UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE …repositorio.ug.edu.ec/bitstream/redug/2338/1/LEON QUISPE...

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TESIS

PRESENTADA AL HONORABLE CONSEJO DIRECTIVO COMO REQUISITO

PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE MÉDICO VETERINARIO Y

ZOOTECNISTA

TEMA

ESTUDIO DE LA POTENCIA NEUTRALIZANTE EN LOTES DE SUEROS

ANTIOFÍDICOS DE MAS DE UN AÑO DE ALMACENAMIENTO

AUTOR

JOSÉ LEONARDO LEÓN QUISPE

DIRECTOR

DR. SANTIAGO RANGEL BAJAÑA. Msc.

GUAYAQUIL-ECUADOR

2013

ii

TEMA

ESTUDIO DE LA POTENCIA NEUTRALIZANTE EN LOTES DE SUERO

ANTIOFÍDICO DE MAS DE UNA AÑO DE ALMACENAMIENTO

AUTOR

JOSÉ LEONARDO LEÓN QUISPE

TESIS

PRESENTADA AL H. CONSEJO DIRECTIVO COMO REQUISITO PARCIAL A

LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE:

MÉDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA

LOS MIEMBROS DEL TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN DESIGNADO POR EL

H. CONSEJO DIRECTIVO DE LA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA

Y ZOOTECNIA, DAN POR APROBADA LA PRESENTE INVESTIGACIÓN

CON LA CALIFICACIÓN DE ( ) EQUIVALENTE A ( )

_____________________________

Dr. Santiago Rangel Bajaña Msc.

Director de Tesis

_______________________ ___________________

Blgo. Antonio Freire Lascano Dr. Mauro Loor Macías

Examinador Principal Examinador Principal

iii

Los datos escritos en esta investigación son de

Conocimiento y responsabilidad del autor.

JOSÉ LEONARDO LEÓN

DEDICATORIA

Al culminar esta etapa tan importante en mi vida,

dedico este trabajo y agradezco a Dios porque me ha

permitido estar rodeado de personas que siempre creyeron y

confiaron en mí.

A mis padres Luis León y Marina Quispe; que con su

esfuerzo siempre me impulsaron a concluir mi carrera.

A mi esposa Sandra Barrientos; que siempre ha estado

conmigo en los buenos y malos momentos.

A las dos personas más importantes que han llegado

han mi vida como son; mis dos hijos Lucas y Samuel que a

pesar de su cortad edad me dan fuerza para seguir adelante.

ii

AGRADECIMIENTO

Le doy las gracias a Dios porque de Él viene la

sabiduría y la inteligencia.

También agradezco al Instituto Nacional de Higiene

Leopoldo Izquieta Pérez, institución que me abrió las puertas

para desarrollar mi trabajo de tesis.

A los doctores Héctor Cabrera y Raúl Martínez que

siempre colaboraron con lo necesario para el desarrollo de mi

investigación.

Al Dr. Santiago Rangel Bajaña Msc. que con su

conocimiento y experiencia fue parte fundamental de este

trabajo investigativo.

A los docentes de la Facultad de Medicina Veterinaria y

Zootecnia de la Universidad de Guayaquil, por impartir con

calidez calidad y paciencia sus conocimientos.

A cada una de las personas que de una forma u otra

colaboraron para la culminación de la presente investigación.

A todos mis compañeros y amigos, muchas gracias.

ÍNDICE GENERAL

CAPÍTULOS Pág.

I. INTRODUCCIÓN………………………………………..…………..

1

II. REVISIÓN DE LITERATURA……………………………..……..

4

III. MATERIALES Y MÉTODOS…………….……………………...

IV. RESULTADOS……………..……………………………………....

V. DISCUSIÓN…………………………………………………………

VI. CONCLUSIONES………………………………………………….

VII. RECOMENDACIONES………………………………………….

VIII. RESUMEN……………………………………………………….

IX. SUMMARY…………………………………………………………

X. BIBLIÓGRAFAA……………………………………………………

XI. ANEXOS……………………………………………………………

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ii

CONTENIDO

Portada…………………………………………………………………….. I

Aceptación del Tribunal de Sustentación……………………………….. Ii

DEDICATORIA…………………………………………………………... Iv

AGRADECIMIENTO……………………………………………………. V

I. INTRODUCCIÓN………………………………………..….………… 1

1.1. OBJETIVOS……………………………..………………………..

1.2. HIPÓTESIS DE LA INVESTIGACIÓN…………………………

1.3. VARIABLES………………………………………………………

3

3

3

II. REVISIÓN DE LITERATURA……………………………..……….

4

2.1. SUEROS ANTIOFÍDICOS..……………………………………

2.1.1. GENERALIDADES…………………………………….

2.2. PRODUCCIÓN DE SUERO ANTIOFÍDICO…………..….…

2.2.1. Obtención del Veneno …....……………………………

2.2.2. Obtención del plasma hiperinmune…………………..

2.2.3. Purificación de los anticuerpos……………………….

2.3. APLICACIÓN DEL SUERO ANTIOFÍDICO……….....…….

2.3.1. Tiempo de aplicación…………...……….…………….

2.3.2. Reacciones………………………..…………………….

2.3.3. Caducidad………………………………………..……..

2.4. PODER NEUTRALIZANTE DEL SUERO ANTIOFÍDICO.

2.4.1. Neutralización de los efectos sistémicos……………..

2.4.2. Neutralización de los efectos locales (Hemorragia,

edema y mionecrosis)………………………………………...

2.4.3. Neutralización de las actividades enzimáticas de los

venenos………………………………………………………….

4

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iii

2.5. UNIFORMIDAD Y ESTABILIDAD DEL SUERO

ANTIOFÍDICO……………………………………………….

III. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………...

3.1. LOCALIZACIÓN DEL ENSAYO………………………..

3.1.1. Coordenadas…………………………………………

3.2. CONDICIONES METEOROLÓGICAS…………………..

3.3. MATERIALES…………...…………………………….……

3.3.1. Materiales biológicos………………………………...

3.3.2. Materiales de laboratorio…...……………………….

3.3.3. Equipo general y complementario………………….

3.3.4. Materiales de oficina………………………...……….

3.4. MÉTODOS…..….................................................................

3.4.1. Recolección del suero antiofídico………..…………

3.4.2. Pesaje de los ratones………………………………..

3.4.3. Incubación e inoculación de suero y veneno………

3.4.4. Potencia neutralizante…….………………………...

3.4.5. Recolección de datos………………………………...

3.4.6. Análisis estadístico…………………………………..

IV. RESULTADOS……………..……………………………………........

4.1. POTENCIA NEUTRALIZANTE…………………………..

4.1.1. Potencia neutralizante de sueros antiofídicos del

Género Bothrops por especie……………………...

4.1.2. Potencia neutralizante de sueros antiofídicos del

género Bothrops por año de almacenamiento……

4.1.3. Desviación estándar de la potencia neutralizante de

sueros antiofídicos del Género Bothrops…………

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iv

4.1.4. Desviación estándar de la potencia neutralizante de

sueros antiofídicos del género bothrops de

acuerdo a los años de almacenamiento…………..

V. DISCUSIÓN……………………………………………………………

VI. CONCLUSIONES…………………………………………………….

VII. RECOMENDACIONES…………………………………………….

VIII. RESUMEN…………………………………………………………..

IX. SUMMARY……………………………………………………………

X. BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………….

XI. ANEXOS

33

34

35

1

I. INTRODUCCIÓN

En muchas partes del mundo, el ofidismo es un problema sanitario al que se le presta

especial atención, a causa de las características clínicas críticas que se presentan con las

mordeduras de serpientes venenosas. En este sentido, la eficacia de los sueros antiofídicos

enfrenta problemas que se traducen en una pérdida de su capacidad neutralizante al momento

de su aplicación, debido a un mal manejo en su almacenamiento, a un incorrecto seguimiento

de las recomendaciones del fabricante y la fecha de expiración propuesta por el fabricante.

Algunos factores explicativos tienen que ver con las altas temperaturas y a la carencia de

sistemas de refrigeración adecuados. Al respecto, se encuentra bastante documentado que las

temperaturas elevadas favorecen la desnaturalización o precipitación irreversible de las

inmunoglobulinas, tal como ocurre con las proteínas en general, las cuales al perder su

conformación tridimensional, pierden su funcionalidad. Pero cuando éstos elementos han

sido manipulados eficientemente, existe la posibilidad de que aún estando caducado, el poder

neutralizante aún siga activo en el suero antiofídico, y ante la posibilidad de escasez y la

presentación de emergencias se debe conocer si es posible la suministración de los mismos y

en qué medida necesaria para coadyuvar al efecto neutralizante del envenenamiento en la

vida del afectado.

Es muy importante comprender que los sueros antiofídicos producidos en otros países

como México o Colombia, tienen una efectividad mucho menor ante las mordeduras de

víboras en Ecuador ya que por lo general no se trata de las mismas especies, o porque las

proteínas que componen sus venenos no son las mismas en los venenos locales. Un suero

antiofídico suele tener un tiempo de validez de un año (esto por garantía de la casa

fabricante), aun que en realidad son activos hasta los 4 años. (Liofilizados)

No existen en realidad ó son nulos los estudios concernientes a esta temática planteada

sobre la potencia neutralizante de los sueros antiofídicos con un año de almacenamiento, por

eso es difícil considerar estudios anteriores comparativos relacionados al tema de la presente

tesis.

El presente estudio se presenta con el fin de establecer, sustentar, verificar o confirmar la

condición de los lotes de suero antiofídico con más de un año de almacenamiento como

antiveneno POLIVALENTE, es decir, que posee una adecuada capacidad de neutralización

2

contra todos y cada uno de los venenos de las diferentes especies de serpientes en el

Ecuador.

En lo fundamental, se pretende que los resultados que se obtengan con este trabajo

constituyan una experiencia valiosa en el sentido de posibilitar la incorporación de un paso

adicional que refuerce la seguridad vial del producto final, el cual consiste en una

conservación efectiva para que al término del tiempo de caducidad se conserven aún las

propiedades autónomas del producto.. En última instancia, se procura realizar el estudio de la

efectividad del suero antiofídico almacenado, manteniendo la potencia neutralizante del

suero, generando la menor cantidad posible de reacciones adversas en las personas a las que

se apliquen el mismo.1

LÓPEZ, N.et al. 2008.

Características de los pacientes con accidente ofídico y complicaciones infecciosas atendidos en el Hospital Pablo Tobón

Uribe entre los años 2000 y 2006.

3

1.1. OBJETIVOS

1.1.1. GENERAL:

Establecer un estudio de la potencia neutralizante en lotes de suero antiofídicos de más

de un año de almacenamiento.

1.1.2. ESPECÍFICOS:

Verificar la eficacia de la potencia neutralizante en lotes de sueros antiofídicos

almacenados.

1.2. HIPÓTESIS DE LA INVESTIGACIÓN

H.I . Los sueros antiofídicos de más de 1 año de almacenamiento mantiene la

potencia neutralizante aceptable para uso humano.

H.o .Los sueros antiofídicos producidos en el Instituto Nacional de Higiene

Leopoldo Izquieta Pérez no mantiene la potencia neutralizante aceptable para uso

humano.

1.3. VARIABLES

Variable independiente:

Sueros antiofídicos almacenados

Variable Dependiente:

Estudio de la potencia neutralizante.

4

II. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1. SUEROS ANTIOFÍDICOS

2.1.1. GENERALIDADES

Los antivenenos son preparaciones de inmunoglobulinas purificadas a partir

del plasma de animales, generalmente ovinos o equinos, que han sido inmunizados

con veneno de serpiente. Debido a que la naturaleza y composición de los venenos

varía de una especie a otra, los sueros antiofídicos son específicos solo para venenos

antigénicamente relacionados con los venenos empleados en la inmunización. En

cualquier caso, los envenenamientos ofídicos deben ser tratados con antivenenos

específicos, cuya eficacia haya sido validada en la neutralización de efectos

particulares como hemorragia, edema y coagulopatías, tanto en estudios preclínicos

como en estudios clínicos.2

2.2. PRODUCCIÓN DE SUERO ANTIOFÍDICO

2.2.1. OBTENCIÓN DEL VENENO:

Primero se obtiene el veneno de las serpientes. Para conservar la estructura y

la actividad de los diferentes componentes del veneno, este es estabilizado mediante

un proceso llamado liofilización, en el cual el agua es sublimada y el veneno es

recuperado como un polvo seco que puede ser almacenado durante años sin

descomponerse y que al ser disuelto en agua recupera las propiedades que tenía el día

de su extracción.

EL Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical “Leopoldo Izquieta

Pérez elabora en sus instalaciones una solución salina de inmunoglobulina heteróloga

purificada de origen equino que contiene fenol 0.25% y thimerosal al 0.005% como

preservativos. Cada frasco de 10 ml de Suero Antibotrópico neutraliza no menos de

25 mg de veneno de: Bothrops asper (equis, equis rabo de hueso), Bothrops atrox

(pitala, macanche), Bothrops xanthogramma (equis pachona).

2ACOSTA P., Edit (2004).

MINISTERIO DE SALUD PÚBLICA - ECUADOR. 2008.

Manual de Normas y Procedimientos sobre Prevención y Tratamiento de Accidentes Ocasionados por Mordedura de

Serpientes..

5

En la práctica diaria del Hospital José María Velasco Ibarra hay

disponibilidad del suero antiofídico polivalente liofilizado PROBIOL, de elaboración

colombiana, cada ampolla reconstituida contiene inmunoglobulinas equinas que

neutralizan como mínimo 25 mg de veneno de Bothrops atrox, 25 mg de veneno de

Bothrops asper, 10 mg de veneno de Crotalus durissus y 20 mg de veneno de

Lachesis muta.3

2.2.2. OBTENCIÓN DEL PLASMA HIPERINMUNE:

Una vez que el veneno es liofilizado se emplea para preparar una serie de

inyecciones con dosis progresivas que son administradas a caballos por vía

subcutánea. El sistema inmunológico de los caballos reconoce a las proteínas del

veneno como extrañas y responde de una forma que se caracteriza por la producción

de gran cantidad de anticuerpos dirigidos contra los elementos del veneno.

Posteriormente los caballos son sometidos a un proceso en el cual se les

extrae sangre en una cantidad que no compromete su salud. Luego de que la sangre

es colectada asépticamente en bolsas estériles que contienen un anticoagulante, se

deja reposar en refrigeración hasta que las células sanguíneas sedimentan y es

posible separar de ellas el plasma donde se encuentran los anticuerpos que

constituyen el principio activo de los antivenenos.

Para evitar que este proceso de sangría produzca cuadros de anemia en los

animales empleados, cada paquete de glóbulos rojos es resuspendido en solución

salina y retransfundido al caballo respectivo.

Finalmente los caballos son enviados al campo, donde descansan y se recuperan

antes de ser empleados nuevamente. 4

3AGUADO, J; AGUILAR, J, Y AGUIRRE,

C. 2000. Medicina Interna de Farreras/ Rozman. 14ta.ed. Barcelona: Dworki.

ÁNGEL R. 1989.. ActMed Col 14:349,

4BOLAÑOS, R., ROJAS, O., ULLOA, C.E. 1982.

6

2.2.3. PURIFICACIÓN DE LOS ANTICUERPOS:

Los anticuerpos son purificados adicionando ácido caprílico al plasma, la

mayoría de las proteínas presentes en el plasma que no tienen actividad neutralizante

sobre la toxicidad del veneno, como son la albúmina y el fibrinógeno, son

precipitadas y posteriormente removidas por una serie de filtraciones. El producto

resultante es una solución estéril de anticuerpos equinos que es formulada a pH

fisiológico con preservantes y otros excipientes.5

2.3 APLICACIÓN DEL SUERO ANTIOFÍDICO

Se cateteriza una vena periférica, distinta a la utilizada en la fase de

reanimación.

No se debe realizar prueba en conjuntiva ocular o inyección intradérmica.

Todo paciente debe considerarse como potencialmente alérgico o sensibilizado y

debemos tener a mano el equipo de reanimación. La prueba no tiene valor predictivo.

El número de ampollas calculado se disuelve en 250cc de solución salina

normal para adultos y en 100 cc para niños.

Se inicia el goteo de la mezcla a una velocidad de 10 gotas por minuto

durante 10 a 15 minutos. Si no hay reacción alguna, el resto de la dilución se pasa en

30 a 60 minutos. Importante “purgar” el equipo de venoclisis, para que el paciente

reciba desde el comienzo el suero.

Las manifestaciones de sensibilidad al suero pueden presentarse entre unos

pocos minutos y 24 horas. El paciente puede presentar signos de inestabilidad

hemodinámica, escalofríos, urticaria, angioedema y aun anafilaxia franca. Ante

cualquiera de estas situaciones se debe suspender el goteo e iniciar una dosis de

adrenalina entre 0.3 y 0.5 mg. por vía intravenosa, hidrocortisona 3 a 6 mg. IVcada

Costa Rica. Rev. Biol. Trop.; 30: 53-58.

5 h BOLAÑOS, R., CERDAS, L.

Rica. Bol. Of. Sanit. Panam. 1980; 88: 189-196

7

seis horas por un día y aplicar un antihistamínico. Aunque en el manejo de la

reacción alérgica por otras causas, se recomienda la administración de adrenalina IM,

el cuadro hemorrágico del accidente ofídico lo contraindica.

Quince minutos después de la aplicación de la adrenalina,se reinicia el goteo

del suero. Si la reacción alérgica vuelve a presentarse, se inicia un goteo de

adrenalina diluyendo una ampolla (un miligramo) en 250 cc de suero fisiológico y

pasar la mezcla a 5-10 gotas por minuto. Cuando los signos de la reacción

desaparezcan, pasar el suero antiofídico restante en dos horas.6

2.3.1. TIEMPO DE APLICACIÓN

El tiempo transcurrido desde el accidente es de suma importancia, ya que

como en todos los envenenamientos, la aplicación oportuna de los antídotos es

mucho más eficaz y evita que se presenten complicaciones; así por ejemplo, un

accidente severo tratado adecuadamente en los primeros minutos, tendrá una

evolución favorable y sin mayores complicaciones, pero un accidente leve o

moderado, atendido muchas horas después de ocurrido, necesariamente presentará

complicaciones propias de los daños causados por la acción del veneno.

La cantidad de suero antiofídico que debe aplicarse, depende de la cantidad

del veneno inoculado en la mordedura. No se recomienda la práctica rutinaria de

pruebas de sensibilidad previa a la aplicación del suero antiofídico, porque no

predicen la posibilidad de reacciones de hipersensibilidad y si pueden por el

contrario, retardar el inicio de la terapia específica, que en los casos de

envenenamiento grave es de suma urgencia. En el momento de aplicar el suero, hay

que tomar las medidas pertinentes y estar preparado para tratar una reacción de

anafilaxia, así no haya el antecedente de hipersensibilidad a sueros heterólogos. De

existir el antecedente de hipersensibilidad al suero, se debe analizar el factor riesgo-

beneficio de la aplicación del suero antiofídico según la gravedad del accidente.

6CHARRY, R. 2006.

. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Manizales – Colombia.

8

El suero antiofídico se aplica por vía intravenosa disuelto en 100 ml Solución

Salina o Dextrosa en agua al 5%, iniciando a 15 ml/hora en los primeros 10 minutos,

y si no se presentan reacciones de hipersensibilidad, se aumenta el goteo para pasar

la totalidad del suero en un lapso no mayor de 20 minutos.

En cuanto a la dosis no existe un esquema terapéutico estandarizado. La

cantidad de antiveneno a utilizar dependerá de la capacidad de neutralización del

suero antiofídico y de la cantidad de veneno inoculado por la serpiente causante del

accidente. Las serpientes del género Bothrops del Ecuador inoculan en promedio

100 a 150 mg. de veneno, por lo tanto la cantidad de antiveneno administrada en las

primeras 24 horas debe ser la necesaria para neutralizar esa cantidad de veneno.

En caso de serpientes del género Lachesis que inoculan grandes cantidades

de veneno, las dosis de suero antiofídico administradas deben ser mayores. Es

importante que se revise la literatura proporcionada por el fabricante del antiveneno

respecto a la capacidad de neutralización y al tipo de especies para las que es

efectivo. En casos de pacientes pediátricos, la dosis de antiveneno debe ser igual a la

de un adulto, en razón de que ellos reciben mayor cantidad de veneno de acuerdo a

su peso corporal.7

2.3.2. REACCIONES

Todos los antivenenos producen reacciones adversas. Estas reacciones fueron

clasificadas por la Organización Mundial de la Salud como reacciones tardías y

reacciones tempranas, las cuales a su vez pueden ser de dos tipos: reacciones

tempranas anafilácticas y reacciones tempranas anafilactoides.

Reacciones tardías (hipersensibilidad tipo III): Las reacciones tardías

corresponden al cuadro clínico conocido como “enfermedad del suero”, una

hipersensibilidad tipo III que ocurre de 7 a 15 días después de la administración del

antiveneno. En estas reacciones, el organismo del paciente reconoce a las proteínas

7CHARRY RESTREPO, H. 2009.

http://www.scribd.com/doc/9419769/Ofidismo-Epidemiologia-del-Accidente-Ofidico-en-Colombia-Hector-Charry-

Restrepo 2009- 07

9

heterólogas como extrañas y produce una respuesta de anticuerpos en su contra. En

la fase inicial de esta respuesta hay un exceso de antígeno, por lo que se forman

complejos inmunes pequeños y solubles, que difunden y se depositan en lugares

como las membranas sinoviales y las membranas basales de glomérulo y de

endotelio.8

Reacciones anafilácticas (hipersensibilidad tipo I): Las reacciones

anafilácticas o de hipersensibilidad tipo I ocurren en pacientes que han sido tratados

con antivenenos en ocasiones previas y que, como parte de su respuesta

inmunológica contra las proteínas del antiveneno, producen anticuerpos de la clase

IgE. Estos anticuerpos se unen a receptores presentes en mastocitos y basófilos, de

modo que en una posterior exposición al antiveneno, las células sensibilizadas se

desgranulan y liberan diversos mediadores vasoactivos entre los que destaca la

histamina, favoreciendo la vasodilatación y el aumento de la permeabilidad vascular.

El resultado final puede ser urticaria, hipotensión, choque, espasmos en músculo liso,

broncoconstricción, obstrucción respiratoria, colapso respiratorio y muerte.

Reacciones anafilactoides: Son las que se observan con más frecuencia

durante la administración de antivenenos. Para que estas ocurran, a diferencia de las

reacciones anafilácticas, no se requiere exposición previa al producto. Aunque las

causas por las cuales ocurren este tipo de reacciones no son del todo comprendidas,

su inducción se ha relacionado con la actividad anticomplementaria de los

antivenenos y la presencia de anticuerpos en el antiveneno contra antígenos celulares

del paciente y anticuerpos del paciente contra las proteínas constituyentes del

antiveneno.

2.3.3. CADUCIDAD

La fecha de expiración está indicada en la etiqueta del frasco, pasado ese

tiempo y de haberse mantenido la cadena de frío, el suero puede utilizarse hasta por

un año después, debiendo en estos casos utilizarse el doble de la dosis recomendada.

8ELIZONDO J. 1987.

.Trabajo de Graduación. Facultad de Microbiología.

Universidad de Microbiología. Universidad de Costa Rica

10

En caso de que el contenido del frasco se torne opaco o exista precipitación de

proteínas es conveniente no utilizar el suero antiofídico, porque existe un alto riesgo

de producir reacciones adversas alérgicas en el paciente. Si se rompe la cadena de

frío por más de 24 horas, el suero pierde su efectividad.9

2.4. PODER NEUTRALIZANTE DEL SUERO ANTIOFÍDICO

Los anticuerpos presentes en el suero antiofídico tiene una acción

neutralizante sobre los componentes del veneno, por esto el cálculo de la dosis a

administrar debe ser de acuerdo a la capacidad neutralizante que se encuentra escrita

en el inserto o indicaciones para su uso, en cada uno de ellos. Como la cantidad de

veneno inoculado es similar en el niño o el adulto, la neutralización del mismo se

hace sin consideración de dosis por edad o peso. A niños y adultos se aplica una

dosis igual, calculada de acuerdo a la calificación de gravedad del accidente.

En el accidente leve se deben neutralizar al menos 100 mg. de veneno.

En el accidente moderado se deben neutralizar al menos 200 mg.

En el grave se deben neutralizar no menos de 300 mg.

Los sueros monovalentes contienen anticuerpos contra el veneno bothrópico.

Se recuerda que este accidente representa el 95% de los casos. Los sueros

polivalentes pueden ser para accidente bothrópico y crotálico o contener además

anticuerpos contra el veneno lachésico.

La capacidad neutralizante, como ya se expresó, es la que determina el

número de ampollas a utilizar. Es responsabilidad del MSP del Ecuador, conocer

con anterioridad el tipo y capacidad de neutralización del suero antiofídico del que

dispone en su país y lugar de trabajo.

Se han efectuado una serie de estudios de carácter experimental tendientes a

conocer la capacidad del suero polivalente para neutralizar varios efectos y

9LOMONTE, B. 1985.

Edema-forming activity of bushmaster Lachesis muta stenophrys) and Central American rattesnake (Crotalus durissus

durissus) venoms and neutralization by a polyvalent antivenom.Toxicon.

11

actividades farmacológicas de los venenos. Inicialmente se demostró que este suero

era eficaz en la neutralización del efecto letal inducido por los venenos de serpientes

de la familia Viripidae. Sin embargo, estos venenos inducen a una serie compleja de

efectos fisiopatológicos, entre los que destacan un severo cuadro de alteraciones

locales (mionecrosis, hemorragia y edema), los cuales se desencadenan pocos

minutos después de la mordedura. Posteriormente, aparecen los efectos sistémicos,

entre los que se destacan la hemorragia, la desfibrinación y otras alteraciones de la

coagulación, el choque cardiovascular y la insuficiencia renal. Estos efectos son

causados por diversos tipos de toxinas, que tienen propiedades químicas y

farmacológicas muy distintas.

La complejidad de este cuadro hace que sea insuficiente evaluar la capacidad

neutralizante de un suero únicamente con base en la neutralización del efecto letal.

La Organización Mundial de la Salud recomienda un enfoque más integral en el

estudio de los sueros y su capacidad neutralizante.

En el Instituto Clodomiro Picado se ha estudiado la capacidad neutralizante

de los sueros mediante el uso de metodología que incluye dos tipos de experimentos.

En el primer tipo, el suero se incuba con el veneno durante 30 minutos a 37ºC, antes

de inocular la mezcla en animales de experimentación. El objetivo es determinar

cuantitativamente la presencia de anticuerpos neutralizantes en el suero, sin tomar en

cuenta la farmacocinética del veneno y, a diferentes intervalos de tiempo, se

administra el suero. En este tipo de procedimiento sí se toma en cuenta la

farmacocinética del veneno y del suero, así como la rapidez con que se desencadenan

los efectos inducidos por el veneno.10

2.4.1. NEUTRALIZACIÓN DE LOS EFECTOS SISTÉMICOS

Neutralización del efecto letal: Tradicionalmente, esta neutralización se ha

estudiado mediante experimentos con preincubación de suero y veneno. Se

10LÓPEZ, N.et al. 2008.

Características de los pacientes con accidente ofídico y complicaciones infecciosas

atendidos en el Hospital Pablo Tobón Uribe entre los años 2000 y 2006.

12

hademostrado claramente que, en estas circunstancias, el suero polivalente es eficaz

en la neutralización de los venenos de las especies de la familia Viperidae.

Los estudios más recientes han permitido concluir que este suero es también

eficaz en la neutralización del efecto letal de los venenos B. asper y B. nummifer de

Honduras, de Agkistrodon bilineatus y Crotalus durissus de Guatemala, así como de

B. atrox y B. pictus del Perú y de B. atrox de Colombia. Por otra parte, cuando los

estudios de neutralización se efectúan mediante inoculación independiente de veneno

y suero se observa, en el caso del veneno de Lachesis muta melanocephala, que aún

administrando el suero con un retraso de varias horas, se logra una adecuada

neutralización de la letalidad.

Alteraciones en la coagulación: Los venenos de serpientes de la familia

Vipiridae afectan el mecanismo de la coagulación sanguínea de varias maneras. La

mayoría de estos venenos contienen enzimas tipo trombina, capaces de convertir el

fibrinógeno en fibrina. Además algunos venenos contienen enzimas que activan el

Factor X. En el organismo, estos venenos inducen un síndrome de desfibrinación,

con disminución de los niveles de fibrinógeno, aparición de los productos de

degradación de la fibrina y prolongación de los tiempos de coagulación y de

protrombina. La determinación del tiempo de protrombina se ha venido utilizando

como un índice para seguir el curso del envenenamiento.

El suero antiofídico polivalente es eficaz para neutralizar los efectos

coagulantes, fibrinolítico, fibrinogenolítico y desfibrinante de los venenos de estas

serpientes. Por otra parte, y en contraste con las observaciones de la neutralización de

efectos locales, el suero polivalente es eficiente en la neutralización de la actividad

desfibrinante del veneno de B. asper, aun cuando se administre después del

envenenamiento. Estos hallazgos concuerdan con observaciones clínicas efectuadas

con observaciones clínicas efectuadas en varios hospitales de Costa Rica, en el

sentido de que las alteraciones en el tiempo protrombina se corrigen luego de

administrado el suero antiofídico.11

11GARCÍA J, et al. 2008.

13

2.4.2. NEUTRALIZACIÓN DE LOS EFECTOS LOCALES (HEMORRAGIA,

EDEMA Y MIONECROSIS)

Hemorragia: Uno de los efectos que aparecen con mayor rapidez luego de

inocular venenos de serpientes de la familia Viperidae es la hemorragia local. Este

fenómeno se origina en la alteración drástica de la microvasculatura, especialmente

capilares y vénulas, por la acción directa de ciertos componentes de los venenos.

Estas «hemorrágicas» son proteínas de un peso molecular relativamente alto, muchas

de las cuales tienen actividad colagenasa.

El efecto hemorrágico de los venenos se cuantifica en el laboratorio mediante

la técnica de Kondo et, basada en la inoculación intradérmica del veneno y la

subsecuente medición del área hemorrágica en la piel. Porotra parte, Ownby et al.

desarrollaron un método que cuantifica la hemoglobina presente en el tejido,

asumiéndose que el efecto hemorrágico va a resultar en un aumento en la cantidad de

hemoglobina presente en el tejido.

Los estudios de Gutiérrez et al.handemostrado que el suero polivalente es

eficaz para neutralizar este efecto en experimentos con preincubación de suero y

veneno, incluso cuando el antiveneno se incuba con venenos que no son utilizados en

la mezcla antigénica para producir el suero polivalente. Este fenómeno también ha

sido observado con otros venenos y antivenenos en otras partes del mundo. Estos

resultados señalan claramente que las toxinas hemorrágicas son muy antigénicas,

capaces deinducir una respuesta elevada de anticuerposneutralizantes en los caballos

y que las hemorraginas de venenos de diferentes especies presentan epitopos

comunes.

Sin embargo, cuando los experimentos se efectúan con inoculación

independiente de suero y veneno, los resultados son diferentes. En estos

experimentos, se observó una neutralización sólo parcial del efecto hemorrágico

local cuando el suero se administró en los primeros minutos posteriores al

Características bioquímicas y evaluación preclínica de un antivenenobotrópico liofilizado contra el veneno de la

serpiente bothropsatrox. revperumedexp salud pública. 25(4). Pp 90- 386

14

envenenamiento, en tanto que casi no hubo neutralización cuando la seroterapia se

atrasó.

La explicación de este fenómeno se basa en la rapidez con la que se

desencadena la hemorragia local una vez que el veneno se ha inoculado

intramuscularmente. En cuestión de minutos se observa extravasación, lo que

obviamente dificulta la neutralización de este efecto por los anticuerpos del suero, los

cuales probablemente llegan al tejido afectado cuando el veneno ha ejercido su

efectovasculotóxico. Además, es factible que las alteraciones drásticas que produce

el veneno en los vasos sanguíneos dificulten el acceso y distribución de los

anticuerpos al área afectada.

La explicación de esta situación aparentemente paradójica es clara: el suero

tiene anticuerpos neutralizantes contra las toxinas hemorrágicas, pero la acción de

éstas es tan rápida que se dificulta mucho la neutralización en circunstancias en

donde el veneno y el suero se administran por separado.

La necrosis muscular: Los venenos de serpientes de la familia Viperidae

originan alteraciones muy drásticas en el tejido muscular. Estos venenos poseen

«miotoxinas», es decir, proteínas que afectan directamente las células musculares. La

mayoría de estas toxinas actúan directamente sobre la membrana plasmática de los

miocitos. En el caso de los venenos de las serpientes costarricenses Bothrops asper

y B. nummifer, se ha aislado varias miotoximas, las cuales inducen un cuadro

patológico similar.

Por otra parte, los venenos que inducen un efecto hemorrágico afectan

también al tejido muscular al inducir isquemia, resultante de la disminución en la

perfusión sanguínea que sobreviene como consecuencia de la destrucción de la

microvasculatura.

Tradicionalmente, el efecto miotóxico de los venenos se ha evaluado

mediante histología. En años recientes, se ha introducido la determinación de los

niveles séricos de la enzima creatina kinasa como un índice cuantitativo de la

necrosis muscular inducida por venenos. Dada la especificidad que presenta esta

15

enzima para detectar alteraciones en tejidomuscular, ha sido de suma utilidad para el

estudio del efecto miotóxico inducido por venenos y de la capacidad neutralizante de

los sueros antiofídicos.

En experimentos con preincubación, el suero polivalente es eficaz en la

neutralización del efecto miotóxico inducido por los venenos de Bothrops asper y

Lachesis muta, no ha sido investigada su capacidad neutralizante contra otros

venenos.

En el caso del veneno de B. asper, especie que produce accidentes

caracterizados por una mionecrosis evidente con lesiones permanentes, se ha

demostrado que el efecto miotóxico se debe a un grupo de cuatro miotoxinas con

pesos moleculares de alrededor de 14.000 daltons y composición de aminoácidos

muy similar. Lomonte et al lograron aislar, mediante cromatografía de

inmunoafinidad, anticuerpos antimiotoxina del suero polivalente, que neutralizan el

efecto miotóxico del veneno de B. asper cuando se preincuban con este veneno antes

de inocularse.

Los resultados experimentales obtenidos indican, por lo tanto, que el suero

polivante contiene anticuerpos eficaces en la neutralización del efecto miotóxíco del

veneno de terciopelo. Sin embargo, cuando se efectúan experimentos con

inoculación independiente de veneno y suero, la neutralización de la miotoxicidad es

sólo parcial. Esto indica que, al igual que en el caso de la hemorragia, las miotoxinas

tienen una acción tan rápida y drástica que dificulta muchísimo el éxito del

tratamiento, si el antiveneno no se administra rápidamente.

Recientemente, produjeron siete anticuerpos monoclonales contra las

miotoxinas del veneno de B. asper, algunos de los cuales demostraron tener

capacidad neutralizante. Ello plantea la posibilidad de utilizar la tecnología

dehibridomas en el desarrollo de recursos terapéuticos inmunológicos más eficaces

para neutralizar actividades tóxicas de los venenos.

El efecto edematizante: Los venenos de serpientes de la familia Viperidae

inducen un pronunciado edema local, pocos minutos después de la inoculación. Este

16

edema es causado, por un lado, por toxinas que afectan directamente la integridad de

los vasos, originando un aumento en la permeabilidad.

Pero además, los venenos inducen la liberación de varios autacoides, entre los

que se destacan la histamina, las prostaglandinas y la bradikinina , aunque también el

complemento podría desempeñar un papel de importancia. Experimentalmente, el

edema se cuantifica mediante el aumento de peso de la pata de un ratón inoculada

con veneno, comparándose con el peso de la otra pata, la cual se inyecta con solución

salina

Gutiérrez et al., efectuaron un estudio detallado sobre la capacidad del suero

antiofídico polivalente para neutralizar el edema inducido por los venenos de

serpientes costarricenses de la familia Viperidae. Los experimentos clásicos de

preincubación de suero y veneno no fueron de utilidad, ya que se observó que las

proteasas del veneno actuaban sobre proteínas presentes en el suero antiofídico,

liberándose como consecuencia péptidos capaces de inducir edema. Se desarrolló

entonces un método alterno que consiste en inyectar el suero por la vía intravenosa y,

cinco minutos más tarde, administrar el veneno en la almohadilla plantar de los

ratones, cuantificándose el edema posteriormentede la forma descrita.

Medianteeficaz en la neutralización de la actividad edematígena de los venenos de

Bothrops asper, B. schlegelii, B, lateralis, B. nummifer, Agkistrodon bilineatus y

Lachesis muta, siendo ineficiente en la neutralización del edema inducido por la

cascabel centroamericana Crotalus durissus durissus.

Se ha propuesto que los venenos cuya actividad edematígena es mal

neutralizada podrían contener toxinas de bajo peso molecular, incapaces de inducir

formación de anticuerpos cuando los venenos son inoculados en caballos. Sin

embargo, pese a que efectivamente existen componentes de bajo peso molecular

capaces de inducir edema, la mayor parte del edema inducido por venenos

costarricenses de la familia Viperidae es debido a toxinas de un peso molecular

relativamente alto.

Es importante profundizar en el estudio de este fenómeno, para obtener una

mejor comprensión de las causas de esta deficiente neutralización. Cuando el estudio

17

de la neutralización del edema se ha efectuado mediante experimentos en los que el

suero se administra a diferentes intervalos de tiempo posteriores al envenenamiento,

los resultados han sido similares a los descritos para hemorragia y mionecrosis: la

neutralización del efecto es sólo parcial, incluso cuando el suero se administra de

inmediato.

En síntesis, la neutralización de los efectos locales (hemorragia, mionecrosis

y edema) inducidos por los venenos de serpientes de la familia Viperidae plantea un

problema de difícil solución. Los hallazgos expuestos señalan claramente que el

suero polivalente tiene anticuerpos que neutralizan estos efectos, con la excepción

del edema inducido por el veneno de cascabel. Ello indica que la gran mayoría de las

toxinas hemorrágicas, miotóxicas y edematizantes son inmunogénicas y que los

caballos inmunizados desarrollan un buen título de anticuerpos contra ellas.

Sin embargo, estos efectos se desarrollan con una rapidez tal, una vez

inoculado el veneno, que cuando la administración del suero se efectúa a posteriori,

como ocurre en condiciones naturales, la neutralización de estos efectos patológicos

es sólo parcial. Esto se debe, posiblemente, a que cuando los anticuerpos

neutralizantes llegan al tejido afectado, ya se ha producido buena parte de la

destrucción tisular y de las alteraciones vasculares.

Como explicación alternativa, podría ser que la drástica destrucción de la

vasculatura por el veneno dificulte el acceso de los anticuerpos a los sitios afectados.

Esto indica que la rapidez con la que se inicie la seroterapia es un factor fundamental

en la neutralización de los efectos locales y en la disminución de las posibles

secuelas de estos efectos. Por otra parte, nuestros hallazgos experimentales han

confirmado algo que se había observado en la experiencia clínica: la administración

del sueropor la vía intravenosa es mucho más eficaz que por la vía intramuscular

para la neutralización de la mionecrosis, hemorragia y edema. Por ende, no se

justifica administrar el suero intramuscularmente, bajo condiciones de

hospitalización.12

12GUTIERREZ. J. et. al., 2009.El Suero Antiofídico Polivalente producido en Costa Rica. Instituto Clodomiro Picado.

Facultad de Microbiología. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

18

2.4.3. NEUTRALIZACIÓN DE LAS ACTIVIDADES ENZIMÁTICAS DE

LOS VENENOS

En el laboratorio del Instituto de Higiene Leopoldo Izquieta Pérez, se ha

estudiado también la capacidad del suero polivalente para neutralizar algunas

actividades enzimáticas de los venenos de serpientes. Las observaciones efectuadas

indican que el suero contiene anticuerpos que neutralizan los efectos proteolítico

(sobre diversos sustratos como caseína, fibrinógeno y fibrina), hialurodinasa y

fosfolipasa.

En el caso de la neutralización de la actividad fosfolipasa demostraron que el

suero es más eficaz contra ciertas isoenzimas que contra otras. Aunque la

neutralización de las actividades enzimáticas no necesariamente se relaciona con

actividades fisiopatológicas, su estudio permite una mejor comprensión de la

capacidad neutralizante de los sueros. Por otra parte, se ha propuesto que la actividad

hialuronidasa de los venenos juega in vivo el papel de factor de difusión degradando

glicosaminoglicanes del tejido conectivo y facilitando la difusión del veneno. Por

ello, el estudio de su neutralización es importante.13

2.5. UNIFORMIDAD Y ESTABILIDAD

DEL SUERO ANTIOFÍDICO

La concentración del suero antiofídico se modifica, antes del envasado final,

de tal manera que tenga una capacidad neutralizante, o Dosis Efectiva 50% de 3 mg

de veneno de Bothrops asper neutralizados por cada ml de suero; lo anterior se hace

GENÉ, J.A., GÓMEZ, M., Gutiérrez, J.M., Cerdas, L. Neutralization of polyvalent antivenom.

Toxicon 1985; 23: 1015-1018.

GENÉ, J.A., GÓMEZ, M., Cerdas, L.

Estudio sobre la estabilidad de la actividad neutralizante del suero antiofídico contra veneno de terciopelo (Bothrops

asper). Rev. Cost, Cienc. Méd. 1986; 7: 3-5.

13GUTIÉRREZ, J.M., ROJAS, G., CERDAS, L.

Ability of polyvalent antivenom to neutralize the venom of Lachesis muta melanocephala, a new Costa Rican subspecies

of the bushmaster.Toxicon. 1987; 25: 713- 720.

19

para que los diferentes lotes tengan una potencia neutralizante similar, y así

uniformar los protocolos de tratamiento. Dado que esta uniformidad se basa

únicamente en la neutralización del efecto letal, y dado que los venenos serpientes

producen otros efectos farmacológicos relevantes, se estudió en cinco lotes diferentes

de suero polivalente cuan uniformes son en cuanto a la neutralización de los efectos

hemorrágicos, proteolíticos y desfibrinante. Los resultados obtenidos permiten

concluir que el ámbito de variación en la capacidad neutralizante de varios lotes es

pequeño y que el suero es un producto bastante uniforme en su potencial terapéutico.

Por otra parte, ya desde los años 60 se estableció que el suero polivalente

líquido tiene un plazo de vencimiento de 3 años, en tanto que el suero liofilizado

tiene un plazo de 5 años. En lo referente al suero líquido, corroboraron el plazo de 3

años, demostrando incluso que la capacidad neutralizante del suero se prolonga

durante varios meses posteriores a la fecha de vencimiento, siempre y cuando el

producto se almacene a 4ºC.

Más recientemente, Rojas et al 1987., estudiaron la estabilidad de este suero a

diferentes temperaturas (4, 23, 30 y 37ºC) durante un año, encontrando que aún a

37ºC el suero no pierde capacidad neutralizante al cabo de un año de

almacenamiento. No obstante, estos autores observaron la aparición de turbidez en

los sueros almacenados a temperaturas de 23ºC, 30 ºC y 37 ºC. Esta turbidez se debió

a la formación de agregados de proteínas, tanto de IgG como de otras proteínas

séricas. En conclusión, es recomendable mantener el suero líquido a temperaturas de

refrigeración.14

14 http://www.binasss.sa.cr/revistas/rccm/v9n2/art7.pdf

20

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. LOCALIZACIÓN DEL ENSAYO:

La presente investigación se realizo en el serpentario de los laboratorios de salud

animal del Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical “Leopoldo

Izquieta Pérez”.

Dirección: Av. De las Américas y Juan Tanca Marengo

Parroquia: Tarqui

Cantón: Guayaquil

Provincia: Guayas

Republica: Ecuador -Sur-América.

3.1.1. COORDENADAS:

Latitud Sur 02º, 16 , 05ˮ . Longitud Oeste 79º , 54 , 06ˮ

3.2. CONDICIONES METEOROLÓGICAS

- Altura promedio: 4 m.s.n.m.

- Precipitación pluvial: 900 – 1000 mm / ano

- Características meteorológicas:

- Humedad atmosférica: 75%

- Temperatura máxima absoluta: 36 ºC

- Temperatura media anual: 25 ºC

- Temperatura mínima absoluta: 18 ºC

- Evaporación: 120 – 150 mm / mes.

Fuente: INOCAR

21

3.3. MATERIALES

3.3.1. MATERIALES BIOLÓGICOS

Lotes de sueros antiofídicos antibothrópico de más de un año de

almacenamiento.

Lotes de venenos de serpientes bothrops conservados en el serpentario.

Ratones albinos adultos de entre 17 y 18 gramos de peso.

3.3.2. MATERIALES DE LABORATORIO

Jeringas de 1,3,5 ml., con agujas No. 22 y 24

Tubos de ensayo de 10 x 20 con tapa rosca.

Gradillas

Pipetas de 1,2,3, 5, 10 ml.

Portafiltro de Nalgene de 25 mml de diámetro

Prefiltro de vidrio

Pipetero de caucho

Espátula

Solución salina de 0,85%

Algodón

Alcohol

Guantes, mascarillas, estetoscopio, termómetros, tijeras, bisturí rasuradoras.

3.3.3. EQUIPO GENERAL Y COMPLEMENTARIO:

Cajas para ratones

Balanceado para ratones

Bebederos para ratones

Rejillas para caja de ratones

Aserrín o viruta

Agua

Baño María

Tapones de caucho

Balanza de precisión de 160g. De 3 decimales.

Balanza gramera electrónica

22

3.3.4. MATERIALES DE OFICINA

Marcador permanente

Plumas, lápices,

Cinta adhesiva

Cuaderno, borrador, cartillas de observación

Computadoras

Impresoras

3.4. MÉTODOS

En esta investigación se utilizaron 24 lotes de sueros antiofídicos Bothrópicos

de las especies B. asper, B. atrox y B. xanthogramma con más de un año de

almacenamiento, ratones albinos de 3 a 4 semanas de edad. El efecto neutralizante de

los sueros se determinó mediante la prueba de neutralización (suero-veneno) en

ratones.

3.4.1. RECOLECCIÓN DEL SUERO ANTIOFÍDICO

Se obtuvo de lotes de sueros antiofídicos de más de un año de almacenamiento,

los cuales se encuentran a temperatura de refrigeración a 4ºC en el serpentario del

Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical “Leopoldo Izquieta Pérez”.

3.4.2. PESAJE DE LOS RATONES

Los ratones se pesaron en una balanza gramera, registrando un peso de 17-18g,

se los colocó en una caja plástica con sus respectivos bebederos y alimento.

3.4.3. INCUBACIÓN E INOCULACIÓN DE SUERO Y VENENO

1. El suero y el veneno se incubaron a una temperatura de 37ºC, durante 30

minutos.

2. Una vez realizadas las diluciones de la diferentes concentraciones que contengan

4 Dl 50 (250 mg.) de veneno bothrópico. Se procedió a inocular a cada ratón con

0,5 ml por vía intraperitoneal.

23

3. Los ratones se colocaron con suficiente agua y comida en sus cajas debidamente

identificadas.

4. Los ratones experimentales fueron observados por 24, 48,y 78 h, anotando los

muertos durante ese periodo.

5. Finalmente se calculó la potencia neutralizante de los sueros en base al

porcentaje de próbito y porcentaje de mortalidad.

3.4.4. POTENCIA NEUTRALIZANTE

Para la determinación de la potencia neutralizante, se estableció en primera instancia

la dosis alcanzada en referencia al número de ratones vivos y la cantidad de suero

inoculado. Cada lote de suero antiofídico polivalente, debía tener dosis mínima de

2,5 mg/ml en cada especie, para su aprobación o descarte como suero efectivo.

3.4.6. RECOLECCIÓN DE DATOS

Se recogen en cartillas de apuntes y las tablas respectivas, que básicamente refieren

a la determinación de la potencia neutralizante, dosis aplicada, síntomas y signos

clínicos.

3.4.7. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Los métodos de comprobación y presentación se refieren básicamente al estadístico

en la representación de gráficos, tablas y curvas.Para el análisis estadístico de los

resultados obtenidos, se determinó la desviación estándar de los lotes de sueros

antiofídicos analizados, bajo la siguiente fórmula:

24

IV. RESULTADOS

4.1. POTENCIA NEUTRALIZANTE

En los 24 lotes de sueros Bothrópicos antiofídicos analizados; de más de un año de

almacenamiento; se verificó la eficacia de la potencia neutralizante, obteniendo como

resultado el 67% de efectividad en los mismos, mientras que el 33% se reportan

como no válidos o no aprobados para su administración. (Figura 1). El cuadro

muestra los valores correspondientes para la potencia neutralizante de los sueros

antiofídicos de la especie Bothrops.

CUADRO 1. POTENCIA NEUTRALIZANTE DE LOS SUEROS

ANTIOFÍDICOS DEL GÉNERO Bothrops DE MÁS DE UN AÑO

DE ALMACENAMIENTO

LOTES ENCONTRADOS

(n)

PORCENTAJE

(%)

APROBADOS 16 67%

NO APROBADOS 8 33%

TOTAL 24 100%

FIGURA 1. POTENCIA NEUTRALIZANTE DE LOS SUEROS


DE ALMACENAMIENTO

25

4.1.1. POTENCIA NEUTRALIZANTE DE SUEROS ANTIOFÍDICO DEL

GÉNERO BOTRHOPS POR ESPECIE

En los sueros antiofídicos de las tres especies analizadas, se encontró que B. asper

posee un 67% de lotes aptos, B. atrox con el 50% y B. xanthograma con el 58% de

sueros eficaces para su administración (Figura 2). El cuadro muestra la potencia

neutralizante de sueros antiofídicos del Género Bothrops de más de un año de

almacenamiento por especie.



DE ALMACENAMIENTO POR ESPECIE

Especie Aprobados % Aprobados Reprobados % No aprobados

B. asper 16 67% 8 33%

B. atrox 12 50% 12 50%

B. xanthograma 14 58% 10 42%

Total 42 58,3% 30 41,7%




26

4.1.2. POTENCIA NEUTRALIZANTE DE SUEROS ANTIOFÍDICO DEL

GÉNERO BOTHROPS POR AÑO DE ALMACENAMIENTO

En los dos años de almacenamiento (2009 y 2010) de los sueros antiofídicos

analizados, se encontró valores idénticos para ambos periodos, dando como resultado

un 67% de lotes aprobados y un 33% como no aprobados para su utilización (Figura

3). El cuadro 3 muestra las cifras correspondientes a la potencia neutralizante de

sueros antiofídicos del género Botrhops por año de almacenamiento.


ANTIOFÍDICOS DEL GÉNERO Bothrops POR AÑO DE

ALMACENAMIENTO

AÑO APROBADOS % APROBADOS REPROBADOS % REPROBADOS

2009 8 67% 4 33%

2010 8 67% 4 33%

Total 16 67% 8 33%




27

4.1.3. DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA POTENCIA NEUTRALIZANTE

DE SUEROS ANTIOFÍDICOS DEL GÉNERO Bothrops

Según el periodo de almacenamiento de 2 años de los lotes de sueros antiofídicos

bothrópicos, se encontró una desviación estándar global de ± 0,50 mg/ml (Figura 4),

para la potencia neutralizante de los mismos. De acuerdo a la especie la desviación

estándar para el B. asperes de ± 0,46 mg/ml, para el B. atrox ± 0,50 mg/ml, y para

B xanthograma es de ± 0,55 mg/ml. (Figura 4). El cuadro 4 muestra los valores

correspondientes a la desviación estándar en la potencia neutralizante por especie de

en los suero antiofídicos de más de una año de almacenamiento.

CUADRO 4. DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA POTENCIA

NEUTRALIZANTE DE LOS SUEROS ANTIOFÍDICOS DEL

GÉNERO Bothrops

Especies N° de lotes Media Desviación Estándar

B. asper 24 2,45mg/ml ± 0,46mg/ml

B. atrox 24 2,3 mg/ml ± 0,50mg/ml

B. xanthogramma 24 2,5mg/ml ± 0,55mg/ml

Global 2,48 mg/ml ± 0,50mg/ml

FIGURA 4. DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA POTENCIA

NEUTRALIZANTE DE LOS SUEROS ANTIOFÍDICOS DEL

GÉNERO Bothrops

28

4.1.4. DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA POTENCIA NEUTRALIZANTE

DE SUEROS ANTIOFÍDICOS DEL GÉNERO BOTHROPS DE

ACUERDO A LOS AÑOS DE ALMACENAMIENTO

Las fluctuaciones de acuerdo a los años de almacenamiento presentan variaciones

similares entre las tres especies bothrópicas bajo estudio. Así se reporta que para el

B. aspery B. atrox presentan una desviación a los 2 años de ±0,6 mg/ml; y al año

±0,4 mg/ml. A diferencia de B. xanthogramma que presenta una desviación

estándar a los 2 años de almacenamiento de ±0,7 mg/ml. (Figura 5). El cuadro 5

muestra los valores correspondientes a la desviación estándar de la potencia

neutralizante de sueros antiofídicos bothrops por años de almacenamiento.

CUADRO 5. DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA POTENCIA

NEUTRALIZANTE DE LOS SUEROS ANTIOFÍDICOS

Bothrops POR AÑOS DE ALMACENAMIENTO

Años de almacenamiento B. asper B. atrox B. xanthogramma

2 años ±0,6 ±0,6 ±0,7

1 año ±0,4 ±0,4 ±0,4

Global ±0,5 ±0,5 ±0,55

FIGURA 5. DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA POTENCIA

NEUTRALIZANTE DE LOS SUEROS ANTIOFÍDICOS

Bothrops POR AÑOS DE ALMACENAMIENTO

29

V. DISCUSIÓN

El 67% de los lotes de sueros Antibothrópicos analizados fueron aprobados como

efectivos para su aplicación en casos de mordeduras de serpientes, resultado que

respalda lo enunciado por la revista médica electrónica venezolana (SERPIENTES

DE VENEZUELA, 2012), donde se especifica que los sueros antiofídicos pueden ser

utilizados aún con fecha de vencimiento, y en tales casos, se usarán dosis mayores.

Por otra parte Gutiérrez, J. 2009en su publicación “El Suero Antiofídico Polivalente

producido en Costa Rica” manifiesta que desde los años 60 se estableció que los

sueros antiofídicos polivalentes líquidos tienes un plazo de vencimiento de 3 años,

demostrando incluso que la capacidad neutralizante del suero se prolonga durante

varios meses posteriores a la fecha de vencimiento, siempre y cuando el producto se

almacene a 4 ºC.

Para la potencia neutralizante de los sueros bothrópicos por especie, se demuestra

que B. asper posee un porcentaje levemente superior de lotes efectivos frente a las

otras especies bajo estudio, análisis que concuerda por lo manifestado por Elizondo

J, 1987 en su investigación de Tesis “Sueros antiofídicos Polivalente de Costa Rica”,

donde los resultados obtenidos permiten concluir que el ámbito de variación en la

capacidad neutralizante de varios lotes es pequeño y que el suero es un producto

bastante uniforme en su potencial terapéutico. Charry R. 2006, en su artículo

“Aspectos biomédicos del Accidente Bothrópico” propone que las variaciones en la

composición de los anti-venenos están fuertemente ligadas a factores geográficos y

climáticos además de los específicos, y por este motivo concluye que los sueros

antiofídicos de una determinada región serán ineficaces frente al veneno de

serpientes extranjeras.

En la evaluación de la potencia neutralizante de los sueros antibothrópicos por años

de almacenamiento se demuestra que existen valores idénticos tanto para los lotes

del 2009 como para los del 2010, donde el 67% se registran como aprobados y el

33% como no aprobados para su utilización, esto podría explicarse dado que la

desviación estándar anual y bianual corresponde a un promedio de ±0,5 mg/ml,

siendo la tendencia decreciente a menor número de años, donde se reporta una

30

desviación de ±0,4 mg/ml. Bajo este panorama también se suma el leve descenso de

la potencia neutralizante de las especies B. atrox y B. xanthograma con desviaciones

que van del ±0,50 mg/ml al ±0,55mg/ml respectivamente.

Con tales antecedentes, la presente investigación de tesis descarta las hipótesis “El

estudio de la potencia neutralizante en lotes de suero antiofídico de más de un año de

caducidad, establecerá que los mismos son seguros para ser suministrados a los

afectados con mordeduras de serpientes” y “La aplicación de un suero antiofídico

caducado, tendrá la eficacia suficiente en su poder neutralizante, y no causaría

reacciones adversas negativas en la salud”, por los resultados anteriormente

mencionados.

31

VI. CONCLUSIONES

En base a los resultados se plantea las siguientes conclusiones:

1. El 67% de sueros antiofídicos bothrópicos con más de un año de almacenamiento

son considerados como efectivos para su administración en caso de mordedura de

serpientes.

2. B. asper es la especie que mayor índice de porcentaje presenta en su potencia

neutralizante para la aplicación de suero antiofídico con un 67%.

3. Por años de almacenamiento, el número de lotes efectivos es igual en ambos

periodos de tiempo (2009 y 2010).

4. En 2 años de almacenamiento de los sueros antiofídicos bothrópicos bajo

estudio, se determinó una desviación estándar global de ± 0,50mg/ml, anual de ±

0,40mg/ml y bianual de ± 0,66mg/ml.

5. La especie con mayor rango de desviación fue B. xanthogramma con ±

0,55mg/ml

32

VII. RECOMENDACIONES

Luego de la investigación efectuada se puede indicar las siguientes recomendaciones:

- Efectuar controles de almacenamiento para evitar condiciones que afecten la

conservación de los lotes de sueros antiofídicos y a su vez la capacidad

neutralizante necesaria para su administración en casos de mordeduras de

serpientes.

- Realizar investigaciones que profundicen en la determinación de efectos

colaterales con la aplicación de diferentes métodos y pruebas que respalden la

información obtenida.

- Desarrollar análisis anuales para comprobar el estado de los lotes de sueros

antiofídicos y la efectividad de los mismos.

- Elaborar protocolos de estandarización para métodos, pruebas de control,

almacenamiento y utilización de sueros antiofídicos, para evitar el manejo

incorrecto de los productos ofídicos.

33

VIII. RESUMEN

En el serpentario de los laboratorios de salud animal del “Instituto Nacional de

Higiene y Medicina Tropical “Leopoldo Izquierda Pérez” de la ciudad Guayaquil, se

realizaron los ensayos para realizar el “Estudio de la Potencia Neutralizante en Lotes

de sueros antiofídicos de más de un año de almacenamiento”, proponiendo como

objetivos: verificar la eficacia de la potencia neutralizante en lotes de sueros

antiofídicos almacenados. Tomando como variable independiente: los sueros

antiofídicos bothrópicos almacenados bajo estudio (B. asper, B. atrox y B.

xanthogramma), y como variable independiente: El estudio de la potencia

neutralizante.

Al efectuar el análisis de la potencia neutralizante de los 24 lotes de sueros

antiofídicos bothrópicos se pudo determinar mediante el método de desviación

estándar que el 67% son efectivos para su administración en casos de mordedura de

serpientes. Las especies con mayor cantidad de sueros efectivos fueron B. aspery B.

xanthrograma. Por años de almacenamiento de los sueros anitofídicos bothrópicos

bajo estudio, se determinó que el número de lotes efectivos es igual en ambos

periodos de tiempo (2009 y 2010), y que presentan una desviación estándar global de

± 0,50 mg/ml.

En la presentación de efectos secundarios, se demostró que el 89 % de aquellos

antivenenos probados eran positivos, la especie con la condición más alta era B.asper

con el 89 %, B.atrox y B. xanthogramma con el 33 %. Con estos resultados se

podría despedir la hipótesis “ el estudio de neutralizar la potencia de las hornadas de

antiveneno de más de un año duración, y establecer que ellos son aptos para ser

proporcionados a los afectados por mordeduras de serpientes“ “ y el Uso de un

antiveneno expirado, va a eficaz en la neutralización del veneno, y no causaría

efectos secundarios negativos sobre la salud “

Palabras clave: Bothrops, B. asper, b. atrox, b. xanthogramma, Potencia

Neutralizante.

34

IX. SUMMARY

The snake of animal health laboratories “National Institute of Hygiene and Tropical

Medicine” Leopoldo Perez Left “city Guayaquil, trials were conducted for the”

Study of the Bulk Power neutralizing antivenom over a storage year „, proposing

objectives: to verify the effectiveness of the neutralizing power antivenom batches

stored and discarded if the supply of stored antivenoms cause negative side effects on

the lives of affected snakebite. Taking as an independent variable: the bothropicos

antivenoms stored under study (B. asper, B. atrox and B. xanthogramma), and as

independent variables: The study of the neutralizing power.

Upon analysis of the neutralizing power of the 24 batches of antivenom bothrópicos

it was determined that 67% are effective for administration of snake bite cases . The

species with the most effective sera were B. asper and B. xanthrograma. For years

storage bothropicos anitofídicos sera under study, it was determined that the actual

number of lots is equal in both time periods (2009 and 2010), and having a global

standard deviation ± 0.50 mg / ml.

In the presentation of side effects, it was shown that 89% of those tested were

positive antivenoms, among them the species with the highest condition was B. with

89% atrox and B. xanthogramma with the lowest value of 33%. From the results it

could dismiss the hypothesis “The study of neutralizing potency of antivenom

batches of more than one year shelf life, establish that they are safe to be provided to

those affected by snake bites” and “Application an antivenom expired, will

sufficiently effective in neutralizing power, and would not cause negative side effects

on health “

Keywords: Bothrops, B. asper, b. atrox, b. xanthogramma, neutralizing potency.

35

X. BIBLIOGRAFÍA

ACOSTA P., et al. (2004). Aislamiento y caracterización parcial de fosfolipasa A2

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http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0303%2032952004000300010&lng=es&nrm=iso

http://www.iics.una.py/n/pdf/revista/21.pdf%202009-%2008

38

VIII. ANEXOS

39

ANEXO 1. Protocolos de observación para inoculación de lotes de sueros

antiofídicos con más de un año de almacenamiento.

PRUEBA 1: sero neutralización del suero antiofídico producido en el Instituto Nacional de

Higiene L.I.P.

LOTE: 111

Fecha de Exp.: 07 – 2010

Vía de inoculación: Intraperitoneal

Cantidad inoculada: 0.6 ml.

DL50 Inoculadas: 4 de 300 mg.

Animales usados: Ratones blancos entre 17 – 18 gramos

Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

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2

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3

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4

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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3

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4

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5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

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5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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4

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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3

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4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

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5

X

40

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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4

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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3

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4

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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√

2

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√

3

X

4

X

5

X

41

PRUEBA 2: sero neutralización del suero antiofídico producido en el Instituto

Nacional de Higiene L.I.P.

LOTE: 108






Observación:

B. asper

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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4

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5

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NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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3

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4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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4

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5

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NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

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2

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3

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4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

X

5

X

42

B. xanthograma

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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4

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5

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NIVEL

#

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24 H

48 H

72 H

3.

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3

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5

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43



LOTE: 107




DL50 Inoculadas: 4 - 250 mg.


Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

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2.

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

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3.

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2

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3

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5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

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5

X

44

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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NIVEL

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2.

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

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3.

1

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3

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4

X

5

X

45



LOTE: 106






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

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2.

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NIVEL

# ANIMALES

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3.

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5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

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3.

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5

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B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

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X

5

X

47



LOTE: 104






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

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X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

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48

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

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72 H

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NIVEL

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3.

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3

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4

X

5

X

49



LOTE: 102

Fecha de Exp.: 10-2009





Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

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# ANIMALES

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72 H

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B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

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72 H

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NIVEL

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24 H

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72 H

3.

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3

X

4

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5

X

50

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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3

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

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5

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√

51



LOTE: 101






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

X

2

X

3

X

4

X

5

X

52

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

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√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

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√

2

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√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

X

2

X

3

X

4

X

5

X

53

PRUEBA 8:sero neutralización del suero antiofídico producido en el Instituto


LOTE: 100






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

54

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

X

3

X

4

X

5

X

55



LOTE: 99

Fecha de Exp.: 02-03-2010





Observación:

B. asper

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

X

2

X

3

X

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

X

2

X

3

X

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

X

2

X

3

X

4

X

5

X

56

B. xanthograma

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

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√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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√

2

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√

3

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4

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√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

57



LOTE: 98






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

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√

4

√

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√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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√

√

2

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√

3

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√

√

4

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√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

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√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

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√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

58

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

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√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

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√

3

X

4

X

5

X

59

Prueba 11: sero neutralización del suero antiofídico producido en el Instituto


LOTE: 97

Fecha de Exp.: 03/2019





Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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√

2

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√

3

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√

4

√

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√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

X

2

X

3

X

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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√

2

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√

3

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4

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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√

3

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4

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√

5

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√

60

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

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√

2

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√

3

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√

4

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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3

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4

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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√

3

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√

4

√

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√

5

√

√

√

61



LOTE: 96

Fecha de Exp.: 07 - 2019





Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

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√

2

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√

3

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4

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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3

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4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

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√

3

X

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

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√

2

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√

3

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√

4

√

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

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√

3

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√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

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√

3

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√

√

4

X

5

X

62

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

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√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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√

3

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√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

X

3

X

4

X

5

X

63



LOTE: 95






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

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4

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

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√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

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√

3

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√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

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√

2

√

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√

3

√

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√

4

√

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√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

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2

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√

3

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4

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√

5

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√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

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√

2

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√

3

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4

√

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√

5

X

64

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

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√

2

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√

3

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4

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√

5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

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2.

1

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2

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3

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4

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5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

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3.

1

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2

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3

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√

4

√

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√

5

√

√

√

65



LOTE:108






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

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√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

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2

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√

3

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4

√

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√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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√

3

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√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

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2

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3

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4

√

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√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

66

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

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4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

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2

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3

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4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

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2

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√

3

√

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4

√

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√

5

X

67



LOTE:107






Observación:

B. asper

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

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√

3

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4

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√

5

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√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

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2

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√

3

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√

4

X

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

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√

5

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√

B. atrox

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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2

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3

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4

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√

5

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√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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4

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5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

√

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√

5

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√

68

B. xanthograma

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

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√

√

2

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√

3

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4

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√

5

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√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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2

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4

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√

5

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√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

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√

5

√

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√

69



LOTE: 106






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

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2

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3

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5

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NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

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3

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4

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5

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√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

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2

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3

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4

√

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√

5

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

70

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

71



LOTE: 104






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

X

3

X

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

72

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

X

3

X

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

73



LOTE:102

Fecha de Exp.: 10 - 2009





Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

74

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

75



LOTE:101






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√ √ √

5

√ √ √

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

76

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

77



LOTE:100






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√ √

4

√

√

√

5

X

78

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√ √ √

3

√ √ √

4

√ √ √

5

√ √ √

79



LOTE: 99

Fecha de Exp 02-03-2010





Observación:

B. asper

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√ √

√

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

B. atrox

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√ √ √

4

√ √ √

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√ √

√

2

√ √

√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

80

B. xanthograma

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

81



LOTE: 98






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

X

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

X

3

X

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

82

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

X

3

X

4

X

5

X

83



LOTE: 97






Observación:

B. asper

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

84

B. xanthograma

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

# ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

85



LOTE: 96






Observación:

B. asper

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

B. atrox

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

X

5

X

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

86

B. xanthograma

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

1.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

2.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

NIVEL

#

ANIMALES

24 H

48 H

72 H

3.

1

√

√

√

2

√

√

√

3

√

√

√

4

√

√

√

5

√

√

√

87

ANEXO 2. Protocolos de resultados para inoculación de lotes de sueros

antiofídicos con más de un año de almacenamiento.

PROTOCOLO DE RESULTADOS # 1

Prueba de seroneutralización del suero antiofídico producido en el Instituto Nacional de Higiene L.I.P.

Prueba N°: 1

Fecha de Inicio: 30/08/2011

Fecha de

terminación: 02/09/2011

Lote: 111


Vía de inoculación:

Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.6 ml

DL50

Inoculadas:

4/300 ug

Animales usados:

Ratones blancos entre 17-18 granos

A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 4 1 2.6 mg/ml

NIVEL 3 4 1

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 2 3

Conclusión:

__________________________________________________________________________

88



Prueba N°: 2


Fecha de


Lote: 108



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 3 2

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 1 4

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

89



Prueba N°: 3


Fecha de


Lote: 107



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 3 2

Conclusión:

__________________________________________________________________________

90



Prueba N°: 4


Fecha de


Lote: 106



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 3 2

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 3 2

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 2 3

Conclusión:

__________________________________________________________________________

91



Prueba N°: 5


Fecha de


Lote: 104



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 1 4

Conclusión:

__________________________________________________________________________

92



Prueba N°: 6


Fecha de


Lote: 102



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 2 3

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

93



Prueba N°: 7


Fecha de


Lote: 101



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 3 2

B. atrox

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 2 mg/ml

NIVEL 3 0 5

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 2 mg/ml

NIVEL 3 0 5

Conclusión:

__________________________________________________________________________

94



Prueba N°: 8


Fecha de


Lote: 100



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 3 2 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 1 4

Conclusión:

__________________________________________________________________________

95



Prueba N°: 9


Fecha de


Lote: 99



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 0 5

B. atrox

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 2 3 1 mg/ml

NIVEL 3 0 5

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 2 3

Conclusión:

__________________________________________________________________________

96



Prueba N°: 10


Fecha de


Lote: 98



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 2 3

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 3 2

B. xanthograma

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 2 3

Conclusión:

__________________________________________________________________________

97



Prueba N°: 11


Fecha de


Lote: 97

Fecha de Exp.: 03/2009


Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 2 mg/ml

NIVEL 3 0 5

B. atrox

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

98



Prueba N°: 12


Fecha de


Lote: 96



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 3 2 2 mg/ml

NIVEL 3 2 3

B. atrox

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 4 1 2 mg/ml

NIVEL 3 1 4

B. xanthograma

NIVEL 1 4 2

NIVEL 2 3 2 1,6 mg/ml

NIVEL 3 1 4

Conclusión:

__________________________________________________________________________

99



Prueba N°: 13


Fecha de


Lote: 111



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

100



Prueba N°: 14


Fecha de


Lote: 108



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 3 2

NIVEL 2 2 3 2 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 3 2


NIVEL 3 2 3

B. xanthograma

NIVEL 1 3 2

NIVEL 2 3 2 2 mg/ml

NIVEL 3 4 1

Conclusión:

__________________________________________________________________________

101



Prueba N°: 15


Fecha de


Lote: 107



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

102



Prueba N°: 16


Fecha de


Lote: 106



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

103



Prueba N°: 17


Fecha de


Lote: 104



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 3 2


NIVEL 3 1 4

B. atrox

NIVEL 1 3 2


NIVEL 3 3 2

B. xanthograma

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 4 1

Conclusión:

__________________________________________________________________________

104



Prueba N°: 15


Fecha de


Lote: 102



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

105



Prueba N°: 19


Fecha de


Lote: 101



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 3 2


NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

Conclusión:

__________________________________________________________________________

106



Prueba N°: 20


Fecha de


Lote: 100



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 4 1

Conclusión:

__________________________________________________________________________

107



Prueba N°: 21


Fecha de


Lote: 99



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 4 1

NIVEL 2 3 2 2 mg/ml

NIVEL 3 3 2

B. atrox

NIVEL 1 4 1

NIVEL 2 2 3 2 mg/ml

NIVEL 3 4 1

B. xanthograma

NIVEL 1 2 3


NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

108



Prueba N°: 22


Fecha de


Lote: 98



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 2 3


NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 1 4

Conclusión:

__________________________________________________________________________

109



Prueba N°: 23


Fecha de


Lote: 97



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 5 0


NIVEL 3 3 2

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

110



Prueba N°: 24


Fecha de


Lote: 96



Intraperitoneal

Cantidad inoculada:

0.5 ml

DL50

Inoculadas:

4/250 ug

Animales usados:


A. VIVOS A. MUERTOS

NIVEL DE

NEUTRALIZACIÓN

mg/ml

B. asper

NIVEL 1 4 1


NIVEL 3 5 0

B. atrox

NIVEL 1 3 2


NIVEL 3 5 0

B. xanthograma

NIVEL 1 5 0

NIVEL 2 5 0 3 mg/ml

NIVEL 3 5 0

Conclusión:

__________________________________________________________________________

111


Prueba de seroneutralización del suero antiofídico producido en el

instituto Nacional de Higiene L.I.P.

LOTE # 111

FECHA DE CADUCIDAD: 07 - 2010

RESULTADO: Neutraliza 2.6 mg/ml de veneno de B. asper; 2.4 mg/ml

de veneno de B. atrox y 2.7 mg/ml de veneno de B. xanthograma

OBSERVACIONES: Aprueba porque neutraliza 2.5 mg/ml de cada

veneno.

112




LOTE # 108





veneno.

113




LOTE # 107





veneno.

114




LOTE # 106





veneno.

115




LOTE # 104





veneno.

116




LOTE # 102





veneno.

117




LOTE # 101




OBSERVACIONES: No aprueba porque no neutraliza 2.5 mg/ml de

cada veneno.

118




LOTE # 100





veneno.

119




LOTE # 99

FECHA DE CADUCIDAD: 02 – 03 - 2010




cada veneno.

120




LOTE # 98

FECHA DE CADUCIDAD: 02 – 03 - 2010




cada veneno.

121




LOTE # 97





veneno.

122




LOTE # 96





cada veneno.

123




LOTE # 111

FECHA DE CADUCIDAD: 07-2010




veneno.

124




LOTE # 108


RESULTADO: Neutraliza 2 mg/ml de veneno de B. asper; 1.8 mg/ml de

veneno de B. atrox y 2 mg/ml de veneno de B. xanthograma


cada veneno.

125




LOTE # 107





veneno.

126




LOTE # 106





veneno.

127




LOTE # 104


RESULTADO: Neutraliza 1,8 mg/ml de veneno de B. asper; 1.6 mg/ml

de veneno de B. atrox y 1,8 mg/ml de veneno de B. xanthograma


cada veneno.

128




LOTE # 102





veneno.

129




LOTE # 101


RESULTADO: Neutraliza 2,6 mg/ml de veneno de B. asper; 2,8 mg/ml



veneno.

130




LOTE # 100





veneno.

131




LOTE # 99

FECHA DE CADUCIDAD: 02-03-2010

RESULTADO: Neutraliza 2 mg/ml de veneno de B. asper; 2 mg/ml de

veneno de B. atrox y 1,8 mg/ml de veneno de B. xanthograma


cada veneno.

132




LOTE # 98

FECHA DE CADUCIDAD: 02-03-2010




cada veneno.

133




LOTE # 97





veneno

134




LOTE # 96





veneno

135

ANEXO 3. Protocolos de resultados para pruebas de hipersensibilidad como

efectos adversos por inoculación de sueros antiofídicos de más de

una año de almacenamiento.

LOTE

B. asper B. asper B. asper

Hipersensibilidad Hipersensibilidad Hipersensibilidad

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo

4 +

+

+

13

- +

-

15

- +

-

16

- +

-

18

-

-

-

19 +

+

+

20 +

+

+

23 +

+

-

24 +

+

-

TOTAL 5 4 8 1 3 5

136

ANEXO 3. Protocolos de resultados para dosis de potencia neutralizante por

inoculación de sueros antiofídicos de más de una año de

almacenamiento.

# Muestra LOTE ESPECIE AÑO CADUCIDAD RESULTADO CALF

1

111 B. asper 2010 2,6 Aprobado

111 B. atrox 2010 2,4 Reprobado

111 B. xanthograma 2010 2,7 Aprobado

2



108 B. xanthograma 2010 3 Aprobado

3


107 B. atrox 2010 2,6 Aprobado

107 B. xanthograma 2010 2,4 Reprobado

4




5

104 B. asper 2010 3 Aprobado



6




7


101 B. atrox 2009 2 Reprobado

101 B. xanthograma 2009 2 Reprobado

8


100 B. atrox 2009 3 Aprobado


9

99 B. asper 2010 1,4 Reprobado



10




11

97 B. asper 2009 2 Reprobado



12




13 111 B. asper 2010 3 Aprobado


137


14




15




16




17




18




19




20




21




22




23




24




138

Figura 1. Jaula de ratones experimentales

León José. 2013 Tesis de Grado

Figura 2. Lotes de sueros antibothrópicos


139

Figura 3. Pesaje de sueros antiofídicos de más de una año de almacenamiento


Figura 4. Pesaje de sueros antiofídicos de más de una año de almacenamiento


140

Figura 5. Desinfección de ratones e inoculación vía intraperitoneal de suero

antibothrópicos.


Figura 6. Inoculación vía intraperitoneal de sueros antibotrhópicos de más de

una año de almacenamiento.


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