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ManualparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasencoloniasderesguardoparaanfibiosyprogramasdereintroducciónVersión2.0:actualizadael2017Basadaen:Actasdeuntallerrealizadoentreel16y18defebrerodel2009SanDiegoZoo

FotografíasdecubiertacortesíadeAllanPessieryRonHolt.UnacontribucióndelIUCN/SSCConservationBreedingSpecialistGroupencolaboraciónconAmphibianArk,SanDiegoZooyZooAtlanta

LaIUCNpromueveencuentros,talleresyotrosforosparaelestudioyanálisisdeasuntosrelacionadosalaconservación,ycreequelosreportesdeestasreunionestienenmayorutilidadcuandosondifundidosampliamente.LasopinionesypuntosdevistaexpresadosporlosautoresnorepresentannecesariamentelaspolíticasformalesdelaIUCN,suscomisiones,susecretariadoosusmiembros.

©CopyrightCBSG2017Ladesignacióndeentidadesgeográficasenestedocumento,ylapresentacióndelmaterialeneste,noimplicalaexpresióndeningunaopiniónporpartedelaIUCNrespectoalacondiciónjurídicadecualquierpaís,territorio,área,odesusautoridades,osobreladelimitacióndesusfronterasolímites.Pessier,A.P.andJ.R.MendelsonIII(Eds.).2017.Manualparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasenlascoloniasderesguardoparaanfibiosyprogramasdereintroducciónalanaturaleza,versión2.0.IUCN/SSCConservationBreedingSpecialistGroup:AppleValley,MN.Sepuededescargarunaversióndigitaldeestereporteenwww.cbsg.org<http://www.cbsg.org/>.

EsteproyectofuefinanciadoporlasubvenciónLG-25-08-0066delInstituteofMuseumandLibraryServices.Lospuntosdevista,hallazgos,conclusionesorecomendacionesexpresadosenestapublicaciónnorepresentannecesariamenteaquellosdelInstituteofMuseumandLibraryServices.Traducidoalespañolpor:-GabrielaMoralesyClaudioRivera(enrepresentacióndelaAsociaciónLatinoamericanadeParquesZoológicosyAcuarios-ALPZA)-EstebanO.Lavilla,InstitutodeHerpetología,FundaciónMiguelLillo,SanMigueldeTucumán,Argentina-RobertoElíasPiperis,LaboratoriodeVidaSilvestre,FacultaddeVeterinariayZootecniaUniversidadPeruanaCayetanoHeredia,Perú;ZoológicodeDenverEditadoenespañolpor:-VicenteVergaraWilson,MédicoVeterinario-LuisCarrillo,CoordinadordeEntrenamiento,ArcadelosAnfibios

MANUALPARAELCONTROLDEENFERMEDADESINFECCIOSASENCOLONIASDESUPERVIVENCIADEANFIBIOSYPROGRAMAS

DEREINTRODUCCIÓN

EDITORES:ALLANP.PESSIER&JOSEPHR.MENDELSONIII

ACTASDEUNTALLERREALIZADOENTREEL16Y18DEFEBRERODEL2009

enlaZoologicalSocietydeSanDiego

Organizadopor:AllanP.Pessier,DVM,Dipl.ACVP

SanDiegoZoo&

JosephR.MendelsonIII,PhDZooAtlanta

Facilitadopor:

OnnieByers,PhDIUCNConservationBreedingSpecialistGroup

Actualizadoenmarzodel2017por:

AllanP.Pessier,DVM,Dipl.ACVP

SanDiegoZoo&

JosephR.MendelsonIII,PhDZooAtlanta

BenjaminTapley,MSc

ZSLLondonZoo

MattGoetzDurrellWildlifeConservationTrust

Índice1.INTRODUCCIÓN………………………………………………………….………………………………….………..82.LISTADECONTRIBUIDORES…………………………………………….…………………..……….….………..113.EVALUACIÓNDERIESGOS………………………………………………………….………….……….………….12 3.0INTRODUCCIÓN………………………………………………………….………………….………..12 3.1RECOMENDACIONESGENERALESPARALAREINTRODUCCIÓNY PROGRAMASDETRANSLOCACIÓN………………………….…………………….…………12 3.2MITIGACIÓNDELRIESGODEENFERMEDADESPARACRÍAENCAUTIVERIOYPROGRAMASDEREINTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………………………………....14 3.3TRANSLOCACIÓN……………………………………….…………………………….…………….21 3.4LITERATURACITADA………………………..…..…………………………………….……………224.BIOSEGURIDAD……………………………………………………………………………………….…………….23 4.0INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………….………..23 4.1¿QUÉES"BIOSEGURIDAD"?...........................................................................24 4.2DEFINICIONESDEBIOSEGURIDAD……………………………………….…………….….……25 4.3COLECCIONESCOSMOPOLITASYRIESGOSDEENFERMEDADESPARAANFIBIOSSILVESTRES………………………………………………………………………………………………………….....26 4.4NIVELESDEBIOSEGURIDAD………………………………………………………………..…..…27 4.5RESUMENDEBUENASPRÁCTICASYNIVELESDEAISLAMIENTODESEGURIDAD………..33 4.6PRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD………………………………………………………………….…36 4.7CAPACITACIÓNDELPERSONALEIMPLEMENTACIÓNDEPRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD38 4.8AISLAMIENTOALARGOPLAZODEANFIBIOSDESTINADOSALAREINTRODUCCIÓN ALANATURALEZA………..……………………………………………………………….……..39 4.9INSTALACIONESPARAELAISLAMIENTOALARGOPLAZO………………………………………40 4.10HIGIENEYROPAPROTECTORADELPERSONALDEMANEJO………..……………….….…..41 4.11RUTINASDEMANEJO…………………………………..……………………………………….....43 4.12HIGIENEDELRECINTO…………………………………………………………………………...….45 4.13EQUIPO,SUSTRATOYDECORACIÓNDELRECINTO…………………………..…….….....…..45 4.14ELIMINACIÓNDEAGUASRESIDUALES……………………………………………………..….…47 4.15ELIMINACIÓNDERESIDUOSSÓLIDOS……………………………………………….……………49 4.16FUENTESDEAGUA……………………………………………….…………….……………….…..50 4.17FUENTESDEALIMENTO………………………………………….……………………………...…50 4.18DISEÑODELAINSTALACIÓNYESPECIFICACIONESDELEDIFICIO………………..………….51 4.19LITERATURACITADA……………………………………..………………..……….……………535.LIMPIEZAYDESINFECCIÓN…………………………………………………………………………………….….55 5.0INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………….………...55 5.1PRINCIPIOSDELIMPIEZAYDESINFECCIÓN…………………………………..………………..….56 5.2DESINFECTANTESQUÍMICOS.……………………………………………….……..……………..…58 5.3MÉTODOSDEDESINFECCIÓNNOQUÍMICOS…………………….……………………………....62

5.4LIMPIEZAYDESINFECCIÓNDELOSRECINTOSPARAANIMALES……………….……..……….63 5.5DESINFECCIÓNDEEQUIPOYHERRAMIENTAS……………………………………….….………..64 5.6DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDESUSTRATOSYAMUEBLADODERECINTOS.……….…....65 5.7DESINFECCIÓNDEPLANTASVIVAS……………………………………………………….…………67 5.8DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDELAGUA…………………………………….…….…….....68 5.9DESINFECCIÓNYBIOSEGURIDADENELCAMPO……………………………………...………….68 5.10TABLADEDESINFECTANTES……………………………………………………….……..….…….71 5.11LITERATURACITADA……………………………………..……………….………….……………736.CUARENTENA…………………………………………….……………………………………………..…….…....76 6.0INTRODUCCIÓN………………………………………….………………………………….…………76 6.1OBJETIVOSYDESARROLLODELOSPROGRAMASDECUARENTENA……………...……........76 6.2EVALUACIÓNDERIESGOSENCUARENTENAANFIBIA……………………………..…………....78 6.3CONSIDERACIONESDELAINSTALACIÓNYPERSONALDECUARENTENA………..…….….….80 6.4CONSIDERACIONESZOOTÉCNICASPARAANIMALESENCUARENTENA…..…..……..……...82 6.5DURACIÓNDELPERÍODODECUARENTENA…………………………………….……..….…......86 6.6CONSIDERACIONESMÉDICASENLACUARENTENA………………………………………...……88 6.7PRUEBASDELABORATORIOYTRATAMIENTODEENFERMEDADESENCUARENTENA……..92 6.8NECROPSIA……………………………………………………………………………….……..……...93

6.9PRUEBASYTRATAMIENTOSPARAPARÁSITOSINTERNOS…………………………….…...…..94 6.10PRUEBASYTRATAMIENTOPARAHONGOSQUITRIDIOS……..….….….…………..………..97 6.11PRUEBASPARADETECTARINFECCIONESRANAVIRUS……………………………………….102 6.12PATOLOGÍASCLÍNICAS(HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICACLÍNICA)…………..…………….106

6.13OTRASENFERMEDADESINFECCIOSASQUESEENCUENTRANENCUARENTENA….…….107 6.14LITERATURACITADA……………………………………..…………………………………….….112

7.EXÁMENESDEDIAGNÓSTICO……………………………………………………………………………………115 7.0INTRODUCCIÓN……………………………………….………………………………….…………..115 7.1VIGILANCIADEENFERMEDADES……………………………………………………..…………..103 7.2EVALUACIÓNDELABORATORIOSQUEREALIZANPRUEBASDE DIAGNOSTICOMOLECULAR…………………………………………..…….……..………..121 7.3PRUEBASDEDIAGNÓSTICOPARAELHONGOQUÍTRIDOANFIBIO…………………..….….126 7.4INFECCIÓNRANAVIRUS……………………………………………………..……….…………….145 7.5ENFERMEDADPROTOZOARIASIMILARALPERKINSUSDELOSRÁNIDOS………………….156 7.6DECLARACIÓNDEENFERMEDADESYPARTICIPACIÓNENBASESDEDATOSDEENFERMEDADES………………………………………………………………………………………………….…….159 7.7PRUEBASYVIGILANCIAPARADETECTARPARÁSITOSFECALES…………………………….…160 7.8HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICASÉRICA……………………………….…….…………..……....170 7.9LABORATORIOSQUEACEPTANMUESTRASANFIBIAS………………..….…………………....172 7.10LITERATURACITADA……………………………………..……………………….………………174 8.TRATAMIENTOYCONTROLDEENFERMEDADES……………………………………………….…..……...182

8.0INTRODUCCIÓN………………………………………………………….……………….…………182

8.1MÉTODOSDETRATAMIENTOYCONTROLDELHONGOQUÍTRIDOANFIBIO…..………….183 8.2CONTROLDEINFECCIONESPORRANAVIRUS………………………………………..….........197 8.3CREANDOPOBLACIONESANFIBIASLIBRESDEPATÓGENOSESPECÍFICOS……….…………199 8.4MONITOREOYTRATAMIENTODEPARÁSITOS…………………………….……………...……204 8.5MEZCLASDEELECTROLITOS……………………………………………………..……….…..……208 8.6EUTANASIA…………………………………………………………………………..…………..……209

8.7LITERATURACITADA……………………………………..……………………….…………………2099.NECROPSIA………………………………………………………………………………………..………..……..213 9.0INTRODUCCIÓN……………………………………………………………..…………….………..213 9.1PREPARACIÓNPARALANECROPSIA……………………………………………….…………….214 9.2MATERIALESNECESARIOS…………………………………………..…………..………………..215 9.3REALIZACIÓNDELANECROPSIA…………………………….…………………….……………..216 9.4NOTASANATÓMICASPARANECROPSIASANFIBIAS………….……………….………………220 9.5TOMADEMUESTRASDURANTEEVENTOSDEMORTALIDAD………..……………….……..222 9.6ENVÍODEMUESTRAS………………………………………………………..….……….…………224 9.7LITERATURACITADA……………………………………..………………….……………..………225 APÉNDICE1:MÉTODOSPARAIDENTIFICARINDIVIDUALMENTEALESPÉCIMENANFIBIO………...….226 APÉNDICE2:TRATAMIENTODEAGUASRESIDUALES............................................................247APÉNDICE3:HABITACIONESAISLADASPARAANFIBIOSDELZOOLÓGICOHENRYDOORLYENOMAHA………………………………………………………………………………………………………………….251APÉNDICE4ANÁLISISDERIESGODEENFERMEDADESYVIGILANCIASANITARIAPARAPROGRAMASDERECUPERACIÓNDEESPECIES……………..……………………………………………………………..…………260

CAPÍTULO1

INTRODUCCIÓN

LaUniónInternacionalparalaConservacióndelaNaturaleza(IUCN,porsussiglaseninglés)haestimadoqueel30%detodaslasespeciesdeanfibiosestánenpeligrodeextinción,yquealmenos484especiesestánengravepeligrodeextinción(http://www.iucnredlist.org).Elprincipalfactorcontribuyentedeladrásticadisminucióndelapoblaciónanfibiaeslaenfermedadquitridiomicosiscausadaporelhongoquítridoanfibio,específicamenteBatrachochytriumdendrobatidisyBatrachochytriumsalamandrivorans.Estehongo,diseminadopormediosantropogénicos,puedereducirlabiodiversidadanfibiaennuevoslugaresenperíodosdetiempoalarmantes,porlotanto,entenderycontrolarenfermedadesinfecciosastalescomolaquitridiomicosissehavueltoelenfoqueprincipaldelosesfuerzosconservacionistasdelosanfibiostantoinsitucomoexsituanivelglobal.

Conelobjetivodetenerunarespuestaalacrisisglobaldeextincióndeanfibios,

laComisiónparalaSupervivenciadelasEspecies(SSC,porsussiglaseningles)delaIUCNconvocóaungrupointernacionaldelosprincipalesbiólogosdeanfibiosenlaCumbredeConservaciónAnfibia,locualdiócomoresultadoelPlandeAcciónparalaConservacióndelosAnfibios(ACAP,porsussiglaseninglés;estedocumentoestádisponibleparadescargarenhttp://www.amphibians.org).ElACAPllegóalaconclusióndequelacrisisdeextincióndelosanfibios"requiereunarespuestaglobalsinprecedentesporpartedegobiernos,corporaciones,sociedadcivilycomunidadcientífica".Ésta,además,llamaalacreacióndecoloniasdesupervivenciaquereúnanarepresentantesdeespeciesdeanfibiosengravepeligrodeextinciónparamantenerlasasalvoencautiverio.Apesardequesolucionarlosfactoresquecontribuyenalaextincióndelasespeciesespreferibleamantenerlasencautiverio,esprobablequealavelocidadconlaqueéstasestándisminuyendosepierdaninnumerablesespeciesantesdequesedescubrannuevassoluciones.Porlotanto,estascoloniasdesupervivenciatienenelimportanteroldepreservaralasespeciesparareintroducirlasasuhábitatnaturalenelfuturo.QuiencoordinaesteesfuerzoglobalparadesarrollartalesprogramaseselArcadelosAnfibios(AArk,porsussiglaseninglés),unesfuerzoenconjuntodelaAsociaciónMundialdeZoológicosyAcuarios(WAZA,porsussiglaseningles),laIUCN/SSC,elGrupoEspecialistaenCríaenCautiverio(CBSG,porsussiglaseninglés)yelGrupodeEspecialistasdeAnfibios(www.amphibianark.org).ElAArkestimaque500especiesdeanfibiosrequierenintervencióninmediataexsitumediantelacreacióndecoloniasdesupervivencia.Estoesungranproyectoquenecesitalosrecursosdeunaampliavariedaddeinstituciones,entrelascualesseencuentranzoológicos,acuarios,jardinesbotánicos,museosdehistorianatural,agenciasgubernamentalesyuniversidades.Pero,

aunquelasinstitucionessepreparanparael"llamadoalaacción"delAArkylaIUCN,larealidadesque,engeneral,elcampodelcuidadodeanfibiosaúnestáensuinfanciaylaexperienciaenelcontroldeenfermedadesanfibiasestálimitadaamuypocasinstitucionesglobalmente.

Dadalarápidaexpansióndecoloniasdesupervivenciadeanfibiosalrededordel

mundo,seelaboraronpautasparamejoresprácticasencuarentenaspermanentesybioseguridaddelasinstalacionescomopartedelTallerdePlaneacióndeConservaciónExSitullevadoacaboporWAZAyCBSGenElValle,Panamáenelaño2006(resúmenesdisponiblesenhttp://www.amphibianark.org/downloads.htm).Además,enelinformefinaldeltallerdePanamáseestablecieronMedidasdeAcciónadicionalesparacrearprotocolosparaexámenesmédicos,tratamientoprofilácticodeenfermedadesinfecciosasimportantes,yvigilanciadeenfermedadesencoleccionesdeanfibioscautivos.PartesdeestasMedidasdeAcciónyasehanllevadoacabodesdeel2006enmediodeunaavalanchadenuevainformaciónenlaliteraturadeanfibiosrespectoapruebasdedeteccióndeenfermedades,protocolosdecontroldeenfermedades,yeldesarrollodeenfoquescreativosparacumplirconestrictaspautasdebioseguridadeninstalacionesinstitucionalesexsituycultivo.Estemanualtienecomoobjetivoabordarformalmenteestasmedidasdeacción,recolectandorecomendacionesdeexpertosencuidadoyveterinariosconexperienciaenmedicinadeanfibiosyevaluaciónderiesgodelasenfermedades,conelobjetivodeconsolidarlanuevainformaciónparacrearprotocolosquepuedenserfácilmenteadaptadosporlaampliavariedaddeinstitucionesquemantienenanfibioscautivos.

Estemanualtienecomopropósitoservircomounrecursode"ventanillaúnica"pararecomendacionesconrespectoacuarentena,necropsia,bioseguridaddelasinstalaciones,higieneytratamientodeenfermedadesenlasinstalaciones,yrevisiónyvigilanciadelasenfermedadesdeanfibios.Estasrecomendacionesdebenservistascomopautasaseguirynocomomandatosorequerimientos,estoyaqueningúnmanualpuederecopilartodaslasnecesidadesespecíficasdecadaprograma.Másimportanteaún,estemanualnopretendeserunreemplazodeuntextocompletodemedicinaveterinariadeanfibios(comoporejemplo:AmphibianMedicineandCaptiveHusbandry,byK.M.Wright&B.R.Whitaker,MalabarPubl.,2001).Asimismo,aunquelostemasdenutriciónyelcuidadobásicosediscutenalolargodeestemanual,éstetienecomopropósitosersolouncomplementoatextosexistentesdelcuidadodeanfibios,talescomoAmphibianHusbandryResourceGuide,Edition1.0(AssociationofZoosandAquariumsPubl.,2008)oprotocolosespecíficosparaespeciescomoeldelaRanaDoradaPanameña(http://www.ranadorada.org/species-info.html).Estemanualtienecomopropósitoservircomounrecursotécnicodetalladoparaveterinariosypersonalexperimentadoenexsituoprogramasdeconservación,guiarlosmientrasdesarrollanprogramasanfibiosnuevosoadicionales,diseñarprotocolosderevisiónrutinariosoencontrarproblemasconenfermedadesinfecciosasensuscoleccionesactuales,omoveranimalesentrecoleccionesoreintroducirlosalanaturaleza.Este

manualseráiterativoyseharándisponiblesedicionesposteriorestrasuntalleradicionalplaneadoparael2011,yocasionalmentedespués. Esperamosqueusuariosdetodaslasáreasencuentrenestemanualútilcomounrecursoprimarioy,másimportanteaún,queésteseaconsideradounportalalaliteraturaprimariaacercadelacienciaveterinariadeanfibiosysusenfermedades.Losanfibiosdelmundonecesitanconsiderableayudaparaevitarmásextinciones,yesperamosqueestemanualfacilitealgodeesaayuda. AllanP.Pessier JosephR.MendelsonIII 25deDiciembre,2009

CAPÍTULO2

LISTADECONTRIBUYENTES Lassiguientespersonascontribuyerondirectamentealcontenidofinalqueapareceenestaversióndelmanual.Lamayoríadeellos/asparticiparoneneltallerquesellevóacaboenelZoológicodeSanDiegoenfebrerode2009,yaportaronimportantescomentariosaborradoresdevarioscapítulosqueestabanporterminarse.DianeBarber,FortWorthZooEricBaitchman;ZooNewEnglandDonBoyer,SanDiegoZooOnnieByers,UICNGrupoEspecialistaenCríaenCautiverioLeighAnnClayton,NationalAquariumBaltimoreJoshCook,UniversityofGeorgiaAnnDuncan,DetroitZooRyanDeVoe,NorthCarolinaZooShannonFerrell,FortWorthZooRonGagliardo,AmphibianArk&ZooAtlantaMichaelGarner,NorthwestZooPathRichardGibson,AmphibianArk&ChesterZooAndreaJohnson,SanDiegoZooMeganJones,SanDiegoZooKimLovich,SanDiegoZooBobMailloux,SandfireDragonRanchDeniseMcAloose,WildlifeConservationSociety-BronxZooJosephMendelson,ZooAtlantaPatMorris,SanDiegoZooIsamaraNavarrete,SanDiegoZooR.AndrewOdum,ToledoZooBradLock,ZooAtlantaSamuelRivera,ZooAtlantaAllanPessier,SanDiegoZooJenniferPramuk,WildlifeConservationSociety-BronxZooMichaelReady,SandfireDragonRanchOliverRyder,SanDiegoZooDannaSchock,UniversityofCalgaryMarkSchrenzel,SanDiegoZooLeeSkerratt,JamesCookUniversityEdytheSonntag,MichiganStateUniversitySimoneVitali,PerthZooCarmelWitte,SanDiegoZooKevinWright,ArizonaExoticAnimalHospitalKevinZippel,AmphibianArk

Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—12

Capítulo3

EVALUACIÓNDERIESGOSYREVISIÓNDEENFERMEDADESPARAPROGRAMASDEREINTRODUCCIÓNDEANFIBIOSALA

NATURALEZA.3.0INTRODUCCIÓN Elreconocimientodequeladevastadoradisminucióndelapoblaciónanfibiaglobalpodríaestarligadaalmovimientoantropogénicodelhongoquítrido,Batrachochytriumdendrobatidisy Batrachochytriumsalamandrivorans,resaltalanecesidaddeconsideraralasenfermedadesinfecciosasenelfuncionamientodelosprogramasdecríaencautiverioyreintroducciónalanaturaleza.Unaimportantelecciónquepuedeseraprendidadelejemplodelaquitridiomicosisanfibiaesquetodaslasinstalacionesquecontienenanfibios,paracualquierpropósito(comoporejemplo:educación,comercio,investigacionesdelaboratoriooconservación),deberíanresponsabilizarsedeimplementarvigilanciadeenfermedadesinfecciosasymedidasdecontrolqueprevenganlaintroduccióndeagentespatógenosanfibiosanuevasubicacionesopoblaciones(vealasección4.3). Uninformepublicadorecientementedescribelaintroduccióndelhongoquítridoanfibioapoblacionessilvestresdelferreretmallorquíncomoresultadodeunprogramadereintroduccióndeespecies(Walkerycolaboradores,2008).Aúnmás,muchosbiólogosrecuerdananecdóticamenteinstanciasenquepodríanhabersidotrasladadasanuevoslugares,enfermedadesdeanfibioscomoresultadodereintroduccionesotranslocacionesbienintencionadasdeanimalessilvestresdesdeunlugaraotro.Enmuchosdeestoscasos,simplesmétodosdevigilanciaoprevencióndeenfermedadeshubieransidoinvaluablesparaprevenirlaintroduccióndeenfermedades. Estecapítuloentregaunresumendeprácticasdevigilancia,evaluaciónderiesgoycontroldeenfermedadesquepuedenseraplicadasaprogramasdecríaencautiverio,reintroducciónytranslocacióndeanfibiosconelobjetivodereducirelriesgodeenfermedades.Cadaprogramadeconservacióndeanfibiosesúnicoynoexistenrecomendacionesqueseapliquenacadacircunstancia.Enlugardeeso,sedaránejemplosdesituacionescomunesseñaladasporlosparticipantesdelostalleres.Conesto,seesperaproveerunmarcoconceptualcomobaseparaeldesarrollodenuevosprogramasyprácticas.Sibienlosenfoquesdeestecapítulosonlasenfermedadesquitridiomicosisyporranavirus,nuestracomunidaddebepermaneceralertayatentaaagentespatógenosqueaúnnohansidodocumentadosodeloscualesnosesospecha.3.1RECOMENDACIONESGENERALESPARAPROGRAMASDEREINTRODUCCIÓNY

TRANSLOCACIÓN Elmantenimientodeanfibiosenprogramasdecríaencautiverioantesdereintroducirlosasuhábitatnaturalylatranslocacióndeanimalessilvestresdesdeunlugar


haciaotrotienecomoriesgoinherentelaintroduccióndeenfermedadesinfecciosasanuevoslugaresopoblaciones.

• Esimposiblecrearprogramasqueesténlibresderiesgodeenfermedad.• Cadaparteinteresada,porejemplo,autoridadesdevidasilvestre,biólogos

silvestres,veterinarios,conservadoresdeprogramasdezoológico,entreotros,debedeterminarquénivelderiesgoesaceptableenlosprogramasqueelijan.

• Enalgunassituaciones,elriesgodeenfermedadenunareintroducciónotranslocaciónestanaltoquesedebenreconsideraralgunasdecisionesdelosprogramas,porejemplo,tomarladecisióndenoreintroduciralosanimalesporqueelriesgodeenfermedadesmuyalto.

• Afortunadamente,elriesgodeenfermedadenlasreintroduccionesotranslocacionessepuedereducirconsiderablementesiseplaneacuidadosamenteysesiguenrecomendacionesqueayudenadisminuirriesgos.

Laspreocupacionesrespectoalaintroduccióndeenfermedadesinfecciosasalaspoblacionessilvestrescomoresultadodelosprogramasdereintroducciónytranslocacióndeespeciesnoestánlimitadasalosanfibios.Paracalmarestaspreocupaciones,sehandesarrolladorecomendacionesparaguiaraveterinariosycuidadoresdeanimalesatravésdeunprocesodeevaluaciónderiesgodeenfermedades.

• ElGrupoEspecialistaenCríaenCautiveriodelaUICN/SSCpublicóunmanualtituladoAnimalMovementsandDiseaseRiskdisponibleparadescargardeformagratuitaen:www.cbsg.org/cbsg/content/files/Disease_Risk/disease.risk_manual.pdf

Algunassugerenciasespecíficasparalamitigacióndelriesgodeenfermedadesenprogramasdeanfibiosydiscutidaseneltallerdecontroldeenfermedadesson:

• Cuandoseaposible,losprogramasdetranslocaciónoreintroduccióndeanfibiosdebenoperardentrodelrangonativodelasespecies.Losprogramasquemantenganaespeciesdeanfibiosfueradesurangonativo,porejemplo,anfibiosdePanamáconservadosenEstadosUnidos,tienenmayorriesgodeenfermedadesquelosprogramasoperandodentrodelrangonativodelasespecies.Estosriesgospuedenincluirlaposibilidaddeintroduciragentespatógenosnonativosalambientealrededordelasinstalacionesquecontienenalosanfibiosylaposibilidaddeintroducirnuevosagentespatógenoslocalesalosanfibiosimportados(vealasección4.3).

• Losanfibiosenprogramasdetranslocaciónoreintroducciónalanaturalezadebenmantenerseenaislamientoalargoplazodeotrosanfibiosquenoseanpartedelrangonaturaldelaespeciequeseráreintroducidaalanaturaleza.Esteprocesodeaislamientoesespecialmenteimportanteparaloszoológicosquedeseanformarpartedeprogramasdeconservacióndeanfibiosperoqueposeencoleccionesdeanfibiosmezcladasocosmopolitas,porejemplo,anfibiosdediferentesubicaciones


geográficasalmacenadosenunasolainstalación.Detallesdelprocesodeaislamientopermanenteseencuentranenlasección4.7.Enelcasodelastranslocaciones,eltiempoquelosanfibiospasanencautiveriodeberíaserreducido.

• Losprogramasdereintroducciónalanaturalezaytranslocacióndeberíanrecolectarinformaciónrelacionadaalasenfermedadesylasaluddelapoblacióncautivaquevaaserreintroduciday,además,delapoblaciónsilvestre(ydelasespeciesdeanfibiossimpátricos)queestéubicadaeneláreaenqueocurrirálareintroducción.Poseerunconocimientodelasenfermedadesylosproblemasqueestascausanenambaspoblacionespermiteunmejoranálisisdelriesgodeenfermedadqueplantealaliberacióndeanimalescautivos.

• Algunosdelosmétodosutilizadosparadesarrollarunabasededatosdepoblacionescautivasysilvestresson:

o Efectuarnecropsias(Incluidalahistopatología)entodoslosanimalesquemueran(verelcapítulo9).Lanecropsiaesútilparadetectarenfermedadesinfecciosas,nuevasoinesperadas,quenohansidoyadetectadasporpruebasespecíficasparaelhongoquítridoanfibiocomo,porejemplo,lareacciónencadenadelapolimerasa,PCRporsussiglaseninglés.

o Lavigilanciaenlanecropsianoestálimitadaaanimalesquemuerannaturalmente,estatambiénpuedeincluirsacrificios(medianteselección)deanfibiosdepoblacionesparaobtenermuestrasparainvestigacionesdelaboratorio.

o Pruebasespecíficasnecesariasparaencontraragentespatógenosanfibios,porejemplo,hongoquítridoanfibioyranavirus,enpoblacionessilvestresycautivas(veaelcapítulo7).

• Sedebehacerunseguimientodelasenfermedadesenlaspoblacionesantesdesuliberaciónydespuésdequeyahansidoreintroducidasalanaturaleza.Todosloseventosdemortalidadenlapoblaciónsilvestredebenserinvestigadosydocumentados.

• Pruebasadicionalesdedeteccióndeenfermedadesespecíficas,comoelhongoquítridoanfibioyelranavirus,puedensernecesariaspreviasalaliberaciónotranslocacióndeanimalescautivos.

3.2MITIGACIÓNDELRIESGODEENFERMEDADESPARACRÍAENCAUTIVERIOY

PROGRAMASDEREINTRODUCCIÓN PROGRAMAS Losprogramasqueponenaanfibiosdepoblacionesamenazadasenpoblacionescautivasdeseguridadparacríaencautiverio,yqueluegoliberanaladescendenciadevueltaasuhábitatnaturalsonconsideradosunabuenaestrategiadeconservacióndeanfibios.Acontinuaciónsediscutenestrategiasparalarevisiónymitigacióndelriesgodeenfermedadesdelaspoblacionesprevioalaliberacióndelosanimalesalanaturalezaparasituacionesdebajo,medianoyaltoriesgo:


Situacionesdebajoriesgo LasituaciónderiesgomásbajaquesepuededarenlaIntroduccióndeunaenfermedadinfecciosaapoblacionesanfibiascomoresultadodeunprogramadereintroducciónescuandolaspoblacionescautivasdeseguridadestánubicadasdentrodelpaísnativooelconjuntodela(s)especiesylainstalaciónsolomantieneaanfibiospertenecientesalpaíslocal.AlgunosejemplosdepoblacionescautivasdeseguridadparaanfibiossonElCentrodeConservacióndeAnfibiosdeElValle,PanamáyelprogramadeconservacióndeanfibiosBalsadelosSaposdelaUniversidadCatólica(PontificiaUniversidadCatólicadelEcuador)enEcuador.Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:

1. Lasinstalacionesestánubicadasenelrangonativodelconjuntodela(s)especie(s)ysoloalbergananfibiosdesurangonativo.

2. Lasinstalacionesmantienenlas"buenasprácticas"debioseguridad.Estasprácticas

sondiscutidasendetalleenlasección4.5).3. Hayunprogramadecuarentenaparanuevosanimalesqueingresanalainstalación

(veaelcapítulo6).4. Losprincipaleseventosdemorbi/mortalidadsoninvestigadosmediantenecropsias

ehistopatologías(veaelcapítulo9).Serecomiendainvestigacionesrutinariasdetodasolamayoríadelasmuertesparaconstruirunabasededatosdesaludyparasercapacesdedetectarproblemasdeenfermedadesinfecciosasinesperados.

5. Sedebeconsiderareldesarrollodepoblacionesespecíficaslibresdeagentes

patógenos,porejemplo,elhongoquítridoanfibiooelranavirus(vealasección8.3).6. Losanimalessonliberadosexclusivamenteenelrangonaturaldelasespecies(de

preferenciasulugardeorigen)Pruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosalaliberaciónalanaturaleza: Losanimalesquesoncriadossoloensurangonaturalyquenuncahansidoexpuestosaanimalesajenosasurangonaturalporlogeneralnotienennecesidaddepasarporpruebasdedeteccióndeenfermedadesprevioaliberarlosalanaturaleza.Conalgunasexcepciones,sepresumequelosagentespatógenospresentesenestosanimalesyaseencuentranpresentesenlapoblaciónsilvestre.Laspautasaseguirparadiseñarprotocolosdepruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosasuliberaciónincluyen:

1. Siduranteunanecropsiaehistopatologíarutinariadelapoblacióncautivasedetectaunaenfermedadinfecciosaserecomiendalosiguiente:


• Siseidentificaunagentepatógenotratable,comoelhongoquítridoanfibio,serecomiendauntratamientosielpatógenopuedesereliminado(veaelcapítulo8).

o Eltratamientoesdeextremaimportanciasielagentepatógenodetectadopuedecausarmorbi/mortalidadsignificativaenlapoblacióncautiva(comoelhongoquítridoanfibio).

o Unmétododepruebaconfiabledebeestardisponibleparaconfirmarquelosanimalesestánlibresdeinfecciónantesdesuliberaciónalonaturaleza.

o Algunosparásitosy/oagentespatógenossondifícilesdeeliminaroespreferiblemantenernivelesbajosdeinfecciónenorganismosquesedennaturalmenteenpoblacionessilvestres(especialmenteparásitos).Vealasección8.4.

• Sedebedefinirelimpactopotencialdelpatógenoenlapoblaciónsilvestre.Estosepuedelograrpormediodelavigilanciadeenfermedadesenlaspoblacionessilvestresyotrasespeciesvulnerables.

o Sielpatógenoestápresentetantoenlapoblaciónsilvestrecomoenlacautiva,entonceslapresenciadeéstepuedenotenerimpactoenladecisióndeliberaranimalesdecautiverioalanaturaleza.Determinarsilospatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosderevisiónPCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus(vealasección7.4).

o Algunosagentespatógenosanfibiossonpatógenosoportunistas,porejemplo,micobacteria,yusualmentesonenfermedadesquesedanenelcuidadodeanimalescautivosmásqueenlaspoblacionessilvestres.

2. Sedebenconsiderarpruebaspreviasalaliberacióndelosanimalesparadetectar

agentespatógenosquepuedanserrelevantesparalaspoblacionesdeanfibiossilvestres,porejemplo,elhongoquítridoyelranavirus.

• Laspruebaspuedennosernecesariassiestádisponibleunhistorialmédicocompletodelapoblacióncautivaqueincluyaanálisisdenecropsiasehistopatologíadelamayoríadelosanimalesquemueran(comoyafuemencionado),yquepresenteevidenciadequelacausadelasmuertesnohaocurridoacausadequitridiomicosisoinfeccióndelRanavirus.Sedebehaberllevadoacabounavigilanciaporunperíodoextendidodetiempo(almenos1o2años).Paradetallesdecómocrearpoblacionesdeanfibioslibresdepatógenosespecíficos(LPE)verlasección8.3.

3. Losanimalesqueesténenfermosolosmiembrosdeunapoblacióncautivaqueeste

experimentandouneventodemortalidadnuncadeberíanserliberadoshasta


despuésdelaidentificaciónyresolucióndelaenfermedad.Estosedebeseguirinclusosielpatógenoesconocidoporaparecerenlaspoblacionessilvestres.

Situacionesderiesgomoderado

Unasituaciónderiesgomoderadoquesepuededarenlaintroduccióndeunaenfermedadinfecciosaapoblacionesdeanfibioscomoresultadodeunprogramadereintroducciónescuandolaspoblacionescautivaspuedenestarexpuestasaanfibiosquenopertenecenalrangonativodelasespecies.Estoocurreenlasinstalacionesqueestándentrodesupaísdeorigen,porejemplo,unainstalaciónquecontieneespeciesalemanasoperandoenAlemaniaperoquetambiéncontieneanfibiosdeAsiaodelosEstadosUnidos,ytambiéncuandolaspoblacionescautivasdeseguridadestánubicadasfueradelpaísdeorigen,porejemplo,anfibiosalemanesenlosEstadosUnidos.Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:

1. Lasinstalacionesmantienenalasespeciesdeanfibiosqueseránreintroducidosalanaturalezaenaislamientoalargoplazo(vealasección4.7).

2. Senecesitaunprogramadecuarentenaparanuevosanimalesqueingresanala

instalación(veaelcapítulo6).3. Losprincipaleseventosdemorbi/mortalidadsoninvestigadosmediantenecropsias

ehistopatologías(veaelcapítulo9).Serecomiendainvestigacionesrutinariasdetodasolamayoríadelasmuertesparaconstruirunabasededatosdesalud(vealasección6.2)yparasercapacesdedetectarproblemasdeenfermedadesinfecciosasinesperados.

4. Sedebeconsiderareldesarrollodepoblacionesespecíficaslibresdeagentes

patógenos,porejemplo,elhongoquítridoanfibiooelranavirus(versección8.3).Pruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosalaliberaciónalanaturaleza: Ensituacionesderiesgomoderado,algunasdelaspautasaseguirparadiseñarpruebasdedeteccióndeenfermedadespreviasalaliberaciónyprotocolosdetratamientosparalaspoblacionesson:

1. Siduranteunanecropsiaehistopatologíarutinariadelapoblacióncautivasedetectaunaenfermedadinfecciosaserecomiendalosiguiente:

• Siseidentificaunagentepatógenotratable,comoelhongoquítridoanfibio,serecomiendauntratamientosielpatógenopuedesereliminado(veaelcapítulo8).



o Debeestardisponibleunmétododepruebaconfiableparaconfirmarquelosanimalesestánlibresdeinfecciónantesdesuliberaciónalanaturaleza.

o Algunosparásitosy/oagentespatógenossondifícilesdeeliminaroespreferiblemantenernivelesbajosdeinfecciónenorganismosquesedennaturalmenteenpoblacionessilvestres(especialmenteparásitos).Vealasección8.4.


o Sielpatógenoestápresentetantoenlapoblaciónsilvestrecomoenlacautiva,entonceslapresenciadeéstepuedenotenerimpactoenladecisióndeliberaranimalescautivosalanaturaleza.Determinarsilosagentespatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosderevisiónPCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus.Vealasección7.4.

o Algunosagentespatógenosanfibiossonoportunistas,porejemplo,micobacteria,yusualmentesonenfermedadesquesedanenelcuidadodeanimalescautivosmásqueenlaspoblacionessilvestres.

2. Sedebenllevaracabopruebaspreviasalaliberacióndelosanimalesparadetectar

agentespatógenosquepuedanserrelevantesparalaspoblacionesdeanfibiossilvestres,porejemplo,elhongoquítridoyelranavirus.Sacrificaraunsubconjuntodeanimalesparallevaracabopruebasparadetectarpatógenosespecíficospuedeserútil.Laspruebasespecíficaspuedennosernecesariassiestádisponibleunhistorialmédicocompletodelapoblacióncautivaqueincluyaanálisisdenecropsiasehistopatologíadelamayoríadelosanimalesquemueran(comoyafuemencionado),yquepresenteevidenciadequelacausadelasmuertesnofuequitridiomicosisoinfeccióndelRanavirus.Idealmente,sedebehaberllevadoacabounavigilanciaporunperíodoextendidodetiempo(almenos1o2años),aestaspoblacionesdeanfibiosselesconsideraríalibredepatógenosespecíficos(vealasección8.3).

3. Losanimalesqueesténenfermosolosmiembrosdeunapoblacióncautivaqueesté

experimentandouneventodemortalidadnuncadeberíanserliberadoshastadespuésdelaidentificaciónyresolucióndelaenfermedad.Estosedebeseguirinclusosielpatógenoesconocidoporaparecerenlaspoblacionessilvestres.

Situacionesdealtoriesgo

Unasituaciónderiesgoaltaquesepuededarenlaintroduccióndeunaenfermedadinfecciosaapoblacionesdeanfibiossilvestrescomoresultadodeunprogramade


reintroducciónescuandolapoblacióncautivadeseguridadestáexpuestaaanfibiosdefueradelrangonativodelaespecieosiestáexpuestaaanimalesconenfermedadesinfecciosasquenoestánpresentesenlapoblacióncautiva.Sedansituacionesderiesgoaltocuandolapoblacióncautivaseencuentraafueradeunabioseguridadapropiadaporcualquierperíododetiempo(veaelcapítulo4).Porlogeneral,losanfibiosquehansidoexpuestosasituacionessinprácticasdebioseguridadapropiadasnosonaptosparausarenprogramasdereintroducción.Sepuedenhacerexcepcionessilaespecieestaextintaensuestadosilvestreynoexistenpoblacionescautivascuidadasbajomedidasapropiadasdebioseguridadenningúnotrolugar.Enestassituaciones,esnecesariounprocesomuyexhaustivo,caroylargo(desdemesesaaños)derevisiónyevaluaciónderiesgosdeenfermedadesantesdeconsiderarreintroduciranimalesalanaturaleza.Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:

1. Poneralosanimalesenaislamientoalargoplazo(sección4.7).Laliberacióndelosanimalessolopuedeserconsideradadespuésdequemúltiplesgeneracioneshansidocriadasbajocondicionesdeaislamiento.

2. Senecesitaunprogramadecuarentenaparanuevosanimalesqueingresanala

instalación(veaelcapítulo6).3. Losprincipaleseventosdemorbi/mortalidadsoninvestigadosmediantenecropsias

ehistopatologías(veaelcapítulo9).Serecomiendainvestigacionesrutinariasdetodasolamayoríadelasmuertesparasercapacesdedetectarproblemasinesperadosdeenfermedadesinfecciosasyparaeldesarrollodeunhistorialmédicogrupalcompleto.Elhistorialmédicogrupaldeberíaserrecolectadoporunperíodoextendidodetiempodealmenos1o2añosderecoleccióndedatos.

4. Desarrollarpoblacionescautivaslibresdepatógenosespecíficoscomoelhongo

quítridoanfibioyranavirus(vealasección8.3).5. Considerarcrearunanuevapoblacióndeanimalesprocedentesdehuevosolarvas

productodelacríadepoblacionesoriginalesdecautiverio.Estamedidaesimportanteparareducirelriesgodeagentespatógenosnuevosquenosondetectadosfácilmenteenpruebasrutinarias.

6. Sedebereconocerquesilasestrategiasparamitigarlasenfermedadesnoson

efectivas,losanimalesnodebenserreintroducidosalanaturalezabajoningunacircunstancia.


Pruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosalaliberaciónalanaturaleza: Elnivelderevisióndeenfermedadesnecesarioparaliberaranimalesdesituacionesdealtoriesgodevueltaasuestadosilvestrepuedeserextensivo.

1. Siduranteunanecropsiaehistopatologíarutinariadelapoblacióncautivasedetectaunaenfermedadinfecciosa,serecomiendalosiguiente:

• Siseidentificaunagentepatógenotratable,comoelhongoquítridoanfibio,serecomiendatratamientosielpatógenopuedesereliminado(veaelcapítulo8).


o Unmétododepruebaconfiabledebeestardisponibleparaconfirmarquelosanimalesestánlibresdeinfecciónantesdesuliberaciónalanaturaleza.


o Sielpatógenoestápresentetantoenlapoblaciónsilvestrecomoenlacautiva,entonceslapresenciadeestepuedenotenerimpactoenladecisióndeliberaranimalescautivosalanaturaleza.Determinarsilosagentespatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosderevisiónPCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus(vealasección7.4).

o Algunosagentespatógenosanfibiossonoportunistas,porejemplo,micobacteria,yusualmentesonenfermedadesquesedanenelcuidadodeanimalescautivosmásqueunriesgoaltoparalaspoblacionesanfibiassilvestres.

2. Siseidentificanenfermedadesinfecciosasquenopuedensertratadasoeliminadas

fácilmente,sedebecrearunanuevapoblacióndeanimales(rederivación)delasiguienteforma:

• Removerloshuevosdelapoblaciónoriginalydejarquelosrenacuajoseclosionenenaislamientopermanente,separadosdelapoblacióndeorigen.Paralasespeciesquesonvivíparas(comoelSapodeAerosoldeKihansi)sedebeinvestigarlaviabilidadderealizarcesáreasylaposteriorcrianzaderenacuajosenaislamientopermanente.

• Puedesernecesarialarederivacióndemúltiplesgeneracionesconpaseseriadoylacrianzadeéstasenentornosdeaislamientopermanente.


• Sepuedeconsiderarladesinfeccióndehuevosomasasdehuevecillosantesdelacrianzaenaislamientopermanentesisepuedeidentificarunmétodoquenointerfieraconeldesarrolloolaviabilidaddelosrenacuajos.

3. Sedebenllevaracaboexperimentosendondeanimalesdecautiverioquevanaser

liberadossonalojadosconespeciesdeanfibiossimpátricosqueestánpresentesenlaubicaciónoregióndondeseránliberadoslosanimales.

• Losanimalessimpátricosseránmonitoreadosparadetectarsihaydesarrollodeenfermedadesysellevaranacabonecropsiasconhistopatologíaentodoslosquemueran.

• Losquesobrevivanhastaelfinaldelexperimentoseránsacrificadosyluegosellevaranacabonecropsiasehistopatologíasenestos.

• Cuandoselleveacabolanecropsiasedeberecolectartejidodetodoslosanimalesparaelusodeésteenpruebasdediagnósticoparadetectaragentespatógenosdeinterés(sedebenmantenercongeladasmuestrasdelhígadoyelriñónparahacerpruebasPCRdelRanavirus).

• Losexperimentosdebenserllevadosacaboporlomenosunos60o90díasparapermitirlamanifestacióndeenfermedadesinfecciosassignificativas.

4. Esnecesarioelsacrificioylaeutanasiadeunsubconjuntodelaspoblacionesen

cautiverioparallevaracabonecropsiaehistopatologíaytambiénparahacerpruebasdedeteccióndeagentespatógenosespecíficosdeinterés(comoelPCRparaelranavirus)antesdeliberarlasalanaturaleza.

5. Sedeberevisarunhistorialmédicode1o2añosdeduracióndelapoblaciónque

seráliberadaalanaturaleza,elcualdebeincluirreportesdenecropsiasehistopatologíasdetodosolamayoríadelosanimalesquemueran.Losanimalesquepresentenevidenciadetenerunaenfermedadinfecciosanodebenserliberadosalanaturaleza.

3.3TRANSLOCACIÓN Lastranslocacionesocurrencuandoanimalessilvestressontrasladadosentrediferenteslugaresconpocaoningunaintervenciónencautiverio(porejemplo,moverlosentrecharcasocañones;animalesquesonpartedelamismametapoblación).Algunosriesgosdeenfermedadesenlastranslocacionesson:

• Elmovimientodeunagentepatógenoanfibiosignificativo(comoelhongoquítridoanfibio)desdeunlugaraotro.

• Quelosanfibiosencautiverioadquieranpatógenos(siesquelosanimalesestánencautiverioduranteelprocesodetranslocación)


Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:

1. Silosanimalesseencuentranencautiverioantesdelatranslocación,estosdeberíanmantenerseenaislamientoalargoplazodeotrosanfibiossilvestres(vealasección4.7).Lasprácticasdebioseguridaddeaislamientodebenestarpresentesdurantetodaladuracióndeltransporteycautiverio.

2. Lasmuertesdurantelastranslocacionesdebenserinvestigadaspormediode

necropsiaehistopatología(veaelcapítulo9)paraidentificarproblemasinesperadosdeenfermedades.

3. Antesdelatranslocación,siesposible,lleveacaboestudiosdevigilanciadesalud

delaspoblacionessilvestresdeorigenydestino.Estosestudiospuedenincluir:necropsiayvigilanciadehistopatología,ytambiénpruebasespecíficasparadetectaragentespatógenosimportantescomoelhongoquítridoanfibioyranavirus.Éstosestudiosdefiniríanlosriesgosdeenfermedadesdelatranslocación.

4. Sisedeidentificanagentesinfecciosos,sedebedefinirelimpactopotencialdeéstos

enlapoblaciónsilvestre.• Sisedetectaelmismoagenteinfecciosotantoenlaspoblacionesde

origenydedestino,lapresenciadelagentepatógenonodeberíaimpactarelprocesodetranslocación.Determinarsilosagentespatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosdedeteccióndePCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus(vealasección7.4).

• Sielagenteinfecciosoestápresentesoloenlapoblacióndeorigen,seránecesariomásplaneaciónyevaluaciónderiesgosantesdelatranslocación.

• Sepuedeconsideraruncortoperíododecautiverioparaeltratamientodeenfermedadesinfecciosascurables(comolaquitridiomicosis)enlapoblacióndeorigen.Eltratamientopodríanosernecesarioodeseadosielmismoagentepatógenoestápresentetantoenlapoblacióndeorigencomoenladedestino.

3.4LITERATURACITADAWalker,S.F.,J.Bosch,T.Y.James,A.P.Litvintseva,J.A.Oliver-Valls,S.Piña,G.García,G.A.

Rosa,A.A.Cunningham,S.Hole,R.Griffiths,andM.C.Fisher.2008.Invasivepathogensthreatenspeciesrecoveryprograms.CurrentBiology18:R853–R854.

Cap.4:Bioseguridad—23

CAPÍTULO4

BIOSEGURIDADYAISLAMIENTOPERMANENTEDEPOBLACIONESDECONSERVACIÓNEXSITU

4.0INTRODUCCIÓN Lanecesidaddemejorbioseguridadenlasinstalacionesquealbergananfibioscautivoshasidoresaltadaporejemploscomoeldelaquitridiomicosis,unaenfermedadinfecciosaintroducidaglobalmentepormediosantropógenosquediocomoresultadodevastadorasdisminucionesdelaspoblacionesanfibias.Losanfibiosson,rutinariamente,trasladadosglobalmenteparasuusocomosujetosdeestudiodelaboratorio,mascotas,animalesdeusoeducacionalodemuestraycomopartedeprogramasdeconservaciónycrianzadeanimales.Estostrasladospuedenaumentarelriesgodequeagentespatógenosanfibiosseanesparcidosanuevoslugares,comoyahasidodemostradoenestudiosrecientesquetratandeimportacionesytrasladosdeanfibios(FisherandGarner,2007;Schloegelycolaboradores,2009;Schloegelycolaboradores,2010;Martelycolaboradores,2014)yenlaintroduccióndelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)apoblacionessilvestresdelferreretmallorquínacausadelasactividadesdeunprogramadecríaencautiverio(Walkerycolaboradores,2008). LaimplementacióndeprácticasdebioseguridadquereduzcanlapotencialIntroduccióndeenfermedadesinfecciosasanfibiasanuevoslugaressonresponsabilidaddetodaslasinstitucionesquealberguenomuevanaanfibioscautivos.Además,lasbuenasprácticasdebioseguridadayudanareducirelriesgoqueplanteanlasenfermedadesinfecciosaseneléxitoylasostenibilidaddelosprogramasdeanfibioscautivos.Losconceptosmásimportantesdelabioseguridadanfibiason:

• Existenriesgosdeenfermedadesinfecciosasasociadosaprogramasquealbergananfibiosencautiveriofueradelrangogeográficonativodeoelconjuntodelasespecies,porejemplo,saposdePanamállevadosalosEstadosUnidos).Riesgossimilaresocurrencadavezqueanimalesdemúltiplesregionesgeográficassonmezcladosenlamismainstalacióndeanfibioscautivos(unacolecciónmezcladaocosmopolita).

• Laformamássimpleybaratadereducirestosriesgosesmanteneraanfibioscautivosdentrodelrangonativodelaespecieyevitarlacreacióndecoleccionescosmopolitas.

• Lasprácticasdebioseguridadquereduzcanelriesgodetransmisióndeenfermedadessonnecesariassilosanfibioscautivosdebenestarfueradesudistribuciónnativaodentrodeunacoleccióncosmopolita.

• Losprogramasdecríaencautiverioolascoloniasderesguardoquepretendanreintroduciranfibiosasuhábitatnaturaldeberíanmanteneraesosanimalesenaislamientopermanente(enedificiosohabitacionesdedicados)lejosdelosanfibios


cuyoorigennoestédentrodeladistribuciónnativadelasespecies.Prácticaszootécnicascomoelusodecalzadodedicado,ropaprotectora,equipoyherramientasdedicadas,yelseguimientodepautasdetrabajoespecíficasreducenelriesgodeintroduciragentespatógenosnonativosacoleccionesdeanfibios.Lasinstalacionesubicadasdentrodeladistribuciónnaturaldelasespeciesyquenoalbergananfibiosajenosaladistribuciónnaturalsonelmejorejemplodeaislamientopermanenteyrequierenlamenorcantidaddegastosyesfuerzo.

• Elusodeprácticasyrutinaszootécnicasrelativamentesimplesreducenelriesgodeintroduciryesparcirenfermedadesinfecciosasdentrodelasinstalacionesdeanfibios.Estosinimportarelpropósitodelasespecies,porejemplo,paraeducar,comomascotaoparapoblaciónderesguardo).

• Sedebentenerencuentaprocedimientosparalaeliminaciónderesiduossólidosyaguasresidualesenlasinstalacionesdeanfibios,cuandolosanfibioscautivosseencuentranfueradeladistribuciónnativadelasespeciesocuandoestosseencuentranalojadosenunacoleccióncosmopolitaquealbergaanfibiosdediferentesregionesgeográficas(dentroofueradesudistribuciónnativa).

• Lasfuentesdeaguayalimentodelasinstalacionesdebenserescudriñadasporsupotencialparaintroduciragentespatógenosanfibios.

• Idealmente,lasinstalacionesson:apruebadepestes;apruebadeanfibios(paraevitarelescapedeestosoparaevitarlaentraday/ocontactoconanfibiosnativosenlibertad);diseñadasparateneralimentación,irrigaciónylimpiezaautomáticayfácilesdelimpiarymantener.

• Idealmente,lasinstalacionesproveenlasnecesidadesambientalesúnicasdelosanfibiosenloquerespectaatemperatura,humedad,iluminaciónycalidaddelaguadelmedioambiente.Estasnormassonesencialesparalasaluddelosanfibiosysonmateriadevariasrevisionesdeexpertos(Browneycolaboradores,2007;PramukyGagliardo,2008),

4.1¿QUEESLA"BIOSEGURIDAD"? Labioseguridadpuedeserdefinidacomo"Laproteccióndelmedioambienteysusespeciesnativasdeagentespatógenos".Sinembargo,elcuidadodepoblacionesdeanfibiosexsituconpropósitosdeconservaciónrequiereconsideracionesadicionales.Porlotanto,enestedocumentolabioseguridadserefierealasmedidasque:

• Protejanalasespeciesnativasensuhábitatnaturaldeanfibioscautivosqueportenagentespatógenos,sobretodosilasespeciescautivasseencuentranfueradesurangodedistribuciónoriginalosiestánexpuestasaotrosanfibiosajenosasurangodedistribución.

• Protejanalosespecímenescautivosdeagentespatógenosqueesténpresentesenlosanfibiosnativos,yaseasilainstalaciónestádentrodelrangodedistribuciónoriginalofueradeeste.

• Protejanalosespecímenescautivosdeagentespatógenospresentesenotrosanfibioscautivosdentrodelacolección.


Nuncaselograráun100%debioseguridadenningunapoblaciónanfibiaexsitu.

• Lasoportunidadesparaquelosagentespatógenossemuevanpuedenreducirsesignificativamenteidentificandoaportadoresyprácticaszootécnicasquepresentenriesgospotencialesydiseñandoprotocolospararemoveroreducirestosriesgos.

• Laimplementaciónymantencióndelabioseguridadesunprocesosinfindeevaluaciónderiesgos(unejemplodeestoeslaprobabilidaddequeunagentepatógenoseatransferidoporunportadoroprácticayaidentificadoscontralaseveridaddelasconsecuenciasquelatransferenciacausaría)yposteriorreducciónderiesgos.

Unnivelrealistadebioseguridadpuedeseralcanzadoponiendoenprácticaprotocolosquesonsimplesybaratos.Lasinversionesgrandesencuantoainstalacionesyequipamientosonsolonecesariassisequierealcanzarelnivelmásaltodebioseguridad,porejemplo,cuandoéstasoperanfueradelrangodedistribuciónoriginaldelasespeciesquevanaserreintroducidasalanaturaleza.4.2DEFINICIONESDEBIOSEGURIDADProgramasubicadosdentrodelrangodedistribuciónoriginaldelasespecies:Laolas

instalacionesquealberganespeciesdeanfibiosoconjuntosdeespeciestienensuubicaciónfísicadentrodeladistribucióngeográficadelasespecies.Ejemplos:1)UnedificioocontenedordetransportemodificadoconsaposaerosoldeKihansi(Nectophrynoidesasperginis)ubicadoenelbordedelaGargantadeKihansienTanzania;2)Unacoleccióndemúltiplesespeciesdeanfibioscapturadoslocalmentealojadosenuncentroeducacionalparavisitantesdentrodeunparquenacionaloreservanatural.

Programasubicadosfueradelrangodedistribuciónoriginaldelasespecies:Laolas

instalacionesquealberganespeciesdeanfibiosoconjuntosdeespeciestienensuubicaciónfísicafueradeladistribucióngeográficadelasespecies.Ejemplos:1)SaposaerosoldeKihansi(Nectophrynoidesasperginis)ubicadosenunzoológicoenUSA;2)SalamandrascapturadasenlibertaddelsurdeMéxico(porejemplo,elEstadodeChiapas)siendomantenidasenunainstalacióndeMéxicocentral(porejemplo,elEstadodeMichoacán).

Instalacionesoinstitucionescosmopolitas:Cualquierinstalación,yaseahabitacióno

edificio,oinstitución,comouniversidadesozoológicos,quealberguenespeciesdeanfibiosdediferentesregionesgeográficas,porejemplo,especiesquenocoexistenenlanaturaleza.Larealidadesquelamayoríadelosprogramasdeanfibiosenelmundocalificancomo"cosmopolitas",peroestonoquieredecirquenopuedendesarrollarprogramaslosuficientementesegurosparalaconservaciónyreintroduccióndeanfibios.


Instalaciónoinstituciónaislada:Cualquierinstalación,yaseahabitaciónoedificio,o

institución,comouniversidadesyzoológicos,queestédedicadaasolounaespecieogrupodeespeciesdeanfibiosquecoexistenenlanaturaleza.Estetipodeprogramasusualmenteestánenfocadosenunasolaespecie,porejemplo,lainstalaciónparaelsapodeWyoming(Anaxyrusbacteri)delServiciodePescayVidaSilvestredelosEstadosUnidosenelCriaderoNacionaldePecesenSaratoga.Enalgunoscasosespecíficos,esteconceptopuedeseraplicadoapoblacionesdiferentesenvezdeaespeciespropiamentedichas.

4.3COLECCIONESCOSMOPOLITASYRIESGOSDEENFERMEDADESPARA

ANFIBIOSSILVESTRES Losagentespatógenosquesonnativos,oendémicos,deunapoblacióndeanfibiosconregularidadcausanenfermedadeslevesoinclusoindetectablesenesosanimales.Estoesporquelapoblaciónhasidoexpuestaalagentepatógenoalolargodeltiempoyhadesarrolladoadaptacionesparalimitarlosefectosdañinosdelpatógeno.Sinembargo,cuandoestospatógenosnonativossonintroducidosapoblacionesanfibiasnuevas,tienenelpotencialdecausarenfermedadesmásserias. Lascoleccionestradicionalesdeanfibiosenzoológicossontípicamentecosmopolitas,yaquealbergananimalesdediferentesubicacionesgeográficasydediferentesfuentes,porejemplo,capturadasenelmediosilvestre,nacidasencautiveriouobtenidasdecomercializadoresdeanimales,dentrodelamismainstalación.Estascoleccionesincrementanelriesgodeintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosaespeciesyubicacionesgeográficasajenasaestospatógenosporlassiguientesrazones:

• Elcontactodirectooindirectoentreanimalesdecoleccionescosmopolitaspuedefacilitarlatransmisióndeagentespatógenosentreanimalesdediferentesubicaciones,porejemplo,ranasdeAméricaCentralquesonexpuestasaranasdeAustraliaysoninfectadasporunpatógenoexclusivodelasranasaustralianas.

• Silosanimalesinfectadosconunagentepatógenononativosonreintroducidosalanaturaleza,estosintroduciránelpatógenononativoasunuevaubicación,porejemplo,ranasdeAméricaCentralinfectadasconunpatógenoaustralianoquesonreintroducidasalanaturalezaenAméricaCentral.

• Losanfibiostraídosaunanuevaubicacióngeográficapuedenintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosalosanfibiosdelanuevaubicación,porejemplo,ranasdeAméricaCentralinfectadasconunpatógenonativodeAméricaCentralquesonllevadasalosEstadosUnidos.

Porestasrazones,debeprocurarseasegurarquelosprogramasquealbergananfibiosencautiverionoesténcontribuyendoalmovimientodeagentespatógenosdeanfibios.

Lasformasmássimplesybaratasdereducirelriesgodeenfermedadesydemoveragentespatógenosanfibiosnonativosanuevoslugaresson:


• Establecerymantenerpoblacionesanfibiascautivas(exsitu)dentro,olomáscerca

posible,deladistribuciónnativayhábitatdelaespeciequeespartedeunprogramadeconservación,porejemplo,manteneralasespecieshondureñasenHondurasyalasespeciesaustralianasenAustralia).

• Evitarestablecerprogramasdecríaencautiveriodeanfibiosqueseránreintroducidosalanaturalezadentrodeunacoleccióncosmopolitadeanfibios(yaseadentroofueradelrangodedistribuciónoriginaldelaespecie).

Yaqueestonoessiempreposible,sonnecesariasmedidasparaincrementarlabioseguridadenmuchosprogramasdecautiverioanfibio.4.4NIVELESDEBIOSEGURIDAD Lasmedidasdeseguridadsonprocedimientosespecíficoszootécnicos,depersonal,flujodetrabajoyveterinarios,quereducen,peronoeliminancompletamente,losriesgosdeenfermedadesinfecciosasdentrodeunainstalaciónanfibia.Lasrazonesporlascualesseimplementanprácticasdebioseguridadeninstalacionesdeanfibiosencautiverioson:

• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosnonativossalgandeunainstalacióndecautiverioyevitarsuintroducciónanuevoslugares.Estopuedeocurrircuandolosanfibioshansidoremovidosdesudistribuciónnativaporcualquiermotivo.

• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosentrenaunapoblacióndecautiveriooqueseantransmitidosentreanimalesdentrodeunainstalación.Porejemplo,noesdeseableintroducirelhongoquítridoanfibioaunacolecciónanfibiasaludableopropagarlainfeccióndelhongoalolargodeunacolecciónanfibia.

Lostiposdeprácticasdebioseguridadnecesariosparaalcanzarestasmetassondeterminadosindividualmenteparacadainstalaciónanfibiayparacadaprogramadeconservacióndeanfibios.Enlascoleccionescosmopolitasdeanfibios,lasprácticasdebioseguridadsondeterminadasparacadaespeciealojadaenlainstalación. Enestemanual,sedefinenpautasparadosnivelesdebioseguridadbasadasenelgradoyeltipoderiesgosdeenfermedadesinfecciosasqueseidentifiquendentrodeunprogramadecautiveriodeanfibios.

• Elprotocolobásicoes"LasBuenasPrácticas",lascualesnorequierenequipamientooinstalacionesespeciales,sinoquedescribesimplesprácticasdesentidocomúnparalahigieneyprevencióndelapropagacióndeenfermedadesparatodoslosanfibioscautivos.

• Paralaspoblacionesexsituqueeventualmenteseránusadasenprogramasdereintroducciónalanaturaleza,serequierenunaspocasmedidasextradebioseguridadparareducirelriesgodeintroduciragentespatógenosalanaturaleza.Esteprotocoloesdenominadosimplemente"Aislamiento",yaqueelsimpleactode


separarfísicamenteaunapoblacióndeanimalesreduceengranmedidalamayoríadelosriesgosdepropagacióndeenfermedadesentrelosanimalescautivos.

Ladecisióndeusarlosprotocolosde"LasBuenasPrácticas"o"Aislamiento"esfacilitadaporunasimpleevaluaciónderiesgosyunárboldedecisiones(vermásabajo).

ÁrboldedecisionesdeevaluaciónderiesgosparalabioseguridadInformaciónRequerida

Elárboldedecisionesparalaevaluaciónderiesgosdebioseguridad(imagen4.1)requiere3tiposdeinformación:

1. Elroldeunaespecieogrupodeespeciesdentrodeunprogramadeconservación

2. Laubicacióndelainstalaciónenrelaciónalorigengeográficodelaespecieogrupodeespecies

3. Lainstalacióndecautiverioescosmopolitaoaislada(vealasección4.2)Estoscriteriossonexplicadosendetalleabajo(despuésdelárboldedecisiones).


1.El"rol"delaespecieogrupodeespecies Losrolesmáscomunesdelasespeciesdeanfibiosencautiverio,comofuerondefinidosporelTallerdePlaneacióndeConservaciónExSitudeAnfibiosdelCBSGylaWAZA(Zippel,LacyyByers2006)yelArcadelosAnfibios,sonlistadosacontinuación,conunacategoríaparaoperacionescomercialesalargaescala.Rolesparaanfibioscautivos:

• Arca,rescateosuplementación• Investigaciónsobrelaconservación• Educaciónsobrelaconservación• Cultivoyproducciónenmasadeanfibios

Arca,rescate,osuplementación: Todasestascategoríastienenlaintencióndereintroduciralosanimalesosudescendenciaalanaturaleza. Arca—Unaespeciedeanfibioqueseencuentraextintaenlanaturaleza(localmenteoglobalmente)yquesehabríaextinguidoporcompletosinelmanejoexsitudeesta. Rescate—Unaespeciedeanfibioqueseencuentraenpeligroinminentedeextinción(localmenteoglobalmente)yquerequieremanejoexsitucomopartesdelasaccionesdeconservaciónrecomendadas. Suplementación—Unaespeciedeanfibiocuyapoblaciónsilvestresevebeneficiadadelmanejoexsituatravésdelacrianzaparalaliberaciónalanaturalezacomopartedeunplandeconservaciónrecomendado.

Investigaciónsobrelaconservación: Estosanimalesnotienenposibilidadesdereintroducciónalanaturaleza,perosonusadosparaproyectosdeinvestigaciónquecontribuyenalaconservacióndesuespecieounaespecierelacionada(sustituta)enlanaturaleza.

Algunosejemplosdeestetipodeinvestigaciónson:

• Eldesarrollodetécnicasparalacríaencautiverio.• Investigacionessobreenfermedades,porejemplo,elcontrolotratamientodela

quitridiomicosis.• Nutriciónydesarrollodedietasparaanfibiosencautiverio.

Educaciónsobrelaconservación: Estosanimalesnotienenposibilidadesdevolveralanaturaleza.Estassonespeciesanfibiasusadassoloconpropósitoseducacionales(principalmenteenzoológicosyacuarios)parainspiraryeducaralosvisitantesyparapromoveruncambiodeactitudpositivo.Estosanimalessonaquellosquenormalmenteseencuentranenunacoleccióncosmopolitadel


zoológico,perotambiénpuedenincluiraanfibiosquesonespecies"emblemas"o"embajadoras"usadasparacrearconcienciarespectoalascuestionesdeconservacióndeanfibios,porejemplo,removeralsapodeWyomingdelapoblacióndecríaencautiverioparausarlocomoanimaldeexhibición.Ocasionalmente,losanfibiosutilizadosconpropósitoseducacionalessonliberadosadevueltaalanaturaleza.Enestecaso,losanimalesdeberíanserconsideradoscomoArca,RescateoSuplementaciónparapropósitosdelaevaluaciónderiesgos.

Cultivoyproducciónenmasadeanfibios: Estosanimalessoncriadosintensamenteyengrandesnúmerosparaserutilizadoscomocomida,animalesdelaboratorioyparaelcomerciodeanimales.Estegrupodeanimalestieneriesgosdeenfermedadesúnicosporelgrannúmerodeanimalesalojadosenunmismolugar,elusoderecintosexteriores(locualpermitequelosanimalesescapenyquehayacontactoentrelosanfibiosnativosyloscriados)yelpotencialdetransmisióndeagentespatógenoscuandohaysituacionesendondelasespeciessoncosmopolitas,porejemplo,unatiendadeanfibiosoreptilesquevendeanimalesdediferentesregionesgeográficas.2.Laubicacióndelainstalaciónparaanfibios Laubicacióndelainstalaciónquealbergaaanfibioscautivosesunimportantecomponentedelaevaluaciónderiesgosdebioseguridad.Lasconsideracionesmásimportantessonlassiguientesdicotomías:

• Lainstalaciónestádentrodelrangogeográficodelaespecieosugrupo,ocercadel

sitioderecolecciónoriginal.O

• Lainstalaciónestáfueradelrangodedistribuciónoriginaldelaespecieogrupodeespecies,olejosdelsitioderecolecciónoriginal.

3.¿Lainstalaciónescosmopolitaoaislada?

• Lainstalaciónselimitaaalbergarespeciesogruposdeespeciesdelrangogeográficonatural(aisladas).

O• Lainstalaciónalbergaespeciesogruposdeespeciesdefueradelrangode

distribuciónoriginaldeestas,porejemplo,unacoleccióncosmopolitadezoológico.

Ejemplosusandoelárboldedecisionesdeevaluaciónderiesgos Lassiguientessituacionessonparaguiaraloslectoresenelusodelárboldedecisionesdeevaluaciónderiesgoparalabioseguridad(imagen4.1).Ejemplo1:Lasranastoroamericanas(Lithobatescatesbeianus)alojadasenunaexhibicióndezoológicoenlosEstadosUnidosqueeducaalpúblicoacercadelosecosistemasdehumedales.No


existenplanesparacriaraestaespecieencautiveriooparaliberarasuscríasalanaturaleza.¿Cómousarestainformaciónenelárboldedecisiones?:

• Estasranastoronosonpartedeunprogramadecríaencautiveriooinvestigaciónsobrelaconservaciónyestasranas,osuscrías,nuncaseránliberadasalanaturaleza.Porlotanto,tienenunrolEDUCACIONAL.

• LosanimalescuyaespecietieneunrolEDUCACIONALsonmanejadosencautiveriousandoelnivelde“BUENASPRÁCTICAS”debioseguridad.

• Laspautasdebioseguridad"BUENASPRÁCTICAS"(vealasección4.4)incluyeninformacióndecómoprevenirlaIntroduccióndeenfermedadesinfecciosasqueportanlasranastoroapoblacioneslocalesdeanfibiossilvestresoaotrosanfibiosqueseanpartedelacoleccióndelzoológico.EstotambiénvaldríasilaexhibiciónmencionadaenesteejemploestuvieraubicadafueradelosEstadosUnidos,porejemplo,EuropaoAustralia,sinembargo,dadoslosriesgossignificativosasociadosalaintroduccióndeagentespatógenosanfibios"nonativos"anuevoslugares(vervealasección4.3),serequiereunestudiodetalladoacercadelasprácticasdebioseguridadparalaeliminaciónderesiduosyaguasresiduales(versecciones4.14–4.15)ydelosaspectosrelacionadosaldiseñodeinstalacionesparaprevenirelescapedeanimalescautivosolaentradadeanfibiossilvestresaestas(vealasección4.18).

Ejemplo2: LossaposdeWyoming(Anaxyrusbaxteri)sonunaespecieenpeligrodeextincióndeloestedelosEstadosUnidosqueformanpartedeunprogramadecríaencautiverioqueproducerenacuajosparasuposteriorreintroducciónalanaturaleza.Unadelasinstalacionesdelprogramadecríaencautiverioesunzoológicoubicadoa20millas(32km)deunlagoenelcualelsapoestápresentenaturalmente.Elzoológicoesunainstitucióncosmopolitaquetambiénalbergaunpequeñonúmerodeotrasespeciesdeanfibiosdealrededordelmundoconpropósitoseducacionales.¿Cómousarestainformaciónenelárboldedecisiones:?

• LossaposdeWyomingsonpartedeunprogramadecríaencautiveriocuyoobjetivoesreintroduciralosanimalesdevueltaalanaturaleza.Porlotanto,estossapostienenunroldeArca,RescateodeSuplementación.

• ElzoológicodeesteejemploestádentrodeladistribuciónnativadelsapodeWyoming.

• Elzoológicoesunainstalación"mezclada",óseaquealbergaespeciesdeanfibiosajenasalrangodedistribuciónoriginaldelsapodeWyoming.

• LosanimalesconunroldeArca,RescateodeSuplementaciónqueesténalojadosenunainstalaciónoinstituciónmezcladasonmantenidosenunniveldebioseguridad


deAISLAMIENTO.Enestasituaciónestoescierto,aunquelosanimalesesténalojadosenunainstalaciónqueestádentrodeladistribuciónnativadelsapo.Esdegranayudatomarprecaucionesadicionalesenelniveldebioseguridadde“AISLAMIENTO”(vealasección4.4),paraasegurarsequelossaposqueseránliberadosalanaturalezanohansidoexpuestosaagentespatógenos"nonativos"quecirculenenotrosanfibiosalojadosenlainstalaciónmezclada.

UnasegundainstalacióndelprogramadecríaencautiveriodelsapodeWyomingestáubicadaa15millas(24km)deunlagoenelcualelsapoestápresentenaturalmente.EstainstalaciónestádedicadasoloalacrianzadesaposdeWyomingyalbergaaotrosanfibios.

• DadoquelainstalaciónenesteejemploestádentrodeladistribuciónnativadelsapodeWyomingyyaqueestádedicada(oaislada)alsapodeWyoming,losanimalespuedenestarbajoelniveldebioseguridadde“BUENASPRÁCTICAS”(vealasección4.4).Aunasí,elniveldebioseguridadde“BUENASPRÁCTICAS”incluyerecomendacionesde"sentidocomún"parareducirelriesgodequeagentespatógenosanfibiosimportante,comoelhongoquítridoanfibio,noseanintroducidosopropagadosalaspoblacionescautivas.

Ejemplo3:LossaposaerosoldeKihansi(Nectophrynoidesasperginus)seencuentranextintosenlanaturaleza,másespecíficamentesudistribuciónnativaalsurdelasMontañasUdzungwadeTanzania.HansidoestablecidasenunzoológicodelosEstadosUnidospoblacionesderesguardoencautiveriodelsapoaerosol.ExistenplanesafuturoparausaralascríasdelapoblacióncautivaparalareintroduccióndelsapoaerosolaTanzaniadespuésdelamitigacióndefactoresambientalesenladistribuciónnativadelsapo.¿Cómousarestainformaciónenelárboldedecisiones?:

• Lossaposaerosolsonpartedeunprogramadecríaencautiveriocuyoobjetivoesreintroduciralosanimalesdevueltaalanaturaleza.Porlotanto,estossapostienenunroldeArca,RescateodeSuplementación.

• Lainstalacióndecrianzaparaelsapoaerosolseencuentraconsiderablementeafueradeladistribuciónnativadelaespecie.Enestasituación,elniveldebioseguridadde“AISLAMIENTO”esnecesarioparaprevenirlaintroduccióndeagentespatógenos"nonativos"alaspoblacionesdesaposaerosol.Siseintroducenagentespatógenosnonativosalossaposaerosol,hayunaposibilidaddeque,comoresultadodelesfuerzoparalareintroducciónalanaturalezadelsapoaerosol,estospatógenostambiénseanintroducidosdevueltaalaspoblacionesdeanfibiossilvestresenTanzania.


4.5RESUMENDEBUENASPRÁCTICASYNIVELESDE“AISLAMIENTO”DESEGURIDAD

BuenasPrácticas Las“BUENASPRÁCTICAS”sonrecomendadasparatodoslosanfibiosencautiverio,sobretodoparaaquellosque:

• SeencuentrenenaislamientoalargoplazoporquetienenunroldeArca,RescateodeSuplementación,perosonmantenidosenunainstalaciónqueestádentrodeladistribuciónnativadelaespecieogrupodeespeciesyquenomantieneotienecontactoconanfibiosajenosasudistribuciónnativa.

O• TienenunroldeINVESTIGACIÓNSOBRELACONSERVACIÓNodeCONSERVACIÓNY

EDUCACIÓNsinintencionesdedevolveralosanimalesosudescendenciaalanaturaleza.Estosanimalespuedenestardentroofueradeladistribuciónnativa.SiestosanimalesserándevueltosalanaturalezadeberíantenerunroldeArca,RescateodeSuplementación.

Las“BUENASPRÁCTICAS”reduciránlossiguientesriesgosdeenfermedadesinfecciosasdeunacolección:

• Adquisicióndeenfermedadesinfecciosasque:o Tienenunimpactonegativoenlasaluddeanimalesindividuales.o Interfierenconeléxitodeunprogramadecríaencautiverioola

sostenibilidaddeunprogramadeanfibiosencautiverio.o Tienenunimpactonegativoenlavalidezdecualquierinvestigaciónque

selleveacaborespectoaunaespecie.• Laintroduccióninvoluntariadeunagentepatógenoanfibiononativoaunanueva

ubicación,porejemplo,ranasdelosEstadosUnidosllevadasaunainstalaciónenAustraliaintroducenunranavirusnonativoaAustralia.

Aislamiento

Lasnormasde“AISLAMIENTO”sonrecomendadasaaquellosanimalesque:TienenrolesdeArca,RescateodeSuplementaciónyquetienenposibilidades,olascríasdeestos,deserdevueltosalanaturaleza

Y

• Hansidoremovidosdesudistribuciónnativaparaesfuerzosconservacionistasexsitu,porejemplo,quesonnativosdeIndiaeincorporadosaprogramasdeconservaciónexsituenAustralia.

O


• Estánenprogramasdeconservaciónexsitudentrodesudistribuciónnativa,peropuedenserexpuestosaanfibiosdefueradesudistribuciónnativa,porejemplo,unzoológicoenAlemaniaquetieneunprogramadeconservaciónexsituparaespeciesnativasalemanas,peroquetambiénalbergaanfibiosdeotrasregionescomoKeniaolosEstadosUnidos.

Lamezcladeindividuosquevienendediferentespoblacionesalopátricasdelamismaespecietambiénpuederequerir“AISLAMIENTO”bajociertascircunstancias.Porejemplo,tengaencuentalosmapasdedistribución(abajo)delaranahylidaeAnothecaspinosaylasalamandradelafamiliapletodóntidosAneideslugubris.Estossonejemplosdeespeciesquenaturalmenteaparecenenpoblacionesdispersas.Entalescasos,unodebeconsiderarconespecialcuidadoelconceptode"dentro"y"fuera"cuandosehabladelrangodelasespecies,tomandoencuentaalaspoblacionesseparadasquepuedenposeerperfilesdeenfermedadesdiferentesenlanaturaleza.Asimismo,enaquelloscasos,esaconsejablemantenerenaislamientoalascoloniasquederivendeporcionesdiferentesoseparadasdelrangodedistribucióngeneraldelaespecie.


(Fuente:www.iucnredlist.org)


El“AISLAMIENTO”reducirálossiguientesriesgosdeenfermedadesinfecciosasdeunacolección:

• Todoslosriesgosquecubrenlas“BUENASPRÁCTICAS”• GarantíasadicionalesparaasegurarquelosanimalesinvolucradosenrolesdeArca,

RescateodeSuplementaciónnoseinfectenconagentespatógenosnonativos.Losgrandesriesgospresentadosporlosagentespatógenosanfibiosnonativossondiscutidosenlasección4.3.

Cambioenelniveldebioseguridad

Losanimalesdebensermantenidosenelniveldebioseguridadapropiadoparasurol.Esaconsejablemanteneralosanimalesenelnivelmásaltodebioseguridad(“BUENASPRÁCTICAS”O“AISLAMIENTO”)necesarioparaelolosrolesactualesyfuturosdelapoblacióncautiva.

• Estoesmásimportanteparalosanimalesquesonconservadosen“AISLAMIENTO”porqueellososudescendenciaserándevueltosalanaturaleza.Siestosanimales,osudescendencia,sonmantenidosbajolas“BUENASPRÁCTICAS”,tendránunriesgomásaltodeadquirirunagentepatógenoanfibiononativoydeintroducirestepatógenoapoblacionesanfibiassilvestres.

• Sielroldelaespeciecambia(porejemplo,deArca,RescateodeSuplementaciónaConservación,InvestigaciónoEducación),sepuededisminuirniveldebioseguridad(porejemplo,de“AISLAMIENTO”a“BUENASPRÁCTICAS”),peronoseríaapropiadocambiarelroldeestosanimalesdevueltaaArca,RescateodeSuplementaciónenelfuturo.

Sianimalesquepreviamenteeranmantenidoscon“BUENASPRÁCTICAS”vanaserconsideradosparaunroldeArca,RescateodeSuplementación,elprocesodeevaluaciónderiesgodeenfermedadesserácomplicado,caroytomarámuchotiempo,también,podríanoresultarenanimalesqueseanaptosparaliberaralanaturaleza(veaelcapítulo3).4.6PRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD Másabajo,enlatabla4.1,seentregaunresumendeprácticasespecíficasparalas“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”ydetallesdeestasprácticaspuedenserencontradosenlasseccionessubsiguientes.Ladiferenciamásgrandeentrelas“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”eselsimpleactodeaislaralosanimales.Elprocesodeaislamientoalargoplazosedescribeendetalleenlasección4.8.Lasprácticaszootécnicasespecíficasdescritasenseccionessubsiguienteslogranunoomásdelossiguientesobjetivos:

• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosnonativosseanintroducidosanuevasubicacionesgeográficasypoblacionesanfibias("nadadebesalir").Estoprotegeapoblacionesdeanfibiossilvestresdenuevosriesgosdeenfermedadesinfecciosas.


• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosseanintroducidosapoblacionessaludablesdeanfibioscautivos("nadadebeentrar").Estoesimportanteparalasostenibilidaddelaspoblacionescautivas,eléxitodeprogramasdecríaencautiverioyderescateyparamantenerlosnivelesdebienestar.

• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosseantransmitidosentrediferentesanimalesdentrodeunainstalacióndeanfibiosencautiverio("Nadasemueveenelinterior").Estasprácticaszootécnicaspuedenminimizarelnúmerodeanimalesqueseveránafectadosencasodequeocurraunbrotedeenfermedadesinfecciosasdentrodeunainstalación.

Tabla4.1—Resumendeprácticaszootécnicasparalas“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”.

Práctica BuenasPrácticas

Aislamiento

Aislamientoalargoplazodelaespecieogrupodeespecies(vealasección4.8)

+

Calzadoespecializadoparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo(sección4.10)

+

Ropaespecializadaparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo(sección4.10)

+

Losanimalesenaislamientoalargoplazodebenseratendidosalcomienzodeldía(sección4.11)

+

Herramientasespecializadasparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo(sección4.13)

+

Calzadoyropaespecializadosparacadaedificio(sección4.10)

+ +

Sedebenlavarlasmanosousarguantesentrecadarecinto(sección4.10)

+ +

Seguirunarutinazootécnicaquereduzcaelpotencialdetransmisióndeenfermedades(sección4.11)

+ +

Limpiarydesinfectarherramientasentrerecintos

+ +


diferentes(sección4.13)Determinarnecesidadesparaeltratoespecialdeaguasresiduales(sección4.14)

+ +

Determinarlanecesidaddeeliminaciónderesiduossólidos(sección4.15)

+ +

Fuentesdeaguayalimentoslibresdeenfermedades(secciones4.16y4.17)

+ +

Automatizacióndeprácticaszootécnicassiexistelaposibilidad(sección4.18)

+ +

Períododecuarentenaparanuevosanimalesentrandoaunacolección(capítulo6)

+ +

Vigilanciadeenfermedadesynecropsiasdelosanimalesquemueranenlacolección(capítulo9)

+ +

4.7CAPACITACIÓNDELPERSONALEIMPLEMENTACIÓNDEPRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD Unodelosmedios(portadores)másimportantesporloscualeslasenfermedadesinfecciosaspuedensertransmitidasenunainstalaciónparaanfibiossonelpersonalzootécnico,porlotanto,losmejoresmétodosparaelcontrolylaprevencióndelosproblemasdeenfermedadesinfecciosasenlosprogramasdeconservacióndeanfibiosencautiveriosonelentrenamientoadecuadodelpersonalybuenosprocedimientosoperacionalesestandarizados. Algunasdelassugerenciasquepuedenayudaralpersonalzootécnicoallevaracabolasprácticasdebioseguridadyqueminimizanlaposibilidaddeerroresson:

• EldesarrolloylaadhesiónaProcedimientosdeOperaciónEstándar(SOP,porsussiglaseninglés)escritosyfácilesdeusarqueproveanunadescripcióndelasprácticasdebioseguridad.Estosprocedimientosdeberíanhacerseamedidaparacadainstalaciónanfibia.LosSOPdeberíanseraccesiblesatodoslosmiembrosdelpersonal.LosSOPdeberíanserprácticosydesarrolladostomandoencuentalasnecesidadeszootécnicasdecadainstalaciónydelaespecieanfibiasiendoalojada.

• Sedebenrevisarlasprácticasdebioseguridadconlosnuevosmiembrosdelpersonalantesdequeempiecenatrabajarconanimales.Tambiénserecomiendaunarevisiónanualdelasprácticasdebioseguridadcontodoelpersonaldecuidadodeanimales.


• Realizarprogramasdeentrenamientoconespecialistasparacuidadoresdeanfibiospuedepromoverunentrenamientoavanzadoenmedidasdebioseguridadybuenasprácticaszootécnicasparaanfibios.Porejemplo,laAsociaciónAmericanadeZoológicossyAcuariostieneuncursomodelodeManejoyBiologíadeAnfibios,suobjetivoes"proveerunabasesólidaparalabiologíadeanfibiosyaqueéstaserelacionaalosprogramaszootécnicos,decrianza,deconservaciónydecooperación."(http://www.aza.org/prodev/Amphibians/).

• Proveaalpersonalzootécnicoconlasherramientasyelequiponecesarioparaelmanejodepoblacionesdeanfibioscautivaoennivelesdebioseguridadapropiadosparaelroldelaespeciequeestáncuidando.

• Esprobablequeseproduzcanerroresenlasprácticasdebioseguridad.Usteddebefomentarunambientelaboralenelcuallosmiembrosdelpersonalsesientancómodosreportandoestoserrorestanprontoocurran.Mientrasmástempranoseidentifiquenloserroresmássepuedehacerparaminimizarsuimpacto.

• CuandoesteformulandolosSOP,diseñeprocedimientosquereduzcanelcontactoquetieneelpersonalconlosanfibios(atravésdelaautomatización).Almismotiempo,estosprocedimientosdebenpermitiralpersonalobservarregularmenteparadetectarseñalessutilesdeenfermedadesocomportamientoanormal.Elpersonaldebeasumirquetodoslosrecintospuedenconteneranimalesconenfermedadesinfecciosasydebeseguirrutinasqueminimicenlaposibilidaddetransmisióndeenfermedades(vealasección4.11).

4.8AISLAMIENTOALARGOPLAZODEANFIBIOSDESTINADOSALA

REINTRODUCCIÓNALANATURALEZA Losanfibiosenprogramasdeconservación,cuyoobjetivoesreintroduciralosanimalescautivosoaladescendenciadeestosalanaturaleza,debenestarpermanentementeseparadosyprotegidosdeotrosanfibiosenunzoológicocosmopolitaodecoleccionesdeanfibiosenaislamientoalargoplazo.Losmejoresejemplosdeaislamientoalargoplazosonlosprogramasquehansidoestablecidosdentrodelrangodelpaísdelaespecieogrupodelaespeciequehasidomantenidadentrodelainstalaciónyquenoalbergaotrosanfibiosdefueradelrangodelpaís.

• Elaislamientoalargoplazotambiénhasidollamado"cuarentenapermanente"porelTallerdePlaneacióndeConservaciónExSitudeAnfibiosllevadoacaboporWAZAyCBSGdelaño2006(Zippelycolaboradores,2006)o"Cuarentena1"y"Cuarentena2"porlaGuíadeRecursosZootécnicosdelaAsociacióndeZoológicosyAcuariosdel2008(KastyHanna,2008).

• Enestemanual,eltérmino"aislamientoalargoplazo"esusadoparadistinguirla"cuarentenapermanente"delacuarentenausadaalmomentodeagregarnuevosanimalesaunacolección(veaelcapítulo6).

Elaislamientoalargoplazopuedeserlogradodelasiguienteforma:


• Albergandosoloaunaespecieogrupodeespecies(ungrupofaunísticoanfibioque

sedanaturalmentejuntoenelpaísdeorigen)enunedificioindependienteodentrodeunahabitaciónohabitacionesaisladasdentrodeledificio.Losdetallesparacrearinstalacionesdeaislamientoalargoplazosondiscutidosabajo.

• Mientrasmásaisladaseencuentreunaespecieogrupodeespeciesdeunacoleccióncosmopolitaanfibia,mássimpleesestablecerymantenerelaislamientoalargoplazoylasprácticasdebioseguridadefectivas(porejemplo,unedificioseparadoparaelaislamientoalargoplazoesmejorquetenerhabitacionesseparadasdentrodeledificio).

↑Separacióndepoblacionesaisladas=↓dificultadparamantenerlabioseguridad• Losanimalesenaislamientoalargoplazonuncasonalojadosenlamismahabitación

conanfibiosajenosasurangodedistribuciónnativa,porejemplo,unaranagopherdeMississippidelosEstadosUnidosnodeberíaestarenlamismahabitaciónqueunsapoaerosoldeKihansideTanzania.

• Sedebeprevenirelcontactoindirectodeanfibiosdefueradeladistribuciónnativapormediodeportadorespotencialescomoelpersonaldecuidadoanimal,recintos,sustrato,sistemasdeagua,oherramientas.Enotraspalabras,todoloquehayatenidocontactoconanfibiosajenosaladistribuciónnativanodebetenercontactoconlosanimalesenaislamientoalargoplazo.Paralograresto,esnecesarioimplementarprácticasdebioseguridadespecíficas,lascualessondiscutidasendetallealassecciones4.10,4.11y4.13másabajo.

4.9INSTALACIONESPARAELAISLAMIENTOALARGOPLAZO

Habitacionesaisladasdentrodeledificio Unmétodorentableparalograrelestándarde“AISLAMIENTO”parapoblacionescautivasanfibiasesdesarrollarhabitacionesdedicadasparaelaislamientoalargoplazodentrodeunainstalacióncosmopolitadeanfibios.Esteenfoqueesrentable,peronoesideal,estoporqueexistenmásposibilidadesdequeexistancasosdecontaminacióncruzadacuandoocurranfugasdeagua,inundaciones,osimplesviolacionesinvoluntariasdelacuarentena.

• Usarhabitacionesdedicadasincrementalaposibilidaddeerroresenlabioseguridaddelasinstalaciones.Elpersonalzootécnicodebeestarcomprometidoalconceptoyalaprácticadelaspautasde“AISLAMIENTO”paraelflujodetrabajo,ropaycalzadoyelusodeherramientasdelpersonal.

Lashabitacionesusadasparaelaislamientoalargoplazopuedenserconstruidasapartirdehabitacionesyaexistentesdentrodelainstalaciónparaanfibiosopuedenconstruirseespecialmente.ApartirdelaexperienciadelZoológicoHenryDorlyde


Omaha(Krebs,2008;verapéndice3)sehandescritodetalladamentemétodosparalaconstrucciónespecialyrelativamenteeconómica(Aproximadamente$7000USD)dehabitacionesmodularesdeaislamientoalargoplazoenespaciosdesocupadosdentrodeunzoológico.Lashabitacionesdeaislamientoalargoplazodebenserconsideradasunidadesindividualesconmodificacionesqueprevenganlaentradaosalidadeagentespatógenosanfibios.Algunasespecificacionesparareducirelriesgodetransmisióndeenfermedadesdelashabitacionesson:

• Lashabitacionesdebenserselladasparaprevenirelescapedeaguaoresiduosde

anfibiosalashabitacionesadyacentes(vealasección4.18).• Lashabitacionesdeberíanserapruebadeescapesyapruebadepestes(veala

sección4.18).• Lashabitacionesylospasilloscircundantesdeberíanserdiseñadasparacumplirlos

requisitosde“AISLAMIENTO”conrespectoaelflujodetrabajo,ropaycalzadodelostrabajadores(sección4.18).

• Siseconstruyenhabitacionesmodulares,deberíanhacerseplanesparaelmantenimientoregulardeestasparaprevenireldeteriorodelosmaterialesdeconstrucción,porejemplo,sedebenusarsellantescomobarreraparaelaguaentrelasparedesyelpiso.

• Sedebetenerenconsideraciónelcontrolyelmovimientodelairedentrodelainstalación(sección4.18).

Edificiosdeaislamientoalargoplazoseparados

Comoyafuemencionado,eldesarrolloylaconstruccióndeedificiosdeaislamientoalargoplazoseparadosreducenmáselriesgodeenfermedades.UnenfoqueexitosodesarrolladoporelCentrodeInvestigacionesdeAnfibiosdeAustraliaparacrearedificioseconómicosdeaislamientoalargoplazoinvolucraelusodecontenedoresdeembarquemodificados.Losdetallesparalaconstruccióndeestoscontenedorespuedenserencontradosenlínea(http://frogs.org.au/arc/container.php).Loscontenedoresdecargavandesdelos6alos12metrosdelongitudyestánequipadosconcalefacciónyenfriamientodeaireindependiente,sistemaseléctricosydeagua,yestándiseñadosparautilizarelespaciodecuidadoanimaldemaneraeficiente.Esposiblemodernizarloscontenedoresantesdesuinstalaciónenelsitioy,porlotanto,estospuedenserinstaladosconmenosapoyoalaconstruccióncomparadosconlaconstruccióndenuevosedificios.Estascaracterísticashacenqueloscontenedoresdecargaseanunaopcióneconómicayflexibleparamuchosprogramasanfibios.Lasunidadestambiénpuedenserconstruidasconventanasparapropósitosdeexposiciónencasodequereraumentarelapoyodelpúblico,lasoportunidadesdefinanciaciónylasoportunidadeseducacionalesparaelpúblicogeneral.


4.10HIGIENEYROPAPROTECTORADELPERSONALDEMANEJO Losprocedimientosparalahigieneylaropaprotectoradelpersonalzootécnicodelainstalaciónparaanfibiossonimportantesparaeléxitodelosprotocolosdebioseguridad.Estasecciónformularecomendacionesparalosanfibiosmantenidosbajolosestándaresde“BUENASPRÁCTICAS”oparalosanimalesen“AISLAMIENTO”.Generalmente,nosedebenfomentarlasvisitasaáreasbioseguras.Cuandoéstasseannecesarias,losvisitantesdebenseguirlasmismaspautasquelosmiembrosregularesdelpersonal.

Calzadoybañosdesinfectantesparapies

• Las“BUENASPRÁCTICAS”indicanqueelcalzadodedicadoesunrequisitoparacadaedificioquealbergueanfibioscautivos.Esimportantequeelpersonalzootécnicoolosvisitantesnoentrenalasáreasdecuidadoanimalusandocalzadoquehasidousadofueradelainstalacióndecautiverio,porejemplo,ensuscasasoalairelibre.

• En“AISLAMIENTO”,esnecesarioelcalzadodedicadoparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo.Lasbotasozapatosdedicadospuedenseralmacenadosdentrodelahabitaciónaislada.Elobjetivoesevitarelseguimientodematerialorgánicooagentespatógenosanfibiosdesdeunahabitacióndeaislamientoalargoplazo(quealbergueaunaespecieogrupodeespeciesdiferentes)aotra,odesdeáreasde“BUENASPRÁCTICAS”aáreasde“AISLAMIENTO”.Unaalternativaalcalzadodedicadoeselusodecubiertasplásticasdesechablesparalospies,porejemplo,lascubiertasdelamarcaShubeesTM.

• Losbañosdesinfectantesparapiessonusadosenalgunasinstalacionesparaanimalesparalimpiarelcalzadoentrelashabitacionesdelosanimales.Losbañossolosonefectivossielcalzadoestáhechodematerialfácildedesinfectar(comolasbotasdecaucho),sinoestámuycontaminadocontierrauotrosmaterialesorgánicos,ysielcalzadoestáexpuestoaldesinfectanteporeltiempodecontactorequerido.Haydisponiblesanálisisdelusodebañosdesinfectantesparapies(Morleyycolaboradores,2005;Dunowskaycolaboradores,2006)

o Losbañosparapiesrequierenunaltoniveldemantenciónparaevitarlaacumulacióndematerialesorgánicosquepuedandesactivaralosdesinfectantesyparaevitarlaevaporacióndelasolucióndesinfectante.

o Losbañosdepiessonútilescuandoestánubicadosenlaentradaysalidadelasáreasbioseguraspararemovermateriaprimaypararecordarlealpersonaldequeestánentrandoaunáreabiosegurayquedebenestarpendientesdelosprotocolosdebioseguridad.

o Algunosdelosdesinfectantesqueseutilizanenlosbañosparapiessonelhipocloritosódico(cloro),VirkonyF10.ElVirkontieneventajascuandoseutilizaenbañosparapiesporquemantienemásactividadcuandohacecontactoconmaterialesorgánicos.(veaelcapítulo5).

o Enlamayoríadelassituaciones,elusodecalzadodedicadoenlugardelosbañosparapiesespreferible,estoyaquelosdesinfectantessolopuedeneliminarciertosagentespatógenos(estodependedelagenteusadoydesu


concentración).Además,losbañosparapiespuedenpresentarunriesgoparalosanimalesenlainstalaciónyaqueexisteunaposibilidaddequelosanimales(porejemplo,prófugos)puedanentrarencontactoconmaterialresidualdesinfectanteenelpiso.Tambiénnoexistenefectosperjudicialesparaelambienteporladescargadedesinfectantessiseusacalzadodedicado.

Ropadedicada

• Paralograrelestándarde“BUENASPRÁCTICAS”serequiereropadedicadapara

cadaedificioquealbergueanfibioscautivos.Esimportantequeelpersonalzootécnicoolosvisitantesnoentrenalasáreasdecuidadoanimalusandoropaquehasidousadofueradelainstalacióndecautiverio,porejemplo,ensuscasasoalairelibre.Essuficienteelusodeuniformesespecialesparalasinstalacionesqueseanlavadosregularmente.Silosuniformessemojanosecontaminandemasiadoconmaterialorgánicodebensercambiados.

• En“AISLAMIENTO”,laropadedicadaesnecesariaparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo.Enlamayoríadeloscasosserásuficientetenerunabatadelaboratorioaparteoalgunaprendadeprotecciónparausarsobrelaropahabitualdelosmiembrosdelpersonal.Silaropahabitualestáhúmeda,suciaosecontaminódealgunaformaconmaterialdefueradelahabitacióndeaislamientoalargoplazo,sedebehaceruncambioderopacompletoantesdeentraralahabitación.Laalternativaeselusoderopaprotectoradesechableparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo,porejemplo,ropaquirúrgicaomonosparavestirdelamarcaTyvek®.

Lavadodemanosyusodeguantesprotectores

• Selesrecomiendaalosmiembrosdelpersonalzootécnicoellavadofrecuentede

manosybrazos(hastalaalturadeloscodos)conjabóndesinfectante.Lavarselasmanosylosbrazosesespecialmenteimportanteenlassiguientessituaciones:

o Antesdeentraracadahabitaciónoinstalaciónde“AISLAMIENTO”.o Cuandoestétrabajandoentrerecintosdiferentescomounprocedimiento

estándardelosprotocolos“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”.• Sedebenusarguantesdesechablescuandoseestémanipulandoanfibioso

limpiandoalgúnrecinto.o Sedebeusarunpardeguantesnuevosparacadarecinto.o Antesdemanipularalosanimalessedebenusarguantessintalcooguantes

enjuagadosminuciosamente.o Unestudioreciente(Cashinsycolaboradores,2008)sugierequelosguantes

delátexydenitrilopuedensertóxicosparaalgunosrenacuajos.Tambiénseobservóquelosguantesdevinilopuedensertóxicossinosonenjuagadosconaguaantesdeexponerlosalosanimales.Enlasobservacionesdela


toxicidadrelacionadaconelusodeguantesnosehavistounaconsistenciaysehanpublicadorecomendacionesparareferirseaesteproblema(Greerycolaboradores,2009).

o Latoxicidadrelacionadaalusodeguantesnohasidoobservadaenanimalespostmetamórficos.

o Unestudioexperimentalmuestraqueelhongoquítridodeanfibios(Batrachochytriumdendrobatidis)sobrevivepormástiempoenmanosdesnudasquehansidolavadasconetanolyagua(Mendezycolaboradores,2008).Lasimplicacionesparalatransmisióndeenfermedadesenunescenarionaturalnosonclarasyseobservóqueellavadodemanoserapreferiblealareutilizacióndeguantesdesechables.

4.11RUTINASDEMANEJO Lasrutinasymodelosdeflujosdetrabajozootécnicosusadasporelpersonalzootécnicosonimportantesparaminimizarlasposibilidadesdetransmisióndeagentespatógenosdentrodeunainstalacióndeanfibioscautivos,algunasdeestasposibilidadesson:

• Latransmisióndeagentespatógenosentreanimalesalojadosendiferentesnivelesdebioseguridad.

• Latransmisióndeagentespatógenosentrerecintosparaanfibios.• Latransmisióndeagentespatógenosentreanimalesencuarentena(veaelcapítulo

6)ylosanimalesenunacoleccióndeanfibiosestablecidaoalojadosenelniveldebioseguridadde“AISLAMIENTO”.

Losanimalesqueseencuentranbajo“AISLAMIENTO”deberíanseratendidosalprincipiodeldíaantesdecuidaralosanimalesqueseencuentranbajolas“BUENASPRÁCTICAS”.Estotambiénaplicacuandolosanimalesdestinadosa“AISLAMIENTO”sonllevadosacuarentena(veaelcapítulo6).Losanimalesbajo“AISLAMIENTO”nuncadebenseralojadosenlamismahabitacióndecuarentenaquelosanimalesajenosaladistribuciónnativadelaespecieencuestión. Laautomatizacióndealgunastareaszootécnicastalescomoalimentaciónylimpiezapuedereducireltiempocontactodirectoconlosanfibios,locualminimizaríalasposibilidadesdetransmisióndeenfermedades.Sugerenciasparalaautomatizaciónsonproporcionadasenlasección4.18. Esaltamenterecomendadaunarutinasistemáticayorganizadaparaelcuidadodiariodeunacolección.Larutinadebeserespecíficaalpuntodeque,siocurreunproblema,cadapasopuedaserreproducidoparaasíeliminarlasáreasderiesgo,ydeterminarexactamentedondeocurrióelerrorodondefueintroducidoelagentepatógeno.Porejemplo,cuandoseestéhaciendoelmantenimientodeunahabitaciónsiempresedebeempezardesdeelfondodeestaytrabajarcaminohacialapuerta,osiempretrabajarenelsentidodelasagujasdelrelojalrededordelahabitación.Depreferencia,debehaberunalistaconcisaqueindiqueladirecciónenlacualsedebe


procederconlasprácticaszootécnicasderutina,estalistadebetenerindicacionesclarasyestardisponibleparaquetodoslosmiembrosquemanejenanimalespuedanverlayentenderla.Porejemplo,laspeceraspodríanseretiquetadassecuencialmente,ylosprocedimientospodríandictarquesedebetrabajarenesteorden:

RecintoA→RecintoB→RecintoC

• Losrecintosquealberguenaanfibiosconpocasprobabilidadesdeserinfectadosconagentespatógenosdepreocupación,porejemplo,losanimalesquehanestadoencautiverioporunlargotiempoolosanimalesquehandadoresultadosnegativosparaBd(Batrachochytriumdendrobatidis)uotrasenfermedadesimportantes,deberíanestarorganizadosdeformaqueseanatendidosprimerosenunasecuenciadireccional(porejemplo,losTanquesAyD,deuntotalde15tanques).

• Losrecintosyelequipodeestos(comolailuminaciónylasunidadesdefiltración)debenestaretiquetadosparaidentificarclaramentecadaunidadenlasecuenciaderecintos.

• Sidurantelarutinadecuidadozootécnicoseencuentrananimalesmuertosoenfermos,estosdebenserremovidosinmediatamentedelrecinto.Losanimalesmuertosdebenserpresentadosparanecropsia(veaelcapítulo9).Losanimalesenfermosdebenserretiradosparaatenciónveterinaria.Comomínimo,losmiembrosdelpersonaldeberíanlavarselasmanosantesdecompletarelmantenimientodireccionalenesahabitaciónoinstalación.

• DebeincorporarestosprocedimientosalosProcedimientosOperacionalesEstandarizados(vealasección4.7)delainstalaciónyproveerentrenamientoestandarizadoparalaimplementacióndeestosporpartedelpersonalzootécnico.

4.12HIGIENEDELRECINTO Lalimpiezaregulardelosrecintosparaanfibiosesesencialentodoslosnivelesdebioseguridadparareducirlaacumulacióndematerialesorgánicosquepuedanincrementarelriesgodeenfermedadesparasitariaseinfecciosasenlaspoblacionescautivas.Algunosconceptosgeneralesdehigieneenlosrecintosquesonimportantesdesdeelpuntodevistadelabioseguridadson:

• Lafrecuenciaconlaquelosrecintosparaanfibiosdebenserlimpiadosincrementasi

labiomasa(cantidaddeanimales)ylaalimentacióndeanfibiosaumentan.• Lafrecuenciadeloscambiosdeaguadependedemuchosfactores,comola

disponibilidadyelusodesistemasdefiltración.• Laspecerasdebenestarhechasdematerialesquepermitansufácillimpiezay

desinfección.Serecomiendanlosmaterialesnoporososcomoelvidrio,lafibradevidriooelplástico.Antesdealbergaracualquieranfibio,laspecerasdebenserlimpiadas,desinfectadas,enjuagadasysecadasminuciosamente.Sedebeseguirelmismoprocedimientoalmomentodevaciaryalmacenarunapecera.Enelcapítulo


5seentreganrecomendacionesacercadequédesinfectantesusarenlaspecerasyelequipamiento.

• Elequipocomolosestantes,repisas,mostradores,einclusopisos,deberíanserconstruidosapartirdematerialesqueseanfácilesdedesinfectar,enjuagar,lavaryfregar.Esnecesariounhorarioregulardelimpiezaydesinfeccióndetodaslassuperficiesexpuestas.

• Paralosanimalesqueseencuentranen"AISLAMIENTO",esimportantequeelequipoylosrecintossoloseanlavadosenfregaderosoáreasquehayansidodesinfectadasyqueesténlibresdematerialescontaminadosdeotrosanimalesdelacolecciónanfibia.Estoincluyematerialesdeotrosanimalesalojadosenbioseguridadde"AISLAMIENTO"quesonnativosdeunaregióngeográficadiferente,porejemplo,laspecerasusadasporanimalesdePanamáen"AISLAMIENTO"nodeberíanlimpiarseenelmismofregaderoenelqueselimpianlaspecerasdeanimalesen"AISLAMIENTO"nativosdelosEstadosUnidossinanteshacerunadesinfeccióncompleta.Comoalternativa,lashabitacionesbajo"AISLAMIENTO"puedenconstruirseconfregaderosdedicadosparacadauna.

4.13EQUIPO,SUSTRATOYDECORACIÓNDELRECINTO Lasherramientas,elequipoylossustratosdelrecintousadosenunainstalaciónparaanfibiospuedenserportadoresimportantesenlaintroduccióndenuevosagentespatógenosapoblacionescautivasoenlatransmisióndeagentespatógenosentrerecintosydiferentesgruposdeanimales.Algunasdelasrecomendacionesparareducirestosriesgosson:

• Lashabitacionesen"AISLAMIENTO"debentenerunconjuntodedicadodeequipo,porejemplo,redes,fórceps,tubosdesucción,cepillosparafregar,esponjas,etc.Elequiponuncadebesersacadodelahabitaciónindividualdeaislamientoynuncadebeserusadoenungrupodiferentedeanimales.

• Tantoenelprotocolode"BUENASPRÁCTICAS"comoenelde"AISLAMIENTO",elpersonalzootécnicodebeasumirquetodoslosanfibiosylosrecintosparaanfibiossonunafuentepotencialdeagentespatógenosquepuedensertransmitidosaotrosrecintos.Estosinimportarlasaludquesepresumadelosanimales.Porejemplo,unanfibiopuedeversemuysaludable,peroaunasípuedeactuarcomoportadordelhongoquítridoanfibio.

o Lasherramientasyelequiposonlimpiadosydesinfectadosdespuésdesuusoentrediferentesrecintos(porejemplo,unaredutilizadaenelRecintoAdebeserdesinfectadaantesdeusarlaenelRecientoB),ocomoalternativa,lasredesuotrasherramientasmenorespuedenserexclusivasdecadarecinto.

o Sonnecesariosmúltiplesconjuntosdeequipo,deformaqueunconjuntopuedaserdesinfectadomientraselotroestáenuso.Lasherramientas


estánetiquetadassegúnsuspecerasohabitacionescorrespondientesparareconocerlasfácilmente.

o Pautasparaladesinfeccióndeherramientasyequiposeentreganenlasección5.5.Sedebetenercuidadodenolimpiarodesinfectarrecintosoequipodeungrupodeanimalesenelmismofregaderouáreaenelqueselimpiaelequipodeungrupodiferentedeanimalessinanteslimpiarydesinfectarelfregaderouáreadelimpieza.

• Lossustratosdelosrecintosylasdecoracionesyamuebladodelosalbergues(porejemplo,plantasyrocas)decualquiertiponodebensermovidosdesdeunrecintoaotrosinsupreviadesinfección.Algunossustratosdelosrecintoscomoelmusgosphagnumolatierradebenconsiderarsedesechablesynosertrasladadosentrerecintos.Losmaterialesporososcomolamaderaoelcorchosondifícilesdedesinfectar.Enlasección5.6y5.7seentreganpautasparaladesinfeccióndelossustratos.

• Cuandoseaposible,lasherramientas,equipoyamuebladodelosalberguesdebenestarhechosdematerialesquesepuedandesinfectarylimpiarfácilmente,porejemplo,plástico,metalovidrio.

• Elusodematerialesnaturales(porejemplo,tierra,grava,rocasyplantas)enrecintosparaanfibiospuedeserimportanteparafomentarelcomportamientonormal(inclusoelapareamiento),reducirelestrésyparaladecoraciónderecintosdeexposiciónenloszoológicos.

o Losmaterialesnaturalestienenelpotencialdesercontaminadosconagentespatógenosdeanfibios,porlotanto,lafuentedeestosmaterialesysudesinfeccióndebenserconsideradoscuidadosamenteantesdeusarlosenunrecinto.

o Cuandoseesténeligiendomaterialesnaturalesparasuusoenrecintos,debeconsiderarselaposibilidaddequehayanestadoexpuestosafaunaanfibianativaononativa,porloquesedebeconsiderarelusodedesinfectantes.

o Sedebenevitarlosmaterialesprovenientesdeáreasconproblemasdeenfermedadesanfibiasconocidas,porejemplo,plantasdeunsitiodondehayahabidounaepidemiadequitridiomicosis.Lasplantascultivadaspormedioshidropónicos(enagua)oenuninvernadero(quenotengaunacolonizaciónanfibianativa)puedenreducirelriesgodeenfermedades.Tambiénsepuedeconsiderarelusodeplantasplásticasodeseda,sobretodoparalosanimalesbajo"AISLAMIENTO".

o Sugerenciasparaladesinfecciónoesterilizacióndematerialesnaturalesseencuentranenlasección5.6

4.14ELIMINACIÓNDEAGUASRESIDUALES Laeliminacióndeaguasresidualesesunelementoimportantedelabioseguridadeneldesarrolloylagestióndeinstalacionesdecautiverio.s.Las"BUENASPRÁCTICAS"requierenqueagentespatógenosnoseanliberadosalmedioambiente.Elproblemade


bioseguridadmásimportanteenlaeliminacióndeaguasresidualeseslaposibilidaddeintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosanuevasubicacionesgeográficasatravésdelaliberacióndeaguasresidualessintrataralmedioambiente.

• Enlasinstalacionesquealbergananfibiosajenosasudistribuciónnativa(porejemplo,anfibiosdePanamáalojadosenlosEstadosUnidos)oquellevanacaboinvestigacionesconagentespatógenosanfibios,sonnecesariasmedidasdebioseguridadparalasaguasresiduales(detallesabajo).Estoaplicaaanimalesyaseabajo"BUENASPRÁCTICAS"o"AISLAMIENTO".Noesaceptablelaliberacióndeaguasresidualesalmedioambientelocal.

• Unainstalaciónquesoloalbergaaanfibiosdesupropiadistribuciónnativa(porejemplo,anfibiosdelsurdeJapónalojadosenelsurdeJapón)usualmentenonecesitaráconsiderarmedidasdebioseguridadparaaguasresiduales.

Implementarmedidasdebioseguridadparaelaguapuedesercomplicadoycostoso,porloqueespreferiblemanteneralosanfibioscautivosdentrodelrangodedistribuciónoriginaldelaespecie.Desafortunadamente,eltemadelabioseguridaddeaguasresidualesescontroversialporquelamayoríadelainformaciónyevidencianecesariaparahacerdecisionesnoestádisponible.Essumamentenecesarioorganizarungrupodetrabajoparallevaracabounaevaluaciónderiesgosdelagestióndeaguasresiduales.Elgrupodetrabajodeberíaincluiraexpertosentratamientodeaguasresiduales(específicamenteexpertosenacuicultura),alcantarilladossanitarios,microbiologíaambiental,enfermedadesdeanfibiosydiseñoycuidadozootécnicodeinstalacionesparaanfibios.Algunosdelosfactoresquesedebentenerencuentarespectoalabioseguridaddelasaguasresidualesson:

• Lacantidaddeaguaquedebesertratada(porejemplo,unainstalaciónparalacríaencautiveriopuedealbergardiferentesmétodosdetratamientodelaguacomparadaconunainstalacióncomercialgrandequecríaaranascomoalimento).

• Lainfraestructuraparaeltratamientodeaguasresiduales(alcantarillado)paraunaregióngeográficaounpaís.

• Losrecursosdisponibles,yaseanfinancierosuotros.

Hayunagranvariedaddeopcionesparaladesinfecciónyeltratamientodeaguasresidualesdisponiblesparainstalarenunainstalaciónparaanfibiosencautiverio.Cadaopcióntienesuspropiasventajas,desventajasyrequisitos.Ningunadelasopcionesestotalmenteapruebadefallasalmomentoderemoveragentespatógenosanfibiospotenciales,ylasopcionessonespecialmentelimitadascuandosedebentratargrandescantidadesdeaguasservidas.Algunasopcionesparaeltratamientodeaguasresidualesson:


• Modernossistemasdeaguasresiduales(alcantarilladosanitario)municipales.Lossistemasmodernosdetratamientodealcantarilladosanitariosonadecuadosparalaeliminacióndeaguasresidualesdemuchaspequeñasymedianasinstalacionesparaanfibiossindesinfeccionesadicionalesyconbajoriesgoparalaspoblacionesanfibiassilvestres.Porejemplo,enmuchasáreasesaceptableliberardirectamentedesechosinfecciososlíquidosdehumanosyanimalesdomésticosalalcantarilladosanitario.Sinembargo,laopcióndelalcantarilladosanitariotienelimitacionesquedebenserconsideradas:

o Noesaceptableladescargadegrandescantidadesdedesechosoagentesinfecciososalalcantarilladosanitariosinantesserdesinfectados.Lasinstalacionesquedeberíantomarmedidasadicionalesparadesinfectarelaguaantesdesudescargaalalcantarilladosanitariosonlasinstalacionesanfibiasmuygrandes(porejemplo,granjasparasapos),instalacionesqueesténpasandoporbrotesdeenfermedadesinfecciosas,instalacionesqueimportangrandescantidadesderanasdeafueradelpaísylasinstalacionesquellevenacaboinvestigacionesrespectoalasenfermedadesinfecciosas.

o Nodebeasumirautomáticamentequelossistemasdealcantarilladossanitariossonadecuadosparalabioseguridad.Lossistemaslocalesdeberíanserevaluadosdeformaindividualparaprobarsuefectividadyfiabilidad.Porejemplo,puedequelainstalaciónseaadecuada,peroquelastuberías(alcantarillas)queconectanalsistemaseanpropensasafallasyliberenmaterialinfecciosoalmedioambientelocal.Enotroscasos,losdesagüespluvialeslocalesestánconectadosalosdesagüesdeaguasservidasy,cuandollueve,lasinstalacionesdetratamientocolapsanacausadelaguadelatormentaydebendescargarlasaguasresidualesnotratadasalmedioambiente.

• ProcesosparaladesinfecciónoesterilizacióndelasaguasresidualesExisteunaampliavariedaddeopcionesparaeltratamientodeaguasresidualesconpropósitodedesactivaragentesinfecciososantesdesuliberaciónaunalcantarilladosanitariooalmedioambiente,algunasdeestasopcionessonelusodequímicos(hipocloritosódico"cloro"),agentesfísicos(calorypresión),ozonificaciónyradiaciónultravioleta.Losdetallesylimitacionesdealgunosdeestosmétodosseentreganenlasección5.8yenelapéndice2.

o Sesugierelaautomatizacióndelosmétodosdedesinfeccióndelaguaenlasinstalaciones.Laautomatizaciónminimizaelerrorhumano,aseguraquelasconcentracionesdedesinfectantesseanlasapropiadas,queeltiempodecontactoconeldesinfectanteseaeladecuado,yhacequeeltratamientodeaguasresidualesseafácildeimplementarparaelpersonalzootécnico.Unsistemaautomatizadoparaladesinfeccióndeaguasresiduales(AWWDS,porsussiglaseningles)eninstalacionesdecríaencautiveriodeanfibios(usandohipocloritosódico)hasidodescritoenestemanual(Robertsonycolaboradores,2008).Tambiénsehandescrito(Krebs,2008)métodosmanualesparaladesinfeccióndelaguausandohipocloritosódico.


o Lossistemasyprotocolosdedesinfeccióndelaguaparasuusoenlaacuiculturacomercialagranescalasonunafuentevaliosadeinformaciónparaeldiseñoeimplementacióndesistemas.Muchosdeestossistemassebasanenlaozonificacióndelasaguasresiduales(Schuur,2003).LasinstalacionesagranescaladereproducciónparaanfibiosogranjasdeberíanseguirlaspautasdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE,porsussiglaseningles),paraladesinfeccióndeaguasresidualesefluenteseninstalacionesacuíferas(www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf).

o LossistemasdedesinfeccióndeaguadeberíanserdiseñadosdeformaqueminimicenlaIntroduccióndecontaminantesquímicostóxicos(comoelcloroolascloraminas)encasodequelasaguasresidualesseandescargadasdirectamentealosambienteslocales.Porejemplo,elcloropuedeneutralizarsesiestratadocontiosulfatodesodio(Browneycolaboradores,2007)osiesexpuestoalaradiaciónUV(Robertsonycolaboradores,2008).

4.15ELIMINACIÓNDERESIDUOSSÓLIDOS Elobjetivodebioseguridadmásimportantedelasinstalacionesdecautiverioanfibiorespectoalosprocedimientosparalaeliminaciónderesiduossólidoseselmismoqueparalaeliminacióndelasaguasresiduales:prevenirlaIntroduccióndeagentespatógenosanfibiosnonativosanuevasubicacionesgeográficas.Porlotanto,lasconsideracionesparalaeliminaciónderesiduossólidossonmásimportanteseninstalacionesquealberganaanfibiosajenosaelrangodelasinstalacionesoquellevanacaboinvestigacionesconagentespatógenosanfibios.Losdesechossólidosdeestasinstalacionesnodebenservertidosalmedioambientelocalsinantessertratados.Algunasopcionesparaladesinfecciónoesterilizacióndedesechossólidosantesdesueliminaciónson:

• Autoclave.• Incineración(noesamistosaconelmedioambiente).• Hidrólisisalcalina(Tejidosocadáveresanfibios).

Otrasopcionesviablesparalaeliminacióndedesechossindesinfecciónesenterrarlosprofundamenteotransferirlosaunvertederomoderno.Laclaveeslacontencióndelmaterialinfecciosoyprevenirquelosanfibiosnativosseveanexpuestosaeste.4.16FUENTESDEAGUA Lafuenteylacomposicióndelaguaenunainstalaciónparaanfibiossonfundamentalparaeléxitodecualquierprogramadeconservacióndeanfibioscautivos.Detallesdefuentes,calidadytratamientodelaguaparalasinstalacionesanfibiashansidorevisadosenunapublicaciónreciente(Browneycolaboradores,2007).AlgunosdelospuntosquedebensertratadosincluyenelpH,durezadelagua,oligoelementos,lapresencia


demetalespotencialmentetóxicos(porejemplo,elcobre)ylapresenciaaditivospotencialmentetóxicos(porejemplo,cloroocloraminasensuministrosdeaguamunicipalesocontaminantesambientalescomopesticidas).

• Esimportantequeelaguautilizadaenunainstalaciónparaanfibioscautivosseencuentrelibredeagentespatógenosanfibiosimportantes.Esteeselcasotantoparalosprogramasde"BUENASPRÁCTICAS"y"AISLAMIENTO".Siseusansuministrosmunicipalesdeaguamodernoscomofuenteinicialparaelaguadelainstalación,elriesgodeintroducirenfermedadesesmuybajo.Sisevanausarfuentesnaturalesdeagua,debeconsiderarseladesinfeccióndelaguaantesdesuusoenrecintosparaanfibios.Algunosmétodosdedesinfecciónpotencialespuedenserlaaplicacióndemétodosfísicos(porejemplo,calorypresión)ylafiltración(vealasección5.8).

4.17FUENTESDEALIMENTO Losproductosalimenticiosqueseledanalosanfibioseninstalacionesdecautiveriosonunapotencialfuenteparalaintroduccióndeagentespatógenosaunapoblación.Estoesunproblemaparalosanimalesqueseencuentranbajolas"BUENASPRÁCTICAS"oen"AISLAMIENTO"".Esdesconocidohastaquépuntolosproductosalimenticiospuedenserunafuentedeagentespatógenosanfibios.Lomásprobableesquelosproductosalimenticiosactúensolocomovectoresmecánicosparalatransmisióndeenfermedades(porejemplo,losinsectosoinvertebradosacuáticosatrapadosenlanaturalezausadoscomoalimentoestánmojadosyllevanconsigoaguaconzoosporasinfecciosasdelhongoquítridoalainstalacióncautiva)envezserinfectadosporestospatógenosyservircomofuentesdeinfecciónalargoplazoparalaspoblacionesanfibias(Rowleyycolaboradores,2007).Unafuentelimpia,confiableydeconfianzadeproductosalimenticiosesidealparatodaslasinstalacionesquealberganaanfibioscautivos.

• Cuandoseaposible,losproductosalimenticiosinvertebradosdebensercultivadosinsituenlainstalaciónparaanfibios.Losproductosalimenticiosacuáticos(porejemplo,dafniaoartemia)deberíansercriadosdesdeelhuevosiesposible.

• Silosproductosalimenticiossoncompradosaunproveedorcomercial,lainstalaciónparaanfibiosdebeasegurarsedequeseusenlasprácticasparareducirlosriesgosdeenfermedades.Idealmente,losproductosalimenticiosdeberíansercriadospuertasadentro,sinestarexpuestosaloselementos,aanfibiosdecualquiertipo(silvestresocautivos)oainsectossilvestres.Lainstalacióndelproveedordebeestarlimpiayestadebeusarmaterialesdealtacalidad.

• Existenposiblesbeneficiosalalimentaralosanfibioscautivosconproductosalimenticiosatrapadosenlanaturaleza,porejemplo,estosproductosposeenmásnutrientesosatisfacenlosrequerimientosypreferenciasdeladietadelaespecieanfibia.Estosbeneficiosdebenserconsideradosjuntoalosriesgosdeenfermedadescuandosetomendecisionesrespectoaunapoblacióncautiva.Losanimalesbajo"AISLAMIENTO"nodebenseralimentadosconproductosalimenticios


capturadosnaturalmentefueradesudistribuciónnativa(porejemplo,ranasdePanamáenunapoblaciónderesguardoenlosEstadosUnidosnodebenseralimentadasconinsectossilvestresdelosEstadosUnidos).

• Sisevaaalimentaralosanfibioscautivosconproductosalimenticioscapturadosenlanaturaleza,losproductossolodebenserrecolectadosdeáreasqueesténlibresdepesticidasuotrosquímicos.Algunospesticidaspuedencontinuarenelmedioambienteporvariosaños,porloqueesrecomendadocomoreglageneralquelosinsectosparaalimentoseanrecolectadosaporlomenos0.5kmdedistanciadecualquieráreaenlaquesehayanusadopesticidasenlosúltimos3años.

• Losproductosalimenticioscapturadosenlanaturalezanodebenserrecolectadosdeubicacionesenlasquesesabequehayunbrotedeenfermedadesinfecciosasanfibias,porejemplo,nodeberecolectarinvertebradosacuáticosdearroyosenloscualeslosanfibiosesténmuriendodequitridiomicosis.

4.18DISEÑODELAINSTALACIÓNYESPECIFICACIONESDELEDIFICIO Losanfibiostienenrequerimientosespecialesrespectoalossistemasdeaguayfiltración,controlclimáticoeiluminaciónquesonesencialesparalasaludgeneraldelosanimalesylasposibilidadesdeéxitoenelapareamientodecoloniasencautiverio.Recientementehansidopublicadosresúmenescompletosacercadeldiseñoylosestándareszootécnicosdelasinstalacionesparaanfibios;serecomiendaconsultarestosrecursosalmomentodediseñarorenovarunainstalación(Browneycolaboradores,2007;PramukyGagliardo,2008). Loselementosimportantesparalabioseguridadeneldiseñodelasinstalacionesseresaltanabajo:

• Lasinstalacionesdebenserapruebadeplagas.Lasplagassilvestresenlibertad(porejemplo,cucarachas,hormigasoroedores)puedenaparecerencualquierinstalaciónparaanfibioscautivos.Algunosdelospeligrosquecausanestasplagasson:dañodirectoomuertedelosanfibios;ladestrucciónderecintos,loquepermiteelescapedelosanfibios;ylatransmisióndeagentespatógenosdeanfibios(yaseaentreanfibiosdentrodelainstalaciónohaciaanfibiossilvestresfueradelainstalación).Algunasdelasfuncioneseneldiseñodeinstalacionesparaminimizarriesgosson:apretarysellarjuntasdepuertasyventanas,puertasquesecierrenautomáticamenteenlashabitacionesparaanfibios;pantallasenlosdrenajesdelossuelos;yagregardeflectoresalasunidadesdeaireacondicionado.Elusodemétodosfísicosparaelcontroldeplagasdentrodelasinstalaciones,porejemplo,trampasparainsectosyadhesivoparamoscas.Sedebenevitarlosmétodosquímicosparaelcontroldeplagasporelriesgodeenvenenaralosanfibiosdelainstalación.

• Lasinstalacionesdebenserapruebadeanfibios.Lasinstalacionesyrecintosdebenserdiseñadosparaprevenirelescapedeanfibioscautivosyprevenirlaentradadeanfibiossilvestresajenosalainstalación.Estoesimportantesobretodopara


anfibiosbajonormasde"AISLAMIENTO".Elriesgoquepuedecausarestasituaciónesquelosanfibiosnonativospuedenescapardelasinstalacioneseintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosaanfibiossilvestresnativos,oquelosanfibiosnativospuedanintroducirnuevosagentespatógenosalosanfibiosnonativosdentrodelainstalación.Lasnormasde"BUENASPRÁCTICAS"dictanquelosanfibiosnativosaunasípodríanintroducirunagentepatógenoquehasidopreviamentecontroladooeliminadoenlapoblacióncautiva(porejemplo,lapoblacióncautivahasidotratadaysehaeliminadolainfeccióndelhongoquítrido,perolosanfibioslocalespodríanactuarcomounafuentedereinfecciónparalosanimalescautivos).Unejemplodehaceralainstalación"apruebadeanfibios"esagregarpantallasquecubranlosdrenajesenlashabitacionesdelosanfibios.

• Lasrutinasdecuidadozootécnicodeberíanserautomatizadas.Paraminimizarelcontactoentrecuidadoresyanimales,yreducirlaposibilidaddeerroreshumanos,serecomiendalaautomatizacióndelossistemasparadrenarrecintos,agregaraguaaestos,filtraciónyalimentaralosanimales.Laautomatizaciónesunamedidaimportantequepuedereducirelpotencialdetransmisióndeenfermedadesentrerecintos.Paralaalimentación,sepuedecolocarunembudoatravésdelacubiertadecadarecintoparapermitirelpasodelaspresasalrecintosinlanecesidaddequeloscuidadoresabranohagancontactoconlosrecintos.Elcuellodelembudodebeserlosuficientementepequeñoyestarcolocadodeformaquepermitaelescapedelosanfibios;elembudopuedetenerunatapaparaquelaspresasquevanaserdadascomoalimentonopuedanescapar.MásdetallesacercadelaautomatizacióndelasinstalacionespuedenserencontradosenelsitiowebdelCentrodeInvestigacionesdeAnfibios((/frogs.org.au/arc/features.php).

• Sistemasdedistribucióndeaire.Latransmisiónaéreadeagentespatógenosimportantesnohasidoregistradahastalafecha.AunqueelenfoquedelosesfuerzosparalabioseguridaddelasinstalacionesestáenelmovimientoylaIntroduccióndeagentespatógenosatravésdelcontactoconelpersonalzootécnico,otrosanfibios,sustratosyherramientas,elpotencialdetransmisiónaéreadepatógenosnodebesercompletamenteignorado.Eneldiseñodeinstalaciones,sonpreferibleslossistemasdedistribucióndeairequeprevenganqueelaireseaforzadoentrehabitaciones.Sedebeevitarquelashabitacionesquealberganaanimalesbajonormasde"AISLAMIENTO"compartanconductosdeaire.

• ImpermeabilidadehigieneLasinstalacionesparaanfibiossonambienteshúmedos,porlotanto,lasparedes,techosypisosdebenserimpermeables,deformaquepuedanmantenerlaintegridaddelahabitaciónoedificioyparafacilitarladesinfecciónylimpiezaregulardeaquellassuperficies.Además,lossellosayudanaprevenirlafugadedesechosanfibiosdesdelasáreasquealbergancoleccionescosmopolitasdeanimalesuotrosanfibiosdediferentesregionesgeográficashacialashabitacionesusadasparalosanimalesbajonivelesdebioseguridad"AVANZADOS".Noserecomiendaelusodetechosdecartón,yesoocelulosayaqueestosmaterialessondifícilesdedesinfectar.

• Diseñodeinstalacionesqueacomodenlosestándaresde"AISLAMIENTO".Lashabitacionesquealberganaanimalesbajolasnormasde"AISLAMIENTO"son


mejoradasdegranmaneraporcaracterísticasdediseñotalescomoantecámarasquepermitanelcambioderopaycalzadoantesdelaentradaaestas,ylainstalacióndefregaderosenlashabitacionesindividualesparaeliminarlosriesgosquesurgenconelusodefregaderoscomunales,loscualessonusadosparalimpiarherramientasymaterialesdecoleccionescosmopolitasdeanimalesodediferentesgruposdeanimalesbajonormasde"AISLAMIENTO".

4.19LITERATURACITADA

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Capítulo5:LimpiezayDesinfección—57

Capítulo5

LIMPIEZAYDESINFECCIÓN

5.0INTRODUCCIÓN Lacapacidaddelimpiarydesinfectarminuciosamenteunagranvariedaddeequipo,recintosanimales,decoracionesyamuebladodealbergues,einclusoelagua,esesencialparalograrunbuenniveldebioseguridadycontroldeenfermedadesinfecciosasenlaspoblacionesdeanfibioscautivosysilvestres.Estecapítulotratadelimpiezaydesinfección,conunénfasisenelhongoquítridoanfibioylosranavirus,sinembargo,estosconceptospuedenaplicarseaunaampliavariedaddeagentespatógenosanfibios.Algunosdelosconceptosresaltadoseneltallerson:

• Losdesinfectantessondesactivadosporlapresenciademugreomaterialesorgánicos.Porlotanto,esesenciallalimpiezaminuciosadetodoslosobjetosantesdeladesinfección

• Elmismométododedesinfecciónodesinfectantenofuncionaraparatodoslosagentespatógenosanfibios.Esnecesariaunaseleccióncuidadosadedesinfectanteparadiferentessituaciones.

• Lasconcentracionesdedesinfectantesyeltiempodecontactoconestossonimportantesparaunadesinfecciónefectiva.

• Almomentodeelegirundesinfectantesedebenconsiderarelimpactoambientalqueestetendrá(siesposible).Loscompuestosdeamoniocuaternarioymonopersulfatodepotasio(Virkon®)sonmejoresqueelhipocloritosódico(lejía).

• Lassuperficiesymaterialesdevidrioometalsonfácilesdedesinfectarcondesinfectantesquímicos.

• Losplásticosdediferentestipos(incluyendoelsilicio)sonfácilesdedesinfectar,peropuedequeabsorbanalgunosquímicosdeldesinfectante(porejemplo,químicosaromáticos,solventes)ydeestemodologranqueelrecintoensísevuelvatóxico.Esteproblemaescasisiempresubestimado.

• Losmaterialesnaturalescomorocas,maderaoplantasdeshidratadassondifícilesdedesinfectar.Laaplicacióndecalorpuedeserlomásefectivo.

• Lasplantasvivastambiénsondifícilesdedesinfectar.Laseleccióncuidadosadelasplantas,removerlatierrayladesinfecciónquímicaofísicasuavepuedereducirlosriesgos.

• Algunosmétodosparaladesinfeccióndeaguaincluyencalor,filtración,desinfecciónquímicauozonificación.


Delosdesinfectantesdisponibles:

• Elhipocloritosódico(lejía,cloro),compuestosdeamoniocuaternarioymonopersulfatodepotasio(Virkon®)hansidoefectivosenexperimentoscontraelhongoquítridodeanfibios(Batrachochytriumdendrobatidis).Sinembargo,elhipocloritosódicodebeusarseenconcentracioneselevadas.Loscompuestosdeamoniocuaternariosonventajososporquesonefectivosenconcentracionesbajas.ElhongoquítridoesvulnerableanivelesrelativamentebajosdecaloryelBatrachochytriumdendrobatidisesvulnerablealsecadocompleto(desecación).

• Elmonopersulfatodepotasio(Virkon®),elhipocloritosódicoylaclorhexidinahansidoefectivosenexperimentoscontralosranavirus.Sinembargo,losexperimentossolohansidoexitososenmaterialeshúmedosoencultivoscelulares.Puedequeestosvirusseanalgoresistentesaladesinfecciónensuperficiessecas(losestudiossonlimitados).

• NohayestudiospublicadosacercadelaeficaciadediferentesdesinfectantesparamataralBatrachochytriumsalamandrivorans(Bsalporsussiglaseninglés).

5.1PRINCIPIOSDELIMPIEZAYDESINFECCIÓN Tenerestándaresaltosenlosprincipiosdelimpiezaydesinfecciónesvitalparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasenlaspoblacionescautivasanfibiasyparaimplementardemaneraexitosaprácticasdebioseguridad.Eldiseñodeunprotocolodedesinfecciónapropiadorequiereelentendimientodelaspropiedadesdelosdesinfectantesylosagentespatógenosatratar,yconsideracionesprácticasdelosequipos,instalacionesoprocesosquerequierandesinfección.Asícomoesimportantecomprenderlaeficaciadelosvariadosprocesosdedesinfección,tambiénesimportanteconsiderarlaseguridaddelosprotocolosdedesinfecciónhaciaelmedioambienteylosanfibios.

Estassonalgunasdefinicionesútilesparalostérminosutilizadosenestecapítulo:

• Limpieza:Laremociónfísicadetodoslosdesechosorgánicosoinorgánicosvisiblesdeobjetos,talescomotierraomateriasfecales(KastyHanna,2008).

• Desinfección:Unprocesofísico(porejemplo,luzUV)oquímico(porejemplo,blanqueadorconcloro)parareducirelnúmeroylaviabilidaddelosmicroorganismos(porejemplo,bacterias,hongosovirus)deunobjeto,superficieomaterial.

• Esterilización:Unprocesofísicooquímicoqueremuevetodoslosmicroorganismosdelosobjetos,superficiesomateriales.


Unalimpiezaydesinfecciónexhaustivasreducenlamayoríadelosriesgosdetransferiragentespatógenosanfibios.Laesterilizacióndelosobjetosesunalaborintensivaypocoprácticaalmomentodellevaracaborutinas.Laspautasdisponiblesparalalimpiezaydesinfeccióndeinstalacionescomercialesdeacuiculturatambiénpuedenseraplicadasalasinstalacionesparaanfibios,especialmenteenlasinstalacionesdeproducciónenmasaycultivodeanfibios.ElManualdePruebasdeDiagnósticoparaAnimalesAcuáticosdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)tieneunabrevedescripcióndelosmétodosdedesinfecciónenlaacuicultura:www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf

Limpieza

Elactodelimpiarensínosignificaqueunobjetoquedelibredepatógenosquepuedancausarenfermedadesanfibias,sinembargo,esextremadamenteimportantelimpiarminuciosamentelosobjetosantesdesudesinfecciónoesterilización.

• Unalimpiezacompletaremuevefísicamentemuchosolamayoríadelosagentespatógenosatrapadosenlosdesechosorgánicos.Alreducirelnúmerodepatógenosenunobjetoelprocesodedesinfeccióntienemásposibilidadesdeserexitoso.Lalimpiezatambiénpermitequelosdesinfectanteshagancontactodirectoconlassuperficiesdeunobjeto.

• Muchosdesinfectantessondesactivadosporlapresenciadematerialesorgánicos.Porlotanto,paraqueelprocesodedesinfecciónseaexitoso,losobjetosprimerodebenserlimpiadosminuciosamente.

• Elcaloroelaguacalientefacilitanlahabilidadderemovermaterialesorgánicosdelosobjetos.

• Sedeberíallevaracabounalimpiezageneraldetodoslosobjetosutilizadosenelcuidadozootécnicodelosanfibiosdeformaregular.Lalimpiezasecomplementaconelusodedetergentesqueaflojenelmaterialorgánicodelasuperficiedelosobjetosyqueayudenaromperlasbiopelículasdemicroorganismosqueseresistanaladesinfección.Elenjuagueminuciosodelosobjetospararemovereldetergenteesesencialdespuésdelalimpiezadeestos.

Desinfección

Lalimpiezaydesinfecciónposteriordeunobjetopormediodelaaplicacióndeunagentequímicoreduceelnúmeroylaviabilidaddelosagentespatógenoshastaelpuntoenqueestosyanopodríanactuarcomofuentedeinfección.Eldesinfectanteaelegirparasuusoenunainstalaciónparaanfibiosdependede:

• Laeficaciadeldesinfectanteyeltipodeagentespatógenosquedebensereliminados.Porejemplo,algunosmicroorganismostalescomoelMycobacteriumspp.oelCryptosporidiumspp.sonmuyresistentesalamayoríadelosdesinfectantescomunes.


• Elpotencialdetoxicidadhacialosanfibiosqueseencuentranexpuestosaldesinfectante.Losanfibiossonmuysensiblesalosresiduosquedejanlosdesinfectantes,porloqueserequiereunenjuagueminuciosodetodoslosdesinfectantesdespuésdesuuso.

• Laspreocupacionesacercadelaexposiciónhumanaalosdesinfectantesyladescargadeestosalmedioambiente.

• Laseguridadparausoendiferentesmateriales.Algunosdesinfectantespuedensercorrosivosparalasherramientasomaterialesusadosenlasinstalacionesparaanfibios.

• Facilidaddeusoyeliminación.• Costo.

5.2DESINFECTANTESQUÍMICOS Hayunagranvariedaddedesinfectantesquímicosdisponiblesparausoenlasinstalacionesdecautiverioanfibioyenelcampo.Cadadesinfectantetienesuspropiasventajasydesventajas.Muchosdesinfectantessondesactivadosporlapresenciadematerialesorgánicos,porloqueunalimpiezaminuciosadelassuperficiesesnecesariaantesdesuuso.Hasidosugeridoelusodeconcentracionesmáselevadasdedesinfectantesqueaquellasdeterminadascomoefectivascontraagentespatógenosanfibiosespecíficosenloslaboratorios,estoesenparteparasuperarlosproblemasasociadosalosresiduosdematerialorgánico(sobretodoensituacionesrealesdeterreno)(Webbycolaboradores,2007). Eltiempodecontactoylaconcentracióndelosdesinfectantessoncríticosparalaeficaciadeunrégimendedesinfecciónquímica.Lostiemposdecontactorecomendadosparavariosdesinfectantesvaríandependiendodelaconcentraciónusadaydelosagentespatógenosespecíficosquenecesitaneliminarse.Porejemplo,unasolucióndeun1%dehipocloritosódicoeliminaraalhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisennomásde1minutodecontacto,mientrasqueunasoluciónde0,4%dehipocloritosódicorequierealmenos10minutosdetiempodecontacto(Johnsonycolaboradores,2003).Recomendacionesyefectividadinvitrodevariosdesinfectantessonresumidasenunatablaalfinaldeestecapítulo.

Lejía(Cloro) Elcloro,máscomúnensuformahipoclorada,eselingredienteactivodelalejíausadaenelhogar.Elcloroesundesinfectantemuyefectivoparalasbacterias,hongos(incluyendoelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis)ymuchosvirus(incluyendolosranavirus).Laspropiedadesdeldesinfectantesevenpotenciadassiseaplicaensuperficieslimpiadasminuciosamenteyconaguatibia.Lasventajasdelalejíacomodesinfectanteson:

• Estaseencuentraampliamentedisponible.• Tieneunbajocosto.


• EsefectivaenconcentracionesrelativamenteelevadascontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus(Langdon,1989;Johnsonycolaboradores,2003;Bryanycolaboradores,2009).

Lasdesventajasdelalejíacomodesinfectanteson:

• Losmaterialesorgánicosladesactivanfácilmente,porejemplo,latierra.• Escorrosivaparametales,telasysellantesdesilicona,sobretodoen

concentracioneselevadas.• Puedequelalejíaseadañinaparalosambientesacuáticos(Webby

colaboradores,2007;Schmidtycolaboradores,2009).• Elcloroesmuyirritanteparalosanfibiosyotrosorganismosacuáticos,yen

niveleselevadospuedecausartoxicosisomuerte(WrightyWhitaker,2001).Esnecesarioenjuagarminuciosamentelosobjetosdespuésdeladesinfección.Sedebeevitarexponeralosanimalesalosgasesdecloroduranteladesinfección.

• Puedenoserefectivacontralosranavirusensuperficiessecas(Langdon,1989).Notaimportante:Laconcentracióndehipocloritosódicoenlalejíadeusohogareñovaríaentrelosproductosdisponiblesenelcomercio(Entre4%y6%dehipocloritosódicoenlamayoríadelosproductos).Además,losproductosdehipocloritodecalcioydesodioconcentrados(Contienenhastaun12%dehipoclorito)estándisponiblesparasuusoenpiscinasuotroslugaresconvolúmenesaltosdeagua.Paradeterminarlacantidaddelejíaquesedebeusarparalograrlosnivelesapropiadosdedesinfección,esimportantedeterminarsilaconcentraciónrecomendadaenunapublicaciónserefierealproductodelejía,alcontenidodehipocloritosódicodelproductooelingredienteactivosdeeste(cloro).

• Lamayoríadelaspublicacionesquedescribenrecomendacionesparadesinfectaragentespatógenosanfibiosserefierenalaconcentracióndehipocloritosódico.

• Porejemplo,unaconcentracióndeun1%dehipocloritosódicohademostradoeliminaralhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisconuncontactomínimode1minuto(Johnsonycolaboradores,2003).Paracrearunasolucióndeun1%dehipocloritosódico,solosenecesitalejíadeusohogareñoconuncontenidode4%dehipocloritosódico,entoncessepuedecrearunadiluciónde1partedelejíay3partesdeagua.

• Encontraste,unasolucióndeun1%delamismalejíadeusohogareñosepuedeobtenerhaciendounadiluciónde1partedelejíay99partesdeagua,locualdacomoresultadounaconcentraciónde0.04%dehipocloritosódico,lacualesinefectivaencontradelhongoquítridoBatrachochytriumdendrobatidis.


Compuestosdeamoniocuaternario(QAC,porsussiglaseninglés) LosQACsonungrupograndededesinfectantesconpropiedadesantibacteriales,antimicóticasyantiviralescomúnmenteusadosenelmanejodeanimales.Algunosejemplosdeestossonelclorurodebenzalconioyelclorurodedidecildimetilamonio(DDAC,porsussiglaseningles).LasventajasdelosQACson:

• Sonmenosirritantesyrelativamentenotóxicosencomparaciónconelcloro.• Sonbiodegradablesynocausantantodañoalmedioambienteenbajas

concentraciones.• Nosoncorrosivosparametales,telasyotrosmaterialesutilizadosenlosrecintos

paraanfibios.• Sonefectivos,enbajasconcentraciones,contraelhongoquítridoanfibio

Batrachochytriumdendrobatidis.Estoesútilparaeltrabajodecampo,yaquepermitequepequeñosvolúmenesdereservasdesolucionesseantransportadosaubicacionesremotas(Johnsonycolaboradores,2003;Webbycolaboradores,2007).

• Sonbaratosybuenosparalalimpiezageneraldesuperficieseinstalaciones.LasdesventajasdelosQACson:

• Puedenserdesactivadosporresiduosdejabónymaterialesorgánicos,porejemplo,tierra.

• LaeficaciadelosQACcontralosranavirusnosehadeterminado(aunqueestossisonefectivoscontraotrosvirusADN,talescomolosherpervirus).

AlgunosejemplosdeproductosQACson:

• Path-X®• QAC128®• F10SúperConcentradoDesinfectante®• TriGene®• Roccal®

MonopersulfatodePotasio(Virkon®)

VirkonS®yVirkonacuático®(AntecInternational/DuPont)sondesinfectantesdeespectroamplioeficacescontramuchasbacterias,virusyhongos.LasventajasdelVirkon®son:

• EsefectivocontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus(Johnsonycolaboradores,2003;Bryanycolaboradores,2009).


• Presentamenosproblemasdetoxicidadambientaloaanfibios(Schmidtycolaboradores,2009).Aunquelaseguridaddelosanfibiosrequiereinvestigacionesadicionales(Bryanycolaboradores,2009).

• Noescorrosivoparamaterialesoirritanteparalapielhumanasiseusalaconcentraciónrecomendadadeun1%.

• Esmásefectivoquelalejíaenlapresenciadematerialesorgánicos.

Clorhexidina(Nolvasan®) Nolvasan®(FortDodgeAnimalHealth)esundesinfectantecomúnutilizadoenhospitalesveterinariosquetieneactividadantibacterial,antimicóticayantiviral.LaventajadeNolvasan®es:

• Actividadcontralosranavirus(Bryanycolaboradores,2009).LadesventajadeNolvasan®es:

• Eficaciacontraelhongoquítridoanfibiodesconocida.Senecesitanestudiosexperimentales.

Etanol

Eletanol(70%)esútilparaladesinfeccióndeequipoeinstrumentosusadosenlagestióndeanfibios.Noserecomiendasuusoenrecintosparaanimalesoenequiposgrandes.

• EsefectivocontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus(Johnsonycolaboradores,2003;Langdon,1989).Lainformaciónexperimentalrelacionadaalosranavirusestábasadaenuncontactode2horas.

Ozono

Elozonoesunfuerteoxidanteconconocidaspropiedadesantibacterialesyantivirales.Tieneunhistorialdeusoparaladesinfeccióndeaguasresidualesenlaacuiculturacomercial(Schuur,2003;yelManualdePruebasdeDiagnósticoparalosAnimalesAcuáticosdelaOIEwww.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf)yprobablementetendráaplicacionesenlasinstalacionesquedebantrataraguasresidualesdeanfibios(vealasección4.13).Nohasidoprobadoespecíficamenteparamedirsuactividadcontraelhongoquítridoanfibioolosranavirus.

Otrosdesinfectantes Otrosdesinfectantesquímicoshansidodescritosparasuusocontraagentespatógenosanfibiosespecíficososonusadoscomúnmenteenlaacuiculturacomercialuotrosparámetroszootécnicos.


• Povidonayodada:Unantisépticotópicoutilizadocomúnmente-Betadine®

Contieneun10%depovidonayodada,loqueesequivalenteaun1%delyododisponible(Webbycolaboradores2007).Esteproductoespotencialmentetóxicoparaanfibiosynoserecomiendasuusogeneralizadoenelcuidadozootécnicodeanfibios.

• Elpermanganatopotásico,elclorurosódicoyelformaldehído,sonproductoscomúnmenteusadosenlaacuiculturaporsuspropiedadesantimicrobianas.Aunqueestosestánampliamentedisponiblesysonbaratos,sonpotencialmentetóxicosycorrosivos,ynoserecomiendasuusogeneralenelmanejodeanfibios.

• Desinfectantesfenólicos:Conservanmásactividadenambientescontaminadosconmaterialesorgánicos,porloquepuedenserútilesparadiferentesaplicaciones,comoparabañosdesinfectantesparapies.Puedesermuyirritanteparalapielperotieneimplicacionesambientalessignificativas.

5.3MÉTODOSDEDESINFECCIÓNNOQUÍMICOS

Calor Laaplicacióndecaloresútilparaladesinfeccióndeobjetos,materialesdelsubstratoorgánicosyagua(aguasentrantesyresiduales)eninstalacionesparaanfibios.Lascombinacionesdecalorypresión(porejemplo,desinfecciónenautoclaveuollaapresión)sonbuenasparalaesterilizacióndematerialesantesdesuusoenunainstalaciónoantesdelaeliminaciónderesiduossólidoscontaminados. Loshongosquítridosanfibiossonaltamentevulnerablesatemperaturasmoderadamenteelevadas.Porejemplo,laexposicióndecultivospurosdeBatrachochytriumdendrobatidisaunatemperaturade32oC(89.6oF)resultóenlamuertedelhongoalas96horasdeexposición.Laexposicióna47oC(116oF)resultóenlamuertedelhongoen30minutosdeexposición(Johnsonycolaboradores,2003).ElBatrachochytriumsalamandrivoranstieneunapreferenciatérmicamásbajaqueBatrachochytriumdendrobatidis.Enunentornodelaboratorio,elBatrachochytriumsalamandrivoransmuerecontemperaturasmayoresa25°C(77.0oF)(Martelycolaboradores,2013).Elevarlastemperaturasambientalesaestosnivelespuedeserútilparaeliminarestehongodematerialestalescomoplantasuotrosobjetosdifícilesdedesinfectar.Laelevacióndelatemperaturaambientaltambiénhasidosugeridacomounmétododetratamientoparaanfibiosquepuedentolerartemperaturasambientalesmáselevadas.UnestudioúnicoexaminóelefectodelcalorencultivoscelularesqueconteníanelranavirusEHNVenpeces(Langdon,1989).Laexposicióna40oC(104oF)matóalvirusalas24horas.Laexposicióna60oC(140oF)matóalvirusen15minutos.

Desecación ElhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisesvulnerablealsecadocompleto(desecación).Lamuertedelhongoocurriódespuésde3horas(Johnsonycolaboradores,2003).Sesabequeelhongopuedemantenerseviableen


aguaesterilizadadelallaveodesionizadaalomenospor3o4semanasy7semanasenaguadelago(JohnsonySpeare,2003). Brunnerycolaboradores(2007)señalaronqueladesecacióna20oCpor4díasdesactivaalranavirusATVensustratosdeestanquenaturales,perosielbarropermanecehúmedoelvirussigueactivo.Sisellevanestoshallazgosalarealidaddeanimalesencautiverio,sepuedeapreciarlaimportanciadeladesecaciónabsolutadelossustratos,mobiliarioorecintos,talvez,porperíodosde2semanasomás. NoexistenestudiopublicadosacercadelefectodeladesecaciónenelBatrachochytriumsalamandrivorans.

Luzultravioleta Laexposiciónaluzultravioletahasidoutilizadaparadesinfectarelaguadesistemasacuáticosysesabequeestaposeeactividadcontrabacteriaymuchosvirus.

• Laluzultravioletaa1000mW/m2yunalongituddeondade254nmnofueefectivacontracultivosvivosdelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisenlaboratorio(Johnsonycolaboradores,2003).Suefectoenzoosporasdenadolibreenelaguaesdesconocido.NosedebedependerdelaluzUVparaladesinfeccióndelaguacontrazoosporasBdhastaquesehayanllevadoacabolosexperimentosapropiados.

• Laluzultravioletaa2,6x104μW.sec/cm2conunafluidezde5000L/hfueefectivacontraeliridovirusBohle(Ranavirus)delasranas(Miocevicycolaboradores,1993).

5.4LIMPIEZAYDESINFECCIÓNDELOSRECINTOSPARAANIMALES Loshorariosdelimpiezadelosrecintosparaanfibiosvariarandependiendodelaespecie,elnúmerodeanimalesalojadosenelrecinto,eltipoderecinto,lostiposdesustratosutilizados,yelusodesistemasdefiltración.

• Sedebenllevaracabolimpiezaslocalizadasdiarias,removiendolashecesyalimentossinconsumiralavista,estoesefectivoparareducirlanecesidaddelimpiezascompletasfrecuentesoeldeteriorodelosrecintos.

• Unenjuagueconaguadiariodelsustrato(dondeseaaplicable)debellevarseacaboentodaslasorecintos.

• Lossustratosdesechablescomolastoallasdepapelopulpadepapeldebensercambiadosfrecuentemente(todoslosdíasoregularmente)parareducirlaacumulaciónpotencialdelosdesechosorgánicosydeciertosagentespatógenoscomolosnemátodosrabditiformes.

• Lossustratosreutilizablesquepuedanserdesinfectadosfácilmente,comolagomaespumanaturaloelAstroturf®tambiéndeberíanserlimpiadosdiariamente.Tenerconjuntosigualesdeestosobjetossimplificaraestatarea.Elconjuntosuciopuedeserdesinfectadoquímicamente,enjuagado,secadoyestarlistoparasuusoeldíasiguiente.


• Lossustratosorgánicoscomoelmusgosphangnum,laturba,lacáscaradecococomprimidaylossustratoshechosdetierradeberíaneliminarsedespuésdeusoynoserreutilizadosenotrorecinto.

• Lafrecuenciadeloscambiosdeaguadependedelahistorianaturaldelaespecieenparticularydeltipodesistemautilizado.SedebenllevaracabopruebasdeaguaparadetectarlosvaloresdepH,amoniacoynitrato,yaqueestossonparámetrosimportantesquesedebenmonitorearparamuchasespeciesacuáticas,ypuedenayudaradeterminarlanecesidaddehacercambiosparcialescompletosenelagua(Browneycolaboradores,2007;PramukyGagliardo,2008).

• Otrofactoratomarencuentaparadeterminarunhorariodelimpiezaessihainiciadolareproducción.Elacondicionamientodealgunasespeciespuederequerirunprocesodeestivación.Algunasespeciessonmenosaptasparaelapareamientosisesienteninquietas.Estosyotrosrequerimientosespecíficosdelasespeciesdebenserconsideradoseneltipoyfrecuenciadelmantenimientodeunacolecciónanfibia.

Ladesinfeccióndelosrecintosparaanimalessellevaacabo:

• Cuandosellevenacaboloscambiosperiódicosdesustratos.• Comopartedeunenfoqueparacontrolarelbrotedeunaenfermedadinfecciosa

enunapoblacióncautiva.Porejemplo,sihayunbrotedequitridiomicosis,esimportanteeliminaralhongoquítridodelosrecintosytambiéntrataralosanimalesenfermos.

• Antesdequerecintospreviamenteutilizadosseanreutilizadosporanimalesdiferentes.

Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.Lassuperficiesdelosrecintossonminuciosamenteenjuagadasparaeliminarlosrestosdedesinfectantesynoexponeralosanfibiosalosquímicosdelosdesinfectantes.5.5DESINFECCIÓNDEEQUIPOYHERRAMIENTASLasherramientasyelequiposonlimpiadosydesinfectadosdespuésdesuusoentrediferentesrecintos(porejemplo,unaredutilizadaenelRecintoAdebeserdesinfectadaantesdeusarlaenelRecientoB).Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.

• Tenervariosjuegosdeequipoesútilparalaeficaciadelflujodetrabajo(porejemplo,puedeusarunjuegomientraselotroestáenuso).


• Paralascoleccionesquellevanbastantetiempoestablecidasyquenotienenproblemasdeenfermedadesinfecciosasencurso,puedebastarconlavarminuciosamentelosinstrumentosoherramientasentrerecintosdiferentes.Sinembargo,existeelriesgodetransmitiragentespatógenosdesconocidosentrediferentesrecintos.

• Lashabitacionesdeaislamientoalargoplazoparalosanimalesbajoelniveldebioseguridadde"AISLAMIENTO"debentenerconjuntosdedicadosdeequipo(porejemplo,redes,fórceps,tubosdesucción,cepillosparafregar,esponjas,etc.).Elequiponuncadebesersacadodelahabitaciónindividualdeaislamientoynuncadebeserusadoenungrupodiferentedeanimales.Sielequipoorecintosdelashabitacionesdebioseguridadde"AISLAMIENTO"debenserlimpiadosydesinfectadosenunlugarofregaderoquetambiénesusadoconelmismopropósitoparaanimalesenunniveldebioseguridaddiferente(porejemplo,bioseguridadde"BUENASPRÁCTICAS"),ellugarofregaderoprimerodebeserminuciosamentedesinfectado(veaelcapítulo4).

Antesdeladesinfecciónesesencialunalimpiezacompletapararemoverlamateriaorgánicadelequipoylasherramientas.Lassuperficiesdelosrecintosdebenserminuciosamenteenjuagadasparaeliminarlosrestosdedesinfectantesynoexponeralosanfibiosalosquímicosdelosdesinfectantes.5.6DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDESUSTRATOSYAMUEBLADODERECINTOS

Existeunagranvariedaddesustratosyamuebladopararecintosqueseutilizanenlosrecintosparaanfibioscautivos,ycadaunorequierediferentesmétodosparadesinfectarse.Comoseseñalóanteriormente,unalimpiezacompletayremoverelmaterialorgánicoesnecesarioparaunadesinfecciónefectiva.

Sustratosyamuebladosderecintoshechosdeplástico,vidrioometal: Estosmaterialessonfácilesdelimpiarydesinfectarsiseusanmétodosquímicos.Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.Sustratoshechosdematerialesorgánicosonaturales: Losmaterialesorgánicosonaturalestalescomorocas,madera,omaterialesdeplantasdeshidratadasomuertas(porejemplo,musgosphangnumocortezadecoco)odeplantasvivas,frecuentementesoncomponentesesencialesdelosrecintosparaanfibios,perosondifícilesdedesinfectaradecuadamente.Pautasparaladesinfeccióndeplantasvivassoncubiertosenlasección5.7.

• Lossustratosorgánicoscomoelmusgosphangnum,turba,cáscaradecococomprimida,tierra,ylossustratosdecerámicaypiedracomolagravilla,piedrasderiachuelo,arenayagregadosligerosdearcillaexpandida(LECA,porsussiglas


eninglés)puedenserdesinfectadosoesterilizadosusandountratamientodecalorantesdesuusoenunrecinto.Puedeencontrarunarevisióndeestetemaenelsiguientedocumentoweb:http://www.colostate.edu/Dept/CoopExt/4dmg/Soil/sterile.htm

Delmismodocumentosehanreimpreso2métodosefectivosparalaesterilizaciónporcalorusandohornosmicroondas:

1.Llenecontenedoresdeplásticolimpiosde1litroaproximadamentecontierramuyhúmeda,perlitaouncaldodecultivodeesquejes.Reviselosbordesdeloscontenedoresparaverificarquenohayaaluminiodeningúntipo,yaquealgunoscontenedores,comoporejemplolosdedeyogurt,vienenconunsellodealuminio.Paraesterilizartierrausecontenedoresdeplásticolimpiosconlastapaspuestas.Debeusarunasondadetemperaturadentrodeunhornomicroondasdetipo"carrusel",debeponerlatemperaturadelhornoa200°Fymantenerlaconelprogramadigitaldelhornopor20minutos.Hagaunagujeroatravésdelastapasdeplásticoconunclavoparaqueseventileelvapor.Lasondadetemperaturavametidaamediasenlatierraporelagujeroenunodeloscontenedores.Enunmicroondasgrandesepuedenesterilizarhasta7contenedoresalmismotiempo,locualhacequeestemétodoseamuyeficienteparaesterilizarlatierraporcalor.Dejequeelcontenedorseenfríeytapeelagujeroparamantenerloestérilhastasuuso.

2.Pongaaproximadamente2libras(1kgaprox.)detierrahúmedaenunabolsadepolipropileno.Dejelapartesuperiorabiertaycolóquelaenelcentrodeunhornomicroondas.Dejepor2minutosymedioatodapotenciade650wattsaproximadamente.Después,cierrelabolsaypermitaquelatierraseenfriéantesderemoverla.

• Lasramas,lamaderayloscorchosdeárbolesdemaderadurasonmaterialesporososdifícilesdedesinfectar.Paraminimizarelriesgodeenfermedadesdeestosmaterialesdebe:

o Considerarlafuentedelosmaterialesantesdeincorporarlosalosrecintosparaanfibios.Evitarrecolectarmaterialesdeáreasqueseencuentranexpuestasaanfibiosnativosoáreasdelasquesesabequeestánpasandoporunbrotedeenfermedadesanfibias.

o Laaplicaciónlevedecaloresútilparaeliminaralhongoquítridodeanfibios(vealasección5.3).Paraobjetosmáspequeños,puedenserútileselautoclaveolaesterilizaciónporcalorenmicroondasparasustratosquesedescribieronmásarriba.

o Laveenaguatibiaocalientepararemovercuantatierraseaposible.Eviteusardetergentesojabonesenmaterialesporosos.

o Puedeconsiderarusarunasolucióndelejíadiluida(de0.4%dehipocloritosódico)paradesinfectardespuésdellavado.Losobjetosdebenserenjuagadosminuciosamentedespuésdeladesinfeccióny


debensecarseporvariosdíasantesdesuusoparaasegurarsedequelosanfibiosnoesténexpuestosaresiduosdecloro.

• Enalgunoscasos,noesterilizarlossustratospuedepresentarventajas.Porejemplo,lahojarascapuedeserunafuentedepresasmicroscópicasesencialesparaeléxitodelmanejodeunaespecieencautiverio.Elriesgodeenfermedadesdebeserconsideradocasoporcaso.

5.7DESINFECCIÓNDEPLANTASVIVAS Lasplantasvivaspuedenseruncomponentemuyimportantedelosrecintosparaanfibioscautivos.Comosedescribióarribaparaotrossustratosymobiliariopararecintos,sedebetenerconsideracióncuidadosadelorigendelasplantasvivasparareducirlosriesgosdeenfermedades.Laseleccióndeplantasdesdeelpuntodevistadelabioseguridaddelasinstalacionesparaanfibios(sobretodoparaanfibiosbajoelniveldebioseguridad"AISLAMIENTO")esdiscutidaenlasección4.13.Algunasdelasestrategiasparaladesinfecciónylareducciónderiesgodeenfermedadesson:

• Lasplantasdebenserremovidasdesusmacetas.Enjuaguelasraícesconaguafrescalimpiapararemoverlatierra.Enjuaguelasplantaspararemoversuciedadocontaminantesdelasuperficiedelostallosylashojas.Lasplantaspuedensertransferidasanuevoscontenedorescontierraestéril.Muchasplantaspuedenserarraigadasycultivadaspormedioshidropónicos(enagua),locualesunmétodopreferiblesisepuedeaplicar.

• Silapreocupaciónprincipaleselhongoquítridoanfibio,laaplicacióndeunacantidaddecalorquenosealetalparalasplantaspuedeserutilizadaparaunadesinfecciónselectiva(vervealasección5.3arriba).

• Enjuaguelasplantasenunasolucióndelejíadiluida(0,4%dehipocloritosódico),mojándolaspornomásde10a15minutos.Diferentesplantasreaccionarándediferentesformasyalgunasnosobreviviráneltratamiento.Porejemplo,lasaráceasrobustascomoelpothos(Epipremnumspp.)yPhilodendroncordatumtendránmejoresresultadosquelasbegonias,helechosyotrasplantascontallosuhojasdelicados.

• Cuandoseaposible,consigasusplantasconcultivadoreslocalesparaminimizarelriesgodeintroduciragentespatógenosnonativos(porejemplo,unainstalaciónenCostaRicadeberíausarplantasdeCostaRica,ynoplantasimportadasdelosEstadosUnidos).Uninvernaderodedicadoounainstalaciónacuáticaohidropónicaparacultivarplantasquenocontengaanfibioscriadosenlibertadesunabuenaformadereducirlosriesgosinvolucradosalusodeplantasvivas.

• Serecomiendaelusodeplantasplásticasodesedacuandoseaposible,sobretodoparalassituacionesdebioseguridadde"AISLAMIENTO".Estaspuedenserfácilmentelimpiadasydesinfectadascontratamientosquímicosodecalor.


5.8DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDELAGUA Ladesinfecciónyesterilizacióndelaguapuedesernecesariaparaasegurarsedequeelaguaentrantedeunainstalaciónestélibredeagentespatógenosanfibios,oparaasegurarsedequelasaguasresidualesquesalendeunainstalaciónnocontenganpatógenosquepuedanpresentarunriesgoparalosanfibiosnativos.Estostemassediscutenenlassecciones4.14y4.16.

• Sifueranecesario,eltratamientodeaguasresidualesdeunainstalaciónpara

anfibiospuedeserlogradopormediodelaaplicacióndecalor,ozonoocloro(Schuur;2003;Robertsonycolaboradores,2008;Krebs,2008).PautasparalasinstalacionesacuícolassonproporcionadasporlaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)(www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf).

• Paraladesinfeccióndelaguapormediodecalor,(yaseaparaaguasresidualesquesalendelainstalaciónoparaaguasentrantes)lastemperaturasrelativamentebajasde71°C(160°F)por15o20minutossonefectivascontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisyelranavirusEHNVenentornosdelaboratorio.EstastemperaturastambiénpuedenserefectivasparalosBatrachochytriumsalamandrivorans,dadasubajatoleranciatérmica,sinembargo,estonohasidoprobado.Estastemperaturaspuedennoserefectivasparalasesporasbacterianasoparatodoslosvirus.Sisedeseaesterilizaragua,senecesitantemperaturasmásaltasquesobrepasenelpuntodeebulliciónde100°C(212°F)..Calentarelaguabajopresión(desinfecciónenautoclaveousodeollaapresión)incrementalaefectividaddeladesinfección.

• Filtrarelaguaconcartuchosdefiltraciónde1micrón(1μm),loscualessonrelativamentebaratosyestándisponiblesenferreterías,esunodelosmétodosquepuedenservirpararemoverlaszoosporasdelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis.LaszoosporasmóvilesdeBatrachochytriumsalamandrivoransvaríande4a5.5μm(Martelycolaboradores,2013),porlotanto,filtrarelaguaatravésdecartuchosdefiltraciónde1micrón(1μm)eseficientepararemoverlaszoosporasdeBatrachochytriumsalamandrivorans,esto,sinembargo,nohasidoprobado.Lafiltracióndeaguanoesefectivapararemovervirus.

• Laluzultravioletapuedeserefectivapararemoverlosranavirusdelagua,perosueficaciacontraelhongoquítridodeanfibiosBatrachochytriumdendrobatidisescuestionable(vealasección5.3).

5.9DESINFECCIÓNYBIOSEGURIDADENELCAMPO Lapreocupaciónencuantoalaposibilidaddemoveragentespatógenosanfibiosanuevoslugares,comoresultadodeinvestigacionesdecampollevadasacaboenanfibiossilvestres,hallevadoalacreacióndeunacantidaddeprotocolosparareduciresteriesgo:


• Páginawebdeenfermedadesdeanfibios:www.jcu.edu.au/school/phtm/PHTM/frogs/field-hygiene.pdf

• AgenciadeproteccióndelmedioambientedelGobiernodeQueensland:www.epa.qld.gov.au/register/p02905aa.pdf

• ElCentroparaControldeEnfermedadesdeCalifornia:www.ccadc.us/docs/DeconForProfessionals.pdf

• GuíadeRecursosparaelManejodeAnfibiosdelaAsociacióndeZoológicosyAcuarios(capítulo2,porKastyHanna):www.aza.org/uploadedFiles/Conservation/Commitments_and_Impacts/Amphibian_Conservation/Amphibian_Resources/AmphibianHusbandryResourceGuide.pdf

• http://www.arguk.org/info-advice/advice-notes/324-advice-note-4-amphibian-disease-precautions-a-guide-for-uk-fieldworkers-pdf-2/file

Existenvariacionesyalgunasvecescontradiccionesentrediferentesprotocolos,sinembargo,losprincipiosbásicosdebioseguridadparabiólogostrabajandoenpoblacionesdeanfibiossilvestressonsimilaresentodoslosprotocolosquehansidorevisados.Recientementesehanvueltodisponiblespublicacionesrevisadasporexpertosqueincluyencalculadorasderiesgoparaayudaralosbiólogosenlatomadedecisionesdebioseguridad(St.Hilaireycolaboradores,2009;Phillottycolaboradores,2010).Unadeestascalculadorasderiesgoseencuentradisponibleenlínea:www.cefas.co.uk/4449.aspxUnresumendeprácticasdecamporecomendadasincluye:Definicióndelsitiodecampo: Laprimeraprecauciónparalapropagacióndeenfermedadesentrepoblacionesanfibiasesdefinircuidadosamenteelolossitiosdecampo.Losinvestigadoresdebenestablecerlímiteshechosporellosonaturalesparadefinirlossitios.Cuandoseaposible,sedebenhacerplanesconanticipaciónparatrabajaren1solositioporsalida,otenerdiferentesgrupostrabajandoencadasitioparaevitarlacontaminacióncruzada(ylatransmisióndeenfermedades)entresitios.Higieneybioseguridaddelequipoinsitu: Elusodeequipodesechablequepuedaserdescartadodespuésdesuusoenunsitiooconunsoloanfibioreduceelriesgodepropagarenfermedades.Todoelequiporeutilizable,incluyendoelcalzado,debeserdesinfectadoentresitiosoestardedicadoaunsolositio(porejemplo,comprarunpardebotasdehuleparasitioyusarlassoloensusrespectivossitios).Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.


• Elcalzadoyotroequipamientoreutilizabledeberíaestarhechodematerialesqueseanfácilesdedesinfectar(porejemplo,lasbotasdehulesonmejoresquelasbotasparacaminardecuero).

• Unalimpiezacompletadelequipoesesencialpararemoverlatierrayelmaterialorgánicoantesdeladesinfecciónenelcampo.Comoseseñalóenotrassecciones,elmaterialorgánicodesactivaelefectodemuchosdesinfectantes.Loscepillosparafregaryotrosimplementospararemovertierraysuciedaddebenserpartedelequipodecampo.Silassolucionesdedesinfectantessoncontaminadasconmaterialorgánicootierraestasdeberíansercambiadas.

• Loscompuestosdeamoniocuaternario(vealasección5.2)hansidorecomendadosparasituacionesrealesdeterrenoporquesonconcentradasy,porlotanto,fácilesdetransportaraterreno(Johnsonycolaboradores,2003;Webbycolaboradores,2007).

• Siladesinfecciónsellevaacaboenelsitio,sedebetenerencuentalatoxicidaddelosquímicoshaciaelmedioambiente.LoscompuestosdeamoniocuaternarioyVirkon®(vealasección5.2)sonopcionesmásamistosasconelmedioambientecomparadasconelcloro(Johnsonycolaboradores,2003;Webbycolaboradores,2007;Schmidtycolaboradores,2009).Silapreocupaciónprincipalsonlosranavirus,elVirkon®puedepresentarmásventajasqueloscompuestosdeamoniocuaternario(Bryanycolaboradores,2009).Lalejíaenpolvoesotraopciónqueesfácildetransportar.

• Losvehículostienenmenosposibilidadesdeserportadoresenlatransmisióndeenfermedadesqueelcalzadoyelequipodecampo,peroaunasídeberíanserdesinfectados,sobretodosiestosentraronocruzaronaunsitioquesesabeestácontaminado.Lasruedasyneumáticosdebenlimpiarsepararemovertodalatierraymaterialorgánicoydebenserdesinfectadasantesdedejarelsitio,usandoelmismodesinfectantequeseusóparadesinfectarelcalzado.Siempredeberecordardesinfectarelcalzadoantesdeentraraunvehículoparaprevenirqueagentespatógenosseantransferidosalpisoolospedales.

Manipulaciónyrecoleccióndelasmuestrasdeanfibios: Cuandoseestétratandoconanfibiosenelcampo,inclusodentrodelmismositio,sedebentomarprecaucionesparaminimizarelriesgodetransmitiragentespatógenosentreanimalesindividuales.

• Losguantesdesechablessintalcosonlamejoropciónalmomentodemanejaranfibios.Losguantescontalcodebenserenjuagadospararemovereltalco.Sedebeusarunpardeguantesnuevoparacadaanimal.Sinohayguantesdisponibles,espreferibleusarsusmanosdesnudasylavarlasdespuésdemanejaranimalesdiferentes(Mendezycolaboradores,2008).

• Elriesgodepropagacióndeenfermedadesmásgrandequepuedeocurriralmanejaranfibiosocurrecuandolosanimalessoncolocadosenunmismo


contenedorocuandoloscontenedoressonreutilizadossinantesserdesinfectados.Noreutilicelasbolsasderecolecciónyutiliceunanuevaparacadaanimal.

• Siempretratedemanejarlomenosposiblealosanimales.Losprocedimientosrápidos,inclusosisonpotencialmentepeligrosos,puedencausarmenosestrésquelosprocedimientosmáslargos.

• Losanimalessolodebenserliberadosenelsitiodecapturaycualquieranfibioqueseencuentreenfermoomuertodebeserpreservadoenunasoluciónde10%deformalinatamponadaydebenserpresentadosparaundiagnósticodeenfermedades(veaelcapítulo9).

• Losinstrumentosutilizadosparalarecoleccióndemuestrasdebenserdesinfectadosentrecadausoencadaanimal.Paralosinstrumentosquirúrgicos(porejemplo,tijeras)yelequipodepesaje,unasoluciónde70%deetanolactúadeformarápidaencontradelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis(Johnsonycolaboradores,2003).Nosesabesiel70%deetanolactúadeformarápidaenBatrachochytriumsalamandrivorans.

• Aunqueesmencionadoenalgunosprotocolosdemanejoanfibio,noserecomiendaelusodeloscompuestosabasedeyodoparaladesinfeccióndelapielantesdeprocedimientostalescomoelcortedededosolaimplantacióndemicrochips,estoporlaspreocupacionesrespectoasutoxicidad.Algunossubstitutospotencialesson0.75%declorhexidinao2mg/Ldeclorurodebenzalconio(Wright,2001).

5.10TABLADEDESINFECTANTES Esimportanterecordarquelasconcentracionesdedesinfectantesylostiemposdecontactoestablecidosenlaspruebasllevadasacaboinvitropuedennoserefectivasensituacionesprácticas,dadoquelamateriaorgánicaesperjudicialparalaeficaciadeunavariedaddedesinfectantes(Johnson,2003;Webbycolaboradores,2007).Lasrecomendacionesparaladesinfecciónencampogeneralmentesonadaptadasdelosestudiosinvitro,incrementandoarbitrariamentelasconcentracionesdelosdesinfectantesoeltiempodecontactomásalládelosnivelesinvitro.Porejemplo,Webbycolaboradores(2007)recomiendanusar2veceselmínimodelasconcentracionesinvitroparaladesinfeccióndecampo.


EstrategiasdedesinfecciónapropiadasparaeliminaralhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus:Todaslasconcentracionesytiemposdecontactosoninvitro.Informaciónderivadade(Johnsonycolaboradores,(2003),Webbycolaboradores(2007),Langdon(1989),Milosevicycolaboradores,(1993),Bryanycolaboradores,(2009)yPhillottycolaboradores,(2010).TablaadaptadadeKastyHanna(2008).

Aplicación Desinfectante Concentración Tiempodecontacto

Agentepatógenoobjetivo

Desinfeccióndeequipoquirúrgicoyotrosinstrumentos(porejemplo,básculas,pinzas)

Clorurodebenzalconio 1mg/mL 1min. Batrachochytriumdendrobatidis

Etanol 70% 1min. Batrachochytriumdendrobatidis

Etanol 70% 2hrs. Ranavirus Virkon® ® 1min. Batrachochytrium

dendrobatidisRanavirus

Clorhexidina 0.75–2% 1min. RanavirusDesinfeccióndeequipos,recintos,calzadoyvehículos

Hipocloritosódico(lejía)

1%dehipocloritosódico

1min. Batrachochytriumdendrobatidis


0.4%dehipocloritosódico

10min.(mínimo)

Batrachochytriumdendrobatidis


3%dehipocloritosódico

1min.(superficieshúmedas)

Ranavirus

Soluciónconcentradade8–12%declorurodedidecildimetilamonio(DDAC)

Diluciónde1en1000

0.5min. Batrachochytriumdendrobatidis

Trigene® Diluciónde1en5000


F10® Diluciónde1en1500


Virkon® 1%(10mg/mL) 1min. Ranavirus Clorhexidina 0.75–2% 1min. Ranavirus Secadocompleto

(desecación) >3hrs. Batrachochytrium

dendrobatidis Calor 60oC 15min. Batrachochytrium

dendrobatidis Calor 37oC(sección5.3) 4hrs. Batrachochytrium

dendrobatidis EsterilizacióndeluzUV (Vealasección5.3) Desinfectartelas(porejemplo,bolsas,ropas)

Lavadoencaliente 60oComásalto 30min. BatrachochytriumdendrobatidisRanavirus


5.11LITERATURACITADAAguirre,A.A.,andM.Lampo.2006.Protocolodebioseguridadycuarentenapara

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Cap.6:Cuarentena—78

CAPÍTULO6

CUARENTENA6.0INTRODUCCIÓN Lacuarentenadenuevos(entrantes)animalesantesdesuantesdesuintroducciónaunacoleccióndeanfibiosestablecida(porejemplo,animalesenzoológicosocoloniasderesguardoparaanfibios)esunaprácticaestándarenlasinstalacionesparaanimalesbienadministradas.Elpropósitobásicodeunprogramadecuarentenaesprevenirlatransmisióndeagentespatógenosimportantespresentesenlosanimalesentranteshacialosanimalesdelacolecciónestablecida,loscualesseencuentranlibresdepatógenos.Elprocesodecuarentenainvolucra:

• Manteneralosanimalesnuevosaisladosdelacolecciónanimalestablecida.• Adaptaralosnuevosanimalesasunuevasituaciónyprácticasdemanejo.• Evaluaramenazassanitariaspresentestantoenlosnuevosanimalescomoenlos

animalesdelacolecciónestablecida.• Mitigaroresolverlasamenazassanitariasidentificadasenlosnuevosanimales.

Estecapítuloseenfocaenlacuarentenaparalosnuevosanimalesqueentrena

coleccionesanfibiasestablecidas.Existeunconsiderablesolapamientoentrelosprocedimientosylafilosofíadelprocesodeaislamientoalargoplazoutilizadoparaanimalescautivososudescendenciaquevayanaserliberadosalanaturaleza(veaelcapítulo4).Algunasreferenciasgeneralesparaeldesarrollodeprogramasdecuarentenaanfibiason:WrightandWhitaker,2001;Lynch,2001;Ferrell,2008.6.1OBJETIVOSYDESARROLLODELOSPROGRAMASDECUARENTENA Cadainstituciónoinstalaciónqueadministreaanfibiosencautiveriodeberíacrearyseguirprotocolosdecuarentenaparaanfibios.Losprotocolosdecuarentenadebensercreadosypersonalizadosparacadainstituciónsegúnlostiposdeespeciesalojadasenlainstalación;losrecursosdisponiblesparalainstitución;lasnecesidadesyrequerimientosúnicosdelosprogramasderecuperaciónparaespeciesindividualesogruposdeespecies;oenrespuestaacambiosenlasevaluacionesderiesgodeenfermedades.

Cuandoseestéelaborandounprotocolodecuarentena,losobjetivosmásimportantesson:

• Reducirelriesgodequelosanfibiosnuevosdelacoleccióndeanimales

introduzcanenfermedadesinfecciosas,paraasíprotegerlasaluddelacolecciónestablecidadeanimales.


• Seguirpautasparaelaislamientoalargoplazodelosanimalesqueseránreintroducidosalanaturaleza(vealoscapítulos4).

• Aclimataradecuadamentealosanimalescapturadosenlibertadqueseencuentranencuarentenaalasprácticaszootécnicasparaanimalescautivos(porejemplo,dieta,propiedadesdelagualocal,entornosocial,diseñodelrecinto,rutinasconductualesdemanejoyenriquecimiento).

Algunosobjetivosadicionalesquepuedenserlogradosporunprogramadecuarentenabiendiseñadoson:

• Documentacióndelestatusdesaludgeneral,enfermedadesinfecciosasy

parásitos(incluyendoorganismoscomensales)delosnuevosanimalescuandoentrenacuarentena.Estadocumentaciónentregainformaciónimportanteparalagestióndelaspoblacionesdeanfibiossilvestresocautivos.

• Llevaracabounaevaluacióndelosriesgosdeenfermedadesparadeterminarsilosnuevosanimalessonaptosparasurolfinal(porejemplo,paraexhibición,investigación,crianzaenunacoloniaderesguardooreintroducciónalanaturaleza).

• Daoportunidadparalaidentificaciónúnicadeanimalesindividualmente.Silaidentificacióndeanimalesindividualmentenoespráctica,debedesarrollarparagestionaraunacoloniadeformaqueestamantengalosobjetivosdelprograma(porejemplo,unacoloniaderesguardonecesitasergestionadaparaconservarymantenerladiversidadgenética).LosmétodosparamarcarindividualmentealosanimalessonrevisadosenelApéndice1.

• Recolectarvaloresdereferencianormalesdepatologíasclínicas(porejemplo,hematologíaybioquímicaclínica)quepuedanserútilesparaelmanejomédico.Estainformaciónesinexistenteparalamayoríadelasespeciesanfibias.

Algunosrecursoseinformaciónimportantequepuedenserrequeridosparadesarrollarunprotocolodecuarentenason:

• Definirelroldelosnuevosanfibiosqueentranalacolección(porejemplo,exposición,investigación,ocoloniaderesguardo).

• Conocerlasprácticasinstitucionalesexistentesparadetectarycontrolarenfermedadesinfecciosasenlacolecciónanfibiaestablecida.Estainformacióndebeestardisponibleparatodaslasinstitucionesqueformenpartedeproyectosmulti-institucionalesderecuperaciónanfibia.

• ¿Estádisponibleunveterinarioqueseapartedelpersonalodeconsultoríaparaguiarlaevaluaciónmédicadelosanimalesentrantesylosanimalesdelacolecciónestablecida?

• ¿Seencuentradisponibleelapoyodeunlaboratoriodediagnósticoparaexámenesmédicos?Dadoquelanecropsiaehistopatologíadelosanimalesque


mueransonparteimportantedelaevaluaciónderiesgosdeenfermedades,debeconsiderarladisponibilidaddeunpatólogoveterinariodeconsultoría.

• Conocimientodelasleyesypolíticasnacionaleseinternacionalespertenecientesalasespeciesalojadasenlainstalación(porejemplo,CITES)oqueregulenenfermedadesinfecciosasenelcontextodeimportación,exportaciónyotrosmovimientosdeanfibioscautivos(porejemplo,laOIE).Todoslospermisosyreportesnecesariosdebenserrevisadosparaasegurarsedequeesténenorden.LaspautasdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE,porsussiglaseninglés)paramitigarlosriesgosdeimportaryexportaralhongoquítridodeanfibiosolosranavirusdeberíanserrevisadas:http://www.oie.int/eng/normes/fcode/fcode2008/en_chapitre_2.4.1.htm

• ¿Quérecursosfinancierosseencuentrandisponiblesparafinanciarlasactividadesdecuarentena?Loscostosdecuarentenaincrementanjuntoalnivelderiesgodeenfermedades.Loscostosdecuarentenapuedenincluir,peronoestánlimitadosa:entrenamientodelpersonal,fuerzalaboral,pruebasdelaboratorio(incluyendonecropsiaehistopatología),transportedeanimalesymuestrasparapruebasdelaboratorio,alimentacióndelosanimales,medicamentosycostosmédicos,serviciospúblicos,materialesparaladesinfecciónycostosdemanteneraislamientoalargoplazo.

6.2EVALUACIÓNDERIESGOSENCUARENTENADEANFIBIOS

Determinarloselementosesencialesdelprocesodecuarentena,talescomolaextensióndelperíododecuarentena,lostiposyelgradodepruebasdelaboratorionecesariosparalaevaluacióndesaludylamagnituddetratamientoveterinarionecesarioparalosnuevosanimalesquedependendeunaevaluaciónderiesgoscualitativa.Estaevaluacióndebeserllevadaacaboencadagrupodenuevosanimalesqueentrenacuarentena.Generalmente,losnuevosanimalesquepresentenunriesgoBAJOrequierenperíodosdecuarentenaypruebasdediagnósticomáscortos,mientrasquelosanimalesconunriesgomásALTOnecesitanperíodosdecuarentenamáslargosypruebasdediagnósticomásextensivasyreiteradas.Algunoscomponentesdelaevaluaciónderiesgosdecuarentenason:

• Lafuentedelosanimalesentrantes.Lapotencialexposicióndelosnuevosanimalesaagentespatógenosanfibiosimportantespuedevariarsignificativamente.Porejemplo,losanimalesquehanestadoenunainstalaciónquemezcleaanfibiosdediferentesespecies,ubicacionesgeográficasyorígenesenlamismahabitaciónoreddeaguapotable(tambiénconocidacomocolección"mezclada"o"cosmopolita")puedentenerunmayorriesgodeportaragentespatógenosinfecciososimportantes.Porelotrolado,losanimalesqueprovengandeunainstalacióndedicadaaunasolaespecieolosanimalesalojadosenaislamientoalargoplazodentrodeunainstalacióncosmopolita(veaelcapítulo4)puedentenermenorriesgodeportaragentespatógenosinfecciosos


importantes.Paraambassituaciones,elnivelderiesgoesmenorsilosnuevosanimalesvienendeunafuentedeconfianza;deunainstalacióndelaquesesabequetienebuenahigieneyprácticasdebioseguridad;ypuedeproveerunhistorialmédicodelosanimales(vermásabajo)

• Elhistorialmédicodelosanimalesentrantes.Losanimalesnuevosquevienendepoblacionescautivasbienmanejadasdezoológicosoacuarios(yalgunaspoblacionesdeanfibiossilvestres),porlogeneraltienenunhistorialmédicodesarrolladoporunlargocuidadoveterinarioyvigilanciadeenfermedades.Estesistemadevigilanciadebeincluirnecropsiasehistopatologíasrutinariasdelosanimalesquemueran(veaelcapítulo9).Puederevisarelhistorialmédico,siseencuentradisponible,paraestaraltantodelapresenciaoausenciadeproblemasdesaludespecíficosenlapoblacióndeorigen,loquepuedeayudardegranmaneraeneldesarrollodeplanesdecuarentena.Losanimalesquenotenganunhistorialmédico(porejemplo,algunasconcesionariasdeanimalesopoblacionesdeanfibiossilvestres)sonconsideradosunriesgodeenfermedadesalto.

Siseidentificanenfermedadesdurantelarevisióndelhistorialmédico,sedebedeterminarunnivelderiesgo(ALTO,MODERADOOBAJO).AquellasenfermedadesderiesgoALTOoMODERADOsonlasquerequierenlaspruebasdelaboratorioytratamientosmásextensosdurantesucuarentenaparareducirelriesgodeenfermedadeshacialacolecciónestablecidadeanimales.Algunosproblemasespecíficosqueseidentificandurantelarevisióndeunhistorialmédico,queseñalanunriesgodeenfermedadesALTOson:

o Enfermedadesomuertessignificativassinexplicaciónenlapoblacióndeorigen(porejemplo,másdel10%delapoblaciónadultamuereopresentaseñalesdeenfermedadesdentrode30días).Elproblemadeestasituacióneslaintroduccióndeagentesdeenfermedadesinfecciosasnuevosysindescribirodifícilesdediagnosticaraunacolecciónanfibiaestablecida.

o Laidentificaciónreciente(dentrode6mesesa1año)enlapoblacióndeorigendeagentespatógenosconocidosporserlimitantesparalaspoblacionesdeanfibiossilvestresocautivos(porejemplo,elhongoquítridoanfibioolainfecciónRanavirus).

UnproblemaespecíficoidentificabledurantelarevisióndeunhistorialmédicoqueindicaunriesgodeenfermedadesMODERADOeslaidentificaciónreciente(dentrode6mesesa1año)enlapoblacióndeorigendeenfermedadesinfecciosasconocidasporcausarenfermedadesclínicassignificativas,perononecesariamenteconocidasporserlimitantesparalaspoblaciones(porejemplo,micobacteriosisoinfeccióndenemátodosrabditiformes). AlgunosproblemasespecíficosidentificablesdurantelarevisióndeunhistorialmédicoquetienenunnivelderiesgoBAJOsonlosagentesinfecciososconsideradoscomoinfeccionesoportunistas(porejemplo,AeromonashydrophilaoSaprolegnia).


• Roldelosnuevosanimales.Elrolfinaltantodelosnuevosanimalesqueentrenaunacoleccióncomoeldelosanimalesdeunacolecciónestablecidaqueseránexpuestosalosnuevosanimalestieneunimpactoenlaevaluaciónderiesgosdeenfermedades.Enelcasodelaspoblacionesderesguardodeanfibiosdegranimportancia(porejemplo,quecontienenaunaespecieengravepeligrodeextinciónoaunaespeciaparalacualexistenpocaspoblacionesderesguardo),seríaprudentetrataratodoslosnuevosanimalescomoriesgosMODERADOSoALTOSporlasconsecuenciasquepuedencausarintroducirinadvertidamenteunaenfermedadinfecciosasignificativa.EsteniveldeprecauciónpuedenosernecesariosilapoblacióndeorigendelosanimalestieneunhistorialmédicoextensivoenelquesonconsideradosdeBAJOriesgo(vermásarriba).

6.3CONSIDERACIONESDELAINSTALACIÓNYPERSONALDECUARENTENA

Ubicaciónyaccesoalahabitacióndecuarentenaoalainstalación Losanimalesencuarentenadebenseralojadosenunedificioohabitaciónseparadosdelacolecciónestablecidaocoloniaderesguardo.LashabitacionesdecuarentenaolasinstalacionesdebenserdesignadasusandolaspautasparalasinstalacionesdeAislamientoaLargoPlazodescritasenelcapítulo4. Elespaciodecuarentenadesignadodebeseraseguradoparaprevenirelaccesonoautorizado,yaseaaccidentaloconunpropósito,yaqueestopodríaresultarenelmovimientodematerialescontaminadosconagentesinfecciososdelosanimalesencuarentenahacialosanimalesdeunacolecciónestablecida.

OrdendelarutinademanejoencuarentenaBajolascondicionesideales,losnuevosanimalesbajocuarentenasoloson

cuidadospormiembrosdelpersonaldedicadossoloaanimalesencuarentenayquenoseencargandelosanfibiospertenecientesalascoleccionesestablecidas.Sinembargo,alamayoríadelasinstitucionesnolesesposibletenermiembrosdelpersonalquesoloseencargandeanimalesencuarentena.Larecomendaciónnormalparaestassituacionesesquelosmiembrosdelpersonalfijosseencarguendelosnuevosanimalesencuarentenaalfinaldecadadíadetrabajoysolodespuésdelcuidadodelosanimalesdelacolecciónestablecida.

• Duranteeldía,losmiembrosdelpersonalnodebenmoverseentreáreasque

contengananimalesencuarentenayáreasdecoleccionesdeanimalesestablecidas.Deestaforma,sedisminuyenlasposibilidadesdemoveraccidentalmentepatógenosanfibiosdesdelosanimalesencuarentenahacialascoleccionesestablecidasdelzoológicoohacialosanimalesdeunapoblaciónderesguardo.

• Siduranteeldíadetrabajolosmiembrosdelpersonaldebencambiarentreelcuidadodelosanimalesencuarentenayeldelosanimalesdecolecciones


establecidas,esdegranimportanciaquesesiganlaspautasrespectoalavestimentayelcalzadodelpersonal(vermásabajo).

• Sedebehacerunaexcepciónalaregladelcuidadodelosnuevosanimalesencuarentenaalfinaldeldíasilosnuevosanimalesdebensermantenidosenaislamientopermanente(capítulo4,BioseguridadyAislamientoPermanente).LosanimalesmantenidosenAislamientoPermanentealalargaproduciránanimalesparasureintroducciónalanaturaleza.Otromotivodepreocupaciónparaestosanimalesesquepresentanlapotencialintroduccióndenuevosagentesinfecciososdesdeunacolecciónanfibiamixtadezoológicohaciapoblacionesvulnerablesdeanfibiossilvestrescomoresultadodeunprogramadereintroducción.Porlotanto,losnuevosanimalesencuarentenaquerequieranaislamientopermanentedebensercuidadosANTESdelcuidadodelosanimalesdelacolecciónanfibiageneral.

Vestuariodelpersonaldecuarentena Parareducirelriesgodepropagaragentespatógenosdesdelosnuevosanimalesencuarentenahacialosanimalesfueradecuarentena(estoincluyetantoalosanimalesdecolecciónestablecidacomoalosanfibiosnativos)yparareducirelriesgodeintroducirpatógenosexternosalosnuevosanimalesencuarentena,existenrecomendacionesespecíficasparaelvestuariodelpersonaldecuarentena,algunasdeestasson:

• Tenercalzadodedicadoparacadahabitacióndecuarentena.Loszapatoso

botasutilizadoseneláreadecuarentenanodebenserutilizadosenáreasquealberguenanimalesdecoleccionesestablecidas.Asimismo,loszapatosutilizadosenáreasdeanimalespertenecientesacoleccionesestablecidasnodebenentraraningunahabitacióndecuarentena.Elusodecubiertasquirúrgicasdesechablesparazapatosocubiertasdeplástico(porejemplo,delamarcaShuBee)paracadahabitaciónesunaalternativamenosdeseablequeelusodecalzadoespecializado.Losbañosparapiesdesinfectantesnosonunbuenreemplazoparaelcalzadoespecializado(vealasección4.10).

• Eluniformeoropaprotectoradebeserdedicadoacadahabitacióndecuarentena.Ununiformeutilizadoeneláreadecuarentenanodebeserutilizadoenlasáreasquealberguenanimalesdecoleccionesestablecidassinserlavadoantes.Asimismo,ununiformeutilizadoenelcuidadodeanimalesdecoleccionesestablecidasnodebeserutilizadoenelcuidadodeanimalesencuarentena.Algunasalternativasparalosuniformessonunabatablancadelaboratorio,batasquirúrgicas,monosdetrabajooropadesechable(porejemplo,delamarcaTyvek).

• Sedebenusarguantesdesechablesdedicadoscuandosetrabajedirectamenteconanfibiosoenrecintosparaanfibios.Elusodeguantesdedicadospuedesernecesarioparacadarecintoanimalindividualyparacadaespecieogrupodeespeciesdependiendodelriesgodeenfermedades.Estoesespecialmente


ciertosianimalesdediferentesfuentessonalojadosenlamismahabitacióndecuarentena.Hanhabidopreocupacionesdetoxicidadcausadaporguantesdelátex,viniloynitriloparalosrenacuajos(Greerycolaboradores,2009).Losmiembrosdelpersonaldebenlavarsusmanosybrazosfrecuentementeysobretodocuandosemuevanentrehabitacionesdiferentes.

6.4CONSIDERACIONESDEMANEJOPARAANIMALESENCUARENTENA

Todosdentro/Todosfuera Todoslosanimalesenunahabitacióndecuarentenadebenentraralperíododecuarentenaalmismotiempoysalirdelacuarentenaalmismotiempo("Todosdentro/Todosfuera").Permitirqueanimalesdiferentesentrenosalgandelamismahabitacióndecuarentenaenmomentosdiferentes("escalonar"lacuarentena)incrementaelriesgodequeunagentepatógenoimportanteseaintroducidoatodoslosanimalesenlahabitacióndecuarentenaypasesinserdetectadoantesdelaliberacióndelosanimalesqueentraronencuarentenaenprimerlugar.Esto,asuvez,incrementaelriesgodeintroducirunaenfermedadinfecciosaimportanteenlacolecciónestablecida.

• Sinuevosanimalesdebenentraraunahabitacióndecuarentenaantesdelfindeunperíododecuarentenaencurso,laduracióndelperíododecuarentenadebeserextendidoparalosanimalesqueestabanencuarentenaantes.

• Ningúnanimaldebeserliberadodesucuarentenahastaquelosanimalesqueentrarondespuésaestahayanterminadosuperíododecuarentena.

• Liberaratodoslosanimalesdelahabitacióndecuarentenaalmismotiempopresentalaventajadepermitirlimpiarydesinfectarcompletamenteelespacioylosrecintosdecuarentenaantesdequeentrennuevosgruposdecuarentena.

Bioseguridadenlacuarentena

Todoslosanimalesenunamismahabitacióndecuarentenadebenposeerelmismorolfinal(Arca,RescateodeSuplementación;investigaciónsobrelaconservaciónoeducación)ydebenposeerunhistorialenelquehayansidomantenidosbajounodelosnivelesdebioseguridad("AISLAMIENTO"o"BUENASPRÁCTICAS")apropiadoparaeserol(vealasección4.4paraunaexplicacióndelosnivelesdebioseguridad).

• Losanimalesdestinadosaentraraunacoloniaderesguardoconelpropósitodedevolverlosaellosoasudescendenciaalanaturaleza(porejemplo,losanimalesquetienenunroldearca,rescateodesuplementaciónyquesonmantenidosenaislamiento),nodeberíannuncaseralojadosenlamismahabitacióndecuarentenaconanimalesquenohayansidoalojadosantesenaislamientoalargoplazo.Estosanimalestambiéndeberíansermantenidosconsumismaespecieogrupodeespecie(ungrupofaunísticoanfibioqueesdelamismapoblacióndeorigen)porcadahabitacióndecuarentena.


• Comounejemplo,noseríarecomendablealojaraunsapodeWyoming(delosEstadosUnidos)queespartedeunapoblaciónderesguardoqueproduceanimalesparasureintroducciónalanaturalezaenlamismahabitacióndecuarentenaenlaqueseencuentraunaranaarborícolaverde(deAustralia)destinadaasuusocomoanimaleducativoodeexhibición.

Durantelacuarentena,sedebenseguirlasrutinasdireccionalesdeprácticaszootécnicasqueminimicenlacontaminacióncruzadaentrediferentesrecintosanimales.Estasprácticassondiscutidasendetalleenlasección4.11.

Recintosylimpieza Paralasinstalacionesdecuarentenaserecomiendatenerrecintosqueseanfácilesdelimpiarydesinfectar.Losrecintosdebensertansimplescomolopermitanlosrequisitoszootécnicosylahistorianaturaldelaespecie,pero,almismotiempo,debenfomentarelcomportamientonaturaldeestamientrasseadaptaalcautiverio(porejemplo,debenincluirrefugios,sustratosuotroamuebladoqueestimulesucomportamientonatural).Laadaptabilidadyapreciaciónporlahistorianaturaldelaespeciesonelementosclavesparaunprotocolodemanejoexitosoenlacuarentena.Porejemplo,notodaslasespeciespuedentolerarunrecintoescuetoconamuebladomínimo(elcualseríaidealparasulimpiezaydesinfección)yestosanimalespodríannecesitarrecintoscomplejosdeapariencianaturaldurantesuperíododecuarentena.Algunasdelasespeciesterritoriales(porejemplo,lasranasvenenosasdelafamiliaDendrobatidae)podríannecesitarbarrerasvisualesentrerecintos.

• Losrecintosdebenserdefácilaccesoydeberíanestarhechosdevidrionoporoso,fibradevidrioomaterialesplásticosqueseanfácilesdelimpiarydesinfectar.

• Despuésdequeungrupodeanimaleshayaterminadosuperíododecuarentena,losrecintosdebensercompletamentedesmontadosydesinfectadosantesdesureutilización.Estoincluyelossistemasdefiltraciónutilizadosparalosanfibiosacuáticos.Guíasparaladesinfeccióndelosrecintossonentregadasenlasección5.4.Lossustratosyelamuebladoodecoracionesdelasrecintosparalosrecintosde

cuarentenadeberíanserdesechablesoestarhechosdematerialesquepuedanseresterilizadosdespuésdesuuso.Algunassugerenciasdesustratosson:

• Musgosphangnum.Estematerialesrelativamentebarato,tieneunaalta

retencióndeaguayposeepropiedadesantibacterianas.• Gravilla.Colocarunacapadelgadadegravillaalfondodelrecintoounfondo

falsoconunacapadesphangnumtambiénsirveparaeldrenajedeesteypermitequeelrecintoseaenjuagadominuciosamenteyfrecuentemente.


• Pisosdeplástico.Sepuedenusarvariostiposdepisosdeplástico(porejemplo,forrosnoresbaladizosparacajasdeherramientas)ochapasperforadasdePVCcomosustratos.Sinembargo,estosdebenserlavadosydesinfectadosminuciosamenteentreusos,yaquesepuedenacumularbiopelículasfácilmenteenlassuperficiestexturadas.

• Toallasdepapel.Estassonconvenientesehigiénicas,perosesecanrápidamenteypuedenrequeriratenciónextraporpartedelosmiembrosdelpersonal.Lastoallasdepapeldebensernoblanqueadasynoimpresasparaevitarexponeralosanfibiosacloroocolorantestóxicos.

• Plantas.Lasplantaspuedensermuyimportantesparaalgunosanfibiosyaquesirvencomorefugioocomosustratoparadescansarodormir.Lasplantasplásticasoartificialessonútilesporquesonbaratasysepuedendesinfectarodescartarfácilmentedespuésdelaliberacióndeungrupodeanimalesdecuarentena.Sisevanausarplantasvivasenlacuarentena,espreferibleutilizarplantasquerequieransustrato(porejemplo,pothos,epífitas)oquepuedanestarenelsustratoalejadasdelosanimales.Lasplantasnodebenserreutilizadasdespuésdequetermineelperíododecuarentena.

Dadaslaspreocupacionesencuantoalaintroduccióndeagentesde

enfermedadesinfecciosas,serecomiendaquelossustratosyelamuebladonuncaseanrecolectadosdeexteriores,sobretododeáreasenlasquehayanpodidoestarencontactoconotrosanfibios.Pautasparalasprácticasdebioseguridadquereduzcanlaposibilidaddeintroducirenfermedadesinfecciosasanfibiasimportantespormediodesustratosyplantaspararecintosseentreganenlasección4.13. Sedebellevaracabodiariamenteunalimpiezageneral(removerlashecesylosproductosalimenticiossinconsumirjuntoconenjuagarlossustratosconaguacuandoseaposible)detodaslasrecintos.Siesposiblesedebellevaracabounreemplazototaldelossustratossemanalmente.Estaspautassonimportantesyaquealgunosparásitos(porejemplo,nemátodosrabditiformes)puedencompletarunciclodevidaenteroensolo48horas.Paralasespeciesqueseestresanfácilmenteenunentornodecautiverio,lalimpiezaoreemplazofrecuentedelossustratospuedesermuyperturbadora.Enestoscasossedebenconsiderarlimpiezasmenosfrecuentesdependiendodelostiposdeparásitospresentesylacargaparasitariaestimadadelaespecie.

Recintosacuáticos

Losanfibiostotalmenteacuáticosqueseencuentrenencuarentenarequeriránatenciónespecialalacalidaddelagua.Estosignificaquesedebetenerunsistemadefiltracióndeaguaocambiarlafrecuentemente(porejemplo,"vaciadoyllenado").También,resultaríaútilvigilarlosparámetrosdelacalidaddelagua,talescomoelniveldeamoniaco,nitratoyelpH.

• Siutilizaunsistemadefiltración,esnecesariotenerun"filtrobiológico"establecidodebacteriasespecializadasparalaeliminacióndelossubproductos


deamoniacodelosresiduosnitrogenadoscreadosporlasexcrecionesdelosanimales,productosalimenticiossincomeruotrosmaterialesorgánicos.Estousualmenterequierequeunsistemalleveenfuncionamiento2o3semanasantesdequenuevosanimalesentrenencuarentena(necesitaplanearconanticipación).

• Pormotivosdebioseguridad,siseusancoloniasbacterialesdepecerasdelasinstalacionesparainiciarunfiltrobiológico,estascoloniasnodebenserprovenirdesistemasopecerasdeaguaquehayanalbergadoanfibiosenalgúnmomento.

• Lossistemasconfiltrosbiológicosrecientementeestablecidospuedenrequerircambiosdeaguafrecuentesparamantenerlacalidaddeesta,yaquelascoloniasdebacteriaspuedenserineficientes.Estoesparticularmenteciertosiseusanantibióticosenelaguaduranteelprocesodecuarentena.

• Cuandolacuarentenaestécompleta,lossistemasdefiltraciónylosrecintosdebenserdesinfectadosparaprevenirlapropagacióndeorganismosquepuedenestarescondidosdentrodelamatrizdelfiltro.Enotraspalabras,nosedeberíausarelmismosistemadefiltraciónparamásdeungrupodeanimalesencuarentena.

• Unenfoquealternativoesevitarlossistemasdefiltraciónporcompletoysimplementeadoptarelmétodode"vaciadoyllenado"entodoslosrecintosacuáticosduranteelcursodelperíododecuarentena.

Manejodedesechosyaguasresiduales

Existelapreocupacióndequeresiduos(porejemplo,sustratossucios)oaguasresidualesdelasinstalacionesdeanfibiosencautiveriopuedanactuarcomofuentedeintroduccióndeagentesdeenfermedadesinfecciosasimportantesparalaspoblacionessilvestresdeanfibios.Asímismo,losdesechosdelosanimalesencuarentenapodríanactuarcomofuentedeagentesinfecciososparalosanimalesdecoleccionesestablecidas.Porlotanto,sedebenestablecerprotocolosparagarantizarquelosresiduosnoentrenencontactoconlosecosistemaslocalesoconotrosanimalesqueseencuentrenafueradelainstalacióndecuarentena.EltratamientodedesechosyaguasresidualespuedeserrequeridobajolaspautasdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)paralaimportacióndeanfibiosdepaísesquenohayansidodeclaradoslibresdelhongoquítridoanfibiooranavirus:www.oie.int/eng/normes/fcode/fcode2008/en_chapitre_2.4.1.htmPautasgeneralesparalaeliminaciónderesiduossólidosyaguasresidualesseencuentrandisponiblesenlassecciones4.13y4.14.

DietayalimentacióndelosanimalesencuarentenaLosinsectoscapturadosenlanaturalezasirvencomounaexcelentefuentede

nutrición,sobretodoparalosanimalesqueaúnnoseadaptanalasdietasdelcautiverio,peroestosconllevanelriesgodeintroducirunagentedeenfermedadinfecciosaouncontaminantequímico.Tambiénpuedeexistirunleveriesgodeintroduccióndeenfermedadescuandoseusanpresassuministradasporproveedores


comerciales.Recomendacionesgeneralesdeprácticasdebioseguridadquereduzcanlaposibilidaddeintroduciragentesdeenfermedadesinfecciosasimportantesdefuentesalimenticiasseentreganenlasección4.17.

Reduccióndelestrés

Aveces,losprogramasdecuarentenadebentenerenconsideraciónelbalanceentrelosobjetivosdelacuarentenaylasnecesidadesdelanimal(porejemplo,evitarelestrésenespeciessensibles).Algunasespeciessonmuysensibles,ypodríannosobreviviralprocesodecuarentenaamenosquesellevenacaboesfuerzosparaadaptarseasusnecesidades.Enesteaspecto,laflexibilidadylaevaluaciónindividualderiesgodeenfermedadesparacadagrupodeanimalesqueentrealacuarentenapuedenserútiles.Elestrésenlosanimalespuedeserreducidomediante:

• Lareducciónalmínimodelafrecuenciaconlaquelosanimalessonmanejadosoperturbados.Todoslosexámenesfísicos,recoleccióndemuestrasparapruebasdedeteccióndeenfermedadesyotrasactividades,deberíansercombinadasenunasolaactividad.Laautomatizaciónenlasrutinasdecuidadozootécnico(porejemplo,atomizadorespreviamenteinstaladosconuntemporizadorparamantenerlahumedadenelrecinto)puedeserútil.

• Ofrecerelrefugioapropiadoparaquelosanimalesseescondanyasífomentarelcomportamientonaturaldeestos.Usarmaterialesquesepuedanlimpiarfácilmenteoqueseandesechables(porejemplo,plantasdeplásticoypiezascortadasdetubosdePVC)permitequelosanimalesseestresenmenosy,almismotiempo,unafácildesinfección.

• Proveerdietas,iluminación,composicióndelagua,temperatura,espacionecesario(tantoverticalcomohorizontal),sustratosydensidadanimaldeformaqueelambientedelanfibioseaconsistenteconlahistorianaturaldelaespecie,puedereducirdemanerasignificativaelestréscrónicodebajaintensidad.Estoesparticularmenteciertoparalasespeciessensiblesoenlasespeciesparalascualesexistepocaexperienciadecuidadozootécnicoencautiverio.Estoúltimosehavueltounasituaciónmáscomúnamedidaqueseestablecenmáspoblacionesderesguardoparaanfibios.Enmuchoscasos,esdeseableestablecerprotocolosdecuidadozootécnicoenunaespecie"sustituta"estrechamenterelacionadaalaquesevaaadquirir,sobretodoantesdelaadquisicióndeunaespeciemuysensibleovaliosa.

6.5DURACIÓNDELPERÍODODECUARENTENA

Elperíodoenquelosnuevosanimalesdebenpasarencuarentenaesdeterminadoporvariosfactores.Estosfactoresincluyen:

• Losresultadosdeunaevaluaciónderiesgosdecuarentena(vealasección6.2).

LosanimalescuyonivelderiesgodeenfermedadesseaBAJOrequierenmenos


pruebasdediagnósticoyobservaciónveterinariay,porlotanto,tendránperíodosdecuarentenamáscortos.

• Lasaludgeneraldelosanimalesencuarentena.Esodebeserdeterminadoporunaevaluaciónveterinaria,pruebasdelaboratoriodediagnósticoyporlaaparicióndeenfermedadesomuertessignificativasenelgrupodeanimales.Siseidentificanproblemasdeenfermedadesosinosecumplenlasnormasparalaliberacióndelosanimalesencuarentena(vermásabajo),elperíododecuarentenadeberásermáslargo.

Laduraciónmínimarecomendadaparaunperíododecuarentenadeanfibioses

de30días.EstebreveperíododecuarentenaesapropiadoparasituacionesdecuarentenaderiesgoBAJOaMODERADO,quenorequieranpruebasdediagnósticoenlaboratorioextensasycuandolosanimalescumplencontodoslosotrosrequisitosparasuliberacióndelacuarentena.ParalamayoríadelassituacionesdecuarentenaderiesgoMODERADOaALTOsesugiereunperíodomínimode60a90díasdeduracióndecuarentena.Esteperíododecuarentenamásextensopermitiráunaobservaciónmeticulosadelosanimalesencuarentenaparabuscarevidenciadeenfermedadesy,también,darátiempopararecibirlosresultadosdelaspruebasdelaboratorionecesarias.Lasnormasparalaliberacióndelosanimalesencuarentenadespuésdelperíodomínimodecuarentenason:

• Unaevaluaciónfísicaexitosaporpartedeunveterinariouotropersonalentrenado.Deserposible,sedebellevarcabounexamenfísicodetalladodecadaanimalenelgrupo.Verlasección6.6paramásdetallesacercadellevaracaboexámenesfísicos.Siungrupograndedeanimalesseencuentraencuarentenaynopuedenserexaminadosunoporuno,hacerexámenesvisualestambiénesaceptable.Sedebehacerunesfuerzopararealizarmásexámenesfísicoscompletosyrevisionesdelaboratorioenalmenosde10%a30%delosanimales.

• Sianimalesindividualeshanmantenidounacondicióncorporal(BCS)mínimade"3"porunmínimode14díasseguidosantesdelafechadeliberacióndecuarentenaestablecida.Verlasección6.6paramásdetallesdecondicionescorporales.

• Sielgrupodeanimalesencuarentenanohasufridoeventosdemortalidadsinexplicaciónporunmínimode14díasseguidosantesdelafechadeliberacióndecuarentenaestablecida.

o Sihayserviciosdepatologíadisponibles,sedebenanalizarlosresultadosfinalesdehistopatologíapormediodenecropsiasdeanimalesquehayanmuertoduranteelprocesodecuarentenaoquehayansidosacrificados(eutanasia)conpropósitosdevigilanciadeenfermedadesdurantelacuarentena.Siseidentificóunaenfermedadinfecciosaenproceso,el


períododecuarentenadebeserextendidohastaquesehayasolucionadoelproblema.

• Silosresultadosfinalesdecualquierpruebadelaboratorio(porejemplo,PCRparadetectarhongoquítridodeanfibios)sonnegativosparaagentespatógenosanfibiosimportantes.Enalgunoscasos,losresultadosdelaspruebaspuedennoestardisponiblesdemaneraoportuna(porejemplo,silasmuestrasparaunPCRdebenserexportadasaotropaísparasuanálisis);entalescasos,sedebenconsiderarconprecauciónotrasalternativascomotratamientosprofilácticos(verlasección8.1).Siseidentificóunaenfermedadinfecciosaenproceso,elperíododecuarentenadeberíaextendersehastaquesehayasolucionadoelproblema.

• Lostratamientosparalasinfeccionesparasitariasconfrecuenciainfluencianlaextensióndeunperíododecuarentena.Sisetomaladecisióndetrataralosparásitosdetectados(verlasección8.4),despuésdecompletareltratamientosedebellevaracabounarevisiónparadetectarparásitosysedebenalcanzarlasreduccionesparasitariasesperadasantesdelaliberacióndecuarentena.Esteprocesopodríaprolongarlacuarentenaporvariassemanasoinclusomásysepodríanecesitarmásde1rondadetratamientos.

• Siseidentificananimalesenfermosenelgrupodecuarentena,sedebenhaberresueltotodoslosproblemasdesalud(yaseaporlamuerteynecropsiadelosanimalesoporqueestosvolvieronaunestadosaludable)poralmenos14díasantesdelafechadeliberacióndecuarentenaestablecida.Enciertomodoestenúmeroesarbitrarioypodríaserajustadodeacuerdoaljuiciodelveterinarioconsultanteuotropersonalentrenado.

o Debeintentarsedeterminarsilosanimalesenfermosseencuentranafectadosporunainfecciónenprocesoosielestadodeestossedebeasumalaadaptaciónalacuarentenaoelcautiverio.Siseeliminalaposibilidaddeseaunaenfermedadinfecciosa,sedebeconsiderarliberaralanimaldecuarentenaytrasladarloaunrecintopermanentequeseajustemásasusnecesidades.

6.6CONSIDERACIONESMÉDICASENLACUARENTENA

Elnúcleoconceptualdelprogramaensíesmantenerunaobservacióncuidadosayunregistrodelasaluddecadaanimalencuarentena.Alobservaralosanimalesindividualmentesepodríandetectarenfermedadesantesdequeaestosselespermitasalirdelainstalacióndecuarentenaysereducenlasprobabilidadesdeintroducirnuevasenfermedadesinfecciosasalascoleccionesestablecidas.

RegistrosmédicosUnregistromédicoesladocumentaciónsistemáticadelahistoriaycuidado

médicoqueselehadadoaélolosanimales.Lamantenciónderegistrosmédicosdetalladossirvecomobaseparaevaluarlaeficaciadelosprotocolosdecuarentena,descubrirmétodosdecuidadozootécnicoapropiadosypermiteelanálisisdelascausasdemorbimortalidadencuarentena.


Elregistromédicodeberíaincluirlossiguienteselementos:

• Informedeidentificación/inventarioCuandoseaposible,laseccióndeidentificación/inventariodelregistromédicodebeseguirelformatodelSistemaInternacionaldeInventariodeEspecies(ISIS,porsussiglaseninglés–ahoraZIMS)ydebecontenerlossiguientecuandoseaposible:nombrecomúndelanimal,nombretaxonómico(géneroyespecie),sexo,tipodenacimiento,lugardenacimiento,fechadenacimiento,fechadeadquisiciónenlacuarentena,origen/identificacióndelpadreylamadre,númerodeingresoalainstitucióndecadaanimalyotrosidentificadoresposiblestalescomodatosdelibrogenealógico,microchipsymarcas.Alosgruposdeanimalesselesdaunnúmerodeingresogrupalconlainformaciónpreviamentemencionadaloantesposible.Lasnotasdecuarentenadebenproporcionarinformaciónparaidentificarindividualmentealosanimales(siesposible),sobretodosisetratademarcasfísicasopeso(verlasecciónmásabajodepesajeparaindividuosygrupos).

• Notasdecuarentena.Todoslosanimales,yaseanindividualesogrupos,debentenerunaanotacióndiariaenlapartedecuarentenadelregistroenlacualseanotelapresencieoausenciadeporlomenos5factores:heces,orina,ingestaalimentaria,comportamientonormalyactitud.Nohaymuchadiferenciaentremantenerunformatoindividualogrupalderegistromédicomientrasloscambiosespecíficosdelapoblaciónseanbiendocumentados(porejemplo,decirque"3de5animalesparecendeshidratadososeencuentranletárgicos"contradecir"algunosanimalessevenenfermos").

• Notasclínicasdelpersonalveterinario.Estasecciónincluyenotasyobservacionesdelosdiagnósticosclínicos,anestesiayprescripcionesmédicas.

• Resultadosdellaboratorio.Resultadosdelaboratoriodeparasitología,diagnósticosmoleculares/serológicos,microbiologíaynecropsia/histopatología.

Examenfísico.Bajolascondicionesideales,losanimalesdeberíanrecibirunexamenfísicoal

menos3vecesdurantelacuarentena.Losexámenesdebenserllevadosacaboporunveterinariouotropersonalquehayarecibidoentrenamientoenevaluacionesmédicas.

• Losexámenesdebenllevarseacabocuandolosanimalesentrenacuarentena,enelpuntomediodelacuarentenayantesdesalirdeesta.Elmanejodelosanimalesdurantelosexámenesdebeserlimitadoparaevitarelestrésenlasespeciessensibles,sobretodoenlaentradaacuarentena.Todolonecesarioparalaexaminaciónoidentificacióndebeestarorganizadoantesdelexamen,deestaformanosedesperdiciarátiempocuandoelanimalesteenmano.


• Laduraciónyelgradodelosexámenespuedevariar.Deungrupograndedeanimalesunsubconjuntodelapoblación(de10%a30%)debeserexaminadoparaevaluarlasaluddelapoblación.

• Sedebedaratenciónespecialalacondicióncorporalycutánea,palpacionescelómicasyexámenesorales.Latransiluminación(elusodeunaluzbrillantepararesaltarlasestructurascelómicasinternas)puedeserútilparalavisualizacióndelasestructurascelómicas,sobretodoparainvestigarydetectarenfermedadescelómicastalescomolaascitis,neoplasia,procesosgranulomatososomasas.

• Todaslasanomalíastantofísicasoconductualesdebenserdocumentadasenelregistromédico.Algunasanomalíasexternascomunesquedebenseranotadassonlafaltadeextremidades/dedos,úlcerasocolor/texturaanormaldelapiel.

• Losanimalesdebenserevaluadosparaobtenersupesoysupuntajedecondicióncorporal(vermásabajo)

• Lascaracterísticasútilesparalaidentificaciónindividualdelosanimalesdebenseranotadas(porejemplo,coloraciónopatronesenlapiel).Sedeberíanobtenerfotografíasdigitalesdelosindividuosparafuturasreferenciasencasodealgunaenfermedadoparacompararlasconlascondicionescorporalesidealesolamorfologíadelaespecie.

Identificacióndelosanimales

Laidentificaciónpermanentedecadaanimalesunaherramientacríticaparalagestióndelosanimalescautivos,sobretodosisequieremantenerladiversidadgenéticaparalareproducción.Enlassituacionesdecuarentenalaidentificacióndecadaanimalesútilpara:

• Supervisarelpesoylospuntajesdecondicióncorporal.• Llevaracaboinvestigacionesepidemiológicaspormediodelaidentificaciónde

portadoresdeenfermedadesysitiosdeexposiciónaagentespatógenosuotrosagentesdañinos.

• Evaluarlaefectividaddelagestiónenlosparámetrosdecuidadozootécnicoencautiverio,talescomodieta,jaulayparámetrosambientales.Estosfactoressonmásfácilesdeanalizarconlaidentificaciónindividualdelosanimales.Losaspectosnegativosdelaidentificaciónindividualsonloscostosdelequipoy

sualmacenamiento,infeccionesotraumassecundarioscausadosporelmecanismodemarcado,ylapotencialperdidayreemplazodelosmarcadores"permanentes"deidentificación.VeaelapéndiceIparamásdetallesacercademétodosdeidentificaciónanimal.

Pesoypuntajedecondicióncorporal.Comoyasehaseñaladoenseccionesanteriores,elpesocorporalyelpuntajede

condicióncorporaldecadaanimalesunaparteimportantedelaevaluacióndesaluden


cuarentena.Sedebenguardarnotasrespectoalaaparienciageneraldelacondicióncorporaldurantelacuarentenadelosanimales,dándoleespecialatenciónalospuntajesdecondicióncorporalalentraralacuarentenayantesdesalirdeesta.

Laescalade5puntosdelsistemaBCSPuntaje Descripción1 Raquítico—Vértebraslumbares,huesospélvicosytodaslas

protuberanciascorporalessonvisiblesaladistancia.Nohaygrasacorporaldistinguible.Ausenciaobviademasamuscular.

2 Delgado—Partesuperiordelasvértebraslumbaresesvisible.Huesospélvicosmenosnotorios.Reduccióncelómicaydecinturaevidente.

3 Moderado—Huesospélvicosnoprominentes.Celomarecogidosisevedeperfil.

4 Robusto—Deaparienciaregordeta.Depósitosgrasosevidentessobrecolumnalumbar,extremidadesybasedelacola.Lareduccióncelómicapuedeestarausente.

5 Obeso—Grandesdepósitosgrasossobrepecho,columnaybasedelacola.Reduccióncelómicaausente.Depósitosgrasosenelcuelloylasextremidades.Celomadistendido.

Elpesocorporaldelosanimalesdebesertomadocuandoestosentrenala

cuarentenaysemanalmentedespuésdeeso.

• Sedebeusarunabalanzadeprecisión(0,01gparaanimalespequeños).Sedeberíausarlamismabalanzacadavezqueunanimalseapesadoparaevitarconfusionesrespectoalainfluenciadelasbalanzasenelcambiodepesodelosanimales.

• Elpesoentreanimalesindividualespuedefluctuar.Elpersonalquenoestéacostumbradoatrabajarconanimalesmuypequeñosdeberíatenerencuentaqueactosnaturales,comoorinarodefecar,puedencausarpérdidasdepesoaparentesrápidasygrandes;losanfibiostienenaorinarcuandosonmanejados.Comopautaaseguir,una"pérdidasignificativadepeso"puedeconsiderarsecomopesarde10%a15%menosqueelpesocorporalsemanalanterior,ydeberíaconsiderarsecomounposibleindicadordesaludanormal.Loscambiosdepesocorporaldebenserevaluadosfrentealasvaloracionesvisualesdelpuntajedecondicióncorporal.

• Losanimalessaludablesdeberían,porlogeneral,mantenersupesocorporaloganarpesodurantelacuarentena.Lamalaadaptaciónalascondicionesdecautiverioocuarentenapodríaseruncausantedepérdidadepeso.

• Engruposgrandesdeanimales,puedeexaminarlamedianadelpesodeestosyutilizarlosvaloresmínimosymáximosdepesocorporalparacalcularlatendenciadepérdidaygananciatotaldepesoenelgrupo.

• Antesdesalirdecuarentena,sedeberíahacerunpesajedesalidadelosanimales.Engruposgrandesdeanimales,elpesodelgrupopuedesertomado


deformasemanalobisemanalylosvalorespuedenserregistradosbajounnúmerodeidentificacióngrupal.Examinarlamedianadelpesodelgrupoyutilizarlosvaloresmínimosymáximosdepesocorporalparacalcularaproximadamentelatendenciadepérdidaygananciatotaldepesoenelgrupo.Lasmismaspreocupacionesexistentantoparalasperdidasgeneralesdepesodentroungrupoquesaldrádecuarentenaqueparalaliberacióndeunanimalconpérdidadepeso.

6.7PRUEBASDELABORATORIOYTRATAMIENTODEENFERMEDADESENCUARENTENA Laspruebasdediagnósticoylostratamientosprofilácticosdelaboratoriosonútilesyavecesesencialesparalasevaluacionesmédicasyderiesgosdelosanimalesencuarentena.Específicamente,laspruebasotratamientosdediagnósticodirigidospueden:

• Detectaryreducirelimpactodeaquellosagentespatógenosconocidosporcausarmortalidadsignificativaenlaspoblacionescautivasantesdequelosanimalesencuarentenaseanintroducidosalacoleccióngeneraloaunacoloniaderesguardo.

• Usteddebeayudareneldesarrollodepoblacionescautivasqueseencuentrenlibresdeagentespatógenos(porejemplo,elhongoquítridodeanfibios).Estaspoblacionesespecíficaslibresdeagentespatógenossonnecesariasparalosprogramasquepretendenreintroduciranimalesalanaturaleza,oqueintentandistribuiranfibiosaotrasinstitucioneszoológicas.

• Identifiqueproblemasdeenfermedadesinesperadosenlaspoblacionesdeorigen.

Seríadifícilcrearunprotocolodetratamientoopruebasdedeteccióndeenfermedadesúnicasparausarentodaslassituacionesdecuarentenadeanfibios.Ladecisióndeusardiferentestiposdepruebasdediagnósticodependedelasituaciónydefactorestalescomo:

• Evaluaciónderiesgosdecuarentena.Enlasección6.2hayunadescripcióndetalladadelaevaluaciónderiesgosdecuarentena.

• Disponibilidaddeapoyodelaboratoriooveterinario.Notodaslasinstalacionesquealberganaanfibioscautivostienenaccesoalaboratoriosyveterinariosquepuedanllevaracabopruebasdediagnósticoeinterpretarlosresultadosdellaboratorio.Enestassituacioneshayunamayordependenciadelostratamientosprofilácticosparaagentesdeenfermedadespreocupantes(porejemplo,elhongoquítridodeanfibiosoparásitosnemátodosrabditiformes);elusodeperíodosdecuarentenaextendidosparaobservaralosanimalesenbuscadeseñalesdeenfermedades;ydependerdeexámenesfísicosparaevaluarlasaluddelanimal.


Algunosmétodosdediagnósticootratamientodelaboratorioquepuedenserutilizadosensituacionesdecuarentenason:

• Necropsia(examinaciónpostmórtem).• Examinaciónenlaboratoriodehecesytratamientoparaparásitosinternos.• Pruebasy/otratamientoprofilácticoparadetectarelhongoquítridoanfibio.• Pruebasparadetectarranavirus.• Obtenermuestrasparapatologíasclínicas(hematologíayquímicasanguínea).

Estosmétodossondiscutidosendetalleenlasseccionesmásabajo.

6.8NECROPSIALanecropsia(examinaciónpostmortem)esunaherramientamuyútilparala

revisiónenbuscadeenfermedadesenanimalesencuarentenayesta,idealmente,debellevarseacaboentodoslosanimalesquemueran.Losprocedimientosparanecropsiasenanfibiossedescribencondetalleenelcapítulo9.

• Lanecropsiaconhistopatologíaesunapruebaquenoestádirigidaaninguna

enfermedadenespecíficoy,porlotanto,tieneelpotencialparadetectarunaampliagamadeenfermedadesinfecciosas(porejemplo,quitridiomicosisoinfecciónporranavirus);infeccionesparasitariasclínicamenteimportantes(porejemplo,grandescargasdenemátodosrabditiformes);yproblemasnutricionales(porejemplo,enfermedadóseametabólica),entremuchasotrasenfermedadesquepuedenserencontradasenlosanfibioscautivos.

• Lanecropsiaconhistopatologíaeselmétododediagnósticoporelcuallamayoríadelosproblemasdeenfermedadesnuevosoinesperados,paraloscualesnoexisteunapruebadediagnósticoespecificadisponibleoválidaparaanfibios,serándetectados.

• Confrecuencia,losresultadosdeunanecropsiaseutilizanparaidentificarconrapidezlosproblemasdesaludmásimportantesenungrupodeanimalesencuarentenayayudanaenfocarlaatencióndelosdiagnósticosdelaboratorioylosesfuerzosdetratamientodurantelacuarentena.

• Dadoquemuchasenfermedadessonindetectablesasimplevistaosonsimilaresaotrascondiciones(porejemplo,unaranaconpielrojapodríatenerunainfecciónbacteriana,micóticaovira),unahistopatologíallevadaacaboporunpatólogoveterinarioamenudoesnecesaria.

Elsacrificiodeanimales(medianteeutanasia)paramuestreosdiagnósticose

histopatologíapuedeformarpartedeunprogramadevigilanciadeenfermedadesencuarentena.Losanimalesseleccionadosparasacrificardebensersacrificados


humanamente;losdetallesparaesteprocedimientoseincluyenenlasección8.6.Algunassituacionesendondeelsacrificioesespecialmenteútilson:

• Lainvestigacióndeunbrotedeenfermedadesounamortalidadmasivasin

explicaciónenlacuarentena.• Elsacrificiotambiénpuedeserunaopciónsihayungrupograndedeanimales

encuarentenayexistemuypocainformaciónacercadelosproblemasdeenfermedadesimportantesdelaespecie,osilosanimalesfueronobtenidosdeunafuenteconsideradaderiesgoALTOrespectoalaintroduccióndeenfermedadesinfecciosas.También,paralosprogramasquetraigananfibiossilvestresacoloniasderesguardo,losprogramasdevigilanciadeenfermedadesqueincluyansacrificiosynecropsias,yaseadelaespecieobjetivoodelaespeciesustitutasimpátrica(odeambos),sonútilesparadeterminarriesgosdeenfermedadesyproblemasimportantesantesdeestablecerelprogramadecautiverio.Enestassituaciones,elsacrificiodeanimalesofrecelamejoroportunidadparaobtenerespecímenesdediagnósticodealtacalidadquepresentenmenosdefectoscausadosporladescomposiciónpostmortem(autolisis).

Ladecisióndesacrificaranimalesparalavigilanciadeenfermedadespuedeser

controversial.Porlotanto,esimportantequetodoslosmiembrosdelprogramadeconservacióndeanfibiosesténdeacuerdorespectoalanecesidaddesacrificareidentificaraaquellosanimalesqueseránremovidosporestospropósitos.

6.9PRUEBASYTRATAMIENTOSPARAPARÁSITOSINTERNOSLarevisiónparadetectarparásitosinternos(usualmenteintestinales)esuna

prácticaveterinariaestándarenlacuarentena.Larevisiónsesuelellevaracabopormediodelaexaminacióndelashecesenunlaboratorioenbuscadehuevecillosuotrasetapasdevidaparasitarias.Siempreseesperaungradodeparasitismointernoenlosanfibiossilvestres,yelhuéspedgeneralmentetoleraalosparásitosendémicosmuybien.

• Encondicionesdecautiverioycuidadozootécnico,lasinfeccionesdealgunos

tiposdeparásitos,especialmentelosnemátodosrabditiformestalescomoRhabdiasspp.(gusanopulmonaranfibio)oStrongyloidesspp.(parásitointestinal)puedenalcanzarnivelesdenominadoscomohiperinfeccionesosuperinfeccionesenelhuésped,loqueresultaenunestrésfisiológicoaumentadooenlaenfermedady,luego,muerte.

• Comopartedeunprogramaparacontrolarlasinfeccionesdenemátodosrabditiformes,laexaminaciónfecalparaencontrarparásitosesimportanteenlosprogramasderevisiónenbuscadeenfermedadesdecuarentena.Enlasección7.8sedescribenmétodosparalarevisiónfecalparaencontrarparásitos.


• Enlasección8.5sediscutenmétodosdecontrolparaparásitosrabditiformes,incluyendoeltratamientoprofilácticoconmedicaciónantihelmíntica,ylainiciacióndeprácticasdehigieneylimpiezaquereduzcanlaexposiciónaparásitospatógenos

Elobjetivodelarevisiónfecalparaencontrarparásitosesdeterminadode

antemanoparacadagruponuevodeanimalesqueentreacuarentena.Eneldiseñodeprogramasdecuarentenaaveceshaydesacuerdosentrelasfilosofíasque:

• Busquencontrolaroreducirlascargasparasitariasaniveles"normales"que

puedenservistosenpoblacionesdeanfibiossilvestres.O

• Quebusqueneliminartodalaevidenciadeinfecciónparasitariaantesdequelosanimalesseanliberadosdecuarentena.

Pararesolverestasdiferenciasserequiereunabuenacomunicaciónentrelos

veterinariosyelpersonaldemanejo.Algunasconsideracionesimportantesalmomentodedecidirqueenfoqueutilizarparaelcontrolparasitarioson:

• Laeliminacióndetodoslosparásitosinternosconfrecuenciaesimposibleonoserecomienda.Losnemátodosrabditiformessonnotoriamentedifícilesdeeliminarporcompleto,inclusocontratamientoantihelmíntico.Envezdetratamientosantihelmínticosprolongados,puedesermejorponerénfasisenlareduccióndecargasparasitariasatravésdeunacombinacióndetratamientosymantenimientodeunabuenahigieneenlosrecintos.

• Enlaspoblacionesdeanimalesencoloniasderesguardodestinadosaserreintroducidosalanaturaleza,puedesermejormantenerbajascargasdeparásitosconocidosporserendémicosenlapoblaciónsilvestre.Estoevitalosproblemasrespectoalaperdidaderesistencianaturaladquiridahaciaestosorganismosquepodríasernecesariaparalasupervivenciadelosanimalesdespuésdesuliberación(LylesyDobson,1993;Cunningham1996).

• Sedebeestablecerunbalanceentrelanecesidaddecontrolaroeliminaralosparásitosylosrequerimientoszootécnicosdelasespeciesanfibiassensibles.Losanimalessensiblesnotolerarantiemposdealojamientoprolongadosbajocondicionesdecuarentenaylaadministraciónreiteradademedicación(sermanejados,etc..).Laaceptacióndecargasparasitariasmenoresenestosanimalesespreferibleasometerlosauntratamientoprolongado.Elpersonalzootécnicoyveterinariodeberíallevaracabounanálisisdecosto/beneficioantesdeejecutartratamientosparasitarios.

• Esimportantediferenciarentreparásitospatógenospotenciales(porejemplo,nemátodosrabditiformes)yorganismoscomensalesqueseencuentranentractosintestinalesdeanfibios.Losprotozoosciliados,opalíneosyflagelos,sonorganismoscomensalescomunesqueporlogeneralnorequierentratamiento.


Lagamadeparásitosquesepuedenencontrarenespecímenesfecalesanfibios

esdiscutidaenlasección7.7.

Examinacióndeparásitosfecalesencuarentena Larevisiónfecalparaencontrarparásitosdebellevarseacaboenlaprimerasemanadelacuarentenayunasemanaantesdeltérminodeesta.Lafrecuenciadelasrevisionesesdeterminadaporlosobjetivosdelamonitorizaciónylasnecesidadesdelosanimalesencuarentena.

• Sielobjetivoeseliminaroreducirlacargaparasitariaaunnivelpredeterminado,larevisióndebellevarseacaboantesde,ydespués,todoslostratamientosparasitariosyrepetidamentehastaqueselleguealniveldeseado.

• Sesugiereincrementarlafrecuenciadelasrevisionesparasitariascomocomplementoparalostratamientosparasitariossi:1)Larevisióndeparásitosinicialmuestraunnúmeroaltodeparásitos;2)Sidentrodelgrupodecuarentenahaymuchosanimalesenfermosodelgados;o3)Siseidentificananimalesconunagrancantidaddeparásitosenlaexaminaciónapartirdelanecropsia.

Lasmuestrasfecalesseleccionadasparalarevisióndeparásitosdebenserlomásfrescasposiblesyserrefrigeradassinoseránprocesadasparaexaminacióninmediatamente.Enlasección7.7puedeencontrardetallesdelastécnicasdelaboratorioparalaexaminaciónenbuscadeparásitosymicrofotografíasdehuevecillosdeparásitosfecalescomúnmenteobservados.

Interpretacióndelarevisiónfecalparaencontrarparásitos Elhallazgomásimportanteenlarevisiónfecalparaencontrarparásitossonlosnemátodosrabditiformes.Estosincluyenalgusanopulmonaranfibio,Rhabdiassp.,yalosparásitosintestinales,Strongyloidesspp.Estosparásitosposeenunciclodevidarápidoydirectoquepuedellevarasuperinfeccionessilacargaparasitarianoesmitigada.Losnemátodosrabditiformeshansidoidentificadoscomounadelasmayorescausasdemorbimortalidadenanimalesquehaningresadoacautiveriorecientementeparasuusoencoloniasderesguardo(Leeycolaboradores,2006;Pessier,200(;Gagliardoycolaboradores,2008). Losanfibiosquepresentenevidenciadeinfeccionesdenemátodosdetiporabditiformeensuexamenfecaldeberíansertratadosencuarentena.Ademásdeltratamientoconantihelmínticossedebeprestarcuidadosaatenciónalahigienedelrecinto(verlasección8.4.)

• Comoyasehaseñalado,laeliminacióncompletadelasinfeccionesdenemátodosrabditiformesesmuydifíciloimposible.Esmásrealistareducirla


cantidaddeparásitosyevitarintroduciranimalesgravementeinfectadosapoblacionescautivasanfibiasestablecidas.

• Usarunsistemadecalificacióncualitativaparalacantidaddehuevosdeparásitospuedeayudaradeterminarsilosnivelesparasitarioshandisminuidoantesdesalirdecuarentena.Antesdeserliberadosdecuarentena,losanimalesdeberíantenerunnúmerobajodelarvasdeohuevecillosdenemátodos(porejemplo,menosde1huevoolarvadenematodopor2o3camposmicroscópicosdebajoaumentoenunaexaminaciónfecaldemontajeenfresco)

6.10PRUEBASYTRATAMIENTOPARAHONGOSQUITRIDIOS Loshongosquítridosdeanfibios(Batrachochytriumdendrobatidis"Bd"yBatrachochytriumsalamandrivorans""Bsal")sonunacausaimportantedeladisminuciónlocalyglobaldepoblacionesdeanfibios.Elhongoquítridoesunproblemaimportanteparalosanfibioscautivos.Aunquealgunasespeciesuotrasetapasdevidavulnerablespuedansucumbiralaquitridiomicosisduranteunperíododecuarentenarutinario,otrasespecies,sinembargo,podríanpresentarinfeccionesdebajonivelo"subclínicas"conBdoBsalquenosonevidentesenlosexámenesclínicosoenlosprocedimientosrutinariosdenecropsia.Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríanactuarcomounafuentedeinfecciónparalasespeciesvulnerables,porloquedebeintentarsedetectary/otrataraestosanimalesantesdeintroducirlosacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo. AlgunassituacionesoespeciesquepuedenserdeespecialpreocupaciónrespectoalaintroduccióndeBdoBsalaunacoleccióndeanfibiosson:

• Animalesobtenidosrecientementedelanaturaleza.• Animalesadquiridosdeotrascoleccionesdeanimalescautivosodistribuidores

comerciales.• EspeciesdelasquesesabequecomúnmentedesarrollaninfeccionesdeBd

subclínicas.Algunosejemplossonlasranastoroamericanas(Lithobatescatesbeianus),ranasleopardo(Lithobatespipiens),tritonesorientales(Notophthalmusviridescens),salamandratigre(Ambystomatigrinum),ajolotes(Ambystomamexicanum),salamandrasamericanasgigantes(Cryptobranchusspp.),ranaafricanadeuñas(Xenopuslaevis),ydendrobátidosadultos.

• EspeciesconocidaspordesarrollarinfeccionesdeBsalsubclínicas.Algunosejemplossonlostritonesdevientredefuegojaponeses(Cynopspyrrhogaster),eltritóndevientredefuegodeChuxiong(Cynopscyanurus)ylasalamandradeTamDao(Paramesotritondeloustali)(Martelycolaboradores,2014).

• Sedebetenerespecialcuidadocuandoestéconsiderandoliberarrenacuajosdecuarentena,dadoqueestospuedenalbergarBdaunnivelsubclínicoensuspiezasbucalesqueratinizadas,nodesarrollandoenfermedadesclínicashastaquesehayacompletadolametamorfosis.LasinfeccionesBdenrenacuajospor


logeneralpuedenserdifícilesdediagnosticarporlasbajascantidadesdeagentespatógenosquepuedenestarenlaspiezasbucales(peroveaaHyattycolaboradores,2007).Losmétodosdetratamientosantimicóticossegurospararenacuajosnoseencuentranampliamentedisponibles.

• LasinfeccionesBsalnohansidoregistradasenlarvasdesalamandras.Estosejemplosnoestáncompletosynosepuedeconfiarsoloenellosparadeterminaromitigarlosriesgos.AlgunasmedidasquesepuedenaplicarparadetectarBdomitigarelriesgodeinfeccionesdeBdenlosanfibiosencuarentenason:

• Necropsiasehistopatologíasrutinariasdetodoslosanimalesquemueran.LahistopatologíacutáneadetectaralesionescaracterísticasyorganismosBdsielanimalmuriódequitridiomicosis(vealasección7.3paramásdetallesdelosmétodosdiagnósticoparaBd).LahistopatologíanosiempredetectaraalosanimalesqueseanportadoressubclínicosdeinfeccionesBd.

• Pruebasdereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)enmuestrasdepielparadetectarADNdeBd.

• Tratamientoantimicóticoprofilácticodelosanfibiosqueentrenacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.

• Manteneralosanimalesentemperaturasentrelos17y23oC(silaespeciepuedetolerarlo)durantelacuarentenaparamaximizarelpotencialdemostrarquitridiomicosisclínica(Youngycolaboradores,2007).

LaspruebasPCRyeltratamientoantimicóticoprofilácticosonlosmétodosmásadecuadoscuandosetratadeportadoressubclínicosdeBd.Estassondiscutidasendetallemásabajo.Estosejemplosnoestáncompletosynosepuedeconfiarsoloenellosparadeterminaromitigarriesgos.AlgunasmedidasquesepuedenaplicarparadetectarBsalomitigarelriesgodeinfeccionesBsalenlosanfibiosencuarentenason:

• Necropsiasehistopatologíasrutinariasdetodoslosanimalesquemueran.LahistopatologíacutáneadetectaralesionescaracterísticasyorganismosBsalsielanimalmuriódequitridiomicosis(vealasección7.3paramásdetallesdelosmétodosdiagnósticoparaBsal).LahistopatologíanosiempredetectaraalosanimalesqueseanportadoressubclínicosdeinfeccionesBsal.

• Pruebasdereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)enmuestrasdepielparadetectarADNdeBsal.

• Manteneralosanimalesentemperaturasentre10y15oC(silaespeciepuedetolerarlo)durantelacuarentenaparamaximizarelpotencialdemostrarquitridiomicosisclínica(Martelycolaboradores,2013).


PruebasPCRparadetectarBdyBsalenlacuarentena LaspruebasPCRdemuestrasdepielparadetectarBdseencuentrandisponiblesatravésdelaboratorioscomercialesydeinvestigaciónyserecomiendafirmementecomopartedelosprocedimientosrutinariosdecuarentenaparalosanfibiosquevanaentraracoleccioneszoológicasocoloniasderesguardo.DetallesacercadelosmétodosderecoleccióndemuestrasparalasPCRdeBdylainterpretacióndelosresultadosseencuentrandisponiblesenlasección7.2LaspruebasPCRenmuestrasdepielparadetectarBsalseencuentrandisponiblespormediodelaboratoriosdeinvestigacionesysonaltamenterecomendadascomopartedelosprocedimientosrutinariosdecuarentenaparaanfibioscaudadosqueentrenacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.DetallesacercadelosmétodosderecoleccióndemuestrasparalaspruebasPCRdeBsalylainterpretacióndelosresultadosseencuentrandisponiblesenlasección7.2 LaspruebasPCRparadetectarquitridiosdeanfibiossonmuysensiblesydetectanunnúmeropequeñodezoosporas(lasetapasinfecciosasdelosBdyBsal).Apesardeesto,losresultadosfalsosnegativospuedensuceder,sobretodoconinfeccionessubclínicasdemuybajonivel.

• Unensayodeinfecciónexperimentaldemostróqueuntotalde3muestrasdepielobtenidasenocasionesdiferentesenunperíodode14díasincrementaránlaprobabilidaddedetectaratodoslosanimalesinfectadosconBd(Hyattycolaboradores,2007).

Puedeque,desdeunpuntodevistafinancieroologístico,llevaracabomúltiplespruebasPCRnoseaposibleparamuchosprogramasquemantienenanfibioscautivos.Porlotanto,elnúmerodevecesenquesepruebeacadaanimal(ogruposdeanimales)dependerádeunanálisisdecostosybeneficiosqueincluyaunaevaluaciónderiesgosparacadagrupodeanimalesqueentrealacuarentena,ydelosrecursosdisponiblesparalainstitución.SilosanimalesprovienendeunapoblaciónqueestálibredeinfeccionesdeBdoBsal(vealasección8.3),laspruebasespecíficasparadetectarelhongoquítridoanfibiopodríannosernecesarias.Delocontrario,lasrecomendacionesgeneralessonlassiguientes:

• Lleveacabopruebasenlosnuevosanimalesporlomenos1vezdurantelacuarentena.Esteenfoqueeselmejorsilosanimalesprovienendecoleccionesconunhistorialmédicoconocidoysincasosrecientementeidentificados(nomenosde1año)dequitridiomicosis.Debetenerencuentaqueunasolapruebapodríanodetectaratodoslosanimalesinfectadossubclínicamenteconelhongoquítrido.


• Silosanimalesprovienendesituacionesderiesgomáselevadas,debellevaracabopruebasenestosalmenos2vecesyposiblemente3durantelacuarentena.Laprimerapruebadeberíaserenlallegadaylaspruebassubsiguientesdeberíanhacerseenespaciosdetiempoaproximadamenteigualessobreunperíodode2semanas.Algunosejemplosdesituacionesderiesgomáselevadasson:1)losanimalesobtenidosdecoleccionesconhistorialesmédicosdudososodedistribuidoresquenotengancoloniasdeanimaleslibresdeBdoBsal;2)losanimalesquevienendecoleccionesconcasosrecientesdequitridiomicosis;3)losanimalesprovenientesdelanaturalezaqueentraranacautiverio;y4)casosdecoloniasderesguardomuyvaliosasenlasqueelriesgo(porpocoquesea)deintroducirBdoBsalesconsideradoinaceptable.

• Agrupacióndelasmuestrasdeprueba.Ensituacionesdecuarentenadondegrandesgruposdeanimales,provenientesdelamismaubicaciónorecinto,debenevaluadosparadetectarinfeccionesBdyBsal,podríaserposiblereducirloscostosgeneralesdelaspruebasPCRsilasmuestrassonobtenidasdeanimalesindividuales,peroselepidelaboratoriodediagnósticosquelasagrupetodasenlamismapruebaPCR.Lasdesventajasdeagruparmuestrassondiscutidasenlasección7.3

• SilaspruebasPCRparadetectarBdoBsalnoseencuentrandisponiblesonopuedenrealizarse,podríaconsiderarseeltratamientoprofilácticodelosanimalesentrantesconmedicinasantimicóticas(vea"Tratamientoprofiláctico"másabajo)oeltratamientoporcalorcuandoseaapropiado(Blooiycolaboradores,2015a).

InterpretacióndelosresultadosdelaspruebasDetallesacercadelainterpretaciónderesultadosnegativosparaBddepruebasPCRseencuentranenlasección7.3Paratomardecisionesrespectoalaliberacióndeanimalesdelacuarentena,sedebenconsiderarlossiguientesaspectos:

• SiencualquiermomentodelaspruebasllevadasacaboenlacuarentenaseidentificanaanimalesPCRpositivos,estosdeberíansertratadosconmedicaciónantimicótica(veaTratamientoprofilácticomásabajo).EnelcasodequesedetecteBsal,eltratamientoporcalorpodríaserunaopciónsiemprequeestenoexcedalatoleranciatermaldelaespeciequeestásiendotratada(Blooiycolaboradores,2015b).DebetenerencuentaquelostratamientosfallidospuedenocurriryestépreparadoparavolveraprobarpormediodePCRalosanimalesantesdeconsiderarliberarlosdelacuarentena.

• Sialgunos,peronotodos,delosanimalesdeungrupoenunahabitacióndecuarentenaresultanserPCRpositivos(osienlanecropsiaseconfirmaquelas


muertesdelgruposonacausadequitridiomicosis),TODOelgrupodebeserconsideradoinfectadoconBd/Bsalsinimportarlosresultadosindividualesdecadaanimal.Elgrupodeberásertratadoconmedicaciónantimicótica(otratamientoporcalorenelcasodeBsal,cuandoseaapropiado)ydebeserprobadodenuevoantesdeserliberadodecuarentena.

Encualquiercaso,elperíododecuarentenadeberáserextendidosiseidentificaBdoBsalenungrupodeanimalesencuarentena,estoparaintentardisiparlainfecciónyacomodareltiemponecesarioparahacerpruebasdeseguimiento.

TratamientoantimicóticoprofilácticoparaBd EltratamientoprofilácticodeanfibiosencuarentenaconmedicaciónantimicóticatalcomoitraconazolesusadocomounaalternativaparalaspruebasPCRrutinariasoenconjuntoconlaspruebasPCR.Detallesdeltratamientoantimicóticoseencuentrandisponiblesenlasección8.1.EltratamientoprofilácticorutinarioparaBdserecomiendasoloenlassiguientessituaciones:

• LosanimalesfuenteseencuentraninfectadosconBdohayunaalta

probabilidaddequeloestén.Unejemplodetalsituaciónsonlosanimalesrescatadosdelanaturalezaytraídosacoloniasderesguardoporunrealosupuestobrotedequitridiomicosis(Gagliardoycolaboradores,2008).

• LaspruebasPCRnoestándisponiblesporunavariedadderazonescomolaubicación(zonasruralesopaísesendesarrollo)oporrazonesfinancieras.

• LanecropsiaolapruebaPCRidentificóunainfecciónBdenungrupodeanimalesalojadosenunahabitacióndecuarentena.Enestassituaciones,elgrupocompletodebeconsiderarseinfectadoconBdysertratado.

Lasposiblesdesventajasdeltratamientoprofilácticorutinarioquedebensertomadasencuentaalmomentodeplanearlosprocesosdecuarentenason:

• Eltratamientomediantemedicaciónantimicóticanosiempreestoleradobienypodríasignificarunafuenteimportantedeestrésparalosanimalesqueseestánadaptandoaunnuevoentornodecautiverio.

• Eltratamientoantimicóticonoes100%efectivo.Ocasionalmente,serequieren2omásciclosdetratamientoparaeliminarlainfecciónBddeungrupodeanimalesporcompleto.Enestoscasos,llevaracabosolo1ciclodetratamientopodríadarunfalsosentidodeseguridad,loquepuederesultarenlaintroduccióndeanimalesinfectadosconBdaunacolección.


TratamientoantimicóticoprofilácticoparaBsalActualmente,lostratamientosantimicóticosparaBsalsoloestánsiendodesarrolladosysolosehanutilizadoparatratarlainfecciónBsalenunaespecie(Blooiycolaboradores,2015b).EltratamientoprofilácticorutinarioparaelBsalpuedeserconsideradoenlassiguientessituaciones:

• LosanimalesfuenteseencuentraninfectadosconBsalohayunaalta

probabilidaddequeloestén.Unejemplodetalsituaciónsonlosanimalesrescatadosdelanaturalezaytraídosacoloniasderesguardoporunrealosupuestobrotedequitridiomicosis(Blooiycolaboradores,2015b)

• LaspruebasPCRnoestándisponiblesporunavariedadderazonescomolaubicación(zonasruralesopaísesendesarrollo)oporrazonesfinancieras.

• LanecropsiaolapruebaPCRidentificóunainfecciónBsalenungrupodeanimalesalojadosenunahabitacióndecuarentena.Enestassituaciones,elgrupocompletodebeconsiderarseinfectadoconBsalysertratado.

Lasposiblesdesventajasdeltratamientoprofilácticorutinarioquedebensertomadasencuentaalmomentodeplanearlosprocesosdecuarentenason:

• ProtocolosdetratamientoparaelBsalestánsiendodesarrolladosactualmentey,hastalafecha,solociertascombinacionesdeantifúngicoshantratadolainfecciónBsalconéxitoenunaespeciedesalamandra(Blooiycolaboradores,2015b)

• Eltratamientomediantemedicaciónantimicóticanosiempreestoleradobienypodríasignificarunafuenteimportantedeestrésparalosanimalesqueseestánadaptandoaunnuevoentornodecautiverio.

• Eltratamientoantimicóticonoes100%efectivo.SesabemuypocoacercadeltratamientodelasinfeccionesBsalensalamandrasy,actualmente,nosesabemuchodelaeficaciadeestostratamientos.

6.11PRUEBASPARADETECTARINFECCIONESRanavirus Lasinfeccionesranavirussonunacausaimportantedeeventosdemortalidadmasivaenlaspoblacionesdeanfibiossilvestres,perosoloocasionalmentehayreportesdeinfeccionesranavirusenanfibioscautivos(Millerycolaboradores,2008;Pasmansycolaboradores,2008).Losbrotesreportadosenanimalescautivoshansidopequeñosolimitadosaunasolaespecie.

• Nosesabesilainfeccióntieneunabajaprevalenciaenlosanimalescautivos;silasinfeccionesenlosanimalescautivoshanpasadodesapercibidasporqueloshallazgosclínicosypatológicossesuperponenconaquellosdeotrasenfermedadesinfecciosasenanfibios(porejemplo,el"síndromedepierna


roja");osilasinfeccionesranavirusquehanocurridoenlaspoblacionescautivassonderelativamentebajavirulencia.

• Losranavirussonungrupograndedevirusrelacionados,cadaunoconuncomportamientobiológicoúnico.Estasdiferenciasensucomportamientoyvacíosenelconocimientodelabiologíadelosranavirusinterfierenconeldiseñodeprogramasdecontrolydepruebasparalascoleccionescautivas.

• Infeccionessubclínicasderanavirusyahansidodocumentadas(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007),peronoestáclarosilasinfeccionessubclínicassontransitoriasopersistenporperíodoslargosdetiempo.Esposiblequeanimalesinfectadosaunnivelsubclínicopuedanservircomounafuentedeinfecciónparalosanimalesnoinfectados,sinembargo,estoaúnnohasidodocumentadosencoleccionesdeanfibioscautivos.

• Laspreocupacionesmásimportantesencuantoalosranavirusenlosprogramasdeanfibioscautivossonqueuneventodemortalidadsignificativoocurraenunaespecievaliosa(oalolargodeunacoleccióndeanfibios),oquepoblacionescautivasinfectadassubclínicamentepuedanservircomoportadoresdenuevosranavirusparapoblacionessilvestresnoinfectadas.

Pruebasparadetectarranavirusenlacuarentena

Laspruebasrutinariasenanimalessaludablesvivosparadetectarinfeccionesranavirusenlacuarentenanosonrecomendadas.Adiferenciadelaspruebasparadetectarelhongoquítridodeanfibios,laspruebasPCRdisponiblesparalosranavirusnohansidovalidadasparaprobarsedeformaviableenanfibiosvivosparadetectarinfeccionessubclínicas.

• Lafaltadepruebassegurassignificaqueexistenimportantesdesventajaspara

laspruebasrutinariasenanimalessaludables.Estasincluyenloscostosdelaspruebas(conbeneficiosinciertos),elestrésresultantedelarecoleccióndemuestrasenlosanimalesencuarentenaylaposibilidaddedesarrollarunafalsasensacióndeseguridadsilosresultadosdelaspruebassonnegativos.

• Debeestaraltantodequealgunoslaboratoriosestándispuestosahacerpruebasenlasmuestrasapesardesuhabilidadparainterpretarlosresultadosconexactitud.

• Amedidaquesehacenavancesenelentendimientodelaspruebasdediagnósticoybiológicasdelosranavirus,esprobablequelasrecomendacionesvayancambiando.

Sisedeseahacerpruebasenlosanimalesencuarentena.Lasmejoresmuestras

quepuedepresentarsonmuestrasdetejidorecolectadasennecropsiasdeanimalesquehayanmuertoencuarentenay/otejidosrecolectadosdeanimalesenelgrupodecuarentenaquehayansidosacrificadosespecíficamenteconpropósitosderevisiónenbuscadeenfermedades.Enlasección7.4seencuentrandisponiblesdetallesacercadelaspruebasdediagnósticopararanavirus


Actualmente,laconsideraciónmásimportanteenunasituacióndecuarentenaesevitarintroduciranimalesacoleccionesqueseencuentrenclínicamenteenfermasconunainfecciónranavirusactivayclínicamentesignificativa.Algunaspropuestasparaminimizaresteriesgoincluyen:

• Larevisióndelhistorialmédicodelosanimalesdelapoblacióndeorigen.Si

hanocurridomuertesoenfermedadesrecientes(6mesesomenos)enlapoblacióndeorigen,lascualeshansidocausadasporinfeccionesranavirus,elriesgodeintroduciranimalesenfermosserámásalto.Elhistorialmédicodelapoblacióndeorigentambiéndeberíaserrevisadoenbuscadesíntomasclínicosoresultadosdelanecropsiaquepuedansugerirunainfecciónranavirus.Estosincluyen:

o hemorragiaenmúltiplestejidos,sobretodoenlapiel("síndromedepiernaroja")yeneltractogastrointestinal.

o necrosisenelhígado,riñón,tractogastrointestinalotejidohematopoyético.

o lesionesproliferativasoulcerativasenlapiel.

Debeserreconocidoqueestossíntomasyhallazgosclínicossonalaveznoespecíficosycomunesenlosanfibioscautivos.Siseidentificansíntomasclínicosolesionessospechosas,puedeintentarconfirmarodescartarunainfecciónranavirus(vermásabajo).

• Vigilanciaapartirdelanecropsiaylahistopatología(asícomoobservaciones

clínicas)paradetectarbrotesdeenfermedadesenlosanimalesencuarentenaquepresentancaracterísticaspotencialesdelasinfeccionesranavirus(vermásarriba).

• Silosbrotesdeenfermedadesy/olosresultadosdelanecropsiasugierenunaposibleinfecciónranavirus,debeusarpruebasPCRparaconfirmarodescartarlainfección.LasmejoresmuestrasparaelPCRsonlasdehígado,riñónypiel(sisepresentanlesionesenlapiel);estasmuestrasdebenserrecolectadasenlanecropsiayluegoseralmacenadascongeladas.Sinoseencuentrandisponiblestejidoscongelados,podríaserposiblellevaracaboelPCRusandotejidosquehayansidoembebidosenparafinaparahistopatologías.Lasmuestrastambiénpuedenextraersedeanimalesvivosclínicamenteenfermos,estasmuestraspuedenserhisoposcloacalesofaríngeos,biopsiasdetejidossangre.Enlasección7.4seencuentrandisponiblesdetallesacercadetécnicasderecoleccióndemuestrasparaPCRderanavirus.

Interpretacióndelaspruebasdediagnósticoparaelranavirus

Siseidentificanenfermedadesclínicasomuertesquepuedanseratribuidasaunainfecciónranavirusdentrodeungrupodeanimalesencuarentena,elperíododecuarentenadebeserprolongadoindefinidamente.Ladecisiónacercadeladisposición


delosanimalesrestantesdespuésdeunbrotedependerádemúltiplesfactores,talescomo:

• Laimportanciadelosanimalesinfectadosoexpuestosparalapoblacióncautivaylosesfuerzosderecuperacióndelaespecie.Si,durantelacuarentena,seidentificaunaenfermedadatribuidaalainfecciónranavirusenunaespeciecomúnquevaaentraraunacolecciónconfinesdeexhibición,podríaconsiderarlaeutanasiadelosanimalesrestantes.Siunaenfermedadatribuidaaunainfecciónranavirusocurreenungrupovaliosodeanimales(porejemplo,unaespecieenpeligrodeextinciónyanimalesindividualesquesonconsideradoscrucialesparaunprogramaderecuperaciónopoblaciónderesguardo),sepuedenconsideraresfuerzosadicionalesconlaesperanzadequeeventualmentelosanimaleseliminencualquierrastrodeinfeccionessubclínicas.Losanimalesenestasituacióndebensermanejadoscomounapoblaciónseparadadelapoblaciónderesguardoprimariahastaqueunavigilanciadeenfermedadesalargoplazodemuestrequeseencuentrancompletamentelibresdeinfeccionesranavirus.Vealasección8.2.

• Incidenciayduracióndeinfeccionesranavirussubclínicas.Laposibleduracióndeinfeccionesranavirussubclínicasesimpredecibleydependedemúltiplesfactorestalescomolaespeciehuésped,laespeciederanavirusyotrasinfluenciassinidentificar.XenopuslaevisinfectadosexperimentalmenteeliminaronlainfeccióndeVirusdelaranatipo3(untipoderanavirus)entansólo20días,sinembargo,ungrupodesalamandrastigreinfectadassubclínicamenteconelvirusAmbystomatigrinummostraronevidenciadeinfecciónporunmínimode6meses(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007).Silasinfeccionessubclínicaspuedensereliminadasdeformanatural,unperíododecuarentenaextendidopuedesertodolonecesarioparalaliberaciónseguradelosanimalesencuarentena.Sinembargo,comofuemencionadoanteriormente,ladeteccióndeinfeccionessubclínicasesproblemáticaycualquierdecisiónquesetomeparaliberaraanimalesdecuarentenarequeriríaunacuidadosaevaluaciónderiesgos.

• Losresultadosdelavigilanciadeenfermedadesdeseguimientoduranteunperíododecuarentenaextendido.Algunaspruebasquepuedenserútilesson:

o Engruposgrandesdeanimales,sedebeconsiderarsacrificar(eutanasia)aalgunosmiembrosdelgrupodecuarentenaparallevaracabopruebasdediagnóstico.Enestasituación,elsacrificioesmásútilparadetectarinfeccionessubclínicaspersistentessiserealizavariassemanasdespuésdequelasenfermedadesclínicasomuertescausadasporlainfecciónranavirussehayandetenido.

o Realicenecropsiasehistopatologíasentodoslosanimalesquemueranoqueseansacrificadosconelpropósitodehacerunavigilanciadeenfermedadesparabuscarlesionescaracterísticasdelasinfeccionesranavirus.


o PruebaPCRdehígadoyriñónparabuscarranavirus,estosdebenserrecolectadosenlanecropsiadetodoslosanimalesquemueranohayansidosacrificadosparalavigilanciadeenfermedades.

o PruebaPCRdeanimalesvivos(estoesunaexcepciónalarecomendaciónpreviaquedecíaquenoserealizaranpruebasPCRenanimalesvivossanos).

• Presenciaoausenciadeinfeccionesranaviruspreexistentesenlapoblacióncautivaysilvestre.Estorequiereinformescompletosdesaluddelaspoblacionescautivasysilvestresconelpropósitodeestablecerinformaciónbásicayclara.Estaconsideraciónesespecialmenterelevanteenlaspoblacionesderesguardodeanimalesenaislamientopermanentedeunacoleccióndeanfibios.Porejemplo,enunasituaciónenlaquesesabequelaspoblacionessilvestres(=fuenteorigendelosanimalesqueseusaronparafundarlacolonia)tieneninfeccionesranavirusendémicasquesucedennaturalmentedentrodelrangodelaespecie,podríatomarladecisióndemanejarlasinfeccionesranavirusenlapoblacióncautivaaislada.Estadecisiónescomplicadaydeberíasertomadacomopartedeunplangeneraldegestiónparalaespecieencuestión.Algunosfactoresatenerencuentason:1)Verificarquelasespeciesespecíficasderanaviruspresentesenlanaturalezayenlapoblacióncautivaseanlasmismas(EsteprocesoesmáscomplicadoquelaspruebasPCRnormales,vealasección7.4;2)Determinarlasprobabilidadesdequelosranaviruspresentesenlaspoblacionessilvestresycautivasrealmenteseanvirusendémicosynovirusexóticosquehansidointroducidosenlapoblaciónsilvestre.

Laconfianzaenlosresultadosyelvalordelavigilanciadeenfermedadesparalosranavirusincrementasegúnelnúmeroylacalidaddelasmuestrasdisponiblesalolargodeltiempoparalaspruebasdediagnóstico.

6.12PATOLOGÍASCLÍNICAS(HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICACLÍNICA) Durantelacuarentena,puederecolectarinformacióngeneraldepatologíasclínicasparaincrementarnuestroentendimientodelafisiologíayecologíanormaldediferentesespeciesanfibias.

• Lainterpretacióndelahematologíaylabioquímicaclínicaenlosanfibiosseencuentraensuinfancia,ylosresultadosinmediatosdelosdiagnósticosdecualquierpruebasonlimitadosytienenpocaimportancia.

• Lainformaciónobtenidapodríaserútilenelfuturoparamejorarladeteccióndeenfermedadesylosesfuerzosconservacionistasgenerales.

• Siserecolectainformacióndepatologíasclínicas,debeprocurarsederegistrarcuidadosamentelosmétodosdelaboratorioutilizadosparaobtenerlainformaciónytodalainformaciónnumérica.


Siesviable,basadoenfactorestalescomoeltamañodelanimal,lasfinanzasyladisponibilidaddeunlaboratoriodepruebasapropiado,podríallevaracabounpanelhematológicoybioquímicocompletoencadaanimaldurantelacuarentena.

• Laextraccióndesangresesuelellevaracaboduranteelexamenfísicoenla

cuarentena.• Porrazonesdeseguridad,noserecomiendaextraersangredeanimalesque

pesenmenosde50gramos.Cuandoseangrupos,puedeextraerlasangredeunnúmeroderepresentantesdelgrupo(de10%a30%delgrupo).

• Hastaquenuestroentendimientodelahematologíaanfibianormalybioquímicaclínicamejore,lainterpretacióndelainformacióndelainformacióndeberíaserprudenteyserbasadatantoenlaexperienciaclínicacomoenlassugerenciasdepublicaciones(WrightyWhitaker,2001).Unavariedaddefactorescomoelestadodehidratación,laestacionalidadyelsexodelanimalpuedeninfluenciarelresultadodelosparámetroshematológicosybioquímicosaungradomásaltoqueelobservadoenotrosanimalesvertebrados.

• Actualmente,noexistenrecomendacionesparalosparámetroshematológicos/bioquímicosquedeberíanserutilizadoscomoherramientadeexclusiónparaprevenirlaliberacióndeunanimaldecuarentena.Podríaconsiderarincrementosodisminucionesenpruebasclavecomoenlaalbúmina,conteodeglóbulosblancos,etc.,parahacerunasupuestaestimaciónyprevenirlaliberacióndecuarentenadeunanimaldelquesesospeche.Sinembargo,dadoqueelnúmerodeanimalesnormalesenelrangodereferenciaparaunaespecieesmuybajo,hacercualquierinterpretaciónestadísticaesclínicamenteinútilynoaconsejada.

Enlasección7.8seencuentrandisponiblesdetallesacercadelarecoleccióndemuestrasyelanálisisdeinformacióndepatologíasclínicas.6.13OTRASENFERMEDADESINFECCIOSASQUESEENCUENTRANENCUARENTENA

Bacteriasaerobias(porejemplo,Aeromonashydrophila)Lasinfeccionesconunavariedaddebacteriasgramnegativas,incluyendo

AeromonashydrophilaoPseudomonasspp.,sehanvistoimplicadascomolacausadeladermatosepticemiabacterial(síndromedepiernaroja)enanfibioscautivos(Taylorycolaboradores,2001).

• Haypocosoningúnbeneficioenllevaracabocultivosbacterialesrutinariosenanfibiosaparentementesaludablesencuarentena.LasbacteriascomolaAeromonasnormalmentehabitanentornosacuáticosyseencuentranfrecuentementeaisladasdelosanimalessaludables.

• Loscultivosbacterianossonútilesparalagestiónclínica(porejemplo,patronesdesusceptibilidadantibiótica)delosanimalesenfermosencuarentena.


• Elcontroldelasinfeccionesbacterianasdelosanfibiosencuarentenasecentraenreducirlosfactoresqueconfrecuenciacontribuyenaldesarrollodeestas,talescomoelestrésdelosenvíosrecientes,elhacinamientoobajacalidaddelagua(porejemplo,queestaposeaaltascargasorgánicas).

Enterobacterias(porejemplo,Salmonela)

Comolosreptiles,losanfibiosavecesportanenterobacteriastalescomolaSalmonelaspp.queposeenpotencialzoonótico(Taylorycolaboradores2001;Centrosparaelcontrolylaprevencióndeenfermedades,2010).

• Noserecomiendallevaracaborevisionesrutinariasparapatógenosentéricosnitratamientosdeanimalesinfectados.Encambio,debenexistirprácticashigiénicasparareducirlasposibilidadesdequeloscuradoresseinfectenconenterobacteriasdeorigenanfibio.

• Pautasparaprácticasdehigieneseencuentrandisponiblesenlíneaen:o CompendiumofMeasurestoPreventDiseaseAssociatedwithAnimalsin

PublicSettings2009—CentersforDiseaseControlandPrevention.www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/rr5805a1.htm

o SalmonellaBacteriaandReptiles—AssociationofReptileandAmphibianVeterinarians.www.arav.org/ECOMARAV//timssnet/arav_publications/SalmonellaOwner.pdf

ChlamydophilaLasinfeccionesdeChlamydophilapsittaci,Chlamydophilapneumoniae,yotros

organismosdetipochlamydiaestánsiendoreconocidoscadavezmásenanfibioscautivosycriadosenlibertad(CorsaroyVenditti,2004;Blumerycolaboradores,2007).

• Lachlamydophilosispuedepresentarsedevariasformas,incluyendounamuerte

inesperadaounasimilitudal"síndromedepiernaroja".• Algunaslesionesquepuedenaparecerenlahistopatologíasonlanecrosisyla

inflamaciónnosupurativaentejidostalescomopulmón,riñón,hígadoycorazón.Enlamayoríadeloscasos,sisellevaacabounahistopatologíadelostejidosafectados,sepodránobservarinclusionescitoplasmáticasbasófilasintracelularesfinamentegranulares.

• LaconfirmacióndeldiagnósticoesllevadaacabomedianteinmunohistoquímicausandoanticuerposmonoclonalesantiLPSChlamydiaceaeespecíficosalafamiliaopormediodereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)paralaclamidia16sRNAylosgenesompA.Noserecomiendanlaspruebasrutinariasenlosanimalessaludablesencuarentena.Silachlamydophilosisesdetectada,elperíododecuarentenadeberíaextenderse

paraelrestodelosanimalesdelgrupoconelpropósitodemonitorearparaeldesarrollo


desíntomasclínicosdeenfermedades.Eltratamientodelrestodelosanimalesconantibióticosdelgrupodelastetraciclinaspuedeserconsiderado(Taylorycolaboradores,2001).PuedeintentarllevaracabopruebasPCRusandohisoposdecloaca,peroestaspruebasnohansidovalidadasconestepropósitoylarevisiónrutinariadelosanimalessaludablesnoesrecomendada.

Micobacteriosis

LasinfeccionesconbacteriasacidorresistentesenelgéneroMycobacterium,incluyendoM.fortuitum,M.marinum,M.chelonaeyM.xenopi,entreotros,sonunproblemacomúnenlascoleccionesanfibiascautivas.

• Estosorganismossonhabitantesubicuosdelosambientesacuáticos(Primmy

colaboradores,2004).• Estasmicobacteriassuelenserpatógenosoportunistasqueaparecenpor

factorestalescomolesionescutáneas,malcuidadozootécnicooestrés.• Lasituaciónlosprogramasdecautiveriopodríasersimilaralaregistradaenaves

dezoológico,dondelafuenteoriginaldelainfecciónfueunareservamedioambientalenvezdelatransmisióndeanimalaanimaldeunorganismoparticular(Schrenzelycolaboradores,2008).

• Losanimalesgravementeinfectadospodríanactuarcomofuentedeinfecciónparalosotrosanimalesdeungrupo,dadoqueestospuedendesprenderungrannúmerodeorganismos,loqueexcederíalosniveles"normales"deexposiciónaestasbacteriascomparadasconloshábitatsacuáticos.

• Elobjetivodelassituacionesdecuarentenanoesdetectaracadaanimalconunainfecciónsubyacentepormicobacterias,sinoqueesevitarlaintroduccióndeanimalesconmicobacteriosisvisibleclínicamenteimportantes(quetienenlasmásaltasprobabilidadesdedesprenderungrannúmerodeorganismos)aunacoleccióndeanfibios.

Lossíntomasclínicosdelamicobacteriosisporlogeneralsonrelacionadosala

piel,estosincluyenúlcerascutáneas,abscesos,nóduloscutáneosehinchazónenlasextremidades(celulitis)quenoseresuelvencontratamientocomplementariooterapiasantibióticasoantimicóticas.

• Ladiseminacióndeórganosvisceralescomoelhígadoyelriñónsellevaacabo

frecuentemente.Enlasinfeccionesdiseminadassepuedenobservarsíntomasnoespecíficostalescomolapérdidadepesoapesardebuenapetitodelanimal.

• Lasinfeccionespuedenaparecercomobrotesenunapoblación,peroporlogeneralestasaparecencomoeventosesporádicoslimitadosaunsoloanimal.

Eldiagnósticodemicobacteriosisesproblemáticoenlosanimalessinlesionescutáneasobvias.


• Lasrevisionespormediodetincionesacidorresistentesdeportaobjetosconheces,mocoorofaríngeoocapasdelodocutáneasnopuedenpredecirenfermedadesenanimalesquesuperficialmentesevensaludablesynoserecomiendan.

• Asimismo,laspruebasPCRseencuentrandisponiblesparalasmicobacteriasambientales,perosuutilidadparallevaracabodiagnósticosconfiablesbasadosenmuestrascomohisoposdecloacaocutáneos,enanimalessuperficialmentesaludables,esdesconocida(existenungranpotencialpararesultadosfalsosnegativosofalsospositivos).

• Siseobservanlesionescutáneas,unaexaminacióncitológicadelaspreparacionesoaspiracionessuperficialespormediodeunatinciónacidorresistentepuedeentregarudiagnósticorápido(Pessier2007).Lasbiopsiasehistopatologíasdelaslesionescutáneasconunatinciónacidorresistentetambiénsonundiagnóstico.

Paraelmanejodelamicobacteriosisenlacuarentena:

• Reviseelhistorialmédicodelosanimalesdelapoblacióndeorigen.Sihan

habidocasosrecientes(dentrode3a6meses)demicobacteriosis,extiendaelperíododecuarentena(90días)paraobservaralosanimalesentrantesybuscarlesionescutáneas,evidenciadepérdidadepesocrónicauotrossíntomasnoespecíficosdemalasalud.

• Sienungrupodecuarentenaseidentificaaanimalesconmicobacteriosis:o Coloquealrestodelosanimalesdelgrupoenunperíododecuarentena

extendido(90días)paraobservarlosenbuscadelesionescutáneasoevidenciadepérdidadepesocrónicauotrossíntomasnoespecíficosdemalasalud.Losanimalesenfermosquemuestrenevidenciadeinfeccióndebenserremovidosytrasladadosaunrecintodeaislamientoseparadoosedebeconsiderarsusacrificioyeutanasia.Estaopciónesmásdeseablesobretodoenanimalesdegranvalorcomoporejemplounaespecieenpeligrodeextinciónqueescríticaparalacrianzadentrodeunacoloniaderesguardo.

o Silosanimalesnosontanvaliosososinoesposibleextenderelperíododecuarentena,podríaconsiderarselaeutanasiadelosanimalesdirectamenteexpuestos(delamismajaula)yaseasipresentanonopresentanseñalesdeestarenfermos.

• Noliberedelacuarentenaaanimalesconlesionescutáneaspormicobacteriasoquepresentenotrasposiblesseñalesdemicobacteriosis.Porlogeneral,eltratamientodelamicobacteriosisanfibianohasidoexitosoyserecomiendalaeutanasiadetodoslosanimalesquepresentensíntomasclínicosdeenfermedad.Eltratamientopuedeserconsideradounmétododerescateparaanimalesmuyvaliosos.


• Losanimalespertenecientesaungrupoconcasosconfirmadosdemicobacteriosispuedensercandidatosparasuliberacióndecuarentenasidespuésde90díasdeobservaciónyanopresentanlesionescutáneasuotrossíntomasclínicosquepuedansercausadosporunainfecciónpormicobacterias.

o Estonogarantizaquelosanimalesesténlibresdeunainfecciónpormicobacterias,peroreduceelriesgodeintroduciraanimalesqueesténdesprendiendounaltonúmerodeorganismosaunacoleccióndezoológicooaunacoloniaderesguardo.

o Alprincipio,tratedeintroduciraestosanimalesenrecintosenlasquenohayamuchosanimalesconlosquetengacontactodirecto(enlamismajaula).

• Finalmente,lainfecciónconlamicobacteriaambientalhasidoconsideradaunazoonosispotencial.

o Elriesgogeneraldelatransmisióndeestosorganismosdesdeanimalesahumanosesbajo,yalgunasmedidasútilesquesepuedentomarparaevitarlainfecciónhumanason:1)Elusodeguantesduranteelmantenimientodelosrecintosoduranteelmanejodelosanimalesparaminimizarlasposibilidadesdelainoculacióndeorganismosenheridascutáneas;y2)Evitarlosaerosolesdeaguaolosmaterialesambientales(comoelcontenidodelossistemasdefiltraciónbiológicos).Enesteaspecto,elusodemascarillasoprotectoresfacialespuedeserútil.

Infeccionesmicóticasydemohosacuáticos Unagranvariedaddeinfeccionesmicóticassistémicasocutáneasseproducenenanfibioscautivos.LasinfeccionesmáscomunessondermatopatíasmicóticascausadaspororganismostalescomoBasidiobolusranarum,Mucorsp.,Fusariumsp.ymohosacuáticoscomoSaprolegenia(Taylor,2001;Pessier,2003).

• Casitodoslosdiversoshongosqueafectanalosanfibiossonubicuosenelmedioambienteysuelenaparecercomoinfeccionessecundarias(enlugardeactuarcomopatógenosprimarios).

• Eliminarcompletamenteaestoshongosdelosrecintosnoespráctico.Laimportanciayaceenlasprácticaszootécnicasparareducirelestrésdelosanimales,proveerunmedioambientelibredeexcesosdedesechos(comida,heces,materialendescomposición)quepuedanfacilitarlossustratosnecesariosparaelcrecimientoexcesivodehongosymejorarlacalidaddelagua(porejemplo,laexposiciónalamoniaco).Todosestosfactoresambientalescontribuyenaldesarrollodeinfeccionesmicóticas.

Eldiagnósticodelasinfeccionesmicóticasenlacuarentenasellevaacaboatravésdelaobservacióndirectaeinvestigacióndediagnósticodelaslesionescutáneas(porejemplo,raspadocutáneoparalacitologíaounabiopsiacutánea)ounahistopatologíadelosanimalesfallecidos.


• Cultivoscutáneosydelosórganosvisceralesafectadospuedenayudara

determinarlaespeciedelhongoconelqueestáinfectadoelanimal.Lainterpretacióndeloscultivospuedeserproblemáticadebidoalaincertidumbredesielhongocultivadosoloseencuentraenelmedioambienteosiestáenfermandoaunanimalenparticular.

• Eltratamientoesdoble:1)Tratealosanimalesafectadosconmedicamentostópicosy/odeadministraciónparenteralcomoelitraconazol;y2)Mejorelasprácticaszootécnicasparaincrementarlacalidaddelagua,reducirlaexposiciónmicóticayreducirelestrésdelosanimales.

6.14LITERATURACITADABlumer,C.,D.R.Zimmermann,R.Weilenmann,L.Vaughan,andA.Pospischil.2007.

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Cap.7:Pruebasdediagnóstico—117

Capítulo7

PRUEBASDIAGNÓSTICAS

7.0INTRODUCCIÓN Elcontroldelosproblemasdeenfermedadesenlascoloniasderesguardoyreintroducciónalanaturalezaparaanfibiosdependedelosprogramasdevigilanciadeenfermedades,unaidentificaciónprecisadeestosproblemaspormediodemétodosdelaboratorioyunainterpretaciónapropiadadelosresultadosdelaboratorio.

Algunosaspectosimportantesdelavigilanciaypruebasdedeteccióndeenfermedades

son:

• Principiosdemuestreodelaspoblacionesparadetectaragentesinfecciosos(porejemplo,determinarelnúmerodeanimalesdelosquesedebenobtenermuestrasparaestarsegurosdequeunapoblaciónseencuentralibredeagentesinfecciosos).

• Evaluacióneidentificacióndeloslaboratoriosquepuedenllevarcabopruebasdediagnósticodemuestrasanfibias.

• Seleccionarlapruebadediagnósticomásapropiadaparaelagenteinfecciosodeinterésyparalasituaciónocontextoenqueseusaralaprueba.

• Recolectarelmejortipodemuestraparalapruebaquesellevaraacabo.• Interpretaciónadecuadadelosresultadosdelaspruebas(Estoessobretodo

importanteparapruebasdediagnósticomolecularo"PCR").• Usarlanecropsia(examinaciónpostmórtem)comounaimportanteherramienta

paraidentificarymanejarproblemasdeenfermedadesencoloniasanfibias(yaseadeenfermedadesinfecciosasonoinfecciosas)yparallevaracaboanálisisderiesgodeenfermedadesenprogramasdereintroducciónalanaturalezaparaanfibios.

Estecapítuloapuntaaentregarunadescripcióndeestostemaseincluye:

• Discusióndemétodos,recoleccióndemuestrasdediagnósticoeinterpretacióndelaspruebasparamétodosdelaboratoriocomúnmenteusadosparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasenlascoloniasderesguardoparaanfibios.

• Seponeénfasisenlaspruebasdediagnósticomolecularparaagentespatógenosimportantes(porejemplo,infeccionesranaviralyhongoquítridoanfibio)ylarevisióndehecesenbuscadeparásitosfecales.

• Laexaminaciónapartirdelanecropsiasediscuteendetalleenelcapítulo9.• Unalistadelaboratoriosqueaceptenmuestrasanfibias.


Seesperaqueestainformaciónrecopiladaseaútiltantoparaelpersonalenubicacionesdentrodepaísesquenoposeanapoyoveterinariodisponibleasualcancecomoparaveterinariosqueesténtrabajandoparadesarrollarprotocolosdesaludparaanfibios.7.1VIGILANCIADEENFERMEDADES Lavigilanciadeenfermedadeseslaprácticadebuscarenfermedadesconlaintencióndecontrolarlassifueranecesario.Enlosprogramasdeconservación,lavigilanciadeenfermedadesexsitu(cautivos)einsitu(poblacionessilvestres)esnecesariaparadetectarproblemasdeenfermedadesquepuedanamenazarlasostenibilidaddelaspoblacionesderesguardoyeléxitodelosprogramasdereintroducciónalanaturaleza.Dehecho,dadoquelasenfermedadesinfecciosashanjugadounpapeltanimportanteeneldeclinedemuchaspoblacionesanfibias,elcontroldeproblemasdeenfermedadesqueocurranenpoblacionesinsituesnecesarioparaeléxitolosesfuerzosconservacionistasexsituqueinvolucrenlareintroduccióndeanimalesalanaturaleza.Lavigilanciadeenfermedadesesnecesariapara:

• Detectarymitigarproblemasdeenfermedadesantesdequecauseneventosdemortalidadquepuedantenerefectosnegativosenlaspoblaciones.

• Determinarrápidamentelacausademortalidadenunapoblaciónconelobjetivodelimitarlosimpactosdelosbrotesdeenfermedades.

• Limitarelpotencialdepropagacióndeenfermedadesinfecciosas.Estoesespecialmenteimportantecuandolosanfibiossontrasladadosdesdelanaturalezaacautiverio,entreinstalacionesdecautiverioydelcautiverioalanaturaleza.

• Cuandoestéplaneandounacuarentenaoreintroducciónalanaturalezadeanfibios,recopilelainformaciónnecesariaparaelanálisisderiesgodeenfermedades.

• Detectarlasenfermedadeszoonóticaspotencialesparamaximizarlasaludyseguridaddelostrabajadoresdelaconservación.

Unalistaderecomendacionesespecíficasparacuandolavigilanciadeenfermedadesseanecesariaseencuentraenlasseccionesanterioresdeestemanualquetratandeevaluaciónderiesgos,cuarentenaybioseguridad.Lavigilanciadeenfermedadesdebeadaptarseacadaespecieanfibiaydependedefactorestalescomosusceptibilidadacadaagentepatógenodeinterés,presenciadelpatógeno,objetivosdeconservaciónalargoplazoparalaespeciebajoconsideraciónyconsideracionesprácticasdelosrecursosdisponibles.Conestoenmente,laflexibilidadypriorizacióndelosprogramasdevigilanciasonimportantes.

¿Cómosellevaacabolavigilanciadeenfermedades? Lavigilanciadeenfermedadesestádiseñadaparavigilaraunapoblaciónenbuscadeagentespatógenosnovedososytambiénparadeterminarelestadodeenfermedadesdeunapoblación,lacargadeenfermedades(prevalencia)otasadepropagacióndeenfermedades(incidencia)dentrodeesta,uotrascaracterísticastalescomomorbilidadomortalidadrelacionadasaenfermedades.Porejemplo,¿Tienelapoblaciónunaenfermedad


ono?,¿quéproporcióndelapoblacióntieneunaenfermedad?,¿existeunincrementodelnúmerodeinfeccionesnuevas?,lavigilanciapuedeenfocarseespecíficamenteenconoceragentesinfecciosososuimportancia(porejemplo,hongoquítridoanfibio),opuedeserdiseñadaparadetectarunavariedaddeproblemasdeenfermedadespotencialesydiferentes.

• Elprimerpasoesrecolectarunhistorialtantodelapoblacióndeinteréscomodelasespeciesquecoexistanconlapoblaciónenlanaturalezaodentrodeunainstalacióndecautiverio.Lainformaciónquepuedeserdeutilidadincluye:Tamañodelapoblación,estructuraporedad,origen(porejemplo,criadosenlamismainstitución,atrapadosenlanaturaleza),fuentedelosproductosalimenticios,historialalimenticio,historialdelacondicióncorporal,etc.

• Dependiendodelainformaciónquesedeseeobtener,puedellevaracabopruebasengruposconunaltoriesgodeenfermedadesdentrodelapoblación,talescomoanimalesmuertosoenfermos(veaelcapítulo9),paraincrementarlasprobabilidadesdedetectarenfermedades.

• Porlogeneral,esmásrentablehacerpruebasenunaporcióndelossujetosdelapoblaciónqueentodoelgrupoopoblación.Hayvariosmétodosdemuestreodepoblaciones,peroserecomiendausarmétodosdemuestreoalazarcuandoseaposibleyapropiadoparaevitarunpotencialsesgoenelmuestreo(veamásabajoparaencontrarmétodosdemuestreoadicionales).

• Sedebenobtenertamañosapropiadosdemuestrassisequieredeterminarelestadodeenfermedadesdelaspoblaciones.

Definirlapoblacióndeinterés

Lapoblacióndeinterésparalasinvestigacionesdeenfermedadesvariarádependiendodelarazóndelmuestreoolapreguntadeinterésdelainvestigación.Cuandoseestédefiniendolapoblacióndemuestreo,sedebentenerenconsideraciónlascaracterísticasdela(s)población(es)deorigen,estoincluye,peronoestálimitadoa:

• Elperíododetiempodeobservaciónespecificado.• Cuáleslaespeciedeinterés(porejemplo,unaespecie;todaslasespeciesdeuna

regiónuhábitatespecíficos).• Sielestudioestáenfocadoenunaregión,instalaciónorecintoespecíficos.• Sielestudioestáenfocadoenanimalesenfermos;animalespresentadosparala

necropsia;animalesprobadosparaenfermedadesinfecciosasespecíficas.• ¿Estáelestudioenfocadoenunaenfermedadoespecieespecíficas,paralascuales

deberíaconsiderarlascaracterísticasimportantesdelahistoriadevidaparadefinirlaspoblacionesdeorigenomuestreo?Porejemplo,¿Laenfermedadafectasoloaadultos(encuyocasolapoblacióndemuestreodeberíaenfocarsesoloenadultos)?


Muestreodelapoblación Losmétodosporloscualessellevaacaboelmuestreodelaspoblacionessonimportantesporquelasdiferenciasenlametodologíademuestraspueden:

• Sesgarlosresultadosqueobtengayafectarlaprevalenciaopresenciapercibidasdeenfermedadesenunapoblación.

• Afectareldesempeñodelaspruebasdediagnóstico.• Afectareldesempeñodelaspruebasdediagnósticoy,porende,afectarla

capacidaddelinvestigadorpararespondersupreguntadeinvestigación.Sehandesarrolladovariosmétodosdiferentesdemuestreodeenfermedadesenpoblacionesdeanimales,ylaeleccióndelmétododemuestreodebebasarseenelpropósitoespecíficodelmuestreo,eldiseñodelestudioylafacilidadparaobtenermuestras.Sehandesarrolladométodosprobabilísticos(basadosenigualarlasposibilidadesdequeunsujetoenparticularseaseleccionado)ynoprobabilísticos(basadosenlaconvenienciaopropósitodelmuestreoengruposdealtoriesgo)utilizandodiseñossimplesycomplejos(porejemplo,muestreoestratificadooporconglomerado) yestospuedenserrevisadosentextosestándardeepidemiologíaveterinaria(Thrusfield,2007). Cuandosehagaunmuestreoenpoblacionesanfibiasparabuscarenfermedades,esimportantetenerencuentacomosonelegidoslosindividuosparaprobarlosenbuscadeagentespatógenosespecíficosycomoestoafectaríalainterpretacióndelosresultados.Paraestimarlaprevalenciadelasenfermedadesenunapoblación,senecesitanmuestrasdeunsubconjuntorepresentativodelapoblacióndeorigen.

• Sinosehaceunmuestreodetodalapoblación,lossujetosdebenserelegidosusandounametodologíasistemáticaaleatoriademuestreocuandoseaposible.Porejemplo,sisevanarecolectarmuestrasde30de100anfibios,losanfibiosdebenserseleccionadosaleatoriamenteydeberíanrepresentarrecintossimilaresoigualesquelosdelrestodelapoblación.

• Tengaencuentadiferenciasenelcomportamientodelosanfibiosquepuedanafectarlainterpretacióndeladetecciónoprevalenciadeenfermedades.Porejemplo,lossujetosquesonmásfácilesdeatraparpuedenestardesproporcionadamenteinfectadosconunagentepatógeno(porej.,losanimalesmásfácilesdeatraparsonlosenfermos)y,porconsiguiente,inclinaríansusestimacionesdeprevalenciadeinfeccionesaunnivelmásaltoqueelverdadero.Asimismo,losindividuosqueusenelespaciodelrecintodeunaformaenparticulartambiénpodríansesgarelresultadosisucomportamientoestáinfluenciadoporunainfección.

Determinareltamañodelamuestra

Laspruebasparadetectaragentespatógenospuedenestarenfocadasenanimalesindividualesparaevaluarlasaludindividualodetodaslaspoblacionesparadeterminarel


estadodeinfecciónosaluddelapoblación.Cuandosehaganpruebasenpoblaciones,sedebetenerenconsideracióneltamañodelamuestrapara:

• Asegurarsedeseleccionaralosindividuossuficientespararesponderlapreguntadeinterésdeunaprueba.

• Determinarlaprecisiónconlaquesepuedenhacerestimacionesdeprevalenciayotrasestadísticas.

• Evitarelsobremuestreoinnecesariocuandolosrecursosseanlimitados;estepodríasercostosoyconsumirmuchotiempoynosiempreproveeráinformaciónadicionalacercadelasmedicionesdeenfermedadesanivelpoblacional.

Eltamañodemuestrarequeridoparadeterminarsiunagenteinfecciosoestápresenteenunapoblaciónocualeslaprevalenciadeinfecciónenunapoblaciónporlogeneralrequiere:

• Conocimientooestimadosdeltamañodelapoblacióndelacualseránrecolectadaslasmuestras.

o Generalmente,cuandolapoblaciónesgrande,ungrannúmerodeindividuosenlapoblación(perounapequeñaproporcióndelapoblacióntotal)necesitarasermuestreadaparaestimarlaprevalenciaodetectarlapresenciadeunaenfermedad,comparadoconelmuestreoenunapoblaciónpequeña.Generalmente,cuandolapoblaciónespequeña,unaproporcióngrandedelapoblación(peromenoralnúmerototaldeesta)necesitarasermuestreadaparaestimarlaprevalenciaodetectarlapresenciadeenfermedades,comparadoconelmuestreoenunapoblacióngrande.Silapoblaciónesmuypequeña,puedequecasitodoslosindividuosnecesitensermuestreadosparatratarderesponderlaspreguntasdeinterésdelaprueba.

• Laprevalencia(oincidencia)esperadadeunainfecciónenlapoblación(porej.,laproporcióndelapoblaciónconinfección).Amenudo,laprevalenciaesperadaqueseusaenelcálculodeltamañodelamuestraseráunasuposición.Unabuenaestrategiadeestimacióndeberíaserdiseñadaparamaximizareltamañodemuestranecesariopararesponderlapreguntadeinteréssinsobremuestreosinnecesarios.

o Cuandoseestécalculandoeltamañodemuestraparadetectarlapresenciadeunaenfermedadenunapoblación,uselaprevalencia(oincidencia)mínimaesperada.Enestoscálculosunaprevalenciaesperadamenorresultaraenuntamañodemuestramásgrande.Porejemplo,siestimaquelaprevalenciaestaráentre2%y10%,calcularuntamañodemuestraquecorrespondaalaprevalenciamínima(2%)resultaráenuntamañodemuestramásgrandeyseráelmejorestimadodeprevalenciaparautilizar.

o Cuandoseestécalculandoeltamañodemuestraparaestimarlaprevalencia(oincidencia)deenfermedades,senecesitaráuntamañodemuestramás


grandeparaestimarlaprevalenciaaun50%enunaprecisiónestimadaqueen0%o100%.Porejemplo,sicreequelaprevalenciaseencuentraentre10%y20%,elegirelestimadodeprevalenciade20%paraloscálculosdetamañodemuestrasresultaraenuntamañodemuestramásgrande.Asimismo,sicreequelaprevalenciaseencuentraentre80%y90%,elegirelestimadodeprevalenciade80%paraloscálculosdetamañodemuestrasresultaraenuntamañodemuestramásgrande.Dadoqueeltamañodemuestramáximoparaestimarlaprevalenciasiempreestáen50%,losestimadosdeprevalenciamáscercanosaestenúmerosiempreresultaraenuntamañodemuestramásgrande,ypodríanserlosestimadosdeprevalenciamásconservadoresparautilizar.

• Elniveldeseadoderelevancia(precisiónestadística)alencontraralmenosa1animalinfectadooendeterminarlaprevalencia.Porlogeneralestoestafijoenunintervalodeconfianzade95%(oalpha=0,05).

o Comofueseñaladoanteriormente,porlogeneral,siunapoblaciónesgrande,seránnecesariosmásindividuosparaidentificaraunanimalinfectado.Esteeselcasohastaciertopuntohastaqueelnúmeronecesarioseestabilice,ydependerádelaprecisiónestadísticadeseada.

o Enpoblacionesmuypequeñas,todoslosindividuospodríansermuestreados,ypuedequeaunasíelestadodeenfermedadesenlapoblaciónnopuedaserdeterminadoalgradonecesariodeprecisiónestadística.

• Conocimientoacercadelaprecisióndelaprueba.Estoincluyelasensibilidaddelaprueba(lahabilidadparaclasificaratodoslosanimalesinfectadoscomopositivosparalosagentesinfecciososbasadosenlosmétodosdeprueba)ylaespecificidaddelaprueba(lahabilidadparaclasificaratodoslosanimalesnoinfectadoscomonegativosparalosagentesinfecciososbasadosenlosmétodosdelaprueba).

o Muchoscálculosdetamañodemuestranotomanenconsideraciónlasevaluacionesdeprecisióndelaspruebasyasumenquelapruebadediagnósticosiemprees100%precisa.Aunqueseanapropiadosenalgunassituaciones,silaspruebasdediagnósticonofuncionanbien,loscálculospodríansesgarsuestimadodetamañodemuestraymostrarlomáspequeñodelonecesarioparaabordarlaspreguntasdelestudio.

o Lasfórmulasparaincorporarpruebasimperfectasaloscálculosdetamañodemuestrassoncomplejas,perohansidoincorporadasalprogramainformáticoFreecalc(veaThrusfield,2007,paradiscusionesrespectoaltratamientoFreecalcdecálculosdetamañodemuestrasconpruebasimperfectas).Podríaserútilincluirvaloracionesdelasensibilidadyespecificidaddelaspruebasconcálculosdetamañodemuestrascuandoseaposible,aunqueestosparámetrosgeneralmentesondesconocidos.

o Sinoseincluyenajustesparapruebasdediagnósticoimperfectas,losinvestigadoresdeberíantenerencuentacomolaprecisióndelaspruebaspodríaafectarlainterpretaciónyresultadosdelosestudiosydeterminarsi


ajustarlosmétodosdemuestreo(porejemplo,hacermuestreosenmásanimales)seríanecesario.

• Muchosdelosparámetrosnecesariosparaestoscálculossondesconocidosenlasenfermedadesanfibias.

Loscálculosdetamañodemuestraspuedenserespecíficosparaeldiseñodeunestudio,laprevalenciaesperada,tamañosestimadosdepoblación,preguntasdeinterés,etc.Loscálculospuedensercomplicadosypodríanrequerirlaparticipacióndeunepidemiólogoounestadístico.Ejemplosdeecuacionesquepuedenserusadasparacalculareltamañodemuestraseentreganenelapéndiceoenlibrosestándardeepidemiologíaveterinaria(veaThrusfield,2007).Tablasquepodríanayudaraobteneraproximacionesrápidasdetamañodemuestrastambiénseencuentrandisponibleslostextosdeepidemiología(veaThrusfield,2007)yenalgunascalculadorasenlínea(veamásabajo);sinembargo,elinvestigadordeberíaestarconscientedelasecuacionessubyacentes(ydesussuposiciones)usadasencualquiertablaocalculadorayevaluarsuadecuaciónasuestudioenparticular.

• AusVetAnimalHealthServices:http://epitools.ausvet.com.au/• OpenEpi:http://www.openepi.com/Menu/OpenEpiMenu.htm• EpiInfo:http://www.cdc.gov/EpiInfo/

7.2EVALUACIÓNDELABORATORIOSQUEREALIZANPRUEBASDEDIAGNÓSTICOMOLECULARES(REACCIÓNENCADENADELAPOLIMERASA"PCR")

Laspruebasdediagnósticomolecularesqueutilizanpruebasdereacciónencadenadelapolimerasa("PCR")paradetectaragentesinfecciosostalescomoelhongoquítridoanfibiooranavirussonherramientasútilesparalagestióndelosproblemasdeenfermedadesenlaspoblacionesdeanfibioscautivosylascoloniasderesguardo.Estaspruebassehanvueltomuycomunespara:1)Revisióndeanimalesencuarentena;2)Revisióndepoblaciones(silvestresocautivas);3)Revisióndelosanimalesantesdesuusoenprogramasdereintroducciónalanaturaleza;y4)Paraeldiagnósticodeanimalesenfermos.

• Enelcasodemuchosagentespatógenosanfibiosimportantes,losprotocolospararealizarestaspruebasestánpublicadosenliteraturacientíficayelequiponecesarioparallevaracabolaspruebasseencuentraampliamentedisponibleenuniversidadesylaboratoriosprivados.Comoresultado,laspruebasparadetectaragentespatógenosanfibiosseencuentrandisponiblesenunacantidaddefuentesdiferentes.

• Loslaboratoriosqueofrecenpruebaspuedenvariarenormementeen:o Experienciaconpruebasdediagnósticoparadetectaragentesde

enfermedadesinfecciosas.o Suhabilidadparaayudarloainterpretarcorrectamenteresultadosde

pruebas.


o Puntualidadparaentregarresultados.o Suhabilidadparaentregarresultadosconfiables.

• Enellaboratoriosedebenutilizarprácticas,validacióndepruebasymedidasdecontroldecalidadapropiadasparaevitarlainformaciónerróneaoengañosa.

• Laspautasparaunaapropiadarecolecciónymanejodemuestraspuedenserdiferentesparacadalaboratorio.Tenerunabuenacomunicaciónconellaboratorioseleccionadoparaprocesarlasmuestrasesesencialparaobtenerresultadosóptimos.Serecomiendabuscarreferenciasdellaboratorio.

Estasecciónproporcionaalgunaspreguntasypautasquepuedenserutilizadasparaevaluaryseleccionarunlaboratorioqueentregarapruebasdediagnósticomolecularesparadetectaragentespatógenosanfibiosimportantes.¿Quétipodepruebautilizaellaboratorio?ExistendostiposprincipalesdepruebaPCR:PCRconvencionalyPCRentiemporeal.

• SiellaboratorioutilizaPCRconvencional,preguntecomosonverificadoslos

resultadospositivos.EnlaPCRconvencional,elproductodelareaccióndeunapruebaporlogeneralesvisualizadomedianteelectroforesisengeldeagarosa,lacualseparalosfragmentosdeADNportamaño.DadoquelosfragmentosdeADNnopatógenospuedenteneruntamañosimilaraldelosfragmentosdeADNpatógenos,esposibleobtenerfalsospositivossisoloserealizalaelectroforesisengel.Porlotanto,esimportanteconsiderarsisonnecesariasunasecuenciacióndeADNohibridaciónespecíficaparaverificarlosresultadosdelosanálisis.

• LaPCRentiemporeal(sifuevalidadaenunlaboratorio)tienealgunasventajassobrelaPCRconvencional.Estasincluyen:1)Mayorsensibilidaddelaspruebas;2)NohaynecesidaddeverificarlosresultadospositivosmediantesecuenciacióndeADNsiseutilizaelmétodoTaqmanentiemporeal(UnasondadeADNespecíficaesincluidaenelproceso);3)LaposibilidaddeincluircontrolesinternosquepuedandetectarinhibidoresdePCR;y4)Resultadosrápidos.

• SiellaboratorioutilizaPCRentiemporeal,averigüesilaspruebasutilizantintesfluorescentes(SYBRGreen)osondasfluorescentesdereporteo(Taqman).LaPCRTaqmanutilizaunasondainternaparaincrementarlafidelidaddelosresultadosmientrasquelaPCRcuantitativaSYBRGreensebasaenpuntosdefusiónyporlotantoesmenosespecífica(existelaposibilidaddefalsospositivos).

• SiellaboratorioutilizaPCRentiemporeal,averigüecuantasvecesserealizalapruebaparacadamuestra.PodríaserimportantecorrerlasmuestrasportriplicadodebidoaerroresinherentesdelaPCRentiemporealdebidoabajosvolúmenes,erroresenelpipeteoydesviacionesenladetecciónporláserenalgunospozosindividuales.

• IndependientementedeltipodePCRutilizado,averigüequeutilizaellaboratoriocomomuestrasdecontrolnegativasypositivas.EnlasPCRentiemporeal,sedebecorrerunaseriededilucionesdemuestrasconocidacomovaloraciónencadalote


demuestrasdeprueba,sisepuededeterminarcualquiertipodeinformacióncuantitativa.

¿Cuálessonloslímitesdesensibilidadyespecificidaddelaprueba?RespectoalaspruebasPCR,esimportantedistinguirentresensibilidadyespecificidad"analíticas"yde"diagnóstico"(SaahyHoover,1997).Nuncaexistiráunapruebaquesea100%sensibley100%específica,yaquesiemprehabráunbalanceentreestosdosparámetros.Unapruebaqueseaaltamentesensibletendráunaespecificidadmenoryviceversa.

• LasensibilidadanalíticadelaspruebasPCReslamásbajaconcentracióndeADNpatógenoquepuedeserdetectadoporlaprueba.

o EstaesdeterminadaenellaboratoriousandodilucionesdeunADNestándarconocidodealgúnagentepatógenodeinterés.LasensibilidadanalíticadelaPCRTaqmanparaelhongoquítridoanfibiopuedesertanbajacomo0,1equivalentesdegenoma(Entérminosprácticos,estoseríaunasolazoospora;Boyleycolaboradores,2004).

o Loslaboratoriosdeberíansercapacesdeentregarlasensibilidadanalíticadesuspruebas.

o Lasensibilidaddediagnósticodescribelaproporcióndeverdaderospositivos(muestrasquecontienenelADNdeunagentepatógeno)detectadosporunaprueba.

o Unasensibilidadde100%significaquelapruebaescapazdeidentificartodaslasmuestrasverdaderaspositivasyquenohaymuestrasfalsasnegativas(muestrasquecontienenADNdelagentepatógeno,peroquenosondetectadasporunaprueba).

o Pocaspruebastienenunasensibilidaddediagnósticode100%,inclusositienenunasensibilidaddediagnósticomuyalta.Estoesdebidoalavariabilidadinherentealarecolecciónyelprocesamientodemuestras.

o Muypocoslaboratoriosseráncapacesdeproveerunasensibilidaddediagnóstico,dadoqueestecálculorequiereunacorrelaciónderesultadosdepruebasenanimalesdelasquesesepasisuestadoesnegativoopositivo.Lasensibilidaddediagnósticotambiénpuededependerdefactoresajenosalcontroldellaboratorio,comoporejemploelmétodoutilizadopararecolectarmuestras.SehadeterminadoenunlaboratorioquelasensibilidaddediagnósticodelprocedimientoPCRTaqmanparaelhongoquítridoanfibioesdeaproximadamente75%(Skerrattycolaboradores,2008).

• LaespecificidadanalíticaparalaspruebasPCReslahabilidaddeidentificarexclusivamenteelADNdelagentepatógenodeinterésynoelADNdeotrosorganismos.

o Estaesrealizadausualmente"desafiando"alapruebaconorganismosestrechamenterelacionadosalpatógenodeinterés.

o Porejemplo,determinarlaespecificidadanalíticadelPCRparaelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)requierequelaprueba


soloentregueresultadospositivosparaelBatrachochytriumynoparaunpaneldeotroshongosquitridios(Boyleycolaboradores,2004).

o Ellaboratoriodeberíasercapazdeafirmarlaespecificidadanalíticadelapruebaqueofrece.

• Laespecificidaddiagnósticaeslaproporcióndenegativosrealesdetectadosporlaprueba.Unaespecificidadde100%significaquetodaslasmuestrasnegativasrealesfueronidentificadasyquenoexistenmuestrasfalsaspositivas(porej.,muestrasquenocontienenelADNdelagentepatógeno,perosoninterpretadascomopositivas).

o LaespecificidaddiagnósticapuedevariarenlaspruebasPCR.Yaqueestaspruebastienenunaaltasensibilidadanalítica,esfácilquelasmuestrassecontaminenconADNpatógenodurantelarecoleccióndemuestrasoenellaboratorio,loquedaríacomoresultadospruebasfalsaspositivas.Laspruebasfalsaspositivasreducenlaespecificidaddiagnóstica.

¿Quécontrolesdecalidadsonutilizadosensuprueba?

• Ellaboratoriodeberíausarcontrolespositivosynegativoscadavezqueserealizaunaprueba.Estoesabsolutamentenecesariosisedeseanresultadosfiables.

• LoscontrolespositivosutilizanADNconocidodelagentepatógenodeinterésydemuestranquelapruebaescapazdeamplificarelADNyquefuncionacorrectamente.

• LoscontrolesnegativosnocontienenADNdelagentepatógenodeinterésysonutilizadosparadetectarunacontaminacióndeADNenellaboratorioolosreactivosdelaboratorio.

• EnelcasodelosmétodosPCRentiemporeal,loslaboratoriosdeberíanutilizaruncontrolinternopositivo(Hyattycolaboradores,2007).EstaesunareacciónPCRdeADNaparteynorelacionadaalagentepatógenodeinterésyesincluidaencadamuestraanalizada.ElcontrolinternopositivodetectainhibidoresdePCRquepuedanresultarenpruebasfalsasnegativas(disminuyenlasensibilidaddediagnósticodelaprueba).Porejemplo,muestrascutáneasdelhongoquítridoanfibioconfrecuenciacontieneninhibidoresdePCRyelusodelcontrolinternoesesencial(Hyattycolaboradores,2007;Skerrattycolaboradores,2008).

• LosinhibidoresdePCRtambiénsonunproblemaparaloslaboratoriosquerealizanPCRconvencionales.Deberíaaveriguarcómoellaboratorioafrontaesteproblemapotencial.

• SisedeseaobtenerresultadoscuantitativosdelosmétodosPCRentiemporeal,esimportanteaveriguarcómofuerongeneradosyadministradoslosestándaresdecuantificación.Sehademostradoqueladegradacióndelosestándaresdealmacenamientoocurreconalgunosprotocolos,loquellevaalasubestimacióndelascargasfúngicas.


¿Quétiposdemuestrassonidealesparasupruebaycomodeberíanserrecolectadas,almacenadasyenviadas?

• Esimportanteconocereltipodemuestracorrectoparaeltipodepruebaquesevaallevaracabo.Porejemplo,laspruebasparadetectarelhongoquítridoanfibiorequierenunhisopouotramuestracutánea.

• Paralosanuros,lasmejoresmuestrasprovienendelassuperficiesdepielventral.Lasmuestrasprovenientesdelapieldorsal,otomadasdeotrapartedelcuerpocomoelhígado,noseránválidasyentregaránresultadosengañosos.Asimismo,unhisopocutáneoporlogeneralnoesunabuenamuestraparadetectarranavirus,loscualessueleninfectartejidosuórganosinternos.

• Lasmejoresmuestrasparalosanfibioscecílidosprovienendesuperficiesdorsalesdelcuerpoylacabeza(Gowerycolaboradores,2013;Rendleycolaboradores,2015).

• Laeleccióndematerialesderecoleccióndemuestraspuedeserimportante.Comoejemplo,loshisoposutilizadospararecoleccióndemuestrasparaelhongoquítridoanfibioestánhechosdediferentestiposdemateriales(mangosdemadera,metaloplástico).ParaelmétodoPCRTaqman,loshisoposderayónconmangodeplásticofuncionanmejorqueloshisoposconmangodemadera.Seledeberíaconsultarallaboratoriocualessonlosmejoresmaterialesparautilizarenlarecoleccióndemuestras.

• Losmétodospreferidosparaelalmacenamientodemuestrasdependerándeltipodepruebaqueserealizara.Porejemplo,elmétodoPCRTaqmanparaelhongoquítridoanfibiofuncionamejorconmuestrasdehisopossecadosalaire,peroalgunoslaboratoriosquerealizanmétodosPCRconvencionalesprefierenhisoposconservadosenetanol.Siemprepregúnteleallaboratoriocomoalmacenarmuestrasdespuésdelarecolección.

• LosmétodosutilizadosparaenviarmuestrassonmuyimportantesparalosresultadosdepruebasPCR.Comoejemplo,loshisopostomadosparapruebasPCRparadetectarelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidispodríandegradarsesisonexpuestosatemperaturasmuyaltas(VanSluysycolaboradores,2008)y,porlotanto,sedeberíantomarmedidasparaenfriarlasmuestrasdespuésdelarecolecciónyduranteelenvío.SielPCRsevaarealizarenmuestrasdetejidoparadetectarranavirusuotrosagentesinfecciosos,esimportantequelostejidospermanezcancongeladosduranteelenvíooqueseanpreservadosenetanol70%nodesnaturalizadodealtacalidad.LasmuestrasdestinadasacualquiertipodediagnósticoPCRnopueden,bajoningunacircunstancia,entrarencontactoconformalinauotrotipodeconservante.Asimismo,elalcoholisopropíliconopuede,bajoningunacircunstancia,serutilizadoenlugardeletanol.


¿Cuántopuedetardarlaentregaderesultados?

• Loslaboratoriosquerealizanpruebasdediagnósticomolecularesparadetectarenfermedadesinfecciosasanfibiasestánmuyocupadosypodríandemorarsevariassemanasoinclusomesesenobtenerresultados.

• Lasaltasesperas(plazos)puedenserinaceptablesenalgunassituaciones(porejemplo,paraeldiagnósticodeanimalesenfermosoparalaspruebasencuarentenaoantesdelaliberacióndeanimalesalanaturaleza).Enestassituaciones,esimportantecomunicarseconellaboratorioparaacordarresultadosmásrápidossiesposible.

¿Quiéntienelapropiedaddelasmuestrasylosresultados?

• Lacomunicaciónycolaboraciónconellaboratorioesesencialcuandosetratadelapropiedaddelasmuestrasylosresultadosdelaspruebas.Debedecirleallaboratorioconanticipaciónsiplaneahacernuevasinvestigacionesopublicarlosresultadosdelasmuestraspresentadas.

• Loslaboratoriosdeinvestigacionespodríansercapacesderealizarlaspruebasaunbajocostosilosresultadossonincorporadosaproyectosdeinvestigaciónopublicacionesencurso.

• Antesderealizarlaspruebasdeberíaverificarquesehayanobtenidolospermisosadecuadosparalarecolección,exportacióny/oimportación.

7.3PRUEBASDEDIAGNÓSTICOPARAELHONGOQUÍTRIDOANFIBIOBATRACHOCHYTRIUMDENDROBATIDIS Elhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis"Bd")esunacausaimportantedeladisminuciónanivelmundialdelaspoblacionesdeanfibios,perotambiénestáasociadoaeventosimportantesdemortalidadenlaspoblacionesdeanfibioscautivos.Aunqueespeciesoetapasdevidavulnerablespuedansucumbiralaquitridiomicosisduranteelcursodeunperíododecuarentenarutinario,debeserreconocidoquealgunasespeciesoindividuospuedenalbergarinfeccionesdebajonivelo"subclínicas"conBdquenosonvisiblesenexámenesclínicosoenprocedimientosdenecropsiarutinarios.Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríanactuarcomounafuentedeinfecciónparalasespeciesvulnerables,porloquedebeintentarsedetectary/otrataraestosanimalesantesdeintroducirlosacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.EsimportantedestacarquelaOIEyBergerycolaboradores(1998)definenlaquitridiomicosiscomounainfecciónconBd.Estaeslanormaconlasenfermedadesactualmente,yaqueinclusolasinfeccionessubclínicaspuedentenerunefectoqueesconsideradoenfermedad,comoporejemplounareproducciónodistribuciónreducidas.


Seleccióndeunapruebadediagnóstico Almomentodeseleccionarunmétododediagnóstico,esútildistinguirentrelaenfermedadolamuertecausadasporunainfecciónBdyunainfecciónsubclínicaosubletal(animalesportadoresquenomuestransímbolosaparentesdeinfecciónoenfermedad).

• Algunosmétodosmorfológicoscomolosmontajesenfresco,lacitologíaylahistopatologíasonútilesparadiagnosticaraanimalesqueesténenfermosconquitridiomicosisporqueungrannúmerodeorganismosestápresenteensupiel.Estosnosonconfiablesparadetectarinfeccionessubclínicasynosonusadosparalarevisiónencuarentenadeanimales.

• Laspruebasdereacciónencadenadelapolimerasa("PCR")convencionalesoTaqmansonconsiderablementemássensiblesquelosmétodosmorfológicosysonútilesparadetectarelbajonúmerodeorganismospresentesenlasinfeccionessubclínicas.

• ElPCReslapruebaporelecciónenlarevisióndepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlapresenciadeinfeccionesBdyparalarevisiónencuarentenadelosanimales.

• Loscultivosfúngicos,usandotécnicasparaorganismosfúngicosconvencionales,nosonútilesparadetectarBd(ElBdrequieretécnicasespecializadasparasucultivo).

MétodosmorfológicosparadetectarBd

Losmétodosmorfológicosdediagnósticosebasanenlaidentificacióndeorganismosfúngicoscaracterísticos(talos)delBd,pormediodelaexaminaciónmicroscópicaconluzde:

• pielmudada.• Muestrascutáneasobtenidaspormedioderaspadodepiel.• seccioneshistológicas.

Paralamayoríadelasespecies,espreferibleelmuestreodelassuperficiesventralesdelcuerpodadoquelostalosBdseencuentranmáspresentesenesoslugares.Losmétodosutilizadosnormalmenteparalosdiagnósticosmorfológicosson:

• Montajeenfresco.Lasmuestrasdepielmudadaseobtienenraspandogentilmentelassuperficiesventralesdelcuerpoodelaspatasusandoelladosuavedelbisturí,mondadientesocucharadeplásticoesterilizada.Verlaimagen7.1.Lamuestradebeser:

o Esparcidaenelportaobjetosdeunmicroscopiodevidrioconunapequeñacantidad(1o2gotas)deaguaosoluciónsalinanormalyluegoponeruncubreobjetos.

o LaimagenesexaminadausandounmicroscopioópticoconelcondensadorapuntandohaciaabajoenbuscadetalosBd(verlaimagen7.1).


Microfotografíasdebuenacalidaddetalosquitridiossintintesseencuentrandisponiblesen:www.umaine.edu/chytrids/Batrachochytrium/Photographs/htm

o Tintestalescomoazulalgodón(ParkerTMInk)y10%KOH(Mazzoniycolaboradores,2003)yRojocongo(BriggsyBurgin,2004)puedenaplicarseparaayudaravisualizarlasparedesdetalosBd.

• Citología.Lasmuestrascutáneassonobtenidaspormediodelatécnicademontaje

enfrescoyadescrita.Lasmuestrascutáneassonesparcidasenunportaobjetosdemicroscopio,secadasenaireypintadascontinteshematológicostalescomoWright'soWright-Giemsa(TambiénDiff-Quik).Verlaimagen7.2.

Imagen7.1:MontajeenfrescocutáneodeunaRanaarborícolaverde(Litoriacaerulea)examinadopormediodemicroscopíaóptica.Numerosasestructurasredondasquerepresentaneltalodelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)seencuentranpresentesdentrodelascélulascutáneas.


Imagen7.2:Citologíacutáneadeunaranavenenosadedardo(Dendrobatessp.).Numerosasestructurasredondasquerepresentaneltalodelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)seencuentranpresentesdentrodelascélulascutáneas.Muchostalosposeenestructurasinternaspurpurasredondas(zoosporas),perootrostalosseencuentranvacíosyaparecencomoespaciosredondosclaros(flechas).Eltalodelaesquinaderechainferiorpresentaevidenciadeseptacióninterna(talocolonial).ReimpresodePessier(2007).

• HistologíaEldiagnósticopormediodehistologíaesmásadecuadoparamuestras

cutáneasrecolectadasennecropsia,sinembargo,loscortesdededosyfragmentosdepielmudadadeanimalesvivostambiénpuedenserprocesadosdeestaforma.

o Lasmuestrasparahistologíadebenserpreservadasenformalinatamponadaneutralal10%(veaelcapítulo9paralaelaboracióndeformalinatamponadaneutral)oenetanolal70-95%.

o Lasmuestrasdenecropsiadeberíanincluirmúltiplesseccionesdepieldeespesortotaldelcuerpoventral,incluyendolaregiónpélvica("absorción"oparchepélvico),piernasypatas.

o Enlosanimalespequeños(pesanmenosde5a10gramos),elcadáverdebeestarintacto,desmineralizadodespuésdeunafijacióndeformalinaymúltiplesseccionescompletasdelcuerpodebenserpreparadas,estotambiénincluyelapiel.

o Lasmuestrasprovenientesderenacuajosanurosdeberíanenfocarseenelqueratinizadodeldiscooral("piezasbucales").

o UnacoloraciónrutinariaconhematoxilinayeosinaporlogeneralessuficienteparademostrareltalodeBd.Lasparedesdeltalotambiénsecoloranconácidoshiffperiódico(PAS,porsussiglaseninglés)yconplatametenaminadeGomori(GMS,porsussiglaseninglés).

o LainmunihistoquímicausandoanticuerpospoliclonalescontraelBdpuedeserutilizadaparamejorarlasensibilidaddelahistología,sobretodoenlasinfeccionessubclínicas(VanEllsycolaboradores,2003).Estemétodonose


encuentraampliamentedisponibleyyanoestanutilizadodadalaaltadisponibilidaddelosdiagnósticosPCR.

o Laslesioneshistopatológicasenlapielasociadasaquitridiomicosisincluyen:! Hiperqueratosis.! Hiperplasiaepidérmica.! Diferentesgradosdeinflamaciónydegeneraciónepidérmica(muchasvecesmínima).

o Lasinfeccionesmicóticasybacterianassecundariassoncomunes.

CaracterísticasmorfológicasdelostalosBd.TodaslastécnicasmorfológicasdescritasdependendelaidentificaciónmicroscópicadeltalocaracterísticodelBddentrodelcitoplasmadelascélulascutáneas(queratinocitos).LiteraturadetalladaquedescribelascaracterísticasmorfológicasdeltaloBdseencuentradisponible(Pessierycolaboradores,1999;Longcoreycolaboradores,1999;Bergerycolaboradores,2005).Algunascaracterísticasquepodríanserútilesson(vealaimagen7.3):• Eltalosuelemedirentre7a20µmenlasecciónhistológica.Habitualmentese

puedenidentificarcuatroformas:o Etapapequeñauninucleadao Formamultinucleadapunteadaconcitoplasmamicrovacuolado.o Zoosporangiomaduroquecontienemúltiplesydiscretasde2a3µm

zoosporasesféricasbasófilaso Talovacío(Estoscontienenzoosporaspreviamentevertidas).Lostalosvacíos

son,algunasveces,laformapredominanteobservadaenlosmétodosmorfológicos.

• Laaparicióndezoosporangiosmadurospuedeserconfundidaconlasetapasdevidadeunorganismoprotozoario.Lasfuncionesprácticasmásútilesparaundiagnósticomorfológicodefinitivoson:

o Lapresenciadetalosvacíosquepresentenevidenciadeseptacióninterna.Estossonlosrestosde"taloscoloniales"característicosdeBd.

o Seobservantaloscontubosdedescargaprominentesqueledanaltalounaaparienciade"frasco".

o Enalgunoscasos,peronoentodos,unacoloraciónGMSdelasseccioneshistológicaspuedemostrarrizoides,loscualessonextensionesdelgadascomoraícesdeltalo.


Imagen7.3:CaracterísticasmorfológicasdetalladasdeltaloBatrachochytriumdendrobatidisútilesparaeldiagnósticohistopatológico:A)Zoosporangiosmadurosquezoosporasbasófilasdiscretasyuntubodedescarga(flecha),tambiénhayvariostalosuninucleadosendesarrollo(asterisco);B)Talosmultinucleadosendesarrollo(flechas);C)Trestalos"vacíos"queyahandescargadosuszoosporas.Lostalosenelcentrosontalos"coloniales",locualesindicadoporunaseptacióninternafinaqueparecieradividiraltaloenlamitad;D)UnasecciónpintadaconplatametenaminadeGomori(GMS)quemuestraalosrizoides(flecha),loscualessonproyeccionesdelgadascomoraícesdelostalosquesepuedenobservardeformaintermitenteenseccioneshistológicasteñidasconplata.

MétodosbasadosenPCRparaeldiagnósticodelBd Laspruebasbasadasenlareacciónencadenadelapolimerasa(PCR)sonimportantesherramientasdediagnósticodeinfeccionesBd.Tantolastécnicasconvencionales(Annisycolaboradores,2004;Gokaycolaboradores,2009)comolasdetiemporeal(Taqman)sonutilizadasactualmente(Boyleycolaboradores,2004;Hyattycolaboradores,2007;Garlandycolaboradores,2009).ElPCReselmétododediagnósticoporelecciónde:

• Larevisióndecuarentenadenuevosanimales.• Larevisióndeanimalesantesdesureintroducciónotranslocación.• Inspeccióndepoblacionescautivasycriadasenlibertadparadetectarlapresenciay

prevalenciadeinfeccionesBd.


• Confirmaciónderesultadospositivosdeexaminacionesenmontajeenfrescoocitológicasclínicas.

LosmétodosPCRsonmuysensiblesyelmétodoTaqmanpuededetectardeformaexperimentaltanpococomounazoosporaBd(Boyleycolaboradores,2004).

• EsporestaexcelentesensibilidadqueunresultadopositivodelPCRsolosignificaqueelanimalestáinfectadoconBd,lapruebanodistingueentreinfeccionessubclínicasyunainfecciónclínicaimportante(quitridiomicosis).

• Reconocerladistinciónentreunainfecciónsubclínicayunainfecciónclínicaimportanteesimportantealmomentodeinvestigareventosdemortalidadanfibia.EstosignificaquesololosresultadospositivosdeBdenPCRnopuedenprobarquelaquitridiomicosisfuelacausadeunamuerteobservada.

ComparacióndediferentestécnicasPCR.LatécnicaPCRentiemporeal(Taqman)(Hyattycolaboradores,2007)tienenventajasencomparaciónconlosmétodosPCRconvencionales(Annisycolaboradores,2004).Estasventajasincluyen:

• Mayorsensibilidaddelaprueba.• Menoresposibilidadesdecontaminacióncruzadaduranteelprocesamientodelas

muestras(loquedacomoresultadopruebasfalsaspositivas).• Nohaynecesidaddeconfirmarlosresultadospositivospormediodeuna

secuenciacióndeADNdelosproductosPCR.• ElusodecontrolesinternosquedetectaninhibidoresdePCR.Ladetecciónde

inhibidoresdePCResimportanteporquelasmuestrasdehisoposcutáneosanfibiospresentadasparaunPCRdeBdconfrecuenciaseencuentrancontaminadasconsuciedadricaeninhibidoresomaterialvegetal.Sincontrolesinternosparalosinhibidores,algunasmuestrasquesisonpositivasparaADNBdpodríanserreportadascomonegativas(falsosnegativos).

LasdesventajasdelatécnicaPCRentiemporealson:

• Costosmásaltosdelosreactivosnecesarios.• Disponibilidadlimitadadelequipoespecializadonecesarioparalapruebaylas

técnicasnodetectantodaslascepasdeBddebidoalaaltaespecificidaddelasonda(Gokaycolaboradores,2009).

LaeleccióndetécnicaPCRutilizadadependerádeunavariedaddefactores,incluyendocostosydisponibilidaddelasdiferentespruebas.Actualmente,unaampliavariedaddediferenteslaboratoriosdeinvestigacionesycomercialesseencuentranofreciendoPCRparaBd.SugerenciasparaevaluaryescogerunlaboratorioparallevaracabopruebasBdseencuentranenlasección7.2.LatécnicaPCRentiemporeal,siseencuentradisponible,es


preferibleyprobablementeformaralabaseparalosestándaresinternacionalesrelacionadosalaspruebasdediagnósticoparadetectarBd.

RecoleccióndemuestrasparaPCRdeBd

ElprocedimientodePCRpuedeserrealizadousandounavariedaddemétodosdemuestreodiferentes,incluyendohisoposcutáneos,bañosdeaguaymuestrasdetejido(cortesdededosoescisióndepiezasbucalesderenacuajos;Hyattycolaboradores,2007).

• Elprocedimientodehisopocutáneoessimple,mínimamenteinvasivoypermiteelmuestreodemúltiplesáreasdelapielquepodríanestarinfectadasconBd(Incrementandolaposibilidaddequelasáreasinfectadasseanmuestreadas).Porlogeneral,loshisoposcutáneossonelmétododemuestreopreferidoparaelPCRdeBd.

• Lasmuestrasrecolectadasconelprocedimientodebañodeaguarequierenunacentrifugaciónofiltraciónpormicroporosinmediatosynosonprácticosenmuchosparámetros.

• Elcortedededosesunprocedimientoinvasivoqueconllevapreocupacioneséticasytieneladesventajademuestrearsolounapequeñaporcióndelapielpotencialmenteinfectada.

Materialesnecesarios.LosmaterialeslistadosmásabajosonpautasgeneralespararealizarelprocedimientodehisopocutáneoparaelPCRdeBdusandoelmétododeTaqman.Puedehaberdiferenciasdependiendodelaspreferenciasdellaboratorioqueprocesaralasmuestrasylascondicionesambientalesbajolascualessonobtenidosloshisopos.

• Guantesdesechablesdelátexonitrilosintalco.• Aplicadoresestériles("hisopos");vea"Seleccióndehisopos"másabajo.• Tubosdemicrocentrifugación/criovialesde1.5ml

LarecoleccióndemuestrasparaelmétododePCRconvencionalrequierequeloshisoposseanalmacenadosenetanolal70%.EstonoserecomiendaparaelprocedimientoPCRTaqman.Paramásinformaciónvealasecciónacercadel"Almacenamientodelasmuestrasdehisoposcutáneos"másabajo.Seleccióndehisopos.Existenunavariedaddepalitosaplicadoresohisoposquedifierenenlacomposicióndelapuntadelhisopo(dealgodónorayón),lacomposicióndelmangodelhisopo(madera,plásticoometal)yeltamañodelapuntadelhisopo(puntafinaoestándar).

• EltipodehisopoutilizadopuedeafectaraldesempeñodelapruebaPCRydeberíaconsiderarsecuidadosamenteantesdeusarloenelmuestreodeanimales.

• EnelprocedimientoPCRTaqman,unhisopoderayóndepuntafinaconunmangodeplásticofabricadoporelMedicalWireandEquipmentCo.hademostradotenerel


mejorrendimiento(Hyattycolaboradores,2007yM.Schrenzel,SanDiegoZoo,sinpublicar).Estehisoposeencuentradisponiblecomo:

o MW100-100(Australia).o DryswabTMFineTipMW113(UnitedStates:www.mwe-usa.com).

Siestehisoponoseencuentradisponible,puedeutilizarotroshisoposderayóndepuntafinaconmangosplásticoscomosubstitutos.• ParaelprocedimientoPCRTaqmandeberíaevitar(siesposible)loshisoposcon

puntadealgodónoconmangodemadera.EstosestánasociadosamenorestasasderecuperacióndelADNBdeinclusoapruebasfalsasnegativas(M.Schrenzel,SanDiegoZoo,sinpublicar).

• LosposiblesresultadosfalsosnegativosdehisoposconmangodemaderapodríansercausadosporlaintroduccióndeinhibidoresdePCRalareacción(vealasección"EvitandolosinhibidoresdePCRenlasmuestras"másabajo).AlgunoslaboratoriosquerealizanelprocedimientodePCRconvencionalrecomiendanelusodehisoposconpuntadealgodónymangosdemadera.SenecesitanmásestudiosdelaboratorioparadeterminarsilosinhibidoresdePCRpuedenresultarenreaccionesfalsasnegativasenestaspruebas.

BATRACHOCHYTRIUMSALAMANDRIVORANS

Elhongoquítridodelassalamandras(Batrachochytriumsalamandrivoranso"Bsal")eslaprincipalcausadeldeclinedelasalamandradefuego(Salamandrasalamandra)enlosPaísesBajosyBélgica(Martelycolaboradores,2013),peroestetambiénhasidoencontradoenpoblacionesanfibiasencautiverio(Cunninghamycolaboradores,2015).Lasespeciesoetapasdevidavulnerablespuedansucumbiralaquitridiomicosisduranteelcursodeunperíododecuarentenarutinario,porestodebeserreconocidoquealgunasespeciesoindividuospuedenalbergarinfeccionesdebajonivelo"subclínicas"conBsalquenosonvisiblesenexámenesclínicosoenprocedimientosdenecropsiarutinarios.Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríanactuarcomounafuentedeinfecciónparalasespeciesvulnerables,porloquedebeintentarsedetectary/otrataraestosanimalesantesdeintroducirlosacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.

Seleccióndeunapruebadediagnóstico Almomentodeseleccionarunmétododediagnóstico,esútildistinguirentrelaenfermedadolamuertecausadasporunainfecciónBsalyunainfecciónsubclínicaosubletal(animalesportadoresquenomuestransíntomasaparentesdeinfecciónoenfermedad).

• Laspruebasdereacciónencadenadelapolimerasa("PCR")sonconsiderablementemássensiblesquelosmétodosmorfológicosysonútilesparadetectarelbajonúmerodeorganismospresentesenlasinfeccionessubclínicas.


• ElPCReslapruebaporelecciónparalarevisióndepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlapresenciadeinfeccionesBsalyparalarevisiónencuarentenadelosanimales.

• Loscultivosfúngicos,usandotécnicasparaorganismosfúngicosconvencionales,nosonútilesparadetectarBsal(ElBsalrequieretécnicasespecializadasparasucultivo).

MétodosmorfológicosparadetectarBsal

Losmétodosmorfológicosdediagnósticosebasanenlaidentificacióndeorganismosfúngicoscaracterísticos(talos)delBsal,pormediodeexámenesmicroscópicososeccioneshistológicasHistologíaEldiagnósticopormediodeunahistologíaesmásadecuadoparamuestrascutáneasrecolectadasennecropsia,sinembargo,loscortesdededosdeanimalesvivostambiénpuedenserprocesadosdeestaforma.LosfragmentosdepielmudadanodeberíanserutilizadosparaladeteccióndeBsal,yaqueelhongopuedeencontrarsealrededordelaslesionesynosiempreenlacapacórnea,comoocurreconelBd(A.MartelPers.Com.)

o Lasmuestrasparahistologíadebenserpreservadasenformalinatamponadaneutralal10%(veaelcapítulo9paralaelaboracióndeformalinatamponadaneutral)oenetanolal70-95%.

o Lasmuestrasdenecropsiadeberíanincluirmúltiplesseccionesdepieldeespesortotaldelcuerpoventral,incluyendolaregiónpélvica("absorción"oparchepélvico),piernasypatas.

o Enlosanimalespequeños(pesanmenosde5a10gramos),elcadáverdebeestarintacto,desmineralizadodespuésdeunafijacióndeformalinaymúltiplesseccionescompletasdelcuerpodebenserpreparadas,estotambiénincluyelapiel.

o UnacoloraciónrutinariaconhematoxilinayeosinaporlogeneralessuficienteparademostrareltalodeBsal.LasparedesdeltalotambiénpuedenserpintadasconlatécnicaShiffdeácidoperyódico(PAS)(Martelycolaboradores,2013)

o Losorganismosintraepidérmicossetiñenenlainmunihistoquímica(Martelycolaboradores,2013)

o LaslesionescausadasporBsalsecaracterizanporunaevidenteulceracióndelapiel,contrarioalaslesionescausadasporBd,quegeneralmenteprovocanhiperplasiaepidérmicaehiperqueratosis(Martelycolaboradores,2013).

o Lassalamandrasdefuego(Salamandrasalamandra)infectadasconBsalconfrecuenciarevelanuncrecimientobacterianoexcesivoenlapiel(Martelycolaboradores,2013).

CaracterísticasmorfológicasdelostalosBsal.SeencuentradisponibleliteraturadetalladaquedescribelascaracterísticasmorfológicasdelostalosBsal(Martely


colaboradores,2013).Algunascaracterísticasquepodríanserútilesson(vealaimagen7.3):

• LostalosdeBsalestánubicadosdentrodelosqueratinocitos(Martely

colaboradores,2013).• LostalosdeBsalsonprincipalmentemonocéntricos,aunquealgunossoncoloniales

(Martelycolaboradores,2013).• Estossuelenmedirde6.9a7.2µm(Martelycolaboradores,2013).

Imagen7.4: Imagendemicroscopíaelectrónicadeunesporangiomaduroconhizoids(R)ImagenAn

Martel.

MétodosbasadosenPCRparaeldiagnósticodelBsal Laspruebasbasadasenlareacciónencadenadelapolimerasa(PCR)sonimportantesherramientasdediagnósticodeinfeccionesBsal.TantolastécnicasPCRconvencionales(Martelycolaboradores,2013)comolascualitativasseencuentranenuso(Blooiycolaboradores,2013).ElPCReselmétododediagnósticoporelecciónde:

• Larevisióndecuarentenadenuevosanimales.• Larevisióndeanimalesantesdesureintroducciónotranslocación.


• InspeccióndepoblacionescautivasycriadasenlibertadparadetectarlapresenciayprevalenciadeinfeccionesBsal.

• Confirmaciónderesultadospositivosdeexaminacionesclínicas.• Dadasusensibilidad,unresultadopositivodelPCRsolosignificaqueelanimalestá

infectadoconBsal,lapruebanodistingueentreinfeccionessubclínicasyunainfecciónclínicaimportante(quitridiomicosis).

• Reconocerladistinciónentreunainfecciónsubclínicayunainfecciónclínicaimportanteesimportantealmomentodeinvestigareventosdemortalidadanfibia.EstosignificaquesololosresultadospositivosdeBsalenPCRnopuedenprobarquelaquitridiomicosisfuelacausadeunamuerteobservada.

ComparacióndediferentestécnicasPCR.LatécnicaPCRentiemporeal(Taqman)(Hyattycolaboradores,2007)tienenventajasencomparaciónconlosmétodosPCRconvencionales(Annisycolaboradores,2004).Estasventajasincluyen:

• Mayorsensibilidaddelaprueba.• Menoresposibilidadesdecontaminacióncruzadaduranteelprocesamientodelas

muestras(loquedacomoresultadopruebasfalsaspositivas).• Nohaynecesidaddeconfirmarlosresultadospositivospormediodeuna

secuenciacióndeADNdelosproductosPCR.• ElusodecontrolesinternosquedetectaninhibidoresdePCR.Ladetecciónde

inhibidoresdePCResimportanteporquelasmuestrasdehisoposcutáneosanfibiospresentadasparaunPCRconfrecuenciaseencuentrancontaminadasconsuciedadricaeninhibidoresomaterialvegetal.Sincontrolesinternosparalosinhibidores,algunasmuestrasquesisonpositivasparaADNBsalpodríanserreportadascomonegativas(falsosnegativos).

LasdesventajasdelatécnicaPCRentiemporealson:

• Costosmásaltosdelosreactivosnecesarios.• Disponibilidadlimitadadeequipomásespecializadopararealizarlaprueba.

LaeleccióndetécnicaPCRutilizadadependerádeunavariedaddefactores,incluyendocostosydisponibilidaddelasdiferentespruebas.UnnúmerolimitadodelaboratoriosdeinvestigacionesactualmenteofrecenPCRparaBsal.SugerenciasparaevaluaryescogerunlaboratorioparallevaracabopruebasBsalseencuentranenlasección7.2.LatécnicaPCRentiemporeal,siseencuentradisponible,seprefiereyprobablementeformaralabaseparalosestándaresinternacionalesrelacionadosalaspruebasdediagnósticoparaBsal


RecoleccióndemuestrasparaPCRdeBsalConsultelarecoleccióndemuestrasparaPCRdeBd.

Técnicadehisopadoparaanurosycaudadospostmetamórficos.(FotosporE.Kabay,ZooAtlanta)

1. Usandounmarcadorpermanentedepuntafina,etiqueteuncriovialconelnombre

delaespecieyelnúmerodeidentificaciónindividualdelanimal.

2. Useunpardeguantesdesechablesnuevosparacadaanimalqueseahisopado(Vealasecciónacercadecómo"Evitarlacontaminacióncruzadadelasmuestras"másabajo).


3. Abraelpaquetequecontieneelhisopoestéril.Asegúresedeevitarqueelhisopotengacontactoconsuperficiesdetrabajo,manososustratodelrecinto.

4. Gentilmente,usandounmovimientodebarrido,desliceelhisopoporlassuperficies

ventrales.Asegúresedeincluirpatas(adelanteyatrás),muslosyabdomen(sobretodoelparchepélvicoolaabsorción).Cadaáreadeberíaserhisopadade3a5veces.DadoquelasinfeccionesporBdsuelenconcentrarseenlassuperficiesventrales,noesnecesariopasarunhisopoenlapieldorsal.

5. Permitaqueelhisoposesequeconaire.Nopermitaquelapuntadelhisopohaga

contactoconsuperficies,manososustratos.


6. Rompaocortelapuntadelhisopoypóngalaenelcriovialpreviamenteetiquetado.

7. AlmaceneloshisopossecadosconaireparaelanálisisPCRTaqmanaomenosde23oC(Temperaturaambiente).Vealasecciónquedescribeel"Almacenamientodemuestras".

8. Paraenviarloshisoposallaboratorio,estosdebenserenviadosconbolsasdehielo

paraprotegerlosdelastemperaturasextremasysedebecontratarunservicionocturnoode2díasdeentrega.Lasmuestrasquehayansidopreviamentecongeladasdebenenviarseenhielosecoparaprevenirsuderretimiento.

UnapresentaciónenvideodeestatécnicaparaelPCRdeTaqmanpuedeservistoaquí:http://amphibiaweb.org/chytrid/index.htmlOtrapresentaciónenvideo,lacualutilizahisoposderivadosdelamaderaadecuadosparaPCRconvencionales,puedeservistaaquí:http://www.amphibianark.org/frog_gallery.html

Técnicasdemuestreopararenacuajos

• Enlosrenacuajos,lainfecciónporBdselimitaaldiscooralo"piezasbucales"queratinizadasyelmuestreoparaPCRdebeestardirigidoaestaárea.

• LasmuestrasparaPCRincluyenlaextraccióndelaspiezasbucalesdespuésdelaeutanasiadelrenacuajo(muestreoletal)ounhisopadodelaspiezasbucalesenlosrenacuajosvivosusandounaplicadoromondadientesdemadera(Retallickycolaboradores,2006;Hyattycolaboradores,2007).

o Elusodemondadientes,aunqueseaunmétodoefectivo,hasidoasociadoamenorsensibilidaddelaspruebasencomparaciónalmétododemuestreoletal(Retallickycolaboradores,2006).

o Latécnicadehisopadoescomparablealmétododemuestreoletal,exceptoparainfeccionesdebajonivel(Hyattycolaboradores,2007).

• Paraelmuestreoletal,laeutanasiadebellevarseacabocomosedescribióenlasección8.6.Laspiezasbucalessonremovidasusandounbisturínuevoyestéril.Laspiezasbucalessedebensecaralaireyguardadasenpapeldefiltroodebenseralmacenadasenetanolal70%antesdesuprocesamiento.


• Lossuministrosyprocedimientosgeneralesparalarecoleccióndemuestrasconhisopossonsimilaresalosdescritosparalosanurosycaudadospostmetamórficosmásarriba.Algunasconsideracionesespecialesson:

o Lasmuestrasdehisoposseobtieneninsertandounhisopoaplicadorenlabocaygirándolovariasveces(Hyattycolaboradores,2007).

o Lasmuestrasdemondadientesseobtienenraspandolasfilasdedientesyelpicoqueratinizadoconunmondadientesdemadera(Retallickycolaboradores,2006).Lasmuestrasdebenserpreservadasenetanolal70%.

o Existenpreocupacionesacercadelatoxicidadpotencialdelosguantesdenitriloylátexparalosrenacuajos.Pautasparaminimizarestosriesgosseencuentrandisponibles(Greerycolaboradores,2009).

Técnicasdemuestreoparacecílidos

• Enloscecílidos,lasinfeccionesconBdconfrecuenciasondetectadasenlasuperficiedorsaldelacabezayelcuerpo(Gowerycolaboradores,2013;Rendleycolaboradores,2015)yelmuestreoparaPCRdebeenfocarseenestaárea.

• Lossuministrosyprocedimientosgeneralesparalarecoleccióndemuestrasconhisopossonsimilaresalosdescritosparalosanurosycaudadospostmetamórficosmásarriba.

Evitarlacontaminacióncruzadademuestras LaspruebasPCRsonmuysensiblesypuedendetectarcantidadesmuypequeñasdeADNBdyBsal.EstoesútilparaladeteccióndeanimalesquetieneninfeccionesBdoBsaldemuybajonivel,peroincrementalasposibilidadesdequelasmuestrasdeunanimalnoidentificadopuedancontaminarseconelADNBd/Bsaldeunanimalinfectado,provocandoasíunresultadofalsopositivoenlaprueba.Porlotanto,esmuyimportantetomarprecaucionesparaevitarlacontaminacióncruzadadelasmuestras,estasprecaucionesincluyen:

• Debeusarseunparnuevodeguantesdesechablesdelátexonitriloparacadaanimalalqueselerealizaranpruebas(Mendezycolaboradores,2008).

• Evitequeloshisopos(sobretodolapuntadeestos)hagancontactoconsuperficiesosustratosquenoseanlapieldelanimalalqueselerealizaralaprueba.

• Siseusaninstrumentosparacortarlapuntadelhisopoyponerlaencrioviales,debeusaruninstrumentofrescoydesinfectadoparacadamuestra.

o Paradesinfectarlosinstrumentosconestepropósito,debesumergirlosenetanolal70%yluegoflamearlosbajounalamparitadealcohol.

o Eviteusarsolucionesdelejíaparadesinfectar,yaqueestopuededegradarelADNdeBdenlasmuestrasdehisopos(Loqueresultaríanpruebasfalsasnegativas;Cashinsycolaboradores,2008).


EvitarinhibidoresdePCRenlasmuestras LosmaterialesextrañoscomotierraomateriavegetalpuedencontenermaterialesqueinhibenlareacciónPCR.Estopodríacausarunresultadodepruebafalsonegativo(enelqueelanimalestáinfectadoconBd,peroestenoesdetectadoporlapruebaPCR).

• Antesdelhisopadocutáneo,debeprocurarsederemovermanualmentelacontaminacióngravedelapiel.Losanimalespuedenserenjuagadosgentilmenteconaguanocontaminadaantesdelmuestreo,perodebeevitarenjuagarlosbruscamentedebidoaquepodríalavarlascélulascutáneasuorganismosinfectadosdeBd/Bsal.

• Sidecidehacerlalimpiezamedianteelenjuague,elaguaqueutilicenodeberíaserdelrecintoomedioambientedelanimal.

• LoslaboratoriosquerealizanPCRparadetectarBdsiempredeberíanutilizarcontrolespositivosinternosexógenosparadetectarinhibidoresdePCR(Hyattycolaboradores,2007).

Almacenamientodeloshisoposcutáneos

Elalmacenamientodehisoposdespuésdelarecoleccióndemuestrasesuntemaimportante.Elproblemamásimportanteparaloshisopossecadosalairesonlastemperaturasextremadamentealtas:

• ElADNdeBdenloshisoposcutáneossecadosalaireesnotablementeestable,yalgunoshisoposexperimentaleshansidoalmacenadosporhasta18mesesatemperaturaambiente(23oC)sinreduccionesdelasensibilidaddelaprueba(Hyattycolaboradores,2007).LaestabilidaddelADNBsalenhisopossecadosalairenohasidoprobada,peroesprobablequeestaseasimilaraladelBd(A.Martelpers.com.).

• Encontraste,laexposicióndehisoposatemperaturasmuyaltas(>38oC)por7díasresultoenunamenorrecuperacióndeADNBd,loquepodríadarcomoresultadofalsosnegativosenlosanimalesconinfeccionesBddebajonivel(VanSluysycolaboradores,2008).

Porlotanto,serecomiendaquelasmuestrasdehisoposcutáneossecadosalaireseanalmacenadasenlatemperaturamásbajaposible(Skerrattycolaboradores,2008).

• A25oC(refrigerador)omásbaja.• Lasmuestrasdeberíansercongeladas(–20oComásbajo)sielanálisisdeestasnose

llevaraacaboenunperíodode6mesesdelarecoleccióndemuestras.Paraelenvíoallaboratorio:

• Idealmentedeberíaenviarloshisoposporenvíonocturnooporunserviciodetrasladode2días(porejemplo,FederalExpress;UPS;DHL).


• Considereutilizarpaquetesdehieloparaprotegerlosdelastemperaturasextremas(sobretodocuandoexistalaposibilidaddequelospaquetesesténexpuestosaaltastemperaturas).

• Lasmuestrasquehayansidopreviamentecongeladasdebenenviarseenhielosecoparaprevenirsuderretimiento.

Elalmacenamientodeloshisoposenetanolal70%hasidosugeridocomounaalternativaalalmacenamientoenfrío,sobretodoparaloshisoposqueseránanalizadospormediodeunmétodoPCRconvencionaloparalasmuestrasrecogidasenelcampoquenotienenaccesoarefrigeración(Annisycolaboradores,2004;Bremycolaboradores,2007).Detallesseencuentrandisponiblesen:www.amphibianark.org/pdf/Field%20sampling%20protocol%20for%20amphibian%20chytrid%20fungi%201.0.pdf.Valdríalapenaquelatécnicadepreservaciónenetanolseavalidadaexperimentalmenteenellaboratorioparalapreservacióndemuestrasexpuestasamuchocalor.

Agrupacióndelasmuestrasdehisoposcutáneos LaagrupaciónopruebaporlotesdehisoposcutáneosdemúltiplesanimalesenunareaccióndePCRhasidoutilizadaparareducirloscostosasociadosalaspruebasparadetectarelhongoquítridoenungrannúmerodeanimales.Lapruebaporlotesesmásútilenlarevisióndepoblacionesyaqueenestecasolosresultadosindividualesnosontanimportantes.

• Enlassituacionesenquelosresultadosindividualesseanimportantes,noserecomiendalaagrupacióndeloshisopos.Estoyaquesepodríareducirlasensibilidaddelapruebayexistiríalaposibilidaddepasarporaltoinfeccionesquitridiasdebajonivel(pruebasfalsasnegativas).

• Deformaexperimental,sehancombinadohasta5hisoposdeBdsinunaperdidageneraldesensibilidad(Hyattycolaboradores,2007).Sinembargo,enelmismoreporteunhisopoindividualdeuncampodeestudioconmuybajosnivelesdeBdnofuedetectadocuandoloshisoposfueronagrupadosyotroshantenidoobservacionessimilares(Skerrattycolaboradores,2008).

• Sedeberíanllevaracaboestudiosexperimentalesqueexaminenlaposibilidaddemuestrearamúltiplesanimalesconelmismohisopo.Estosoloseríaútilparagruposdeanimalesalojadosenelmismorecintoycuandolosresultadosindividualesnosonimportantes(seasumequelosanimalesalojadosjuntosestáninfectadosconBd/BsalsinimportarlosresultadosindividualesdelPCR).

InterpretacióndelosresultadosdePCRparaBd/Bsal

LosresultadosdelPCRTaqmanparaBd/Bsalporlogeneralseránreportadoscomopositivos,equívocosonegativos.


• UnresultadopositivoindicaquelapruebadetectoADNdeBd/Bsalyquelos

animalesprobablementeesténinfectados.o LosresultadosfalsospositivossonpococomunesamenosqueelADNse

hayacontaminadoyaseadurantelarecoleccióndemuestras(vea"Evitarlacontaminacióncruzadademuestras"másarriba)oduranteelprocesamientodellaboratorio.

o LoslaboratoriosquerealicenPCRdeberíanusarprocedimientosquereduzcanlasposibilidadesdecontaminación,asícomocontrolesnegativosquepuedandetectareventosdecontaminación(vealasección7.2).

o Losanimalescautivospuedensertratadosconmedicamentosantimicóticosparaintentarmitigarlainfección(vealasección8.1).Estosnodeberíanserintroducidosaunacoleccióndezoológico,coloniaderesguardo,outilizadosenunprogramadereintroducciónhastaquehayaconfianzaenquelainfecciónfueeliminada.

• UnresultadoequívocoseráreportadoporloslaboratoriosquerealizanlapruebaPCRTaqmanyocurrecuando1o2delosdepósitosenunaprueballevadaacaboentriplicadosonpositivosyotrosdepósitossonnegativosparaADNdeBd/Bsal.

o LosresultadosequívocossucedenacausadeunacontaminacióndeADNenellaboratoriooporinfeccionesBd/Bsaldebajonivel(subclínicas).

o Enestecaso,lamuestraoriginalpuedeseranalizadaotravez,sepodríarecomendarunnuevomuestreodelanimalo,sepodríanrealizarambas.

• UnresultadonegativoindicaquelapruebanodetectoADNdeBd/BsalLosresultadosnegativospuedensignificarunodelassiguientes:

o UnresultadonegativorealyaqueelanimalnoseencuentrainfectadoconBd/Bsal

o UnresultadofalsonegativoyaqueelanimaltieneunainfecciónBd/Bsaldebajonivel(ohamudadounagrancantidaddepielinfectadarecientemente)ynohabíasuficienteADNBd/Bsalenlamuestraparaqueestefueradetectado.

o UnresultadofalsonegativodeunanimalinfectadoconBd/BsalyaquehayinhibidoresdePCRpresentesenlamuestra(vea"EvitarinhibidoresdePCR"másarriba).LamayoríadeloslaboratoriosquerealizanPCRTaqmanutilizancontrolesinternosparadetectarmuestrasquecontenganinhibidoresdePCR.

o PorqueelanimalestáinfectadoconunasepadeBd/BsalquenoesdetectadaporelPCRTaqman(Gokaycolaboradores,2009).

Laposibilidadderesultadosfalsosnegativos,sobretodoacausadeinfeccionesdebajonivel,parcialmenteexplicalasobservacionesacercadecómoanimalesvulnerablesingenuosexpuestosaBdamedidaquesusinfeccionesprogresanenintensidad(Hyattycolaboradores.2007).Esposiblequelosanimalesconinfeccionescrónicasdebajonivel(portadoresdeenfermedades)noseandetectadosconestesistemademuestreo.Podríasernecesarioestresaralosanimales,realizarlosmuestreosatravésdeunperíodomás


largoointroduciraanimalesingenuosyvulnerablesparadetectarelBdenlosanimalesportadores.

• Envistadeestasobservaciones,enlassituacionesenquelosresultadosdelaspruebasPCRseancríticos(porejemplo,encuarentenaanfibiaoparaprogramasdereintroducciónalanaturaleza),sesugiererecolectarmúltiplesmuestrasparaPCRdehisoposenunperíodode2semanas,omás,paraincrementarlaconfianzaenlosresultadosnegativosindividualesdecualquierPCR.

Unestudioexperimentaldemostróquelarecolecciónde3hisoposenunperíodode14díasincrementolasposibilidadesdedetectaralosanimalesconinfeccionesBddebajonivel(Hyattycolaboradores,2007).Estenúmerodemuestreospodríanoserposibledesdeunpuntodevistalogísticoofinancieroparamuchosprogramasquemantienenaanfibioscautivos.Ladecisióndellevaracabomúltiplespruebasdependerádelriesgorelativo.Ejemplosdesituacionesdealtoriesgoincluyen:

• AnimalesobtenidosdecoleccionesconunhistorialmédicodepocaconfianzaodedistribuidoresquenoposeencoloniasdeanimaleslibresdeBd/Bsal.

• Animalesprovenientesdecoleccionesofuentesconcasosrecientementeidentificadosdequitridiomicosis.

• Animalessilvestresqueentraranacautiverio.• Casosdeanimalesdealtovalorenqueelriesgo(sinimportarcuanpequeño)de

introducironodetectarBd/Bsalseainaceptable.7.4INFECCIÓNRANAVIRUS LosiridovirusenelgénerodelosRanavirussonreconocidoscomounadelasmayorescausasdeeventosdemortalidadmasivaenpoblacionesdeanfibiossilvestres(Greenycolaboradores,2002;Jancovichycolaboradores,1997;Bollingerycolaboradores,1999;Grayycolaboradores,2009;Driskellycolaboradores,2009;Kikycolaboradores,2012).

• Adiferenciadelaquitridiomicosis,lasinfeccionesRanavirusnohansidoasociadasdeformaconcluyenteconladisminuciónalargoplazodelaspoblaciones.

• LoseventosdemortalidadasociadosaRanavirusenanimalescautivosocoleccioneszoológicasanfibiassolohansidodocumentadosrecientemente(Donnellyycolaboradores,2003;Majjiycolaboradores,2006;Pasmansycolaboradores,2008;Millerycolaboradores,2008;Driskellycolaboradores,2009;Kikycolaboradores,2012)ymuypocoessabidoacercadelaprevalenciaeimportanciadelasinfeccionesenpoblacionescautivas.

o Estopuedeserporqueloshallazgosclínicosypatológicospuedensuperponerseconotrasenfermedadesinfecciosasanfibias(porejemplo,Kikycolaboradores,2012)yporquelaspruebasdediagnósticoespecíficasnosiemprehanestadodisponiblesparaveterinarios.


• LasinfeccionesRanaviruspuedensersubclínicas(animalesportadoressinseñalesexternasdeenfermedad)y,porlotanto,lasinfeccionespodríanocurrirensituacionesdecautiveriosinserdetectadas.

• SonnecesariasinvestigacionesprospectivasdecoleccionesanfibiascautivasparaencontrarevidenciadeinfeccionesRanavirusyasíinformarmejoralasgestionesdeanimalesencautiverioyalosprogramasdereintroducciónalanaturalezadeanfibios.

Lasprincipalespreocupacionesrespectoalosranavirusenrelaciónalascoloniasderesguardodeanfibiosincluyen:

• Laposibilidaddecausarmortalidadsignificativaenpoblacionescautivasvulnerables.• Laposibilidaddequelosanfibioscriadosencautiveriopertenecientesacolecciones

zoológicascosmopolitassirvancomoportadoresparaelmovimientoderanavirushaciapoblacionesdeanfibiossilvestres.

o ElmovimientoantropogénicodelosranavirushasidodocumentadoenlaindustriadecebosparalapescalosEstadosUnidosytambiénenlasranastoroimportadasdesdelosEstadosUnidos(PiccoyCollins,2008;Schloegelycolaboradores,2009).

• Algunosranavirusposeenunampliorangodehuéspedes,elcualpuedeincluirnosoloadiferentesespeciesanfibias,sinotambiénadiferentesclasesdeanimales,especialmentepeces,anfibiosyreptiles,expandiendoasílapotencialimportanciaecológicadelosranavirusintroducidosanuevoslugares(Johnsonycolaboradores,2007;Schockycolaboradores,2008).

• Puedenexistirdiferenciasintraespecíficasimportantesentrecepasdepatógenosypoblacioneshuésped.Inclusocepasderanavirusrelacionadasestrechamente(porejemplo,cepasdelvirusAmbystomatigrinum)puedencausarnivelesmuydiferentesdemortalidadyenfermedad.Además,diferentespoblacionesdeanfibiospuedenresponderdemaneramuydiferentesaunasolacepadeunpatógeno.Estosignificaquenotodaslascepasynotodaslaspoblacioneshuéspedsecomportandelamismamanera(Schockycolaboradores,2010).

Losranavirussonungrupograndedevirusrelacionadosycadaunopuedeteneruncomportamientobiológicoúnico(porejemplo,rangodehuésped;virulenciahaciaespeciesanfibiasdiferentes).Losranavirusdepreocupaciónenlaconservacióndeanfibiosconfrecuenciaseránlosquecaigandentrodelosvirusdelaranatipo3(FV3),losvirusAmbystomatigrinum(ATV),elranavirusdelferreretcomún(CMTV)oeliridovirusBohle(BIV).

• LosvirusFV3porlogeneralseencuentranaisladosdelosanfibiosanuros(ranas),peroestostambiénhansidoencontradosentortugasyenalgunassalamandras(Johnsonycolaboradores,2007;Duffusycolaboradores,2008).


• LosvirusATVseencuentrannaturalmenteenlassalamandras,mientrasquelosanfibiosanurosaparentementesonresistentesalainfección.Sinembargo,infeccionesexperimentalesrecientesenránidoshanincrementadolasposibilidadesdequelosvirusATVposeanunrangodehuéspedesmásamplio(Schockycolaboradores,2008).

• Elranavirusdelferreretcomún(CMTV),provenientedeEuropa,esimportanteyaquesesabequepuedecausarmortalidadesmasivasydisminucionespoblacioneslocalizadasenmúltiplesydiversosanfitrionesanfibios(Priceycolaboradores,2014)

• EliridovirusBohle(BIV),provenientedeAustralia,esdiferentealosvirusFV3yATVyesimportanteyaquehamostradosercapazdecausarenfermedadesenlosanfibiosanurosylospeces.

LosbrotesdeenfermedadesranaviralesenanurosconvirussimilaresalosFV3confrecuenciaocurrenenrenacuajosoenranasjóvenesrecientementemetamorfoseadas,perolasenfermedadestambiénpuedenobservarseenanimalesadultos.LasenfermedadesasociadasavirusATVenlassalamandraspuedenserobservadasensusetapasdevidalarvariasyadultas.

• Algunossíntomasclínicosdeenfermedadesranaviralespuedenincluirhemorragiascutáneas(delapiel),ulceracióndelapiel,hemorragiavisceralyedemasubcutáneo.Porfuera,lasinfeccionespuedenparecerseal"síndromedepiernaroja",elcualhistóricamentehasidoatribuidoainfeccionesbacterianassistémicasenanfibios.

• Hiperplasiaepidérmicaquedacomoresultado"pólipos"enlapiel,quepuedeserobservadaensalamandrasinfectadasconvirusATV.

• Enlosanuros,sehaobservadoulceracióndelapielcrónicasinevidenciadeenfermedadesranaviralessistémicas(Cunninghamycolaboradores,2008).

Infeccionessubclínicas(Sinseñalesexterioresdeenfermedad)sipuedenocurrir.Peronoesclarosiestassontransitoriasosipuedenpersistirporlargosperíodosdetiempo.Laposibleduracióndelasinfeccionessubclínicaspuededependerdelaespeciehuésped,eltipodeRanavirusyotrosfactorestalescomoelestadoinmunitario.

• XenopuslaevisinfectadosexperimentalmenteeliminaronlainfeccióndeVirusdelaranatipo3entansólo20días,sinembargo,ungrupodesalamandrastigreinfectadassubclínicamenteconelvirusAmbystomatigrinummostraronevidenciadeinfecciónporunmínimode6meses(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007).

SeleccióndeunapruebadediagnósticoparalosRanavirus

El diagnósticodeinfeccionesRanaviruseselmásfácildeobtenerenlosanimalesqueseencuentrenenfermosyquetenganenfermedadesranaviralessistémicas.AdiferenciadelaspruebasPCRparadetectarelhongoquítridoanfibio,laspruebasdediagnósticodisponiblesnoseencuentranvalidadasparaladeteccióndeinfeccionesenanimales


aparentementesanos(animalesinfectadossubclínicamente).Estosignificaquenoexistenpruebasconfiablesparadetectarinfeccionessubclínicasenanimalesvivosconpropósitostalescomo:

• InspeccionesdepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlaincidenciaoprevalenciadeinfeccionesRanavirus.

• Larevisióndenuevosanimalesencuarentenaantesdesuentradaaunacoleccióncautiva.

• Larevisiónantesdesuusoenprogramasdereintroducciónotranslocación.Unavariedaddemétodosdediagnóstico,loscualesincluyenhistopatología,inmunihistoquímica,aislamientodelvirusencultivocelular,métodosmoleculares(reacciónencadenadelapolimerasa)ypruebasserológicassondescritosenlaliteraturadeinvestigaciónysonresumidosmásabajo.Paraeldiagnósticodeenfermedades,vigilanciadeenfermedadesinfecciosasyevaluaciónderiesgosparaprogramasdeconservacióndeanfibiosencautiverio,laspruebasbasadasenlareacciónencadenadelapolimerasa(PCR)sonlasmásusadasparadiagnosticardeformadefinitivalasinfeccionesRanavirus.

MétodosmorfológicosparaeldiagnósticodelosRanavirus LaNecropsiaehistopatologíapuedenserutilizadasparadesarrollarundiagnósticopreliminardeinfeccionesRanavirussiseobservanlesionesmicroscópicassospechosasconosincuerposdeinclusióncaracterísticos.AlgunaslesionescomunesasociadasconlainfecciónRanavirusincluyen:

• Necrosisconosinhemorragiaenlugarestalescomohígado,riñón,tractogastrointestinal,tejidohematopoyético(incluyendositiosdehematopoyesisenelhígado,riñónybazo)olapiel(Grayycolaboradores,2009).

• Proliferaciónepitelial(delapiel)eninfecciónATV(Bollingerycolaboradores,1999)• Enalgunoscasoselúnicohallazgopuedeserulceracióncutánea(Cunninghamy

colaboradores,2008)• Cuerposdeinclusiónbasófilosintracitoplásmicos(vealaimagen7.4abajo).Estos

puedensermuydifícilesoimposiblesdedetectar.Enalgunaslesionesestospuedenserconfundidoscondesechosnuclearesodeotrascélulas.

• Lesionessutilesonoespecíficastalescomonecrosisdeltejidohematopoyéticoquepodríannoserreconocidasamenosqueelpatólogoposeaunaextensivaexperienciahistológicaenanfibios.

Dadoqueloshallazgospuedensernoespecíficosysuperponerseconotrasenfermedadesinfecciosasanfibias,laconfirmacióndeunpresuntodiagnósticodeRanaviruspormediodeotrosmétodosdediagnósticotalescomoinmunihistoquímicaoPCRsuelesernecesario.

• Lainmunihistoquímicaharesultadoexitosausandoantisuerodeconejoparaelvirusdelanecrosishematopoyéticaepizoótica(VNHE)delospeces(Cunninghamy


colaboradores,2008)ounanticuerpomonoclonalparalaproteínacápsidemayordelFV3(Robertycolaboradores,2005).Ladisponibilidaddeestosreactivospodríaestarlimitadaalaboratoriosdeinvestigaciones.

• SehadescritounatécnicaparaamplificarelADNRanavirusdelostejidosincluidosenparafina(Kattenbeltycolaboradores,2000).

• Lamicroscopíaelectrónicadetransmisiónpuedeserutilizadaparamostrarviriónesdeiridovirusenlostejidosafectados.

Imagen7.5:Secciónhistológicadelhígadoquemuestracuerposdeinclusiónintracitoplásmicoscaracterísticosdelasinfeccionesranavirus(flechas)dentrodeloshepatocitos(célulasdelhígado).

Aislamientodelosranavirusenloscultivoscelulares

Losranaviruspuedenseraisladosencultivoscelularesylíneascelularesdepecessoncomúnmenteutilizadas(Hengstbergerycolaboradores,1993;Zupanovicycolaboradores,1998;Bollingerycolaboradores,1999;Dochertyycolaboradores,2003).

• ElaislamientodelvirusgeneralmenteesutilizadoparainvestigacionesenentornodelaboratorioypodríanoestarampliamentedisponibleparaeldiagnósticoclínicodeinfeccionesRanavirus.

• Elaislamientodelvirusesnecesariopararealizarperfilesdepolimorfismosdelongituddefragmentosderestricción(RFLP,porsussiglaseninglés)necesariosparaidentificarunRanavirusespecífico.Estopodríaserútilenalgunosprogramasdeconservacióndeanfibiosenloscualesesnecesariosabersielvirusquecirculaenunapoblaciónsilvestreeselmismovirusqueestápresenteenunapoblacióncautiva(vermásabajo).


• Lasmuestrasapropiadasparaelaislamientodelvirussontejidosfrescosocongelados,talescomohígadoyriñón,obtenidosenlanecropsiadelosanimalesafectados.

Serologíaparalosranavirus

Sehadescritounatécnicadeensayoinmunoenzimático(ELISA,porsussiglaseninglés)paraladeteccióndeanticuerposantiRanavirusensuerodesaposmarinos(Zupanovicycolaboradores,1998).

• EstatécnicasolopuededetectarexposicionespreviasaunRanavirus,noinfeccionesactivas.

• LaspruebasELISApuedenserútilesparaestudiosdesaludanivelpoblacional;sinembargo,lapruebanoseencuentradisponiblefueradelaboratoriosdeinvestigación.

• OtrasdesventajasdeunusomásgeneralizadodeestemétododepruebaseslainhabilidaddeobtenervolúmenesdemuestrasdesangregrandesdemuchasespeciescautivasylanecesidaddevalidarlapruebaparasuusoenotrasespeciesapartedelSapomarino(Rhinellamarina).

MétodosbasadosenlaPCRparaeldiagnósticodeinfeccionesRanavirus

LaspruebasdereacciónencadenadelapolimerasabasadasenlaPCRparadetectarelADNlosranavirussehanvueltoampliamentedisponiblesfueradeinvestigacionesenentornosdelaboratorio.YasehandescritolastécnicasPCRconvencionalesyentiemporeal(Taqman)basadasenlaproteínacápsidemayor(MCP)(Maoycolaboradores,1997;Pallisterycolaboradores,2007;Schockycolaboradores,2008).

• LastécnicasPCRhansidolasmejoresvalidadasparasuusoenmuestrasdetejido.Estaspuedenaplicarseaotrostiposdemuestras(porejemplo,hisoposdeanimalesvivos),perolosresultadosdebenserinterpretadosconprecaución.

ComparacióndediferentestécnicasPCR.LaPCRconvencionalusandoelconjuntoprimarioMCP4/5descritoporMaoycolaboradoresen1997escomúnmenteutilizadaparadetectarranavirus.LasventajasdelaspruebasPCRconvencionalesson:

• LahabilidadderealizarunasecuenciacióndeADNdelproductodelPCRyobtenerinformaciónadicionalacercadeltipodeRanaviruspresente(porejemplo,unvirusFV3oATV).

• BajocostodereactivosyequipoencomparaciónconlosmétodosPCRentiemporeal.


LasdesventajasdelaspruebasPCRconvencionalesson:

• LanecesidadderealizarunasecuenciacióndeADNounanálisisSouthernblotparaconfirmarlosresultadospositivos.

• LaPCRconvencionalpuedesermenossensiblequelastécnicasPCRentiemporeal.

LatécnicaPCRentiemporealtieneventajasparasituacionesdediagnóstico,talescomo: • NohaynecesidadderealizarunasecuenciacióndeADNounanálisisSouthernblot

paraconfirmarlosresultadospositivos.Estoaceleraladisponibilidaddelainformacióndiagnóstica.

• LamayorsensibilidaddelaPCRentiemporealpermitedetectarcantidadesmáspequeñasdeADNRanavirus.

LasdesventajasdelaPCRentiemporealson:

• Costosmásaltosdereactivosyequipo.• Sinecesitacaracterizaralvirus(porejemplo,determinarsiesunvirusFV3oATV),

serequeriránreaccionesPCRadicionalesconmásconjuntosprimariosespecíficosdePCRentiemporealounaPCRconvencionalconsecuenciacióndeADN.

RecoleccióndemuestrasparalaPCRRanavirus

LaeleccióndetipodemuestraparalaPCRdeRanavirusdependerádesilasmuestrasfueronobtenidasenlanecropsiadeunanimalmuertoosielmuestreosellevaraacaboenunanimalvivo.Muestrasdenecropsia: ParalaspruebasenanimalesenfermosquemuerandeformanaturaloqueseansacrificadosdebidoalasospechadequetienenunaenfermedadRanavirus.LasinfeccionesRanavirusletalesafectanamúltiplessistemasorgánicosy,porlotanto,eldiagnósticodeberíaserapartirdelmuestreodeunoomásdelossiguientestejidosenlanecropsia:

• Hígado.• Riñón.• Piel(Siseobservanlesionescutáneasulcerativasoproliferativas;sesugierenPCR

simultáneosdehígadooriñónparalamayoríadeloscasos).ParausartejidosdelanecropsiaparadetectaranimalesqueseencuentrensubclínicamenteinfectadosconunRanavirus(elanimalnomurióporlainfecciónRanavirus,peroeraportadordeunainfección).EstetipodepruebaspuedeserútilparalaspruebasenpoblacionesquebusquenlapresenciaoausenciadeinfeccionesRanavirus.


• Elriñónylostejidosquecontenganunaltonúmerodecélulasresidentesdetipomacrófago,comoelhígadooelbazo,podríanserútilessegúnhallazgoshechosenranasafricanasdeuñas(Xenopuslaevis)infectadassubclínicamenteconFV3(Robertycolaboradores,2005,2007).

• LapulverizaciónyelanálisisPCRdecadáveresenterossonotraconsideraciónparalosestudiosdepoblaciones(GreeryCollins,2007).

LasmuestrasdetejidodelanecropsiadebenserrecolectadasenbolsasdeestiloWhirl-Pak®(Nasco,USA,www.enasco.com)oencriovialesNuncCryoTubesTMoVangardCryosTM(SumitomoBakeliteCo.,Ltd.,Japan;www.sumibe.co.jp/english/).Sedebeutilizarunconjuntoseparadodeinstrumentosparacadatejidomuestreadoconelpropósitodeevitarlacontaminacióncruzada.Lostubosdebenseretiquetadosconelnombredelaespecie,tipodetejido,númerodeidentificaciónindividualdelanimalylafecha.Muestrasclínicasonoletales(Muestrasdeanimalesvivos):

DebidoaquelasinfeccionesletalesdeRanavirussuelenafectaramúltiplessistemasorgánicos,diferentestiposdemuestrasclínicas(noletales)tienenelpotencialdeserexitosasendetectarlainfección.

• Lasmuestrasclínicassonlasquetienenmásprobabilidadesdeserexitosasendetectarinfeccionesenanimalesevidentementeenfermosconenfermedadesranavirales.Estosanimalesconfrecuenciatienengrandescantidadesdelvirusquepuedenserdetectadasenmúltiplestejidos.

• AdiferenciadelaspruebasPCRparadetectarelhongoquítridoanfibio,laspruebasdediagnósticodisponiblesnoestánvalidadasparaladeteccióndeinfeccionesenanimalesaparentementesaludables(animalesinfectadossubclínicamente).Estosignificaquenoexistenpruebasconfiablesparadetectarinfeccionessubclínicasenanimalesvivosparapropósitostalescomo:o inspeccionesdepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlaincidencia

oprevalenciadeinfeccionesRanavirus.o larevisióndenuevosanimalesencuarentenaantesdesuentradaauna

coleccióncautiva.o larevisiónantesdesuusoenprogramasdereintroducciónotranslocación.

Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríantenermenorescantidadesdevirusyelviruspodríaestarpresentesoloenalgunostejidos(porejemplo,elriñón).Porlotanto,estasinfeccionespodríansermásdifícilesdedetectareneltipodemuestrasqueseobtienenfácilmentedeanimalesvivos.Siserealizanpruebasenanimalesaparentementesaludables,unresultadopositivoqueindiquequesedetectóADNRanavirusesmásdefinitivoqueinresultadonegativo.LosresultadosnegativosdepruebasenanimalesaparentementesaludablesnodeberíanutilizarseparadeterminarodeclararqueunanimalseencuentralibredeunainfecciónRanavirus.


Lostiposdemuestrasquepuedenserconsideradasparaanimalesvivosincluyen:

• Hisoposcutáneos(solosiseobservanlesionescutáneastalescomoúlceras),delacavidadoral/faringeocloacales.o ParalarecoleccióndemuestrasparaPCR,sonpreferiblesloshisoposcon

mangodeplásticoypuntaderayón.o Elhisopodebeseraplicadoogiradogentilmenteenlaubicaciónqueserá

muestreaday,despuésdelarecoleccióndemuestras,lapuntadelhisopodebeserrotaocortadayluegodepositadaenuncriovialetiquetadoounabolsaestéril.

o SeusaronhisoposcloacalesyoralesparadetectardeformavariableinfeccionesRanavirusenTortugasdeorejasrojasdeFloridainfectadasexperimentalmente(Johnsonycolaboradores,2007),peroestemétodonohasidovalidadoparaanfibios.

• Labiopsiadetejidosusandocortesdededos(anuros)ocortesdealetas(puntasde

colasdesalamandras)hasidodescritacomounmétododemuestreonoletal(St-AmouryLesbarreres,2007;GreeryCollins,2007).

o Esmuyprobablequeestoentregueundiagnósticoparalosanimalesqueseanvirémicos(Quetengangrandescantidadesdeviruscirculandoporsusangre).

o TécnicassonmenossensiblesqueunaPCRdehígadouhomogeneizadosdecuerpocompleto

o Podríanodetectaraanimalesenetapastempranasdeinfecciónoaanimalesconinfeccionessubclínicas.

o Labiopsiadetejidopodríasermuyinvasivaparasuusoclínicorutinario.

• Lasmuestrasdesangreenteraodecapasleucocitariaspuedenserútilesparadetectaraanimalesvirémicos.

o Noseesperaqueestatécnicaseadiagnósticaparaanimalesenetapastempranasdeinfecciónoparaanimalesconinfeccionessubclínicas.

o Losextremosdelostubosmicrohematocritoscentrifugadosquecontienenlacapaleucocitariasonrotosydepositadosenuncriovialopuedealmacenarlostubosenunabolsaplásticaestéril.

o SiseutilizananticoagulantesprefieracitratodesodiooEDTA.Silasangrerecolectadaespuestaenvialesconanticoagulantes,asegúresedenotificarallaboratorioquerealizaralaspruebas.LapresenciadeestosanticoagulantespodríainterferirconlasreaccionesPCRycrearresultadosfalsosnegativos.Sinembargo,estosanticoagulantespuedenserfácilmentemanejadosenlasreaccionesPCRsiempreycuandoellaboratorioestéaltantodesupresenciaenlasmuestrasypuedahacerlosajustesnecesariosparalascondicionesdereaccióndelasPCR.


Almacenamientodelasmuestras:TodaslasmuestrasparalasPCRdeRanavirusdebenseralmacenadasenla

temperaturamásbajaposibledespuésdesurecolección.

• Congelarlasenunfrigoríficoconvencional(–20oC)esadecuadoparaelalmacenamientoacortoplazode1a2semanas.Tengacuidadoyevite(odesactive)losciclosautomáticosdedescongelamiento,loscualesseencuentrandisponiblesenmuchosmodelosdecongeladores.Eldescongelamientocomprometerálacalidaddelasmuestras.

• Paraelalmacenamientoalargoplazo,esmejorcongelaratemperaturasde–70oC,omásbajasconfrigoríficosultrafríosonitrógenolíquido.

• Lasmuestrascongeladasdeberíanserenviadasallaboratorioenhielosecoparaprevenirsudescongelamiento.

InterpretacióndelosresultadosPCRdeRanavirus

LosresultadosdelastécnicasPCRconvencionalesoentiemporealparadetectarRanavirussuelenserreportadoscomo"positivos"o"negativos".• UnresultadopositivodelaPCRindicaquelapruebadetectoADNRanavirusenla

muestra.ElresultadopositivodelaPCRsoloindicalapresenciadeunRanavirus,peronodistinguealosanimalesqueteníaninfeccionesletalesdelosportadoressubclínicosdeinfecciones.LacorrelacióndelosresultadosdelPCRconloshallazgosclínicosydenecropsia(histopatológicos)típicosdelasinfeccionesRanavirus(vermásarriba)esnecesariaparadeterminarsiunRanavirusfuelacausaprobabledeunamuerteouneventodemortalidad.

• LaspruebasPCRfalsaspositivassoncircunstanciasenquelapruebadaunresultadopositivo,peroelanimalnoestáinfectadoconunRanavirus.Máscomúnmente,estoocurrirácomoresultadode:

o LacontaminaciónconADNRanavirusdelasmuestrasdurantelarecoleccióndemuestrasoduranteelprocesamientodelaboratorio.TodosloslaboratoriosquerealizanPCRdeberíantenerprocedimientospreparadosparareducirlaposibilidaddecontaminaciónydeberíanutilizarcontrolesnegativosdemuestrasparadetectareventosdecontaminación.

o NorealizarunasecuenciacióndeADNoanálisisSouthernblotconfirmativosenlasmuestraspositivas,comoesdeterminadoporlatécnicadePCRconvencional.LarazóndeestoesqueelADNnoRanavirusalgunasvecesseráamplificadoporlareacciónPCRyaparecerácomounafranjaenungeldeagarosaaproximadamentedelmismotamañoquelafranjaesperadadelRanavirus.LatécnicaPCRentiemporealtieneunasondainternaqueconfirmalaaplicacióndelasecuenciacorrectadeADNy,porlotanto,lasecuenciacióndeADNnoseránecesariaparaconfirmarresultadospositivos.

• UnresultadodePCRnegativoindicaquelapruebanohadetectadoADNRanavirusenlamuestrapresentadaallaboratorio.Estonosiempreindicaqueelanimalno


estáinfectadoporRanavirus;estadeclaraciónpuedecomplicarseacausaderesultadosfalsosnegativos.

• Unresultadofalsonegativo(elanimalestáinfectadoconunRanavirus,perolapruebaPCResnegativa),yaque:

o NohabíaADNdelviruspresenteenlamuestrapresentadaallaboratorio.Esmásprobablequeestoocurraenmuestrastalescomohisopos(faríngeosocloacales),biopsiasdetejidoomuestrasdesangre(capaleucocitaria)tomadasdeanimalesvivos.Estosanimalespodríannoservirémicosonoestarderramandovirusenlasubicacionesmuestreadas.AunquelamayoríadelasinfeccionesRanaviruspuedenserdetectadasenmúltiplestiposdetejidos,estasalgunasvecesestánlimitadasaunaubicaciónespecíficacomolapieloelriñón,ylamuestrapresentadaparalaspruebasesmuyimportanteparaevitarresultadosfalsosnegativos.

o ElADNdelvirusestápresenteencantidadesmenoresalasdetectablesporelmétodoPCRutilizado.Esmásprobablequeestasituaciónsedéconinfeccionessubclínicas.LosmétodosPCRentiemporealsonconsideradosmássensiblesymáscapacesdedetectarinfeccionesconpequeñascantidadesdeADNviral.

o HayinhibidoresdePCRenlamuestra.Esmásprobablequeestoocurraconhisoposdecloacaquepuedancontenercantidadessignificativasdemateriafecal.

IdentificaciónespecíficadeRanavirus

Enlamayoríadelassituaciones,paralaspoblacionesdeanfibioscautivos,laconfirmacióndeundiagnósticodeinfecciónRanavirussellevaráacabopormediodemétodosPCR,loscualesseencuentrandisponiblesenunavariedaddelaboratoriosdeinvestigaciónycomerciales.

• EstosmétodosnopuedendeterminarlaespecieespecíficadeRanaviruspresenteenlosanimalesinfectados.LaPCRconvencionaljuntoconunasecuenciaciónconfrecuenciadeterminaranelgrupo(porejemplo,grupodevirusFV3oATV)deRanaviruspresenteenelanimalogrupodeanimales.

YaqueungrannúmerodediferentesespeciesdeRanaviruspuedensercolocadasenestosampliosgrupos(Schockycolaboradores,2008),avecesserequeriráunacaracterizaciónmásprecisadelviruspresenteparapodertomardecisionesacercadelagestióndelapoblación.Porejemplo,sepodríanidentificarranavirusenpoblacionessilvestresderanasyenranascautivasdelamismaespeciealojadasenunacoloniaderesguardoquecríaanimalesparaliberarlosalanaturaleza.

• SisoloserealizanPCRconvencionalysecuenciacióndeADN,esmuyprobablequeelvirusenlapoblaciónsilvestrerecibaunacaracterizaciónsimilaraladelviruspresenteenlapoblacióncautiva(porejemplo,"Virusdelarana3").


• Taldeterminaciónpodríallevaralaconclusiónerróneadequeelvirusenlapoblacióncautivaeselmismoqueeldelapoblaciónsilvestreyqueessegurointroducirranasinfectadascriadasencautiverioalapoblaciónsilvestreinfectada.Sinembargo,especiesdiferentesdeRanavirusquevaríanencuantoasuvirulencia(habilidadparacausargravesenfermedadesenespeciesdiferentes)tendránperfilessimilaresoidénticos(Majjiycolaboradores,2006;Schockycolaboradores,2010).

• Serequierenmedidasmásavanzadasparaidentificarlaespeciedelosvirusqueafectanalaspoblacionessilvestresycautivasparaasídeterminarmejorlaprobabilidaddequelosvirusseandelamismaespecieypararealizarunabuenaevaluaciónderiesgosenelprogramadereintroducciónalanaturaleza.

LosintentosparaidentificarespecíficamenteaunRanavirusrequeriránelaislamientodelvirusencultivoscelulares(vermásarriba)seguidoporlaaplicacióndetécnicas,loqueincluyeunanálisisdepolimorfismosdelongituddefragmentosderestricción(Hyattycolaboradores,2000;Majjiycolaboradores,2006;Schockycolaboradores,2008).

• Esmásprobablequeestastécnicasseanrealizadasporlaboratoriosdeinvestigaciónyquenoseencuentrenampliamentedisponibles.

• Estostiposdecaracterizacionesmolecularesrequierentejidoscongeladosofrescosparaqueaunesténpresentesviriónesviables.Lasmuestraspreservadasenetanolnopuedenserutilizadasparaestostiposdecaracterización.

7.5ENFERMEDADPROTOZOARIASIMILARALPERKINSUSDELOSRÁNIDOS

Lainfeccióndeunprotistapatógenonuevo,llamadoporalgunoselagentedetipoPerkinsus,haresultadoeneventosdemortalidadmasivaenrenacuajosderánidossilvestresenlosEstadosUnidos(Greenycolaboradores,2003;Davisycolaboradores,2007).Losciclosdevidaymodosdetransmisióndeestenohansidodeterminadosdefinitivamente.

• EntrelasespeciesafectadasseencuentranlaRanadelamadera,Lithobatessylvaticus;Ranaleopardodelsur,L.sphenocephalus;Ranatoroamericana,Lcastesbeianus;Ranavisón,L.septrionalis;Ranaverde,L.clamitans;Ranasebosa,L.sevosusylaRanacapito,L.capito.

• Nosehadeterminadodeformaconclusivaquelasinfeccionesconestosorganismossonlacausadeldescensoalargoplazodelaspoblaciones.

• Existenpreocupacionesdequeloseventosdemortalidadmasivaasociadosalorganismopuedanamenazarlapersistenciadealgunasespeciesalreduciroeliminarelreclutamientonaturalenalgunosestanques.HayunagranpreocupaciónporunodelosanurosengravepeligrodeextinciónenNorteamérica,laRanasebosa(Lithobatessevosus),delacualsoloquedanaproximadamente100adultosenlanaturaleza.


Solosehanobservadoeventosimportantesdeenfermedadomortalidadenrenacuajosránidos.

• Sehandocumentadocasosdeinfeccionessubclínicas(dondenoexisteevidenciadeenfermedadomuerte)enalgunoshylidaestalescomoel"SpringPeeper"(Pseudacriscrucifer)ylaRanagrillodelsur(Acrisgryllus).

• LasinfeccionesenanimalespostmetamórficoshansidosubclínicasysehanlimitadoallumendelintestinoconlaexcepcióndeunpequeñogrupodemetamorfosdelaRanaleopardodelsurLithobatessphenocephalus(Davisycolaboradores,2007)queteníaninfeccionesenelhígadosimilaresalasobservadasenrenacuajos.

• Conlaexcepcióndeanimalessilvestrestraídosacoloniasderesguardoencautiveriooalaboratoriosdeinvestigación,lainfecciónconlosagentesdetipoPerkinsusnohasidodocumentadaenanimalescautivosoencoleccioneszoológicasanfibias.

,LasprincipalespreocupacionesrespectoalosagentesdetipoPerkinsusenrelaciónalascoloniasderesguardodeanfibiosincluyen:

• Laincertidumbrerespectoalrangopotencialdehuéspedesparaesteorganismoylasimplicacionesdesuintroducciónacoleccioneszoológicasocoloniasderesguardo.

• Elpotencialdesconocidodeintroduciraesteorganismoenpoblacionesdeanfibiossilvestresingenuospormediodelmovimientoderanascautivasenprogramasdereintroducciónalanaturaleza.

• Elpotencialdemortalidadsignificativaenlaspoblacionescautivasdeespeciesvulnerables.

ElhistorialdevidadelosagentesdetipoPerkinsusesdesconocidoynosehanlogradoestudiosexperimentalesdetransmisiónodeinfeccioneshastalafecha.Algunossíntomasclínicosdeinfecciónreportadosenrenacuajossonletargo,hinchazóny,ocasionalmente,hemorragiacutánea.Algunoshallazgosapartirdelanecropsiarevelaronórganosinternosnotablementeensanchados,talescomohígado,bazoyriñón,quepodríahabersedecoloradohastaquedarblanco.

DiagnósticodeenfermedadesprotozoariasdetipoPerkinsus Eldiagnósticoenrenacuajosevidentementeenfermosespormediodelaidentificaciónmorfológicadeesporascaracterísticaspormediodemicroscopíaópticausandofrotisdetejidosfrescosopormediodehistopatología(veamásabajo).

• Nohayningunapruebadediagnósticoconfiablequepuedadetectarlapresenciadeinfeccionesenpoblacionesdeanfibioscautivosapartedelavigilanciaenlanecropsiadeanimalesenfermosomuertos.


Losmétodosdediagnósticoincluyen:Frotisdetejidos: Estosellevaacabotomandounapequeñapartedetejidofresco(2X2mm)obtenidoenlanecropsiaycolocándoloenunportaobjetosdemicroscopiolimpio.Luego,sedebeutilizarunsegundoportaobjetosparaesparcireltejidoatravésdelprimerportaobjetos,asegurándosedequeeltejidoquedecompletamenteaplanado(Davisycolaboradores,2007).Elportaobjetosdebeserexaminadopormediodemicroscopíaópticaparabuscaresporassubesféricascaracterísticasquemidenaproximadamente6X5.5micrones(vealaimagen7.5másabajo).

Imagen.7.6:Microfotografíadeuntejidoenmontajeenfrescoquemuestralasesporas

protozoariasdetipoPerkinsuscaracterísticas. Lavadocloacaloexaminacióndeloscontenidosintestinales: Estosmaterialessonexaminadosenbuscadeesporas,comofuedescritoparalosfrotisdetejido.Estemétodopuedeserusadoenanimalesvivos,peronodeberíaconsiderarsecomounapruebadefinitivaparadeclararalosanimalescomolibresdeinfección.Histopatología: Lanecropsiaesrealizadaenrenacuajosusandolatécnicadefijacióndecadáveres(veaelcapítulo9).Elrenacuajodebeserabiertobrevementehaciendounaincisiónenlacavidadcelómicayluegotodoelcadáverdebesersumergidoenunasoluciónfijadora(porlogeneralestaesde10%formalinatamponadaneutralodeetanol).Lostejidossonprocesadosdeformarutinariaparalaexaminaciónhistológica.Enlaexaminacióndelasseccioneshistológicasseencuentranesporasesféricasbasófilascaracterísticasengrandesnúmeros,infiltrándoseenlostejidostalescomohígado,riñón,bazo,músculoesquelético,pielymesenterio.


Técnicasdediagnósticomolecular: Nohayunapruebaespecíficadediagnósticomolecularqueseencuentreampliamentedisponible.SehautilizadounatécnicaPCRconvencionalusandounaimprimaciónqueamplificaelgenARNribosomal18SdeunaampliagamadeorganismosprotozoarioseucariotasseguidodeunasecuenciacióndeADN(Davisycolaboradores,2007).

7.6DECLARACIÓNDEENFERMEDADESYPARTICIPACIÓNENBASESDEDATOSDEENFERMEDADES

DeclaracióndeenfermedadesdelaOIE LaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIEporsussiglaseninglés)esunaorganizacióninternacionalresponsabledemejorarlasaludanimalanivelmundialyesreconocidacomounaorganizacióndereferenciaporlaOrganizaciónMundialdeComercio(OMC).Apartirdeabrildel2009,había174paísesyterritoriosmiembros.UnodelosobjetivosprincipalesdelaOIEesla"seguridadsanitaria",loquebuscanlograrpormediodelapublicacióndeestándaresdesaludparaelcomerciointernacionaldeanimalesyproductosanimales.EstosestándaressonreconocidosporlaOMCcomoreglassanitariasinternacionalesdereferencia. SelesrequierealospaísessignatariosdelaOIEqueensusreportesnotifiquenalaOIEdecualquierenfermedadimportantecada6meses.Actualmente,dosenfermedadesanfibiassonnotificables,laquitridiomicosisylasenfermedadesranavirales(Schloegelycolaboradores,2010).

• LaautoridadveterinariadelpaísesquienposeelaresponsabilidaddereportarlealaOIE.Losresultadosdelaspruebasparaestasenfermedades,incluyendolosresultadosnegativos,deberíanenviarsealapersonadelpaísqueenvíaelreportealaOIE(OIE,2008).EnlosEstadosUnidos,eljefeveterinarioseríaelUnitedStatesDepartmentofAgricultureAnimalandPlantHealthInspectionService(USDA/APHIS).

• Sinembargo,actualmentelaresponsabilidaddelosreportesdezoológicos,acuariosocoloniasderesguardoparaanfibiosrespectoalaincidenciadequitridiomicosisoinfecciónRanavirusnoesclara(porlomenosenlosEstadosUnidos).ActualmentenohaypautasparaelreportajeolaaplicacióndelasrecomendacionesdelaOIEparalaspruebasdeenfermedades.

• Allistadodeenfermedadesranaviralesyquitridiomicosisseleagregaranrequerimientosparalaspruebasdedeteccióndeenfermedadesinfecciosasparaelenvíointernacionalyposiblementeinterestataldeanfibios.Laslimitacionesacortoplazopodríanincluir:faltadelaboratorioscertificados;costosdelaspruebasdedeteccióndeenfermedadesylacreacióndepoblacionesanfibiaslibresdepatógenosespecíficos;faltadeunabuenapruebavalidadaparadetectarranavirusenanimalesvivos.


• EllistadodequitridiomicosisyenfermedadesranaviralesdelaOIEtambiénpodríanecesitarlacertificacióndelaspruebasyestándaresinternacionalesdereferenciautilizadosenlaspruebasparadetectarestasenfermedades,yaqueestasserelacionanalosenvíosinternacionalesdeanimales.Vealossiguientesenlaces:

• www.oie.int/vcda/eng/en_background_VCDA.htm?e1d9www.oie.int/vcda/eng/en_fichier_SOP.pdf

LosdetallesacercadelosrequerimientosdelaOIEparaelmovimientointernacionaldeanfibiosbajoelcódigosanitariodeanimalesacuáticosparaquitridiomicosisyenfermedadesranaviralespuedenserobtenidosen:Quitridiomicosis:www.oie.int/eng/normes/fcode/en_chapitre_1.8.1.htmRanavirus:www.oie.int/eng/normes/fcode/en_chapitre_1.8.2.htm

Basesdedatosdeenfermedades

Actualmente,hayesfuerzosanivelmundialpararegistrarlaincidenciadeenfermedadesinfecciosasimportantesenanfibios,sobretodolasinfeccionesdelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis(Bd)(TambiénestáenprogresounregistrodeBsal).Seesperaqueestosesfuerzosnosayudenacomprendermejorladistribución,elmovimientoylagenéticadelBd.Mientrasinstituciones,laboratorioseinvestigadoresenelcampoidentificanamásanfibiosinfectadosconBd,seesperaqueestosreportentodalainformaciónpertinentealasbasesdedatosparaasírecolectartodalainformaciónposible.Algunaspreocupacionesquedeberíanabordarseporlasbasesdedatosdisponiblesincluyenlaestandarizaciónyvalidacióndelainformacióngeneradaporunavariedaddefuentesdiferentes,inquietudesrespectoalaprivacidadinstitucionalylapropiedaddelainformación.

LabasededatosmáscompletayactualizadaparaBdseencuentraenlínea:http://www.spatialepidemiology.net/bd/7.7PRUEBASYVIGILANCIAPARADETECTARPARÁSITOSFECALES Laexaminaciónenunlaboratoriodelashecesparabuscarlapresenciadeparásitosinternosesunmétodocomúndevigilanciadeenfermedadesparalagestióndeanfibiosencautiverio.Lastécnicasdeexaminaciónfecalrudimentariasrequierenpocoequipamientoypuedenutilizarseinclusoenubicacionesremotasquetengancoloniasderesguardoparaanfibios.

• Laexaminaciónfecalsirveparadetectarparásitosprotozoariosovarioshelmintos(gusanoscestodos,trematodosonemátodos).Losparásitosdetectadosnoestánlimitadosaltractointestinal.Porejemplo,losgusanosadultosdelnematodoRhabdiasseencuentranubicadosenlospulmonesdeunavariedaddeanfibios.

• Laexaminaciónfecalpuededetectaralosparásitosqueprobablementecausaranproblemasdeenfermedadesenanfibioscautivosyalosorganismoscomensalesquenoestánasociadosaenfermedades.


• Losanfibiossilvestresconfrecuencia(ynormalmente)sonportadoresdeunavariedaddeparásitosinternos,perolamayoríadeestosparásitosyenfermedadesparasitariasnosonconsideradosfactorespoblacionaleslimitantesdentrodelaspoblacionessilvestres.Sinembargo,algunosdeestosparásitospuedencausargravesproblemasdeenfermedadesenpoblacionescautivasdebidoalamalahigiene,uncuidadozootécnicoinadecuadoyelestrés.

• Lavigilanciadeparásitosesnecesariaparamantenerpoblacionescautivassaludables.Losnemátodosrabditiformes,Rhabdias(gusanopulmonaranfibio)ylosStrongyloides(ungusanointestinal)sehanvueltoproblemasimportantesenmuchascoloniasderesguardoparaanfibios(Leeycolaboradores,2006;Pessier,2008;Gagliardoycolaboradores,2008).Ladeteccióndeloslaboratoriosesunaparteimportantedelosprogramasdecontrolparaestosparásitos.

Algunasconsideracionesatenercuentaalahoradedecidirpropuestasparalasupervisiónyelcontroldeparásitosenpoblacionescautivasson:

• Laeliminaciónyelcontroldetodoslosparásitosinternosensituacionesdecautiveriopodríanoserposibleodeseada.Porejemplo:

o Losnemátodosrabditiformes(RhabdiasyStrongyloides)sondifícilesdeeliminarcompletamentecontratamientosantihelmínticos.Porlotanto,unaopciónseríaporénfasisenlareduccióndelosnivelesparasitariospormediodetratamientosyunbuenmantenimientodelahigienedelrecinto,estoesmejorqueusartratamientosextenuadosconstantementeparatratardeeliminarlainfeccióncompletamente.

o Enelcasodelosanimalesencoloniasderesguardoqueserándevueltosalanaturaleza,podríasermejormantenerbajosnivelesdelosparásitosquesonendémicosenlaspoblacionessilvestresdeesaespecie.Existeunapreocupaciónteóricarespectoalaperdidaderesistencianaturaladquiridahaciaestosorganismosquepodríasernecesariaparalasupervivenciadelosanimalesdespuésdesuliberación(<biblio>).

• Esimportantediferenciaentreparásitospatógenosopotencialmentepatógenosy

losorganismoscomensalesquesoncomunesenlostractosgastrointestinalesanfibios(veamásabajo).

Técnicasparalaexaminaciónfecalenbuscadeparásitos

Lastécnicasutilizadasparalaexaminaciónfecalenbuscadeparásitossonmontajesenfresco,flotaciónfecal,sedimentaciónfecalylatécnicadeBaermann.Todasestastécnicassonexplicadascondetalleentextosestándaresdeparasitologíaysonfamiliaresparaveterinarios(Foreyt,2001).


• Lastécnicasmásrudimentarias(montajeenfrescofecalyflotaciónpasiva)paradetectarparásitosfecalessolorequierenunmicroscopiocompuesto(deluz)básicoyreactivossimples.

o Estastécnicassonútilesparalagestiónsanitariadecoloniasanfibiasenubicacionesremotas,ysonadecuadasparadetectarnemátodosrabditiformes,quesonelproblemaparasitariomáscomúnenlascoloniasderesguardo.

• Hayunafaltadeconocimientobásicorespectoalaaparienciadeloshuevosdelosparásitosanfibios.Estohacequealgunasveceslaidentificacióndefinitivaseadifíciloimposible.

Montajeenfrescofecal:• Estatécnicatambiénesllamada"frotisdirecto".• Estatécnicaesmásútilparaidentificaraparásitosmotilescomoalgunasespeciesde

protozooylarvasnematodo.• Serequierenhecesfrescas.Silashecesnopuedenserprocesadasinmediatamente

paralaexaminacióndelaboratorio,deberíanrefrigerarse(4oC).• Estatécnicaesusadafrecuentementeparadetectarparásitosenanfibiosdebidoa

quesoloserequiereunapequeñamuestradehecesparaelanálisis.• Lasdesventajasdelmontajeenfrescoson:1)bajasensibilidadparadetectarbajos

númerosdehuevosuoocistosparasitariosenlamuestra;y2)loshuevosuoocistospuedenseroscurecidosporlapresenciadedesechosfecalesenlamuestra.

• Unsistemadepuntuaciónfecalcualitativousadoeneltratamientodeinfeccionesdenemátodosrabditiformesestábasadoenlaexaminacióndemontajeenfrescofecal(vealasección8.4).

Pararealizarelmontajeenfrescofecal:

1) Apliqueunapequeñacantidad(unagota)desoluciónsalina(clorurosódico0.9%)aunportaobjetoslimpiodevidriodemicroscopio.

2) Agregueunapequeñacantidaddeheces(deltamañodelacabezadeunfosforo)alagotadesoluciónsalina.

3) Mezclelashecesylasalinaenunmovimientocircular.4) Coloqueuncubreobjetosenelportaobjetosyexaminebajo10Xy40Xobjetivosde

microscopioenbuscadeparásitos,óvulosdeparásitoyoocistos.

Flotaciónfecal:• Sepuedenconcentrarmuchoshuevosdeparásitoshelmintospormediodela

flotación.Laconcentraciónincrementalasensibilidaddelaexaminación.• Estatécnicasebasaenelusodeunasoluciónsobresaturadaquelevantahuevos

hacialasuperficiedelacolumnadelíquidodebidoasubajagravedadespecífica.Loshuevossonrecolectadosenlasuperficieysonmenososcurecidosporlamateriafecal(encomparaciónconelmontajeenfrescofecal).


• Lastécnicasdeflotaciónsonpasivas(hecesmezcladasconsoluciónparalaflotación)ocentrífugas.Lastécnicascentrífugassonmássensibles,perorequierenunacentrífuga,porloquepodríannoserprácticasparalascoloniasderesguardoremotas.Másinformaciónrespectoaestatécnicasepuedeencontraraquí:http://www.drmichaeldryden.com/parasitology/5/clinical-parasitology

Pararealizarelmétodopasivodeflotaciónfecal:

1) Prepareunasolucióndeflotación.Espreferibleunasoluciónconunagravedadespecíficade1,2o1,3.Silassolucionesseránpreparadasinsitu,unhidrómetroleresultaríaútilparapoderverificaryajustarlagravedadespecíficadelassolucionesdeflotación.Algunassolucionesdeflotaciónson:

• Sulfatodemagnesio(salesdeEpsom)(400gdisueltosen1000mldeagua).

• Azúcar(454gdeazúcargranulada+355mldeaguacalienteparadisolver)

• Nitratosódico(568gdeanhidroNaNO3+1000mldeaguatibiaparadisolver).

• Sulfatodecinc(33gdeanhidroZnSO4enaguadestilada;llevara100ml).

2) Coloquede1a2gramosdehecesentuboestrechodefondoplanooenun

vialdeflotaciónfecalcomercialmentedisponible(Fecalyzer®,VetoquinolUSA;Ovassay,SybioticsCorporation,USA).

o Paraevaluarlosproblemasdeparásitosfecalesencoloniasdeanfibios,esaceptablerecolectarycombinarhecesprovenientesdevariosanimalesdelmismorecintoparaobtenerunamuestramásgrandeparaelanálisisdeparásitosfecales.

3) Agregueaproximadamente15mldesolucióndeflotaciónymezclebien.Los

vialesdeflotacióndisponiblesenelcomerciovienenincorporadosconunfiltroqueremuevelosdesechosfecales.Siseutilizanvialesconvencionales,lashecesylamezcladesolucióndeflotaciónpuedenserpasadosporunfiltro.

4) Agreguesolucióndeflotaciónadicionalalvialhastaseformaunmeniscoligeramenteconvexoenlacima.

5) Coloqueuncubreobjetosenlacimadelvialyespere10minutos.6) Despuésde10minutos,levanteelcubreobjetosdelasuperficiedelvialy

colóqueloenunportaobjetoslimpiodemicroscopio.7) Examineconunamagnificaciónde10Xy40Xenbuscadeparásitosyóvulos

deparásito.Siseencuentrandisponibleselequipoypersonalentrenado,losmétodosdeflotaciónencentrífugadeberíanserutilizadosporellaboratorio.Losmétodosdecentrífugasonmejoresparadetectaralgunosquistesprotozoariosytambiénhuevosdecestodosynemátodos.Los


detallespararealizartécnicasdeflotaciónfecalporcentrífugaseencuentrandisponiblesenlaliteraturacitadadeparasitologíaestándaryenlínea:Dr.MichealDryden—http://www.drmichaeldryden.com/parasitology/5/clinical-parasitologyUniversityofPennsylvania,DiagnosisofVeterinaryEndoparasiticInfections—http://cal.vet.upenn.edu/projects/dxendopar/index.html Otrastécnicas:

• Lasedimentaciónfecalenaguapodríasernecesariaparadetectarhuevosdetrematodos.Loshuevosdetrematodostienenunaaltagravedadespecíficaysondifícilesdedetectarconmétodosdeflotación.Probablementenodeberíarealizarsedeformarutinariaamenosqueotrosmétodosdevigilanciadeenfermedades(porejemplo,necropsiaehistopatología)indiquenquelacoloniasufredeproblemasdesaludrelacionadosatrematodos.

• Puederealizarseunaesporulaciónendicromatodepotasioparaidentificarespecíficamentealosoocistosdeprotozoococcidios.

Parásitosanfibiosidentificablespormediodeexaminaciónfecal

Unavariedaddeparásitos,huevosdeparásitosyorganismoscomensalespuedenseridentificadosenlaexaminaciónfecaldelosanfibios(PoyntonyWhitaker2001).Laidentificacióndeestoshuevospuederesultardifícilalgunasvecesyaqueexistepocaliteraturaoficialconfiableparalosveterinarios.Puedeencontrarlascaracterísticasgeneralesdehuevosdelosgruposparasitariosprincipalesenlaliteraturarelacionadaareptilesyanimalesdomésticos,estascaracterísticaspuedenserledeutilidadenalgunascircunstancias(Foreyt2001;Jacobson2007;Klingenberg,2007;BarnardyUpton,1994).Másabajoseentregandetallesacercadelaidentificacióneinterpretacióndeparásitoscomunespormediodelaexaminaciónfecal.Nemátodosdetiporabditiforme: Enelcasodelosanfibioscautivos,estossonloshallazgospotencialesmásimportantesquesepuedenhacerenlarevisiónenbuscadeparásitosfecales,estosincluyenalgusanopulmonaranfibio,Rhabdiasspp.yalosparásitosintestinales,Strongyloidesspp.

• LosRhabdiasspp.soncomunesenunaampliavariedaddeanfibioscriadosen

libertad.Estos,enbajosnúmeros,nocausanenfermedades.• Losrabditiformesposeenunciclodevidamuyrápido,loquepuedecausar

superinfeccionesenalgunassituacionesdecautiverio.Algunosfactoreszootécnicostalescomolahigienedelrecintosonextremadamenteimportantesparaelcontroldeestosparásitos.


• Bajocondicionesdecautiverio,losnemátodosrabditiformeshansidoidentificadoscomounadelasmayorescausasdemorbimortalidadenanimalesquehaningresadoacautiveriorecientementeparasuusoencoloniasderesguardo(Patterson-Kaneycolaboradores,2001;Leeycolaboradores,2006;Pessier,2008;Gagliardoycolaboradores,2008).

• Losdetallesacercadeltratamientoyelcontroldelosnemátodosrabditiformessonrevisadosenlasección8.4.

Losnemátodosrabditiformessondiagnosticadoscuandoseobservanlarvascaracterísticasdenemátodosyhuevosembrionadosdeestosenlaexaminaciónenmontajeenfrescofecaloflotaciónfecal.

• Loshuevostienenformaoval,decáscarafina,avecesselesrefierecomodetipoestróngidosoestrongílidosyfrecuentementecontienenungusanolarvalenrollado(huevoembrionado;vealaimagen7.6másabajo)

Imagen7.7:Huevosembrionadostípicosdeunparásitonematodorabditiforme.Cadahuevo

ovalcontieneunalarvainmaduradenematodoenrollada.Magnificaciónde40X• LoshuevosdeRhabdiasyStrongyloidespuedenserdifícilesoimposiblesde

diferenciar.Sitienedisponibleunmicrómetroparamedirhuevos,loshuevosdelRhabdiaspuedensermásgrandes(aproximadamentede87a120micronesdelargo)quelosdelStrongyloidessp.(40a55micrones).

• OtrosnemátodosnorabditiformesdelosanfibioscomoelCosmocerca,elAplectanayelOswaldocruziaposeenhuevosembrionadosypodríanserdifícilesdedistinguirdelosnemátodosrabditiformes.Lostamañosdeestoshuevossonmásparecidosa


losdelRhabdiasspp.Laasistenciadeunparasitólogoylaexaminacióndelosgusanosadultospodríansernecesarias.

• LaslarvasdeStrongyloidessondesenvainadasytienenunacolarectaqueseencuentratruncadaenlapunta.Bajoinmersiónenaceite,lapuntapresentaunamuescaenformadeV

• LaslarvasdeRhabdiasgeneralmentesonreconociblesporposeerunestileteconformadeagujaalfinaldelacola(Imagen7.7).Estaspuedenserdifícilesdedistinguirdelaslarvasdenemátodosdevidalibre(sobretodosilamuestrafuerecolectadadelatierrauotrolugarconmuchomaterialorgánico).

Imagen7.8:LarvadeRhabdiassp.enunmontajeenfrescofecal.Observeelestileteconformade

agujaalfinaldelacola(partesuperiordelaimagen).

• LatécnicaBaermanesutilizadaparaconcentrarlarvasvivasdenemátodosrabditiformes.Usualmente,estatécnicanoesutilizadaparalavigilanciarutinariadeparásitos,peroesútilparaobtenergrandesnúmerosdelarvasdenemátodosparaidentificar.

o Serequierenhecesfrescas.o Lashecessoncolocadasenunaestopillaenunabandejaderejillaenunembudo.Luegosesujetauntuboenlasalidadelembudoyesteesllenadoconaguatibia(30°C)paracubrirlasheces.Despuésde6horas,recolecte


elaguadeltuboypóngalaenuntubodecentrífuga,centrifugueeltuboyexamíneloconunmicroscopiocompuestoparabuscarlarvas.

Otrosnemátodosdeltractogastrointestinal: Existeunagranvariedaddeparásitosnemátodosdiferentesquehansidodescritosdelostractosgastrointestinalesdeanfibiosanivelmundial(GoldbergyBursey;2008;Goldbergycolaboradores,2009;Schotthoeferycolaboradores,2009).

• Existenmuypocosoningúncasoconocidoenqueestosnemátodoshayan

causadoproblemassignificativosdeenfermedadesenanfibioscautivos,peroaunasíestopodríaocurrirbajocondicionesdecuidadoszootécnicosencautiverio,sobretodoamedidaqueespeciesnuevassontraídasalascoloniasderesguardo.

• Existenpocasdescripcionesomicrofotografíaspublicadasquesirvanparaguiarlosdiagnósticosclínicos.Comoyasehaseñalado,elCosmocerca,elAplectanayelOswaldocruzia(untrichostrongylus)puedentenerhuevosembrionadosquepuedennecesitarserdistinguidosdeloshuevosdelosnemátodosrabditiformes.

• NemátodosdetipoOxyurid(oxiuros)Lasinfeccionesdeoxiurossepuedenobservarenrenacuajos(Adamson,1981)yenalgunosanurospostmetamórficos.Estosnohansidoasociadosaenfermedadesy,dehecho,losoxiurospuedenserorganismoscomensalesbeneficiosos(PryoryBjorndal,2005).Noserequieretratamiento.

Protozoosciliadosyopalinidos: Estossonorganismosprotozoarioscomensalescomunesdeltractogastrointestinalanfibio.Estossecaracterizanportenercilio(ciliados)omúltiplesflagelosqueseparecenaloscilios(opalinidos;PoyntonyWhitaker,1994;2001).ElprotozoarioopalíneoProtoopalinasemuestraabajoenlaimagen7.8.

• LaespecieincluyeNyctotheroides(ciliado),Zelleriella(opalíneo)yProtoopalina

entreotros.• Losopalinidossedistinguendelosciliadosporunafaltademacronúcleoo

infundíbulo.• Noserequieretratamiento.


Imagen7.9:ElprotozoarioopalíneoProtoopalinasp.enpreparacionesdemontajeenfrescofecalenmagnificaciónde10X(derecha)y40X(izquierda).

Protozoosflagelados: Unagranvariedaddeprotozoosflageladossoncomensalescomunesdeltractogastrointestinalanfibio(PoyntonyWhitaker,2001).

• Losflageladosseaprecianmejorcomoorganismosmotilesmuypequeñosenunaexaminaciónenmontajeenfrescodelasheces(vealaimagen7.9).

• Eltratamientonosuelesernecesario.• Elestrés,envíorecienteolosambientesalteradospuedenllevaralcrecimiento

excesivoysíntomasclínicosdelosflagelos(pérdidadepeso/inhabilidaddeprosperar).Siaparecensíntomasclínicosjuntoanúmerosmuyaltosdeorganismosenunmontajeenfrescofecal(5a10organismosporcampomicroscópicodealtopoder[40X]),eltratamientoconmedicinascomoelmetronidazolpodríaserútil(PoyntonyWhitaker,2001).

Imagen7.10:MúltiplesprotozoosflageladosenelmontajeenfrescofecaldeunSapodelaerosolde

Kihansi(Nectophrynoidesasperginus).Magnificaciónde40X.


Cestodos(Tenias): Loshuevosdeteniararavezsonidentificadosenunaexaminaciónfecal(Imagen7.10).Noserequieretratamientoamenosqueseobservenpérdidadepesouotrossíntomasclínicos.

Imagen7.11:Huevodeuncestodoenunaflotaciónfecaldeunaranatoroafricana(Pyxicephalusadspersus).Magnificaciónde40X

Trematodos: Loshuevosdeparásitostrematodos(imagen7.11)estánpresenteseneltractourinario(Gorgoderaspp.),tractorespiratorio(Hematoloechusspp.)otractointestinaly,ocasionalmente,puedenserobservadosenlaexaminaciónenmontajeenfrescofecal(PoyntonyWhitaker,2001).

Imagen7.12:Huevosdeunparásitotrematodo(Hematoloechussp.)enunmontajeenfrescofecaldeunaRanaleopardoChiricahua(Lithobateschiricahuaensis).Magnificaciónde40X.


Ameba: LaamebiasiscausadaporelprotozoarioEntamoebaranarummuyraramentehasidodescritacomounproblemaclínico(ValentineyStoskopf,1984;PoyntonyWhitaker,2001).Lostrofozoítosamebianosoquistessepuedenencontrarenmontajesenfrescofecales.Laamoebapuedeserunaespeciedifícildeidentificarytantolasespeciespatogénicascomolasnopatogénicaspuedenestarpresentesenlasmuestrasfecales.Coccidia: Parásitosprotozoariosusualmentedeltractointestinal.LostiposEimeriaeIsosporahansidoreportadosenanfibios.

• Losproblemasdeenfermedades(coccidiosis)sehanobservadoconfrecuenciaenrenacuajos.Raramenteasociadoconenfermedadesenadultos.

• Sediagnósticapormediodelaidentificacióndeoocistosenlaexaminaciónenmontajeenfrescofecaloflotación.

• Puedeconsiderareltratamientosiseobservansíntomasclínicostalescomopérdidadepesoodiarreaosireportesdenecropsiadelosanimalesmuertossugierenunaaltacargaparasitaria(PoyntonyWhitaker,2001).

Criptosporidio: Unparásitoprotozoarioqueraramenteesvistoenanfibios.

• Solohay1reportedeestaenfermedad(gastritisproliferativa)enanfibios(Green

ycolaboradores,2003).DescripciónrecientedeC.frágildelestómagodesapos(Jirkůycolaboradores,2008).

• Noserecomiendalarevisiónrutinaria.Si,basadoenresultadosdelanecropsia,sesospechaqueestápresenteenungrupodeanimales,unatinciónacidorresistentemodificadapodríaserútilparaquesemanifiestenlosoocistosenlasheces.

Acantocéfalos(gusanosdecabezaespinosa): Estosparásitospuedenserencontradoseneltractointestinalyalgunasvecespuedenestarasociadosaproblemasclínicos(perforacionesintestinales,pérdidadepeso)(PoyntonyWhitaker,2001).

7.8HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICASÉRICA Lahematologíaylosanálisisbioquímicosensuerosoncomúnmenteutilizadosenloscontrolessanitariosparamamíferos,avesyreptilesalojadosenentornosdecautiverio.Laexaminacióndelasfraccionescelularesdelasangreenlaformadeconteodeglóbulosblancosesutilizadacomounindicadordeinflamación(incluyendolaasociadaalasenfermedadesinfecciosas).Elanálisisdebioquímicaséricapuedeentregarinformaciónacercadefuncionesorgánicasyfisiológicas.Lahematologíaylosanálisisdebioquímica


séricararamentedebenserrealizadoscomopartedevaloracionesyvigilanciasanitariasenanfibios.Lasrazonesdeestoincluyen:

• Dificultadpararecolectarlacantidadadecuadadesangreparalaspruebasque

sequierenrealizar(especialmenteenlasespeciesmuypequeñas).• Faltaderangosfisiológicosnormalesestandarizadosparamuchasespeciesde

anfibios.• Limitadoconocimientodisponibleparalarevisióneinterpretaciónde

parámetrosdesangre,incluyendocaracterísticascitológicas/morfológicasdelasangreanfibia.

Porestasrazones,elusodelainformaciónentregadaporlahematologíaylabioquímicaensueroparaloscontrolessanitariosdeanfibiosseencuentraensuinfancia.Amedidaqueincrementaelinterésenlasaluddelosanfibios,sereúneexperienciaadicionalyserealizaninvestigacionesprospectivas,estasmetodologíaspodríanserutilizadasconmayorfrecuencia.Siseobtieneinformaciónprovenientedeespeciesanfibiasalojadasenpoblacionesderesguardo,debenhacerseesfuerzospararegistrardetalladamentelosmétodosdelaboratorioutilizadospararecolectarestainformación,asícomolosdatosnuméricos.Estosedebeaqueelmétododelaboratorioutilizadoinfluyeenlosresultadosylahabilidaddecompararhallazgosentrelaboratoriosdependedeestainformación.

Recoleccióndemuestras

Recientementehanhabidovariasrevisionesdelastécnicasdeextraccióndesangreenanfibiosyhematología(Wright,2001a;CampbellyEllis2007;AllenderyFry,2008;HeatleyyJohnson,2009).

• Algunossitioscomunesdevenopunciónincluyenlavenaabdominaldelíneamedia(anuros);plexolingual;venacaudaldelacola(salamandras)ypuncióncardiaca.

• Prefieralaheparinacomoanticoagulante.ElEDTAestáasociadoalalisisdelosglóbulosrojosenmuchasespecies.

• Dependiendodeltamañodelespécimen,essegurorecolectarhastaun1%delpesocorporal(porejemplo,0.1mldesangrepor10gdepesocorporal)deunanimalsaludable;enelcasodelosanimalesenfermosodebilitados,sedeberíanrecolectarmenoresvolúmenes.

• Elsuerooplasmapuedeserdecolorazul,verdeonaranjo,inclusoenlosanimalessaludables.

• Siunveterinarioexperimentadoseencuentradisponible,elusodeanestesiademetanosulfonatodetricaína(MS-222)odeaceitedeclavopuedenhacerlarecoleccióndemuestrasmásfácilyconestrésreducido(Wright2001b;Mitchell,2009).


Análisisdemuestras

• Enelcasodelosanimalesmuypequeños,sepuedeadquiririnformaciónsirealizaunestimadodelconteodeglóbulosblancosenunfrotisdetincióndesangre.

• LosconteossanguíneoscompletosserealizanusandométodosmanualestalescomoaquellosqueusanunasoluciónNatt-Herricks.

• Lamorfologíaylafuncióndelosglóbulosblancosanfibiosesunáreaquerequiereinvestigacionesadicionales.Existenformasmorfológicasdegranulocitosquesonsimilaresalosneutrófilosyloseosinófilos(encontrastealos"heterófilos"deavesyreptiles).

• Loslaboratoriosveterinarioscomercialesdediagnósticoqueaceptenmuestrasdereptilespuedenserutilizadosparaanalizarlasmuestrasdeanfibios.Siellaboratorioyatienepanelesparareptiles,estospuedenserusadosparaanfibios,sinembargo,unasustituciónrecomendadaesincluirnitrógenoureicoenlasangreenvezácidoúrico(asíreflejandolosresiduosnitrogenadospredominantesdelosanfibios),exceptoenelcasodelosanfibiosuricotélicos(porejemplo,Phyllomedusaspp.yChiromantisspp.)

• Lainterpretacióndelosresultadospuedeserdifícil.Unavariedaddefactorescomoelestadodehidratación,laestacionalidadyelsexodelanimalpuedeninfluenciarelresultadodelosparámetroshematológicosybioquímicosaungradomásaltoqueelobservadoenotrasespeciesnormalmentetratadasporveterinariosdezoológico.

• Pocosvaloresreferencialesnormalesseencuentrandisponibles.Unresumenseencuentradisponible(Wright2001a).LasbasesdedatosdelaInternationalSpeciesInformationSystempuedenserunabuenafuentedeinformación(www.isis.org/CMSHOME/)

• Paralainterpretacióndelosresultadosdeunanimalenfermo,esútilobtenertambiénunamuestradelamismaespecie,sexoycondicioneshabitacionalesparaluegocompararlas.

7.9LABORATORIOSQUEACEPTANMUESTRASDEANFIBIOS

NecropsiaehistopatologíaEstadosUnidos

• NorthwestZoopath,654W.MainSt.,Monroe,WA98272Phone:(360)794-0630Fax:(360)794-4312([email protected])

• Zoo/ExoticPathologyService,2825KOVRDrive,WestSacramento,CA95605Phone:

(916)725-5100([email protected])


• AmphibianDiseaseLaboratory,SanDiegoZoo’sInstituteforConservationResearch([email protected])

Pruebasdediagnósticomoleculares("PCR")

EstadosUnidos• PiscesMolecularPCRconvencionalparadetectarelhongoquítridoanfibio

Batrachochytriumdendrobatidis.(www.pisces-molecular.com)• AmphibianDiseaseLaboratory,SanDiegoZoo’sInstituteforConservationResearch

PCRTaqmanparadetectarelhongoquítridoanfibioyranavirus.(www.sandiegozoo.org/conservation/news/low-cost_health_screening_for_captive_amphibians)

• SchoolofBiologicalSciences,CenterforIntegratedBiotechnology,WashingtonStateUniversity.PCRTaqmanparadetectarelhongoquítridoanfibioyranavirus.([email protected])

• ZoologixLaboratories.PCRTaqmanparadetectarelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisyranavirus.(www.zoologix.com)

• ResearchAssociatesLaboratories.www.vetdna.com• UniversityofSouthDakota,[email protected]

UnitedKingdom• [email protected]

Australia • AustralianAnimalHealthLaboratory,Geelong.OIEdiagnosticreferencelaboratory

forchytridiomycosisandranaviruses([email protected]).• JamesCookUniversity,Townsville.Diagnosticresearchlaboratoryfor

chytridiomycosis([email protected]).Switzerland

• EcogenicsLaboratory.www.ecogenics.ch/indexhtml


7.10LiteraturacitadaAdamson,M.L.1981.DevelopmentandtransmissionofGyrinicolabatrachiensis(Walton,

1929)(Oxyuroidea:Pharyngodoniae).CanadianJournalofZoology59:1351–1367.Allender,M.C.,andM.M.Fry.2008.Amphibianhematology.VeterinaryClinicsofNorth

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Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—184

CAPÍTULO8

TRATAMIENTOYCONTROLDEENFERMEDADES

8.0INTRODUCCIÓN Entrelosproblemasmásimportantesdeenfermedadesinfecciosasidentificadosenlaspoblacionesderesguardoparaanfibiosseencuentranlaquitridiomicosis,infecciónRanavirusylainfecciónconnemátodosrabditiformesRhabdiasyStrongyloides.Losobjetivosdeltratamientomédicoylasotrasmedidasdecontroldeenfermedadesdescritasenestecapítuloson:

• Mitigarlosefectosdelasenfermedadesinfecciosaseneléxitoylasostenibilidaddelaspoblacionesdeanfibioscautivos.

• Reducirelriesgodequepoblacionesdeanfibioscautivospuedanactuarcomofuentesdeenfermedadesinfecciosaslimitadorasdepoblaciones(porejemplo,laquitridiomicosisyelRanavirus)parapoblacionesdeanfibiossilvestres.Estaspoblacionescautivasnosolosedefinencomoanfibiosenpoblacionesderesguardo,sinoquetambiénpuedenseraquellasconotrosroles,comolosanimalesparaexhibicionesoconpropósitoseducacionalesycomerciales(porejemplo,intercambiodemascotas,animalesdelaboratorioocomida).

• Identifiquemétodosquepuedanserusadosparacrearpoblacionesanfibiasqueesténlibresdepatógenosespecíficos,sobretodoparaesostiposdeanfibiosquesontrasladadosfrecuentementecomoresultadodelcomerciodeanfibiosodeprogramasdeconservación.

Deberíaserreconocidoclaramenteporveterinariosyotraspersonasqueimplementenregímenesdetratamientosparaenfermedadesinfecciosasquemuypocasrecomendacionesterapéuticasparaanfibiosestánbasadasenensayosexperimentalesdobleciegosocontrolados.Lamayoríadelostratamientoshansidoderivadosempíricamentey,porlotanto,nosoneficientesentodaslascircunstanciasopodríannosersegurosdeusarentodaslasespeciesoetapasdevidaanfibias.Finalmente,enelcasodealgunosagentespatógenos(porejemplo,Ranavirus),noseencuentrandisponiblesmétodosdetratamientoespecíficoysedeberíaponerénfasisenmétodosdecontroldeenfermedades. Enelcasodelaspoblacionesderesguardo,ladecisióndetrataraanimalesporunaenfermedadinfecciosaespecíficaolosobjetivosdeltratamiento(porejemplo,lacompletaeliminacióndeunparásitopormediodetratamientoountratamientoparareducirlosnúmerosdeparásitos,peronoparaeliminarlainfección)dependerándefactorestalescomo:

• Laimportanciadelagentepatógenoparalasaluddelapoblacióncautiva.Sisevenefectosmínimosenlosanimalescautivos,eltratamientopodríanosernecesario.


• Podríaserconvenientemantenerpoblacionesderesguardoqueesténinfectadasconagentespatógenosoparásitosqueseencuentrennaturalmenteenlapoblaciónsilvestre.Supuestamente,estopermitiríaquelosanimalescautivosqueserándevueltosalanaturalezamantengansuadaptabilidaddeespeciehospedanteosuinmunidadhaciaunagentepatógenoespecífico.

• Podríaserconvenientedesarrollarpoblacionesderesguardoquehayanadquiridoalgunaresistenciaoexposiciónaagentespatógenos(porejemplo,elhongoquítridoanfibio)queseanresponsablesdedisminucionesenlapoblaciónsilvestre.

• Ladecisióndetratarporunpatógenoaunindividuoounapoblacióntambiéndependerádelaincidenciadelaenfermedadenanimalesconspecíficosydecontacto,otraspoblacionescautivasyenpoblacionessilvestres.

8.1MÉTODOSDETRATAMIENTOYCONTROLDELHONGOQUÍTRIDODE

ANFIBIOS Losmétodosdetratamientoparaelhongoquítridodeanfibiossonnecesariospara:

• Reducirlamorbimortalidadenpoblacionescautivasdebidoaestainfección.• Elsalvamentodepoblacionesdeanfibiossilvestresexperimentandomortalidad

debidoaquitridiomicosis(Gagliardoycolaboradores,2008).• Reducirelriesgohacialaspoblacionesdeanfibiossilvestresycautivos

planteadosporanfibiosqueesténinfectadosconhongoquítridoyquepuedanintroducirelhongoanuevoslugares.

• Lacreacióndepoblacionesdecrianzadeanfibiosqueesténlibresdeinfeccionesfungalesquitridias(libresdepatógenosespecíficos).Estaspoblacionespuedenserutilizadascomopoblacionesderesguardooparapropósitoscomerciales(porejemplo,animalesdelaboratorioymascotas).

Elhongoquítridoanfibio(Bd)tieneunaespecificidaddelhospedadormuybaja,locualfuedemostradoporlaidentificaciónenmásde200especiesy20familiasrepresentandoalosanuros,caudadosycecílidos(Gowerycolaboradores,2013).Aunqueunaampliagamadeespeciesanfibias(probablementelamayoría)sepuedenverinfectadas,diferentesanfibiospuedenvariardeformaconsiderableensususceptibilidadalaenfermedadquitridiomicosiscausadaporBd.ElBsalsóloseconoceporinfectaraanfibioscaudados.LosanfibioscaudadosdelPaleárticooccidentalparecenserparticularmentevulnerablesalaquitridiomicosiscausadaporlainfecciónBsal.Enelcasodemuchasespecies,lainfecciónnocausasíntomasexternosdeenfermedades(infecciónsubclínica),peroestosanimalesinfectadosaunasípuedenactuarcomofuentesdeinfeccionesparalasespeciesquesonaltamentevulnerablesalasenfermedadescausadasporBd(quitridiomicosis).Porestarazón,suelesernecesario


trataralosanfibioscautivosporinfeccionescuandoestánseanidentificadasyaseacomocausadeenfermedadocuandoseidentifiqueunainfecciónsubclínicausandounapruebaPCR(vealasección6.7–6.8yelcapítulo8). Aunquesehalogradoeltratamientoexitosoparaelhongoquítridoanfibio,existendesventajasparatodoslosmétodosdetratamientodescritos(Youngycolaboradores,2007;Bergerycolaboradores,2010;Blooiycolaboradores,2015).Estasdesventajasincluyen:

• Lostratamientosnosonconsistentementeexitososeneliminarlainfecciónquítridaentrelasespecies.

• Existeunanecesidadderealizarpruebasexperimentalescontroladasdelosmétodosdetratamientoparalainfecciónquítrida.Lamayoríadelostratamientoshansidoderivadosempíricamenteyprobadosenunasolaespecieosoloenunpequeñonúmerodeindividuos.Senecesitandesesperadamentepruebasqueexaminenaunavariedaddeespeciesanfibiasdiferentesyqueevalúentantolaeficaciadeltratamiento,asícomolatoleranciayseguridadentreespecies.Otraspruebaspodríanexaminarcombinacionesdetratamientosdiferentes(porejemplo,unacombinacióndecalorymedicamentosantimicóticos).

• Algunasmedicinasoregímenesdetratamientossontóxicosonosontoleradosporalgunasespeciesanfibiasoetapasdevidaanfibias(porejemplo,renacuajos).Muchosdelosreportesdemuertesasociadasalostratamientoshansidopobrementedocumentados

• Algunostratamientospuedenpresentarriesgosparalasaludhumana(porejemplo,malaquitaverde;cloranfenicol).

• Existenpocostratamientosconfiablespararenacuajos(Garnerycolaboradores,2009).

Algunoscomentariosgeneralesacercadetodoslosmétodosdetratamientoparaelhongoquítridoanfibioson:

• Existendiferenciasimportantesenlahabilidaddetolerarmedicaciónantimicóticadelasespeciesyetapasdevida(porejemplo,renacuajo,jóvenesyadultos).Sinohayexperienciaconunmedicamentoespecíficoenunaespecieoetapadevida,esrecomendabletrataraunnúmeropequeñodeindividuosparaevaluarlaseguridaddelmedicamentoantesdetrataraungrupoenterodeanimales.

• Yaquelainfecciónestáubicadaenlasuperficiedelapiel,lostratamientossuelenseraplicadostópicamentecomounbaño.Esimportanteagitarlasolucióndeltratamientoperiódicamenteparagarantizarquelamedicaciónhagacontactocontodaslassuperficiesdelapiel(dorsalesyventrales).

• Dadoqueelhongoquítridotienelacapacidaddepersistirenelmedioambiente,esimportantequelosanimalesseanalojadosenunrecintolibredehongo


quítridodespuésdecadatratamientodiario.Veaelpaso#1delprotocolodetratamientoitraconazolmásabajo.Ladesinfeccióndiariadelosrecintosysuamuebladoesnecesaria(veaelcapítulo5).

• Losanimalesnodeberíanserdevueltosaunrecintopermanentecontaminadodespuésdesutratamientoparaelhongoquítrido.Losrecintospermanentesdebenserlimpiadosydesinfectadosminuciosamente.Sedeberíanusarnuevossustratos.

• Dadoquelostratamientosnosonuniformementeefectivos,esaltamenterecomendadoelusodepruebasPCRdespuésdeltratamientoparaevaluareléxitooelfracasodeesteenlosanimales.Podríansernecesariasmúltiplespruebasparaestarsegurodequelosanimalesseencuentranlibresdeinfeccióndespuésdeltratamiento(vealasección7.3).

• SiunapruebaPCRresultapositivadespuésdelprimertratamiento,seránecesariounsegundotratamientoconlamismaodiferentemedicaciónométodoparagarantizarlaliquidacióndelainfecciónBd.Algunasvecessonnecesariosmúltiplesciclosdepruebasytratamientosparagarantizarlaliquidacióndelainfección.

• SilosanimalesestánenfermosomuriendoporinfeccionesBd/Bsal(quitridiomicosis),esútilentregartratamientocomplementarioconelectrolitos(Voylesycolaboradores,2007;Voylesycolaboradores,2009;Bergerycolaboradores,2010)yconantibióticos(porejemplo,Baytril).Vealasección8.5paradetallesacercadelaformulacióndesolucionesdesuplementacióndeelectrolitos.

• Mientrasquelasinstitucionesempiezanadiagnosticaryatratarquitridiosmásampliamenteensuscolecciones,surgeunaoportunidadparadeterminaranecdóticamentecualesprotocolosdetratamientoresultanmáseficacesparacualesespecies.Resultaríaútilunacoleccióndeinformaciónqueincluyalaespecie,tamaño,dosisusada,metodologíadedosis,períododetratamiento,diagnósticosdeseguimiento,resultadosynecesidadderepetirlostratamientos.Recolectarinformacióndeloquenofuncionaestanimportantecomolainformacióndeloquesifunciona.

Sehandescritounavariedaddemétodosdetratamientoenlaliteraturaoanecdóticamentedentrodelosprogramasdeconservacióndeanfibios.Estoshansidorevisadosrecientemente(Bergerycolaboradores,2010).Eltipodetratamientodependerádevariosfactores,incluyendo:

• Costo.• Ladisponibilidaddelosmedicamentosespecíficos.• Elnúmerodeanimalesquedebensertratados.• Latoleranciaconocidaoanticipadadelasespeciesalostratamientostales

comoeldealtastemperaturasambientalesoeldeitraconazol.


Másabajoseentregainformaciónrespectoalatransmisióndelhongoquítridoanfibioydatosespecíficosdealgunosdelosmétodosdetratamientomásusados.

Transmisióndelhongoquítridodeanfibios Losaspectosdelatransmisióndelhongoquítridodeanfibiosquesonútilesparaeldiseñodetratamientosyprogramasdecontrolincluyen:

• Elestadoinfecciosodelhongoquítridodeanfibiosresponsabledelatransmisióndelainfeccióneslazoosporaflagelo.Laincidenciadeesporasresistentesodeetapasdereposonohasidoclaramentedocumentada.

• Esposiblealbergaraanfibiosinfectadosconhongoquítridoenlamismahabitaciónoinstalaciónquelosanfibiosnoinfectadossinriesgodetransmisiónoinfección.Estorequierecuidadosaatenciónalasprácticasdebioseguridad(vermásabajo).

• LaszoosporasinfecciosasdeBatrachochytriumdendrobatidissonmuyvulnerablesaladesecación(secadocompleto),porlotanto,sutransmisiónporlogeneralrequierematerialesoherramientashúmedasocontactoentreanimales)JohnsonySpeare,2003;Piotrowskiycolaboradores,2004).

• ElhongoquítridoBatrachochytriumdendrobatidishaprobadosercapazdesobrevivirenaguadesionizadapor3a4semanas,enaguadelagoesterilizadapor7semanas,enarenahúmedaderiopor3mesesyenplumasdeavesporhasta3horas(JohnsonySpeare,2003;JohnsonySpeare,2005).

• Lasprácticasdebioseguridadquesonútilesparacontrolarinfeccionesytransmisionesson:

o Evitemoveranimales,sustratoshúmedosomojados(porejemplo,tierra,grava,musgo,plantas),amuebladodelajaulaoaguaentrerecintosdiferentes.Desinfecteherramientasyequipodespuésdeusarlosenrecintosdiferentes.

o Sigalasrecomendacionesparalahigiene,patronesdetrabajoehigienedelrecintoenlassecciones4.9,4.12yelcapítulo5.

o Useprácticasdedesinfecciónpararecintosyequipoqueseanconocidasporeliminarelhongoquítridoanfibio.Veaelcapítulo5.

TratamientodeinfecciónBdconitraconazol

Ladrogaantimicóticadetipoazole,itraconazol,escomúnmenteusadaenzoológicosyprogramasdeconservacióndeanfibiosparaeltratamientodequitridiomicosiscausadaporBatrachochytriumdendrobatidisenanfibiospostmetamórficos(Nicholsycolaboradores,2000;Forzanycolaboradores,2008;Gagliardoycolaboradores,2008;Pessier,2008).Existenalgunaspruebasclínicascontroladasqueapoyanelusodeitraconazol,sinembargo,estaspruebassehanbasadoenpequeñosnúmerosdeanimalesoespecies(Nicholsycolaboradores,2000;LamirandeyNichols,2001;Garnerycolaboradores,2009).


Lasventajasdelitraconazolincluyen:

• Usoexitosovariosprogramasdeconservacióndeanfibios.EnlosEstadosUnidos,losprogramasdecríaencautiverioparaelsapodeWyoming(Anaxyrusbaxteri)yelsapopuertorriqueño(Peltophrynelemur)hanusadoestamedicaciónextensivamente.Elusodeitraconazolenunaoperaciónderescatedeunavariedaddeespeciesanfibiaspanameñasparecióestarbientolerado(Gagliardoycolaboradores,2008).

• Elitraconazolpodríaposeerventajassobreotrosmedicamentosantimicóticosazole,yaqueenlosmamíferossevuelvemásconcentradoypersisteentejidosqueratinizadostalescomolapiel.Estonohasidocomprobadoenanfibios.

• Eltratamientodeaplicacióndiariaesporuncortoperíododetiempo(5a10minutos).

• Tienemenosriesgosdeseguridadparahumanoscomparadoconotrosmétodosdetratamientodescritos.

Lasdesventajasdelitraconazolson:

• Elprotocolodetratamientoquehasidousadofrecuentementeparaanfibiospostmetamórficosenprogramasanfibiosdecautiverioestóxicoparalosrenacuajosyalgunasranasrecientementemetamorfoseadas.Esteprotocoloestándar,usandounasoluciónde0,01%itraconazol,nodeberíaserusadoenestasetapasdevida.UnprotocoloalternativousandounaconcentraciónsubstancialmentemásbajadeitraconazolfuetoleradoporrenacuajosAlytesmuletensis,peroresultoendespigmentacióndelapiel(Garnerycolaboradores,2009).

• Existeunavariaciónencomolosanimalespostmetamórficostoleraneltratamientoconlasoluciónestándarde0,01%deitraconazol.Sehanregistradocasosdeanorexia,úlcerascorneales,enfermedadesdelriñónymuertesenalgunasespecies(sobretodoenránidos)relacionadaaltratamiento.Cuandoseestétrabajandoconespeciesoetapasdevidanovedosas,eltratamientodeberíaserprobadoyevaluadocuidadosamenteantesdesuaplicacióngeneralizada.

o Lasobservacionesdeefectosadversosnohansidoconsistentesypuedequelamismaespecietolereeltratamientobienenunainstalaciónyqueobtengaresultadosnegativosenunainstalacióndiferente.Losfactoresqueinfluencianelresultadodelostratamientospodríanincluirlaseveridaddelaenfermedadantesdeltratamiento;variacionesencomolamedicacióndeltratamientoesformuladaoaplicada;yreaccionesidiosincráticasalasdrogas.

o Lascausasdemuertesasociadasatratamientostambiénpodríanincluirfactoresrelacionadosalaformulacióndelitraconazol.Paralograrlasolubilidaddelmedicamentoenunaformaacuosa,lasoluciónoraldelcomercioesmuyácida.UnbajopHpodríaresultarenirritacióncutáneao


disfunciónosmótica,locualpodríaserdifícildetolerarparaanimalesqueyaseencuentranosmóticamentecomprometidosdebidoaunaenfermedadoparaformasdevidacompletamenteacuáticascomolosrenacuajos.ElusodesolucionesmenosconcentradasdeitraconazololaaplicacióndetratamientosconsolucionesconcapacidaddeproteccióncomolasoluciónparaanfibiosdeRingerpodríaresultarútil.

• Algunasdelasmedicinasantimicóticasdetipoazole(comoelitraconazol)disminuyenlasíntesisdehormonasdeesteroidestalescomolatestosteronaoloscorticosteroides,locualpodríatenerunimpactoenlaviabilidadreproductivadelosanimales.Enelcasodelitraconazol,estosefectossecundariossonmínimosenlosmamíferos,perosuefectoenanfibiosnohasidoestudiado.Algunosanfibiosenpoblacionesderesguardosometidosaltratamientoconitraconazolhanpodidoreproducirseconéxitodespuésdeltratamiento(sapodeWyoming,ranadoradadePanamá,sapopuertorriqueño).

• Lasoluciónoraldeitraconazoldisponibleenelcomercioescara,porloqueeltratamientodeungrupograndedeanimalestendríacostesprohibitivos.

Imagen8.1—Unaranahylidae(Hyloscirtuscolymba)dePanamáquemuestrasíntomasdeun

casoclínicoodequitridiomicosiscontraídaenlanaturaleza.FotoporE.Baitchman.

Protocolodetratamientoconitraconazol Elprotocolodetratamientoconitraconazol,másfrecuentementeutilizadoenprogramasdeconservacióndeanfibios,fuedesarrolladoenpequeñosensayosconranasdelgéneroDendrobatescautivasenelSmithsonianNationalZoo(Nicholsycolaboradores,2000;LamirandeyNichols,2002).Elprotocolofuederivadoempíricamenteydespuésfueaplicadoaunavariedaddeespeciesanfibiasenparámetrosdecautiverio(Rendleycolaboradores,2015).SususosincluyeneltratamientodeanimalesenfermosconquitridiomicosiscausadaporBd,eltratamientodeanimalesinfectadossubclínicamenteconBdyeltratamientoprofilácticodeanimalesdealtoriesgoantesdesuhibernación,envío,apareamiento,translocaciónyreintroducciónalanaturaleza.


Elprotocolooriginalutilizounasuspensióncompuestadeitraconazoldiluidoen0,6%NaCL(salino)diariamentepor11días.Posteriormente,hanemergidomuchasvariacionesdelprotocoloylamayoríadeestasutilizanunasoluciónoralde10mg/ml(1%)deitraconazol(Sporanox®OralSolution;Itrafungol®OralSolution)parahacerunasolucióndetratamientode0,01%pormediodeladiluciónensolucióndeRingerparaanfibios.Serecomiendaelsiguienteprotocolo:

1. Duranteelperíododetratamiento,losanimalessonmantenidosenrecintosqueseanfácilesdedesinfectar.Algunasopcionesincluyenrecintostemporaleshechosdecontenedoresplásticosdecomida(“Tupperware®”),recintosbaratosdeplásticoparaanimales(“PetPals®”),acuariosdevidrioygrandescontenedoresdeplástico(“Rubbermaid®”).

• Lossustratosdelrecintotemporaldeberíanserdesechables(por

ejemplo,toallasdepapel,musgosphangnumhúmedo)ysercambiadosdiariamente.

• Elamuebladodelrecintotemporal(porejemplo,cajasparaesconderse)deberíaestarhechodematerialesfácilesdelimpiarydesinfectados.Estosdeberíanserdesinfectadosdiariamente.

• Esútiltener2conjuntosderecintosyamuebladospararecintosquepuedanalternarseentrelosdíasdetratamiento.Despuésdequelosanimalesrecibantratamiento,estosdebensercolocadosenelrecintolimpioquedeberíahabersidodesinfectadoeldíaanterior(vermásabajo).

2. Sinohayexperienciapreviausandoitraconazolenlaespecieoetapadevida

(porejemplo,renacuajo,jovenoadulto)queserátratada,elprotocolodetratamientodeberíarealizarseenunpequeñonúmerodeanimalesparaevaluarsuseguridadantesdetrataraungrupograndedeanimales.Estopodríanoserposibleenlassituacionesqueinvolucrenaanimalesenfermosocercadelamuerte.Consideretrataraestosanimalesconconcentracionesmásbajasdeitraconazol(vea#3másabajo).

3. Lasolucióndeltratamientoconitraconazoldebeserpreparadadiariamente.La

soluciónoralde10mg/ml(1%)deitraconazol(Sporanox®OralSolution;Itrafungol®OralSolution)disponibleenelcomerciodebeserdiluidaensolucióndeRingerparaanfibios(vealasección8.5paralareceta)parahacerunasolucióndetratamientode0,01%.Nouselasolucióndetratamientode0,01%enrenacuajosoenanimalesrecientementemetamorfoseados(puedequebajasconcentracionesdeitraconazolseanseguras,vermásabajo).


• Paraprepararcadasolucióndetratamientode100ml,agregue1,0mlde10mg/mldeitraconazola99mldesolucióndeRingerparaanfibios(parapreparar1litrodesolucióndetratamientoagregue10mlde10mg/mldeitraconazola990mldesolucióndeRingerparaanfibios).Estoesequivalentea100mgdeitraconazolporlitrodesolucióndetratamiento.

• Experienciasrecientesmuestranqueelusodeconcentracionesdeitraconazolmenoresa0,01%puedenserexitosasenlaeliminacióndeinfeccionesBd.Senecesitanpruebasexperimentalesparadeterminarlaconcentraciónmínimaefectivadeitraconazol.Elusodeconcentracionesmásbajasessugeridoparatrataraespeciesquenopuedentolerareltratamientoconsolucionesde0,01%osinotieneexperienciapreviautilizandoitraconazolenunaespecie.Algunosdelosasistentesatallereshanempezadoausarsolucionesdetratamientode0,005%(50mgporlitro)omenosconéxito.

• Unensayoexperimentalúnicotratoconéxitoarenacuajosdelferreret(Alytesmuletensis)conunaconcentraciónmuybajadeitraconazol(de0,5a1,5mgdeitraconazolporlitrodesolucióndetratamiento).Sinembargo,estosrenacuajosperdieronpigmentaciónenlapiely,porlotanto,laseguridadalargoplazodeestetratamientoenrenacuajosesdesconocida(Garnerycolaboradores,2009).Actualmente,estabajadosisnoesrecomendadaparaanimalespostmetamórficos.

4. Eltratamientodebañodeitraconazoldebeseraplicadopor5minutos1vezal

díapor10díasconsecutivos.

• Elusodebolsasplásticasconunselladodetipocierre(porejemplo,Ziploc®),vasosdeplásticodesechables(Forzanycolaboradores,2008)ocontenedoresplásticosdesechablesdecomidasonútilesparalaaplicacióndelosbañosdeitraconazol.Elbajovolumenrequeridoparaestoscontenedoresreducelacantidaddesolucióndetratamientonecesaria.Elusodebolsasplásticasparecereducirelestrésdeltratamientoparaalgunosanimales.

• LasolucióndeitraconazolsevolveráblancaoparecidaalechecuandoseaagregadaalasolucióndeRingerparaanfibios.Algunosanimalesreaccionarancuandoseancolocadosenlasolucióndetratamientoytratarandeescapardelbaño(estopodríacausarirritacióncutánea).Siseobservanreaccionesextremas,deberíaconsiderarseelusodeunaconcentraciónmásbajadesolucióndeitraconazol.

• Lasolucióndetratamientodeberíacubrirlassuperficiescutáneasventralesyextenderseaproximadamentealamitaddelassuperficies


lateralesdelcuerpo.Losanimalesnodeberíannadaroflotarenlasolucióndetratamiento(exceptoenelcasodelasespeciesanfibiastotalmenteacuáticas).

• Elcontenedordetratamientodebeseragitadoregularmenteparaasegurarsedequelasolucióndetratamientoalcancetodaslassuperficiesdelapiel(dorsalyventral).Evitequelosanimalessubanalosladosdelcontenedordetratamientoparaescapardelasolucióndetratamiento.

• Despuésdecadatratamientodiario,losanimalesdebenserdevueltosaunrecintolimpioypreviamentedesinfectado(vea#1másarriba).

5. Enelcasodelosanimalesqueseencuentrenclínicamenteenfermoscon

quitridiomicosis(porejemplo,quemuestrensíntomasdeletargo,anorexia,malosreflejos,descamaciónexcesivadelapiel,posturaencorvada)untratamientodeapoyoconelectrolitosyantibióticossuplementariospuedeserútil.

• Ranasinfectadasexperimentalmenteconquitridiomicosisterminal

mostraronserhiponatrémicasehipocalémicas(Voylesycolaboradores,2007;Voylesycolaboradores,2009).

• Paraintentarcorregirlasanomalíasenloselectrolitos,sesugierelaadministraciónpormediodesondagástricade12%soluciónoralWhitaker-Wright(Voylesycolaboradores,2009;Bergerycolaboradores,2010).Vealasección8.5paralaformulacióndeWhitaker-Wright.

• Alternativamente,oademásde,losanimalesqueseencuentranafectadosclínicamenteporquitridiomicosisdebensercolocadosenunbañoRingerparaanfibios,preparadoconunaconcentraciónisotónicaounaligeramentemásgrande,estoconelpropósitodefomentarlaretencióndeelectrolitos.LafuentedeaguaregularpuedeserreemplazadaconsolucióndeRingerparaanfibios.Lasolucióndebesercambiadadiariamente.

• Tambiéndebeseradministradountratamientoantibióticoempírico(porejemplo,enrofloxacina)paratratarinfeccionesbacterianassecundarias.

• UnarevisióndelaterapiadefluidosparaanfibiosseencuentraenWrightyWhitaker(2001).Fórmulasparalassolucionesdeelectrolitosseentreganenlasección8.5.

6. Eltratamientodebeserdescontinuadodespuésde10días.Eléxitodel

tratamientopuedeserverificadopormediopruebasPCRdehisoposcutáneos(vealassecciones7.2y7.3).


• LasmuestrasparalaspruebasPCRdebenserobtenidas2semanasdespuésdequetermineeltratamiento.Estopermitequelosanimalesterminendedescamarpielquepuedacontenerorganismosquitridiosinactivosomuertos.

• Yaquelosanimalestratadospodríanpresentarmuybajosnivelesdeinfección,sesugierequealmenos2o3hisoposparaPCRseanobtenidosenunperíodode2semanas.MúltiplespruebasPCRnegativasentreganmásseguridaddequelosanimaleshayaneliminadoconéxitolainfección

• Combinarlasmuestrasdemúltiplesanimalesdelmismogrupodetratamientopuedeayudarareducirloscostosdelaspruebasposttratamiento.Sicualquieranimalenelgrupodetratamientodaunresultadopositivo,elgrupoenterodebeconsiderarseinfectadoysertratadodenuevo.

7. Unsolociclodetratamientode10díasnosiempreesefectivoparaeliminarla

infecciónBd.Unsegundociclodetratamientoy,ocasionalmente,múltiplesciclosdetratamientopodríansernecesariosparaeliminarlainfeccióndelosanimales.Algunasposiblescausasdefallasdeltratamientoincluyen:

• Nodesinfectarlosrecintosdelosanimalesdespuésdecadatratamientodiario.

• Noagitarlasolucióndetratamientoparaasegurarsedequetodaslassuperficiesdelapielesténcubiertasconmedicaciónopermitirquelosanimalesescapendelasolucióndetratamiento(porejemplo,subiéndosealosladosdelcontenedordetratamiento).

• Siseutilizansuspensionesdeitraconazolcompuestasenvezdelasoluciónoralde10mg/mldisponibleenelcomercio,elitraconazolpodríadesprendersedelasoluciónyquedarseenelfondodelcontenedordetratamiento.Agitarymezclarfrecuentementepodríasernecesarioparalassolucionesdetratamientohechasdesuspensionesdeitraconazol.

8. Laaplicaciónenelcampodelprotocolodetratamientodeitraconazolpuede

lograsefácilmenteypuedeincrementarlasupervivenciadelosanimalesprovenientesdeambientesconBdqueestánsiendorecolectadosparacoloniasderesguardoyconservación.LosanimalesqueseanpositivosparaBdcuandosoncapturadospodríandesarrollarrápidamenteenfermedadesclínicasdebidoainmunosupresióncausadaporelestrés.Aquellosanimalesquesoncapturadosenlosprimerosdíasdeexpedicionesqueduraranvariosdíaspodríanestarespecialmenteenriesgodedesarrollarenfermedadesirreversiblesparacuandotodosseantraídosalainstalaciónprimariadecuarentenaytratamiento.EnlasregionespositivasparaBd,iniciarelprotocolodetratamientodentrodelasprimeras24horasdelacapturapuedeincrementarnotablementelastasasdesupervivenciageneral.


• Lasbolsasdeplásticosellablesydesechables,losvasosdeplástico

desechablesylasreservasdesolucióndeitraconazolpuedensercargadasfácilmenteenelcampo.Lasfuenteslocalesdeaguapuedenserutilizadasparaprepararlasolucióndetratamientodiluida,estoselograusandodispositivosportablesdefiltracióndeaguaqueincluyanfiltrosde0,5micronesomáspequeñospararemoveralosorganismosBddelafuentedeagua.Losdispositivosportablesdefiltracióndeaguahechosparaproduciraguapotableparaexcursionistasseencuentrandisponiblescomercialmente.

• LlevarunareservadesolucióndeRingerparaanfibiosyantibióticosalcampopermitiráeltratamientodeapoyoparalosanimalesqueyaseencuentrenclínicamenteenfermosenáreasmuyafectadas.

Tratamientoconcloranfenicolyflorfenicol

ElantibióticocloranfenicolhademostradoparadójicamenteteneractividadinvitroeinvivocontraelBd(Poulterycolaboradores,2007;Bishopycolaboradores,2009).Losensayosinicialesusandounbañocontinuodecloranfenicolpor2a4semanaseranaparentementesegurosyefectivosenlaeliminaciónlainfecciónBdenranascampanamoteadas(Litoriaraniformis)yranasarborícolasmarrones(Litoriaewingii).Lasventajaspotencialesdeltratamientoconcloranfenicolson:

• Eltratamientopareceserbientoleradoporrenacuajosyranasadultas,inclusocuandolosanimalessonmantenidosdeformacontinuaensolucióndetratamientoporvariassemanas.

• Eltratamientopodríaserunadelaspocasmedicacionesdisponiblesparasuusoenrenacuajos.

• Laaplicaciónpormediodeinmersióncontinuaesmuyconvenienteparaeltratamientodeespeciesanfibiastotalmenteacuáticasyderenacuajos.

• Eltratamientoesbaratocomparadoconeldeitraconazol.Sinembargo,existenalgunasdesventajaspotencialesimportantesrespectoalusodecloranfenicol:

• Losprotocolosdetratamientodisponiblesrequierenquelosanimalesesténcontinuamenteexpuestosalasolucióndetratamientoporunperíodode2a4semanas.Estopuedesertoleradopormuchasespeciesanfibiasacuáticasosemiacuáticas,perolasespeciesanfibiasterrestres(porejemplo,lossapos)podríantenerproblemasconsuosmorregulaciónybalancedelosfluidosbajoestascondiciones.Senecesitanpruebasexperimentalesconespeciesanfibias


terrestresantesdeponeraestosanimalesenunprotocoloextendidodetratamientodebaño.

• Enmuyrarasocasioneselcloranfenicolestáasociadoasupresióndemédulaóseayanemiaaplásicaengatosysereshumanos.Estopodríacausarpreocupacionesrespectoalasaludlaboralenalgunospaíses.Lostrabajadoresquetratenconcloranfenicolaanfibiosdeberíanusarprecaucionesparaevitarlaexposiciónalasolucióndetratamiento.Elusodemedicamentostalescomoelflorfenicol,loscualesestánrelacionadosalcloranfenicol,peronopresentanpreocupacionesrespectoalasaludhumana,deberíanserevaluadosdeformaexperimentalparasuusoeneltratamientodequitridiomicosis.

Unprotocolodetalladodetratamientoparaelusodecloranfenicolseencuentradisponibleen:www.nzfrogs.org/site/nzfrog/files/TreatmentProtocol.pdf

• Lasolucióndetratamientoestáhechadecloranfenicoldegradoreactivo(cloranfenicolC0378;Sigma-Adrich,St.Louis,MO).Unasolucióndereservasepuedehaceragregando200mgdecloranfenicolenpolvoa1litrodeaguacaliente.Unapartedelasolucióndereservaesdiluidaen9partesdeaguaparahacerlasolucióndetratamiento(porejemplo,100mldesolucióndereservaagregadosa900mldeaguaparahacer1litrodesolucióndetratamiento).Lasolucióndetratamientocontiene20mgporlitro(20ppm)decloranfenicol.

• Losanimalessoncolocadosenlasolucióndetratamientoporunperíodode2a4semanasyestosdebenestarconstantementeexpuestosalasolucióndetratamiento.Lasolucióndetratamientodebesercambiadadiariamente.

• Losintentospreliminaresparatrataraanimalesconflorfenicol(NuFlor®)usandounasolucióndetratamientode30mgporlitro(30ppm)hansidotoleradosporalgunasespeciesanfibias(K.Wright,comunicaciónpersonal).Senecesitanestudiosparaconfirmarsueficaciacontraelhongoquítridoanfibio.También,sedesconocesihayaditivosenlasolucióninyectabledisponibleenelcomerciodeflorfenicol(comercializadoparaganadoenlosEstadosUnidos)quepuedansertóxicosparalosanfibios.Espreferibleelusodepolvodeflorfenicolobtenidodeunaformulacióndefarmacia.

• Cuandoconcluyaeltratamiento,unapruebaPCR,comofuedescritomásarribaenelprotocolodetratamientoconitraconazol,esrecomendadaparaconfirmarqueseeliminólainfección.

TratamientoquímicodelainfecciónBsal

• EltratamientoantimicóticodelainfecciónBsalensalamandrasdefuego(Salamandrasalamandra)usandoprotocolosdesarrolladosparaBdresultoenunfracasoterapéutico(Blooiycolaboradores,2015)


• LainhibicióndeBsalcrecidainvitroocurriódespuésdelaexposiciónavoriconazol,polimixinaE,itraconazolyterbinafina,peronoaflorfenicol(Blooiycolaboradores,2015)

• Eltratamientotópicoensalamandrasdefuegoinfectadas(Salamandrasalamandra)convoriconazoloitraconazolsolos(12,5μg/mly0,6μg/mlrespectivamente)oencombinaciónconpolimixinaE(2000IU/ml)atemperaturaambientede15°Cdurante10díasredujeronlascargasfúngicas,peronoeliminaronlasinfeccionesBsal.

• EltratamientotópicodeanimalesinfectadosconBsaljuntoaunacombinacióndepolimixinaE(2000IU/ml)yvoriconazol(12,5μg/ml)enunatemperaturaambientede20°CresultóenlaeliminacióndeinfeccionesBsal.Elprotocolodetratamientofuevalidadoen12salamandrasdefuegoinfectadasconBsalduranteunbrotedecampoyresultoenlaeliminacióndelainfecciónenlosanimales.

• EltratamientoquímicodeinfeccionesBsalnohasidoreportadoparaotrasespecies.

TratamientodeinfeccionesBdyBsalcontemperaturas

ambientaleselevadas Elusodetemperaturasambientaleselevadasparaeltratamientodeunainfeccióndehongoquítridoanfibioaprovechalaincapacidaddelhongodecrecerenaltastemperaturas(crecimientomáximodelBatrachochytriumdendrobatidisa17-25oCycrecimientomáximodelBatrachochytriumsalamandrivorans10-15oC).Enunestudiopiloto,ranasarborícolasverdesLitoriachlorisinfectadasexperimentalmenteconBdymantenidasa37oCpor16horaseliminaronlainfecciónmientrasquelamayoríadelosanimalesmantenidosa20oCmurierondequitridiomicosis(Woodhamsycolaboradores,2003).Elusode32oCpormediodeexposicióncontinuafueefectivoparaeliminarlainfecciónBddePseudacristriseriata(RetallickyMiera,2007).ExponerasalamandrasdefuegoinfectadasconBsal(Salamandrasalamandra)a25oCpor10díasresultoenlacompletaeliminacióndelainfecciónycuroclínicamenteatodoslosanimalesinfectadosconpropósitosexperimentales(Blooiycolaboradores,2015).

• Aligualqueconotrosmétodosdetratamiento,lasalzasdetemperaturahansidoinconsistentementeefectivasentreespecies.Noserecomiendausarlascomotratamientoúnicoenlamayoríadeloscasos.Elusodealzasdetemperaturaencombinaciónconotrométododetratamiento(porejemplo,itraconazolocloranfenicol)essugeridoparaeltratamientodeinfeccionesBd.

• Notodaslasespeciesanfibiaspuedentolerarlasaltastemperaturasambientales(37oC)necesariasparalarápidaeliminacióndeinfeccionesBdo(25oC)paralarápidaeliminacióndeinfeccionesBsalpormediodelaaplicacióndecalor.Sinembargo,elusodetemperaturasmenoresqueexcedanlastemperaturasidealesparaelcrecimientodelhongopodríaayudarenlaeliminacióndelainfección.Porejemplo,unMixophyesfasciolatusinoculadoconelhongoquítridoyalojado


a27oCnopresentoevidenciadeinfecciónpor98díasdespuésdelainoculación(Bergerycolaboradores,2004).

• CuandoestéconsiderandolatemperaturacomounmétododetratamientoparaBdyBsal,esimportantemanteneralosanimalesaunatemperaturaconstanteenvezintermitente(Youngycolaboradores,2007).

• Senecesitanensayosexperimentalesadicionalesqueusencalorparaeliminarlainfeccióndehongoquítridoanfibio.Eltratamientoporcalorpodríaserútilencombinaciónconotrosmétodosdetratamiento.

Otrosmétodosdetratamiento

Variosmétodosdetratamientomássondescritosousadosanecdóticamente.Estoshansidorevisadosrecientemente(Bergerycolaboradores,2010).Algunosdeestosmétodosposeenimportantesdesventajas.

• VerdedeMalaquitayformalina.Estaesunacombinacióndequímicosquehasidousadaampliamentecomounbañoantiprotozoarioyantimicóticoparapeces.SuusorutinarioparaeltratamientodeinfeccionesBdnoesrecomendado.

o Unacombinaciónde0,1mg/litrodemalaquitaverdey25ppmdeformalinaadministradoscomobañopor24horascadadosdíashastallegarauntotalde4tratamientosfueefectivaeneltratamientoderanasafricanasdeuñas(Xenopustropicalis)coninfeccionesBd(Parkerycolaboradores,2002).

o Apesardequeesteprotocolodetratamientopodríaserconsideradoparaotrasespecies,tantolamalaquitaverdecomolaformalinasonconocidasporserteratógenasy/ocancerígenasyestánasociadasconpreocupacionesporlasaludhumana.

o Muchosanfibiosnotoleraraneltratamientoconestosquímicos.• Clorurodebenzalconio.Elclorurodebenzalconioesundesinfectantede

amoniocuaternarioocasionalmenteusadocomomedicaciónantimicóticaenpecesyanfibios.Hasidomencionadocomountratamientopotencialparalaquitridiomicosisenelcomerciodemascotas:www.flippersandfins.net/chytridBCtreatment.htmSinembargo,elusodebensalkoniumenranasafricanasdeuñasenanasconquitridiomicosis(originalmentediagnosticadascomoconunainfeccióndeBasidiobolusranarum;veaGroffycolaboradores,1991)resultoenunnúmeroreducidodemuertes,peronoeliminocompletamentelainfeccióndeBd.Actualmente,elbensalkoniumnoesrecomendadocomountratamientodefinitivo.

• Medicinasantimicóticasdeazoleapartedelitraconazol.Sehandescritoprotocolosqueutilizanmiconazolyfluconazol(Nicholsycolaboradores,2000;Bergerycolaboradores,2010),peroestosnosonusadosampliamenteohantenidoefectosmarginales.


• SulfafiazinaytrimetoprimEstacombinaciónparecehabertenidoactividadfungistáticaenunensayolimitadoconranasdelgéneroDendrobatesinfectadasconBd(Nicholsycolaboradores,2000).

• Terbinafina(Lamisil®).EstaesunamedicaciónantimicóticadeventalibrequemuchosaficionadosydueñosdemascotasprobadoshanusadoparatrataraanimalesdelosquesesospechaqueportanBdoqueestánclínicamenteenfermosconquitridiomicosis.Losprotocolosseencuentranrápidamenteenlínea,aunquenohanhabidoestudioscontroladosqueconfirmenlaeficaciaoseguridaddeestetratamientoy,enlamayoríadeloscasos,nosehaconfirmadoquelosanimalestienenBdantesdeltratamiento.Esteprotocolonoserecomienda.

8.2CONTROLDEINFECCIONESRANAVIRUS Lasinfeccionesconranavirussolorecientementehansidoreconocidascomounproblemapotencialenlaspoblacionesdeanfibioscautivos(Millerycolaboradores,2008;Pasmansycolaboradores,2008;Driskellycolaboradores,2009)ylaextensióneimportanciadeestasinfeccionesaúnsondesconocidas.SonnecesariosmásesfuerzosparalabúsquedayeldiagnósticodeinfeccionesRanavirusenpoblacionescautivasparaasípoderadquirirestosconocimientosfaltantes. Lasopcionesdetratamientoparaagentespatógenosviralessonmuylimitadasparalosvertebradosengeneralylaeficaciadeestasesdesconocidaenanfibios.SisediagnosticaninfeccionesRanavirusenunapoblaciónanfibiacautiva,lamayoríadelosesfuerzosdeberíanapuntaralcontroldeenfermedadesmásquealtratamientodeanimalesindividuales.Losobjetivosdeestasmedidasdecontrolson:

• Evitarlatransmisióndelainfecciónaotrosanfibiosdelapoblaciónoinstalación.

• Evitarlatransmisióndelainfecciónapoblacionesanfibiasnativas.• Lacreacióndepoblacionesdecrianzadeanfibiosqueesténlibresdeinfecciones

ranavirales(libresdepatógenosespecíficos).Estaspoblacionespuedenserutilizadascomopoblacionesderesguardooparapropósitoscomerciales(porejemplo,animalesdelaboratorioymascotas).

Sehadocumentadoquelasinfeccionessubclínicasderanavirusposeenperíodosdepersistenciaquevaríandesdetanpococomo20díasa6mesesomás(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007).

• Losanimalesinfectadossubclínicamentetieneelpotencialdepropagarlainfeccióninadvertidamenteaotrosanimalesmásvulnerables.Sinembargo,estonohasidodocumentadoenpoblacionescautivas.

• Desafortunadamente,adiferenciadelasinfeccionesconhongosquitridios,laspruebasdediagnósticoconfiablesparadetectaraanimalesinfectadossubclínicamenteconranavirusnoseencuentrandisponibles(vealasección7.4),


losquecomplicalaimplementacióndemedidasparaelcontroldeenfermedades.

TransmisióndeinfeccionesRanavirus

AspectosdelatransmisióndeRanavirusquesonútilesparaeldiseñodeuntratamientoyunprogramadecontrolincluyen:

• Latransmisiónocurrepormedioderutastalescomocontactodirectoentreanimales,exposiciónaaguaquehayacontenidoaanimalesinfectados,consumodetejidosanimalesinfectadosypotencialmentepormediodeherramientas,equipoyrecintoscontaminados.

• ElRanavirusEHNpermaneceviablepormásde97díasenaguadestiladalibredecélulasmantenidaa15oC(59oF)ypormásde113díasensuperficiessecas(Langdon,1989).

• ElRanavirusAmbystomatigrinumpuedepermanecerviableenaguaporhasta2semanasa25oC(77oF;Jancovichycolaboradores,1997).

Tratamientoymétodosdecontrol

Siseidentificaunbrotedeenfermedadesranaviralesenunapoblacióncautiva,algunosmétodosdecontrolútilesincluyen:

1. Elaislamientodelosanimalesenfermosdelosanimalessaludables.2. Apegarseestrictamentealasprácticasdebioseguridadqueminimiceno

eliminenlatransmisióndeagentespatógenosentrerecintosanimales.Estopuededisminuirelnúmerodeanimalesqueseenfermanomuerenduranteunbrote.Lasprácticasparacontrolarlainfecciónylatransmisiónson:

o Evitelatransferenciadesustratossucios(porejemplo,tierra,grava,musgo,plantas),amuebladodelajaulaoaguaentrerecintosdiferentes.Lasrecomendacionesparalahigiene,patronesdetrabajoehigienedelrecintosedetallanenlassecciones4.9,4.12yelcapítulo5.

o Desinfecteherramientasyequipodespuésdeusarlosenrecintosdiferentes.Losdesinfectantesquedesactivanranavirusseenumeranenelcapítulo5.

3. Lasopcionesútilesparaeltratamientodeanimalesindividualesconinfecciones

Ranavirussonlimitadas.o Enelcasodelassalamandrastigre(Ambystomatigrinum)expuestasa

elRanavirusATV,lastemperaturasambientalesinfluenciaronlamortalidadyeltiempohastasumuerte.Lamayoríadelosanimalessobrevivierona26oC(78,8oF)ylamayoríamurierona18oC(64,4oF)y10oC(50oF)(Rojasycolaboradores,2005).


o Eltratamientoconantibióticos(porejemplo,enrofloxacino)podríaayudaracontrolarlasinfeccionesbacterianassecundarias.

4. Sedeberíarealizarunaevaluaciónderiesgosparalosanimalesdelosquese

sabequeestáninfectadosconunaRanavirusoquehansobrevividoaunbrotedeRanavirus.Estoesdiscutidoconmásdetalleenlasección6.2.Brevemente,lasdecisionesrespectoalagestióndeestosanimalesdependeráde:

o Laimportanciadelosanimalesinfectadosoexpuestosparalapoblacióncautivayparalosesfuerzosderecuperacióndelaespecie.

o LosresultadosdelosesfuerzosdevigilanciadeenfermedadesparadetectarinfeccionesRanavirus.Lasmejoresmuestrasparalavigilanciasonlasmuestrasdetejidorecolectadasenlaexaminaciónapartirdelanecropsia.ExistenpocaspruebasconfiablesovalidadasparadetectarinfeccionesRanavirusenanimalesvivos.

o lapresenciadelamismainfecciónRanavirusenlapoblacióncautivaqueladeunapoblaciónsilvestredeunaespecieanfibiaparticular.EstorequieretécnicasespecializadastalescomoelanálisisRFLPqueestámásalláquelaspruebasestándarbasadasenPCR.Vealasección7.4

8.3CREANDOPOBLACIONESDEANFIBIOSLIBRESDEPATÓGENOSESPECÍFICOS

(HONGOQUÍTRIDODEANFIBIOSYRANAVIRUS) Sehancreadopoblacionesdeanimalescautivoslibresdeagentespatógenosespecíficos("Libresdepatógenosespecíficos"oSPF,porsussiglaseninglés)enambientesagrícolas,acuiculturayencoloniasanimalesdelaboratorio.Estaspropuestaspodríanresultarmuyútilesparalagestióndepoblacionesdeanfibioscautivos(Lotz,1997;OIEAquaticHealthCode:http://www.oie.int/Eng/normes/fcode/A_summry.htm).Comoyasehaseñaladoenelcapítulo4,existenpreocupacionesrespectoalmovimientoylaintroduccióndeagentespatógenosanfibiosanuevasubicacionesgeográficasyelimpactodeestosparalaspoblacionesdeanfibiossilvestres. LacreacióndepoblacionesanfibiasSPFparaanfibioscomúnmentedistribuidosenelcomerciodemascotas(porejemplo,ranasafricanasdeuñasenanas;ranaarborícoladeWhite);investigacionesdelaboratorio(ranaafricanadeuñas;ranasleopardo);produccióndealimentos(ranastoroamericanas)ypoblacionesderesguardoparaanfibiossonmuyrecomendadaspara:

• Reducirelriesgodemoveragentespatógenosanfibiosimportantestalescomoelhongoquítridooranavirusanuevoslugarespormediodelcomerciodeanfibios.

• Reducirlanecesidadderealizarextensivaspruebasdedeteccióndeenfermedadesinfecciosasantesdeunenvíooduranteunacuarentena(veaelcapítulo6)sisesabeosetieneuncertificadodequelosanimalesseencuentranlibresdeagentespatógenosespecíficos.Estoresultaríaen:


o Menortiempoencuarentenaymenosestrésdelosanimalesasociadoconlaspruebasdedeteccióndeenfermedades.

o Reduccióndeloscostosdelaspruebasdedeteccióndeenfermedades.

o PermitiríacumplirmásfácilmenteconlosrequerimientosdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)paraelmovimientodeanfibios(vealasección7.6)

• Reducirelimpactoquetienenlasenfermedadesinfecciosasespecíficasenlasostenibilidaddepoblacionescautivasyeneléxitodepoblacionesderesguardo.

AlgunosdesafíospotencialesdelacreacióndepoblacionesSPFson:

• Laspoblacionessoncarasyrequierenmuchotiempoparasercreadas.• ElmantenimientodelestatusSPFdeunapoblaciónylaprevencióndenuevas

infeccionesrequierenuncompromisoalargoplazopara:o Mantenerestrictasprácticasdebioseguridaddelasinstalaciones(veael

capítulo4).Algunasdelasprácticasdebioseguridadmásimportantessonprevenirlaexposiciónaanfibiossilvestresoacoleccionesanfibiascosmopolitasquealberguenanimalesdemúltiplesubicacionesgeográficasofuentes.

o Mantenerlasprácticasdecuarentenaenvigorantesdelaintroduccióndenuevosanimalesaunapoblación(veaelcapítulo6).

o Crearyutilizarunprogramadevigilanciadeenfermedadesqueincluyanecropsiaehistopatologíadetodoslosanimalesquemueran(veaelcapítulo9)asícomopruebasperiódicasparadetectaragentespatógenosdeinterés.

• Enalgunoscasosseríapreferiblemantenerlainfeccióndeagentespatógenosespecíficosennivelesquenoresultenenunamorbimortalidadsignificativadentrodelapoblacióncautiva.Estoesmásadecuadoparalaspoblacionesderesguardodondeespreferiblequelosanimalescautivosdesarrollenomantenganlatoleranciaaagentespatógenosqueencontrarancuandoseanreintroducidosalanaturaleza.

Engeneral,lacreacióndepoblacionesSPFrequiere:

• Ladisponibilidaddeunaovariaspruebasdediagnósticoconfiablesparadetectarpatógenosdeinterés.

• Ladisponibilidaddetratamientosparaenfermedadesespecíficasqueseanefectivosparalaeliminacióndelainfeccióndelpatógenodeinterés.

• LahabilidadparamantenerlabioseguridaddelasinstalacionesyeliminarlaexposiciónaanfibiosquenoseanSPF.

• Elusodetécnicasqueseparenalosanimalesjuvenilesoendesarrollodesuspadresinfectadosuotrasfuentesdecontaminaciónantesdequeseinfectencon


elagentepatógenodeinterés.Ningunadeestastécnicashansidovalidadasparasuusoenanfibiosoespecíficamenteparaagentespatógenosanfibios.Lastécnicasincluyen:

o Eliminacióny/odesinfeccióndeloshuevosseguidodelaremocióndelmedioambientecontaminado.www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf

o Laremocióndelarvaspormediodecesárea(paralasespeciesanfibiasvivíparastalescomoelsapoaerosoldeKihansi,Nectophrynoidesasperginis).

AlgunosenfoquesquepodríanserusadosparalacreacióndepoblacionesSPFdeanfibioslibresdelhongoquítridodeanfibiosoranavirusseentreganmásabajo.

Crearpoblacionescautivaslibresdehongoquítridodeanfibios Lacreacióndepoblacionesdeanfibioscautivoslibresdeinfeccionesconelhongoquítridodeanfibiosesimportantepara:

• Eléxitoylasostenibilidaddelaspoblacionesderesguardoparaanfibios,especialmenteparaaquellasespeciesquesonmuysensiblesalasinfeccionesmicóticasquitridiasyqueestánenpeligrodeextincióndebidoalaquitridiomicosis.

• Proveerunafuentedeanimaleslibresdelhongoquítridodeanfibiosparasuusoenelcomerciodemascotas,consumohumanoycomoanimalesdelaboratorio.Estominimizaríalasposibilidadesdequeanimalescautivosactúencomounafuentedeinfecciónparanuevaspoblacionesanfibias.

Unaestrategiaparacrearpoblacionescautivaslibresdelhongodequítridoanfibios

1.Sedebedeterminarlapresenciaoausenciadelhongoquítridodeanfibiosenlapoblacióncautiva.Laspruebasdereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)enanimalesseránnecesarias(vealasección7.3)amenosqueyasesepaquelapoblaciónestáinfectadayaqueloindicaronlosresultadosdelasvigilanciasapartirdenecropsiasopruebasPCRanteriores.

• EsimportantequelaspruebasPCRdeunapoblaciónseandiseñadaspararecolectareltamañodemuestraapropiadoparaestarsegurodelaausenciadelainfección.

• SerequierenmúltiplespruebasPCRparadeterminarsianimalesindividualesdefinitivamenteseencuentranlibresdelainfección.Unsoloresultadonegativonoessuficienteparaelpropósitodelacreacióndepoblacioneslibresdehongosquitridios.Losresultadosfalsosnegativosocurrenenanimalesquetieneninfeccionessubclínicasodebajonivel(vealasección7.3).Inicialmente,sedeberíanhacerpruebasenanimalesindividuales(enelcasodepoblacionespequeñas)oenmuestrasdetamañoapropiadodepoblacionesgrandesporlo


menos2vecesynomásde3vecesenunperíodode2semanas.Elusodeprotocolosqueagrupenmuestrasdehisoposdemúltiplesanimalesalojadosenelmismorecintopodríaserútilparareducirelcostodelaspruebas.

• Losanimalesquemuerandeberíanserpresentadosparalaexaminaciónapartirdelanecropsiaehistopatologíaparadeterminarsilamuertefuecausadaporquitridiomicosis(veaelcapítulo9).

2.SitodoslosanimalesdanresultadosnegativosenlapruebaPCRrealizadaenelpaso1ylosresultadosdelanecropsiadelosanimalesquemueransonnegativosparaquitridiomicosis,sepodríahacerunadeterminaciónpreliminardeunaestadolibredehongoquítrido.Vayaalpaso#5.3.SiseidentificananimalesPCRpositivososiseencuentranmuertescausadasporquitridiomicosisenlaexaminaciónapartirdelanecropsia,todalapoblaciónseconsideraráinfectadaconhongoquítrido.Estadeterminaciónsellevaacabosinimportarlosresultadosdelaspruebasdecualquieranimal.Enotraspalabras,losanimalescuyoresultadodePCRhayasidonegativoenestasituaciónseconsideraráninfectadosconhongoquítridosiotrosanimalesdelgrupotienenresultadospositivos.Todalapoblacióndeanimalesdeberíasertratadaconmedicaciónantimicóticausandolosprotocolosdiscutidosmásarribaenlasección8.1.4.Despuésdequeeltratamientoconmedicaciónantimicóticadelapoblaciónseacompletado,espereunmínimode2semanasantesderepetirlaspruebasPCRcomofuedescritoenelpaso#1.SilaseriedepruebasposttratamientodetectaanimalesPCRpositivos,sedeberepetirelpaso#3entodalapoblaciónhastaquelaspruebasPCRdelapoblaciónseannegativas.Silaseriedepruebasposttratamientosonnegativasentodalapoblación,sepodríahacerunadeterminaciónpreliminardeunestadolibredehongoquítrido.5.Laspoblacionesconunadeterminaciónpreliminardequeseencuentranlibresdehongoquítrido,comofuedescritoenelpaso#1o#4,deberíansermonitoreadasenunprogramadevigilanciadeenfermedadesporunperíodoextendido(porejemplo,de6mesesa1año)antesdedeterminarfinalmentequeseencuentranlibresdeBd.Lavigilanciadeenfermedadespuedeincluirtantonecropsiaehistopatología,asícomopruebasPCResporádicasdeanimalesdelapoblación.SiseidentificananimalesPCRpositivososisedescubrequitridiomicosisenlaexaminaciónapartirdelanecropsia,sedeberepetirelpaso#3.6.EsimportantequelaspoblacionesdeanfibiosPCRnegativasseanmantenidasenaislamientopermanentedelosanimalesinfectadosconhongoquítridoodeloscualessedesconozcasuestadodeinfección.Lasprácticasdebioseguridadindicadasenelcapítulo4podríanserútiles.Antesdeañadirnuevosanimalesalapoblación,esimportantequeestosseencuentrensujetosaunprocesodecuarentenacompleto(veaelcapítulo6),elcualincluyepruebasPCRparadetectaralhongoquítridoanfibio.


Crearpoblacionescautivaslibresderanavirus

LacreacióndepoblacionesdeanfibioslibresdeRanavirusesrecomendadaporlaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)paraelcontroldeinfeccionesranaviralesenanfibioscriados.ElprocesonecesarioparacrearpoblacionesSPFdeRanavirusesmenosclarocomparadoaldelhongoquítridoanfibio,estoesdebidoalafaltadepruebadediagnósticovalidadasparasuusoenanimalesvivos.

• LaspoblacionesSPFdeRanavirustambiéntendránusosparalosanimalescriadosengrandesnúmerosparaelcomerciodemascotas.

• Enelcasodelaspoblacionesderesguardoylosprogramasdereintroducciónalanaturalezaparaanfibios,laspoblacionesSPFdeRanavirusprobablementesoloseránnecesariasensituacionesenquelapoblacióncautivahayaadquiridounRanavirusquenocirculenormalmenteenlaspoblacionessilvestresosiestáinfectadaconunRanavirusqueconsistentementecausamortalidadsignificativaenlapoblacióncautiva.

Estrategiasparacrearpoblacionescautivaslibresderanavirus

1.Determinarlapresenciaoausenciadeinfeccionesranaviralesenlapoblacióncautiva.Algunosmétodossugeridosincluyen:

• LavigilanciapormediodenecropsiaehistopatologíadelasmuertesenlapoblaciónquemuestrensignosquepodríansugerirunainfecciónRanavirus.Estosincluyen:hemorragiasenmúltiplestejidos;degeneraciónynecrosisenhígado,riñón,tractogastrointestinalotejidohematopoyético;ycondicionescutáneasproliferativasoulcerativas.

• RealicepruebasPCRenlostejidos(porejemplo,hígadoriñón)recolectadosenlanecropsiadetodoslosanimalesquemuerany/odetodoslosanimalesqueseansacrificadosparapropósitosdevigilanciadeenfermedades.Vealasección7.4

• LarecoleccióndemuestrasparapruebasPCRdeanimalesvivosaparentementesaludablesnohasidovalidadaynoesrecomendadacomolaúnicapruebadediagnósticoparadeterminarelestadodeinfeccióndeRanavirusdeunapoblación.

• Lavigilanciadeberíallevarseacaboenunperíodoextendido(porejemplo,1año).

• LosgruposdeanimalesqueseránutilizadosparalacreacióndeunapoblaciónSPFdeberíanmantenerseenaislamientoalargoplazodeotrosanfibios(vealasección4.9)

2.Silavigilanciaparadetectarranavirusdescritaenelpaso#1esnegativa,lapoblaciónpodríaserprovisionalmenteconsideradalibredeRanavirus.Vayaalpaso#4.


3.Silavigilanciaparadetectarranavirusdescritaenelpaso#1espositivaymuestraevidenciadeinfecciónRanavirusenlapoblación,lassiguientesmedidaspodríanserútiles:

• Sihayanimalesenfermos,sepárelosdelosanimalesclínicamentesaludables.• Incrementelosesfuerzosdelavigilanciacomofuedescritoenelpaso#1.Se

deberíaconsiderarelsacrificiodeanimalesparalavigilanciadeenfermedades(pruebasPCRdelostejidos).

• SigruposindividualesdeanimalesenlapoblacióndanresultadosnegativosparalaevidenciadeunainfecciónRanavirus,estosdeberíanserseparadosdelosgruposquedenresultadospositivos.Sedeberíaninstituirprácticasdebioseguridadqueaíslenaestosgruposnegativosdelosgrupospositivos.(vealasección4.9).

• Lasmedidasdevigilancia,comofuerondescritasenelpaso#1,seseguiránaplicandoenlosgruposquetenganresultadosnegativos.Lavigilanciasedeberíarealizarenunperíodoextendido(porejemplo,de6mesesa1año).SiestosgrupossiguensiendoPCRnegativos,podríanserconsideradosprovisionalmentelibredeRanavirus.Enestaetapa,vayaalpaso#4.

• Considerevolveraderivaralaspoblacionescautivaspormediodelaremocióndesushuevosdelosambientesopoblacionescontaminadas.UnaadvertenciapotencialessilasinfeccionesRanaviruspuedentenertransmisiónvertical(desconocido).

4. EsimportantequelaspoblacionesanfibiasSPFdeRanavirusseanmantenidasen

aislamientopermanentedelosanimalesinfectadosopotencialmenteinfectadosconranavirus.Antesdeañadirnuevosanimalesalapoblación,esimportantequeestosseencuentrensujetosaunprocesodecuarentenacompleto.

8.4MONITOREOYTRATAMIENTODEPARÁSITOS Aunquenosiempreespreferibleeliminarcompletamentelascargasparasitariasnaturalesdelosanimalesdestinadosalareintroducciónalanaturaleza(LylesyDobson,1993;Cunningham,1996),sonnecesariosprogramasdecontrolparaciertosendoparásitosbajocondicionesdecautiverio.InfeccionesdeespecialimportanciasonaquellasconnemátodosrabditiformestalescomoelgusanopulmonaranfibioRhabdias,yelnematodointestinalStrongyloides.Estassoninfeccionessubclínicascomunesenlosanfibiossilvestres,perocausanseriosproblemasenlosgruposdeanimalesrecientementetraídosacautiveriodesdelanaturaleza(Leeycolaboradores,2006;Pessier,2008).

• Muchosanfibiosenlanaturalezasehanadaptadoparasobrevivirconbajosnivelesdecargasparasitariasdenemátodos.Asuvez,losparásitosproducenaltosnúmerosdecríasparaincrementarlasposibilidadesdequeunadeestaseventualmenteencuentreunhuéspedviable.Cuandounanimalinfectadoes


traídoacautiverio,elanimalesrepetidamenteexpuestoaunagrancontaminaciónambientalconaltosnúmerosdeóvulosolarvasdeparásitoinfecciosos.

• Enelcasodelosnemátodosrabditiformes,estosparásitosposeenunciclodevidadirecto,elcualescompletadoentanpococomo48horas,porloquelashiperinfeccionespuedenocurrirfácilmente.(PoyntonyWhitaker,2001).

• Losnemátodosrabditiformessoncontroladosenlassituacionesdecautiveriopormediodeunacombinacióndevigilanciadeparásitosfecales,buenahigienedelrecintoeinstalaciónytratamientosantihelmínticos.

Vigilanciadeparásitos

Lavigilanciadelasmuestrasfecalesparaencontrarevidenciadeparasitismointernoesunaparteimportantedeunprogramadecontrolparasitario(vealasección7.7).

• Durantelacuarentenaparalosnuevosanimales,elobjetivoesreducirlacargaparasitariatantocomoseaposibleparaevitarintroduciranimaleshiperinfectadosalaspoblacionescautivasestablecidas.Lavigilanciafecalparalacuarentenaesdiscutidaendetalleenlasección6.11.

• Losanimalesenpoblacionescautivasquehanpasadolacuarentenaexitosamentesonvigiladospormediodeexaminaciónfecalporlomenosdecada6a12mesesotanfrecuentementecomoseanecesarioparaalcanzarunniveldeseadodecontrolparasitario.

o Ademásdeloscontrolesrutinarios,sedeberíantomaryrevisarmuestrasfecalesdetodoslosanimalesquepresentenpérdidadepeso,pérdidadeapetito,enfermedadpatológica,etc.

o Lasexaminacionesfecalestambiénsedebenrealizarmásfrecuentementesilavigilanciaapartirdelanecropsiadelapoblaciónindicaquelosproblemasparasitariossonunacausaimportantedeenfermedadomuerte.

• Enelcasodelosnemátodosrabditiformes,unsistemadepuntuaciónestandarizadoesutilizadopararegistrarconexactitudlosnivelesparasitarios.Unsistemadepuntuaciónfecalparalaslarvasdenematodorabditiformeespropuestoabajo.Ciertamente,estesistemaessubjetivoyotrosenfoquespodríanserutilizados.Elusoconsistentedeunsistemadentrodelainstalacióneslomásimportante.

Estesistemaparalalarvadenematodorabditiformeesutilizadoconunaexaminaciónenmontajeenfrescodelasheces:

• 1+=1omenoslarvasidentificadasporcada3omáscamposbajos(Objetivode10x)

• 2+=1larvaidentificadaporcada2o3camposbajos• 3+=1larvaidentificadaporcada1o2camposbajos


• 4+=1omáslarvasidentificadasencadacampobajo;paralasmuestras4+,intenteregistrarunnúmeroaproximadodecuantaslarvassonvistasporcampobajo

Nota:Yaqueelportaobjetosesescaneadoenbajopoder(Objetivo10x),cadaposiciónnuevadelportaobjetosesconsideradauncampobajo.Unpuntajeesasignadobasadoenelpromediodetodosloscampos.Serecomiendaquetodoslosanimalesenunacolecciónestablecidaconresultadosde3+omásseantratados.Lashecesdetodoslosanimalesquerecibantratamientoparasitariodeberíanserexaminadasdenuevo1semanadespuésdelúltimotratamiento.Siunamuestrafecaldaunresultadopositivoenunrecintoquecontieneamásdeunanimal,considereatodoslosanimalesdelrecintocomopositivos.

Tratamientoantiparasitario Eltratamientoparalosnemátodosrabditiformesrequiereatenciónalahigienedelrecintodelosanimalesparacontrolartantolasetapasambientalesdelparásito,asícomolaadministracióndemedicinaantihelmínticaparareducirlascargasparasitariasinternas.

• Enelcasodelosanimalesgravementeinfectadosdebeconsideraralojarlosenrecintostemporalesquesepuedanlimpiarydesinfectarfácilmenteyquecontengancantidadesmínimasdesustratosorgánicos.Lashecesdeberíanserremovidasdiariamentedelrecintoylossustratosolosrecintosdeberíanserreemplazadosylimpiadosaproximadamentecada2díasduranteeltratamiento.

• Paraelcontrolparasitarioalargoplazo,losrecintosparaanimalesdeberíanserdiseñadosdeformaquelalimpiezaylaremocióndedesechosfecalesseanfáciles.

o Elusoderecintosconpisosagujereadosypisosfalsospermiteelenjuaguefrecuente(porejemplo,semanal)delossustratosdelrecinto.

o Lamateriafecaldeberíaserremovidamanualmentedelassuperficiesdelasplantasuotrossustratosdelrecinto.

• Debeobtenerelpesocorporalengramosprecisodecadaanimalparalaadministracióndemedicinasantihelmínticas.

• Antesdelusodeunamedicaciónenunaespecienueva,seríaprudentetrataraunpequeñonúmerodeanimalesantesdetrataratodalacolección.Todaslasmedicinaspresentadasmásabajohanprobadosersegurasenunaampliagamadeespecies,aunqueaunasíesposiblequeexistasensibilidadytoxicidadenespeciesindividuales.Además,cualquiermedicaciónpodríasertóxicasiseentregaunadosisexcesiva;esesencialprestaratenciónalospesoscorporales,elcálculodelasdosisylapreparacióndelasdisoluciones.

• Algunasopcionesdemedicaciónincluyen:


o DrontalPlus®BayerHealthCareAnimalHealthDivision.Unproductodecombinaciónquecontienepraziquantel,paomatodepirantelyfebantel.Unasuspensiónescompuestausandocomprimidosoralesparaperrosdisponiblesenelcomercio.Lasuspensiónesformuladaparaproveer2,25mg/mldelcomponentedepiranteldelproducto.Ladosisesde0,01ml(o10microlitros)deformaoralporcadagramodepesocorporal.Repitaladosisen2o3semanas.Esteprotocolohasidousadodeformasegurayefectivaenanurospanameñostraídosapoblacionesderesguardo(Gagliardoycolaboradores,2008).Esútilusarunamicropipetaenlosanimalesmuypequeños.Unauñetablandadeguitarraounaparatosimilardelgadodeplásticoblandoesusadoparaabrirgentilmentelabocadelanimalparaladosificaciónoral.

o Fenbendazole(Panacur®)suspensiónoral10%(100mg/ml).Unantihelmínticocomúnmenteusadoenlamedicinaveterinariaconunamplioperfildeseguridad.Ladosisesde50–100mg/kg.De0,5a1microlitrosdesuspensiónde100mg/mlpor1gdepesocorporal(de50a100mg/kg),administradosdeformaoral(comofuedescritoparaelDrontalPlus).Repitaen10a14días.Comoalternativa,enelcasodelosanimalesmuypequeños,utilicegránulosde22%deFenbendazole(222mg/g)paraespolvorearaloselementosdepresa.Ofrezcaloselementosdepresaespolvoreadosunavezaldíapor5díasyrepítaloen2a3semanas.

o Levamisol.Esteesunantihelmínticocomúnmenteutilizadoenelganadodomésticoyseencuentradisponibleenmuchospaísescomounasolucióninyectable.Ladosisesde10mg/kg(equivalentea0,01mgdeLevamisolporcadagdepesocorporal),lacualesaplicadadeformatópicaenlapiel.Laaplicacióncutáneapresentaventajasparalosanimalesqueseestresanfácilmenteyquenopuedentolerarlasmedicinasadministradasdeformaoral.Lasolucióndetratamientosehacediluyendolasolucióninyectabledisponibleenelcomercioa10mgpormililitro.Usandoestasolución,aplique0,01mlporcada10gpesocorporal.Paralosanimalesquepesanmenosde10gramos,utiliceunamicropipetaparadar1microlitroporgramodepesocorporal.Despuésdeaplicarlasoluciónenlapiel,enjuaguelapielconaguafrescadespuésde1horadecontacto.Vigilealosanimalesporsipresentansíntomasdeparálisis;siestoocurre,enjuaguealanimalminuciosamenteymanténgaloenunambientebienoxigenadoyfrescohastaqueserecupere.Repitaeltratamientocada14díasparauntotalde2o3dosis.Estamedicaciónhasidoutilizadadeformaseguraenunaampliavariedaddeanuroscautivosycaudadosencoleccionesdezoológicosycoloniasderesguardoexsitu.Suefectividadhavariadoyesnecesariovolveraverificarlasmuestrasfecales1o2semanasdespuésdecompletareltratamientoparaverificarsusefectos,aligualqueconcualquiertratamientoantiparasitario.


o Ivermectina.Seencuentradisponibleunasolucióninyectablede1%(10mg/ml)deivermectina(Ivomec®).Estapreparaciónpuedeaplicarsedeformatópica,inyectableuoralmente.Ladosisparalamayoríadelosanfibiosesde0,2mg/kg,locualesequivalentea0,02microlitrosdeun1%delaivermectinainyectableporcadagramodepesocorporal.Laadministraciónrequeriráladilucióndelproductode1%parapodermedirladosisconexactitud.Alternativamente,sepuedeprepararunbañodeivermectinaconunaconcentraciónde10mg/L(1mldeun1%deivermectinainyectableen1litrodeagua).Losanimalesdebensercolocadosenelbañopor60minutos,loquesedeberepetiren7días.Hanhabidoreportesanecdóticosdetoxicidadalaivermectinaenalgunasespecies,porloquesedebetenercuidadocuandoseapliqueestasoluciónaespeciesconlaquenoestáfamiliarizado.

8.5MEZCLASDEELECTROLITOSLosanfibiosconquitridiomicosisuotrospatógenospuedenpresentar

importantesdesequilibriosdeelectrolitos.Porlotanto,ademásdeltratamientoantimicótico,losanimalesafectadossebeneficiandeterapiasdefluidosyelectrolitos.Laspropuestasparalasterapiasdefluidosparaanfibiossehanrevisadoenotraspublicaciones(Wright&Whitaker,2001).Enelcasodelosanimaleslevementeymoderadamenteafectados,losbañosdeelectrolitoscomoeldesolucióndeRingerparaanfibiosaplicadoscontinuamenteenelcasodeespeciesacuáticasocomofuentedeaguaparalasespeciesterrestrespodríanserútiles.Enelcasodelosanimalesdeprimidosomoribundos,podríasernecesarialaadministraciónintracelómicadesolucionesdeelectrolitosbalanceados(nolacteados)diluidosen1:1o2:1con5%dedextrosa.

• RecetaparalasolucióndeRingerparaanfibios(1litro)

o Clorurosódico(NaCl),6,6gramoso Cloruropotásico(KCl),0,15gramoso Clorurocálcico(CaCl2),0,15gramoso Bicarbonatosódico(NaHCO3),0,2gramos

Agregueaguadestiladaparahacer1litrodesolución.Mezclelasoluciónminuciosamenteparagarantizarquetodosloscristalessedisuelvan.Agitebienantesdeusar.Manténgalaenuncontenedorselladoparareducirlaevaporación(WrightyWhitaker2001).Sisecompranproductosquímicossecos,seríaconvenientepremezclarlosquímicosenbolsasseparadasqueesténlistasparaseragregadasalagua.Tambiénhaysolucioneslíquidasconcentradaspremezcladasconvenientesybaratasdereservadisponiblesenelcomercio:http://www.enasco.com/product/SA09708(LM)M


• RecetaparalasoluciónWhitaker-Wright(1litrode100%desolucióndereserva)

o Clorurosódico(NaCl),113gramoso Sulfatodemagnesio(MgSO4·7H2O),8,6gramoso Clorurocálcico(CaCl2),4,2gramoso Cloruropotásico(KCl),1,7gramos

"Disuelvaloscristalesminuciosamenteenaguadestilada.Mantengaelcontenedortapadoparaprevenirevaporación.AgreguelabasedeTrizma(7,4),calidaddepez,paraestabilizarelpHdelasoluciónentre7,0y7,3"(WrightyWhitaker,2001).Estaesunasolucióndereservaquedebeserdiluidaantesdeusarse.UnasoluciónWhitaker-Wright12%hasidoutilizadacomosuplementooraldeelectrolitospararanasconquitridiomicosis(Voylesycolaboradores,2009;Bergerycolaboradores,2010).Unasolución12%sepreparaagregando12mldesolucióndereservaa88mldeaguadestilada.8.6EUTANASIA Unavariedaddemétodosparalaeutanasiadeanfibioshansidodescritos,incluyendobañosdeinmersiónenmetanosulfonatodetricaína(MS-222)obenzocaína;inyeccióndebarbitúricostalescomoelpentobarbital;ymétodosfísicoscomoeldescabello.Estosmétodoshansidodiscutidosenrevisionesdelosmétodosdeeutanasiaparaanimales(www.avma.org/issues/animal_welfare/euthanasia.pdf) Lainmersiónenmetanosulfonatodetricaína(MS-222)(Finquel®,ArgentChemicalLaboratories)esunodelosmétodosdeeutanasiamenosestresantesyeselquemenosinterfiereconlaspruebasdediagnósticodelaboratoriotalescomolanecropsiaehistopatología.Losanimalessonpuestosenunabañeraquecontienede1a3gramosdeMS-222porlitro.Sedejaalosanimalesenlasoluciónhastaquenorespondanaestímulosyhayaevidenciadequesurespiraciónyactividadescardiacashayancesado.ElclorhidratodebenzocaínaesunadrogarelacionadaalMS-222ypuedeseradministradaenunbañoconporlomenos250mgporlitro.8.6LITERATURACITADABergerL.,R.Speare,A.P.Pessier,J.Voyles,andL.F.Skerratt.2010.Reviewoftreatmentsforchytridiomycosis.DiseasesofAquaticOrganisms:inpress.Berger,L.,R.Speare,H.B.Hines,G.Marantelli,A.D.Hyatt,K.R.McDonald,L.F.Skerratt,V.Olsen,J.M.Clarke,G.Gillespie,M.Mahony,N.Sheppard,C.Williams,andM.J.Tyler.2004.Effectofseasonandtemperatureonmortalityinamphibiansduetochytridiomycosis.AustralianVeterinaryJournal82:434–439.Bishop,P.J,R.Speare,R.Poulter,M.Butler,B.J.Speare,A.D.Hyatt,V.Olsen,andA.Haigh.2009.EliminationoftheamphibianchytridfungusBatrachochytrium


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Cap.9:Necropsiadeanfibios—215

CAPÍTULO9

NECROPSIADEANFIBIOS9.0INTRODUCCIÓN Lanecropsia(oexamenpost-mortem)esuncomponenteimportantedelosprogramasdevigilanciadeenfermedadesenlascoloniasdesupervivenciadeanfibios,altiempodeserunaherramientaimportanteparalasevaluacionesdelriesgodeenfermedades.

• Idealmente,sedeberealizarunanecropsiacompletaenlamayorcantidaddeanimalesquemuerenenlascoloniasdesupervivenciadeanfibios.

• Tambiénserealizannecropsiasenanimalesentresacadosdelaspoblacionesysacrificadospararecolectarinformaciónparalavigilanciadelaenfermedad.

• Unanecropsiacompletaincluyetambiénelexamenhistológicodelosprincipalesórganosydelapiel.

Lossiguientessonalgunosdelosbeneficiosqueaportanlasnecropsiasyestudioshistopatológicosparalaseguridaddelascoloniasdesupervivenciadeanfibios:

• Lahistopatologíapuededetectarunaampliagamadeenfermedadesinfecciosasynoinfecciosas(incluyendopruebasdedeficienciasnutricionalescomunesenlascoloniasdesupervivencia).Eselmétododediagnósticoqueposeemásposibilidadesdedetectarenfermedadesnuevasoinesperadasparalascualesnoexistenpruebasespecíficas(porejemplo,PCRparaelhongoquítridodelosanfibios).

• Ademásdeserunaherramientaparalaevaluaciónderiesgosdeenfermedad,losdatosrecolectadosconlasnecropsiassonutilizadosporveterinariosyadministradoresdeinstalacionesparadeterminarlosproblemasdesaludmásimportantesqueafectanaunacoloniadesupervivencia.Estopermiteconcentrarlosesfuerzosdegestiónhaciaesasacciones(porejemplo,lacorreccióndeladieta,oeltratamientodeunainfecciónespecífica)queserándegranbeneficioparamantenercoloniasdesupervivenciasegurasyautosustentables.

Notodaslasinstalacionestienenaccesoinmediatoaunpatólogoveterinario,oinclusounveterinariolocalquepuedarealizarnecropsias.

• Aúnenestassituacionessiguesiendoimportanterecolectarmuestraspostmortem,lasquesepuedenconservaryutilizarposteriormente,cuandosedispongadeunveterinarioodeunpatólogo.


• Elmétododefijacióndecuerposparalasnecropsiasquesedescribeenlasección“Realizacióndelanecropsia”puedeserenseñadofácilmentealpersonal,aunqueéstenotengaformaciónenbiologíaoveterinaria.[p.197]

• Lasmuestrasparanecropsiasonunrecursoinsustituibleparalacomprensióndelosproblemassanitariosenlascoloniasdesupervivencia.Porlotanto,esmuchomejorrecolectaryconservarmuestrassiempre,queluegolamentarnohaberlohecho.

• Estasecciónanalizalosprocedimientosdenecropsiadeanfibios,enfatizandoenlatomademuestrasenaquellascoloniasdesupervivenciaquenocuentanconapoyoveterinarioinsitu.Existenalgunasrevisionesdetalladasmétodosdenecropsiaenanfibiosyreptiles(Nichols,2001,PessieryPinkerton,2003,TerrellyStacy,2007).Lasdirectricesgeneralesparalarecoleccióndemuestrasdenecropsiadeanimalessalvajesestándisponiblesen(www.wcs.org/~/media/Files/pdfs/necropsy2.ashx),ycontieneninformaciónútil.

• Tambiénsediscutiránalgunasconsideracionesespecialesaaplicareneventosdemortalidadmasiva,enlosqueseencuentranmúltiplesanimalesmuertosomuriendo.

9.1PREPARACIÓNPARALANECROPSIA

Lanecropsiasedeberealizartanprontocomoseaposibledespuésdelamuertedelanimal.Ladescomposición(autolisis)delostejidosenanfibiosseproducerápidamente,ycuantoantessepuedanconservarlasmuestras,mayorserálaposibilidaddequelahistopatologíayotraspruebasdiagnósticasproporcioneninformaciónútil.

• Silanecropsianoserealizainmediatamente,loscuerposdebenserconservadosenrefrigeración(2-8°C)porunlapsomáximode24a72horas.

• Loscuerposnodebensercongelados,amenosquenoexistaotraalternativa,oqueserequieradeeseprocedimientoparaotrotipodepruebasdediagnóstico(ver“Investigacióndeeventosdemortalidad”,másabajo).Elcongelamientopuedecrearartefactossignificativos,quepuedeninterferirconlasinterpretacioneshistopatológicas.

• Loscuerposconservadosenelrefrigeradordebendisponerseenbolsasplásticasconcierreherméticouotrotipoderecipientesellado.Cadarecipienteestaráetiquetadoconelnombredelaespecie,elnúmeroindividualdeidentificacióndelanimalylafecha.

• Lasnecropsiasdeberánrealizarseenunespaciolimpio,alejadodelasáreasenlasquesemantienealosanimales,odeaquellasenquesepreparasucomida,secríanlosinsectososepreparanyprocesanlasrecintosylossustratos.


9.2MATERIALESNECESARIOS• Fijadordetejidos.Elmejorfijadorparalapreservacióndelostejidospara

histopatologíaesunasolucióndeformalinaneutratamponada.Lafórmulaparahacer1litroes:

o 100mldeformaldehído37%o40%.o 900mldeaguadestilada.o 4.0gdefosfatomonobásicodesodio.o 6.5gdefosfatodibásicodesodio.[p.198]

Laformalinaneutratamponadatambiénpuedeobtenersepremezcladadeproveedoresdeproductosquímicosomedicinales.Sinosedispusieradeformalina,selapuedesustituirporunasolucióndeetanolal70-90%comofijadordetejidos.

• Elementosparalarecolecciónyconservacióndemuestrascongeladasdetejidoparanecropsias.Algunosejemplosincluyen:

o BolsastipoWhirl-Pak®(Nasco,EUA,www.enasco.com).Útilesparacongelarmuestrasdegranvolumenocuerposcompletos.

o TuboscriogénicostipoNuncCryoTubesTMoVangardCryosTM(SumitomoBakeliteCo.,Ltd.Japón,www.sumibe.co.jp/english/).Útilesparacongelarórganosaisladosomuestrasdetejido.

• Instrumental.Pararealizarunanecropsiacompletaenlamayoríadelosanfibiossolosenecesitanalgunosinstrumentosbásicos,incluyendo:

o Mangoycuchillasdebisturí.o Tijeras(sesugierenmúltiplespares,asícomounpardetijerasfuertes

paracortarhuesos).o Pinzarparatejidos.o Reglagraduada(paramedirelcuerpoycualquierlesión).o Tabladecorte(paraserutilizadocomosuperficiedetrabajo).Es

preferibleutilizartablerosplásticos,porqueselavanydesinfectanmásfácilmente.

o Balanzadigital(útilpararegistrarelpesodelosdiversoselementos).Labalanzanodebeserlamismaqueseempleaparapesaralosanimalesvivos.

• Equipodeprotección.Estoselementosprotegenalapersonaquerealizalanecropsiadelaexposiciónapatógenos,ycontribuyenaasegurarquelosmaterialesinfecciososnosetrasladendelazonadenecropsiaalasáreasendondesealojananimalesvivos.Elequiposugeridoincluye:

o Guantesdesechablesdelátexonitrilo.o Batadelaboratorioodelantalplásticoparaprotegerlaropa.

• Quemadordealcoholodebutano.Paraesterilizarlosinstrumentosutilizadosenlaobtencióndemuestrasparapruebasdediagnósticomicrobiológicoomolecular.


• Formularioestandarizadoparanecropsias.Pararegistrarlainformaciónsobreelespécimenylosresultadosdelasobservacionesdelanecropsia.

9.3REALIZACIÓNDELANECROPSIA 1.Antesdecomenzarlanecropsiasedebenregistrarelpesocorporalylalongitudhocico-cloaca.Luegosedebehacerunexamenexterno,prestandoespecialatencióna:

• Estadogeneraldelosrestos.Lasevidenciasaconsiderarincluyenelgradodedescomposiciónpostmortem,cualquierdescargaproducidapornariz,bocaocloaca,ysiloshuesossonprominentes(indicacióndeadelgazamiento).[p.199]

• Estadodelasuperficiedelapiel(p.ej.,decoloración,excesivadescamación,aumentodelmoco,nóduloscutáneos,áreasdeulceración,parásitosexternos).

2.Sihaylesionescutáneas,puedeserbeneficiosorealizarunraspadodelapielpararealizarpreparadoshúmedosparaestudioscitológicos(verSección7.3).

• Ademásdeloshongosquitridiosdeanfibios,losraspadosdepielpuedenayudaradiagnosticarunagranvariedaddeotrasinfeccionesbacterianas,fúngicasyparasitarias(Pessier,2007).

• Lasáreasdelapielutilizadasparaelraspadodelapieldebenseradyacentes,peronoidénticas,alasáreasdedondesetomanlasmuestrasparahistopatología.

• Lafácildisponibilidaddecámarasdigitalesbarataspuedepermitirquepersonaldeloscentrosdecríaquecarecendeapoyoveterinarioinsitufotografíenáreasseleccionadasdeunraspadodepiel,paraluegoenviarlasporcorreoelectrónicoaunveterinarioopatólogoexternoparaeldiagnóstico.

3.Acontinuación,coloquealanimalendecúbitodorsal(sobrelaespalda)sobreunatabladecortelimpia,uotrasuperficiedetrabajofácilmentelimpiableydesinfectable.

• Conunbisturíotijeras,nuevosyestérilesoreciénlimpiadasydesinfectadas,hagaunaincisiónenlalíneamediaventral,desdelamandíbulahastaelniveldelacloaca.

• Retirelapielhaciacadaladodelaincisiónparadejaraldescubiertolamusculaturaabdominal.

• Cortarconcuidadolamusculaturaabdominal(pareddelcuerpo)alolargodelalíneamediaparaentrarenlacavidadcelómica,peroevitetocarlasvíscerassubyacentes(Figura9.1).[p.200]


Figura9.1:Necropsiadeunsapo(Anaxyrusboreas),mostrandolaincisiónenlalíneamediaventral,desdelamandíbulahastalacloaca,exponiendolacavidadcelómica.Seobservanlospulmones(L),esternón(S),queseubicaporarribadelcorazón,ehígado(LI).ImagentomadadePessieryPinkerton(2003).4.Siseobservalapresenciadelíquidosenlosespaciossubcutáneos(sacoslinfáticosenlosanuros)odentrodelacavidadcelómica,recojaunamuestrausandojeringayagujaestériles.

• Sisedispusieradelserviciodeunlaboratorioexternodepatologíaclínica,podríaserútilhaceruncultivobacterianodellíquido,asícomootrosanálisis(recuentodecélulas,proteínatotalycitología,Pessier,2007).

5.Despuésdelaincisiónenlacavidadcelómicaylaexposicióndelasvísceras,utiliceunpardetijerasfuertesparacortaryeliminarelesternón.Estoexponeelcorazónylapartemáscranealdelospulmones.6.Luegodelaexposicióndelasvíscerasyelcorazón,sedebenrecogermuestrasestérilesparamicrobiología,parapruebasdediagnósticomolecular(porejemplo,PCRparaRanavirus)oparaalmacenarlascongeladassisedesea.

• Sisedisponedelacapacidadparaalmacenarmuestrasdetejidocongelado(congeladoronitrógenolíquido),serecomiendarecogerdemanerarutinariadeunapequeñaporcióndelhígado(paralalocalizacióndelhígado,véaselafigura9.1).Espreferibleuncongeladorultra-frío(-70°C,omenos),peroescaroypuedenoestardisponibleentodaspartes.Lamuestrarecogidasecolocaen


tuboscriogénicosoenunabolsatipoWhirl-Pak,etiquetadosconelnombredelaespecie,elnúmerodeidentificacióndelanimalylafecha.Desernecesario,estamuestrasepuedeguardaryutilizarparapruebasdediagnósticoenunafechaposterior.[p.201]

• Sidurantelanecropsiaseidentificanlesionesmuyevidentes,comoórganosagrandados,nódulosenlasvíscerasoáreasdecoloradasenellas,tomarunamuestradelalesiónparacongelar,ydejarelrestoparahistopatología,coneltratamientoquesedescribemásabajo.Silalesiónfueramuypequeña(demenosde5mm),convieneguardartodoparahistopatología,másqueparaunamuestracongelada.

• Bajodeterminadascircunstanciasconvieneguardarvariasmuestrasdetejidocongeladas(versección9.5,másabajo).

• Sisedesea,sepuedenenviarmuestrasparaanálisisbacteriológicos.Lasmejoresmuestrasincluyensangredelcorazónehígado.

• Luegodeabrirelcuerpo,sedebedecidirsiseaplicaráelmétodofijacióndelcuerpoosiserealizaráunanecropsiapordisección.

Métododefijacióndelcuerpoparanecropsia

Estaeslatécnicarecomendadaparaaquellasinstalacionesquenocuentanconunveterinarioinsitu(uotrapersonaconconocimientosdeanfibios),asícomoparalamayoríadelosanfibiospequeños(<20gdepesocorporal).

• Estemétodohasidoutilizadoexitosamenteconanimalesdemásde20g,peroexisteunriesgoelevadodeunaincorrectapreservacióndelostejidossilacavidadcelómicanofueabiertalosuficientesosiseempleaunacantidadinsuficientedesoluciónfijadora.

• Parallevaracaboelmétododefijacióndecuerpos:o Abrirlacavidadcelómicayexponerlosórganos,talcomofueradescrito

anteriormente.o Tomarmuestrasdetejidoparacongelary/oparaanálisismicrobiológicos,

comoyasedescribiera.o Sumergirelcuerpoabiertoenlasoluciónfijadora.Paralapreservación

óptimadelostejidosserecomiendaunarelaciónde1partecorrespondientealcuerpoy9partesdefijador.

o Mantenerelcuerpoenelfijadorhastasuenvíoaunpatólogoveterinarioparaanálisishistopatológicos.

Sielcuerpoesgrande(>de20-30gdepeso),semodificaelprocedimientoparalograrunamejorpreservacióndetejidos:

o Separandolacabezadelcuerpoempleandounbisturíounpardetijerasfuertes.

o Utilizandojeringayaguja,inyectarpequeñascantidadesdesoluciónfijadoraenestómagoeintestino.


Estasdosmodificacionesrequierendeunaciertafamiliaridadyprácticacontécnicasdedisección,ydebenconsiderareoptativas.[p.202]

Métododenecropsiapordisección Estemétodoesmásrecomendableparaaquellosanimalesmásgrandes(>20gdepesocorporal),yparaaquellassituacionesenlasquesedisponedeunveterinario,odeotrapersonaconunadecuadoconocimientoprácticodeanatomíadeanfibios,capadellevaracabolanecropsia.Elprocedimientoconsisteenunaminuciosadiseccióndelcuerpoylapreservaciónderozosrepresentativosdelosdiferentesórganos.Siladisecciónserealizaenanimalesmuypequeños,entoncesserecomiendaelempleodeunmicroscopiodedisección(lupabinocular)parapoderregistrardetallessutiles.

• Parallevaracaboladisección:o Abrirlacavidadcelómicayexponerlosórganos,talcomofueradescrito

anteriormente.o Tomarmuestrasdetejidoparacongelary/oparaanálisismicrobiológicos,

comoyasedescribiera.o Sedebentomarmuestrasdelosprincipalesórganosycolocarlasen

soluciónfijadora.Laproporcióndetejidoafijadordebeserdeunapartedetejidoa9partesdefijador.Idealmente,laspiezasdetejidonodebenexceder0,5cmdeespesor.Losórganosmásgrandespuedencortarseserialmenteyexaminarseparadetectarlesiones.Acontinuaciónsepresentaunalistadelostejidosquesedebenfijarrutinariamenteparahistopatología.

o Lasnotasdeloshallazgosdelanecropsiadebenserregistradaenunformularioestandarizadoparatalfin.

Tabla9.1:Tejidosasercolectadosparaestudioshistopatológicosenanfibios

Piel1 VesículabiliarPulmón MúsculoesqueléticoCorazón HuesoHígado NervioperiféricoBazo VejigaurinariaRiñón Gónada(testículouovario)Estómago CloacaIntestinodelgadoygrueso OjoPáncreas LaringeCerebro

1Múltiplesseccionesparaincluirmuestrasdepieldorsalyventral,asícomodecualquierlesión.


9.4NOTASANATÓMICASPARANECROPSIASDEANFIBIOS Alrealizarlanecropsia,esconvenienteconsiderar,orecordar,algunascaracterísticasúnicasdelaanatomíaylafisiologíadelosanfibios,entrelasqueseincluyen:[p.203]

• Adiferenciadeloquesucedeenotrosvertebrados,lapielesmuyimportante,porqueallísellevanacabounaampliavariedaddeprocesosfisiológicos,comolaabsorcióndeaguayelectrolitos,osmorregulación,y,enelcasodealgunasespecies,respiración.Enconsecuencia,esextremadamenteimportanteevaluarlapiel(especialmenteporhistopatología),cuandoserealiceunanecropsiaenanfibios.

• Lasreservasdegrasacorporalseacumulanpredominantementeenloscuerposgrasoscelómicos(gonadales),ubicadosenposicióncranealalasgónadas.Enlosanurostomanelaspectodehebraso“dedos”detejidodecolorblancoaamarillo(figura9.3).

o Lamayoríadelosanimalessanostienenalgunoscuerposgrasoscelómicosclaramenteidentificables.Siestossonpequeños,onopuedenseridentificados,seconsideraqueelanimalestáenmalestadonutricionalgeneral.Entrelascausasdeestoseincluyenunamalaingestadealimentosdebidoalamalaadaptaciónalcautiverio,elestrésolacompetenciaexcesivaporalimentos,oporcondicionesdeenfermedadsubyacentes.

• Lamayoríadelosanfibiostienepulmonespares;sinembargo,lassalamandrasdelafamiliaPlethodontidaecarecendeellos,yalgunasceciliassolamentetienenelpulmónderechofuncional,mientrasqueelizquierdoesvestigial.

• EnanimalesdelafamiliaBufonidae,losmachosmuestranunpequeñoagregadodetejidoováricoenelpolocranealdelostestículos(eselórganodeBidder;figura9.2).

• Losovariosdelosanurospuedensermuygrandesyocupartodalacavidadcelómica.Enalgunasespeciesestánpigmentadosdenegro(figura9.3).Losoviductossonprominentes,ysemuestrancomoespiralesdetejidoalrededordelovario(figura9.3).

• Lavejigaurinariatieneparedesmuydelgadasytranslúcidas,yporelloconfrecuenciaselapasaporaltoenelexamendurantelasnecropsias.Lasmuestrasdevejigaparahistopatologíapuedenobtenerseextrayendolostejidosblandoselcanalpélvico.[p.204]


Figura9.2:Necropsiadelsapo(Anaxyrusboreas).Seextrajoelhígadoysedesplazóeltractogastrointestinalparamostrarloscuerposgrasoscelómicos(FB).Tambiénestánseñaladosestómago(St),intestinogrueso(LI),bazo(S)ytestículos(T).ElórganodeBidderesapenasvisibleenelpolocranealdeltestículo,adyacentealbazo.ImagendePessieryPinkerton(2003).

Figure9.3:Necropsiadelaranatoroafricana(Pyxicephalusadspersus)mostrandolosovariospigmentadosdenegro,queocupanparcialmentelacavidadcelómica(O).Tambiénsemuestranpulmón(L),hígado(Li)yvesículabiliar(G).ImagendePessieryPinkerton(2003).[p.205]


FIGURA9.4:Necropsiadelaceciliaacuática(Typhlonectesnatans)mostrandoelcorazón(H).Sonvisiblestambiénpulmón(L),hígado(LI)yvesículabiliar(GB).Tambiénestánetiquetadoselestómago(ST),ovocitos(OV),riñón(K)ycuerposgrasos(FB).ImágenesdeB.Tapley.

9.5TOMADEMUESTRASDURANTEEVENTOSDEMORTALIDAD Hablamosdeeventosdemortalidadcuandoseencuentranamuchosanimalesmoribundosomuertosenlascoloniasdesupervivenciaoenlaspoblacionessilvestresdeanfibios.Aunquesepuedesospechar,conunaltogradodecerteza,dealgunasenfermedadesinfecciosasbienconocidasdelosanfibios(porejemplo,quitridiomicosisoinfecciónporRanavirus),esimportantemantenerunamenteabiertayconsiderarsiempreotrascausaspotenciales.Lossíntomasinicialesdemuchasenfermedadesdiferentespuedeninicialmenteparecermuysimilares,yserequiereunainvestigacióndelaboratorioparalograrundiagnósticodefinitivo.

• Elpropósitoinicialdeinvestigarloseventosdemortalidadesobtenerypreservarmuestrasrepresentativasquepuedanserutilizadasposteriormenteenanálisisdelaboratorioaplicandolasdiferentestécnicasqueseannecesarias.

Sepuedendiseñarprotocoloscomplejosparalaobtencióndemuestrasduranteloseventosdemortalidad,especialmentesisedisponedelaguíadeunveterinario;sinembargo,unenfoquesimpleybásico,quepuederesultaradecuadoparalamayoríadelassituaciones,consisteen:

• Preservarunconjuntodetejidos(odecuerpos)ensoluciónfijadoraparahistopatología.


• Preservarunsegundoconjuntodetejidos(odecuerpos)congelados,quepuedanutilizarseparatécnicasdediagnósticomolecular(comoPCR),paraaislaragentesinfecciososencultivooparaanálisistoxicológicos.[p.206]

Algunasdirectricesparalaobtencióndemuestrasduranteuneventodemortalidad:

• Sinosedisponedeasesoramientoveterinario,osilosanimalessonpequeños,apliqueelmétododenecropsiaporfijacióndelcuerpo(descritomásarriba)enlamitadolosdosterciosdelosanimalesmuertos.Paralosrestantes,congeleelcuerpocompletotanrápidocomoseaposible,yetiquételosconelnombredelaespecie,elnúmerodeidentificaciónindividualylafecha.

• Sisedisponedeorientaciónveterinaria,odealguienconexperienciaenanatomíadeanfibios,apliqueelmétododenecropsiapordisección(descritomásarriba)enlosanimalesmuertos.

o Ademásdeconservarmuestrasdelosprincipalesórganosensoluciónfijadoraparahistopatología,conservartambiénmuestrasadicionalescongeladasdedichosórganos.

o Sesugiereconservarmuestrascongeladasdehígado,riñón,pulmón,intestino,cerebroydecualquierotrotejidoquemuestrealgunaanormalidadduranteladisección(p.ej.,órganosagrandadosodescoloridos,oconnódulos).Además,tambiénpuedepreservarseelcontenidoestomacal,cuerposgrasoscelómicosymúsculosesqueléticos,enespecialsisesospechadeunaexposiciónasustanciastóxicas.

o LasmuestrasdeórganosseconservanenbolsastipoWhirl-Pak®(Nasco,USA,www.enasco.com)oentuboscrioscópicostipoNuncCryoTubesTMoVangardCryosTM(SumitomoBakeliteCo.,Ltd.Japan,www.sumibe.co.jp/english/).Estosrecipientesdebenestaretiquetadosconelnombredelaespecie,elnúmerodeidentificaciónindividualdelanimalylafecha.

• Paracongelarloscuerposcompletosolasmuestrasdetejidoserecomiendan

temperaturasultrafrías(-70°Comenos),onitrógenolíquido;sinembargo,lastemperaturasdeuncongeladorfamiliarsonsuficientesparaeldepósitoacortoplazo.Comoúltimorecurso,sinosedisponedecongeladornidenitrógenolíquido,fijarloscuerposenetanol70%(enlugardeformalina)puedeaúnpermitirlaaplicacióndealgunastécnicasdediagnósticomolecular.

• Siseencuentrananimalesmoribundos,sedebeconsideralaposibilidaddeeutanasiadealgunosindividuosparanecropsiaytomademuestrasdetejidos(versección8.6).Estobrindamuestrasmuyfrescasquesonidealesparalamayoríadelosmétodosdelaboratorioempleadosenlainvestigacióndeenfermedades.


PROTOCOLOBÁSICOPARALATOMADEMUESTRASDURANTEEVENTOSDEMORTALIDADDEANFIBIOS

(Cuandonosedisponedeveterinariososeactúaenunaestacióndecampoconequipamientomuylimitado)

• Enlamitaddelosanimalesmuertosrealiceunaincisiónhacialacavidad

celómicayexpongalosórganosinternos.Encasosdeanimalesmuypequeños,osinosedisponedeunbisturí,simplementefijeelcuerpocompleto.Coloqueelcuerpoabiertoenunasoluciónfijadora,comoformalinatamponadaneutraal10%(preferible),oetanol70%.Laproporciónidealesunapartedecuerpodelanimalen9partesdesoluciónfijadora.[p.207]

• Paralaotramitaddelosanimalesmuertos,congeleloscuerposcompletosomanténgalosenfriados(porejemplo,enunaconservadoraconhielo)hastaquepuedansertrasladadosaunsitiodondeseaposiblecongelarlos.

• Siempreespreferibleguardarmuestrasconambostiposdepreservación,fijadas(enformalinaoetanol)ycongeladas.Siestonofueraposible,sedebedarpreferenciaalaconservacióndetejidosfijadosenformalinaoetanol.Conservarsolamentemuestrascongeladasdebeserelúltimorecurso(peroesmejorquenoconservarningunamuestra).

• Sinoesposiblecongelarmuestras,supreservaciónenetanolpermiterealizartantoestudiosdehistopatologíacomoalgunaspruebasmoleculares(p.ej.,PCR).

9.6 ENVÍODEMUESTRAS

Paraelenvíodetejidosquesehanconservadoenunasoluciónfijadora.Unavezquelascarcasasotejidoshanestadoenformalinauotrasoluciónfijadoraduranteunmínimode48horas,seretirandelfijador,seenvuelvenentoallasdepapelogasahumedecidaconfijador,seenvasanenbolsasdeplásticoselladasyseenvíanaunpatólogo.Estominimizaelpotencialdefugasduranteeltransporteyreduceelpesodelpaquete(yloscostosdeenvío).

• LosmaterialesdebenenviarsesiguiendolasnormasdelaAsociaciónInternacionaldeTransporteAéreo(IATA,porsussiglaseninglés)paramaterialespeligrosos.Algunaspautasgeneralesincluyen::

o Lasmuestrasdebenguardarseenunrecipienteprimarioqueseaestanco.

o Esterecipienteprimarioescolocadoenunsegundorecipienteestanco.o Entreambosrecipientessedebecolocarmaterialabsorbente(p.ej.,

toallasdepapel).Elvolumendeestematerialdebesersuficientecomoparaabsorbertodoellíquidocontenidoenelprimerreceptáculo.

o Lasprincipalescompañíasdetransportedisponendepautasparaayudaraladecuadoenvíodemuestrasbiológicas.Másinformacióndisponibleen:http://images.fedex.com/downloads/shared/packagingtips/pointers


9.7 LITERATURACITADA Berger,L.,andR.Speare.Whattodowithdeadorillfrogs

(www.jcu.edu.au./school/phtm/PHTM/frogs/pmfrog.htm)Munson,L.Necropsyofwildanimals. www.wcs.org/~/media/Files/pdfs/necropsy2.ashxNationalWildlifeHealthCenter.Collection,preservationandmailingofamphibiansfor

diagnosticexaminations(www.nwhc.usgs.gov/publications/amphibian_research_procedures/specimen_collection.jsp)[p.208]

Nichols,D.K.2001.Necropsy.Pp.331–334In:Wright,K.M.,andB.R.Whitaker(eds.),

AmphibianMedicineandCaptiveHusbandry.KriegerPublishing,Malabar,Florida,USA.

Pessier,A.P.,andM.E.Pinkerton.2003.Practicalgrossnecropsyofamphibians.

SeminarsinAvianandExoticPetMedicine12:81–88.Pessier,A.P.2007.Cytologicdiagnosisofdiseaseinamphibians.VeterinaryClinicsof

NorthAmericaExoticAnimalPractice10:187–206.Terrell,S.P.,andB.A.Stacy.2007.Reptilenecropsytechniques.Pp.219–256In:E.R.

Jacobson(ed.),InfectiousDiseasesandPathologyofReptiles:ColorAtlasandText.CRCTaylorandFrancis,BocaRaton,Florida,USA.

Apéndice1:Marcacióndeanfibios 228

Apéndice1:

MÉTODOSPARAIDENTIFICARINDIVIDUALMENTEESPECÍMENES

DEANFIBIOSR.AndrewOdumyEdytheSonntag

INTRODUCCIÓN

Lacalidadenelmanejodelosanimalessemejoraenormementecuandolasmuestrassepuedenidentificarcomoindividuales.Sinlahabilidaddepoderidentificardemaneraconsistenteacadaespécimen,sevuelveimposiblemantenerhistorialesmédicos,informaciónsobrelaespecie,yotrotipodeinformaciónpertinentequeestédirectamenterelacionadoconelespécimen.Laincapacidaddeidentificaralosindividuos,deigualmaneravaacausarunimpactoenladiversidaddegenesquesemantienenenunapoblaciónencautiverio(Verseccióndemanejogenético).

Enlosúltimosveinticincoaños,laspoblacionesdeespeciesenpeligrodeextinciónenzoológicoshansidomanejadasparamantenerladiversidadgenéticadurantelareproducciónselectiva.Elmanejodelapoblacióngenéticaesmáseficienteenunnivelindividualconespeciescompletas(Schad,2007).Estorequierequecadaindividuopuedaseridentificadoalolargodesuvida,yqueellinajesepuedeestablecerparatodaslascrías.Mantenerlaidentificacióndeunanimalalargoplazo,requieredealgúntipodeidentificadorrecordableparaconectaralindividualconsusregistros.Generalmenteenalgunoszoológicosestoesunnúmerodeconsentimiento,yelalgunoscasosraros,paraunaconsideraciónparticulardelasmuestrasdeanfibios,essolounnombre.Estosidentificadoressepuedenusarcomoguíaparalainformaciónalmacenadaenelsistemaderegistro,yporconsiguiente,establecerlaespecieoraza.Lastécnicasdeidentificaciónindividualsepuedendividirendoscategoríasgenerales:Aquellosquesoninvasivosyaquellosquenoloson.Esimportantetenerencuentaquetodaslastécnicasnoestáncompletamenteaprobadas.Todashanfalladobajoalgunascondiciones,yhanocurridomortalidadesentécnicasinvasivas.Algunastécnicasinvasivaspuedenprovocarundéficitpermanente,afectarlaactividadfísica,ydisminuirlacapacidaddesupervivencia(ejemplo:amputacióndetejidos).Estastécnicasdeberserevaluadasindividualmenteporlascircunstanciasdesuusopropuestoprevioasuimplementación.


TÉCNICASNOINVASIVAS

ColorypatrónanimalUnodelosmétodosmássimplesyefectivosparaidentificaralosanfibios,esatravésdesuspatronesycoloración.Enmuchasespecies,unavezqueelanimalalcanzasuformaadulta,supatrón,marcas,estructurasglandularesycoloración,generalmenteseestabilizaporelrestodesusvidas.Apesardequepudieranhabercambiosontogenéticosamedidaqueelanimalenvejece(ejemplo:oscurecimiento),susmanchasjóvenestodavíapuedenseguirvisibles.Estospatronessepuedendocumentaratravésdeundibujo(sisedisponedetalentomínimo)afotografiandoalanimal.Dependiendodelasespecies,yparadelinearlasdiferenciasdelosespecímenes,puedesermejorusareldorso,elabdomenoáreaslaterales.Enelcasodeanimalesconpielgranularoverrugosa,laposiciónynúmerosdeestascaracterísticas,asícomolacoloración,sonidentificadoresexcelentesyúnicosparalosanimales.

Lospatronesdeanimalesjóvenespuedencambiaramedidaqueelanimalmadura;sinembargo,cuandosetomaronfotografíasrepetidamentedurante1a4meses,elequipodelzoológicodeDetroitregistróexitosamentelaidentificacióndeungrupodesalamandrasmandarinasjuvenilesdurantelaadultez,yobservócambiosmínimos.Conlaactualizaciónregulardelosregistros,esposibleutilizaridentificacióndepatronesfotográficosenespeciesdeanimalesjuveniles,dondehaycambiosontogenéticosenpatronesycolor.Sinembargo,ladependenciadeestemétododebeincluirelcompromisodeactualizarlasimágenesduranteelcrecimientoregularmente.

Existenlímitesparaestatécnica.Porsupuesto,silosanimalessonvisualmenteindistinguibles,estatécnicaesineficaz.Enadición,amedidaqueelnúmerodelosanimalesenlosrecintosaumenta,sevuelvemástediosodeterminaraunanimaldelgrupo,particularmentesilasdiferenciasentrelosespecímenesindividualessonmínimas.Otrofactorimportanteeseltamaño.Silosespecímenessonmuypequeños,esdifícilidentificarlasdiferenciassinunartefactoconaumento,sumandolanecesidaddecontarconuninstrumentoderestricciónparaelespécimen.Dependiendodelasespecies,dealgunamanera,éstatécnicasevuelveinefectivacuandohaymásdecincoadiezespecímenesalojadosjuntos.

Hayinformesanecdóticosenelusodemáquinasdefotocopiasdececílidosparadocumentarpatronesdeanillosanulares.Aunqueestemétododeidentificacióngeneralmenteperturbaalequipomanchalacopiadora,fueefectivoymenosestresantequeintentarafirmaralosanimalesparafotografiarlosodibujarlos.Elanimalfuepuestosobreelvidriolimpiodelacopiadora,ysobreestasepusounatoallahúmedaparalarestriccióndelanimal.

Amedidaquelatecnologíahamejorado,ylascámarasdigitalessehanvueltocomunes,elreconocimientodepatroneshaidomuchomásalládelascopiasdibujadasamanodelosanimalesqueestudianlosinvestigadores.Gambleetal.(2008)Sehadesarrolladounalgoritmodepatróndereconocimiento,elcualusafotografíasdesalamandrasmarmoladas(Ambystomaopacum)tomadasenelcampo.Laspruebasde


estesistemafueronunéxitoenlaidentificacióndeunindividual,contansolounminutoyconel95%deprecisiónenunabasededatosde1000imágenes.

AislamientoOtratécnicasimpleparaalbergarlaidentificaciónindividualesseparandolosanimalesendiferentesrecintos.Sihubieraunsoloanimalenlajaula,fácilmentepodrásaberquiénes.Estotambiénsepuedeaplicaralosparessexualesquesealojanjuntosenelmismorecinto,mientrasquesepuededeterminarelsexodelosespecímenesindividuales(locualpuedeonoserelcasoenalgunasespeciesdeanfibios).Aladjuntarunatarjetaconelnúmerodeingresoenlajaula,elanimaloelpardeanimales,seasocianconsuidentificador.Estatécnicahapresentadoalgunasfallascuandolamarcadelasrecintossedesvaneceoseborran,ocuandosesalelatarjetaadjuntaaesta.Estadeficienciasepuederevertirporlasimplemantencióndelosnúmerosydelastarjetas.

TÉCNICASINVASIVAS

Congelación/Calor/MarcaciónquímicaLamarcacióndelapieleselprocesodeprovocarunacicatrizenlasuperficiede

lapiel,deformaquelavuelvaunamarcaidentificable.Estosepuederealizaratravésdelcalor,conocidocomomarcaciónporcalordirectooelectrocauterización(ClarkJr,1971),porlamarcaciónporcongelamiento,dondeseusanitrógenolíquidoohieloseco(Daugherty,1976;Paineetal.,1984;Measeyetal.,2003);ofinalmenteporelusodequímicos,dondeseusaunasolucióndel0.5%deamidonegroenel7%deácidoacético(WolfandHedrick,1971).Estemétodoesdoloroso;yporlotanto,requiereunaanestesialocalogeneral.Enadición,ydebidoalanaturalezadelapieldelosanfibios,estasmarcaspuedensersolosemipermanentesenalgunasespecies(CACC,Unknown).Lamarcaciónporcongelaciónsehaempleadoenestudiosdecampoparaespeciesgrandesdeanfibioscomolassalamandrasgigantes(Cryptobranchidae).Elanimales"marcado"conunamarcaonúmerousandofríoextremo.Laherramientademarcacióndemetalseenfríaatemperaturasbajoceroconunrefrigeranteoconhieloseco.Laherramientademarcacióndebeserdeunamasasuficiente,parapodercongelardemaneraefectivalascélulasdelapielydepigmentacióndelanimal.Cuandosecolocalamarcafríaporalgunossegundossobrelapielmojadadelanfibio,lostejidosqueestánencontactoconlamarcasevanacongelaryamorir.Generalmente,elárearesultantesanasinpigmento,haciéndolounamarcapermanenteenelanimal.Existendesventajasenestemétodo.Enprimerlugar,lamarcaensímismaesantiestéticayvisible.Segundo,esunmétodoprimitivoylasmarcasgeneralmentesongrandes.Lazonacongeladapropiamentedichaporlamarca,nosepuedecontrolarfácilmente.Mientrasmástiempoestélamarcaencontactoconlapiel,lamarcaserámásancha.Ladiferenciaentreunamarcapequeñaaceptableyunazonamásgrandedetejidocicatrizado,puedeserelresultadodealgunossegundosadicionalesdecontactoentrelaherramientademarcaciónyelanfibio.


Apesardequelamarcadecongelaciónhayaduradorelativamentemástiempoenespeciesmásgrandescomoenlassalamandrasgigantes(Cryptobranchidae),puedehaberlimitesenespeciesmáspequeñas.Lasmarcasdecalorycongelaciónsehanutilizadoensapos.En1971,Clarkdescribióelmétododemarcaciónporcalor,endondesearmaunalíneaenformadenúmeros,yseutilizaparaponermarcasalos311saposdelacostadelGolfo(Inciliusnebulifer),lasquesemantienenporunaño.Paineetal.En1984serealizaronpruebasdemarcaciónporcongelaciónensapospuertorriqueños(Peltophrynelemur)enelzoológicodeBúfalo,lascualesfueronexitosasyduraronsobre2años.

Lafotografíamuestraunamarcadecongelaciónenunpez;enestecaso,essólounalínea.Aquísepuedeverconfacilidadquehaylimitacionesenelnúmerodevariacionesconestamarcaciónprimitiva.

AmputacióndetejidosDurantemuchosaños,laamputacióndelosdedoshasidounatécnicacomúnenlosproyectosdeinvestigacióndecampoparareptilesyanfibios.Estatécnicaesinvasivaycreaundéficitpermanenteenelanimal.Esprobablequeaumentelamortalidad(Clarke,1972).Sinembargo,éstaesunatécnicaquesehaempleadoenalgunosprogramasdezoológicos.Éstatécnicaimplicalaamputacióndelosdedosdelanimal,yquecorrespondeaunplannumérico.Latemperaturabajoceroesejemplodeunsistemanuméricoparamásde10.000individuales(Twitty,1966).


DeDonnelly(1994).

Elproblemaconestemétodoesquepuedequerequieralaextraccióndemúltiplesdedosdesdeunaextremidadúnica,dejandoalanimalmuchomásqueunmuñón.Estopuedecomprometerlacapacidaddelanimalparallevarcabofuncionesbiológicasesencialessimplestalescomolamovilidad,abarcarlareproducción,laalimentación,etc.Enadiciónaesto,enelsitiodeamputaciónsepuedendestacarinfeccionespococomunes.Enunlugardondesehautilizadoestatécnica,esparaalgunosprogramasdeconservacióndeliberación.Generalmente,losanfibiosjóvenessonmonitoreadosporgruposyatodosselesasignaunaúnicamarcadecodificación(ejemplo:laextraccióndeundígito).Losanimalesmásviejospuedensermarcadosconuncódigoindividual.Elusodeestatécnicadebesercuidadosamentesopesadaentrelanecesidadderastrearalosanimales,deobteneríndicesdesupervivenciadeliberación,yeldañopotencialquesepuedecausaralanimalliberado.

Además,laregeneracióndelosdedosfueunproblemaparaalgunasespecies,especialmenteparalassalamandras(DavisandOvaska,2001);entonces,en1961,Heatwoleutilizónitratodeberilioparalimitarelresurgimientodelosdedosenlassalamandrasdedorsorojo(Plethodoncinereus),locualfuebastanteexitosoparaelestudio.Heatwoleen1961declaróqueelnitratodeberilioesconocidoporsertóxicoyporprovocaredemasymuerteinclusoenbajasconcentraciones,perousounaconcentracióndiluidacuidadosamenteaplicadaaldedoamputado.LaSociedadamericanadeictiólogosyherpetólogos(2004)recomiendandelimitarelnúmerodededosamputadosporanimal,yevitarlaextraccióndedosdedosadyacentes(Beaupreetal.,2004).Mayen2004,escribióunartículoexponiendoqueelusodecortadoresdededoscomprometióestadísticamenteelestudiodelusodeestasmarcas.

Mientrasquelaecologíamolecularylacronologíaesqueletalsehanconvertidoenherramientasenlaecología,elusodecortadoresdededosesgeneralmenteunmétododemarcacióndondeeltejidoextraídotieneusosimportantes.Lienen2007,utilizóuncortadordededosparadeterminarlademografíadelaranadeTaipéi(Ranataipehensis),yutilizósusdedosparalasinvestigacionesesqueletocronológicas.Siseusancortadoresdededos,todoslosdedosextraídosdeberánsercatalogadosyalmacenadosdemaneraapropiadaparaposiblesanálisis,especialmenteenespeciespococomunesoenpeligrodeextinción.


Laextraccióndelacolahasidoutilizadatambiénensalamandrascomounatécnicademarcación;sinembargo,lahabilidadregenerativadelassalamandrashacequeésteseaunmétodotemporalenelmejordeloscasos.Arntzenetal.En1999,secomparóelmétododemarcaciónyelmétododemuestreodetejidoenuntritóncrestadoyserecomendóapesarquelossujetadorescrecieranenmenosdeochomeses.Estaesotraoportunidadparaquelosinvestigadoresrecopilenmuestrasgenéticas.Laamputacióndelacolaenrenacuajoshalimitadolautilidadasícomotambiénlamarcacióngeneralmentesepierdeentre2o3semanasdesdelaamputación.En1973,GuttmanyCreaseydestacaronquelaamputacióndelacolatambiéntieneelriesgodeprovocarundañoalosvasossanguíneosoalosnervios.

Transpondedoresdeidentificaciónpasiva-MicrochipsLostranspondedoresdeidentificaciónpasiva(normalmenteserefierealasPITs,perotambiénalostranspondedoresintegradospasivoseinductivos)sonprobablementeelmétodomáscomúndeidentificaciónparalosanimalesenloszoológicos.Seinsertaunmicrochippordebajodelapiel,enlaespaldaoenlacavidadcelómicadelanimal.Estoselograalhacerunapequeñaincisiónenelanimalyalponermanualmentelaetiqueta,outilizandounaplicador.Elaplicadoresunaparatohipodérmicolargoconunaagujadecalibre12.Luegolaetiquetasepuededetectarpormediodeunlector,elcualenciendeeltransmisordelaetiquetaparaquedevuelvauncódigoalfanuméricoúnico,elqueesdecodificadoporellector.Existenmilesdemillonesdecódigosdisponiblesqueaseguranqueloscódigossonúnicos.Elcódigoapareceenunapantallaenellector.Estaesunatécnicainvasivaquepotencialmenteexponealanimalainfecciones,sinembargoraravezhasidoreportado.Existendeigualmaneralimitacionesdebidoaltamañodelasetiquetas.Algunasetiquetaspuedensertanpequeñashastaalcanzarlos7mmdelargo,peropuedenseguirsiendomuygrandesparaalgunosanfibios.Lasranasdebenestarporlomenosentrelos25a35mmdelongitudSVparapoderaceptarlasetiquetas.Además,frecuentementelasetiquetassemuevenporelcuerpodelanimal,ynoescomúnquelasPITsseanexpulsadasdelanfibio,generalmentedeunaubicacióndiferenteadondeseinsertóoriginalmente.Estoessobretodoverdaderocuandolaetiquetaseponeenlacavidadcorporal.Essabidoquelasetiquetassepuedenpasarporlashecesfecales.Cuandoseexpulsalaetiqueta,sepuedeperderlaidentificacióndelanimal.OtroproblemaconlosPITsesqueexistenvariossistemasenelmercado,loscualessonincompatibles.Haylectoresuniversalesdisponibles,peroestospuedensercostosos.AlgunosprogramashanincluidolasetiquetasTrovancomoelestándaryotroshanincluidolasetiquetasAVID.Estopuedehacernecesariocontarconmásdeunsistemadisponibleensuinstitución.


LectordeTranspondedorAvidPortátil

EtiquetasdealambreencodificacióndecimalLatecnologíadesarrolladaporlosingenierosdepescaparamonitorearlaliberacióndelospecesesatravésdelusodepequeñasseccionesdecablesmagnetizadosconpequeños(micro)númerosimpresosenelcable(Donnellyetal.,1994).Sedetectalapresenciadelalambreconunsistemadedetecciónmagnético.Luegosedeberemoverconelfindeleerelnúmeroconunaparatoconaumento.Laextraccióndelaetiquetaesunprocedimientoquirúrgicoyexisteelriesgodemortalidad,déficitfuncionalopuededejarunacicatriz.Estatécnicatieneusoslimitadosencautiverio,peropuedeserunaherramientavaliosaparalosprogramasdeliberación,dondeseliberangrandescantidadesdeanimalespequeños.

De:http://www.nmt.us/products/cwt/cwt.htm

Marcadoroimplantedeelastómerofluorescentevisible(VIE)Otratécnicautilizandopolímerospigmentadostienetambiénsusorígenesenlos

estudiosdelospeces.Estatécnicaimplicainyectarunelastómerofluorescentevisiblesubcutáneoenelanimal(Donnellyetal.,1994).Loselastómerosestándisponiblesendiversoscolores.Algunoscoloresdelelastómerosepuedenvercuandoseponealanimalbajounaluznegra;otrosnosonfluorescentesporqueledeberíansinvisiblessinestaluzparasuidentificación.Lostintesfluorescentessepuedenverclaramentebajolapiel,inclusoconalgodepigmentación.Sepuedeidentificaralanimalalponerun


elastómerodiferentescoloresendistintaspartes.Acontinuaciónhayunejemplodemarcacióndeunaranautilizandounamembranaenlaspatastraseras.

De:http://tropicalis.berkeley.edu/home/husbandry/tags/E-ANTs.html

Estossistemastambiénhansidodesarrolladosparasalamandras.Lafotomásabajomuestracuatrolugaresquesepuedenusarparacodificarlainformaciónconvarioscolores.

De:http://www.pwrc.usgs.gov/resshow/droege2rs/salmark.htm

Otrousodeloselastómeroesparalamarcacióndelarvas.Elelastómerose

vuelveunapartepermanentedelanimal.Cuandoelanimalsetransformaasuformaadulta,laetiquetaelastómerapuedepermanecervisible.Unproblemaconestatécnicaesquecuandoelanimalalcanzasuformaadulta,esdifícilsaberenquélugarquedaráelimplante.Duranteelprocesodemetamorfosislostejidossemuevenysepropagan.Cuandosetratadelamarcacióndelaslarvas,estasdebenestaranestesiadas,especialmenteenespeciespequeñas,lasqueportansuspropiosriesgos.Alserlaslarvasdeuntamañopequeño,haceimposiblequesepuedansujetardeformasegurayefectivacuandoseestánmarcando.Conlaanestesialasespeciesmáspequeñaspuedensermarcadas.Porejemplo,enelzoológicodeDetroitsepudieronmarcarexitosamentelaslarvasdetritóndelesteyretenersusetiquetasdelacola.


Otroproblemaesquealgunosdeloselastómerospuedenmigrardentrodelcuerpodelanimal.EnlossaposdeWyoming,sedescubrióqueloselastómerosqueseinyectabanenlaspiernassepodíandetectarbajoluzultravioletaenelhígado,cuandomástardeseexaminóalanimalduranteunanecropsia(Williams,1995).Debidoaquelapieldelosanfibiosnoestádirectamenteadheridaalosmúsculos,lasetiquetasqueseponensubcutáneamenteamenudoiránmigrandoalaspartesbajasdelcuerpo.Lasetiquetasdemúltiplescoloresqueseponenenlosmuslosdelasranasfrecuentementeresultanenunacoleccióndepuntosdecoloreseneláreadelaingle.Estosepuederesolveralinyectarelelastómeroenlasuperficiedelmusculosubyacente.Unavezqueseinyecta,pasarlosdedossuavementesobreellugarenqueseinyectó,indicarásilaetiquetaestásegura.

Elusodeloselastómerossehacomparadoconotrosmétodosdemarcación,incluyendoaDavisyOvaska,quienesen2001compararonlamarcaciónelastómeracontralaamputacióndededos.Ellosencontraronquelassalamandrasdeespaldaroja(Plethodonvehiculum)marcadasconelastómeros,mostraronunmejoraumentoenelpesoadiferenciadeanimalesalosqueseleamputarondedosenlaboratoriosyenelcampo.Heeymeyeretal.En2007seprobaronloselastómerosensalamandrasdeespaldaroja(Plethodoncinereus),lasquetienenpieloscura,loquepodríalimitarelvalordeestatécnica.Suresultadoindicóqueéstatécnicademarcaciónesunaopciónviable;sinembargo,hanhabidoalgunasmigracionesdelasetiquetasyporestoserecomiendacolocarmúltiplesmarcaslomásseparadasposiblesunasdelasotras(Heemeyeretal.,2007).LosfabricantesdeesteproductopresentanunnumerodedocumentosquehanprobadolarelevanciadeesteproductoincluyendoaRegesteryWoosley,quienesen2005utilizaronVIEparaidentificaryrastrearlasmasasdehuevecillos(NorthwesternMarinTechnology,ApplicationNoteAPG02,2007).

OtrasmarcasinyectablesdecoloresConelpasodelosaños,hanaparecidounavariedaddemétodos,involucrando

lainyeccióndeproductosaltamentevisibleenlosanimales.Todosestosmétodosseaplicaroninicialmenteenlasindustriaspesqueras,dondeserefinaroneinclusoalgunasvecesseautomatizaron.OtrastécnicasusadasconmásfrecuenciaparecenserelPanjet(WrightHealthGroup,Ltd.Dundee),otrosmétodosdetatuajes,polímerosacrílicosinyectables,eimplantesdeelastómerovisible;loscualessehandiscutido(NorthwesternMarineTechnology,SalisburyUK).

Engeneral,altatuarseinyectaunaespeciedetintaenlapiel,aunaprofundidadqueevitequesedecolore.ElConsejoCanadiensedeCuidadoAnimal(CACC,Unknown),elmanualparaelcuidadodeanfibiosyreptilesrecomiendalaseleccióndelmétododetatuajebasadoen:1)usodetintaquecontrastelapieldelanimaly2)usodeuntatuajequemantengalalegibilidadalolargodeltiempo,conladifusiónenlapiel,ycondegradaciónultravioleta(ConsejoCanadiensedeCuidadoAnimal,2005).Sinembargo,inclusoconestasconsideraciones,MurrayyFulleren2005recomendaronelusodeextraccióndetejidos,marcación,marcaciónporcongelación,yelectrocauterizaciónporsobrelostatuajes,debidoalaprobabilidaddetenerproblemasconlasvisibilidadylegibilidad.ElComitéHerpetológicodecuidadoanimalyuso(HACC),delaSociedad


americanadeictiólogosyherpetólogos(Beaupreetal.,2004),apruebaelusodetatuajescomométododemarcación,peroadviertequelatintaqueseutilizatieneunpotencialdeabsorción,ysidesconocelatoxicidadenanfibios,posibilitalamuerte.Enadición,lanaturalezapermeabledelapieldelosanfibioshacequelamarcacióndetatuajeseapropensaadesvanecerse.

EltatuajePajetesunmétodoautomáticodeinyeccióndetintaintercutáneaatravésdelatensiónenvezdeusarunaaguja.Esteprocesoseusacomúnmenteenpesquerasporquelaaperturapequeñaylagranpresiónelaparatopotencialatintahacialapieldelanimal.Measeyen2003utilizóestatécnicaencecílidos,ydescubrióquelasmarcasnoseborraban,ybasadosoloenlaobservación,nocausóimpactoenlasupervivenciaocomportamientodelosanimales.

ApesardequelamarcadefábricaPanjetnosehayamencionado,Nishikawaycompañíaen1988utilizaronunmétododealtapresióninnecesario,comoenunacomparacióndeestatécnicayloscortadoresdededosparalarecapturaciónenlassalamandrasPlethodonjorndaiylosPlethodonglutinosus.Ellosalteraronelusodelmétodoprevioaldisminuireltamañodelaaperturadelapistola,utilizandountubopequeñoysituandolasmarcasendistintoslugaresdelcuerpoyextremidades.Elresultadodeesteestudiodemostróqueestemétododemarcaciónfueexitoso,conresultadosmejoresqueaquellosconanimalescondedosamputadosparalarecaptura(Nishikawaycompañía,1988).En1982TayloryDeeganestudiaronlaefectividaddeestemétodoenranasverdes(Lithobatesclamitans)yenrenacuajos,ydescubrieronqueeraexitosoparamarcargrandesnúmerosdelarvas;sinembargo,siadvirtieronquelapresiónpuedeserunproblemasiseintentamarcaranimalesmáspequeñosydelicados.Tambiénnoinvestigaronlosposiblesimpactosdelamarcacióndelarvasencrecimiento(TayloryDeegan,1982).

Otroprotocolodemarcacióninyectable,utilizadoenelestudiodeunavariedaddeanfibios,eslainyeccióndepolímeroacrílico.En1973,Wooleyutilizóestemétodoconéxitoensalamandras,aunquelamarcaciónindividualnofueposible.Esteprocesoalcanzómarcasquefueronvisiblesdesde4a5pies(1200y1500metrosaproximadamente);sinembargo,hubounaligeradifuminaciónalolargodelperímetrodelamarca,yunaligerainestabilidaddelamarcaalolargodeltiempoenalgunosanimales.LaprimeraventajaqueidentificóWooley,fuelahabilidaddeobservaralosanimalessincapturarymanipulardespuésdelamarcacióninicial.Sinembargo,elaumentodelavisibilidadeninvestigadores,significaráunaumentodelavisibilidadadepredadores,locualpuedeinfluenciarlasupervivencia.En1978,CecilyJustutilizaronelmismoprocedimientoparamarcaralaslarvasderanatoro(Ranacatesbeiana).Aunquehuboungradodedificultadaldiscriminarcoloressimilares(comoblancoyamarillo),yelmétodofueexitosoyengeneralrentable(CecilyJust,1978).

Lamarcacióndelarvasdeanfibiopresentaundesafíoúnicodebidoasutamañoyestructura.En1974,SealeyBoraasutilizaronmezclasdetinta,jaleadejaleadepetróleo,yaceitesminerales,ylasinyectaronenlacolayenlaespaldadelosrenacuajos.Descubrieronquelamarcaciónespermanente(hastalametamorfosis),ynotieneimpactoenlosanimales.Huboproblemasconlapocamovilidadenelnadoforzandoquelamarcasesalga;independientedeesto,sinoseponedemanera


correcta,luegovarequerirremarcación.Otroslogranmenoréxitoconestemétodo,desdequeelradiodelassalesmineralesconlajaleadepetróleodebenserexactas;yhayunafaltadeconsistenciaenlosproductosdisponiblesparapermitirunéxitohabitual.

MuertelarvariaDurantelosaños,renacuajostinturadoscompletos,sehanutilizadoenuna

variedaddeestudios.Entodosestosmétodos,lavariableprincipaleselpigmentoutilizado.Independientementedelpigmento,sehaceunasoluciónconelpigmentodondesecolocanlosrenacuajosporunacantidaddetiempo.Lapielsemipermeabledelalarvaabsorbeelpigmentoycoloraelcuerpocompletodelanimal.En1973,GuttmanyCreaseydescubrieronqueelazuldemetilenomatóalosrenacuajosymanchósusórganosinternos;elrojoneutralsoloduródosdías,yelBismarckcaféYprovocóuncomportamientovago.Sielpropósitodelestudioescomprenderenentendimientodelasupervivenciaycomportamientodelaslarvasdeanfibios,losefectostemporalesdelrojoneutralparecenserpreferibles.En1981,TravisutilizórojoneutralparamanchararenacuajosdeHylagratiosa,yevaluarelimpactodelapigmentaciónenelcrecimientoysupervivenciadeellos.Susdatosindicanqueelcrecimientodelosrenacuajosdisminuyecuandosonpigmentados.Estodebeserunaconsideraciónenelprocesodedecisiónparaconsiderarsuuso.

EtiquetasalfanuméricasvisiblesLasetiquetasalfanuméricasvisiblesquesepuedenaplicarenlaidentificacióndelosanfibiosestándisponiblesenelcomercio(Donnellyetal.,1994).Estaspequeñasetiquetasseinsertansubcutáneamentealhacerunapequeñaincisión,ycolocandolaetiquetadebajodelapiel.Parasuturarlapielseutilizaunpegamentoquirúrgicocomocianoacrilato.Unsitiorecomendadoparaimplantarlo,eselinteriordelmuslodelasranas(verhttp://tropicalis.berkeley.edu/home/husbandry/tags/E-ANTs.html)LalecturadeestasetiquetassehacepormediodeunalinternaespecialdeluzLEDazulyconanteojosdevisiónámbar,disponibledefábrica.Lasetiquetasvienenconcódigosalfanuméricosqueproporcionancercade46.000variantesúnicas.Estasetiquetasseimprimenconnúmerosúnicosyvariadoscolores,yvienenendostamaños:unoestándarde1.0mmx2.5mmyunograndede1.5mmx3.5mm.Lostrabajadores(Measeyetal.,2001,Measeyetal.,2003)utilizaronestemétodoexitosamenteencecílidos(Gegeneophisramswamii),loscualesfueronpreviamenteidentificadosindividualmenteengrupospequeñosencautiverio,dondelospatronesdeanulaciónerandistinguibles.Estemétodorequirióelusodeanestesiadebidoaladificultadgeneraldemanejaralosanfibiossinpiernas,peronorequirióanestesiageneralenespeciesquefueronfácilmenterestringidas.


De:http://tropicalis.berkeley.edu/home/husbandry/tags/E-ANTs.html

MarcasyetiquetasAlgunosestudiosdecampomásantiguosutilizabancuerdasalrededordela

cinturadelasranascomomarcas.Algunasdelascuerdaserancodificadasporcoloresmientrasqueotrasteníanetiquetaspequeñas.ElConsejoCanadienseenCuidadoanimal(2002),sitúaranastoroparacompararlacinturaylasmarcasdelosbrazos,ydescubriendoqueambascausanabrasiónenlasranas(CACC,Unknown).En1940,RaneysituóunestudioporBreder(BrederJr.etal.,1927),utilizandounacuerdaconunapequeñaetiqueta,ysupreocupaciónfuelafaltadepermanenciaypotencialporheridascuandolacuerdaseatabamuyfuerte(Raney,1940).Sinembargo,Lienen2007utilizóexitosamentemarcasenlacinturaparaidentificaciónindividualenranasdeTaipéi(Hylaranataipehensis);asíqueexistenprácticasactualesdeestemétodo(Lienetal.,2007).

Generalmente,lasmarcasenlacintura,conysinetiquetas,parecentenerunaduraciónlimitadaytenerelpotencialparaengancharsedeobjetosylimitarpotencialmenteelmovimiento.Enadición,loscoloresdelasmarcaspuedenllamarlaatencióndedepredadores;hemosencontradoestudiossobrelasposiblesimplicacionesdesobrevivencia.Sinembargo,estatécnicademarcacióntemporalpuedeserútilyviableparaanimalesencautiverio.

LasmarcasquerodeanlaextremidadanteriorfueronaparentementeutilizadasporDelyen1945enranascomestibles(Pelophylaxesculentus)yensaposdevientredefuegoeuropeo(Bombinabombina)deacuerdoaHonegger(Honegger,2007).PrimeramenteHoneggerseinteresóenlastécnicasdemarcaciónparazoológicosy;porlotanto,descartóestatécnicademarcacióndebidoasuscaracterísticasdesagradablesypocoestéticasmásqueenloprácticoyútildelmétodo.Laotrapreocupaciónconestamarcaciónesqueerasoloestacional.Dependiendodelmaterialutilizadoparalaconstruccióndelasbandas,existentambiénabrasionesenlesiones,interferenciaconamplexos,yatraccióndedepredadores.Lasextremidadesanterioresdemuchosmachosanurossonrobustasynoseexponenatenerlasmarcasenlugarfácilmentesinalgúntipodelesión.


En2007Honeggertambiénhisoreferenciaalestudiodondelasmarcassecolocabanalrededordelosdedosdelosanfibios.EstefueunmétododefabricacióntemporaldesarrolladoporDelyen1954enespeciesderanasnoidentificadas.Nofuimoscapacesdeencontrareldocumentooriginal,peropuedeparecerquelaestructuraanatómicadelaspatasdelasranashacequelasetiquetassesueltenmásfácil,ysisecolocanlosuficientementefuerteparaquesequedenensulugar,podríaprovocarunacontracción,laquepodríaresultarenlapérdidadelaspatas.Enadición,algunasdelasbandaspodríaninterferirconelcambiodepielenanfibios,dependiendodecómoseanaplicadas.

LasetiquetasderodillasfueronutilizadosporMcAllisteretal.(2004)enunacomparacióndetécnicasdemarcaciónconradiotelemetría.ElcitaelusodeestasetiquetasporElmbergen1989utilizandocuerdaselásticas.Lasetiquetaserandeplástico,numéricamentecodificadasdealevinesatadasenlarodilla.Ellossedieroncuentaquelasetiquetasprovocanirritaciónenlapielylaceracionesenlapielymúsculos.

Comopartedeunproyectodetelemetríademostracionalpequeño(2ranas),elzoológicodeDetroitcolocótransmisoresenranastoroamericanasmachoadultas(Lithobatescatesbeianus)utilizandounabutacapequeñacubiertadeplásticoyunamarcaenlacintura.Aunquelasetiquetaseventualmenteseperdieron,nosenotóningunalesiónenelanimalrecapturadoprevioalapérdidadesuetiqueta.Elvendajepuedesermásaplicableenelmanejodeanimalescautivos,yaquesonmonitoreadosdiariamente,ylapérdidadesolounavendasepuederesolverfácilmente.

EtiquetasexternasDistinguimoslasetiquetasexternasdelasvendasporquelasetiquetas

generalmenteimplicanpasaralgunapartedelmarcadoratravésdelapiely/oelmúsculodelanimal.Lasetiquetassonmásinvasivasytienenunpotencialparaunamayorincomodidadparalosanimales,lesiones,einfecciones;sinembargo,ellostienenungradomásaltodepermanenciayconfianza.Hahabidounaampliavariedaddeetiquetasexternasquesehanutilizadoenestudiosconanfibiosconelpasodelosaños.Algunosdeestosincluyenetiquetademandíbula(Raney,1940;RaneyandLachner,1947),cortadoresdecola(RaneyandIngram,1941),etiquetasdecuentas(NaceandManders,1982),etiquetasderodillas(McAllisteretal.,2004),yetiquetasdededos(CACC,Unknown).Elestudiodelosanfibiosporpartedeinvestigadoresentre50y70añosatráspareciódemostrarunamenorpreocupaciónporlacomodidaddelanimaldurantelacolocacióndelasetiquetas,ydurantelavidadelanimalconlaetiqueta;sinembargo,suincomodidadnofuecompletamenteignorada.Laactituddelosinvestigadoresconrespectoalacolocaciónhumanadelasmarcasesevidente,conunarevisióndelabibliografía.Además,losinvestigadoresmásrecientessevenenlaobligacióndeexaminaralosanimalesenlamismaluzquelosmamíferosyaveslopermiten.Losanfibiosfueron,hastahacepoco,clasificadosconlospecesporuniversidadesylaboratorios,loscualesnoestánreguladosparapruebasymanipulación.


UnodelosinformesmásrecientessobreelusodeetiquetasfuedeRaneyen1940,quienutilizóetiquetasmandibularesenranastoroamericanas(Lithobatescatesbeianus)yenranasverdes(Ranaclamitans).Duranteelestudio,Raneymarcó606ranasusandoetiquetasnumeradasdemetalycolocándolasatravésdelamandíbulabaja.Esteesunmétodoqueseutilizóenpeces,ylainsatisfaccióndeRaneyconlaamputacióndededos(debidoalacontabilidad)ylasmarcasdecintura(debidoalapermanencia),lollevóausarsujetadoresdemandíbulasenranas.Elcomenzócon50ranascomoenungrupodeprueba,dadoLaspreocupacionesqueteníaencuantoalasconsecuenciasdesupervivenciaycomportamientoporlasetiquetasenlasranas.Esteprocedimientofuerealizadosinanestesia,yRaneyinformósobrealgunasranasquesequitabanlasetiquetasconsuspatas,despuésdehabersidocolocadas,peronosenotóningúntipodedesprendimientoseriodelapiel.Elsostuvoquenohubounimpactoaparenteenhabilidaddecomerdelosanimales,dadoqueelestómagodelosanimalesrecapturadosconteníaalimento;atravésdelapalpacióndeestos,yqueelllamadonotablementenocambió.Raneyconcluyóqueelmétododesujetadordemandíbulasfuesatisfactorioysuperioraotrosmétodosdisponiblesenesemomento(Raney,1940).Entre1940y1946,RaneyyLacherinvestigaronelimpactodelossujetadoresdemandíbulasenelcrecimientodelossapos(Anaxyrusterrestrisamericanus)(RaneyandLachner,1947).Descubrieronquelosanimalesetiquetadosteníanuníndicedecrecimientomáslentoquelosanimalessinetiquetas.Woodburyen1954pusounestudiodeStebbins,etal.,quienencontróquelossujetadoresdemandíbulaeranunmétodoinaceptableparamarcarsalamandras(Woodburyetal.,1956).Ellossedieroncuentaquelasetiquetasprovocabanunainflamación,yquesedesprendieronatravésdelhuesomandibular.Elusorecientedelossujetadoresdemandíbulasesinexistenteenlabibliografía,aparentementeporbuenosmotivos.

Raneyen1941intentóamputarlascolasdelassalamandras,dondeadjuntóvendasdemetalatravésdelacolaylaespalda;sinembargo,estosmétodosdemarcaciónfallaron.Enalgunoscasos,loscortadoresqueutilizóerantanpesados,quelostritonesacuáticostuvierondificultadesparavolveralasuperficie.Eltambiénvioungrannúmerodeetiquetasperdidas,lesionesencola(almenoscolascompletamentecaídas),yloqueélllamópiel"putrefacta";conlocualasumimosquesignificaalgúntipodeinfección.Sinembargo,Raneysimencionaqueotrosinvestigadoresutilizaronexitosamentesujetadoresdecolaensalamandrasacuáticas(Necturus)duranteelperíododelestudio(Raney,1941).Engeneral,elusodeetiquetasensalamandrashasidomenosqueexitosoynoseestárecomendando.

En1982,NaceyMandercrearonunsistemaúnicodemarcaciónpararanascarnívorasencautiverio(Xenopus),elcualutilizauncablequirúrgicoconcuentasdecoloresunidadaeste.Elcablesecolocaatravésdelaextremidadtraseraodelantera,alrededordelhuesoparaasegurarsuestabilidad.Enesteestudio,lasranashembrafueronmarcadasenlaextremidadanteriorylosmachosenlaextremidaddelanteraparaevitarcomplicacionesyatoramientosdurantelareproducción.Lasetiquetasqueseponíanatravésdelapielseperdíanocasionalmente(NaceandManders,1982).Esposibleusaretiquetasdecablesconcuentasatravésdelosmuslosocoladelosanfibios;sinembargo,elriesgodeatoramientoexiste(CACC,Unknown).Enranasmás


grandes,lasetiquetasdededossonunaopciónparamarcaralosanimales.Estasetiquetassecolocanatravésdelamembranadelaspatastraseras,yseincluyeunaetiquetadecintadediscolaquecontieneuncódigoúnico(CACC,Unknown).En2007,HoneggerserefirióalusodelasetiquetasdededosporHeusseren1958,quienencontróunainflamaciónenelsitioderetencióncercadeunasemana,conunmáximodedostemporadas.

CONCLUSIONES

Haymuchasopcionesparamantenerlaidentificaciónindividualdelosanfibiosdurantesuvida.Muchoshansidoempleadosentrabajodecampo,yluegoadoptadosparaanimalesencautiverio.Losanimalesencautiveriosoncontinuamentemonitoreados;adiferenciademuchosanimalesenestudiosdecampo,quesonmarcadosyluegoliberadosenlanaturaleza.Siexisteunimpactoenlasupervivenciaoenlamorbilidad,provocadosporunatécnicademarcación,sepuedeobservardirectamentedurantetodalavidadelanimal.Paralostaxoneslongevos,estopuedoserdécadas.Laveterinariamodernadecienciaypatología,puedenahoraidentificarlosproblemasdelastécnicasdemarcaciónquenohansidoevidentesenelpasado(Williams,1995).Estohaproporcionadoinformaciónadicionalenlaidoneidaddealgunastécnicas.

Hoyendía,laéticaanimalactuallimitalasopcionesdisponiblesparalosanimalesdeloszoológicos.Esesencialconsiderarelbienestaranimal,laestéticadelosespecímenes,ylasaludalargoplazodelosespecímenes.Sonpreferibleslastérmicasnoinvasivassiestassonfiables,funcionalesyfactibles.Cuandolastécnicasconinvasivas,esvitalbalancearlosbeneficiosdelatécnica(ejemplo:animalesderaza),loscostospotencialesendolor,morbilidad,fecundidad,ymortalidaddelespécimen.

Lamutilaciónatravésdelaamputacióndetejidosseconsideraunatécnicainaceptableenalgunasinstituciones.Estoesparticularmenteverdaderocuandohayamputacionesmúltiplesinvolucradasenlamarcación. Estastécnicaspuedenlimitarlaactividad,darpasoaunaoportunidaddeinfección,reducirlafuncionalidad,yaumentarlamortalidad.Laregeneracióndetejidoestambiénevidentesiocurreenanimalesencautiverio.Losprosycontrasconalgunoscomentariosparasituacionesdecautiveriodemuchasdeestastécnicasdescritasenestecapítulo,seproporcionanenlasTablas1y2acontinuación.R.AndrewOdumDepartmentofHerpetology,ToledoZoologicalSocietyraodum@[email protected]


TABLADEPROSYCONTRASDELASTÉCNICASDEMARCAJETABLA1-TÉCNICASNOINVASIVAS

Técnica Aplicación Pros ContrasFotografíadeidentificación

Animalesconpatronesoestructurasúnicas(ejemplo:verrugas)

Noinvasivo 1. Requierealgodeexperienciafotográfica.

2. Lospatronespuedencambiarconlaedad.

3. Loscambiospostmórtempuedendificultarlaidentificacióndelanimal

Dibujosdepatrones Animalesconpatronesdiferentesfácilmenteidentificables

Noinvasivo 1. Requierealgodeexperienciafotográfica.

2. Lospatronespuedencambiarconlaedad.

3. Loscambiospostmórtempuedendificultarlaidentificacióndelanimal

Aislamiento Losanimalessemantienenindividualmenteoenpares(sexualmentedimórficos)

1. Noinvasivo2. Norequiereun

patrón

Lasetiquetasdelasrecintosodelastarjetassepuedenperder

Tabla2-TécnicasinvasivasTécnica Aplicación Pros Contras

Marcaciónporcongelación

anfibiosgrandes Marcaciónpermanente

1. Lasmarcacionessonprimitivas2. Puedencausarinfecciones3. Losanimalesdebenserbastante

grandesAmputacióndededosyamputacióndecola

Ranasysalamandras Unatécnicafácil 1. Puderequerirlaamputacióndemúltiplesdedosenunaextremidad.

2. Lassalamandraspuedenregenerarlosdedosylacola

3. PuedencausarinfeccionesOtrasamputaciones Norecomendadas Unatécnicafácil 1. Cesedeamputación

2. PuedecomprometerlaactividadCabledecódigodecimal

Gruposdeanimales Sepuedehacerparamarcaranimales

1. Requiereunlector2. Losanimalesdebenser

sacrificadosparaleerelcableVendas Ranasysalamandras Unatécnicafácil 1. Nosepuedeutilizarenanimales

pequeños2. Laetiquetasepuedecaer3. Puedecomprometerlaactividad

Etiquetasexternas Todoslosanfibios Fácilidentificación1. Nosepuedeutilizarenanimalespequeños

2. Laetiquetasepuedecaer3. Puedecomprometerlaactividad


Transpondedoresintegradospasivos

Animalessobrelos25gr Identificaciónúnicaydeusocomúnenzoológicos

1. Nosepuedeutilizarenanimalespequeños

2. Laetiquetasepuedecaercuandoelanimalcambiadepiel

3. LaetiquetapuedefallarImplantesvisuales-Elastómero

Marcacióndetodoslosanfibios

Sepuedeutilizarenlarvasyadultos

1. Elelastómeropudemigraraórganosinternos

2. Sistemasdecodificaciónlimitado

3. RequiereunaluznegraOtrosimplantesinyectables

Marcacióndetodoslosanfibios

Sepuedeutilizarenlarvasyadultos

1. Elelastómeropudemigraraórganosinternos

2. Sistemasdecodificaciónlimitado

3. Requiereunaluznegra


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Apéndice2:Tratamientodeaguasresiduales 249

Apéndice2:

TRATAMIENTODEAGUASRESIDUALES

DiseñodeconsideracionesparaeltratamientodeaguasresidualesParalograrefectivaseneltratamientodeaguasresiduales,sedebenemplearmétodosbiológicosyquímicos.Bajociertascircunstancias,esnecesarioprocesarelaguainsitu.Paradeterminarlanecesidadyeltipoapropiadodetratamientoefluente,esnecesariohacerunaevaluaciónderiesgosparaintroduciragentespatógenosnovedososalmedioambiente.Deigualmanerasedebeconsiderarlaemisióndequímicostóxicosdeestasinstalaciones.

• Ensituacionesdondeeltratamientodeaguasresidualesnecesariamenteseconsiderainsitu,idealmenteelsistemadebeproporcionarservicioininterrumpido,requerirmantenimientomínimo,ytenercostosoperacionalesmínimos.Comoejemplo,siconsideramosqueexisteunaaltaprobabilidadquelosanimalesretenidosenelrecintopuedenacarrearagentespatógenosvirulentos,losquepodríanafectaralosanfibioslocales,lossistemasdeefectividadyfiabilidadsonunapreocupaciónprimaria.Lossistemasdebenserevaluadosporefluentescultivadosparadeterminarsueficiencia.Inclusosiunsistemaes99%fiable,significaquepodríabajarpor3.65díasalaño,ylosagentespatógenosseríanliberadosalmedioambiente.Siverdaderamentehayunagentepatógenopeligrosopresente,estonosedeberíaconsideraraceptable.

• Alevaluardiversosdesinfectantesparaeltratamientodelagua,esnecesariocontarconalgúnsistemamétricoparasueficienciacontraorganismosespecíficos(agentespatógenos).Estaeficiencianormalmenteesdefinidaporunporcentajedemuerte(ejemplo:99.99%).Unsistemamétricoestándarquesehautilizadocomúnmenteesunproductodeconcentraciónytiempodecontacto(Ct)(Ct=concentraciónenmg/l(ppm)ytiempodecontactoenminutos).ElconceptodeCtpermitedeterminarlacantidaddetiempodecontactonecesarioendiferentesconcentraciones.Porejemplo,unCtde100conun99.99%demuerteporunagentepatógenodeberíaserefectivosieltiempodecontactofuepor100minutosaunaconcentraciónde1.0mg/lode1minutoaunaconcentraciónde100mg/l.ElCtvaríaampliamentefordiferentesdesinfectantesyagentespatógenos.Esademásdependientedelatemperatura.Generalmentelosdesinfectantessonmásefectivosentemperaturasaltas.ElCtesutilizadocomoelestándarporlaAgencia deProtecciónAmbientaldeEstadosUnidosEPAparaeltratamientodeaguasresiduales;yhayinformaciónsignificativaparaapoyarsuusocomouncontrolestándardeagentespatógenosenanfibios.

• Ctesunagentepatógenoespecífico.ElCtlibredecloroes~100porE.coli,ytanaltocomo10.000porCryptosporidiumparvum.ElBatrachochytrium(Bd)tieneunCtsimilaraalgunodelosagentespatógenosmásinmunesalclorocomolaGiardiasisymicobacteriosis(Ct=~1000mg-min/litro).


• Existentambiénsistemasbiológicosquehandemostradosereficientesencontrolarlapropagacióndeagentespatógenos.Estoincluyesistemaslocalessépticosutilizadoscomúnmenteparahogaresypararecintosdetratamientodeaguasresidualesmásgrandes,queusanprocesosbiológicosconundesinfectantefinalqueaplicaantesdellanzamientofinaldeefluente.SistemassépticosUnaopciónqueproporcionaunnivelresponsabledecontroldeenfermedadesesunsistemasépticoqueincluyeuntanquedefijaciónyuncampodefiltración,quedistribuyenlasaguasresidualesbajotierra.Estossistemashandemostradosuhabilidadparacontrolarladistribucióndeagentespatógenosenlasnapasdeaguayenelmedioambiente.EstoestáclaramenteindicadoenlosestándaresparalospozosdeaguapotableyloscamposdedescargassépticasenEstadosUnidos.Elestándaresqueenladistanciaentreelpozodeconsumoyelcamposépticodebeteneralmenos100piesdedistancia(30metrosaproximadamente).Estadistanciaesadecuadaparaprevenirqueagentespatógenosingresenalossistemasdeaguapotable.Ladeficienciadeestossistemasesquenopuedencontrolarelingresodequímicosnobiodegradablesalasnapasdeagua.Eltanquedefijaciónademásnecesitamantenimientoperiódicoparaextraersedimentoalmacenado.AsuntosuspendidoenaguasresidualesElprimerpasoentodoslosprocesosdetratamientodeaguaeslaextraccióndecontaminantesquímicos.Estosepuedeconseguirpormediodelusodefiltrosmecánicosoportanquesdefijación.Lamayoríadelosdesinfectantesquímicossonineficaceseneltratamientodeaguasresidualesquecontienenpartículassuspendidas.Dependiendodelacomposicióndelaspartículas,puedequelosquímicosnopenetren,permitiendoquelasbolsasdeagentespatógenosescapendelosdesinfectantes.Estogeneraotroproblemadeeliminaciónparaelresiduo,unresiduosólido(Verresiduosólidomásabajo). Cloro(Cl2)

• Elclorolibre(Cl2)sehautilizadonormalmentecomoundesinfectanteparalosanfibios.Lasoluciónmáscomúndeclorolibreesellasolucióndehipocloritosódico(CaClO).Esfácilconseguirlocomoblanqueadordoméstico(3-6%NaClO)yenpreparacionescomercialesconconcentracionestanaltascomo+30%.OtrasolucióncomúndeclorolibreeselhipocloritodecalcioCa(ClO)2.Elúltimopuedeservendidobajounsinfindenombres,incluyendoHTHparacloracióndepiscinas.ElCa(ClO)2esunsólidoelcualpuedecontenermásdel50%declorolibre.DebidoasusconcentracioneselevadasdeCl2libre,esunaopciónidealparatratargrandescantidadesdeagua.

• Lasconcentracionesgeneralestanaltascomoel1%deNaClO(ejemplo:1partedel4%deblanqueadoren3partesdeagua)paralalimpiezahansidorecomendadasparalimpiezaydesinfección(Pessier,2008).Elclorolibreenestadisoluciónes~47.600mg/l.


Estasconcentracioneselevadassonimprácticasparalossistemasdetratamientodegrandescantidadesdeagua.

• Elcloroesunaopciónviableparaladesinfeccióndeaguasresidualesparaalgunosorganismos.Desafortunadamente,sielBdeslapreocupaciónprincipalparaelaislamiento,losexperimentoshechosporJohnson,etal.en2003,demostraronqueesmuyresistentealadesinfecciónconcloro.Ensusexperimentos,sematabael100%deBdconconcentracionesde4.00mg/lNaClO(=0.4%,1parte4.0%deblanqueadoren9partesdeefluente)poruntiempodecontactode10minutosTambiénselograeliminarconunaconcentraciónde10.000mg/lenunminuto(=1.0%1partede4.0%deblanqueadoren3partesdeagua).EstoestableceCtentre10.000y40.000mg-min/litro.Muchasinstitucionesempleanmanualesparaladesinfeccióndelaguausandoblanqueadores.Paramenorescantidadesdeagua,puedeserprácticoutilizarunadisoluciónen1:3blanqueador-aguaresidualconuntiempodecontactode40minutos(oenunadisoluciónde1:9por10minutosdecontacto).

• Paravolúmenesmásgrandes,esventajosoutilizartécnicasautomatizadas,peronuevamentelaclorinatienesusdeficienciasparaelBd.EnelzoológicodePerthenAustralia,sedesarrollóunsistemadiseñadoentornoaloscomponentesdelsistemadecloraciónparapiscinas(Robinson,etal.,2008).EstesistemaalmacenaelaguaenunareservayautomáticamenteseinyectaunadisolucióndeNaClOconunsistemaquímicodebombeo.Laconcentracióndelcloroenlareservasecontrolapormediodeunasondacensoradecloroyunanalizador.Laconcentraciónsemantieneen100mg/l.SiconsideramoselCtensulímitemásaltode40.000mg-min/l,eltiempodecontactodeberáserde400minutos(6.66horas).LaeficienciadeestesistemanohasidoevaluadaconBdactivo,peropareceprometedor.TratamientoporcalorAumentarlatemperaturadelaguaalpuntodeebullición,generalmenteseconsideracomounbuenmétododedesinfección.Desafortunadamenteestambiénbastantecostoso.Elaguatieneunatemperaturaespecíficamuyalta,yrequiereungranconsumodeenergíaparaquelleguealpuntodeebullición.Porconsiguiente,lossistemasdiseñadosparamanejargrandescantidadesdeaguatendránuncostoinaccesible.Sinembargo,estaesunaopciónviableparadesinfectarpequeñascantidadesdeaguasresiduales.OzonificaciónElozonoesunoxidantefuerte,yunodelosdesinfectantesdisponiblesmásefectivos.SehanrealizadopruebasnoespecíficasenBd,peronohaymotivosparaqueestonoseaefectivoenconcentracionesnormales.LadificultaddeCtparamataragentespatógenoscomolamicobacteriosisyelCryptosporidium,sondosclasesdemagnitudmenorqueaquellasdemostradasporelcloro(Ct=~10).Otrobeneficiodelozonoesquesedescomponerápidamenteenoxígenonotóxico,porloquenoquedanresiduosenelmedioambiente.Acontinuaciónsepresentaunesquemadeunsistemadetratamientodeaguasresidualessimple,utilizandoozonoyluzultravioleta.Lossistemasdeestetipopueden


demostrarseefectivosenladesinfeccióndeaguasresiduales.Losexperimentosconaguaconresiduosdeanfibiosrealeshanproporcionadoresultadosalentadores,perosiguesiendonecesariohacerunrefinamientomásafondo,paradesarrollarundiseñoquesepuedausarampliamente.

IlustraciónporR.A.Odum

Ladesventajadelozonoesqueesmuycostosodeproducir,requiereunainversióninicialconsiderable,yrequieredeunamantenciónconsiderable.Lasaltaspropiedadesdecorrosiónyerosióndelozono,requierequetodaslastuberías,lostanques,ylascanaletasesténfabricadasdematerialesresistentesalozono.

EsterilizacióndeluzultravioletaLaesterilizacióndeluzultravioletasehaempleadoduranteañosparaeltratamientodelagua.Parasuefectividad,sedebenremoverlamayoríadelaspartículasantesdeltratamiento.Desafortunadamente,elúnicoagentepatógenoqueparecesermuyresistenteeselBd.Sinembargo,elBdnoeselúnicoagentepatógenoqueseasociaconlosanfibios,ylaluzUVsepuedeutilizarjuntoconotrosmétodosparaproducirunsistemamásefectivo.

Tanque de

asentar Tanque de

Ozono

Generador de Ozono Ozono

Tanque de

almacenamiento

Esterilizador Ozono

Bomba Ozono

Efluente Ozono

Electronivel Ozono

Agua

Flujo constate de

agua

Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 253

Apéndice3:

HABITACIONESDEAISLAMIENTOPARAANFIBIOSENEL

ZOOLÓGICOHENRYDOORLYDEOMAHA

Reimpresoconautorizaciónde:Zippel,K.,R.Lacey,O.Byers(eds.)2006.CBSG/WAZAReportefinaldelTallerdePlaneacióndeConservacióndeAnfibiosexsitu.IUCN/SSCGrupoEspecialistadeCríasenCautiverio,AppleValley,MN55124,USA.Pp.65.________________________________________________________________________

HABITACIONESDEAISLAMIENTOPARAANFIBIOSENELZOOLÓGICOHENRY

DOORLYDEOMAHAUnejemplodelcumplimientoconlosestándaresdecuarentenaycríaparaanfibios

Diseñadoparalareintroducciónenlanaturaleza

JessiKrebs

SupervisordeReptilesyAnfibios,zoológicoHenryDoorlydeOmaha

3701S.10thSt.OmahaNE68107

[email protected]

IntroducciónEnfebrerode2006,laUICNGrupoEspecialistaenCríaenCautiverio(CBSG)ylaAsociaciónMundialdeParquesZoológicosyAcuarios(WAZA)presentaronunTallerdePlaneacióndeConservacióndeanfibiosensituenElValle,Panamá.Unodelosmuchospropósitosdelencuentro,fueformularrecomendacionesparalosestándaresdecríadeanimalesparaanfibios,quesonpartedelosprogramasdereintroducciónodelosgruposdecautiverioquepuedenregresaralanaturalezaenalgúnmomentoenelfuturo(Zippeletal.,2006).Muchasdelasrecomendacionespuedenimplicarunamejoraenelalojoactualyenlasprácticasestándaresdecuarentenapormuchoszoológicos,privados,einstitucionesacadémicas;yhansidovistosporalgunoscomoimprácticoyextremoparazoológicosyacuarios.ConlasleccionesaprendidasdelapropagaciónmundialdelaBatrachochytriumdendrobatidis(unodelosagentescausalesdelaenfermaddequitridiomicosis),yelpotencialparaqueemerjannuevospatógenos,seríaprudentequelasinstitucionesque


alberganespeciesdeanfibiosdesignadasparalarepatriaciónrevisensusprácticasbásicasdecríaylasnormasdecuarentena,tratandodecumplirconlasnuevasrecomendaciones.ElzoológicoHenryDoorlydeOmaha,respondióaestellamadodeaccióneinmediatamenteseestablecieronhabitacionesdeanfibiosdentrodelosedificiosexistentesenlosterrenosdeloszoológicos.Lashabitacionesdeaislamientoparaanfibios(IARs)sehanconvertidoenunmodelodetrabajoparalaaplicacióndelosestándaresrecomendadosenlosambientesdeloszoológicosoacuarios.CadaunadelasIARsmantieneunaespecieogruposdeespeciesdelamismazonageográfica.Elsiguientelistadoproveeimágenes,precios,materiales,yfuentesparaservircomounprimerejemploparalosquepudieranconsiderarfabricarsuspropiasinstalacionesdeIARparalosanfibios.1

Imagen1.Unatípicahabitacióndeanfibiosnocompatible.

HabitacionesparaanfibiosNocompatibleconlabioseguridadLamayoríadelashabitacionesdealojamientodeanfibiosenzoológicosyacuarios,noestánencumplimientoconlasnuevasrecomendacionesdelabioseguridad.Unejemplodehabitacionesdeanfibiosnobioseguras,esunaquealojaanimalesdetodoelmundo(imagen1).Otrosproblemaspuedenserquenosetomaronmedidasparaprevenirqueaguasresidualesalmacenadasentanquesmásaltossederramenenlosdemásabajo,oquenoseempleeunprocesodetratamientodeaguasresidualesparaprevenirqueagentespatógenossalgandelainstalaciónyponganenpeligroalapoblaciónanfibialocal.Elerrordeloscuidadoresnuncasepuededescartarporcompleto,ylastapasquenoesténaseguradaspuedenaumentarmuchomáslapropagacióndelosagentespatógenosentrelosanimalesdediferenteslugaresdelmundo. Los materiales y las fuentes se presentan en base a la fabricación del zoológico Henry Doorly de Omaha, no como respaldo. Para información adicional sobre cualquiera de los productos presentados puede contactar al autor.


Imagen2.Unejemplodeltamañodelashabitacionesdeaislamientodeanfibiosesde8x8x8pies

(2.4x2.4x2.4m).CompatibleconlabioseguridadCadaIARenelzoológicoHenryDoorlyenOmaha,alojasolounaespecieogruposdeespeciesdelamismazona.LasIARsonhabitacionesversátilesconstruidasconmaterialesdeinvernadero,disponiblescomercialmentecontodalaconstrucción(Imagen2).ElrangodelasIARsenelzoológicoesde8x4x8pies(2.4x1.5x2.4m)yentamañode10x16x8pies(3x4.9x2.4m).LasparedesestánconstruidastubosdealuminiohuecossuperpuestosconláminasLexandedoblehojade1.5x1.5pulgadas(3.8x3.8cm).Lasparedesindividualesestánunidasconpiezasangularesdealuminiode1pulgada(2cm).Lascontrapuertasquesecompranenelcomercioseutilizanparaaccederacadahabitación.Todaslasbisagrasylasgrietassesellancon100%siliconaparaevitarqueelaguasefiltreenáreascomunesoenotrashabitacionesdeaislamiento.Lossellossepruebanapresiónantesqueseinstalenlosequipos,yantesquelosanimalesylasinspeccionesvisualesesténencursoparamantenerlosnivelesdebioseguridad.Lacontrapuertaseponeenelpuntomásbajoyelumbraldeunapulgadapermitequecadahabitaciónalojealmenos175galones(796lt)antesquesederrameenunasalacomúnconundesagüe.Ellistadodeproductosqueseutilizaronparalaconstruccióndelahabitacióndelaimagen1semuestraacontinuación:Tapa18@8pies(2.4m)2Empalme23@8pies(2.4m)LáminasdeLexan26@6x8pies(1.8x2.4m)

Tubosdealuminio18@8pies[1.5x1.5pulgadas(3.8x3.8cm);31/8pulgadas(0.3cm)degrosor]

www.stuppy.com www.statesteel.com/omaha.htm


Contrapuerta HerramientasTornillosArandelasterminadasporlosguardianesdelzoológico

Imagen3.Acercamientodelapiezadealuminioangularde1pulgada(2cm)sosteniendoeltubode

aluminioylacontrapuertade1.5x1.5pulgadas(3.8x3.8cm).

Imagen4.Launidadportabledecalefacciónyaireacondicionadoyelcalzadoespecializadopuestosencadahabitación.

Lasunidadesportablesdecalefacciónyaireacondicionadoseutilizanparacontrolarlatemperaturaambientalencadahabitación(imagen4).Estasunidadessepuedenadquirir


condiferentesrangosdeBTU(unidadtérmicadeenergía)parahabitacionesdediferentestamaños:Enhabitacionesde8x8x8pies(2.4x2.4x2.4m)seutilizan10.000unidadesdeBTU;habitacionesde10x16x8pies(3x4.9x2.4.)Enlaimagen4tambiénsepuedevereldiseñodelcalzadoparaingresaraestahabitación.Elcalzadoqueesfácildedesinfectarsecambiaalmomentoenqueelcuidadorcruzaelumbraldelahabitación.Acontinuaciónsemuestraunlistadodelosartículosqueseutilizaronenlahabitacióndelaimagen4:

Calefactor/ACutiliza10.000unidadesdeBTU4 Calzado

Imagen5.Estanteríasconrecintosparaanfibios.

Lostubosqueseutilizanparalosrecintosdeanfibiosestánfabricadosdepolicarbonatodegradoalimenticioparaprevenirlafiltracióndetoxinas,quealgunasvecesseencuentranenmaterialesplásticos(Imagen5).Aunquelosacuariosdevidriopuedansermenoscostosos,lostubosdepolicarbonatotienenunamayorduraciónyversatilidad,loquelosvuelvemásapropiadosparaelalojamientodeespeciesterrestresyacuáticas.Noserequiereuntaladroespecíficoparaperforarlostubosyaquenoseagrietanniserompenfácilmentecomoelvidrio.Elvolumendelostanquesqueseutilizanbordeade5a16galones.

www.sunpentown.com/wa12poacwihe.html


Acontinuaciónsemuestraellistadodelosartículosqueseutilizaronparalosestantesdentrodelahabitaciónenlaimagen5:

Estanterías5Tanquespararanas6Tapas7

Imagen6.InstalacióndelsistemaenormededrenajebajocadarepisaenlasIAR.

EldrenajeparacadarecintooperaenunsistemacomúndedrenajequeestáubicadobajocadarepisaLaslíneasdelsistemadedrenajesonde2-pulgadas(3cm)dediámetroparapermitirquegrandesvolúmenesdeaguapasenatravésdeellassinapoyarsedeotrosrecintosadyacentes(Imagen6).Lastuberíasdelsistemadedrenajefuncionanenlosbaldesderecoleccióndeaguasresiduales.

www.samsclub.com/shopping/navigate.do?dest=5&item=203424&pCatg=7085 o de los materiales adquiridos en las tiendas de herramientas. www.rcpworksmarter.com/rcp/products/detail.jsp?rcpNum=3328 www.habitatsystemsltd.com, hechas a medida.


Imagen7.LosbaldesderecoleccióndeaguasresidualesdelasIARconbombadesumiderose

muestraacontinuación.Seutilizaunacombinaciónconunfregaderopararecolectaraguasresidualesdecadahabitacióndeaislamiento,ysefabricaparaensamblardosfregaderoseconómicos(Imagen7). Elbaldedelabase(sinpatas)seensambladirectamenteensuelonoperforado.Elsegundofregadero(conpatas)seensambladentrodelbaldeinferiorysebombeaparadrenarlosinsalpicaragua.Labombadesumideroconuninterruptordeencendido/apagadoautomáticoseensambladentrodelbaldeinferiorparabombearelaguaresidualalaestacióncentraldetratamiento(Imagen8).Eltubosuperiorsepuedesondearparaquefuncionecomofregaderosilodesea,otambiénsepuedenconectarlíneasdemanguerasentrecadahabitaciónparaproporcionarfuentesdeaguafiltrada.Acontinuaciónsemuestraellistadodelosartículosqueseutilizaronparalosbaldesderecoleccióndeaguasresidualesenlasimágenes6y7:

UtilidaddedosfregaderosBombadesumidero8TubosycodosdePVCTubería

www.flotecpump.com/pdf/Page_06_2004.pdf


Imagen8.Estacióncentraldetratamientoyalmacenamientodeaguadeledificio.

TodaelaguaestratadacuandoentraysaledelIARenestacióncentraldetratamiento.Seutilizauncontenedordeaguamásgrandeparaalmacenarelaguareconstituidaporosmosisinversa(OI)quesebombeóacadahabitacióncomofueranecesario(ladoderechodelaimagen8;revisarcapítulo1parainformaciónadicionalcomolareconstituciónOIdeagua).Seutilizandosbarrilesparajuntartodaslasaguasresiduales(centrodelaimagen8),elcualdespuésestratadoconunblanqueadordeusodomésticopor12horasantesdeserliberadoenelalcantarilladodelaciudad.Revisarcapítulo3paramayorinformaciónsobreeltratamientodeaguasresiduales.Acontinuaciónsemuestraellistadodelosartículosutilizadosparaeltratamientodeaguaafluenteyefluentedentrodelashabitacionesenlaimagen8:

TanquedealmacenamientodeaguaOIde300galones(1135L)SistemasdefiltroOI AlimentacióndereconstituciónOIBarrildetratamientodeaguasresidualesde2@55galón(208L)SistemadealimentacióndeblanqueadorTuberíasdePVCTuberíaKitdepruebadecalidaddelagua


Imagen9.Adaptacióndelailuminaciónenlosestantes.

Lailuminaciónentodoslosestantesesproporcionadadedosmaneras:comoiluminacióncompactafluorescentesobrecadarepisaparaproporcionarluzultravioleta,ypequeñaslámparasdecalorencadarecintoparaproporcionarsitiosdecalentamientoparalasespeciesquerequierantemperaturasmáselevadas(Imagen9).Acontinuaciónsemuestraunlistadodelosartículosqueseutilizaronenlailuminacióndehabitaciónenlaimagen9:

Iluminaciónfija9Focos10

ResumenpresupuestarioparaunIARde8x8x8pies(2.4x2.4x2.4m):Materialesdelahabitación1.100UDS

Estanterías270USDCalefacción700USDTanquespararanas145UDScadaunoyx18=2.160USDIluminación210USDcadaunoyx9=1.890USDTuberías450USD

Conductoseléctricos200USDTotalparaunahabitación7.220USD

www.drsfostersmith.com/Product/Prod_Display.cfm?pcatid=3773&N=2004+113345 www.esuweb.com/cardfile.asp?ItemNumber=55112&IDProductRelationship=281


ConclusiónElZoológicodeJohannesburgodeSudáfricahautilizadotecnologíayprácticassimilaresparadesarrollarhabitacionesdeaislamientoparaanfibios,ensusintentosporcumplirconlosestándaresdelabioseguridadensuCentrodeConservacióndeAnfibios.EnelzoológicodeJohannesburgurgo,semodificóunedificioubicadoensusterrenosparaalojardiversasespeciesenpeligrodeextinción,previstasparaelprogramadeliberación.Losmétodosdescritosacontinuaciónparecenestarfuncionandobienparaellos;demostrandolatransferibilidaddelzoológicoHenryDoorlydeOmahanosóloaotrosparqueszoológicosyacuariosacreditadosporAZA,sinoquetambiénalasinstalacionesinternacionales.Estecapítulodemuestraqueconunpocodeimaginación,lasinstitucionessoncapacesdeseguirlasrecomendacionesdebioseguridad,recibidasporLaCBSGyelTallerdePlaneacióndeConservacióndeAnfibiosexsitudeWAZAconunainversióndeespacioyderecursosfinancierosrelativamentemásbajos.Consuerte,estovaamotivaraotrosaconsiderarlaconstruccióndesuspropiosIAR,yaintentarsalvarporlomenosunaespeciesoungrupodeanfibios.

ReferenciasZippel,K.,R.Lacey,O.Byers(eds.)2006.CBSG/WAZAReportefinaldelTallerdePlaneacióndeConservacióndeanfibiosexsitu.IUCN/SSCConservationBreedingSpecialistGroup,AppleValley,MN55124,USA.Pp.65.

Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación

263

Apéndice4:Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciasanitariaparaprogramasderecuperación

deespecies

Laranaverdecentroeuropea(Pelophylaxlessonae,anteriormentellamadaRanalessonae)

InformeaInglaterraNatural:

AnálisisderiesgosdeenfermedadesparaeldesplazamientoalavidasilvestrederanasverdesreintroducidasaunasegundaubicaciónenInglaterra.

Abril2015

DrJustineShottonBScBVScMScMRCVS

YDrTonySainsbury

BVetMedCertZooMedDVetMedDipECZM(Saluddelapoblaciónsilvestre)MRCVSEspecialistasEuropeosReconocidosenMedicinazoológica(saluddelapoblaciónsilvestre)

1. Introducciónyorigen

Entre2003 y2005, el grupodeAnálisis deRiesgodeEnfermedades yVigilancia Sanitaria(DRAHS) de la Sociedad Zoológica de Londres (ZSL) elaboraron un Análisis detallado deRiesgodeEnfermedades(DRA)paralareintroducciónderanasverdes(Pelophylaxlessonae,originalmente Rana lessonae) de Suecia al Reino Unido. El DRA del 2003/05 detalló ladisminución global de anfibios en ese tiempo y la asociación de esto con enfermedadesinfecciosas (Ver Sainsbury et al 2004). Estos incluyeron la consideración del ranavirus(iridovirus)quefueasociadoconlasmuertesmasivasenvariospaíses,incluyendoelReinoUnido (Cunninghamet al 1996), y el hongoquítridoBatrachochytriumdendrobatidis (Bd)quetambiénestuvoinvolucradoendisminuciónglobaldelapoblacióndeanfibios(Daszaketal2000).ElDRAde2003/05investigóelconocimientoactualdelriesgodeenfermedadesatravésdeuna revisión de la bibliografía y de consultas a expertos, llevando a cabo revisionesdetalladas por agentes infecciosos en las poblaciones de origen de ranas verdes, y laspoblaciones de destino de anfibios nativos; llevando a cabo evaluaciones de riesgos deenfermedades(Tabla1)eilustrandoguíasdemanejosparacadaagentepatógenoquefueraconsideradounriesgoeneldesplazamientoderanasverdeslibresdepoblacionesdeorigende Suecia, al lugar de liberación identificado en Inglaterra. La reintroducción apuntó arestablecer la población de ranas verdes en el Reino Unido, seguido de su extinción amediadosde1990(BuckleyandFoster2005).LosresultadosdelaDRAfueronconsiderados


264

comouncomponentedelcosto-beneficiodelanálisisdeestedesplazamientoantesquesellevaraacabo.Lareintroducciónderanasverdescomenzóen2005.En la revisión de las ranas verdes suecas y los anfibios nativos por agentes infecciosos,duranteelDRAde2003/05,lamayoríadeagentesinfecciososdetectadossepresentaronenlosanfibiosnativosyen lasranassuecas;yporconsiguiente,sedescartócomounriesgo.Losagentesinfecciososdetectadosenranasverdesperonoenanfibiosnativos,incluyeronhelmintos, protozoos opalíneos y parásitos parecidos a los tripanosomátidos. Sedetectaronhelmintosen los intestinosdesiete ranasverdes, losque fueron identificadoscomo nemátodos rhabditis (E Harris) y fueron considerados como no patogénicos a losanfibios.Seencontraronprotozoosenlosintestinosde29ranasverdes,ysuidentificaciónaniveldeespeciesnofueposibledebidoalaausenciadeexperiencia.Sellevóacabounaevaluación de riesgo de enfermedades en tripanosomátidos y en protozoos opalíneos,siendo ambos considerados como un riesgo bajo de causar enfermedades en anfibiosnativos.Nosehandetectadoningúntipodeagenteenasociaciónconenfermedadesenelsitiodereintroduccióndesde2005;sinembargo,hasidodifícildetectarenestoslugareslaenfermedad y muerte de los anfibios. A pesar que nuestro análisis de riesgo deenfermedades nodetectara ningúnparásito conun alto riesgode causar enfermedadenpoblaciones de anfibios nativos, no podemos descartar su presencia porque (i) labibliografía sobre parásitos y enfermedad en anfibios en Suecia era limitada, (ii) losnúmerosdemuestradelasranasverdesfueroninsuficientesparadetectaragentesdebajaprevalencia y (iii) no pudimos utilizar pruebas apropiadas para algunos parásitosdesconocidos e indetectados (presentado por Sainsbury et al). Además, hasta que lapoblaciónde ranas verdesenel sitiode reintroducciónhaya logradocapacidadde carga,puedehaberunaausenciadelosrequerimientosecológicosparaqueunparásitoprovoqueunaenfermedad(presentadoporSainsburyetal).De los agentes infecciosos que se detectaron en anfibios nativos, pero no en las ranasverdes por el DRA de 2003/05, no se pudieron identificar flagelos, ciliados y formas dequistesdeprotozoosaniveldeespecies,ylaextensióndeCandidakefyrenelpaleártico.Elranaviralnofueespecíficamentedefendido,yaquesesabíaqueestabapresenteenelReinoUnido,yelBbfuedetectadoenelReinoUnidoalmismotiempodelDRA. Nuestroanálisisdel riesgodeenfermedades, reconocióelBdyel ranaviral comounode losmásriesgosos de provocar enfermedades en las ranas verdes desplazadas, y elAmphibiocystidiumranaeconunriesgomedio (Tabla1). Nosehandetectado casosdeenfermedades asociados con estos agentes en el sitio de reintroducción, y tampoco larevisióndelBdyelranaviralhadetectadoestosagentesinsitu.EsposiblequesepresenteelBdyelranaviralperosinserdetectados,probablementeporquelosanimalesinfectadosmueren y son saqueados y por lo tanto, no se han encontrado. La presencia del Bd-asociado no detectado, o la enfermedad rana viral-asociada se da posiblemente (i)resultados positivos del estudio de anfibios nativos en otros sectores del Reino Unido(Cunningham andMinting 2008; ZSL/ Defra/ARG-UK 2011), (ii) los anfibios en el sitio dereintroducción pueden ser inmunológicamente nulos a estos agentes y por consiguiente,podríanserhastaahoraunaenfermedadepidémicanodetectada,y(iii)enelcasodelrana


265

viral,laenfermedadasociadaconesteagentehasidoreportadoenranasverdes(VerranaviralDRA).NohaybarrerasecológicasogeográficasevidentessobrelapropagacióndeBdoranaviralenellugardereintroducción,elcualimplicaquelapropagaciónnaturalocurriráyestosagentespermaneceráncomoamenazahacialasranasverdesreintroducidas.Tabla 1: Evaluación de riesgos para el desplazamiento de ranas verdes: patógenossignificativosyotrosidentificadosen2004.

Siguiendo el DRA, el manejo de los riesgos de enfermedades, y el post lanzamiento delprotocolodevigilanciadelasalud(DRM&PRHS)fueilustradoporlaZSLeInglaterranatural(NE), y las ranas verdes fueron trasladadas de Suecia al Reino Unido, con la primeraliberación en Julio de 2005, y las liberaciones posteriores cada Junio hasta e incluyendoJuniode2008.FueronliberadasenunsitioenNorfolk,elcualseráreferidocomositio1dereintroducción. Durante loscuatroaños,se importarondesdeSueciahuevosyranas (vertabla 3), y un total 3783 ranas verdes de clado en varias etapas de su vida (ver tabla 2)fueronliberadasenelsitio1.Tabla2:Liberaciónderanasverdes2005-8:SumariodenúmerosyetapasdevidaLiberaciónenestanques(nota-diferenciamínimadecantidadesimportadas) 2005 2006 2007 2008 TotalAdultos 23 25 17 25 90Juveniles 26 2 30 30 88Total(solopostmetamórfico)

49 27 47 55 178

larva 118 1607 802 18003 3605Huevos1 0 0 0 0 0Total(todoslosindivids.)

167 1634 127 1855 3783

Notas:1 Los huevos se importarondurante algunos años perono fueron liberados directamente en los estanques; fueron criados hasta que

eclosionaronodespuésantesdeserliberados.2En2007,seimportaron3000huevos,secriaronentanquesenunalocaciónsegura,enlamismaregiónqueellugardereintroducción,y

despuésfueronliberadoscomolarvas;sinembargo,hubouncrecimientodébilyunaltoniveldemortalidad,porloquesoloseliberaron

80larvas.

Pathogen Geographical DistributionMethod of

transmission/lifecycleInfective for other

species

Probability other species will

contact pathogen

Prevalence pathogen in translocated

animals

Chance establishment at release site

Pathogenicity for individual

Pathogenicity for target population

Pathogenicity for populations of other

speciesRanavirus USA, Canada, UK direct? probably high unknown medium High High high High

Chytrid fungiworldwide (Spain, UK, Germany in Europe direct? probably high est. 2% medium High High high HighDermocystidium sp USA, Italy direct? probably high unknown medium medium medium medium medium

Table 3. Disease risk assessment for translocation of pool frogs :significant and other pathogensProbability of establishment at release site Severity disease once established

Total Disease Risk


266

3En2008,seimportaron3000huevos,secriaronenelexterior,sobrevivierontodaslaslarvasperosoloseliberaron1800.Tabla 3: Cantidad de animales exportados desde Suecia (nota: al final no se liberarontodos-vermásarriba) 2005 2006 2007 2008 TotalAdultos 23 25 17 25 90Juveniles 26 2 30 30 88Total(solopostmetamórfico)

49 27 47 55 178

larva 118 1618 0 0 1736Huevos1 0 0 3000 3000 6000Total(todoslosindivids.)

167 1634 3047 3055

DesdelaúltimaliberacióndeSueciaen2008,lapoblaciónactualderanasverdesenelsitio1hamostradounadisminucióngradual,con61ranasadultasindividuales(34machosy27hembras)identificadosen2014.Sinembargo,indicadorespositivosparaelcrecimientodelapoblaciónincluyeelhechoqueseencontraronalasranasde13estanquesdiferentesalolargodelsitio,yhuboevidenciadereproducción.Enunesfuerzoporaumentarlapoblaciónde ranas verdes dentro del Reino Unido, se ha propuesto que los individuales de lapoblacióninglesaactualenelsitio1,elcualseráreferidocomositio2dereintroducción,elcualestáenlamismaregiónqueelsitio1.Elmétodosugeridoparaestedesplazamientoesvía"sitiodeinicio",dondesereúnenhuevosderanadelapoblaciónoriginal,ysecríanenun medio ambiente controlado y en un sitio separado, antes que los juveniles seanliberados en el lugar destinado (ver el documento de sitio de inicio, apéndice 1). Estémétodo fue utilizado previamente en un intento de apoyar y aumentar la población deranasverdesenelprimerositiodeliberación.El objetivo de este informe en investigar el riesgo de enfermedades asociadas con eldesplazamientonaturaleza-a-naturalezapropuestade la reintroducciónde ranasverdesaunsegundositiodentrodelReinoUnido (incluyendoelelementodesitiode inicio). EsteDRAcualitativo, continúaelmétododescritoporSainsburyetal (2012)yporSainsburyyVaughan-Higgins (2012). Este DRA ha sido ilustrado a través de revisiones literarias delestadoactualdelasenfermedadesdeanfibios,ambosenelReinoUnidoyanivelmundial;juntosconunaconsultaprofesionalyconlosresultadosdeltrabajodiariodevigilanciadesaluddelasranasverdes,yotrodepoblaciónanfibiaenSitio1,yelestadodeparásitosdeanfibiosyenfermedadesenSitio2.


267

1.1Objetivos1) Evaluarelpotencialparalaintroduccióndeagentesinfecciososdesconocidosaldestino

medio ambiental, particularmente aquellos que podrían tener efectos nocivos enpoblacionesderesidentessilvestres,y/oaldestinomedioambiental;

2) Analizar el potencial para la intensificación artificial de enfermedades endémicas enanfibiosenellugardeliberación,porlaintroduccióndenuevosportadores.

3) Determinar los riegos de desplazamiento de ranas verdes presentadas por agentesinfecciososenanfibiosenellugardeliberación,ymejorarledondeseaposible.

4) Analizar y proponer mitigación contra los riesgos de enfermedad de parásitos quepueden portar las ranas verdes durante el camino de desplazamiento, que durantemomentosdeestréspuedenprovocarenfermedadclínica.

5) Garantizar que el desplazamiento tiene efectos mínimos en el bienestar de ranasverdesyotrosanimales.

6) Evaluarel riesgodeenfermedaddeagentesno infecciosos,presentadosenel sitiodeinicio o lugar de liberación, que puedan afectar negativamente a las ranas verdesdesplazas.

7) Considerartodoslosriesgoszoonóticosquepudieranserrelevantesalasaludhumanaduranteelcaminodedesplazamiento.

8) Garantizarque las ranas verdesdesplazadasestánenbuena salud, conelobjetivodemejorar el éxito del desplazamiento a través de (i) buenas prácticas de cría,bioseguridad en los lugares del sitio de inicio, ymonitoreo de salud, y (ii)mitigar lasconsecuenciaspotencialesnegativasdelosriesgosidentificadosporlaDRAenlasranas;

9) Recopilarmayorinformaciónenlosriesgosidentificadosatravésdevigilanciadesaludpreypostliberación,parainformaryrevisarelDRAcontinuamente;

10) Conservar la faunaparasitaria comensal y la flora de ranas verdes desplazadas; y porconsiguiente, mejorar la biodiversidad del medio ambiente destinado, y permitir eldesarrollo de las respuestas apropiadas de los portadores inmunes previo a laexposiciónpotencialdelasranasaparásitossimilaresenelnuevositio;

11) Detectar riesgos de enfermedades desconocidos o no identificados, que podríanvolverseevidentesduranteeldesplazamiento,atravésdelaincidenciadeenfermedad,ydedesarrollar una inversiónenel seguimientoposterior a la liberaciónmedianteelseguimientos de datos demográficos y de salud para obtener información en (i) lareevaluacióndelriesgodeenfermedadesduranteladesplazamientoderanasverdes,(ii)dilucidar la interacciónentreenfermedadypoblaciónactivadeanfibiosen Inglaterra;

12) Monitorear el efecto de la reintroducción de ranas verdes en la salud de anfibiossimpátricosenellugardereintroducciónyenáreascircundantes.

1.2CambiosennuestroentendimientodelasenfermedadesdeanfibiosenelReinoUnidodesdeelúltimoDRA.Hay información disponible limitada sobre el estado actual de la distribución de hongosquitridios, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) y ranavirus (FV3 y cepas de CMTV) a lolargodelReinoUnido.Hayinclusomenorinformacióndisponibleparaotrospatógenosen


268

anfibios.Sinembargo,losanálisisderiesgosdeenfermedadparaestosagentesinfecciosos,hansidoactualizadosenbasea informaciónpublicadarecientemente,yquesedescribenmásadelanteenesteinforme.Continuando con la reintroducción de ranas verdes en el Reino Unido desde Suecia, secomenzóunavigilanciadesaludextensivadepost-liberación.1.3ResultadosdePRHSenSitio1desdeel2006La vigilancia de la salud post liberación, fue desarrollada en la reintroducción de ranasverdesyensudescendencia,yenanfibiossilvestresenellugardeliberaciónentre2006y2012;sinembargo,elmonitoreodesaluddelasranasverdessesuspendióen2010(perocomenzaremos otra vez si hay alguna evidencia de disminución del número de lapoblación).Elmonitoreoderanasysaposcomunesaumentóenel2010,2011,y2012conelpropósitodealcanzarelnúmerodestino(30)decadaespecie.Latabla4listaelnúmeroderanasverdesclínicamenteexaminadasentre2006y2012enellugardereintroducción.Laexaminacióndelasaludderanasverdesyanfibiossilvestressellevó a cabo en un intervalo de meses en el lugar de reintroducción entre Mayo ySeptiembre en el 2006 y 2007. En el 2008, las primeras examinaciones de anfibiossilvestres, se llevó a cabo enMarzo, y en Agosto no hubo examinaciones. Los anfibiossilvestres (ranas comunes, tritones crestados, y tritones comunes) fueron examinados enMayo,Julio,AgostoySeptiembreen2006y2007,yenMarzo,Mayo,JulioySeptiembreenel 2008.Desdeel 2009, lasexaminaciones se llevarona caboen tresespeciesmás saposcomunes;en2009sellevaronacaboexaminacionesenMarzo,MayoySeptiembre;en2010enMarzoySeptiembre;ydesdeahí,en2011y2012,lasexaminacionessellevaronacabosólo en Marzo. Entre paréntesis, el promedio y rango de los anfibios silvestres que seexaminaronanualmentefueelsiguiente:promediode25tritonescomunes(rangode0y62), promediode23 tritones crestados (rangode0 y42), promediode9 ranas comunes(rangode1a20),yunpromediode31saposcomunes(rangode29a34).Inmediatamentedespuésdelaexaminación,losanfibiosjuvenilesyadultosfuerondevueltosasusestanquesde origen. Continuando la examinación, las larvas son (i) re-liberadas en recintos pararenacuajos,o(ii)re-liberadasdirectamenteenunestanque.El tamañodemuestrade los anfibios silvestres y las ranas verdesque seexaminaron, seescogieronenbasealaproporcióndelapoblaciónpropensaaverseafectadaporunbrotedeenfermedades,ylaprobabilidaddedetectarindividuosenfermos.Laevaluaciónoriginalde riesgos de enfermedades sugirió que el Bd y el ranavirus fueron los agentes máspropensos a causar enfermedad en la población reintroducida de ranas verdes. En laenfermedadranaviralyenlaepidemiadequitridiomicosisquesereportóenEEUU,sehaconocido que la mortalidad excedió el 90% en los sitios afectados (Green, Converse ySchrader, 2002), probablemente dependiente en especies susceptibles (Blaustein et al2005;Brunneretal2005). Fue imposiblepredecir lasusceptibilidadde lasranasverdesbasadoencualquierevidenciaen2005,ylasinvestigacionessubsecuentessugirieronquelasusceptibilidadesvariabledentrodelasespecies(Padgett-FlohryHayes2011;Woodhamset al 2011), y entonces, se tomó una decisión para tratar de detectar un brote de


269

enfermedadafectandoel10%delapoblaciónporqueestegradodemortalidadpodríasersignificante para la viabilidad de la población. Con el fin de detectar una única ranaenfermaconel95%deconfianzaparaunaenfermedadqueprovocael10%demortalidaden una población de 250 ranas, se predice que 29 ranas requieren de un examen(DiGiacomo y Koepsell 1986), y por lo tanto, decidimos tratar de examinar al menos 29ranas verdes en cada visita. No tenemos información sobre el análisis de riesgo deenfermedades con el cual predecir el número de anfibios silvestres que requieran serexaminados, y probablemente la mayor amenaza de enfermedad a estas especies, fueplanteadoporagentesnodetectadosdeenfermedadconpatógenosdesconocidos; yporconsiguiente,enlaausenciadeunamejoreguía,escogimosexaminaraproximadamente30animalesdecadaespecieencadavisita.Paraelotoñodel2009,nuestrosresultadosindicaronquelareintroduccióndelapoblaciónderanasverdeserasaludabledespuésdesuliberación,ylosignosdereproducciónhabíansido detectados tan temprano cuando las ranas verdes liberadas en el 2006 habían sidoengendradas (Foster et al., en prep). Dado estos descubrimientos y restricciones derecursos, escogimos dedicar las actividades demonitoreo de salud a los anfibios nativos.Para fines de 2010, no se había detectado ninguna enfermedad preocupante en tritonescomunesoentritonescrestados;yporconsiguiente,enfocamoslasexaminacionesdesaluden ranas comunes y en sapos comunes, porque estas especies tienen una relaciónfilogenética cercanas con las ranas verdes, y por lo tanto son consideradas como máspropensas a contraer parásitos nuevos. Almismo tiempo, seguimos cuidadosamente losresultadosdelmonitoreode lapoblaciónquehabíansido llevadosacaboporFosteretal(enprep)endisposicióndealterarelenfoquedenuestrasupervisióndelasaludencasodequealgunadelaspoblacionesdeanfibiosdemuestreunadisminución.Tabla 4: Cantidad de ranas verdes examinadas clínicamente antes y después de lareintroducciónentre2006y2012

ExaminaciónderanasverdesadultasyjuvenilesantesdesureintroducciónenSueciayReino

Unido

Examinaciónderanasverdesdespuésdesureintroducción

2006 2007 2008 2006 2007 2008 2009 2010

2011

2012

27(incluyendo 2juveniles)

47(Incluyendo30juveniles)másaproximadamenteentre 2000y 4000

47(Incluyendo30juveniles) yaproximadamente3000huevos

47(incluyendo 22metamorfos)

30(incluyendo12juveniles)

55(incluyendo 1juvenil)

38(incluyendo 6juveniles)

1 1 1


270

huevosLa tabla5describe lasenfermedadesdetectadasen las ranasverdesyen lasespeciesdeanfibios silvestres entre 2006 y 2012 en el lugar de reintroducción. Se sospechó que lasheridas observadas en la lengua de 6 ranas verdes se asociaron con la alimentación depresas,porqueestasranasverdesfueronobservadascomiendolibélulasadultasprevioasucaptura. La siguiente bacteria fue criada en un cultivo puro: Lesiones cutáneas deBurkholderia cepacia por erythematous de dos ranas verdes antes de su liberación;Aeromonas hydrophila de una rana verde con una lesión cutáneamenor post-liberación;Pseudomonas fluorescens (0157557) por lesiones cutáneasmenores en tres ranas verdespost-liberación; Burkholderia cepacia de una úlcera superficial en un tritón crestado. Lasiguientebacteriafuecultivadacomocrecimientopredominante:Pasteurellaaerogenesdeúlceraspunteadasencontradaenunade lasranascomunesconestas lesionesyRalstoniapickettii (0041455) de una rana común macho con epidermis engrosada amarilla en elvientre y en las extremidadesmedias ocultas. Aparentemente, estos fueron los primerosaislamientosregistradosdeRalstoniapickettiiyBurkholderiacepaciadeanfibiossilvestresenelReinoUnido(yRalstoniapickettiitambiénfueaisladadetresranasverdesencultivosmezclados), pero ambas bacterias han sido ampliamente informadas por el Reino Unido(Muhdietal1996,Sousaetal.2000;Ryanetal.2006;Weidmannetal.2008,LaAgenciaMedioambiental 2002, Agencia de protección de salud 2008, 2009). En 2006 y 2007 loshisopos secos recolectados de todas las lesiones de todas las especies examinadas en ellugar de reintroducción, y examinadas por PCR por Batrachochytrium dendrobatidis (Bd)fueronnegativasparaloshongos.Desdeel2008loshisopossecosrecolectadosde lapiel inguinalyde laspatastraserasdetodaslasranasysapos(aquellosconysinlesiones)(entre2008y2009,18ranasverdesy5otrosanfibios,serecogieronmuestrasconunhisopoporBd,ytodosestosfueronademásnegativos)yporlesionesentritonesfueronnegativosporBdenPCR.PCRpararanavirusfuellevado a cabo con muestras de piel con hisopos de todos los animales con lesionescutáneas,examinadosenellugardereintroduccióndesdeel2011ynosedetectaronvirus.Las interrupciones de las úlceras descritas en dos ranas comunes fueron consistentes enaparienciaconlainfeccióndeAmphibiocystidiumranae,peroestehongonofuedetectado.Sedetectóunparásitoúnicoenunadedosranascomunes,sinsignosdeenfermedad,yunodeestosparásitosfueidentificadocomoHelobdellastagnali.


271

Tabla5:Lacantidaddecasosdeenfermedadesdetectadasdurantelaexaminaciónclínicade ranas verdes y anfibiosnativosexaminadosenel lugarde reintroducción (Todos losdatosrecopiladoscombinadosentre2006y2012).Descubrimientosclínicos Tritón

comúnTritóncrestad

o

Ranaverde Ranacomún

Sapocomún

Enfermedadesinfecciosas oinfeccionessospechosas

Eritemadelapiel 2 3 2 Ulceraciónsuperficial de lapiel

1 1 1 1

Otras lesionescutáneasmenores

3 2 20 3 3

Múltiples úlceraspunteadas en eldorso

2

Epidermis espesaamarilla en elvientre y patastraserasmedias

2

Inflamación de, ymovilidad excesivaen la articulaciónmandibular

1

Enfermedadesno infecciosasy lesionestraumáticas

Pérdida de unaparte de unaextremidad

4 1 3

Heridas levesmenoresenlapiel

4 2 5 2 2

Heridas rojizaspequeñas en lalengua(<1mm)

6

Trauma menor delamucosaoral

3

Enfermedadesdiversas

Condición corporalpobre, celomaflácido

2

N.B.Más de un descubrimiento clínico pudo haber sido registrado en un sólo animal; laubicacióndelaslesionesenelcuerpodelanimalfueronvariadassinoseindicaron;todoslosanimalesestabanactivosyalertas.Durante las visitas demonitoreoecológico y del salud al lugar, el personal revisaba cadaestanqueyalrededoresenellugardereintroducciónporanfibiosmuertos.


272

Latabla6muestrael resultadodeexaminacionespatológicasendosranasverdesqueseencontraronmuertas.Foster et al (en prep) utilizó registros de captura-marca-recaptura para mostrar que lapoblaciónderanasverdesenel lugardereintroducciónfueestableparael2012,conunapoblación máxima estimada de 7 adultos, y, de un punto bajo en 2009 fue posibleevidenciarelcrecimiento.Elproyectoaúnnodeberíaserconsideradounéxito.Tabla 6: Resultados de la examinación post-mortem para las ranas verdes que seencontraronmuertasenel lugarde lareintroduccióncomocomponentede lavigilanciadelasaludposterioralaliberación.Historia Edad Sexo Fecha en la

que seencontrómuerto

Descubrimientospatológicos

Encontrados enaguas pocoprofundas en elborde delestanque5

Adulto M 10 de Marzode2007

Se presentaron dos áreas deeritemasobreelaspectoventralenambos hombros, deaproximadamente 7mm dediámetro. El área central inguinaltambién tenía eritema. Lasheridas sin moretones en celoma,sugirieron una búsqueda postmortem. El corazón, el tractogastrointestinalmedio y caudal, elhígado y el bazo probablementehan sido removidos por uncarroñero. No se detectaron otrasanomalías.

Encontrados en lasuperficie de losestanques en ellugar dereintroducción

Adulto F 7deMarzode2010

Buena condición corporal condepósitos de grasa celómica;huevos presentados en el caudalcelómico, blanco, lana algodonadacomo crecimiento cubrió lasuperficie del cuerpo; hígadocongestionado, tractogastrointestinalyriñones,columnalumbar congestionada al nivel deluróstilo. Una mezcla decrecimiento moderado deAeromonas hydrophila/caviae fueaislado de la piel, de la cavidadoral, del corazón y de losintestinos, y la Ochrobacteriumantrhopi de la cavidad oral e


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intestinal.Nohayhongosaislados.PCR por hongos quitridios yranavirusnegativos.Pesocorporalde14g.

ElPRHSquesecomenzóenelSitio1nohadetectadoningúnagenteinfecciosoobrotedeenfermedades preocupantes, y la mayoría de las ranas verdes y anfibios silvestresmostraron signos de buena salud. Como se mencionó anteriormente, ni la Bd ni elranavirus han sido detectados en el Sitio 1, y ambos agentes presentaron una potencialamenazaparalasranasverdes.UnapequeñapoblaciónderanasverdespermaneceenelSitio y continúa la vigilancia de la salud. Se habría esperado que la población hubieracrecido,dado los recursosaparentementebuenos, a la capacidadde carga, yelproyectoaúnnosepuedeconsiderarunéxito.

2. Métodos

Seobtuvoelcaminodedesplazamiento.Seconsideraronlasbarrerasparalatransferenciade parásitos entre el origen y los sitios de destino. Consolidamos el conocimiento delestadoactualdeparásitosdelapoblaciónderanasverdesenelReinoUnidoatravésdeunanálisisdelosresultadosdelmuestreodevigilanciadesaludpostliberación,yelestudiodelareintroducciónenelSitio1,yvíabibliografía.Seactualizólarevisióndelabibliografíadeparásitosyagentesnoinfecciosos,llevadaacaboen2003-05porelprimerdesplazamiento.Si lasbarrerasestuvieranpresentes,planearíamosconsiderarelorigenyeldestinode lasamenazadatravésdeunanálisisderiesgodeenfermedades,utilizandoelmétododescritopor Sainsbury y Vaughan-Higgins (2012). Analizamos transporte, portadores, población yamenazaszoonóticascomoapropiadas.Una vez que se ha completado el análisis de riesgo de enfermedades, y asumiendo quealgunaformadedesplazamientoseconsideraviable,unprotocolodetalladodeDMRPRHSparamantener lasaludybienestarde lasranasverdesyotrosanimales,ymonitorear lasconsecuencias del desplazamiento, se deben tener en cuenta y ser aprobadas. Esteprotocolo incluye guías sobremanejo, cuarentena,métodos de examinación de la salud,opcionesterapéuticasymétodosdeexaminaciónpatológica.

3. Resultados

3.1CaminodedesplazamientoEl desplazamiento propuesto implica el sitio de inicio para que las ranas verdes seandesplazadas, utilizando técnicas similares a aquellas que se utilizaron en el 2013 (Baker,2014). Se tomarán los huevos del Sitio 1, entonces los renacuajos pueden crecer bajoprotección,condicionesdecautiverioenelSitio/s3. Lametamorfosis/ranitas resultantesseránliberadasdosotresmesesdespuésenelsitiosecundariodereintroducción(Sitio1),el cualestáen lamismaregiónqueel sitioprimario. El sitio2esdondeexistió laúltima


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poblaciónsilvestreconfirmadaderanasverdesdeCladenorteñasenelReinoUnido,antesdesuextinciónenlosaños90,ylareintroducciónsubsecuenteenelSitio1.Nohayregistrossobreenfermedadesdeanfibiosenelsitiodereintroducciónsecundaria,oencualquieradelasposiblessedesdesitiodeinicio.Paramásdetallessobreelprocesodelsitiodeinicio,porfavorveael informedelsitiodeinicio(Apéndice1).LossitiosactualesdelsitiodeiniciopropuestosestándetalladosenlaTabla7.Los huevos de rana van a eclosionar en contenedores de plástico con agua corrientecombinada agua de estanques del lugar de colección. A las 2 o 3 semanas de edad, losrenacuajos serán transferidos a estanques artificiales exteriores (dependiendo del lugar),conteniendolamismaaguaqueseutilizóparaloshuevos,peroademásdetenervegetaciónacuáticadelsitiodonante,proporcionandocoberturayalimento.Lasranitastransformadasserán liberadas en el Sitio 2. Las ubicaciones del sitio de inicio aún están por serdeterminadasypuedeincluirmásdeunlugar.Tabla7:Lugarespotencialesparaestanquesartificialesventajosos.Sitio Distancia* Comentario Lugar 1 x km Los estanques deben estar ubicados en el exterior,

posiblemente en un túnel poli vinílico. Este lugar aloja aves y mamíferos, pero no anfibios, reptiles o peces.

Lugar 2 x km Este zoológico no aloja a otros anfibios. Las opciones para el sitio de inicio dentro del zoológico incluyen un área con una mesa para preparar la comida y /o un jardín privado.

Lugar 3 x km El jardín privado de un tasador contratado será utilizado con bandejas plásticas cubiertas con tapas enmalladas.

Lugar 4 x km Esta área de pradera abierta al lado del segundo sitio de introducción propuesto es cercada de público y utilizará bandejas plásticas cubiertas con tapas enmalladas para el sitio de inicio.

*Distanciadelsitioprimariodereintroducción.

3.2 Definición y determinación de amenazas para translocaciones a la naturaleza enInglaterra

Conelfindedeterminarquegruposdeamenazassonimportantesparaundesplazamientoa la naturaleza, debemos entender el rol de las barreras geográficas y ecológicas en lapropagación de los anfibios y sus parásitos entre los 3 sitios; sitio 1, el sitio actual de lapoblaciónderanasverdes,ysitio2,elsegundositioparaeldesplazamientoysitio/s3,el


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sitio de inicio. Esto es porque las enfermedades que surgen como consecuencia de lainteracciónentreportadoresprimitivos yparásitos ajenos sonprobablementeunamayoramenaza para las poblaciones desplazadas y las poblaciones receptoras al destino(SainsburyyVaughan-Higgins2012).Dondenohaybarrerasecológicasogeográficasparaanfibios y para la propagación de parásitos de anfibios, las amenazas de interésprobablemente podrían ser limitadas a transporte, portadores, población y gruposzoonóticoscomolodefinióSainsburyyVaughan-Higgins(2012).Silasbarrerassecruzan,hayunpotencialparaelorigenydestinodelasamenazasqueprovocanlasenfermedades.La sección siguiente explorará la validez de evidencia para la existencia de barrerasecológicasygeográficasentrepoblacionesdeanfibiosenlossitios1,2y3.3.2.1Definiciónderiesgos Esprobablequeelriesgodeencontrarparásitosenlasranasverdes,encaminoaldestinode liberación, durante un desplazamiento en Inglaterra sea bajo; sin embargo, estodependedelametodologíaylasmedidasdebioseguridadenelprocedimientodelsitiodeinicio.Estosriesgosdetrasporte,puedenseragentesinfecciososonoinfecciosos.Lapoblaciónderiesgofuedefinidacomoagentesinfecciososynoinfecciosos,presentesenel origen y sitios de destino que potencialmente tienen un impacto en la cantidad depoblacióneneldestino.Los portadores de riesgos fueron definidos como aquellos organismos comensales quepodríanafectar lasaluddelasranasverdes,comoresultadodeloscambiosdelarelaciónhuésped-parásito-medioambiente, comoaumentar ladensidaddelhuéspedel cualactúacomoalgoquecausaestrés,encargadodereducirlacompetenciainmuneyeldesarrollodeenfermedad.Losriesgoszoonóticosfuerondefinidosconagentesinfecciosospotencialesderanasverdesquepodríangenerarunriesgozoonótico.AlrealizartranslocacionesalanaturalezadentrodeInglaterra,enteoríadeberíahaberunareducción considerableenel riesgodeenfermedades infecciosas cuando se compara condesplazamientos cautiverio-naturaleza o desplazamientos naturaleza-naturaleza a lo largodelafronterainternacional.Previamentesehanutilizadoestrategiasdetranslocacionesalanaturalezasimilaresalasqueseusanconlasculebraslisas(Coronellaaustriaca)(MastersySainsbury2011);estasculebraslisasfuerondesplazadasdeunossitiosenDorsetaotrossitiossecosdepáramosalsurdeInglaterra.3.3Investigacióndebarrerasgeográficasyecológicasentrelaspoblacionesdeanfibios.Puesto que las translocaciones propuestas implicarían el movimiento de ranas verdessalvajes entre tres ubicaciones, sólo algunos kilómetros de distancia entre ellos, laprobabilidaddequecualquierorigendeparásitos(porelcuallasranasdesplazadaspuedenfuncionar como portadoras), ser exóticos al destino, se presume que es bajo. A


276

continuacióndeesto,todoslosagentesinfecciososenelorigentambiénestaránpresenteseneldestino,particularmentedesdeque las ranasverdeshansidopresentadasel sitio1poruna cantidadde años, entonces la poblacióndeparásitos entre los sitios geográficospróximos,puedenserconsideradosadyacentes,dadoelmovimientolibredelosanfibiosenelReinoUnido.Sinlossistemasencursoactivosdevigilanciadesaludpararánidosyotrasfamiliasdeanfibios,nohayinformaciónsuficientedisponiblesobrequéparásitosalbergannaturalmentelosanfibiossilvestres,ysihaydiferenciasentrelaspoblacionesconrespectoa lacargaparasitariaosuscepas. Lasdificultadesparadeterminar lacomposiciónde losparásitos de ranas verdes silvestres están compuestas mayormente por la falta desensibilidadydepruebasdediagnósticoespecíficas;sinembargo,lasranasverdesyotrosanfibios residentes del sitio 1, han sido extensivamente examinados a lo largo de losintentos de reintroducción. Con el fin de investigar más a fondo las suposiciones enrelaciónalasbarrerasdecruce,seinvestigóenlabibliografíayseconsultóconexpertos.3.3.1DistribucióndeanfibiosalolargodeInglaterra,ecologíaycomportamiento.El ReinoUnido tiene siete especies nativas de anfibios, el clado de ranas verdes norteña(Pelophylax, originalmente llamada Rama lessonae), el sapo corredor (Epidalea,originalmentellamadoBufocalamita),eltritóncrestado(Trituruscristatus),elsapocomún(Bufobufo),el tritóncomún(Lossotriton,originalmente llamadoTriturusvulgaris), la ranacomún(Ranatemporaria),yeltritónpalmeado(Lissotriton,originalmentellamadoTriturushelveticus)(Bakeretal2011). Todas lasespeciesademásdel sapocorredoryel cladoderanasverdesnorteñas,tienenunaextensadistribuciónalolargodeInglaterra(Bakeretal2011).Además,existeunaespeciedetritóndesconocida(eltritónalpino,Triturusalpestris);tresespeciesderanasverdesodecobredesconocidas (ranaeuropea (Pelophylaxridibundus),clado de ranas verdes sureñas (Pelophylax lessonae) y la rana comestible (Pelophylaxesculentus);ycuatrootrasespeciesdeanfibiosdesconocida(sapobombina(Bombinaspp.),sapopartero(Alytesobstetricans), laranaafricanadeuñas(Xenopus laevis)y laranitadeSanAntonio(Hylaarborea).HaypocasbarrerasconocidasparalasespeciesdeanfibiosalolargodeInglaterra.Dadalaextensión de la naturaleza de la mayoría de los anfibios británicos, y el hecho que secongreguenenestanquespara reproducirse,hayque suponerquedonde laspoblacionescomparten los sitios para la reproducción, entonces hay una alta probabilidad detransmisióndeagentesinfecciosos. Lasranasysapossoncapacesdecolonizarestanquesdentrode1kmdesussitiosdereproducción,mientrasque los tritonespuedencolonizarsitioshasta500mt(Bakeretal2011). Para lamayoríade losanfibios,elloshabitanáreascercanasasu lugaroriginal (verTabla8);sinembargo,unpequeñonúmerode individuos(menosdel1%)viajaránmáslejos,hastaalgunoskilómetrosmáslejos(Bakeretal2011).


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Tabla8:Limitesdemigracióndeanfibiosydistanciaentreestanques(deBakeretal2011)LímitesdemigraciónydistanciaentreestanquesDistanciasuperiordemigracióndeespeciesDistanciamáximarecomendadaentreestanquesTritóncrestado1300m500mTritóncomún1000m500mSapocomún5000m1000mSapocorredor>2000m500mRanacomún2000m1000mRanaverdecentroeuropea1000m300mEl informedelesquemadeanfibiosyreptilesentre2007y2012(WilkinsonyArnell2013)encontróqueenInglaterracentral(incluyendoNorfolk),laocupacióntotaldelosestanquesporanfibioseradeun86%,conlarepresentacióndetodoslosanfibiossilvestres,apartedelareintroduccióndelaspoblacionesdelsapocorredorydelaranaverdecentroeuropea.Dadoslosresultadosdelosestudiosdetalladosmásarriba,laevidenciaparecemostrarquees poco probable que hayan mayores barreras ecológicas y/o geográficas entre laspoblacionesdeanfibiosysusparásitosenInglaterra;y,porlotanto,elorigenydestinodelosriesgosprobablementenoexistaeneldesplazamientodecortadistancia,sientoprevistaenelcasoactual. Sinembargo, laevidenciaeslimitadayelestadoactualdeenfermedadparalosanfibiosdelReinoUnidonoescompletamenteconocido,yporlotantolapresenciadeparásitosnuevosenalgunaspoblacionesnopuedeserdescontada.Lasranasverdesenel Sitio1 son recientemente reintroducidas yhanestadoen cuarentenaelmayor tiempoposible; y, por lo tanto,puedenestarpresentesagentes infecciososnuevosquehan sidoimportados con ellos desde Suecia. Cualquier agente nuevo presente no han causado laenfermedadenanfibiossilvestresenlamedidaquesomosconscientes,peroestaevidenciaesdifícildereunir(presentadoporSainsburyetal)ylosbrotesdeenfermedades,debidoalaintroduccióndeagentesinfecciosos,puedetomardécadasendesarrollarse(Sainsburyetal 2008). Nuestro entendimiento de la presencia de agentes nuevos y su patogenicidadmejorará una vez que la población de ranas verdes en el sitio 1, hayan alcanzado lacapacidaddecargaporquehabrámásoportunidadpara la transmisióndeparásitosentreranas verdes y anfibios silvestres y viceversa (presentadopor Sainsburyet al). Mientrastanto, la vigilancia de la salud post liberación para monitorear enfermedades, seráextremadamente importante detectar enfermedades emergentes en el sitio dereintroducciónexistente,despuésdecualquierdesplazamiento.

3.4 Listaderiesgosidentificados

Lossiguientesriesgosinfecciososfueronidentificadosparaseranalizados:• Riesgodelapoblación• RiesgodelapoblaciónRanavirus


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• Riesgo de la población Amphibiocystidium ranae (originalmente Dermocystidiumranae)yotrosparásitosmesomicetozoos

• RiesgodelapoblaciónRanidherpesvirus• RiesgodelosportadoresBacteria• Riesgo de los portadores y de la población: agentes infecciosos asociados con la

enfermedadprovocadoporlaaltadensidaddelmanejoderanasverdesparaelsitiodeinicio.

• Otrosagentesinfecciososdeposiblepreocupaciónfuturao Batrachochytriumsalamandrivorans

AcontinuaciónseresumeunAnálisisdetalladoderiesgodeenfermedadesparatodos losagentesmencionadosanteriormente,apartede losagentes infecciosos loscualespodríanprovocar enfermedades asociadas con un manejo intensivo. Estos agentes infecciosospuedenseragentespresentesenelmedioambientey/oportadoresporranasverdes. Seespera que estos provoquen enfermedades secundarias a entidades estresantes, yrepresenten un riesgo de enfermedades esporádicas dependientes del manejo. Por lotanto,laestimaciónderiesgoyelmanejoderiesgodescritoporlosportadoresderiesgo,seesperaquelabacteriacubraesteriesgoyquenosehayaredactadounDRAseparado.Además, consideramos lo agentes infecciosos potencialmente nuevos, los que puedenhaber sido introducidos con las ranas verdes desde Suecia al sitio de reintroducción 1, ypuedenhabersidotransferidosentresitiosconestedesplazamiento.Lostripanosomátidosfueron descartados como riesgo, porque una investigación en la red de Ciencia no pudodemostrarningúninformedelaenfermedadasociadaaesteparásito,ynohaymuestrasdelaenfermedadasociadasaellasyquehayansido informadasdelSitio1. Sinembargo, laenfermedad debido a los tripanosomátidos no puede ser completamente descartada,porquehasidodifícildetectarlaenfermedadylamuertedelasranasverdesenelSitio1dereintroducción.LosprotozoosopalíneosasimismonohansidodetectadosenasociaciónconlaenfermedadderanasverdesenelSitio1,yelriesgodeenfermedadasociadaconestosagentes se considera insignificante. A través de PRHSdiligentes y detallados, seguido deotros desplazamientos de ranas verdes, podemos continuar haciendo esfuerzos paradetectarsiestasenfermedadespuedanocurrirdebidoaestosagentesinfecciososnuevos.

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5. PatógenosindividualesdeDras.

5.1Riesgosdelapoblación:BatrachochytriumdendrobatidisJustificacióndeRiesgosBatrachochytrium dendrobatidis (de aquí en adelante conocido como Bd) ha sidoidentificadocomounfactorcausalenladisminuciónyextincióndenumerosaspoblacionesdeanfibiosanivelmundial(Bergeretal1998;Lipsetal2006;Chengetal2011;Heatwole2013). Clínicamente, los anfibios afectadosmuestran la hiperqueratosis de la piel con elcambiodepielenalgunasespecies(Bergeretal2005),ylaslarvaspuedendesarrollarpiezasbucales deformes. La capacidad de osmorregulación de la epidermis se interrumpe,provocandountrastornohidroelectrolíticoydeshidratación,seguidodelamuerte(Voylesetal2009;Marcumetal2010).Lapatogénesisvaríaenambasespecies,conalgunosquesonasintomáticamente portadores (Walker et al 2010) y además con la virulencia de laaislamiento(Farreretal2011).Alafecha,lainfecciónBdhasidoinformadaen53especiesdeanfibiosenEuropa(www.bd-maps.eu).ElBdsedetectóporprimeravezenanfibiosdelReinoUnidoen2004,enlaintroduccióndeespeciesdeLitobatescatesbeianusdesconocidas(ranatorodeNorteamérica),ylasmuertessubsecuentesporquitridiomicosishansidovistasensaposcomunesenlanaturaleza,ylossapos corredores (Epidalea calamita) reproducidos para la reintroducción (Garner et al2009;Smith2014).EnAlemanialaranacomestible,génerodelasPelophylax,fuetambiénafectadoporlaquitridiomicosis(Mutschmannetal2007).Las encuestas a nivel nacional para Bd, llevadas a cabo por el Instituto de Zoología,estudiandoun totalde8882anfibiosen2008 (125)yen2011 (122sitios)mostraronunaextensióngeneralizadaperoirregulardeBdsincambiosalolargodeltiempo(Smith,2014).Laencuestatambiénrevelóquediferentesespeciesdeanfibiostienendiferentesrangosdeprevalencia,yestofueademásconfundidoporlaépocadelaño.LaprevalenciadeBdfuefuertementeasociadaconlepresenciadeespeciesnonativas,entoncessepredijoqueenlossitiosdereintroducciónderanasverdes,dondenosehabíanvistoespeciesnonativas,elriesgo de exposición de Bd debería ser bajo. Sin embargo, los clados de ranas verdesjuvenilesnonativas sureñas, fueronpositivamenteasociados con infecciones (aunque losadultos no lo fueron), sugiriendo que otros miembros de este género pueden ser


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igualmente vulnerables a la infección (Pelophylax ridibundus, la rana europea no nativa,también se probó positivo en algunos sitios) (Smith, 2014). En el 2014, Smith tambiénobservó infecciones experimentales las que sugirieron que el Bd era poco probable queprovoca una alta mortalidad en los tritones palmeados, en tritones comunes y ranascomunes,peroquepodríatenerunefectonegativoacortoplazoenpoblacionesdesaposcomunes,dondeseencontrabanlosindividualesmásvulnerables,deaquellosexaminados,alainfecciónconBd.ElcladoderanasverdesnorteñasenlaúnicaespeciesilvestreenelReinoUnidoqueseconozcaquenohayasidoinfectadaconBd;sinembargo,estasespeciesnofueronexaminadasduranteestasencuestas.Las imágenesAyBmuestran ladistribuciónde lossitiosdepruebay los resultadosde laprueba de Bb en 2008 y 2011. No se encontraron anfibios con Bd positivo en AngliaOrientaldurantelasencuestas,sugiriendoquelaprevalenciadeestasáreasesmuybaja.Antesdelaprimerareintroducciónderanasverdesen2004,seexaminaronalasespeciessiguientesenelsitiodereintroducción(sitio1)paraversiteníanBdusandoPCR:12adultosdetritonescomunesy24larvas,12adultosdetritonescrestadosy49larvas;6adultosderanascomunesy68larvas;y159larvasdesaposcomunes. Enadición,seexaminaron14ranas toros adultas de otro sitio de Sudeste de Inglaterra, y 5 adultos, 29 juveniles y 72larvasderanasverdesdeSuecia. ElPCRparadetectarelhongoquítrido fuenegativoentodas lasespeciesdeanfibios silvestresdelReinoUnidoque fueronexaminadas, yen lasranas verdes de Suecia. Dos de las 14 ranas toros tuvieron resultados positivos al hongoquítridoporPCR.LasranastorosconBdpositivo,fueronunapreocupaciónparticular,porqueestasespeciessonextremadamenteexitosasalcolonizarterrenoseingerirotrosanfibios(Adams2002),yhansidoimplicadoscomoportadoresdequítrido,responsablesdesupropagaciónenvariospaíses(Hanselmannetal2004,Daszaketal2004).Sinembargo,secreequelasranastorohansidoexitosamenteerradicadasdeInglaterra.Se han realizadomuestras en curso,muestreo y pruebas para detectar Bd a lo largo delperíodo de reintroducción de ranas verdes, ambas en ranas verdes antes de habersedesplazado,yenanfibios localesenelsitiode liberación;nosehanencontradomuestrasactualesdetenerBdpositivoenPCRparaanfibiossilvestresoranasverdes.En2006y2007lacoleccióndehisopossecosdetodaslaslesionesdetodaslasespeciesexaminadasenelsitiode reintroducción, y examinadasporPCRparadetectarBd, fueronnegativasparaelhongo. A partir del 2008, los hisopos secos recolectados de la piel inguinal de todas lasranasysapos(aquellosconysinlesiones)ydelesionestritoneserannegativasparaelBdenPCR.Pararesumir,laextensióndelBdenelReinoUnidoescapazdeinfectarunagrancantidaddeespeciesdeanfibiosincluyendolasranasverdes.Lasranasverdes,originalesdeSuecia,ysubsecuentementeexaminadasenelprimersitiodereintroducción,nohanprobadoserpositivas,ytampocosecuentaconanfibiossilvestresenestesitiodeliberación.Evidencia


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considerabledeestarevisiónparaBdenelprimersitiodereintroducción,sugierequelasranas verdes desplazadas al segundo sitio serán inmunológicamente nulas al hongo. LasusceptibilidaddelasranasenelgéneroPelophylaxalaenfermedaddeBd,noseentiendecompletamente, y se sabe que ocurren diferencias en la susceptibilidad de las especies(Stockwelletal2010),perolaenfermedadinducidaporBdnopuedeserdescontada.EvaluacióndeexposiciónLasranasverdesdesplazadasalsitio2,seránexpuestasaBdatravésdelcontactodirectoconlosanfibiosinfectadosy/oconlosparásitosqueseencuentranenalagua.Existeunabaja probabilidad de esta exposición a corto plazo (diez años) porque el Bd no ha sidodetectado en el sitio 2 de reintroducción, y no se ha encontrado en ubicacionesgeográficamentecercanas.Alargoplazo,elriesgodeexposiciónesaltoyaquehayunaaltaprobabilidad de la propagación del Bd en el sitio de reintroducción. Las imágenes A y BmuestranladistribucióndelBdenanfibiosenelReinoUnido(Smith,2014),ylaImagenCmuestraladistribuciónenEuropayenReinoUnido(Smith,2014).La probabilidad de diseminación a través del desplazamiento de ranas verdes es alta,debido a la resistencia y movilidad natural de la zoospora de Bd en medio ambientesacuáticos; las zoosporasdeBdnadan librementeenel agua (Jameset al 2006), comoenestanquesenlossitios1y2.Engeneral,laprobabilidaddeexposiciónydiseminaciónenuncortoplazoesbaja,yaumentaalargoplazo.


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ImagenA.Distribuciónde lossitiosexaminadosenelReinoUnidoen2008(n=125).Sitiosde loscuales al menos 26 muestras fueron recolectadas en primavera y verano, y se representan portriángulos (n = 69). Sitios donde solo se recolectaron pocasmuestras, y están representadas porcírculos (n = 56). En ambos casos, los sitios positivos (n = 25) se muestran en rojo, y los sitiosnegativos(n=100)semuestranenazul.(Smith,2014).


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ImagenB.Distribuciónde lossitiosexaminadosenelReinoUnidoen2011(n=122).Sitiosde loscualesalmenosserecolectaron26muestrasyserepresentanportriángulos(n=91).Sitiosdondesoloserecolectaronpocasmuestras,yestánrepresentadasporcírculos (n=31).Enamboscasos,lossitiospositivos(n=14)semuestranenrojo,ylossitiosnegativos(n=108)semuestranenazul.(Smith,2014).


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ImagenC.LadistribucióndeBdenEuropa(deSmith2014)EvaluacióndeconsecuenciaLaprobabilidaddeenfermedadenranasverdes,reintroducidasenelsitio2enuncorto(10años)ylargoplazoesenpromedio,porquelasusceptibilidaddelasranasverdesesincierta.LamuertetotalyloseventosdeextinciónlocalhansidoprovocadosporBd,yteóricamenteeste hongo puede ser capaz de provocar una epidemia en ranas verdes en el sitio deliberaciónysercapazdeprovocarunfalloeneldesplazamiento.Eldesplazamientoderanasverdesalsitiopuedealterarladinámicadeportador-patógeno,yconduciraunbrotedeenfermedaddeBdenanfibiossilvestresinsitu,particularmentealossapossilvestresmásvulnerables.Laprobabilidaddeestoscambiosportador-patógenocomo consecuencia de este desplazamiento específico, llevando a consecuencias medioambientalesbiológicas,seconsideramuybajo.


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EstimaciónderiesgosElriesgoestimadodeexposicióndelasranasverdesdesplazadasesbajoenelcortoplazoyalto en un largo plazo, el riesgo de las consecuencias de las enfermedades se considerapromedio. El riesgo general de enfermedad y el fallo del desplazamiento se consideranpromedio.ManejoderiesgosCon el propósito de minimizar el riesgo del desplazamiento del Bd al nuevo sitio deliberación,odeexponeralasranasverdesdesplazadasaestehongo,sepuedecolocarunacerca de cuarentena alrededor del sitio de reintroducción, e implementar medidas debioseguridadporlosprimerosañosdelareintroducción,yrevisarlosdespuésdedosaños.La prueba de los anfibios en el sitio de liberación, y las ranas verdes destinadas aldesplazamientoporBd,aumentaránuestroentendimientodelriesgodeenfermedadesdeesteagente.Estapruebatambiénsepuedellevaracaboenjuvenilesyenelaguaelsitiodeinicio, porque puede permitir la detección temprana de Bd y facilitar un tratamientopreventivoparaelBdsiesqueelhongocausaraalgunaenfermedad.Las muestras de piel por qPCR detecta la presencia de Bd (Hyatt et al 2007), y el PCRpositivo de anfibios con evidencia histopatológica de Bd y/o signos de enfermedadconfirmanlainfeccióny/oenfermedad.Labioseguridadestrictaylasmedidasdecuarentenadeberíaserllevadaacaboenelsitiodeinicio(Sitio3),paraasegurarquelainfeccióndeanfibiossilvestresenestesitioositiosen losalrededoresnosepropaguea las ranitasverdes,yque la infecciónsepropagueelsitiodereintroducción.Sedebeprocurarproporcionaradecuadamenteloscuartelesdelasranitas,yminimizartodoslosagentesdeestrésquepudierancausarlainmunosupresión,ypor consiguiente, facilitar la precipitación de la enfermedad. Las poblaciones de ranasverdesyotrosanfibiosenel sitiode liberacióndebensometersemonitoreode la saludalargo plazo y amonitoreos en la población, y toda evidencia de disminución debería serinvestigadaprontamente.ReferenciasdeBd:

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5.2Riesgosdelapoblación:RanavirusJustificaciónderiesgosLos ranavirus son virus de ADN doble trenzado de la familia Iridovirus con distribuciónglobal (Schloegel et al 2010). Una cantidad de ranavirus es capaz de infectar anfibios,incluyendo Virus de la rana tipo 3 (FV3), el virus de la salamandra tigre o Ambystomatigrinum(ATV)ymuchosotros.Elranavirushasidoaisladoenasociaciónconuneventodemortalidad masivo de vida libre, Pelophylax spp. (Ariel et al 2009) en Dinamarca. Unterratenientereportó1200ranascomestibles (Pelophylaxesculentus), lascualesencontrómuerta sobre un fin de semana desde su estanque con casi ninguna rana viva restantedespuésde lamuertemasiva (Arieletal2009). Estas ranas seencontraronmuertasa lolargo del borde del estanque, mostrando ningún síntoma clínico obvio. Los peces einvertebradosdeláreasevieronsaludables,ynohahabidocambiosrecientesenelmanejodelestanque;sinembargo,lastemperaturaseraninusualmentealtasantesyduranteestebrote. Se examinaron dos especímenes de este evento de mortalidad masivo, y lasmuestras de ambos produjeron ranavirus aislados. La experimentaciónmedio ambientalfue negativa de contaminantes, aceites y pesticidas. Las altas densidades de la rana senotaron en el estanque antes de este brote, la temperatura (aire y agua) era alta y sinsombradisponibleparalasranas.Estosfactorespuedenactuarcomoagentesestresantesenestecaso,posibilitandounaprecipitaciónypropagaciónde laenfermedadmásrápido.LasespeciesPelophylaxparecenservulnerablesa laenfermedaddel ranavirus (Fijanetal1991,Arieletal2009,Kiketal2011).Elranavirusqueinfectaalosanfibioseuropeossongeneralmente en el grupo FV3 (Hyatt et al 2000; Balseiro et al 2009), sin embargo espreocupante, se detectó una nueva y reciente especie, comúnmente conocida como virussapopartero (CMTV),el cual seoriginóenEspaña (Balseiroetal2009)yquepudohaberbrotadoenHolandayasuvezserresponsabledelamuertemasivadelosPelophylaxspp.,incluyendo las ranasverdes (Kiketal2011), sugiriendo lapropagacióndeesta cepa. Eneste brote, se encontraron más de 1000 metamorfos incompletos y ranas comestibles yranasverdesmuertas;algunasdelascualesmostraronhemorragiacutáneayedemas(Kiket al 2011). De ocho ranas adultas examinadas post mortem, todas tenían ranaviruspositivoenPCR(yBdnegativo),yCMTVfueelranavirusinvolucradomásprobable(Kiketal2011). LacomunidadanfibiacolapsaenmúltiplesespeciesdebidoaqueelCMTVhasidorecientemente informado en España (Price et al 2014); este ranavirus aún no se haencontradoenelReinoUnido.EnelReinoUnido, laenfermedadrelacionadaal ranavirus,provocódisminuciones localesenranascomunes(Ranatemporaria)durante1980s(Teacheretal2010),ensaposcomunes(Bufobufo),yentritonescomunes(Lissotritonvulgaris)(Cunninghametal1996;Hyattetal2000;DuffusyCunningham2010;Teacheretal2010).EnEuropa,elranavirusparecesermenos específico en el portador que en otras áreas delmundo (Cunninghamet al 2007;Balseiroetal2010).EnlaimagenD,semuestraladistribucióndelranavirusenelReinoUnidohastael2010(lafechadisponiblemásreciente).


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ImagenD:Distribucióndelranavirusen1992,1997,2002y2010.Lospuntosrojosindicanladetecciónderanaviruspositiva;lospuntosazulesindicanlaexaminacióndondenoseencontróenranavirus.Antes de la reintroducción inicial de las ranas verdes, como parte del DRA original de2003/05,laexaminaciónparaelranavirussellevabaacaboenranasverdessuecas(PCRycultivo viral) y enespeciesdel ReinoUnidoenel sitio de reintroducción (Sitio 1) (Cultivoviral). Todas lasmuestrasdelosanfibiossilvestresmostraronsernegativos;sinembargo,se observó un efecto citopático limitado en cultivos inoculados con varias muestras deranastoro,peronoseobservóningúnvirusdespuésdelaexaminaciónmicroscópicadeloscultivos concentrados, y el efecto citopático no fue visto enpasajes subsecuentes.No sedetectóelranavirusenranasverdessuecasniporpruebasdePCRocultivos.Sinembargo,elnúmerode ranasverdesque seobtienenporelmuestreodeSuecia fuemuypequeño(n=32 por PCR) (debido a la naturaleza invasiva y letal de las muestras que estabandisponibles en ese momento), y por lo tanto, el nivel de confidencialidad en estosresultadosfuebajo.ParalospropósitosdelDRAinicial,sesupusoqueelranavirusestabapresenteenel sitiode liberación (Sitio1), oen los alrededoresdeeste sitio; yaquea lolargo del ReinoUnido, se pensaba que el ranavirus era endémico, o que en un futuro losería.


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Previo a la reintroducción en el sitio 1, se examinaron dos tritones comunes; estasmostraron inclusiones intraeritrocitarias rojizas, similares a las que se observaron en lasinfecciones de ranavirus en otras especies de anfibios (Gray et al 2009). El PCR pararanavirussellevóacaboconmuestrasdepieldetodoslosanimalesconlesionescutáneas,lasqueseexaminaronenel sitiodereintroduccióndesdeel2011enadelanteduranteelPRHS,ynosedetectóningúnvirus.Desde que los ranavirus son endémicos en el Reino Unido, son patógenos en el géneroPelophylax y está asociado con la mortalidadmasiva, fueron considerados un riego a lapoblación.EvaluacióndeexposiciónEl ranavirus se puede trasmitir por contacto directo e indirecto, y posiblemente portransmisiónvertical(Duffusetal2008).Lasranasverdesdesplazadasalsitio2,podríanserexpuestasaBdatravésdelcontactodirectoconlosanfibiosinfectadosy/oconlosparásitosqueseencuentranenalagua.Existeunamedianaprobabilidaddeestaexposiciónacortoplazo(diezaños),porquelosranavirusnohansidodetectadosenelsitiodereintroducción,pero han sido en ubicaciones geográficamente cercanas. A largo plazo, el riesgo deexposicióneinfecciónesalto,yaquehayunaaltaprobabilidaddepropagaciónderanavirusenelsitiodereintroducción,siesqueyanoestápresente.Laprobabilidaddediseminaciónatravésderanasverdesdesplazadasesbajaenuncortoplazo,desdequelapoblaciónderanasverdesenelsitio1nuncahandemostradoserpositivasaestosvirus,peroenunlargoplazo(másde10años)esaltoporquelosranavirussonmáspropensosapropagarsealSitio2. En general, la probabilidadde exposición y diseminación enun corto plazo es baja, yaumentaalargoplazo.EvaluacióndeconsecuenciaLaprobabilidaddeenfermedadenranasverdesreintroducidasenelsitio2enuncorto(10años) y largo plazo esmedia, porque la bibliografía sugiere que la susceptibilidad de lasranas verdes a los ranaviruses alta. Lasmuertesmasivashan sidoasociadas con variosranavirus en la especie Pelophylax. (Ariel et al 2009; Fijan et al 1991, Kik et al 2011), yteóricamente estos virus podrían ser capaces de provocar una epidemia en el sitio deliberaciónyunfalloeneldesplazamiento.Eldesplazamientoderanasverdesalsitiopuedealterarladinámicadeportador-patógeno,yconduciraunbrotedeenfermedadranaviralenanfibiossilvestresinsitu;sinembargo,laprobabilidad de estos cambios portador-patógeno, que conducen a importantesconsecuenciasambientalesobiológicasseconsideramuybaja,porquelosranavirussehanextendidoenInglaterra.EstimaciónderiesgosLaprobabilidaddeexposición,infecciónydiseminaciónesbajaenuncortoplazoyaltaenunlargoplazo,ylaprobabilidaddefallarenlosdesplazamientosesmediaenuncortoplazo


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yaltaenunlargoplazo. Elriesgoengeneraldelaenfermedadporranavirusyelfallodereintroducciónesalto.ManejoderiesgosLaenfermedadranaviralesdiagnosticadadespuésdelamuerteporunaexaminaciónpostmórtem,ylapresenciadelesiones(hemorragiasyulcerasenlapiel)juntoconPCRpositivo,inmunihistoquímica (IHC) de muestras post mórtem, aislamiento de virus o microscopíaelectrónica. En losanfibiosvivos, lasmuestrasdepiel sepuedentomarporPCR,y sehaintentado la serología; sinembargo, los resultadosdeestosmétodosnoson fiables,y lasmuestras invasivas como los cortadores, pueden dar resultados más exactos (Grat et al2009),perolaexaminacióndemuestrasderiñonesehígadoporPCR,eselmétodoqueserecomiendacuandoseaposible(SPricepersonalcommunication;AACunninghampersonalcommunication).Conelpropósitodeminimizarel riesgodeexponera las ranasverdesdesplazadasaestevirushastaquelapoblacióntengaunaoportunidadparaestablecerse,sepuedecolocarunacerca de cuarentena alrededor del sitio de reintroducción, e implementar medidas debioseguridadporlosprimerosañosdelareintroducción,yrevisarlosdespuésdedosotresaños. El estudio de los anfibios en el sitio de liberación y en el Sitio 3 (o áreas en losalrededores)porranavirus,sepuedellevaracaboantesquecomienceeldesplazamiento,yladecisiónsobrecómoprocederconlareintroducciónenbaseaesto.Esteestudiotambiénsepuedellevaracaboeljuvenilesyenelaguaenelsitiodeinicio,porquepuedepermitirunadeteccióntempranayelcesedelareintroducciónsíqueessedetectara.Silosanfibiosdel Sitio 3 son positivos, se debería escoger un nuevo sitio de inicio. Una estrategiaalternativa para reducir el riesgo de contraer la enfermedad del ranavirus puede serliberadaalasranasverdesensitiosinanfibiosexistentes.Labioseguridadestrictaylasmedidasdecuarentenadeberíaserllevadaacaboenelsitiodeinicio(Sitio3),paraasegurarquelainfecciónpotencialdeanfibiossilvestresenestesitioo sitios en los alrededores no se propague a las ranitas verdes, y que la infección sepropague el sitio de reintroducción. Se debe procurar proporcionar adecuadamente loscuarteles de las ranitas, yminimizar todos los agentes de estrés que pudieran causar lainmunosupresión, y por consiguiente, facilitar la precipitación de la enfermedad. Laspoblaciones de ranas verdes y otros anfibios en el sitio de liberación deben someterse amonitoreos de salud a largo plazo y amonitoreos en la población, y toda evidencia dedisminucióndeberíaserinvestigadaprontamente.ReferenciasderanavirusAriel,E.,Kielgast,J.,Svart,H.E.,Larsen,K.,Tapiovaara,H.,Jensen,B.B.andHolopainen,R.(2009). Ranavirus inwild edible frogsPelophylax kl. esculentus inDenmark. DiseasesofAquaticOrganisms85:7-14.Balseiro,A.,Dalton,K.P.,delCerro,A.,Marquez,I.,Cunningham,A.A.,Parra,F.,Prieto,J.M., Casais, R. (2009). Pathology, isolation andmolecular characterisation of a ranavirus


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5.3Riesgosdelapoblación:Amphibiocystidiumranae(originalmentellamadoDermocystidiumranae)yotrosparásitosmesomicetozoos

1. Justificacióndelosriesgos

Amphibiocystidium ranae (originalmente llamado Dermocystidium ranae) fue reportadoentre 1999 y 2000 en una población de ranas verdes del complejo Rana esculenta,incluyendo la Rana lessonae parental (ahora llamada Pelophylax lessonae, rana verdecentroeuropea) y sus crías híbridas Rana esculenta en Italia (Pascolini et al 2003). Esteestudioviomásdel50%dedisminuciónenlapoblacióndePelophylaxlessonaeen1999,yencontróquistesdérmicos(elevacioneshemisféricasentre3-5mmendiámetroenelestratoesponjoso, algunos de los cuales se ulceraron) infectados con mesomicetozoos,Dermocystidiumrana,particularmenteenelvientredeestasranas.En1999,seinfectaronel45.5% de las ranas (n=22),mientras que en el año 2000, se infectó el 5.4% de las ranas(n=21).Estaprevalencia fuemásaltapara laRanaesculenta, lacualmostróunrangodel14.3% de infección en 1999 (n=21), y un 17.2% en el año 2000 (n=29); esta poblaciónpermanece estable. Sin embargo, estas ranas fueron, de lo contrario, aparentementesaludables,ypudieronalbergar la infecciónsinefectosadversosevidentes,ynosesabesiestainfecciónfueresponsableporladisminucióndelapoblación,sinembargoestohasidopropuesto(DiRosaandSimoncelli2007).Algunosmesomicetozoos, incluyendo aquellos del orden Ichthyophonae y Dermocystida,sonpatógenosenpeces,yenalgunoscasosviscerales,asícomolaslesionescutáneassonposibles (Rowley et al 2013). La taxonomía, la filogenia y la clasificación de las especiesAmphibiocystidiumfueinvestigadomásafondoydilucidadoporPereiraetal(2005).En 2014, Startk y Guex encontraron Amphibiocystidium ranae en tritones comunes(Lissotritonvulgaris),Pelophylaxlessonaeyranascomunes(Ranatemporaria)enHolanda.ElAmphibiocystidium,elcualprovocalesionesenlapiel,hígadoyderiñónenanfibios,juntocon parásitos Dermocystidium similares e Ichtyophonus (del cuál el último afecta a lospeces), tieneunamplio rangodeportadoresydeesporasmóvilesy resistentes, lascualespuedensertransmitidasporfómite.En 2010, Gonzalez-Hernandez et al, reportaron una infección nueva con un parasitoDermocystidium, relacionado con el Amphibiocystidium ranae en varios sitios dereproducción de tritones palmeados (Lissotriton helveticus) en Larzac, Francia. Estainfeccióndemostró laprogresiónde lesionescutáneasaextensivashemorragiasyúlcerascutáneas, el cual fue el primer informe de tal severa enfermedad por la infección porparásitosmesomicetozoos.LostritonespalmeadosdelaIsladeRumenEscocia,sonlasúnicasespeciesdeanfibiosenlaisla.Duranteelaño2000,senotaronlesionesenestostritones,yenel2008,seencontróun 63% de los tritones infectados con la especie Amphibiocystidium; todos los tritonesinfectadosteníanquistesvisibles(Wood,2014personalcommunication;Anderson2014).


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En síntesis, hay algo de evidencia en que los parásitos mesomicetozoos son capaces deprovocarconsecuenciasanivelpoblacional.Esteesciertamenteelcasoparaotrostaxones(como lospeces)yesprobablequeseaposibleparapatógenossimilaresenanfibios. Nohay información disponible para determinar si este patógeno es endémico en anfibiosbritánicos; sin embargo, se ha descubierto y asociado con la disminución del tritónpalmeado en Escocia, por lo tanto, se debería asumir que este patógeno tambiénpodríaestar presente el poblaciones de anfibios ingleses. Durante la reintroducción original deranasverdesalReinoUnidodesdeSuecia,noseencontróesteparásitoenlasranasverdessuecas. Se encontraron algunas úlceras en una de las ranas comunes en el sitio dereintroducción en 2008; sin embargo, esta rana también tenía una sanguijuela, y uncrecimiento de Pasteurella aerogenes predominante fue aislado de esta úlcera, el cualprobósernegativoparalaPCRdeBd.Unaranacomúndemostróabrasionesdermalesen2009, pero pruebas más a fondo no detectaron ningún patógeno (incluyendo A. ranae).Aúnnoseconocemuchosobre losparásitosmesomicetozoosparadeterminarelniveldeamenazaalosanfibiossilvestresingleses;sinembargo,estospuedenestarpresentesysercapacesdeprovocarenfermedadenalgunasespecies.Las ranas verdes son vulnerables a la infecciónA. ranae (Pascolini et al 2003; Startk andGuex2014),peronosesabesilaslesionesasociadasconlainfecciónestánasociadasconlamortalidad, o si estepatógenoes capazde causar disminuciones en la población. No sesabe si la población de ranas verdes en el Reino Unido es positivas a este patógeno (oasociadas a las especiesmesomicetozoos) ya que aún no han sido examinadas para estepatógeno (y la población original de donantes no fue examinada en Suecia antes de serimportadas);sinembargo,nohanhabidocasosreportadossobrelesionescutáneasduranteelprogramadereintroducciónderanasverdes,previamentevistasenasociaciónconestepatógeno. En total, se examinaron desde Suecia 2052 ranas verdes adultas, juveniles ylarvas durante el proceso de desplazamiento, y no se detectaron quistes dérmicos,indicandoqueelA.ranaeprobablementenosepresentóen lapoblaciónderanasverdessuecas. Tampoco se han publicado informes sobre A. ranae en anfibios suecos. Por lotanto, el riesgode albergarA. ranaeen la población actual de ranas verdes se considerabajo.Ensíntesis,dadalaevidenciaqueelAmphibiocystidiumranaeesendémicoenanfibiosdelReino Unido, y es capaz de provocar enfermedades en ranas verdes, y posiblementeconducir a unadisminuciónde la población, el Amphibiocystidium ranae se considera unriesgoalapoblación.Evaluaciónderiesgos

a. EvaluacióndeexposiciónEste patógeno se transmite por esporas resistentes movibles (Startk andGuex2014;Rowleyetal2014),yporlotantohayunaaltaprobabilidadquelas ranas verdes desplazadas sean expuestas e infectadas por A. ranae. Elrango de anfibios vulnerables aún no se comprende, pero los parásitosMesomycetozoean son generalistas, afectando solo un rango de especies


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(Rowleyetal2013;Glocklingetal2013). Seha reportado la infecciónpormesomicetozoos en 18 especies de anfibios y en 74 especies de peces(Rowleyetal2013).Desde que el A. ranae se puede transmitir entre anfibios por contactodirecto,ylasranasverdesseránliberadasenunoodosestanques,hayunaaltaprobabilidadqueelA.ranaeseadiseminadoatravésdelapoblaciónderanasverdes.

b. EvaluacióndeconsecuenciaMientras que todo el potencial patógeno de los parásitosmesomicetozoosen las poblaciones de anfibios permanezcan confusas, existe una bajaprobabilidad de que estos parásitos son capaces de provocar unadisminucióndelapoblación,yaseaporsísolaoatravésdeunacombinacióndeinfeccionesconotrospatógenoscomoelranavirusyquitridiomicosis. Silas ranas verdes se infectaran con mesomicetozoos, existe una bajaprobabilidaddeconsecuenciasen lapoblación, seguidodeldesplazamientoenunacombinaciónconagentesestresantesyunfalloeneldesplazamiento.En este caso, es probables que las ranas verdes se infectenconsiderablemente, yestopodría tener severas consecuenciasen las ranasverdesdesplazadas(DiRosaetal2007).

c. EstimaciónderiesgosExisteunaaltaprobabilidaddeexposiciónydiseminaciónenranasverdes,yuna baja probabilidad de fallo en el desplazamiento, y por lo tanto, laestimaciónderiesgosengeneralseconsiderabaja.

ManejoderiesgosConel fin de aumentar nuestro entendimiento del riesgode las enfermedades por estosparásitos en las ranas verdes, se considerarán las pruebas de anfibios en el sitio deliberaciónyen las ranasverdesdestinadasparaeldesplazamiento. Estaprueba tambiénpuedeserllevadaacaboenranasjuvenilesyenelaguaenelsitiodeinicioparalasranasverdes. No existe un método de tratamiento para estos parásitos. Todos los anfibiosexaminadosduranteelprocesodedesplazamiento,conlesionessugestivasporlainfeccióndeAmphibiocystidiumsppdebenserexaminadasynodesplazadas.Sedebenimplementarmedidasestrictasdehigieneybioseguridadalolargodelcaminodedesplazamiento,paraasegurar que la posibilidad de diseminar estos parásitos seamínima. Las poblaciones deranasverdesyotrosanfibiosenelsitiodeliberacióndebensometerseamonitoreosalargoplazo,ytodaevidenciadedisminucióndeberíaserinvestigadaprontamente.Las lesiones asociadas con las infecciones de mesomicetozoos deben ser descritas paratodos los miembros involucrados en el desplazamiento y en la vigilancia de salud postliberación,parapromoverlarápidaidentificacióndelainfecciónsillegaraaocurrir.


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ReferenciasdeAmphibiocystidium:Anderson,L.(2014).AccessedDec2014:http://www.academia.edu/1702008/Investigating_the_distribution_and_prevalence_of_a_recently_emerged_parasite_threatening_palmate_newts_on_the_Isle_of_RumDiRosa,I.andSimoncelli,F.(2007).Theproximatecauseoffrogdeclines?Nature447:E4-E5Glockling,S.L.,Marshall,W.L.,Gleason,F.H.(2013).PhylogeneticinterpretationsandecologicalpotentialsoftheMesomycetozoea(Ichthyosporea).FungalEcology6:237-247.González-Hernández,M.,Denoël,M.,Duffus,A.J.L.,Garner,T.W.J.,Cunningham,A.A.,Acevedo-Whitehouse,K.(2010)Dermocystidinfectionandassociatedskinlesionsinfree-livingpalmatenewts(Lissotritonhelveticus)fromSouthernFrance.ParasitologyInternational59:344-350.Pascolini,R., Daszak,P.,Cunningham,A., Tei,S., Vagnetti,D., Bucci,S., Fagotti,A.&DiRosa,I.(2003)Parasitismby Dermocystidium Ranae InAPopulationOf Rana Esculenta ComplexInCentralItalyAndDescriptionOf Amphibiocystidium N.Gen. DiseasesOfAquaticOrganisms. 56: 1,65-74.  Pereira,C.N.,DiRosa,I.,Fagotti,A.,Simoncelli,F.,Pascolini,R.,andMendoza,L.(2005)ThepathogenoffrogsAmphibiocystidiumranaeisamemberoftheorderdermocystidaintheclassmesomycetozoea.JournalofClinicalMicrobiology43,192-198.Rowley,J.J.L.,Gleason,F.H.,Andreou,D.,Marshall,W.L.,Lilje,O.,Gozlan,R.(2013).Impactsofmesomycetozoeanparasitesonamphibianandfreshwaterfishpopulations.FungalBiologyReviews27:100-111.TariqStark&Gaston-DenisGuex(2014).InfectiesbijamfibieëninNederland:Amphibiocystidium.Ravon54,Jaargang16,Nummer3:54-56..

5.4Riesgosdelapoblación:RanidHerpesvirus

JustificaciónderiesgosLamayor informacióndisponiblepara los herpes virusde anfibios vienedel ranidherpesvirus 1 (RsHV-1) (Davisonet al 1999) el cual provoca tumores al riñónen ranas leopardonorteñas,Ranapipiens(McKinnell1973).NohayinformessobrelainfecciónconRaHV-1enotras especies; sin embargo, se han asociados otros herpes virus con la enfermedad enotras especies. En Italia, las ranas ágiles (Rana dalmatina) fueron la primera especie deanfibios en Europa de las que se tiene registros de ser infectadas por el herpes virus(Bennatietal1994),peronoseobservómortalidad,yotrosanfibiosdelamismaáreajuntoconPelophylax spp.No fueronvisiblementeafectados. Las lesiones cutáneasporherpesvirus en R. tempraria spp. Se han informado en varios lugares del Reino Unido. (A.CunninghamandT.Garner,unpublisheddata).


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Lavirologíaquese llevóencaboenmuestrasoralesycloacalesdeanfibiosenel sitiodeliberación 1, durante la vigilancia de salud post liberación, fueron negativos en laaislamientodelvirus;sinembargo,estatécnicapuedeprovocarresultadosnegativosfalsos,y otros métodos como PCR e histopatología de lesiones cutáneas (junto con síntomasclínicossugestivos)puedenserllevadasacabosiesposibledurantepruebasfuturas.Enelcasoqueelherpesvirussepuedamanifestarenelsitiodereintroducción2ypuedaprovocar enfermedades en las ranas verdes desplazadas; y que esta enfermedad puedellevar aunadisminuciónde lapoblaciónde ranas verdes, el herpes virusesunpotencialriesgoalapoblación.EvaluacióndeexposiciónLasranasverdesdesplazasalsitiodereintroducción2,puedenserexpuestasa travésdelcontacto directo con anfibios infectados, y hay una alta probabilidad que ocurra unaexposicióneinfección.Laprobabilidaddediseminaciónporcontactodirectoatravésdelapoblaciónderanasverdesesalta.EvaluacióndeconsecuenciaHay un entendimiento insuficiente sobre la distribución actual y la patogénesis del ranidherpesvirusparapredecirconcertezalaprobabilidaddeenfermarseporestepatógeno.Lavulnerabilidad de las ranas verdes a la enfermedad de herpes virus se desconoce; sinembargo,lasranasverdesPelophylaxspp.quevivenpróximasalasranaságilesinfectadas,no presentaron lesiones (Bennati et al 1994). Los herpes virus son capaces de provocarlesionescutáneasenunavariedaddeespeciesdeanfibios,lesionessugestivasdelascualessehanvistoen las ranas comunesdelReinoUnido; sinembargo, estas lesioneshan sidoasociadasconcarcinomasdecélulasrenalesletalesenranasleopardonorteñasenlasranaspata de pala comunes europeas (Pelobates fuscus). Las ranas verdes puedenhaber sidoexpuestasaestevirusenelsitiodeliberación1sindetectarenfermedades,yporlotanto,laprobabilidaddeenfermedadenlasranasverdesdesplazadasenelsitiodereintroducción2,yelfalloenlareintroducción,seconsiderabajo.Si los virus de ranid herpes fueron diseminados debido al desplazamiento de las ranasverdes, las consecuencias ambientales y biológicas son probables a ser bajas, dada lasospecha de que ya pudieran ser altamente distribuidas a lo largo de Europa (A.CunninghamandT.Garner,unpublisheddata)yparecesolocausarenfermedady/omuerteenciertasespeciesdeanfibios.EstimaciónderiesgosExisteunaaltaprobabilidaddeexposición,infe4ydiseminaciónentrelapoblaciónderanasverdes, perounabajaprobabilidadde consecuencias, y por lo tanto, el riesgo general seconsiderabajo.


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ManejoderiesgosLasranasverdesylosanfibiosdesplazadosdeberíanrecibirexaminacionesfísicasvisualesycualquier lesión cutánea sugestiva, debería ser probada por PCR para los herpes virusdurante el desplazamiento y la vigilancia de salud post liberación, y la histopatología delesionescutáneasycualquiersospechadetumoresal riñónencontradasenpostmortem,deberíanserllevadasacaboparatratardeidentificarestevirus.ReferenciasdeRanidHerpesvirus:

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5.5Riesgosdeportadores:Bacteria

JustificaciónderiesgosDiversos agentes bacterianos pueden infectar y provocar enfermedades en anfibios. Lamicobacteria es capaz de provocarmuertesmasivas en anfibios en cautiverio (Chai et al2006; Sanchez-Mrogado et al 2009); la clamidia spp. también ha sido asociada conenfermedadesencautiverio(Marteletal2012),peropocosesabesobrelosefectosenlapoblacióndelabacteriaenlosanfibioslibres.Generalmentelabacteriaesresponsableporinfeccionesoportunistas,contrarioalasenfermedadesdeanfibios.Durante el PRHS, se detectaron numerosas especies de bacterias en bacteriología fecal(especímenesetal inpress),porejemploenAeromonashydrophilayenHafniaalvei. LamayoríadeestasespeciesestuvieronpresentesenSueciayReinoUnido,ylainvestigaciónen la Web de la Ciencia demostró que todas las especies que se detectaron fueronesparcidasglobalmente.LassiguientesbacteriascrecieronelcultivospurosdurantelapruebadePRHS:Burkholderiacepacia por las lesiones cutáneas de eritema de dos ranas verdes antes de ser liberadas;Aeromonas hydrophila de una rana verde con heridas cutáneasmenores post liberación;Pseudomonas fluorescens (0157557) de heridas cutáneasmenores post liberación en tresranas verdes; Burkholderia cepacia de una úlcera superficial en un tritón crestado. La


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siguientebacteriafuecultivadacomocrecimientopredominante:LaPasteurellaaerogenesde ulceras puntiformes que se encontró en una rana común con estas lesiones; Ralstoniapickettii(0041455)deunaranacomúnmachoconepidermisespesaamarillaenelvientreymedias patas traseras. Al parecer, estos fueron los primeros reportes separados deRalstoniapickettyyBurkholderiacepaciadeanfibiossilvestresdelReinoUnido(yRalstoniapickettii también se aisló de tres ranas verdes comunes en cultivos mixtos), pero ambasbacteriashansidoampliamenteinformadasporelReinoUnido(Muhdietal.1996;Sousaetal.2010;Kimuraetal.2005;Maroyeetal.2000;Ryanetal.2006;Weidmannetal.2008,TheEnvironmentAgency2002;HealthProtectionagency2008,2009).En el entendimiento que la bacteria está asociada con enfermedades secundarias,posiblemente asociadas con agentes estresantes, que las ranas verdes desplazadaspudieran portarmuchas especies de bacterias, y que el desplazamiento es previsto paraestresara lasranasverdesdesplazadas(yposiblementea losanfibiossilvestresenelsitiodereintroducción),lasespeciesdebacteriassonconsideradasunriesgodelportador.EvaluacióndeliberaciónLa bacteria albergada por las ranas verdes desplazadas, serán liberadas en el sitio dereintroducción2.Laprobabilidaddequelasranasverdesseveaninfectadasyexpuestasalabacteria, previo al desplazamiento, yque lasbacterias sean liberadas conellas esmuyalta.EvaluacióndeexposiciónLas ranas verdes reintroducidas, continuarán albergando las bacterias después de habersidoliberadas,yvolveránainfectarse.Otrosanfibiosenelsitiodereintroducción2puedenserexpuestosaestasbacteriasatravésdelcontactodirecto. Existeunaaltaprobabilidadde que las ranas verdes y los anfibios silvestres sean expuestos, y luego la bacteria sediseminaráatravésdelaspoblacionesdeanfibiosenelsitio2.EvaluacióndeconsecuenciaComosesuponequenoexistenbarrerasentrelaspoblacionesdeanfibiosenlossitiosdereintroducción 1 y 2, es probable que a la bacteria a la que estén expuestos sea similarentrelossitios1y2. Generalmentelasbacteriassoninvasoressecundariosenindividuosdeciertamaneraestresadosoinmunocomprometidos,yelestréspuedeserunprecipitadormayor para las enfermedades bacterianas clínicas. Hay una alta probabilidad deenfermedades esporádicas en ranas verdes desplazadas debido a las enfermedadesasociadasalestrés,peroexisteunabajaprobabilidadqueestoafectaráunacantidaddelapoblaciónderanasverdes.EstimaciónderiesgosExisteunaaltaprobabilidadde liberación,unaaltaprobabilidaddeexposición,yunabajaprobabilidaddeefectosambientalessignificantesydeefectoseconómicos,yporlotanto,elriesgogeneralesbajo.


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ManejoderiesgosEsesencialquelasmedidasestrictasdebioseguridad,higieneylareduccióndeestrésesténenordenalolargodelcaminodedesplazamiento,paraminimizarlaprecipitacióndeestasinfecciones.Por último, la vigilancia post liberación debe ir tras lesiones en todos los anfibios (pararesidentesypoblacionesdeanfibiosdesplazadas)einvestigarlasafondo;lasexaminacionescompletas post mortem deberían ser llevadas a cabo en anfibios muertos que seencuentrenenel sitiode liberación. Además, si los fondos lopermiten, sedeben tomarmuestras a las ranas verdes desplazadas para buscar infecciones bacterianas, previo a aldesplazamientoycomopartedeunarutinademonitoreodePRHS,comodeberíaserparalosanfibiosresidentesenlossitios1y2. Estoayudaráadefinirsiesquesejustificanlassuposicionessobresinoexistenbarrerasentrelaspoblacionesdeanfibiosgeográficamentecontiguas.Referenciasdebacterias

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5.6OtrosagentesinfecciososdepreocupaciónfuturaBatrachochytriumsalamandrivorans

OrigenyestimaciónderiesgosRecientemente,hongoquítridonuevo,Batrachochytriumsalamandrivorans,fueaisladodelas poblaciones de salamandras comunes (Salamandra salamandra) en Noruega, las quehabíanmostrado una disminución de la población hace tres años atrás (Spitzen-van derSluijs et al 2013;Martel et al 2013). Estehongoquítrido fue capazdeprovocar lesionescutáneaserosivasyaltamortalidadensalamandrasinfectadasparaexperimentaciones.Sinembargo, la infección experimental de sapos parteros (Alytes obstetricans) no provocóenfermedades (Martel et al 2013). Esta investigación también demostró que las B.salamandrivorans tienen una preferencia a las bajas temperaturas (10-15 grados C) encomparación a Bd (Martel et al 2013), y por consiguiente, se consideró utilizar un nichoecológicodiferente.Lainvestigaciónextensayafondoinvolucrandolarevisióndemásde5000especiesdeanfibiosanivelmundial,juntosconlaspruebasdeinfecciónexperimental,confirmóqueestequítridoes altamentepatológicopara salamandras y tritones,peronohayevidenciaactualquesugieraquepatológicoparaotrosgruposdeanfibios incluyendolos anuros (Martel et al 2014). En una infección experimental de ranas comunes (Ranatemporaria)ysaposcorredores(Epidaleacalamita),sedescubrióquedosanurossilvestresdelReinoUnidoeran inmunes(Marteletal2014). Estudiosfilogenéticossugierenqueeseste patógenooriginado enAsia, donde la infecciónde salamandras y tritones silvestres,concepasidénticasdehongos,noestánasociadasconenfermedadescondisminucionesdelapoblaciónenurodelossilvestres(Marteletal2014).DesdequeelB. salamandrivorannosehaencontrado todavíaenanfibiossilvestresenelReinoUnido,ynohayevidenciasobresilasranasverdessonvulnerablesaestepatógeno,noseconsideracomoamenazaparaeldesplazamientopropuesto,ynosehallevadoacabounDRAcompletoparaestepatógeno.Sinembargo,mientrassellevaacabolarevisióndeanfibioscontiguos,duranteeldesplazamientoderanasverdes, seríaposibleconsiderar laprueba de tritones crestados (Triturus cristatus) por PCR, comohamostrado ser letal enestas especies (Martel et al 2014). Aunque no se prestó atención en los sitios 1 y 2,afortunadamente el tritón palmeado (Lissotriton helveticus) fue inmune a la infecciónexperimental(Marteletal2014).Aúnnosesabesieltritóncomún(Lissotritonvulgaris)esvulnerable al B. salamandrivorans. El afloramiento actual de este hongo en nuevoscontinentesylacausadeladisminucióndelapoblaciónenespeciesprimitivas,ejemplificala importancia de una bioseguridad estricta a lo largo de cualquier proceso dedesplazamiento(incluyendoelcomerciodemascotasenanfibios).ReferenciasdeB.salamandrivorans

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6. Discusiónyconclusiones

Eneste informehemosutilizado la informaciónenelanálisisdelriesgodeenfermedades,llevado a cabo entre los años 2003 y 2005 para la reintroducción de ranas verdes aInglaterra,actualizadoenbasea labibliografía, lacualhasidopublicadadesdeel2005,yque incluye información de nuestra vigilancia de enfermedades post liberación desde elprimer sitio de reintroducción, producir un nuevo DRA para el desplazamiento de ranasverdesdesdeelsitiooriginaldereintroducciónaunsitionuevoespecíficoenInglaterra.Apesardelgranaumentoenelvolumendelainformaciónpublicadaenlasenfermedadesdeanfibiosdesdeel2005,elDRAhasidollevadoacaboconsiderablementemásrápidoqueeloriginal DRA, el cual se completó después de dos años. Hemos descrito el camino dedesplazamiento, hemos mostrados que es probables que esto no acurra a lo largo debarreras geográficas o ecológicas, y que se identifiquen riesgos de enfermedades. Estasamenazas han sido materia de análisis detallados sobre el riesgo de enfermedades, unriesgomedio de amenaza (Bd) y se ha detectado y analizado un riesgo alto de amenaza(ranavirus).SitiosdeinicioHubo insuficiente información disponible en los sitios de inicio para concluir el DRA altiempo de la redacción. Recomendamos que cada sitio propuesto sea evaluadocuidadosamenteparaver si existen riesgosdeenfermedadesa lo largodel sitioantesdetomarunadecisión.ExisteunaposibilidadqueelDRAdebaserreescrito,siesqueungrupozoológico se involucre en el proceso de sitios de inicio, porque pueden haber anfibiosexóticos,pecesoreptilesencontactoconelpersonalquemanejaalasranasverdes.Laamenazadelranavirusalasranasverdes.Desde el 2005, se encuentra disponible informaciónmás detallada sobre la patología delranavirusenlasranasverdes,yhansidoasociadosconlosbrotesdeenfermedades.Hayungradode incertidumbresobresiunade lasespeciesmáspatológicas (CMTV)oaltamenterelacionadaconlosvirus,estánpresentesenelReinoUnido.ComoelvirusCMTVsolohasidodescritoporHolanda,enasociaciónconelbrotedeenfermedadesenPelophylaxspp,y


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porconsiguiente,hayunaumentoevidentede laamenazaplanteadaporestosvirusa lasranas verdes. El brote informado por Ariel et al (2009) en Dinamarca, sugirió que losagentes estresantes pueden gatillar el brote de enfermedades. Debido a que las ranasverdesexistenenpoblacionespequeñasenInglaterra,sonvulnerablesalosbrotesfortuitosdelaenfermedad.Comounanuevapoblación,tambiénestánpotencialmentebajoestrés,y por lo tanto, sonmás propensos a sufrir por brotes de enfermedades asociadas con elranavirus. Por consiguiente, los ranavirus ya presentes en Inglaterra, representan unaamenaza significativa a los establecimientos de poblaciones de ranas verdes, y de otrasespeciespatógenasquepudieranemergerenelReinoUnido.Existenvariaspropuestasposiblessobreelmanejodelaconservacióndelasranasverdesallidiarcon laamenazadel ranavirus. Eldesplazamientoderanasverdesanuevossitiossepuedevercomounaventaja,yaqueladefuncióndeunapoblación,comoresultadodeunaenfermedad rana viral, puede ser menos desastrosa si es que hay otras poblacionesdisponibles para garantizar la sobrevivencia de la especie. La revisión de los anfibiossilvestres en el nuevo sitio de desplazamiento puede permitir que, en un corto plazo, elriesgodecontraerunaenfermedadranaviralseaevaluadaantesdeldesplazamiento,perovaarequerirdepruebasletalesenlosanfibiossilvestres,yporconsiguiente,talpropuestavaarequerirunareflexiónydiscusiónmáscuidadosa.Eldesplazamientoderanasverdesaunnuevo sitio, sin anfibios nativos (si estándisponibles y/o si es factible) va a reducir elriesgo de contraer una enfermedad rana viral en un medio plazo, y va a aumentar laprobabilidaddefundarunanuevapoblación.Estaúltimaopciónprobablementereduceelriesgo de contraer enfermedades en una gran extensión, pero ubicar tal sitio puede serdifícil.Alargoplazo(20-50años)esmuyprobablequelasranasverdesentodoslossitiosdedesplazamientoseanexpuestasalranavirus,yactualmente,laevidenciaprediceunaltoriesgodeunaepidemiadeenfermedadranaviralenestaspoblaciones.Recomendamos el comité que supervise el desplazamiento propuesto, considerecuidadosamenteelriesgodecontraerenfermedadesporlosranavirus.Lasinvestigacionesparamejorarnuestroentendimientodelarelaciónparásito-portadorentre losranavirusylas ranas verdes, puede ser útil previo al (o al mismo tiempo) desplazamiento, con elpropósitodemejoraralargoplazolasexpectativasdelasranasverdesenInglaterra.Sisetomaunadecisiónparaprocederconeldesplazamiento,estamosenposicióndemanejarcuidadosamente el riesgo, y reducir al mínimo el uso de las técnicas de manejo, y másimportante aún, monitorear la salud y las enfermedades de las ranas verdes y de losanfibiossilvestres,conelfindeaumentarnuestroconocimientosobrelaamenazadeestaenfermedad.HongoquítridoydesplazamientoEl Bd sigue siendo una amenaza en el proceso de desplazamiento, pero cada vezmenorporquelapatogenicidaddeestehongoquítridoenelgéneroPelophylax,parecesermenorqueenotrasespeciesdeanfibios.Elmanejodelasopcionessepuedellevaracaboparareducirelriesgodecontraerenfermedadesydemejorarnuestroconocimientosobreestaamenaza.


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ManejodelriesgodelasenfermedadesUnavezqueseescogenlossitiosdeinicioydedesplazamiento,sepuedenreducirlosriesgosdecontraerenfermedadesporlaadhesiónaunabioseguridadestricta,higieneyprotocolosdelpersonal,loscualesseránextendidosenlosdocumentosdelManejodelRiesgodeEnfermedadesypostliberación,yVigilanciadelasalud.Porejemplo,probablementeserecomendarácolocarestanquesenelsitiodeiniciodentrodeunpolitúnelbioseguromásqueenelexterior(encuyocasoseráncubiertasconunamallaparaprevenirelcontactocondepredadoresyotrosanfibios).Dadosestosrequerimientosparalabioseguridadylarevisiónadicional,elnúmerodesitiosdeinicioqueseescojan,debensercuidadosamenteconsiderados.Losriesgosmásaltosdecontraerenfermedadesseránplanteadosporlossitiosencontactoconotrosanfibios,seguidoporzoológicosconotrostaxonescomopeces,invertebradosyreptiles,losquecompartenalgunospatógenossimilares.Lossitiosquealojenavesymamíferosdebencontarconunmenorriesgodecontraerenfermedades.Los documentos de un manejo completo de los riesgos de contraer enfermedades, y lavigilanciadelasaludpostliberación,deberánserilustradosseguidosdelDRAyantesqueserealice cualquier desplazamiento, para exponer los pasos necesarios con el fin demonitorear el resultado del desplazamiento naturaleza-a-naturaleza, desde el punto devista de sus efectos en la salud y en la demografía de la población de ambos; lareintroducción de ranas verdes y las especies de anfibios nativos en el sitio dedesplazamiento.ElDMRPRHSdesarrolladoparalaprimerareintroducciónderanasverdespuede formar la base, pero aumenta las opciones sobre nuestro conocimiento deenfermedadesdeanfibiosymonitoreopostliberaciónvandictarloscambiosquesehacen.El monitoreo de las enfermedades post liberación serán particularmente importantesporque, casi con certeza, no tenemos conocimiento sobre la identidad y la cantidad detodoslosposiblespotencialesparásitospatológicosquesealberganenlasranasverdes,losque podrían provocar enfermedades en anfibios silvestres. Creemos que tendremos unmejor conocimiento sobre la amenaza de estos agentes desconocidos, una vez que lapoblaciónderanasverdesenelSitio1alcancesucapacidaddecarga.Apartirdeesto,yatravés de monitoreos cercanos a los animales post reintroducción, y a la detección deenfermedadeseintervencióncuandoseanecesario,apuntaremosamantenerlasaludyelbienestar de estos anfibios, y de proteger el ecosistema de consecuencias nocivas ydesconocidas.VigilanciadeenfermedadespostliberaciónExistenseveraslimitacionesenlainformaciónquesepuedeconseguirdelosmétodosescogidosparalavigilanciapostliberaciónenelprimersitiodereintroducciónentre2006y2012:examinacionesdelasaludymuestrasdeconvenienciaparaanfibiosmuertos,losquefueronexaminadospostmortem.Esposiblequeestasenfermedadesjueguenunrolenelcrecimientopaulatinodelapoblacióndelasranasverdesenelprimersitiodereintroducción,peroesimprobablequelosmétodosdisponiblesparaelmonitoreoproporcionesinformaciónsobreestaposibleamenaza.Hayunanecesidadporrevisarel


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plandevigilanciadelasenfermedadespostliberaciónenelnuevositio,paraversipodemoshacermejorasrentablesenlosmétodosinvolucrados,yobtenerunmejorconocimientosobrelasamenazasdeenfermedadesaestaspoblaciones.AgradecimientosNosgustaríaagradeceraJohnBakeryJimFosterporlainformaciónsobreeldesplazamientopropuesto;AndrewCunninghamyStephenPriceporlasdiscusionesylainformaciónenlasamenazaspropuestasporlosranavirus;yaPaulEdgarporlasdiscusionesenelresultadodelDRA.


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APÉNDICE:PROCEDIMIENTODESITIOSDEINICIOPROPUESTO

DescripciónLosrenacuajosserániniciadosutilizandotécnicassimilaresaaquellasutilizadasen2013(Baker,2014).Setomaránloshuevosdelsitioprimariodereintroducción,entonceslosrenacuajospuedencrecerbajoprotecciónycondicionesdecautiverio.Lametamorfosisoranitasresultantesseránliberadasdosotresmesesdespuésenelsitiosecundariodereintroducción,elcualestáenlamismaregiónqueelsitioprimario.Unadiferenciasignificanteentreelsitiodeiniciodel2013yelqueseplaneóenel2015,esquelaliberaciónfuturaserállevadaacaboenThompsonCommonenvezqueenelsitioprimariodereintroducción.

EstadodeenfermedadElanálisisderiesgodecontraerenfermedades(McGill&Sainsbury,2006),larevisiónyvigilanciahansidollevadasacaboporelInstitutodezoologíacomopartedelproyectodereintroducciónderanasverdes(Buckley&Foster,2005).LasmismasranasverdesfueronrevisadasenbuscadeenfermedadesinmediatamenteyprevioalaliberaciónenInglaterra,ylavigilanciaanualsellevóacabohastael2011.Losanfibiosqueyaresideneneláreadeliberacióntambiénfueronrevisados,previoalaliberacióndelasranasverdes,ymuchasveceshastael2011(Vaughan&Sainsbury,2011).Enlosexámenesmédicosnoseencontraronevidenciassustancialessobresilasaluddelosanfibiossilvestresodelasranasverdessehavistoadversaysignificativamenteafectadaporlareintroducción.Aunquesehayanidentificadoalgunasbacteriascomopatógenosnuevospotenciales(Vaughanetal.2009),nosehandetectadoagentesinfecciosossignificativosoenfermedadesenningunodelosanfibiosexaminadosresidentesointroducidos,yenparticular,losanálisisdehongoquitridiosyranavirusnoloshandetectado.Nohayregistrosdeenfermedadesdeanfibiosnienelsegundositiodereintroducciónnienningunodelossitiosdeiniciopotenciales.

RecoleccióndehuevosAproximadamentesetomaránmuestrasde12gruposderanasverdesdelsitiodonante,teniendocuidadodemaximizarlasoportunidadesdequeestosseandediferenteshembras(idealmentetomadosdeunrangodelocacionesdediferentesestanques,endiferentesmomentossobreelperíododemuestra).Laubicaciónytomademuestrasvanarequerirquesecamineentrelosestanquesdereproducción,yposiblevaarequerirelusodeunpequeñobotearemos.Losriesgosdelabioseguridadseránminimizadosporelusodelaimplementaciónprotocolosyequipamientoduranteelmonitoreodelasranasverdes,eltrabajodemantenimientodelsitio,elequipoylaropaqueentrahabitualmenteenelagua,


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sóloseutilizaenelsitiodeldonante;cualquierotroequipoquesepuedausarenelagua,debeserlimpiadoyesterilizadoantesdeusarloenelsitio.

Eclosiónycrecimientoinicial(interior)Loshuevosserántransportadosalacasadelsupervisorcontratado(46kmdelsitiodedonación),dondelaeclosiónylasetapasinicialesdelcrecimientodelosrenacuajosseránadaptadosenelinterior.sevanamanteneraloshuevosyalosrenacuajosencontenedoresdeplástico,conaguadelallaveinoculada,yconaguadelestanquequesesacadelsitiodeldonante.Estaetapatieneamenazasdebioseguridadmínimas,porquealestarenelinterior,elriesgodecontactoconotrosanfibiosesnulo(nootrosanfibiosocualquierotroanimalquetengaquesupervisor).Cuandolosrenacuajosnadalibremente,yhancrecidoauntamañoquepermitaelmanejoytransportaciónfácil(enaproximadamentedosotressemanas),serántransportadosaestanquesartificialesenelexterior.

Crecimientoenestanquesartificiales(exterior)Losrenacuajosseráncriadosenelexteriorenestanquesartificiales.Estosestanquesseránsimilaresalosqueseutilizaronenel2013.Lastinasdeyesosevanahundirparcialmenteenelsueloparaamortiguarlosdelastemperaturascambiantes.Estassevanallenarconaguadelallaveinoculada,yconaguadelestanquetransportadadelprimersitiodereintroducción.Sevaatomarvegetaciónacuáticadelprimersitiodereintroducciónparaincluirlaenelestanqueartificialyasíproporcionarcubrimientoysustratoalimenticio.Losestanquesvanaserprotegidosdeinvasionesquepuedensucederenlosalrededoresconunacubiertademalla,porotrosanfibiossilvestresopotencialesdepredadores(ejemplo:invertebradosacuáticos,culebrasdepastoyaves).Losrenacuajosvanasermonitoreadosyalimentadosconfrecuenciascomolalógicalopermita;idealmentevariasvecesaldíacuandolosrenacuajosestáncreciendorápidamente.

LiberacióndelametamorfosisUnavezquelosrenacuajoslleguenalasetapasfinalesdelarva,latransformaciónaranitasserátransportadaalsitiosecundariodereintroducción,ThompsonCommon.Losrenacuajoscrecenysedesarrollanendiferentesrangos,entonceslaliberaciónocurriráporetapas,amedidaquelosrenacuajosindividualeslleguenalfinaldelaetapadelarvaentrelosmesesdejulioyagosto.Losrenacuajosserántransportadosdelosestanquesartificialesencontenedoresde10litros,parcialmentellenos,conaguadellavemezcladaconaguadelestanque,yllenosconvegetaciónacuáticadeestosestanques.

UbicacióndelosestanquesartificialesLossitiosquevanaalojarlosestanquesartificialesestánbajorevisióncomopartedelapreparaciónactualparalareintroduccióndelasranasverdesalsitiosecundariodereintroducción.Idealmente,losrenacuajosvanainiciarensitioscercanosalossitiosde


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reintroducción,bajoelcuidadodepersonasconexperienciaenlacríadeanfibios.Sinembargo,laadhesiónalosprotocolosdebioseguridadefectivamenteexcluyealaspersonasmásexperimentadas,quienesgeneralmentemantienenotrosanfibiosencautiverio,loqueconstituyeunaltoriesgodecontraerenfermedades.Sehaconfirmadounsitiodeinicioyotrostresseránrevisados.Enlatablaacontinuaciónsehaceunresumendelospotencialessitiosconfirmados.Idealmente,elsitiodeiniciosevaapropagaralolargodealmenosdossitios.Todoelpersonalinvolucradoenelcuidadoderenacuajosseráminuciosamenteentrenadoenmedidasdebioseguridadyenelcuidadoderenacuajos. Sitiospotencialesparalosestanquesartificiales Sitio Distancia* Comentario Sitio 1 x km Este sitio es confirmado como sitio de inicio. Los

estanques serán colocados en poli túneles. Este sitio aloja otros animales que no son anfibios.

Sitio 2 x km Una evaluación de bioseguridad y las potenciales negociaciones serán llevadas a cabo como parte de la preparación actual.

Sitio 3 x km El jardín privado del supervisor contratado será evaluado como parte de la preparación actual.

Sitio 4 x km Una evaluación de bioseguridad y las potenciales negociaciones serán llevadas a cabo como parte de la preparación actual.

*Distanciadelsitioprimariodereintroducción.

BIBLIOGRAFÍABaker,J.(2014).Poolfrogheadstarting2013.Unpublishedreporttothepoolfrog

ReintroductionSteeringGroup.

Buckley,J.&Foster,J.(2005).ReintroductionstrategyforthepoolfrogRanalessonaeinEngland.EnglishNatureResearchReport642.EnglishNature,Peterborough.

McGill,I.&Sainsbury,A.W.(2006)Healthandwelfaremonitoringofthepoolfrog(Ranalessonae):Methodsofhealthandwelfaremonitoring.London,InstituteofZoology,ZoologicalSocietyofLondon.

Vaughan,R.&Sainsbury,A.(2011).Diseaseriskmanagementandpost-releasehealthsurveillanceofthepoolfrog(Pelophylaxlessonae)reintroductionprogramme2011.London,InstituteofZoology,ZoologicalSocietyofLondon.

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