documentos.cofepris.gob.mxdocumentos.cofepris.gob.mx/.../GRL/ApendiceIEcoli.docx · Web viewEl...

PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL

MÉTODO APROBADO PARA LA ESTIMACIÓN DE LA DENSIDAD DE E.

coli POR LA TÉCNICA DEL NMP, PARA PRODUCTOS DE LA PESCA.

APÉNDICE I NORMATIVO.NOM-210-SSA1-2014

Participaron en la elaboración de este protocolo.Nombre: Liliana Areli Cano RamirezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Supervisor de Microbiología Sanitaria55 50805200 EXT. [email protected]

Arturo Vargas Tapia PrandizComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Químico Jefe de Sección55 50805200 EXT. [email protected]

María Esperanza Rodríguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]

Karina Guerrero ColinaLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Q. Analista de Análisis Microbiológicos229 9811390 Ext: [email protected]

APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

1

Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de Jalisco(33) [email protected]

César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.5550805200 ext. [email protected]

Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios229 9811390 Ext: [email protected]

Anastacio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes449 [email protected]

M. en C. Juan Carlos Piliado VelascoLaboratorio de Análisis de Riesgos del Distrito FederalResponsable del [email protected]

AutorizaciónImelda Rocío GuzmánComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Control AnalíticoTeléfono: 01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

Josefina Gutiérrez RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]


2

1. OBJETIVO.Establecer las directrices para la evaluación de desempeño del Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca.

2. CAMPO DE APLICACIÓN.Este protocolo es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de implementación del Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca, con excepción de moluscos bivalvos.

3. MÉTODO DE ENSAYO.Apéndice I normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca.

4. DIAGRAMA DE FLUJOEl diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe tener acceso al método de prueba original.


3


4

5. EQUIPOS E INSTRUMENTOSLos equipos listados a continuación son los requeridos por el método. En el informe de evaluación de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos e instrumentos empleados”

Nombre Características Estado deseado

Balanza Granataria Sensibilidad de 0.1 g Calibración vigente y verificada el día de uso.

Marco de pesas Clase F1 o E210 ó 20 g;y 100 g ó 200 g ó 500 g

Calibrado

Incubadora Temperatura controlada a 44°C ± 1°C.

Calificada1 44 ± 1°C, por 24 h mínimo.Con termómetro calibrado ó verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C adecuadamente inmerso.

Incubadora Temperatura controlada a 37°C ± 1°C

Calificada 37 ± 1°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.

1 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se demuestra a través del muestreo en diferentes puntos de la temperatura de la cámara y durante un periodo determinado, la homogeneidad térmica, que asegure las condiciones de incubación de la prueba.APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

5

Homogeneizador peristáltico o licuadora2

Funcionando. Mantenimiento vigente.Licuadora no debe presentar fugas en el momento de la operación, los vasos deben ser esterilizables.

6. MATERIALESEl material de trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por calor seco o calor húmedo se considera estéril hasta por un mes siempre que se mantenga la integridad del empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la fecha de esterilización de material y la fecha de uso. Cuando se use material estéril desechable, éste deberá ser evaluado por lote en su recepción o documentar la esterilidad mediante certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser usados después de tres días.

El material de vidrio reutilizado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente mediante registros de supervisión, y demostrar la ausencia de residuos de detergente.

Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados y sus características en el informe.

● Cucharas, cuchillos, pinzas estériles● Mechero Bunsen o Fisher● Asas bacteriológicas;● Cajas Petri de 90 a 100 mm de diámetro.● Tubos de ensaye 18mm x 200mm y de 16mm x160 mm con tapón

de rosca;● Frascos de dilución de vidrio de borosilicato con tapa de rosca;● Frascos de 500mL esterilizables.● Pipetas de 1mL, 5 mL y 10mL de capacidad, graduada en 0.1mL,

0.5mL y 1mL. respectivamente ● Charolas ó contenedores estériles● Perillas o propipetas.

7. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL BIOLÓGICO DE REFERENCIA

2 El uso del homogeneizador o de la licuadora depende del tipo de muestra, deberá utilizarse el sistema de homogeneización más adecuado para preparar la muestra, y este debe describirse en el informe.APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

6

7.1. Medios de cultivo3.7.1.1. Solución de Peptona Salina4.7.1.2. MMGB (Caldo glutamato con minerales modificado) medio

selectivo de enriquecimiento.7.1.3. TBGA (Agar bilis glucurónido)5

7.2. Cepas Control7.2.1. E. coli ATCC 25922 o ATCC 8739 y7.2.2. E. faecalis ATCC 29212 o ATCC 19433.

8. MUESTRAS.8.1. Grupo de interés: productos de la pesca8.2. Tipo de alimentos: crudos, procesados, congelados, secos, otros.8.3. Cantidad: 1500g y almacenar en condiciones adecuadas,

dependiendo de la matriz. Se debe además contar con la trazabilidad de la muestra por ejemplo tipo de muestra, marca, lote, fecha de caducidad.

9. DESARROLLO EXPERIMENTAL9.1. Ajuste de Inóculo.

9.1.1. Previo al ensayo de evaluación para la inoculación de la muestra se debe contar con cepas que demuestren su identidad y pureza.

9.1.2. El protocolo de preparación del inóculo puede elegirse a conveniencia del laboratorio, este debe describirse en el informe.

9.1.3. Para la preparación del inóculo puede consultarse la “Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos por la técnica del número más probable,” (CCAYAC-CR-01, punto 4.2.1.1 y 4.2.1.2), ó bien se deberán realizar diluciones y el conteo de estas por duplicado para identificar la dilución apropiada para la suspensión de trabajo misma que se recomienda aproximadamente de 10,000 UFC/mL. Por lo tanto en la

3 La composición de los medios de cultivo debe coincidir con lo especificado en la NOM-210-SSA1-2014.4 La peptona recomendada es Oxoid LP0034 puede utilizarse otra marca y catálogo siempre que se cumplan satisfactoriamente las pruebas evaluación del medio de cultivo. Se debe utilizar agua peptonada 1% salina, conforme indica el método ISO de referencia. La COFEPRIS realizará una fe de erratas a la NOM-210.5 Alternativamente puede utilizarse en el medio TBX, con base en la actualización el método de referencia del Apéndice I, ISO 16649-3 2015.APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

7

dilución 1:10 de la muestra: por cada 25 g de muestra en 225 mL de solución se tendría una concentración aproximada de 40 UFC/mL.

9.2. Preparación de la muestra Dependiendo del tipo de muestra empleada seguir el procedimiento de preparación de muestras indicado en I.6 de la NOM-210-SSA1-2014, para obtener una dilución 1:10

9.3. Verificación de la muestra.

Realizar por triplicado el análisis simultáneo de la muestra sin fortificar (Blanco de muestra), siguiendo las mismas condiciones de prueba que para la muestra fortificada. Realizar el análisis estadístico, considerando la condición de la muestra, para muestras con recuperación de E. coli, no se debe fortificar y no se debe aplicar el criterio de verificación del tamaño del inóculo.

9.4.Fortificación de la muestra.Calcular el volumen del inóculo de las dos cepas control con respecto a la cuenta obtenida en el punto 9.1, hasta obtener una concentración aproximada por muestra considerando: Obtener aproximadamente 100% de tubos positivos en la primera dilución, un 10% de tubos positivos en la segunda dilución y 1% de tubos positivos para la tercera dilución. Ejemplo: se inocula una suspensión aproximada a 10,000 UFC en la dilución primaria 1:10. (ver verificación del inóculo en 9.6)

9.5.Realización de la prueba.9.5.1. Seguir el método de prueba y su interpretación de resultados,

considerar los controles independientemente si se trata de muestras naturalmente contaminadas o fortificadas

9.5.2. Controles9.5.2.1. Control positivo. Realizar la fortificación de los

medios de cultivo sin la muestra con un inóculo de E. coli igual al utilizado en fortificación de la muestra.

9.5.2.2. Control Negativo. Realizar la fortificación de los medios de cultivo sin la muestra y con la cepa control de Enterococos faecalis utilizando un nivel de inóculo similar al del control positivo.

9.6.Verificación del inóculoAPÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

8

El nivel de fortificación debe ser verificado por sextuplicado, es decir para la dilución 10-1 se deberán hacer 6 repeticiones inoculando un mL de la suspensión en dos placas petri, adicionar de 18 a 20 mL de Agar Cuenta Estándar, agitar suavemente para homogeneizar el inóculo, evitar que el medio salpique la tapa de la caja, incubar a 37°C +/- 1°C por 24-48 horas. Después del periodo de incubación contar las colonias y registrar en el formato correspondiente. Calcular el Coeficiente de variación (CV) de la concentración del inóculo para cada nivel de fortificación utilizando los valores obtenidos de las 6 repeticiones, dicho valor no debe ser mayor al 15%, ver el siguiente diagrama.


9

9.7 Repetibilidad

9.7.1. Pesar diez fracciones de de muestra y proceder como se indica en I.6 de la NOM-210-SSA1-2014 para obtener diluciones 1:10

9.7.2 Inocular cada frasco con el volumen determinado de la suspensión de trabajo de 10,000 UFC/mL.

9.7.3 Verificar el inóculo de acuerdo al 9.6.9.7.4 Realizar el método de prueba de acuerdo al apéndice I normativo, de

la NOM-210-SSA1-2014.


10

9.7.5 Registrar los resultados en el formato del informe.

9.8 Reproducibilidad

9.8.1 Un segundo analista o el mismo en un segundo momento realizará lo declarado en el punto de repetibilidad.

9.8.2 Registrar los resultados en el formato del informe.

NOTA: En la evaluación de ambos parámetros deberá tenerse la evidencia del seguimiento de los controles utilizados.

10. Análisis Estadístico

10.1. Muestras no contaminadas naturalmente o fortificadas

En muestras no contaminadas naturalmente o fortificadas. La combinación encontrada para el control positivo se tomará como el valor de referencia para determinar el intervalo de confianza. El 95% de los resultados de los ensayos deberán caer dentro del intervalo de confianza del control positivo.

10.2. Muestras contaminadas naturalmente

Para muestras contaminadas naturalmente, el intervalo de confianza del 100% de los resultados debe sobre superponerse entre las series de resultados. Para estas muestras no es necesario realizar fortificación de la muestra ni la verificación del inóculo.

10.3. RepetibilidadCalcular el logaritmo del resultado obtenido. Calcular el promedio que se expresa como la suma de los logaritmos de cada réplica entre el número total de réplicas.

x=∑i=1

n

( log x i )

nCalcular la desviación estándar.

σ=√∑i=1n

1( xi−x)

n−1


11

Calcular el coeficiente de variación.

CV=σx

Calcular rr=CVr∗2.8

Dónde:x= Promedio de réplicas Xi=1…...Xn= Resultado obtenido de la densidad microbiana (NMP) de cada réplicaσ= Desviación estándarCV= Coeficiente de variaciónr= varianza de Repetibilidad

10.4 Reproducibilidad

Calcular el valor de varianza de Reproducibiliad (R)R=CV R∗2.8

10.5 Definición de incertidumbre10.5.1. Factores de incertidumbre en el método.

Enlistar las posibles fuentes de incertidumbre

10.5.2. Cálculos para la incertidumbre combinada.

υ c=√r2+R2Dónde:R= Reproducibilidadr = repetibilidadυ c=Incertidumbre combinada

11. Criterios de Aceptación.

Parámetro de desempeño

Criterio

Muestras fortificadas

Criterio

Muestras naturalmente contaminadas

Verificación del Al verificar el tamaño del inóculo No aplicaAPÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

12

tamaño del inóculo*

por lo menos seis veces en promedio se obtienen las

siguientes cuentas teóricas:

10-1 entre 10 y 100 UFC / mL

10-2 entre 1 y 10 UFC / mL

10-3 entre 1 y 0 UFC / mL

El coeficiente de variación (CV) de las cuentas debe ser menor de

15%

Verificación de la muestra*

Muestras no contaminadasNo. de repeticiones = 3**

Resultados positivos = 0%No aplica

Repetibilidad

No. de repeticiones = 10

No. de analistas = 1

Resultado = r < 32%

Reproducibilidad No. de repeticiones = 10 por analistaNo. de analistas = 2Resultado= R < 32%

Incertidumbre Enlistar los factores de incertidumbre en el método.

Realizar cálculos para la incertidumbre combinada.

** Si se realizan análisis en días diferentes, se debe verificar la muestra en cada día.


13

INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL

MÉTODO APROBADO PARA LA ESTIMACIÓN DE LA DENSIDAD DE E.

coli POR LA TÉCNICA DEL NMP, PARA PRODUCTOS DE LA PESCA.

APÉNDICE I NORMATIVO.NOM-210-SSA1-2014.

Participaron en la elaboración de este informe.Nombre: Liliana Areli Cano RamirezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Supervisor de Microbiología Sanitaria55 50805200 EXT. [email protected]

César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.5550805200 ext. [email protected]

María Esperanza Rodríguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]

Karina Guerrero ColinaLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Q. Analista de Análisis Microbiológicos229 9811390 Ext: [email protected]


14

Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de Jalisco(33) [email protected]

Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios229 9811390 Ext: [email protected]

Anastacio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes449 [email protected]

M. en C. Juan Carlos Piliado VelascoLaboratorio de Análisis de Riesgos del Distrito FederalResponsable del [email protected]

AutorizaciónImelda Rocío GuzmánComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Control AnalíticoTeléfono: 01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

Josefina Gutiérrez RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]


15

1. OBJETIVOEstablecer los lineamientos para la elaboración del informe en la evaluación del desempeño del método (declare clave y nombre del método) acorde al Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca, evaluándose la repetibilidad, reproducibilidad e incertidumbre.

2. CAMPO DE APLICACIÓN.Este documento es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de implementación del Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca .

3. EQUIPOS E INSTRUMENTOS Equipo Descripción:

Identificación, Marca, Modelo

Estado deseado6

Evidencia del estado.7

Balanza Granataria

Haga clic aquí para escribir texto.

Verificado y Calibrado

Elija un bloque de creación.

Marco de pesas Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado Haga clic aquí para escribir texto.

Incubadora44°C ± 1°C


Calificada Haga clic aquí para escribir texto.

Incubadora37°C ± 1°C


Calificada Haga clic aquí para escribir texto.

Homogeneizador peristáltico o

licuadora


Mantenimiento vigente


Termómetros, registradores de temperatura yDataloggers


Calibrados y/o verificados


6 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/Terceros-Autorizados.aspx7Hacer referencia al registro, número de informe de calibración/calificación. Anexar copia de las evidencias al presente informe.APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

16

Reportó:Nombre, Firma y Fecha


Supervisó:Nombre, Firma y Fecha


4. MATERIALES Material Marca Lote Certificado de

calidad8

Caja petri de vidrio o desechable, diámetro de 90 mm a 100 mm




Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora




Cucharas, tenedores y cuchillos para el manejo de la muestra.

No aplica Lote de esterilización:Haga clic aquí para escribir texto.Registro: Haga clic aquí para escribir texto.

No aplica

Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables

No aplica Lote de esterilización: Haga clic aquí para escribir texto.Registro: Haga clic aquí para escribir texto.

Registro de prueba de esterilidad:Haga clic aquí para escribir texto.

8 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de esterilidad realizada al material.APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

17

Material Marca Lote Certificado de calidad

Pipetas estériles de vidrio graduadas de diferentes capacidades: 10 mL, 5 mL y 1mL con divisiones minimas de 1mL, 0.5 mL y 0.1mL

No aplica Lote de esterilización: Haga clic aquí para escribir texto.Registro: Haga clic aquí para escribir texto.


Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL



Tubos de ensaye de 18mm x 200mm y de 16mm x160 mm con tapón de rosca



Reportó:Nombre Firma y Fecha


Supervisó:Nombre Firma y Fecha


5. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL BIOLÓGICO DE REFERENCIA

5.1 Medios de Cultivo.


18

Reactivo o medio de cultivo

Marca Lote Resultados de desempeño

Fecha de realización

❏ TBGA9

❏ TBXHaga clic aquí para escribir texto.



Solución Peptona salina




MMGB Haga clic aquí para escribir texto.







5.2. Cepas ControlCepas utilizadas ATCC Certificado u hoja de identidad

y aseguramiento de calidad

Escherichia coli Haga clic aquí para escribir texto.


E. faecalis Haga clic aquí para escribir texto.






6. MUESTRASConsiderando que este documento solo tiene como alcance los productos de la pesca se hace la selección de la matriz: __________

9 Alternativamente puede utilizarse en el medio TBX, con base en la actualización el método de referencia del Apéndice I, ISO 16649-3 2015.APÉNDICE I NORMATIVO, NOM-210-SSA1-2014

19

(cantidad: _______________) dado que esta muestra es de mayor importancia para el laboratorio.

Descripción de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de preservación):____________________________________



Autorizó:Nombre Firma y Fecha


7 DESARROLLO EXPERIMENTAL.

7.1 Ajuste del inóculo. (Ver punto 9.1.3 del protocolo)7.1.1 Descripción de la preparación del inóculo:

Escriba en esta sección el protocolo empleado. por ejemplo:

Se inoculó una asada de Escherichia coli en 10 mL de Caldo Infusión Cerebro Corazón, se incubó a 35o C +/- 2o C por 22 a 24 h. A partir del cultivo se realizaron una serie de diluciones con solución salina 0.85% hasta llegar a la dilución 10-10.Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-10 y se adiciona AST, se incubó a 35o C + 2o C por 22h a 24 h. Se realizó el conteo en cada dilución y se realizó el registro de los resultados de la concentración del microorganismo en cada dilución.Se seleccionó la dilución con cuentas de 10,000 UFC/mL. Por lo tanto en la dilución 1:10 de la muestra: por cada 25 g de muestra en 225 mL de solución se tendría una concentración aproximada de 40 UFC/mL.Las diluciones se mantienen en refrigeración y no son utilizadas por más 26h.

Fecha de preparación:_______________________Fecha de lectura:_______Diluciones 10-6 10-7 10-8 Dilución

seleccionada

Cuenta de colonias

>250 >250 218 200 25 20 10-5

UFC/mL >250 210 <25 UFC 21000

Volumen seleccionado (inóculo) 0.5mL


20





7.2. Preparación de la muestra Indicar el procedimiento de preparación de la muestra.

Por ejemplo: I.6.2 Productos congelados. Los productos congelados deben permitir que obtengan una consistencia adecuada para ser muestreados en el laboratorio, almacenados de 18°C a 27°C (temperatura del laboratorio) por máximo de 3h o a 2°C ± 2°C por24h. Las muestras deben ser analizadas tan rápido como sea posible después de este paso. Si el producto todavía está congelado, tomar una porción del diluyente a temperatura del laboratorio y adicionar para facilitar la descongelación.Se pesó 25 g de muestra y se transfirió a frascos de dilución conteniendo 225 mL Solución peptona salina para obtener una dilución 1:10. Homogeneizando durante 1 ó 2 min en licuadora a velocidad media.

Ver registro en:__________________________ Supervisó:________________

7.3. Verificación de la muestra.

No. de réplicas

de laMuestra

Inoculación en Caldo Glutamato con Minerales

Modificado MMGB

Resultado en placas TBX NMP / g

10 -1 10-2 10-3 10 -1 10-2 10-3 Haga clic aquí para escribir texto.

1 Haga clic aquí

para escribir texto.

Haga clic aquí



Haga clic aquí





21

No. de réplicas

de la

Inoculación en Caldo Glutamato con Minerales

Modificado MMGB

Resultado en placas TBX NMP / g

2 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí




3 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí




Ver registro en:____________________ Realizó: ______________________ Supervisó:________________

7.4 Fortificación de la muestra.(Solo en caso de que la muestra no haya estado naturalmente contaminada) Indicar como efectuó la fortificación de la muestra.

7.4.1 Controles

7.4.1.1. Control positivo (E. coli)Crecimiento MMGB 10-1 MMGB 10-2 MMGB 10-3

Vire del medio

☒Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

Crecimiento TBGA/TBX TBGA/TBX TBGA/TBX

Colonias azules

☒Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

Combinación de tubos obtenida


Resultado Haga clic aquí para escribir texto.


7.4.1.2 Control negativo. (E. faecalis)


22

Crecimiento MMGB 10-1 MMGB 10-2 MMGB 10-3

Vire del medio

☒Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

TBGA/TBX TBGA/TBX TBGA/TBX

Crecimiento ☒Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

☐Si☐No

Combinación de tubos obtenida


Resultado Haga clic aquí para escribir texto.



23

7.5.Verificación del inóculo

7.5.1 Analista 1

Ver registro en:____________________ 7.5.2 Analista 2


24

Verificación del inóculo

Analista RepeticiónDilución

1:10 1:100

1

1

Ver registro en:____________________

7.6. Resultados 7.6.1 Analista 1

No. de réplicas

de laMuestra

Inoculación en MMGB Resultado en placas TBGA / TBX NMP / g

10 -1 10-2 10-3 10 -1 10-2 10-3

1 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





2 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





3 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





4 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





5 Haga clic aquí

Haga clic aquí

Haga clic aquí para

Haga clic aquí





25

No. de réplicas

de la

Inoculación en MMGB Resultado en placas TBGA / TBX NMP / g

10 -1 10-2 10-3 10 -1 10-2 10-3



escribir texto.


escribir texto.

escribir texto.

escribir texto.

6 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





7 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





8 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





9 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





10 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí






7.6.1 Analista 2


26

No. de réplicas

de laMuestra

Inoculación en MMGB Resultado en placas TBGA/TBX NMP / g

10 -1 10-2 10-3 10 -1 10-2 10-3

1 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





2 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





3 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





4 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





5 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





6 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





7 Haga clic aquí

para

Haga clic aquí

para

Haga clic aquí para escribir

Haga clic aquí

para





27

No. de réplicas

de la

Inoculación en MMGB Resultado en placas TBGA/TBX NMP / g

10 -1 10-2 10-3 10 -1 10-2 10-3

escribir texto.

escribir texto.

texto. escribir texto.

texto. texto. texto.

8 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





9 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí





10 Haga clic aquí


Haga clic aquí



Haga clic aquí







28

7.7. Cálculos 7.7.1 RepetibilidadAnalista 1

Analista : Anotar el nombre del analista Fecha de inicio: 2/15/2016Matriz:Escribir el nombre de la matriz empleadaFecha de término:Analito:Registrar el nombre del microorganismo controlInóculo UFC/mL: Asentar la concentración del microorganismo

Registros: Referenciar los formatos o bitácoras internas

Analista NMP Log NMP Promedio Varianza %CV r

1

1 Err:502

Err:502 Err:502 Err:502 Err:502 Err:502

2 Err:5023 Err:5024 Err:5025 Err:5026 Err:5027 Err:5028 Err:5029 Err:502

10 Err:502

Criterio Dictamen r<32% Err:502

Realizó: Supervisó:Fecha: Fecha:

No. Muest

raDesviación Estándar

Analista 2


29

Analista : Anotar el nombre del analista Fecha de inicio: Matriz:Escribir el nombre de la matriz empleadaFecha de término:Analito:Registrar el nombre del microorganismo controlInóculo UFC/mL: Asentar la concentración del microorganismo

Registros: Referenciar los formatos o bitácoras internas

Analista NMP Log NMP Promedio Varianza %CV r

2

1 Err:502



10 Err:502

Criterio Dictamen r<32% Err:502

Realizó: Supervisó:

No. Muest

raDesviación Estándar

7.7.2 Reproducibilidad


30

Analista(s) :Anotar el nombre del (los) analista(s) Fecha de inicio: Matriz:Escribir el nombre de la matriz empleada Fecha de término:Analito:Registrar el nombre del microorganismo control Registros: Referenciar los formatos o bitácoras internas

AnalistaNo. Muestra NMP Log NMP Promedio Promedio Varianza CV % R

1

1 Err:502

Err:502



10 Err:502

2

1 Err:502

Err:502


10 Err:502

Criterio Dictamen R<32% Err:502

Realizó: Supervisó:Fecha: Fecha:

Desviación Estándar

7.7.3 Incertidumbre


31

Parámetro de Incertidumbre

Método: Registrar el nombre y clave del método internoAnalista : Anotar el nombre del (los) analista(s)Fecha de inicio: Matriz:Escribir el nombre de la matriz empleadaFecha de término:Analito:Registrar el nombre del microorganismo controlRegistros:

r r2 0.000

R R2 0.000

Incertidumbre combinada 0.000

Descripción de las fuentes de incertidumbre del método:Haga clic aquí para escribir texto.


32

8. RESULTADOS

Parámetro Resultados obtenidos

Criterio de aceptación Cumple

Verificación del inóculo

Dil 1:10:______Dil 1:100:_____Dil 1:1000:____

CV <= 15% ☐ Cumple☐No cumple

Verificación de la muestra


Ningún resultado positivo

☐ Cumple☐No cumple

Intervalo de confianza

NMP control positivo:_____Intervalo de confianza:

___________% de resultados

dentro del intervalo de confianza:_______

El 95% de los resultados se encuentra dentro del intervalo de confianza del control positivo

☐ Cumple☐No cumple

RepetibilidadHaga clic aquí para

escribir texto.< 32% ☐ Cumple

☐No cumple

Reproducibilidad


< 32% ☐ Cumple☐No cumple

Incertidumbre Combinada


No aplica No aplica

9. Discusión de los resultados

Por ejemplo: Los resultados encontrados demuestran que al aplicar el método se obtienen resultados confiables y reproducibles, y por tanto se puede utilizar para el


33

análisis de los productos descritos en este informe.

10. CONCLUSIÓN

☐Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Método (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), acorde al Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca. NOM-SSA1-210-2014 al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el análisis de productos de la pesca.

☐Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se concluye que el Método Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca. NOM-SSA1-210-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX NO es adecuado para el análisis de indicar la matriz para la cual no cumplio 11 BIBLIOGRAFÍA

11.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MÉTODOS DE PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS. Apéndice I Normativo. Método aprobado para la estimación de la densidad de E. coli por la técnica del NMP, para productos de la pesca.

11.2 Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-CR-01.

12ANEXOSAnexe copia de las evidencias referidas en el informe.


34

documentos.cofepris.gob.mxdocumentos.cofepris.gob.mx/.../GRL/ApendiceIEcoli.docx · Web viewEl...

Documents

Transcript of documentos.cofepris.gob.mxdocumentos.cofepris.gob.mx/.../GRL/ApendiceIEcoli.docx · Web viewEl...