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UNIVERSIDAD DE GUADALAJARACENTRO UNIVERSITARIO DE LA CIÉNEGA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA VIDA

Manual de Prácticas para

Bioquímica I

(FB 206)

Fecha de Actualización 27.11.2008

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Índice

I. Reglamento General del Laboratorio............................................................................3II. Seguridad .....................................................................................................................4III. Comportamiento en el Laboratorio en General ............................................................5IV. Manejar Sustancias Peligrosas ....................................................................................6V. Reglamento Interno ......................................................................................................7VI. Evaluación de las Prácticas..........................................................................................7VII. Protocolo ......................................................................................................................8VIII. Examen ........................................................................................................................8Práctica No. 1: Buffer y pH ...................................................................................................9Práctica No. 2: Espectrofotómetro ......................................................................................13Práctica No. 3: Desnaturalización de Enzimas ...................................................................16Práctica No. 4: Cinética enzimática ....................................................................................20Práctica No. 5: Azúcares reductores...................................................................................24Práctica No. 6: Ácidos grasos insaturados .........................................................................27

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I. Reglamento General del LaboratorioEl profesor de la práctica deberá:

- Estar presente durante todo el desarrollo de la práctica- Mantener la disciplina de sus estudiantes durante la práctica

Todo el personal que ingrese al laboratorio deberá portar el material de protecciónpersonal como:

- Bata (blanca, limpia, de algodón y manga larga)- Pantalones (largos)- Zapatos cerrados y de piso; preferiblemente de cuero- Guantes adecuados dependiendo de los reactivos y de las actividades. Con guantes

nunca se toca algo fuera del experimento. Véase a las "IdS Guantes"- Cubre-bocas, cofias, mascarillas y/o gafas de seguridad en casos necesarios

Además deberá:- Familiarizarse con la ubicación de los elementos de seguridad como extintor, puertas

de emergencia, duchas de emergencia, lava-ojos, botiquín de primeros auxilios etc.,así como los números telefónicos de emergencia

- Sujetar el cabello y no usar gorra- Traer uñas cortas y sin esmalte- No maquillarse durante el desarrollo de la práctica ni manipular lentes de contacto- No comer, beber, masticar chicle- No fumar- No llevarse objetos a la boca como lápices o dedos- Lavarse las manos antes de entrar y de salir del laboratorio

Está prohibido portar la indumentaria de protección personal fuera del laboratorioNo almacenar alimentos o bebidas para el consumo humano en el laboratorioEstá prohibido el ingreso al laboratorio a personas no autorizadas, p.ej. niños o visitasCualquier incidente en el laboratorio reportarlo inmediatamente al responsableLos estudiantes no podrán salir del laboratorio durante la práctica a menos que sea muy

necesarioEstá prohibido bloquear las rutas de evacuaciónToda sustancia química será etiquetada, clasificada y almacenada de acuerdo a la

normatividad existente (véase "Registro de Sustancias Peligrosas")Toda sustancia química no deberá ser eliminada directamente al desagüe sin antes

consultar las Fichas de Datos de Seguridad (véase "Registro Residuos Peligrosos")El responsable del laboratorio levantará un reporte cuando no se cumple con lo indicado

en este reglamento

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II. SeguridadPara entrar a las prácticas de bioquímica, cada estudiante tiene que conocer y cumplir lasreglas de seguridad en el laboratorio. Información sobre el comportamiento en general sepuede encontrar muy detallado en la página webhttp://radio.cuci.udg.mx/bch/ES/Sicherheit/index.html y breve en los puntos"III: Comportamiento en el Laboratorio en General" y "IV: Manejar Sustancias Peligrosas"de este manual.También es obligatorio para el estudiante de informarse sobre los riesgos potenciales queprovienen de los reactivos y procedimientos que se aplicarán *antes* de que se lleven acabo las prácticas. Información y documentos de pdf para bajar e imprimir se encuentratambién en dicha página de internet como el "Registro de Sustancias Peligrosas","Instrucciones de Seguridad (IdS)" y "Fichas de Datos de Seguridad" (FDS) para lassustancias que se utilizarán.

En el caso de no cumplir las reglas de seguridad, el estudiante tiene que salir de la prácticainmediatamente y se evaluará este práctica con cero puntos. En casos graves (p.ej.causando accidentes con heridos) y de intención el estudiante puede ser excluido de lasprácticas para todo el semestre.

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III. Comportamiento en el Laboratorio en GeneralUsar una bata de algodón, manga larga, abotonada y limpia para

protegernos contra contaminaciones" para no contaminar el exterior, nunca se utiliza la bata fuera del

laboratorio" batas sucias traen el peligro de contaminarse uno mismo

Usar zapatos cerrados (no sandalias) y seguros para caminar (sin tacón)" en verano se puede traer un par de zapatos adicionales adecuados

para el laboratorio

Usar material de seguridad personal (gafas, guantes, etc.), cuando esindicado

NO fumarNO comer, beber, maquillarseNO alcohol u otras drogasNO móvil/celular

No desarrollar experimentos peligrosos solos en el laboratorioNo correr ni jugar en el laboratorioNo recibir visitas personales en el laboratorioNo dejar bolsas o ropa en el laboratorioSiempre dejar el laboratorio limpio y ordenado- su material (quitar escrituras y adhesivos)- los equipos (p.ej. centrífuga)- su lugar de trabajo y lugares comunes (p.ej. campana, lavabo)Avisar:- situaciones peligrosas- mal funcionamiento de equipos y/o- terminación de reactivosal Responsable del Laboratorio

Lavarse las manos después del trabajo y ponerse crema para la piel

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IV. Manejar Sustancias PeligrosasEs obligatorio informarse sobre los riesgos específicos de sustancias

peligrosas" Ver las Fichas de Datos de Seguridad (FDS)http://www.apacheweb.cuci.udg.mx/bch/ES/Sicherheit/SDB.html" Ver al Registro de Sustancias Peligrosashttp://www.apacheweb.cuci.udg.mx/bch/ES/Sicherheit/Anweisungen.html

Mujeres embarazadas y madres amamantandoNO pueden trabajar en el laboratorio con sustancias peligrosas

Almacenar:En recipientes adecuados y en una manera adecuadaMarcado conforme a su contenido- contenido (sustancia, mezcla, concentración)- fecha- propietario- símbolo de peligroNo en cantidades grandesSustancias que producen polvos, gases, vapores, aerosoles etc tóxicos,

nocivos, cancerígenos, corrosivos o inflamables almacenar en un lugarventilado

Nunca almacenar alimentos en el laboratorioNunca almacenar reactivos en contenedores de alimentos

Manejar:No tocar químicosTrasvasar mediante un medio aplicable (e.je. embudo)Nunca poner las tapas boca abajo sobre la mesa- dejar químicos sobre la mesa- traer contaminación al recipienteNo dañar las etiquetas mientras se trasvasa (p.ej. por goteo)Nunca devolver reactivos en su envase original- traer contaminación al recipienteNo llenar recipientes más del 90% de su capacidad máximaCerrar bien los recipientes no usadosSustancias que producen polvos, gases, vapores o aerosoles tóxicos,

nocivos, cancerígenos, corrosivos o inflamables se maneja en unacampana de extracción

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V. Reglamento InternoEl estudiante tiene que entrar preparado a las prácticas, es decir con:- Ropa adecuada cumpliendo las reglas de seguridad- Material necesario para llevar a cabo la práctica según el manual o el anuncio del profesor- Plan de trabajo/esquema para llevar a cabo la práctica- Conocer la base teórica para entender el objetivo de la práctica.En el caso de no cumplir algún punto de los anteriores, el estudiante puede ser excluido deesta práctica y se evaluará con cero puntos.

VI. Evaluación de las PrácticasEn cada práctica se evaluará al estudiante según el siguiente esquema:40 % Comportamiento en el laboratorio (actitud, preparación, desempeño, limpieza)30 % Protocolo (siempre individual)30 % Examen de prácticas

La calificación final de las prácticas se calculará del promedio de todas las prácticasofrecidas, donde cada práctica tiene el mismo peso. Según la voluntad del profesor elestudiante puede repetir prácticas ofrecidas, que él no ha llevado cabo; por lo demás seevaluará una falta de asistencia con cero puntos.

La evaluación de la materia será:Exámenes 65 %Prácticas 20 %Tareas 15 %Se tiene que aprobar la teoría (= exámenes + tareas) y las prácticas independientementepara aprobar la materia.

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VII. ProtocoloEl estudiante tiene que entregar el protocolo de la práctica a más tardar hasta el inicio de lasiguiente práctica al profesor responsable. El protocolo debe cumplir con los siguientespuntos:- Nombre, fecha, curso, tema- Introducción pequeña en la teoría en que se basa la práctica- Material: - Material (especial) utilizado (sin material estándar como tubo de ensayo, ...)

- Soluciones, reactivos utilizados (pureza, conc. marca si es relevante etc.):no se refiere a soluciones/reactivos que deberían utilizar!

- Procedimiento: - Pasos que realizaron para llevar a cabo la prácticano se refiere a que deberían hacer (que sería el método!)

- Resultados: - Tabla, gráfica de los resultados primarios (de lectura),- Cálculos y resultados elaborados

- Discusión: - Resultados cumplen con la expectativa (en base de la teoría)?- Qué significan los resultados - para que se puede utilizar este método?- En el caso de no: discusión de errores

- Bibliografia: Autor1, N1, N2 Autor2 & N3 Autor3 (año): Título. Revista, Volumen: páginashttp://www.domain-name.de/link/al/documento.pdf

VIII. ExamenEl examen de las prácticas deberá ser antes de la siguiente práctica, la fecha concretadeberá ser establecida entre el profesor responsable y los estudiantes.El tema de los exámenes de las prácticas incluye el conocimiento teórico-básico de cadapráctica como se establece en este manual, los principios teóricos en que se basan lasreacciones y mecanismos de los experimentos y los cálculos necesarios. Los exámenes nodeberán tardar más de 30 min.

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Práctica No. 1 Buffer y pH

Tipo de práctica: Individual Tiempo de duración: 2 h

Objetivos1. Comprobar la presencia de sistemas amortiguadores en líquidos biológicos.2. Aprender a preparar soluciones amortiguadoras útiles en la biología y bioquímica.3. Calcular el pH y conocer factores que influyen en éste.

IntroducciónLas soluciones amortiguadoras, también conocidas como disoluciones buffer o tampón,son disoluciones que están compuestas por el ión común de un ácido débil o una basedébil. El mismo ión común en una sal conjugada, debe estar presente junto con el ióncomún del ácido o base débil. También se dice que una solución es amortiguadora,reguladora o tampón si la [H+], es decir el pH de una solución no se ve afectadasignificativamente por la adición de pequeñas cantidades o volúmenes de ácidos y bases.Siendo que pH no significa otra cosa que potencial de hidrogeniones, un buffer (oamortiguador) lo que hace es regular el pH. Cuando un buffer es añadido al agua, el primercambio que se produce es que el pH del agua se vuelve constante. De esta manera,ácidos o bases (álcalis = bases) adicionales no podrán tener efecto alguno sobre el agua,ya que ésta siempre se estabilizará de inmediato.

MaterialMaterial Cantidad Reactivos Cantidad

Leche de vaca (lo trae el estudiante) 100 m# 0,1 N Ácido clorhídrico 2 m#Jugos diferentes (lo trae el estudiante) 100 m# Aqua destillata (A. dest.) 80 m#

Pipetas de 5 m# 2 EquipoPipetas de 10 m# 2 Potenciómetro 1Vasos de precipitado de 100 m# 2

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Método1) Jugo1.1. Determinar el pH de una muestra de jugo con el potenciómetro1.2. Anotar en el cuadro el valor obtenido

2) Leche de vaca2.1. Determinar el pH de una muestra de leche de vaca2.2. Colocar en un vaso de precipitados 2 m# de leche y adicionar 38 m# de A. dest.2.3. Determinar el pH de esta dilución2.4. Anotar en el cuadro el valor obtenido

3) HCl3.1. Determinar el pH de una solución de 0,1 N HCl3.2. Colocar en un vaso de precipitados 2 m# 0,1 N HCl y adicionar 38 ml de A. dest.3.3. Determinar el pH de esta dilución3.4. Anotar en el cuadro el valor obtenido

ResultadosPara la leche el pH teórico será un valor de la literatura y en base a este valor se puedecalcular el pH teórico para la leche diluida. Es importante anotar en el protocolo el"procedimiento" de los cálculos y no solo el resultado.

Registro de los resultados obtenidosMuestra pH determinado pH teórico

JugoLeche

Leche diluida0,1 N HCl

0,1 N HCl diluido

Cálculos para la determinación del pH

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Observaciones

Conclusiones

Bibliografía1. Conn, E.E., P.K. Stumpf, B. George & R.H. Doi (2002): Bioquímica Fundamental. 4. ed.,

Wiley2. Murray, R.K., D.K Granner & V.W. Rodwell (2007): Bioquímica ilustrada. 17. ed., Manual

Moderno3. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley

Cuestionario1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en

esta práctica.2. Indique los cálculos necesarios para la elaboración de las soluciones utilizadas y

especifique el peso molecular, temperatura de ebullición, temperatura de fusión, estadofísico a 25 ºC y solubilidad de los reactivos utilizados.

3. Indique las propiedades fisicoquímicas del agua.4. ¿Qué es un ácido-base según Brønstedt?5. ¿Cómo se calcula el pH? Indique la ecuación de Henderson-Hasselbalch y como

calcular soluciones buffer.6. ¿Cuál es la diferencia entre mol, molar, molal, normalidad, densidad y porcentaje?7. Especifique cuáles son las soluciones buffer comunes en la biología.

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Mecanismo de EvaluaciónLa presente se calificará en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estará enproporción con el porcentaje de la evaluación final (20 % para prácticas), los puntos aevaluar se listan a continuación:

Aspecto a evaluar %Comportamiento 40Protocolo 30Examen 30

Medidas de Seguridad y Salud OcupacionalA la concentración de 0,1 M de HCl no es una sustancia peligrosa.

Disposición de Desechos Físicos, Químicos y BiológicosSe pueden tirar los desechos directamente al desagüe.

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Práctica No. 2 Espectrofotómetro

Tipo de práctica: Grupo de 3 personas Tiempo de duración: 2 h

ObjetivoConocer el fundamento del espectrofotómetro para determinar la absorción yconcentración de una sustancia en solución.

IntroducciónEste instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través deuna muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto permitedar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra y también indicarindirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en dichamuestra. El color de las sustancias se debe a que estas absorben ciertas longitudes deonda de la luz blanca que incide sobre ellas y sólo vemos aquellas longitudes de onda queno fueron absorbidas.


Celdas de plástico 2 Solución. madre de FeCl3 (5,0 g/#) $ 20 m#Pipetas 1 y 2 m# 5 Aqua destillata (A. dest.)Tubos de ensayo 4 1 muestra de FeCl3 de concentración 5 m#Equipo desconocidaEspectrofotómetro 1

Método1. Preparar un banco de diluciones (1:1, 1:2, 1:5, 1:10, 1:20) de la solución madre2. Calibrar el espectrofotómetro a λ = 640 nm contra A. dest.3. Determinar la absorbancia de cada solución a λ = 640 nm4. Determinar la absorbancia de la muestra a λ = 640 nm

ResultadosCalcular una regresión lineal por los estándares (banco de dilución)Calcular en base a esto la concentración de la muestra

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Diluciones 1:1 (Soln madre) 1:2 1:5 1:10 1:20Conc. g/#Abs (640 nm)

Absorbancia muestra: Concentración muestra:

Observaciones

Conclusiones

Bibliografía1. Skoog, D.A., D.M. West, F.J. Holler & S.R. Crouch (2005): Fundamentos de química

analítica. 8. ed. Editorial Thomson2. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley




3. Indique detalladamente el principio del espectrofotómetro.4. ¿Cuáles son los tipos de espectrofotómetro que existen?5. ¿Cuál es la Ley de Lambert-Beer?6. ¿Cuál es la diferencia entre extinción, absorción y transmisión?7. ¿Qué es la regresión lineal y para que nos sirve?

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Medidas de Seguridad y Salud OcupacionalEl FeCl3 es nocivo por ingestión. Irrita la piel. Riesgo de lesiones oculares graves.En contacto con los ojos, lavar con abundante agua manteniendo los párpados abiertos(mínimo 10 min.). Llamar al oftalmólogo.En ingestión, beber abundante agua y evitar vómito. Llamar al médico.Tras inhalación, tomar aire fresco.En contacto con la piel, lavar con agua. Eliminar ropa contaminada.

Protección PersonalProtección de las manos: Guantes de caucho butílico o PVCProtección de los ojos: Gafas protectoras y/o con protección del rostro

Disposición de Desechos Físicos, Químicos y BiológicosLos desechos se depositan al contenedor de sales de metales pesados.

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Práctica No. 3 Desnaturalización de Enzimas

Tipo de práctica: Individual Tiempo de duración: 2 h

ObjetivoDemostrar como el calor y/o pH pueden influir en la estructura terciara de una enzima, asícomo su funcionalidad.

IntroducciónCada célula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que provoca continuos cambios ensu estado bioquímico, en la base de la cual están las enzimas, que tienen el poder decatalizar, facilitar y agilizar determinados procesos sintéticos y analíticos. La temperaturaInfluye en la actividad de las enzimas. El punto óptimo es aquel que representa el máximode actividad. A temperaturas bajas las enzimas se hallan "muy rígidas" y cuando se superaun valor considerable (mayor de 50 ºC) la actividad cae bruscamente porque, comoproteína, la enzima se desnaturaliza.El pH puede afectar de varias maneras:• El centro activo puede contener aminoácidos con grupos ionizados que pueden variar

con el pH• La ionización de aminoácidos que no están en el centro activo puede provocar

modificaciones en la conformación de la enzima• El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH


Trozo de hígado fresco (lotrae el estudiante)

1 Agua oxigenada (H2O2, 5 %) (lotrae el estudiante) %

15 m#

Tubos de ensayo de 15 m# 2 1 M HCl $ 5 m#Pinza para tubo de ensayo 1 1 M NaOH $ 5 m#Mechero 1 Aqua destillata (A. dest.)Gradilla 1Pipetas de 5 m# 2Bisturí o navaja 1

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Método1) Normal1.1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado1.2. Añadir 5 m# de agua oxigenada1.3. Anotar y explicar las observaciones

2) Temperatura2.1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado2.2. Añadir 5 m# de A. dest. y hervir la muestra durante 5 min2.3. Retirar el agua sobrante2.4. Añadir 5 ml agua oxigenada2.5. Anotar y explicar las observaciones

3) pH3.1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado3.2. Añadir 5 m# 1 M HCl e incubar a temperatura ambiente la muestra durante 5 min

(mezclándola)3.3. Retirar el ácido sobrante (neutralizándolo con unos 5 ml 1 M NaOH)3.4. Añadir 5 m# agua oxigenada3.5. Anotar y explicar las observaciones

Resultados

Normal Temperatura pH

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Observaciones

Conclusiones

Bibliografía1. Conn, E.E., P.K. Stumpf, B. George & R.H. Doi (2002): Bioquímica Fundamental. 4. ed.,

Wiley2. Murray, R.K., D.K Granner & V.W. Rodwell (2007): Bioquímica ilustrada. 17. ed., Manual





3. Diferencie entre las estructuras de proteínas 1a, 2a, 3a y 4a.4. ¿Qué otros factores favorecen a la desnaturalización de las enzimas?



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Medidas de Seguridad y Salud OcupacionalEn el manejo del hígado, no se requiere medidas de seguridad especiales. Durante el cortedel hígado con las tijeras no se debe cortar sus dedos. Al hervir las muestras, la boca delos tubos debe estar dirigida al contrario de la persona por si el burbujeo al hervir es fuerte.Para evitar que se derrame el líquido en el tubo al hervir, se recomienda que el tubo tenga3/4 partes de espacio libre.El HCl provoca quemaduras e irrita las vías respiratorias puesto que es una sustancia muycorrosiva y se tiene que usar guantes de caucho nitrilo. En caso de perdida delconocimiento nunca dar a beber ni provocar el vomito. Si se inhala, trasladar a la personaal aire libre. En caso de que persista el malestar, pedir atención médica. Si se tienecontacto con la piel lavar abundantemente con agua. Quitarse las ropas contaminadas. Encaso de contacto con los ojos, lavar abundantemente con agua manteniendo los parpadosabiertos. Pedir atención médica. Si se llega a ingerir, beber abundante agua. Evitar elvómito. Pedir atención médica. En contacto con metales puede formarse hidrógenogaseoso.NaOH es corrosivo y se tiene que usar guantes de caucho butílico. En caso de derrameneutralice con carbonato hidrogenado, para situaciones en las que entre en contacto conpiel y ojos enjuagar con abundante agua y llamar al servicio médico de emergencias.

Disposición de Desechos Físicos, Químicos y BiológicosEn este caso la neutralización del HCl se realiza con 1 M NaOH. Una vez neutralizado losdesechos se pueden tirar al desagüe. Si existen residuos de hígado, se depositan en unabolsa de plástico, se cierra bien y se tira en la basura.

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Práctica No. 4Cinética enzimática

Tipo de práctica: Grupo de 3 estudiantes Tiempo de duración: 2 h

ObjetivoAprender el funcionamiento y la influencia en la velocidad de reacción de las enzimas, quetienen una posición central en el metabolismo de los seres vivos.

IntroducciónLas enzimas son catalizadores de naturaleza proteínica que regulan la velocidad a la cualse realizan los procesos fisiológicos, producidos por los organismos vivos. En los sistemasbiológicos constituyen las bases de las complejas y variadas reacciones que caracterizanlos fenómenos vitales. La fijación de la energía solar y la síntesis de sustanciasalimenticias llevadas a cabo por los vegetales dependen de las enzimas presentes en lasplantas. Los animales, a su vez, están dotados de las enzimas que les permitenaprovechar los alimentos con fines energéticos o estructurales; las del metabolismo internoy de la vida de relación, como la locomoción, la excitabilidad, la irritabilidad, la divisióncelular, la reproducción, etc., están regidas por la actividad de innumerables enzimasresponsables de que las reacciones se lleven a cabo en condiciones favorables para elindividuo, sin liberaciones bruscas de energía a temperaturas fijas en un medio de pH,concentración salina, entre otras, prácticamente constante.Las enzimas producidas por los organismos vivos habitualmente solo catalizan un tipo dereacción o solo una reacción determinada; la especificidad de las enzimas es tan marcadaque en general actúan exclusivamente sobre sustancias que tienen una configuraciónprecisa.


Pipetas, perilla 3 Saliva (ayuno: estudiante no debecomer por lo menos 2 h antes)

2 m#

Tubos de ensayo de15 m#

10 Lugol: 1 g I2, 2 g KI en 300 ml de Aquadestillata (A. dest.) filtrado

5 m#

Celda de plástico 1 Solución de almidón (100 mg/m#) 1 m#EquipoEspectrofotómetro 1

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Método1. Pipetar según el siguiente esquema en un tubo de ensayo:

- 2500 µ# Agua- 300 µ# Lugol- 100 µ# Saliva

2. Determinar E0 (660 nm): blanco- 100 µ# almidón (diferentes concentraciones según la Tabla 1)

3. Mezclar rápido (tubo de ensayo)4. Pasar a una celda de plástico y5. Determinar ∆E660 por 1-2 min cada 10 s6. Después por 3-4 min cada 15 s (o hasta que no haya más ∆E660 significativo)7. Cada concentración se determina por duplicado

ResultadosCalcule la velocidad inicial de la reacción para cada concentración de sustrato.Dibuje una gráfica de Michaelis-Menten.Estima por la gráfica de Michaelis-Menten el KM y vmax.Calcule por la ecuación de Lineweaver-Burk el KM y vmax.

Tabla 1. Preparación y mediciones de las diferentes concentraciones de almidónNo. Vol alm. [µ####] Vol H2O [µ####] conc. alm.

[mg/m####]v0

[∆E/min]

1/c (alm)[µM-1]

1/v[min/∆E]

0 0 3000 1 300 2700 3 600 2400 5 900 2100 7 1200 1800 9 1500 150011 2300 70013 3000 0

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Observaciones

Conclusiones

Bibliografía1. Champe, P.C., R.A. Harvey & D.R. Ferrier (2005): Bioquímica. 3. ed. McGraw Hill2. Conn, E.E., P.K. Stumpf, B. George & R.H. Doi (2002): Bioquímica Fundamental. 4. ed.,

Wiley3. Lodish, H., A. Berk, P. Matsudaira, C.A. Kaiser, M. Krieger, M.P. Scott, S.L. Zipkursky &

J. Darnell (2005): Biología celular y molecular. 5. ed. Médica Panamericana4. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley5. Skoog, D.A., D.M. West, F.J. Holler & S.R. Crouch (2005): Fundamentos de química

analítica. 8. ed. Editorial Thomson




3. Describir la ecuación de Michaelis-Menten para calcular v y KM, y también la ecuaciónde Lineweaver-Burk.

4. ¿Cómo puede la enzima bajar la entalpía (energía) de activación?5. Describir el significado de catálisis, actividad catalítica, catal, Kcat y KM.

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Medidas de Seguridad y Salud OcupacionalLa concentración de yodo utilizada en esta práctica es similar a utilizada paradesinfectantes. Por lo tanto las soluciones en esta práctica no son tóxicas. Sin embargo, serecomienda utilizar guantes para evitar colorear la piel por el yodo.

Disposición de Desechos Físicos, Químicos y BiológicosLos desechos líquidos se pueden tirar al desagüe.

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Práctica No. 5Azúcares reductores

Tipo de práctica: Grupo de 3 estudiantes Tiempo de duración: 2 h

ObjetivoFamiliarizarse con las propiedades químicas de los azúcares determinando los azúcaresreductores por la reacción de Fehling.

IntroducciónLos azúcares reductores son aquellos que presentan un carbono libre en su estructura ypueden reducir, en determinadas condiciones, a las sales cúpricas. El ensayo de Fehlingse funda en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído. Éste se oxida a ácido yreduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido de cobre (I), que forma un precipitadode color rojo. Un aspecto importante de esta reacción es que la forma aldehído puededetectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce el licorde Fehling a óxido de cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor. Al reaccionar conmonosacáridos, se torna verdoso; si lo hace con disacáridos, toma el color del ladrillo.

MaterialFehling I: 0,93 g CuSO4 en 100 m# Aqua destillata (A. dest.)Fehling II: 36,4 g Na-K-tartrato + 12 g NaOH en 100 m# A. dest. $

Material Cantidad Reactivos CantidadPipetas, perilla 3 Reactivo de Fehling I 10 m#Tubos de ensayo de 15 m# 10 Reactivo de Fehling II $ 10 m#

Soln. glucosa (1 g/10 m#) 0,5 m#Soln. fructosa (1 g/10 m#) 0,5 m#

Equipo Soln. sacarosa (1 g/10 m#) 0,5 m#Baño María (100 ºC) 1 Soln. almidón (1 g/10 m#) 0,5 m#

Método1. Poner en cada uno de 5 tubos 2 m# de reactivo de Fehling I2. Añadir en cada tubo 2 m# de reactivo de Fehling II y mezclarlo3. Añadir 3 gotas de A. dest. en tubo 1, soln. glucosa en tubo 2, soln. fructosa en tubo 3,

soln. sacarosa en tubo 4 y soln. almidón en tubo 54. Calentar por 3 min en un Baño María a 100 °C5. Enfriarlo lentamente

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Resultados

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Observaciones

Conclusiones

Bibliografía1. Ganong, W.F. (2006): Fisiología Médica. 20. ed. Manual Moderno2. Guyton, A.C. & J.E. Hall (2006): Tratado de Fisiología Médica. 11. ed. Elsevier3. Murray, R.K., D.K Granner & V.W. Rodwell (2007): Bioquímica ilustrada. 17. ed., Manual


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3. Describir carbohidratos, aldosas, cetosas, triosas, tetrosas, pentosas, hexosas.4. ¿Cuáles son las estructuras de carbohidratos relevantes en la biología?5. ¿Qué son los isómeros: enantiómeros, diastereómeros, epímeros, anómeros?6. Explique anillo interno: hemiacetal, hemicetal, mutarrotación, proyección Fischer y

Haworth.7. Describa reacciones de oxidación y reducción: alditol, ácido aldónico, ácido urónico,

lactona, ácido aldáridos.8. Explique el enlace glucosídico (N y O) y disacáridos relevantes en la biología.



Medidas de Seguridad y Salud OcupacionalEl CuSO4 puede producir irritaciones en ojos y piel en personas predispuestas. Láveseinmediatamente con agua abundante. Usar guantes y gafas de seguridad. Contamina almedio ambiente por ser bioacumulativo y no es intrínsecamente biodegradable por lo queno se debe tirar al alcantarillado.

Disposición de Desechos Físicos, Químicos y BiológicosTodos los desechos que contengan CuSO4 (como aquellos tubos que contengan elreactivo de Fehling I), se depositan al contenedor de sales de metales pesados.

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Práctica No. 6Ácidos grasos insaturados

Tipo de práctica: individual Tiempo de duración: 2 h

ObjetivoConocer las características físico-químicas de diferentes lípidos.

IntroducciónLos lípidos son biomoléculas muy diversas; unos están formados por cadenas alifáticassaturadas o insaturadas, en general lineales, pero algunos tienen anillos (aromáticos).Algunos son flexibles, mientras que otros son rígidos o semiflexibles hasta alcanzar casiuna total flexibilidad molecular; algunos comparten carbonos libres y otros forman puentesde hidrógeno. En el uso coloquial, a los lípidos se les llama incorrectamente grasas,aunque las grasas son sólo un tipo de lípidos procedentes de animales. Los lípidoscumplen funciones diversas en los entre ellas la de reserva energética (triacilglicéridos), laestructural (fosfolípidos de las bicapas) y la reguladora (esteroides). Los ácidos grasos sonlas unidades básicas de los lípidos saponificables y consisten en moléculas formadas poruna larga cadena hidrocarbonada con 12 a 22 átomos de carbono y un grupo terminal. Lapresencia de dobles enlaces en el ácido graso reduce el punto de fusión. Los ácidosgrasos se dividen en saturados (sin presencia de dobles enlaces) e insaturados (uno omás dobles enlaces).


Lipidos de diferentes fuentes (aceites,mantequilla, manteca, margarina): trae elestudiante

4 NaOH, 20 % $ 2 m#

Espátula chica 1 Ácido acético, 5 % $ 8 m#Mechero de Bunsen 1 Almidón 1 gTubos de ensayo de 15 m# 4 Lugol 3 gotasPipetas de 2 y 10 m# 4

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Método1) Saponificación1.1 Colocar 2 m# o 2 g de aceite y 2 m# de NaOH al 20 %1.2 Hervir suavemente (de forma controlada) y agitar durante algunos minutos

(aproximadamente 2 min)1.3 Dejar reposar y aparecerán dos o tres capas

a) Superior (puede no aparecer): aceite que no ha reaccionadob) Intermedia semisólida de jabónc) Inferior: glicerol disuelta en el agua

2) Ácidos grasos insaturados2.1. Poner 2 m# de un lípido en un tubo de ensayo2.2. Añadir 7,5 m# ácido acético2.3. Añadir unas 3 gotas de Lugol y mezclar bien2.4. Incubarlo unos 7 min a 70 ºC2.5. Añadir media espátula de polvo de almidón y mezclar bien

Resultados

Observaciones

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Conclusiones

Bibliografía1. Ganong, W.F. (2006): Fisiología Médica. 20. ed. Manual Moderno2. Lodish, H., A. Berk, P. Matsudaira, C.A. Kaiser, M. Krieger, M.P. Scott, S.L. Zipkursky &

J. Darnell (2005): Biología celular y molecular. 5. ed. Médica Panamericana3. Mathews, C.K., K.E. van Holde & K.G. Ahern (2002): Bioquímica. 3. ed. Pearson

Addison Wesley




3. Explique dos ejemplos de estructuras y funciones de las diferentes clases de lípidos.4. Describa la estructura de la membrana y sistemas de transporte.5. ¿Cuáles son los ácidos grasos esenciales, por qué y para qué se necesitan?



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Medidas de Seguridad y Salud OcupacionalAl hervir las muestras, la boca de los tubos debe estar dirigida al contrario de la personapor si el burbujeo al hervir es fuerte. Para evitar que se derrame el líquido en el tubo alhervir, se recomienda que el tubo tenga 3/4 partes de espacio libre.Ácido acético es una sustancia corrosiva y se tiene que usar guantes de neopreno. Encaso de perdida del conocimiento nunca dar a beber ni provocar el vomito. Si se inhala,trasladar a la persona al aire libre. En caso de que persista el malestar, pedir atenciónmédica. Si se tiene contacto con la piel lavar abundantemente con agua. Quitarse lasropas contaminadas. En caso de contacto con los ojos, lavar abundantemente con aguamanteniendo los parpados abiertos. Pedir atención médica. Si se llega a ingerir, beberabundante agua. Evitar el vómito. Pedir atención médica.NaOH es corrosivo y se tiene que usar guantes de caucho butílico. En caso de derrameneutralice con carbonato hidrogenado, para situaciones en las que entre en contacto conpiel y ojos enjuagar con abundante agua y llamar al servicio médico de emergencias.

Disposicion de Desechos Físicos, Químicos y BiológicosEn este caso la neutralización del NaOH se realiza con HCl. Una vez neutralizado losdesechos se puede tirar al desagüe. La concentración del ácido acético utilizada en estapráctica (5 %) no es tóxica, sin embargo puede neutralizarse con carbonato hidrogenadopara posteriormente tirarlo al desagüe.

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