Técnicas histológicas

MV. Johilmer J. Álvarez Gil. Abril 2018.UCLA-DCV Anatomía Microscópica y Embriología Veterinaria.

alvarez@ucla.edu.ve

Universidad Centroccidental Lisandro AlvaradoDecanato de Ciencias VeterinariasÁrea de Anatomía Microscópica

Departamento de Ciencias Básicas

BIENVENIDOS……..

TEJIDO

SISTEMA

CÉLULA

Átomo Moléculas

PROCARIOTA: núcleo carecede membrana nuclear

EUCARIOTA: núcleo poseemembrana nuclear

EPITELIAL CONECTIVO MUSCULAR NERVIOSO

ÓRGANO

TEJIDO

SISTEMA

CÉLULA

Átomo Moléculas

ORGANISMOS

UNICELULARES PLURICELULARES

Protozoarios

Metazoarios

1 cm 10 mm (milímetros)

1 mm 1000 µm (micrómetros)

1 µm 1000 nm (nanómetros)

1 nm 10 Å (Angströn)

1 µm 1 x 10-3 = 0,001 mm

SISTEMA INTERNACIONAL DE LONGITUD

Anatomía Microscópica

HISTOLOGÍA

Es la ciencia que estudia las características

estructurales de células, tejido u órgano que

solo son observables por medio del

microscopio.

Anatomía Macroscópica vs Anatomía Microscópica

• Disección de tejidos

• Observación a simple vista

• Toma de muestra y preparación de los tejidos

• Observación con microscopio

El conjunto de procedimientos aplicados auna muestra biológica a fin de prepararlopara poderlo observar a través de unmicroscopio.

Técnica histológica

Procedimientos

Técnica histológica

Vitales Postvitales

Métodos para estudio “In vivo”

Procedimientos histológicos que se

realiza en células, tejidos u

organismos vivos en su estado

natural, con el uso de microscopios

ópticos especiales

Técnica de coloración vital”

Definición

Tipos de coloración vital

Intravital

(se inyecta a

organismos vivos)

Supravital

(se aplica a células

o tejidos vivos)

Métodos para estudio “In vitro”

Cultivo de células

Definición

Condiciones (4)

Desventajas (2)

Procedimientos

Técnica histológica

Vitales Postvitales

Métodos para estudio “In vivo”

Métodos para estudios

de tejidos muertos”Técnica de coloración vital”

Definición

Tipos de coloración vital

Intravital

(se inyecta a

organismos vivos)

Supravital

(se aplica a células

o tejidos vivos)

Métodos para estudio “In vitro”

Cultivo de células

Definición

Condiciones (4)

Desventajas (2)

Procedimiento histológico que se

realiza en células, tejidos u órganos de

organismos sin signos vitales, a fin de

preservar su estructura evitando los

procesos postmortem, y ser

observados con microscopio óptico.

Técnica de la parafina

1. Toma de la muestra

2. Fijación

3. Deshidratación

4. Aclaración

5. Inclusión en parafina

6. Formación de los bloques de parafina7. Microtomía u obtención de cortes

Procedimientos histológicos que se

realiza en células, tejidos u

organismos vivos en su estado

natural, con el uso de microscopios

ópticos especiales

Es hidrocarburo sólido a temperatura ambiente, blanco, inodoro, y

líquido en temperaturas elevadas, de color translúcida, se obtiene de la

destilación del petróleo y se emplea generalmente para fabricar velas,otros usos como en cosmetología y técnicas histológicas.

Parafina…

Parafina sólida Parafina fundida

Técnica de la parafina

1. Toma de muestra

Procedimientos:

Biopsia: toma de fragmentos de tejidos

u órganos de un organismo vivo.

Necropsia: toma de fragmentos de tejidos u órganos

De un organismo muerto.

PASOS:

1. Muerte del animal (natural o eutanasia).

2. Extracción de los órganos con delicadeza en la manipulación.

3. La muestra debe ser tomada con prontitud.

4. La muestra debe ser representativa del órgano o tejido.

5. El tamaño de la muestra debe ser de 1 cm 3.

6. Cortes con bisturí realizando movimientos deslizantes sin presión.

2. FijaciónTécnica de la parafina

Definición: paso de la técnica de parafina que consiste en utilizar agentes fijadores en la

muestra biológica, a fin de detener el proceso postmorten (autolisis) para conservar de manera

integra la estructura de la muestra.

Clasificación de los fijadores;

Físicos Químicos

Compuestos: (ventajas): Líquido de Bouin

Líquido de Zenker

Líquido de Helly

Lavado de la muestra fijada:

Cualidades

de unbuen fijador

2. Alto poder de

penetración.

4. Conferir dureza

no excesiva.

Es un paso de la fijación que consiste en lavar la muestra biológica con agua

corriente a fin de retirar el fijador para evitar el excesivo endurecimiento y facilitar seccionar en láminas delgadas.

1. Impedir rápidamente

los procesos autolíticos.

3. Fácil manipulación.

5. fácil de

conseguir

y económico.

Técnica de la

parafina

PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS

PROCESO DE COLORACION O TINCIÓN

Es un proceso que consiste en la aplicación de una sustanciacolorante a una célula o tejido, a fin de aportarle color paradestacar y contrastar o distinguir los componentesestructurales de la células o tejidos.

Son sustancias con tinción propia,capaz de ceder color a células ytejidos dado a su afinidad por suscomponentes.

La coloración o tinción

Colorante:

Teoría físicaSostiene que la coloración se da por un proceso físico de cohesión molecular, es decir, que las partículas disueltas en los colorantes son absorbidos por los componentes celulares.

Teoría químicaSostiene que la coloración se da por un proceso químico de unión iónica, que consiste en que los radicales aniónicos y catiónicos de los colorantes se unen a los radicales catiónicos y aniónicos de los componentes celulares dado a un proceso de neutralización de las cargas.

COLORANTE BÁSICO (+) (-)

Radical básico (+)

Radical

ácido (-)

El radical aniónico (ácido) del colorante es el que

aporta color

COLORANTE ÁCIDOS (-) (+)El radical aniónico del

colorante se unió al radical catiónico de la célula

(citoplasma)Radical básico (+)

Radical

ácido (-)

El radical catiónico (básico) del colorante es el que aporta color

el radical catiónico del colorante se unió al radical

aniónico de la célula (núcleo)

Bases teóricas de la coloración

Criterios de clasificación de los colorantes

1. Por su origen

Colorantes Naturales

1. Animal: El carmín de color rojo intenso (se extrae de la cochinilla)

2. Vegetal: La Hematoxilina de color azul (se extraede la corteza del campeche), La orceina (se extrae de un tipo de Liquen).

Colorantes Artificiales

Eosina colorante rojo anaranjado es un derivado de la anilina, producto de la destilación de la hulla o carbón.

2. Por el radical que cede color

COLORANTE ÁCIDOS (-) (+) = el radical aniónico aporta el color

COLORANTE BÁSICO (+) (-)= el radical catiónico aporta el color

COLORANTE NEUTRO (+) (-)= ambos radicales aportan color

3. Por los componentescelulares que colorea

Colorantes citoplasmáticos

Colorantes nucleares

Tipos de coloraciones

Los tejidos se tiñen con soluciones sucesivas de varios colorantes, los cuales colorearán los componentes del tejido según su afinidad.

El tejido se tiñe con un color diferente al delcolorante empleado.

Los tejidos adquieren el mismocolor del colorante empleado.

El tejido se colorea progresivamente consoluciones de diferente concentraciones hastaalcanzar el punto óptimo.

El tejido se colorea con una soluciónconcentrada del colorante y luego seelimina el exceso por medio dediferenciadores.

TÉCNICA DE COLORACIÓN CON HEMATOXILINA - EOSINA (H - E) O COLORACIÓN DE RUTINA

Hidratación del Tejido

Coloración con Hematoxilina

Coloración con Eosina

Lavado con agua

Deshidratación

Montaje definitivoy obtención de la preparación histológica

Aclaración (diafanización)

AFINIDAD TINTORIAL

Componente acidófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes ácidos, ejemplo citoplasma.

Componente basófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes básicos, ejemplo el núcleo.

Componente neutrófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes neutros, ejemplo citoplasma de los neutrófilos.

Componente argirofilo: componente que tiene afinidad por las sales de plata, ejemplo fibras reticulares .

Acidofilia Basofilia

COLORACION H - E

AFINIDAD TINTORIAL DEL CITOPLASMA ?

AFINIDAD TINTORIAL DEL NÚCLEO ?

CEREBRO. HE (obj.100X - inmersión)- Corteza cerebral. Neurona piramidal

GANGLIO LINFÁTICO. HE (obj.100X - inmersión)- Tejido conectivo reticular. Macrófagos libres y fijos

AFINIDAD TINTORIAL DEL CITOPLASMA ?

AFINIDAD TINTORIAL DEL NÚCLEO ?

TRICRÓMICA DE MALLORY PARA COLÁGENO

TRICRÓMICA DE MASSON PARA COLÁGENO

IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA PARA FIBRAS RETICULARES

RIÑÓN- Lámina basal.-ÁCIDO

PERYÓDICO-SCHIFF (PAS)

MICROSCOPÍA

Es el estudio detallado de

células, tejidos y órganos

mediante el uso del

microscopio.

• Identificar células, tejidos y órganos indicados

y/o enfocados.

• Describir las características histológicas que le

permitió identificarlo.

CLASIFICACIÓN DE LOS MICROSCOPIOS SEGÚN EL TIPO DE LUZ

ÓPTICO

ELECTRÓNICO

Simple

Compuesto

M.Opropiamente

dicho

M.O especiales

Monocular

Binoculares

Campo oscuroContraste de fases

Luz polarizada

Transmisión

Barrido

TUBO

CABEZAL

ASAREVOLVER

PLATINA

BASETORNILLO

MICROMETRICO

TORNILLOMACROMETRICO

PINZA

CARRO

SISTEMA MECÁNICO

SISTEMA ÓPTICO

OCULARES

OBJETIVOS

CONDENSADOR

SISTEMA DE ILUMINACIÓN

LÁMPARA

El sistema de iluminación genera,trasmite y modula la intensidad de laluz que incide sobre la preparaciónhistológica.

MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES

*Utiliza dos filtros polarizantes: un polarizador que dirige toda la luz hacia el objeto y el analizador que registra la imagen con toda las variaciones sufrida por la luz al atravesar el objeto.

*Se utiliza un condensador especial que desvía la luz para que no llegue directamente al objeto, observándose la imagen sobre un fondo oscuro.

•Diafragma anular: A diferencia del tipo iris,

este diafragma solo deja pasar la luz a

través de una línea circular. Al atravesarlo, la

luz forma un cilindro hueco que ilumina la

preparación.

•Placa anular de fase: Es una lente que se

añade al sistema de lentes del objetivo. Esta

placa enlentece los rayos de luz procedentes

del condensador, y es indispensable que se

encuentre alineada con el diafragma.

MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

Microscopio Electrónico

de Transmisión

Microscopio Electrónico

de Barrido

ARTEFACTOS DE LA PREPARACIONES HISTOLÓGICA

Definición: serie de alteraciones que pueden observarse en los cortes histológicos,

ocasionadas por anomalías en uno o más de los diferentes pasos de la técnica

histológica y que pueden dificultar o incluso imposibilitar la identificación de tejidos yórganos.

Hallazgos frecuentes:

AUTÓLISIS RETRACCIÓN PRECIPITADO

´PLIEGUES MUESCAS BURBUJAS

PELOS O FIBRAS

Email: alvarez@ucla.edu.veHorario de consultas: Viernes de 9:00 a.m. -11:00 a.m.

RECOMENDACIONES

1.Desarrollar el programa instruccional.

2.Bibliografía recomendada:

• Histología básica de: Junqueira &

Carneiro.

• Histología Veterinaria de H. Dieter Dellman.

3.Revisar páginas web:

https://anatomiamicrovet.wordpress.com

4. Aclarar dudas con el profesor en su

respectivo horario de consultas.