ASOCIACIN DEL POLIMORFISMO rs1122608 DEL GEN LDLr CON HIPERCOLESTEROLEMIA EN PACIENTES CON OBESIDAD

JustificacinLa obesidad es una enfermedad sistmica, crnica y multifactorial, que ha alcanzado proporciones epidmicas a nivel mundial y constituye un grave problema de salud pblica, debido a que genera un incremento en la morbilidad asociada y en los costos en salud, as como una disminucin de la sobrevida y calidad de vida.Una complicaciones de la obesidad es la dislipidemia que en conjunto van a aumentar el riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares.En Mxico, los niveles elevados de colesterol en sangre son un factor de riesgo importante para infarto agudo del miocardio, as como para isquemia miocrdica silente, y junto con la diabetes.

ObjetivosObjetivo general: Asociar la presencia del polimorfismo rs1122603 del gen LDLr con la presencia de dislipidemia en pacientes obesos.

Objetivos especficos: Conocer la incidencia del gen LDLr en pacientes con obesidad. Conocer la prevalencia de cada genotipo del polimorfismo del gel LDLr en hombres y mujeres.

Hiptesis El polimorfismo rs1122608 del gen LDLr confiere asociacin con el desarrollo de dislipidemia en pacientes obesos. Tener el polimorfismo rs1122608 del gen LDLr no se asocia con el desarrollo de dislipidemia en pacientes obesos.

Marco terico La obesidad y el sobrepeso se definen como una acumulacin anormal o excesiva de grasa que puede ser perjudicial para la salud. Una forma simple de medir la obesidad es el ndice de masa corporal (IMC), esto es el peso de una persona en kilogramos dividido por el cuadrado de la talla en metros. Una persona con un IMC igual o superior a 30 es considerada obesa y con un IMC igual o superior a 25 es considerada con sobrepeso. El sobrepeso y la obesidad son factores de riesgo para numerosas enfermedades crnicas, entre las que se incluyen la diabetes, las enfermedades cardiovasculares y el cncer (OMS 2015).La dislipidemia se define como un conjunto de patologas que se caracterizan por alteraciones de los lipoprotenas sanguneos, en especial el colesterol, triglicridos y las protenas trasportadoras que son Lipoprotenas de alta densidad (HDL), baja densidad (LDL) y de muy baja densidad (VLDL)3. La hipercolesterolemia se define por la presencia de concentraciones sricas elevadas de colesterol total (CT), LDL-colesterol (LDL-c) y VLDL-colesterol (VLDL-c) y concentraciones sricas bajas de HDL-colesterol (HDL-c)4.Las dislipidemias son trastornos metablicos ampliamente condicionados por los factores del medio ambiente, tales como la nutricin o las anomalas metablicas asociadas como insulinorresistencia, diabetes y obesidad. Ciertas dislipidemias aparecen ms frecuentemente en los familiares de los individuos afectados que en la poblacin general2.De acuerdo a la ENSANUT 2012 la prevalencia de hipercolesterolemia en la poblacin mexicana mayor de 30 aos fue del 14.68%. Respecto a las mujeres mayores de 30 aos un 16.55% present colesterol elevado y en hombres un 12.57% 8.Los genes no necesariamente dictan el futuro, sino que los cambios en los estilos de vida y dietario de la poblacin mundial son los que influencian el desarrollo de dislipidemia en individuos con predisposicin gentica.Las variantes genticas en un nmero de genes se han asociado con dislipidemia en estudios de asociacin de genoma completo (GWAS) o en estudios de asociacin candidato de casos y control, incluyendo: apo-B100, apo-E, LDLr, LPA, HBF1A, LPL, LH, CETP, apoAI, apoAII y LCAT6.El gen del receptor de lipoprotena de baja densidad (LDLr) se localiza en el brazo corto del cromosoma 19 en la posicin 13.2 (19p13.2) en las bases pares 11,089,361to 11,133,829. Este gen codifica para el receptor de LDL7.El receptor se une a lipoprotenas de baja densidad, que son los principales portadores de colesterol en la sangre. Estos receptores se localizan en la superficie exterior de muchos tipos de clulas, donde se unen a las lipoprotenas de baja densidad de la circulacin sangunea y los transportan a la clula. Una vez dentro de la clula, la lipoprotena de baja densidad se descompone para liberar el colesterol. El colesterol se utiliza por la clula, almacena o elimina por el cuerpo.Las mutaciones del gen LDLr se asocia a la hipercolesterolemia familiar. Se han descrito 1,741 mutaciones de diversos tipos que incluyen: sustituciones a nivel del promotor, regin codificadora y uniones intro-exon (73%); micro y macrodeleciones (19%), duplicaciones (3%) e inversiones (13 mmol / L) y el LDL-colesterol (LDL-C,> 450 mg / dL, 11,7 mmol / L). La deposicin de colesterol insoluble provoca xantomas en los tendones de las manos y los pies, plana cutnea y arco corneal en la vida temprana, tambin existen anormalidades de la vlvula aortica o mitral y eventos cardiovasculares antes de los 30 aos1.

Materiales y mtodosSe realiz un estudio transversal de casos. Todas las medidas de lpidos y de laboratorio clnico se llevaron a cabo utilizando procedimientos estandarizados por el Laboratorio de Biologa Molecular y Medicina Genmica del Hospital Regional Lic. Adolfo Lpez Mateos, del 11 de noviembre de 2013 al 26 abril de 2014. Todos los anlisis de laboratorio se realizaron con mtodos estandarizados disponibles comercialmente.Se tomaron en cuenta tanto criterios de inclusin como de exclusin:Criterios de inclusin: IMC 30 kg/m2, edad mayor de 45 aos, nacionalidad mexicana y sin antecedentes conocidos de enfermedades crnicas. Criterios de exclusin: un IMC 30 kg/m2, edad menor de 45 aos, antecedentes de enfermedades crnicas.De los 480 pacientes solo se incluyeron en este estudio 118 pacientes que cumplan los criterios de inclusin.Los sujetos incluidos en el estudio firmaron un consentimiento informado donde a su vez, se recolectaron datos heredofamiliares y personales a partir de un cuestionario autoaplicable. Se les tomaron medidas antropomtricas mediante tcnicas estandarizadas (peso, talla, circunferencia de cintura y circunferencia de cadera).A cada paciente se le extrajo muestras sanguneas con un ayuno previo de 8 horas, las cuales se utilizaron para realizar los anlisis bioqumicos en suero y plasma (glucosa, colesterol total, triglicridos, HDL-C y LDL-C) y la obtencin de DNA. La extraccin de DNA se realiz con el kit de reactivos InviMag en el equipo InviGenius utilizando las instrucciones prescritas por el fabricante. El DNA extrado se cuantific por espectofotometra (Nanodrop 8000). Una vez alcanzada la concentracin deseada se prosigui con la genotipificacin de las muestras, utilizando el termociclador Applied Biosystems 7500 para PCR tiempo real. La presencia de hipercolesterolemia se determin con un colesterol total (CT) >200mg/dl o colesterol de lipoprotena de baja densidad (LDLc) >130mg/dl, y para determinar la asociacin del polimorfismo con la presencia de esta se corrieron los modelos genticos: dominante, recesivo y aditivo, se observ el valor de Chi2 para la significancia estadstica y as determinar qu modelo se acopla ms a la poblacin estudiada, as como tambin el valor de OR para determinar tanto el riesgo como la proteccin que confiere cada genotipo y alelo individualmente.El anlisis estadstico se llev a cabo utilizando las pruebas de T de Student y Chi2, tambin se determinaron las frecuencias allicas y genotpicas de LDLR rs1122608 y se comprob que estas estuvieran en equilibrio de Hardy-Weinberg.

ResultadosDe los 120 pacientes con obesidad que se estudiaron, 73 fueron mujeres y 45 hombres. Tabla 1. Presencia de hipercolesterolemia de acuerdo al sexo

Sexo Colesterol p=0.047LDLcP= 0.023

200 mg/ dl< 130 mg/dl>130 mg/dl

Femenino5676.7157.731723.2980.955980.82%57.841419.18%87.50

Masculino4191.1142.2748.8919.054395.56%42.1624.44%12.50

Total 9782.20100.002117.80100.0010286.44100.001613.56100.00

De todos los pacientes estudiados, 21 tenan un colesterol total >200 mg/dl y 16 tenan un LDLc >130 mg/dl (Tabla 1).La relacin de la presencia de hipercolesterolemia entre ambos sexos fue significativamente importante, obteniendo una prevalencia del 19.18% en las mujeres sobre un 4.44% en los hombres tomando en cuenta el LDLc obteniendo una significativa (P=0.023); as como un 23.29% en mujeres sobre un 8.89% en hombres tomando en cuenta el valor del Colesterol total con una P=0.047.

Tabla 2. Genotipificacin. Alelo de Riesgo T

LDLr frecuencia%Cum?

GG6974.1974.19

GT2223.6697.85

TT22.15100.00

Total 93100.00

La genotipificacion de las muestras revelo 24 pacientes con variantes causante de la enfermedad en LDLr, 22 de estos con mutacin heterocigota (GT) y 2 con mutacin homocigota (TT) (Tabla 2).

Asumiendo que las variantes son iguales, los valores de LDLr dominante de los grupos estudiados no presentan diferencia estadstica, odds ratio = 0.4565217; el intervalo de confianza del 95%= 0.052115-3.999082; p .479. (Tabla 3).Tabla 3. Relacin de la presencia del polimorfismo de hipercolesterolemia

LDLrT de student

Frecuencia ObservadaMediaError estndarDesviacin Estndar(Intervalo de confianza 95%)

No polimorfismo6997.279713.82349631.7603489.65004 104.9094

Polimorfismo2493.570835.80727828.4497381.55756 105.5841

Combinacion9396.322583.19708330.8315589.9729 102.6723

Diferencia3.7088777.336194-10.86357 18.28133

t= 0.5056grados de libertad= 91

No se encontr una asociacin significativa de hipercolesterolemia con el polimorfismo G>T (rs1122608) tras realizar ajuste por edad, IMC y el efecto de la mutacin del receptor de lipoprotenas de baja densidad con el modelo dominante (GT + TT frente a GG: odds ratio = 0.4565217; el intervalo de confianza del 95%= 0.052115-3.999082; p .479. (Tabla 4)Tabla 4. Asociacin genotpica del SNP rs1122608 con hipercolesterolemia (Colesterol Total) en 3 modelos genticos diferentes

Modelo Anlisis de regresin logstica

Odds RatioError estndar ZP IzI(Intervalo de Confianza 95% )

Dominante .4565217.5054869-0.0710.479.052115 3.999082

RecesivoOmitido+

Aditivo .4559353.4824024-0.740.458.0573178 3.626747

+ recesivo LDLR cay y 2 observados no se utilizan. chi2(0) predice fracaso perfectamente

En la tabla 5, se encontr que a los hombres les confiere proteccin tener una mutacin en el rs1122608 del Gen LDLr en comparacin con las mujeres, obteniendo as: odds ratio = 0.196; el intervalo de confianza del 95%= 0.0423- .9077; p .037. Tabla 5. Proteccin de hipercolesterolemia por sexo en portadores del polimorfismo rs1122608 del gen LDLr

LDL colesterol Anlisis de regresin logstica

Odds RatioError estndar ZP IzI(Intervalo de Confianza 95% )

Hombre 1Mujer 0 .1960133 .1532961-2.08 0.037.042324 .9077886

DiscusinEn este estudio, nosotros reportamos una baja asociacin entre el SNP rs1122en el gen LDLr en el cromosoma 19p13 que disminuye la presencia de hipercolesterolemia. Esto es similar a lo reportado por Xiong et al y donde se encontraron asociacin de los niveles de lpidos con el polimorfismo rs1122608, tambin en un corte de Doetichem y un meta anlisis de 7 GWAS encontraron que existe una asociacin significativa. Kathiresan et al investigaron la asociacin de genoma con infarto agudo al miocardio y reportaron un polimorfismo del gen LDLr (rs 1122608) utilizando el alelo de riesgo G, encontrando una frecuencia del 75% en los controles lo cual se considera una asociacin significativa (p 1,14 (1,09-1,19)). En nuestro estudio se utilizo el alelo de riesgo T donde se encontr una frecuencia de 25.81% en los pacientes que presentaron hipercolesterolemia. Van de Woestijne AP et al investigaron la asociacin de varios SNPs enlaces de LDLc con el infarto de miocardio, en el que incluan al SNP rs1122608 y reportaron que en los pacientes con enfermedad vascular establecida, los SNPs estudiados aumentaron los niveles plasmticos de LDLc y que el incremento de los alelos de LDLc pueden estar asociados a un mayor riesgo de infarto de miocardio. En nuestro estudio se encontr que tener un SNP rs1122608 confiere proteccin de hipercolesterolemia en los hombres por lo tanto, una disminucin del probable riesgo a desarrollar infarto al miocardio.

ConclusionesConcluimos que tener una SNP en rs1122608 del gen LDLr no se asocia con el posterior desarrollo de hipercolesterolemia. Lo cual podra jugar un rol protector de hipercolesterolemia en pacientes obesos En los hombres, tener un polimorfismo del gen LDLr les confiere proteccin de desarrollar hipercolesterolemia.En pacientes con obesidad establecida la dislipidemia no es dependiente del polimorfismo en rs1122608 del LDLr, sin embargo pudiera haber otros factores que desencadenen la enfermedad en estos pacientes.Creemos factible el estudio posterior de las mujeres que presentaron mayor incidencia de dislipidemia por el importante porcentaje de este.

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