneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H)
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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6 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Metodo inverso
1 Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguiacutenea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguiacutenea sin anticoagulante a una velocidad de 2500rpm por 10 minutos pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado
2 Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera en cada tubo rotular dos nuacutemeros
en la muestra uno correspondiente del 1 al 4 el otro numero corresponde al que yatraiacutea la muestra y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido A 1 A2 B y OEjemplo 113 A1 113 A2 etc El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes
3 Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero seguacuten corresponday una gota de los eritrocitos con antigeno conocido
4 Al concluir lo anterior llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 rpm para observar mejor la reaccioacuten antigeno-anticuerpo(formacioacuten de un botoacuten)
5 Por ultimo leer los tubos observando si hubo reaccioacuten o no y correlacionando losdatos obtenidos con el meacutetodo inverso para determinar el grupo sanguiacuteneo
Resultados
Muestra Meacutetodo directo Meacutetodo inverso
Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O
Grupo y
Rh1 - - - + + + + - O +
2 - + + + + + - - B +
3 + + - + - - + - A +
4 + + + + + - - - AB +
InterpretacioacutenPara el meacutetodo directo la loacutegica fue si en un tubo hay formacioacuten de botoacuten (reaccioacuten antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con losanticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo y si no presentan aglutinacioacuten querraacutedecir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero o que el
antigeno esta ausente en esos eritrocitos De ahiacute que pueda observarse que una muestrasanguiacutenea muestre un solo tipo de antiacutegenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B)ambos antiacutegenos (AB) o ninguno de ellos (O) lo mismo sucede para el sistema Rh alpresentarlo (Rh +) o no (Rh -)Para el meacutetodo inverso el razonamiento fue si en un tubo hay formacioacuten del botoacuten (reaccioacutenantigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerposque reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido los cuales sirven de reactivo paraesta prueba Por lo tanto una reaccioacuten positiva en este meacutetodo definitivamente indica que elpaciente no tiene eritrocitos con antiacutegenos que reaccionariacutean con los anticuerpos de su plasmaDe ahiacute que el meacutetodo se le nombre inverso
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ConclusioacutenConcluyo que Para realizar una transfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguiacuteneo porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA Nordm 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguiacuteneo
INTRODUCCION
El sistema de grupos sanguiacuteneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusioacutende sangre Los antiacutegenos A y B son productos geacutenicosfaacutecilmente detectables y constituyen marcadoresgeneacuteticos de gran valor Entre los individuos A se
distinguen 2 categoriacuteas A1y A2
La diferenciacioacuten entre ambas se realiza mediante lautilizacioacuten de anticuerpos monoclonales y lectinasespeciacuteficas de grupo sanguiacuteneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H)
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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ConclusioacutenConcluyo que Para realizar una transfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguiacuteneo porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA Nordm 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguiacuteneo
INTRODUCCION
El sistema de grupos sanguiacuteneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusioacutende sangre Los antiacutegenos A y B son productos geacutenicosfaacutecilmente detectables y constituyen marcadoresgeneacuteticos de gran valor Entre los individuos A se
distinguen 2 categoriacuteas A1y A2
La diferenciacioacuten entre ambas se realiza mediante lautilizacioacuten de anticuerpos monoclonales y lectinasespeciacuteficas de grupo sanguiacuteneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H)
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Uso Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar ceacutelulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075 mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA INMUCOR INC
LOTE SN2132
CADUCIDAD 2007-12-14
TECNICA
1 Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados
2 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina Mezcle completamente el contenido del tubo
3 Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm
4 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPOSANGUINEO
Anti-A Anti-A1 Porciento
A1 + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS A
A1b + + 80 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A2 + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS A
A2B + 0 20 DE TODOSLOS GRUPOS AB
A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacioacuten de del estado secretor y tipificacioacuten de las ceacutelulas rojas
INTRODUCCIONLa mayoriacutea de los grupos sanguiacuteneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantiacutegenos y anticuerpos reciacuteprocos para ese sistema
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunoloacutegica y se producen contra los antiacutegenos A y B
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antiacutegeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores Se hallan con mayor frecuencia y tienen maacutesrelevancia cliacutenica los de A que los de B Al utilizarlectinas se definen los subgrupos A1 y A2 con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1 perono los de A2 y el anti H semilla Ulex europeus aglutinaeritrocitos que tienen antiacutegeno H
MATERIAL Y EQUIPObull Tubos de ensaye de 1075mm
bull Cronometro
bull Marcador
bull Centrifuga seroloacutegica
MUESTRA BIOLOGICAbull Ceacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVObull Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA GANMA
LOTE ML1581
CADUCIDAD 2007-11-14
TECNICA
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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1 Adicione una gota de una suspensioacuten de eritrocitos bajo prueba del 3-5 en
salina en tubos adecuadamente marcados
2 Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo
3 incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
4 Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm5 Agite suavemente el tubo y resuspenda el botoacuten celular Examine las reacciones
resultantes macroscoacutepicamente Registre resultados
INTERPRETACIOacuteN
PROBLEMA ANTI A1 ANTI H
(ANTI A2)
RESULTADO
SUBGRUPO
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
bull Prueba positiva Aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
Nota La hemoacutelisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacioacuten del reactivo
bull Prueba negativa Ausencia de aglutinacioacuten de las ceacutelulas rojas
CONCLUSIONES
Concluyo que para realizar unatransfusioacuten sanguiacutenea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y del
receptor Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen maacutes relevanciacliacutenica los de A que los de B Y seidentifican por medio de utilizarlectinas Los subgrupos A maacutesimportantes son A1 y A2
PRACTICA 3DETERMINACION DE Rh
INTRODUCCIOacuteN
El factor Rh es una clase de proteiacutena que se encuentra enlos gloacutebulos rojos de la sangre cuando alguien tiene esaproteiacutena se le considera ldquoRh Positivordquo Cuando no la tienees ldquoRh Negativordquo El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes El Factor Rh positivo es dominantees decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo su factor Rh seraacute positivo
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la eritroblastosis fetal en la que los gloacutebulosrojos del nintildeo se encuentran sensibilizados con
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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anticuerpo materno Es uacutetil tambieacuten en el diagnosticode la anemia hemoliacutetica adquirida (anticuerpos sobrelos gloacutebulo rojos del mismo paciente) asiacute como ladeterminacioacuten de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusioacuten
Las dos clasificaciones maacutes importantes para describirgrupos sanguiacuteneos en humanos son los antiacutegenos y el factorRh Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reaccioacuten inmunoloacutegica que puededesembocar en hemoacutelisis anemia fallo renal shock omuerte
MATERIAL
bull Tubos de ensayo de 12 x 75
bull Pipetas Pasteur
bull Gradilla
EQUIPO
bull Centrifuga
MUESTRA BIOLOacuteGICA
bull Eritrocitos lavados 3-5 del paciente
REACTIVOS
bull Antisuero Anti-D
bull Suero anti globulina humanabull Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONELote NDMG04305CAD 29MAR08Aspecto transparenteColor incoloroSuero anti globulina HumanaLote 405CAD 06-NOV-08Aspecto transparenteColor verde
Reactivo control GAMMA-CLONELote GCM115-3CAD 2008-12-08Aspecto transparenteColor incoloro
TEacuteCNICA
Determinacioacuten de Rh
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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bull Prepare una suspensioacuten de gloacutebulos rojos al 3-5 en solucioacuten salina Los gloacutebulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteiacutenas del plasma
bull Rotular 3 tubos para la previa identificacioacuten
de Rhbull Ponga 1 gota de la suspensioacuten lavada en cada
tubo
bull Antildeada una gota de anti suero D monoclonal
bull Mezcle y centrifugue 15 seg Y observe si hayaglutinacioacuten
Preparacioacuten del control negativo
bull Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5
bull Antildeada una gota de reactivo control
bull
Centrifugue 15 seg y observe si hay aglutinacioacuten
Deteccioacuten de sangre Du
Nota esta teacutecnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron
bull Los tubos que no tuvieron aglutinacioacuten en ladeterminacioacuten de Rh se incuban 15 min yposteriormente se lavan 3 veces con sol Salina
bull Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suerode COOMBS
bull Centrifugar 15 seg y observar desprender boton
ESQUEMAS
RESULTADOS problemas Aglutinacioacuten resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
21
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Paciente 2 coacutedigo 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 coacutedigo 021620 Hernaacutendez Loacutepez GuillermoPaciente 11 coacutedigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIOacuteNPara el primer meacutetodoAglutinacion Rh positivoNo aglutinacioacuten realizar prueba de deteccioacuten desangre Du
Deteccioacuten de sangre DuAglutinacioacuten D deacutebil (Du positivo)No aglutinacioacuten Rh negativo
CONCLUSIONESCon el descubrimiento del sistema Rh se denominan Rhpositivos los hematiacutees que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen por tanto el antiacutegeno Rh en lasuperficie Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que por tanto no poseen el antiacutegeno Rh ensu superficie
De la misma manera que en el sistema ABO en el sistema Rh
no se puede transfundir el antiacutegeno Rh a las personas queno lo tienen ya que podriacutea originar la produccioacuten deanticuerpos Rh en el receptor Los sujetos Rh negativossoacutelo podraacuten recibir sangre de donantes Rh negativos
PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION
El sistema utilizado en inmunohematologiacutea para investigar e identificar antiacutegenos y
anticuerpos antieritrocitarios Es de tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la
separacioacuten por tamantildeo de los eritrocitos aglutinados durante un proceso de
centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
21
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Esta teacutecnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccioacuten antiacutegeno-
anticuerpo con facilidad y repetitividad Asiacute como la estandariza del uso de reactivos
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador
OBJETIVO determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y determinacion
del grupo serico en tecnica de gel
FUNDAMENTOS
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersionincubacion
La tecnologiacutea de microtipificacioacuten en gel se basa en la separacioacuten por tamantildeo de los
eritrocitos aglutinados durante un proceso de centrifugacioacuten en un gel poroso
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequentildeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna
MATERIAL
Pipeta automaacutetica 10 ul 50ul 1 ml
Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso
MUESTRA BIOLOGICACeacutelulas rojas de donador o paciente
REACTIVO
Placa de gelReactivo de gel sol
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
21
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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TECNICA1- determinacion de los antigenos del sistema ABORh
-preparar una suspension de hematies al 5 de DG sol Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5
2- determinacion de l grupo serico-homogenizar los hematies recativos A1B
- dispersar el microtubulo N a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo Nb
50 ul de hematies reactivos B
-antildeadir suero o plasma
3- centrigugar en centrifuga para DG sol
Leer los resultados
RESULTADOS
NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna resto de la columna sin
aglutinados
POSITIVO
+- Escasoa glutinados de pequentildeo tamantildea d ela columna
1+ Algunos aglutinados pequentildeso en la columna
2+ aglutinados pequentildeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado
4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacion (doble banda de hematies en el fondo y en la parte
superior
INTERPRETACION DE RESULTADOS
GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo
Amicrotubo
Bmicrotubo
ABmicrotubo
CTL
MICROTUBUBON+ a1
MICROTUBUBON+ B
ABOGRUPO
0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A
0 + + 0 + 0 B
+ + + 0 0 0 AB
SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo
DrdquoMicrutuboCTL
INTERPRETACION
+ + 0 D positivo
0 0 0 D negativo
0 + 0
+ 0 0
D deacutebil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Resultado A+
CONCLUSION
Concluyo que esta teacutecnica es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacioacuten y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una teacutecnica inapropiada
asi como crear un meacutetodo de interpretaciones sencillas y constantes
Practica No 5ldquoPrueba de compatibilidadrdquo
Introduccioacuten
Para requerir una oacuteptima transfusioacuten actualmente serequiere de aceptaciones inmunoloacutegicas receptor - donanteya que la transfusioacuten de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Es uacutetil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacutenmaterno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas
como identificacioacuten de anticuerpos autoinmunes deteccioacutende algunos sistemas sanguiacuteneos y pruebas de compatibilidadsanguiacutenea
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio Durante esteperiodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs produciendo aglutinacioacuten
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos
Material y equipo
bull Pipetas automaacuteticas de 10 microl 25 microl 50 microl y 1 ml
bull Puntas de pipetas desechables
bull Tubos de vidrio
bull Incubador para tarjetas DG Gel
bull Centrifuga para tarjetas DG Gel
Material bioloacutegico
bull Hematiacutees reactivo para investigacioacuten e identificacioacuten de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols SA
bull Suero de hemoclasificacioacuten
bull Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante
Reactivos
bull Tarjetas DG Gel
bull DG Gel Sol
Reactivos
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura entre 2 y 25 ordmC Rango de temperatura entre 2 y 8ordmCLote 704901 Lote 7003701Cad 2008-03 Cad 2008-06Aspecto transparente Aspecto transparenteColor verde Color incoloro
TeacutecnicaMeacutetodo manual
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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1 Dejar atemperar (18-25ordmC) muestras y reactivo2 Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar3 Identificar las tarjetas y muestras a utilizar4 Despegar con precaucioacuten la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos
5 Preparar una suspensioacuten con hematiacutees al 1 en DG Gel Sol (10 microl de sedimento oconcentrado de hematiacutees en 1 ml de DG Gel Sol) Utilizar los hematiacutees del donantepara la PC mayor y hematiacutees del receptor para la PC menor Asegurar la suspensioacuten delos hematiacutees antes de utilizar
6 Dispensar en el tubo correspondiente 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 deldonante (PC mayor) o 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor (PCmenor)
7 Antildeadir 25 microl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 microl de suero o plasma deldonante (PC menor)
8 Preparar auto control con 50 microl de suspensioacuten de los hematiacutees al 1 del receptor y 25microl de suero o plasma del receptor
9 Incubar 15 minutos a 37 ordmC10 Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel
11 Leer los resultados
InterpretacioacutenNegativo - Banda de hematiacutees en el fondo de la columna resto de la columna sin aglutinados visibles
Positivo +- Escasos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la mitad inferior de la columna
1+ Algunos aglutinados de pequentildeo tamantildeo en la columna
2+ Aglutinados de tamantildeo pequentildeo o mediano a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinados de tamantildeo mediano en la mitad superior de la columna
4+ Banda de hematiacutees aglutinados en la parte superior de la columna
DP Doble poblacioacuten (doble banda de hematiacutees en el fondo y en la parte superior de la columna
Resultados
Paciente Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1 Orea Valero Erasmo (A+)Donador 2 Moreno Adolfo (O+)
M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 1
GR de donador 2 +suero del paciente
GR del paciente +suero de donador 2
GR del paciente +suero del paciente
- + - + -
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+) lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos no asiacute plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccioacuten en ambas pruebasmenores
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Conclusioacuten
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusioacuten para Asegurar que todos losgloacutebulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente Evitar estimular laproduccioacuten de nuevos anticuerpos contra los gloacutebulos rojosen el receptor especialmente anti-Rh D
PRAacuteCTICA No 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGIacuteNEA
(Teacutecnica salina)
INTRODUCCIOacuteN
Landsteiner constatoacute que cuando un aglutinoacutegeno se pone
en contacto con la aglutinina homoacuteloga se produce unaaglutinacioacuten
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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La compatibilidad sanguiacutenea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos tales como losfenoacutemenos de la lisis o de la aglutinacioacuten
A causa de este fenoacutemeno bioloacutegico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero) sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta porqueninguacuten otro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas
Ademaacutes de los 6 antiacutegenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos existen numerosos sistemas deaglutinoacutegenos que contienen muchos antiacutegenos individuales
en los eritrocitos (maacutes de 500000 millones posibles defenotipos de grupos sanguiacuteneos conocidos) Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh ademaacutes del ABO
Del sistema de antiacutegenos Rh es el D el maacutes antigeacutenico yel teacutermino Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinoacutegeno D El individuo Rh negativo no tiene antiacutegenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con eacuteste
Las reacciones antiacutegeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por
mdash Hemoacutelisis la unioacuten antiacutegeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activacioacuten delcomplemento) mdash Aglutinacioacuten los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comuacutenmente tipo
IgM)
OBJETIVO Determinacioacuten de los antigenos del sistema ABORh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor
MATERIAL5 Tubos de ensaye6 Pipetas Pasteur
1Gradilla1 Bulbo
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EQUIPOMicrocentriacutefugaBantildeo Mariacutea oacute Estufa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
21
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Papel Parafilm
MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA
REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespeciacutefico Anti IgG C-d) Para prueba de CoombsLABORATORIOS LAFON SA de C VFecha de Caducidad 31-Ene-09Lote 406Hecho en MeacutexicoAspecto TransparenteColor Verde
TEacuteCNICA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3 veces)
SALINA RAacutePIDA1 Agregar una gota de Eritrocitos Lavados2 Diluirlo al 3-5 con solucioacuten salina 093 Agregar 2 gotas de suero4 Centrifugar y observar anotar desprendimiento del botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
1 Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1hora (o 20 min)2 Centirfugar despueacutes de haber pasado el
tiempo3 Desprender el botoacuten de eritrocitos y
observarAGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS
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PRUEBA MAYOR
G Rojos del DONADOR+
Suero del RECEPTOR(paciente)
PRUEBA MENOR
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G Rojos del RECEPTOR(paciente)
+Suero del RECEPTOR
(paciente)
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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M1 Autotestigo- -
Compatible
Compatible
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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1 Con solucioacuten salina 09 lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2 Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
RESULTADOS
Paciente Madrigal Meacutendez Luis Eduardo (B+)Folio 009164Fecha301007
Donador 1 Torres Avileacutes Joseacute Ramoacuten (O+)Folio 022604Fecha311007
Donador 2 Rodriacuteguez Nuacutentildeez Joseacute Angel (A+) Folio 022605
Fecha311007
SALINA RAacutePIDA
M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 1
GR de donador 2+ suero del
paciente
GR del paciente+ suero dedonador 2
GR del paciente+ suero del
paciente
- 4+ 4+ 4+ -
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA
M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -
Compatible Nocompatible
Nocompatible
Nocompatible
Compatible
SALINA COOMBS
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+) debido a que en el suero nohay anticuerpos de ninguacuten tipo que reaccionen con losantiacutegenos de los eritrocios del Donador 1 Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos
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PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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INTERPRETACIOacuteN
PRUEBA POSITIVA Existe una aglutinacioacuten de lasceacutelulas sanguiacuteneas que indica la presencia delantiacutegeno A o B En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antiacutegeno D en los eritrocitos Lahemoacutelisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminacioacuten delreactivo
PRUEBA NEGATIVA La no aglutinacioacuten indica unresultado negativo e indica que las ceacutelulas sonnegativas para Antiacutegenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIOacuteN
He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero) sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta porque ninguacutenotro fenoacutemeno de inmunizacioacuten interfiera Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas
Praacutectica No 7ldquoPrueba de compatibilidad sanguiacutenea (teacutecnica albumina)rdquo
IntroduccioacutenLa tipificacioacuten de sangre identifica el tipo sanguiacuteneo determinandoantiacutegenos presentes en los eritrocitos detecta aloanticuerpos encontra esos antiacutegenos Asiacute los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antiacutegenos de superficie de los eritrocitos La prueba
de compatibilidad sanguiacutenea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menorLa prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos consiste en probar el plasma del receptor contra los
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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gloacutebulos rojos del donante Es incompatible cuando se genera unareaccioacuten hemoliacutetica los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los gloacutebulosrojos del receptor Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reaccioacuten en contra una transfusioacuten porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unioacuten deeritrocitos con alguacuten tipo de anticuerpo Uno de esospotencializadores es la albuacutemina La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinacioacuten de eritrocitos sensibilizados Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908 pero Coombs Mourant y Race en 1946 la introdujeron en elestudio de los grupos sanguiacuteneos y anticuerpos cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculacioacuten de animales para
inmunizarlos con proteiacutena humana utilizando el anticuerpo obtenido enla deteccioacuten de los llamados anticuerpos incompletos Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antiacutegenos sanguiacuteneos Esuacutetil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacioacuten materno-fetal y se emplea tambieacuten en otro tipo de pruebas como identificacioacutende anticuerpos autoinmunes deteccioacuten de algunos sistemas sanguiacuteneos ypruebas de compatibilidad sanguiacutenea La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudioDurante este periodo si existe un anticuerpo este se fija sobre surespectivo determinante antigeacutenico Una vez fijados los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs produciendoaglutinacioacuten Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos
Objetivo Determinacioacuten de los antiacutegenos del sistema ABO Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor
Material y equipo
5 Tubos de ensaye
6 Pipetas Pasteur
1Gradilla
1 Bulbo
Papel Parafilm
Microcentriacutefuga
Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
Material bioloacutegico
Muestras de sangre de extraccioacuten reciente recogida conanticoagulante o sin anticoagulante
ReactivosSuero de CoombsAlbuacutemina bovina deg
Suero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto
transparentedegAlbumina de bovino polimerizada Interbiol Lote APO107 Cad 150109 Color incoloroAspecto transparente
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
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REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Teacutecnica
1 Montar prueba mayor 1 y 2 prueba menor 1 y 2 y autotestigocon el procedimiento ya anteriormente conocido
2 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 223 Centrifugar 20 segundos4 observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten5 A los tubos con lecturas negativas incubar 20 minutos en bantildeo
Mariacutea a 37 degC6 Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
7 Lavar tres veces decantar y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados1 PRUEBA MAYOR 1 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 12 PRUEBA MENOR 1 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente3 PRUEBA MAYOR 2 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del
donador 24 PRUEBA MENOR 2 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de GR al 3-5 del
paciente5 AUTOTESTIGO 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de GR al 3-5 del paciente
M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albuacutemina - - - - -Despueacutes de incubacioacuten a 37 degC - - - - -Despueacutes de Coombs - - - - -Despueacutes de validacioacuten con gloacutebulos
positivos+ + + + +
InterpretacioacutenPrueba positiva Alutinacioacuten o hemolisis Indica no compatibilidadPrueba negativaNo aglutinacioacuten Indica compatibilidad
Esquemas
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 30
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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ConclusioacutenConcluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conalbuacutemina bovina ofrece mucha ventaja al ser al igual que otrosreactivos un potencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga
PRACTICA No 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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FUNDAMENTO
LISS es utilizado para reducir la fuerza ioacutenica del medio
de reaccioacuten en los procedimientos de deteccioacuten eidentificacioacuten de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad La presencia de este reactivo refuerza lainteraccioacuten antiacutegeno - anticuerpo durante la incubacioacuten
GENERALIDADESEl uso de solucioacuten salina de baja fuerza ioacutenica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col y
Elliot y col pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentracioacuten molar obtenida provocaba la hemoacutelisisde los eritrocitos suspendidos
En 1974 Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolucioacuten Liss de 003 M que lograba reducir el tiempo deincubacioacuten y no presentaba tendencia a la hemoacutelisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza ioacutenica restableciendola presioacuten osmoacutetica de la solucioacuten mediante la adicioacuten deglicinaLas soluciones de baja fuerza ioacutenica son actualmente lasmaacutes utilizadas en inmunohematologiacutea provocando un aumentoen la velocidad de asociacioacuten entre antiacutegenos y anticuerpospermitiendo asiacute acortar el tiempo de incubacioacuten de 60minutos a 10-15 minutos sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevadosSe ha observado que lasreacciones antiacutegeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza ioacutenica del medio de reaccioacuten
La fuerza ioacutenica es uno de los factores maacutes importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captacioacuten deanticuerpos por parte de los eritrocitos El uso de mediosde reaccioacuten de baja fuerza ioacutenica permite disminuir eltiempo de incubacioacuten y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespeciacuteficas
Los iones Na+ y Cl- presentes en la solucioacuten salinafisioloacutegica se agrupan alrededor de las moleacuteculas deantiacutegeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas locual dificulta la unioacuten entre ellos Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza ioacutenica y disminuyendode esta manera la incubacioacuten de las pruebas
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 30
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 32
bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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En esta etapa de sensibilizacioacuten las posibilidades deasociacioacuten pueden incrementarse mediante agitacioacutencentrifugacioacuten yo variacioacuten de la concentracioacuten delanticuerpo
Despueacutes de que el anticuerpo se ha fijado al antiacutegeno loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinacioacuten visible esta red tambieacuten solidifica yestabiliza la reaccioacuten
En esta etapa la reaccioacuten depende de factores como lascaracteriacutesticas del anticuerpo localizacioacuten en la membranay nuacutemero de sitios antigeacutenicos fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos
Las caracteriacutesticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamantildeo del anticuerpo involucrado y el nuacutemero desitios de combinacioacuten con el antiacutegeno Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontaacuteneamente en solucioacuten salina mientrasque los IgG no ya que las IgM pentameacutericas poseen 10sitios de combinacioacuten con el antiacutegeno y las IgG diacutemerossoacutelo dos sitios
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie su interaccioacuten con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta criacutetica denominada
potencial zeta y la reduccioacuten de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 65 ndash 70 se recomienda unaosmolalidad de 270 ndash 305 mosmkg y una conductividad de 37mmcm El control diario implica el examen de su aparienciafiacutesica ausencia de turbidez particulas o sedimento asiacutecomo corroborar la capacidad para generar hemoacutelisiscrenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D un anti- jk anti- fy oanti- kell diluido se compara su capacidad de deteccioacutencontra un medio salino normal incubando 10min a 37ordmC enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo en tanto que enmedio salino no
MATERIAL Y EQUIPO
Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla10 Pipetas pasteur
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
29
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 30
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentriacutefuga1 Bantildeo Mariacutea
MATERIAL BIOLOGICO
Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5Suero
REACTIVOS
Reactivo de LISSReactivo de Coombs
TECNICA1- Lavar los eritrocitos
Separar el suero del paquete de gloacutebulos rojos
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo deensayo y agregarle solucioacuten salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
2- Realizar la Prueba de LISS
Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
Mezclar y centrifugar un minuto decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000
RPM Anotar los resultados
3- A las pruebas negativas realizar Coombs
Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombscentrifugar 30 seg
Leer aglutinaciones y anotar resultados
REACTIVOS UTILIZADOS
REACTIVO MARCA FECHA DECADUCIDAD
ASPECTO COLOR LOTE
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 30
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
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DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 32
bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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SueroAntiglobuina
humana
Lafon 31 01 2009 Transparente Verde 406
LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI
1 antildeo Transparente Transparente
----------
PACIENTE ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1 GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2 GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)
RESULTADOS
INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
La hemoacutelisis o la aglutinacioacuten representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Los resultados negativos no severa aglutinacioacuten o hemolisis
ESQUEMAS
CONCLUSIONES
Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguiacutenea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser al igual que otros reactivos unpotencializador de la reaccioacuten antiacutegeno-anticuerpo Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga
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Tubo Resultado
M1 NEGATIVOm1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTES NEGATIVO
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCIONPRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios gloacutebulos rojos (GR) de un individuo Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo (mientras los eritrocitosestaacuten circulando en el individuo) La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos previamente lavados para eliminar otras proteiacutenas no fijadas a el una prueba directa positiva significa que larelacioacuten antiacutegeno-anticuerpo ocurrioacute in vivo es decir que la fijacioacuten del
anticuerpo sobre el antiacutegeno se realizo en el organismo del individuo enestudio
Las indicaciones principales de esta prueba son diagnostico de enfermedadeshemoliacuteticas ictericia o anomaliacuteas en la apariencia de los gloacutebulos rojos bajo elmicroscopio ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los gloacutebulosrojos y causan anemia para investigar reacciones en transfusiones Parainvestigar la induccioacuten de drogas en ceacutelulas rojas sensibilizadas medicamentos(por ejemplo quinidina metildopa procainamida y otros) que pueden llevar a la produccioacuten de estos anticuerpos
OBJETIVO Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losgloacutebulos rojos del individuo
MATERIAL
bull 10 Tubos de 1275
bull 10 Pipetas Pasteur
bull 1 Gradilla
bull 1 Bulbo
bull Papel Parafilm
bull Microcentriacutefuga
bull Bantildeo Mariacutea a 37degC
MUESTRA BIOLOGICA
Eritrocitos lavados de (3-5) del donador o pacienteREACTIVO
Suero de CoombsSuero anti-globulina humana Lafon Lote 406 Cad 310109 Color verde Aspecto transparente
TECNICA
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5)Centrifugar a 1000 rpm durante 20 segDesprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacionRotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(frac12frac1418)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de CoombsColocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5) mezclar completamente y agregar al tubo 1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg
LECTURA
Aglutina- Prueba de Coombs directa es positiva
No aglutina- Prueba de Coombs directa es negativa
ESQUEMAS y RESULTADOS
CONCLUCION
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los gloacutebulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones ademaacutes
sirve para la determinacioacuten de anemia hemoliacutetica autoinmune entre otras afecciones
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom
DILUCIONES
frac12 positiva
frac14 positiva
18 positiva
116 negativa
132 negativa
164 negativa
1128 negativa1256 negativa
31
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 32
bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacteriascoliformes que contienen sustancias quiacutemicas en suestructura parecidas a las de este sistema Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que eacutestos tendraacuten durante toda su vida
Los anticuerpos irregulares son los que no estaacuten de esamanera aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta queacute o coacutemo se induce su produccioacuten Losadquiridos se conocen tambieacuten como inmunes y son elresultado de la exposicioacuten a antiacutegenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusioacuten o en las mujerespor el embarazo estos anticuerpos son dirigidos contraantiacutegenos de sistemas diferentes al ABO
Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G las cuales producenhemoacutelisis extravascular en el bazo o en el hiacutegado mediantefagocitosis del complejo eritrocito maacutes anticuerpo
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) maacutes comunes en
nuestra poblacioacuten son los que involucran a los sistemasMNSs P1 Kidd (Jka Jkb) Duffy (Fya Fyb) Kell Lewis yDiego
OBJETIVO identificacioacuten del anticuerpo irregular a traveacutesde las diferentes teacutecnicas
MATERIAL
bull 10 Tubos de ensaye
bull 10 Pipetas Pasteur
bull
1Gradillabull 1 Bulbo
bull Papel Parafim
MATERIAL BIOLOGICO
bull Gloacutebulos rojos lavados al 3 - 5
bull Suero
bull REACTIVOSReactivos
1 Suero de Coombs2 Albuacutemina bovina
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bull EQUIPO1 Microcentriacutefuga2 Bantildeo Mariacutea oacute Estufa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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3 SOLUCION SALINA4 SOLUCION DE LISS
TEacuteCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucioacuten salina (3veces)SALINA RAacutePIDA
Agregar una gota de Eritrocitos LavadosDiluiacuterlo al 3-5 con solucioacuten salina 09Agregar 2 gotas de sueroCentrifugar y observar anotar desprendimientodel botoacuten
SALINA 37deg BANtildeO MARIacuteA1) Incubar tubos a Bantildeo mariacutea a 37degC durante 1
hora (o 20 min)
2) Centirfugar despueacutes de haber pasado eltiempo
3) Desprender el botoacuten de eritrocitos yobservar
AGLUTINACIOacuteNndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
SALINA COOMBS1) Con solucioacuten salina 09 lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinacioacuten 3 veces
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs
AGLUTINACIOacuteN ndash No es compatibleNO AGLUTINACIOacuteN - Lavar 3 veces
TECNICA LISS
1 Poner dos gotas de LISS en cada tubo agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5 seguacuten el nuacutemero detubo correspondiente
2 Mezclar y centrifugar un minuto decantar el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo
3 Poner nuevamente 2 gota de LISS resuspender poragitacioacuten agregar 2 gotas de suero problema mezclarincubar 15 minutos a 37ordm C centrifugar 30 seg A 1000RPM
4 Anotar los resultados
A las pruebas negativas realizar Coombs
1 Lavar 3 veces las ceacutelulas agregar suero de Coombs
centrifugar 30 seg2 Leer aglutinaciones y anotar resultados
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
OBTENIDO DE wwwquimicaclinicauvblogspotcom 34
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TECNICA ALBUMINA BOVINA 8 Agregar 2 gotas de albuacutemina al 229 Centrifugar 20 segundos10observar aglutinacioacuten o hemolisis o no aglutinacioacuten
11A los tubos con lecturas negativas incubar 20minutos en bantildeo Mariacutea a 37 degC12Centrifugar y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten llevar a Coombs
13Lavar tres veces decantar y quitar el exceso desalina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo deCoombs y centrifugar 20 segundos y observar
bull Aglutinacioacuten o hemoacutelisis reportar incompatible
bull No aglutinacioacuten reportar compatible
Resultados ANTICUERPO IRREGULAR Anticuerpo c
InterpretacioacutenEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G y debido a esa temperatura dereaccioacuten carecen de importancia cliacutenica salvo que sureaccioacuten ocurra tambieacuten a 37 degC su importancia radica enpacientes que seraacuten intervenido a 22 ordmc como es el caso de
operacioacuten de corazoacuten
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura oacuteptima dereaccioacuten a 37 degC a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa que puedenocasionar la muerte
Esquemas
CONCLUSIONHe concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia cliacutenica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa
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