VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS · crecimiento de los microorganismos que puede afectarse por...
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VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS Y BIOLÓGICOS
Referencia USP 29,Farmacopea Mexicana
Validación de métodos analíticos AEFI
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Los métodos biológicos se emplean para determinar la potencia o el contenido de ciertas elementos que no pueden ser ensayados por otros métodos químicos o físicos
Ensayos biológicos
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Es la comparación de la respuesta de la sustancia patrón (o de referencia) de concentración conocida con la del producto a ensayar, con una probabilidad determinada
Los ensayos biológicos como su nombre lo indica, utilizan materia viva (animales, células, microorganismos entre otros)
El principio de un ensayo biológico
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Se dividen en ensayos cualitativos y cuantitativos
En los cualitativos se identifica una sustancia por alguna reacción característica producida en una especie particular de entidad biológica
Ensayos biológicos
Ensayos cualitativos
BBLBBL
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Ensayos cuantitativos
Los ensayos cuantitativos, permiten determinar la potencia o concentración de un activo en la muestra
Ensayos biológicos
Valoración por cilindro- placa o en placa : Difusión
Valoración turbidimétrica
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Pueden ser difíciles de "validar""Validez" se hace prácticamente
caso por caso
Ensayos biológicos
Lo recomendables es: Cumplir estrictamente las monografías de los Ensayos biológicos en las farmacopeas
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Validamos todos los métodos microbiológicos?
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Ensayos de límites microbianos
Recuento microbiano
Ensayo de esterilidad
Ensayo de eficacia de preservativo
Programa de control de ambiente
Ensayos biológicos
Requieren validación
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Validación de ensayos microbiológicos
Es virtualmente imposible validar completamente los procedimientos de ensayo para cada microorganismo
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Que cualquier sustancia inhibitoria presente en la muestra ha sido neutralizada/inactivada o diluida a niveles por debajo del nivel inhibidor.
La capacidad de los medios para promover el crecimiento de los microorganismos que puede afectarse por el proceso de preparación del medio, por los procesos de esterilización y de almacenamiento, entre otros.
LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO DEBE DEMOSTRAR:
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Neutralizar/inactivar o diluir las sustancias inhibidoras.
Enfrentamiento periódico de los medios.
Tener los métodos normalizadosTener los Equipos de medición
calibrados.
Actividades preliminares:
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Temperatura y tiempo de incubación
Todos los microorganismos no pueden crecer en los medios
Variaciones en los medios puede afectar la recuperación
Desinfectantes o preservativos inhibidores
Muestra
procedimientos
manejo, almacenamiento, transporte
Parámetros que deben incluirse
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Métodosincorporación en placa /
diseminación en placafiltración por membranaNúmero más probable
Tamaño de la muestraDilución de ensayo BBLBBL
Parámetros que deben incluirse
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Condiciones de la filtración por membrana
Condiciones de incubación Criterios de
aceptación
Parámetros que deben incluirse
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Microorganismos de enfrentamiento para la validaciónLos recomendados por las farmacopeas.
Staphylococcus aureusBacillus subtilisEscherichia coliCandida albicansAspergillus niger
Tamaño del inóculo10 –100 ufc totales inoculadas en de 0.1ml a 100mL de la solución de ensayo.
Parámetros que deben incluirse
Los microorganismos deben ser
enfrentados por separado y no
mezclados en un ensayo
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Requerimientos de la validación de ensayos de esterilidad
pH, promoción del crecimiento y esterilidad de los medios
Ensayo de la ESTÁSIS (comprobación del medio
Control ambiental
Controles negativos
Microorganismos de enfrentamiento según USP
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Unidades y estándares de referencia
La potencia de los antibióticos estáespecificada en Unidades o µg de actividad.La preparación de los estándares se puede en algunos casos con anticipación como una solución madre y las diluciones el día de la ejecución del ensayo.
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Pruebas de aptitud de los medios
Prueba de promoción de crecimientoEstabilidad de los medios preparados.
Para un mes de almacenamiento, en envase cerrado, verificar cada 2 semanasPara un año de almacenamiento, en envase impermeable y bien cerrado, verificada cada 3 meses.
Deben cumplir
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Reporte de Validación
Objetivo y alcance del método, aplicabilidad
Tipo de analito y la matriz sobre la que se hizo la validación,
Detalles del analito, reactivos, estándares de referencia y control y estabilidad de las muestras preparadas.
Procedimiento para la verificación de la calidad de los estándares y reactivos químicos usados
Condiciones de seguridad
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Listado de equipos, funcionamiento, condiciones de desempeño. IQ,OQ,PQ
Detalle de las condiciones y cómo fue realizado el proceso, incluyendo la preparación de la muestra
Tratatamiento estadístico y cálculos realizados
Procedimientos de control rutinario
Parámetros críticos establecidos a través del test de robustez
Parámetros del método
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Reporte de Validación
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Resultados de la incertidumbre de la medición
Criterios para revalidación
Persona que desarrolló y validó el método inicialmente
Resumen y conclusiones
test de aceptación de las variables
Registros como cromatogramas, espectros y curvas de calibración
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1212
1313
1414
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Reporte de Validación