Ejercicio de cinética enzimática, inhibición de la actividad. Bioquímica Experimental, Grupo 8.

i. La enzima fosfatasa alcalina cataliza la siguiente reacción:

Un compuesto fosfatado, llamado FP (sustrato), perderá el grupo fosfato en presencia de la fosfatasa. Un inhibidor de esta enzima es el Oxalato de Bromolevamisol.

Para saber el tipo de inhibición que este compuesto causa sobre la fosfatasa alcalina se realizó el siguiente experimento:

1) Determinación de la actividad en presencia de concentraciones crecientes de sustrato (FB) sin inhibidor

2) Determinación de la actividad en presencia de concentraciones crecientes de sustrato (FP) en presencia de tres concentraciones distintas del inhibidor (Oxalato de Bromolevamisol).

Contesta lo siguiente

A) Realiza un análisis grafico (actividad vs concentración de sustrato, es decir, una gráfica tipo Michaelis Menten) de cada una de las 4 mediciones.

B) Realiza un análisis de Lineweaver-Burk (doble recíproco) de cada una de las 4 mediciones. C) Usando el gráfico de de Lineweaver-Burk, calcula la Km y Vmax de cada una de las

mediciones (i.e se tendrían que encontrar 4 Km y 4 Vmax).D) Determina que tipo de inhibición causa el oxalato de bromolevamisol sobre la actividad de la

fosfatasa alcalina, FUNDAMENTA la respuesta en términos gráficos y cinéticos.

ii. La transaminasa glutámico pirúvica (TGP) transfiere un grupo amino del glutamato al piruvato, como se muestra en la siguiente reacción:

El ácido 2-hidroxisuccínico es capaz de unirse a la TGP e inhibir su actividad

Para saber el tipo de inhibición que este compuesto causa sobre la TGP se realizó el siguiente experimento:

1) Determinación de la actividad en presencia de concentraciones crecientes de sustrato (glutamato, Glu) sin inhibidor.

2) Determinación de la actividad en presencia de concentraciones crecientes de sustrato (Glu) en presencia de tres concentraciones distintas del inhibidor (2-hidroxisuccínico).

Contesta lo siguiente

A) Realiza un análisis grafico (actividad vs concentración de sustrato, es decir, una gráfica tipo Michaelis Menten) de cada una de las 4 mediciones.

B) Realiza un análisis de Lineweaver-Burk (doble recíproco) de cada una de las 4 mediciones. C) Usando el gráfico de de Lineweaver-Burk, calcula la Km y Vmax de cada una de las

mediciones (i.e se tendrían que encontrar 4 Km y 4 Vmax).D) Determina el tipo de inhibición que causa el ácido 2-hidroxisuccínico sobre la actividad de la

TGP, FUNDAMENTA la respuesta en términos gráficos y cinéticos.