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T/L =f3/ fe 11 L UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA "PREVALENCIA DE Ehrlichia sp., EN CANINOS INFESTADOS CON GARRAPATAS (Rhipicephalus sanguineus), MEDIANTE FROTIS SANGUÍNEO EN LA PROVINCIA DE TRUJILLO" TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE MÉDICO VETERINARIO PRESENTADA POR LA BACHILLER: LUZ TERESA RABANAL ALVA ASESOR M. Cs. RODOLFO GAMARRA RAMÍREZ COASESOR M. V. JULIO PAREDES SALDAÑA CAJAMARCA- PERÚ 2014
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T/L =f3/ fe 11 L
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA
"PREVALENCIA DE Ehrlichia sp., EN CANINOS INFESTADOS CON GARRAPATAS (Rhipicephalus sanguineus), MEDIANTE FROTIS SANGUÍNEO EN LA PROVINCIA
DE TRUJILLO"
TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE
MÉDICO VETERINARIO
PRESENTADA POR LA BACHILLER:
LUZ TERESA RABANAL ALVA
ASESOR M. Cs. RODOLFO GAMARRA RAMÍREZ
COASESOR M. V. JULIO PAREDES SALDAÑA
CAJAMARCA- PERÚ
2014
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA NORTE DE LA UNIVERSIDAD PERUANA
Fundada Por Ley N"14015 Del13 De Febrero De 1962 FACUL TAO DE CIENCIAS VETERINARIAS
DECANATO Av. Atahualpa 1050- Ciudad Universitaria Edificio 2F- 205 Fono 076 365852
ACTA DE SUSTENTACIÓN DE TESIS
En Cajamarca, siendo las once horas con quince minutos, del día veintinueve de agosto del dos mil catorce, se reunieron en el Auditorio de la Facultad de Ciencias Veterinarias "César Bazán Vásquez" de la Universidad Nacional de Cajamarca, los integrantes del Jurado Calificador, designados por el Consejo de Facultad, con el objeto de evaluar la sustentación de Tesis Titulada "PREVALENCIA DE Ehrlichia sp., EN CANINOS INFESTADOS CON GARRAPATAS (Rhipicephalus sanguineus), MEDIANTE FROTIS SANGUÍNEO EN LA PROVINCIA DE TRUJILLO" presentada por la Bachiller en Medicina Veterinaria: Luz Teresa Rabanal Alva.
Acto seguido el Presidente del Jurado procedió a dar por iniciada la sustentación, y para los efectos del caso se invitó a la sustentante a exponer su trabajo.
Concluida la exposición de la Tesis, los miembros del Jurado Calificador formularon las preguntas que consideraron convenientes, relacionadas con el trabajo presentado; asimismo, el Presidente invitó al público asistente a formular preguntas concernientes al tema.
Después de realizar la calificación de acuerdo a las Pautas de Evaluación señaladas en el Reglamento de Tesis, el Jurado Calificador acordó: APROBAR la sustentación de Tesis para optar el Título Profesional de MÉDICO VETERINARIO, con el Calificativo Final obtenido de DIECISÉIS (16).
Siendo las doce horas y catorce minutos del mismo día, el Presidente del Jurado Calificador dió por concluido el proceso de sustentación.
~th= . M.Sc. M.V. FERNANDO ALBERTO OBLITAS GUAYAN
SECRETARIO
J~~ ·-M.Sc. M. V. MARIA MANUELA CABRERA NUNEZ
VOCAL
DEDICATORIA
A Jehová por guiarme siempre en mis decisiones e iluminar mi vida en los momentos
difíciles.
A mis padres José Serapio Rabanal Ramírez y María Ysabel Alva Zavaleta, con cariño
y aprecio, por su protección, amor sacrificio y apoyo en todas mis decisiones para mi
formación profesional y personal.
A los motivadores de mi vida, Misael y Antonio, por darme la dicha de amarlos.
A mis hermanos, Kike, Pepo, Misael y Mario, por su gratitud desinteresada, su cariño y
comprensión.
A quienes sin escatimar esfuerzo alguno; han sacrificado gran parte de su vida para
formarme y educarme.
A mis abuelas, Bertila Zavaleta Mauricio, Mercedes Alva Minchón y Felicita Alva
Minchón, por el ejemplo de amor, lucha, valor y lealtad
A mis abuelos Misael Rabanal Alcalde y Santiago Alva Minchón.
La autora.
AGRADECIMIENTO
A la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Cajamarca, por la
formación profesional.
A mi asesor Rodolfo Gamarra, por su confianza, tiempo y dedicación en este trabajo de
investigación.
A Manuela Lujan Velásquez y Julio Paredes que compartieron sus conocimientos, por
sus valiosas ideas, recomendaciones y experiencias durante la realización de este
trabajo.
A mi hermano Misael por acompañarme por lugares peligrosos para la ejecución de
esta investigación y a Juan Carlos por la confianza con su clave de acceso.
A mis primos Shesira, Angy, Tula, Sussan, Rosita, Karin, Beto, Juan Carlos, Edu, Hans,
Haniel, Victor, Adonis, Franco, Luis, Felix, Alessandro, Stephanie, Alan, Luz, Jorge,
Toño, Carlos, Hugo, José y Vivían, por su amistad y aliento.
A mis tíos Luis Antonio, Santiago, Misael, Aldo, mamá Magaly, mamá Carmen y Silvia
por su preocupación para con mi persona en todo momento.
A Vilma y Elmer por su hospitalidad brindada en Cajamarca.
A mis amigos Valeria Horna, T ania Ramos, Ronald Romero, Tito Sangay y Milagros
Sánchez, por brindarme su amistad y apoyo para la realización de este proyecto.
Luz T Rabanal Alva
RESUMEN
En el presente trabajo de investigación se planteó como objetivo, determinar la prevalencia de Ehrlichia sp. en caninos positivos a garrapatas, de la provincia de Trujillo - La Libertad, mediante la técnica de Frotis Sanguíneo. Se utilizó 100 caninqs, de los cuales se obtuvo la muestra por punción en la cara ventral de la oreja, realizándose en una lámina porta objetos un extendido, y en el laboratorio, se procedió a la coloración Wright. Se observó cuerpos de inclusión o mórulas intracitoplasmáticas basófilas en neutrófilos, linfocitos y plaquetas, indicadores de infección por Ehrlichia sp .. Se determinó la prevalencia por distritos siendo de 45% en el distrito de Trujillo, 40% en Huanchaco, 40% en Laredo, 35% en El Porvenir y 25% en Moche. Por lo tanto se concluye que, en la provincia de Trujillo existe una prevalencia de 37% de Ehr/ichia sp. en caninos infestados con garrapatas.
Palabras Clave: Ehrlichia sp, Ehrlichiosis canina, Mórulas intracitoplasmáticas
basófilas.
ABSTRACT
In the current investigative work the following objective was presented: To determine the prevalence of Ehrlichia sp. in canines positive for ticks in the province of Trujillo - La Libertad, found by means of a blood smear technique. A sample of 100 canine subjects was tested. The blood sample was drawn from the ventral side of the ear, then a slide smear prepared. Slides were then processed with the Wright Stain in the laboratory to for appropiate staining. lt was observed that inclusion bodies or basophilic intracytoplasmic morulae in neutrophils, lymphocytes, and platelets, all indicators of infection by Ehrlichia sp. The individual districts presented a prevalence of 45% for Trujillo, 40% in Huanchaco, 40% in Laredo, 35% in El Porvenir, and 25% in Moche. Therefore it is concluded that, in the province of Trujillo there is a prevalence of 37% of Ehrlichia sp. in dogs infested with ticks.
Keywords: Ehrlichia sp., Canine Ehrlichiosis, basophilic intracytoplasmic morulae.
ÍNDICE
CAPÍTULO 1 •.•..••..•....•••..••.•..........•••.•......•.••............••••.•..•..........•.•.•.•.•.•.....•.....•..• 1
INTRODUCCIÓN ............................................................................................. 1
OBJETIVOS .................................................................................................. 3
CAPÍTULO 11 •..••..•••.....•.•.•.•••....••.•.••.•..•...•.•••.•••...•...•.•..•..........•.•••...•••...•..••..•..•..•. 4
MARCO TEÓRICO ........................................................................................... 4
Antecedentes ................................................................................................ 4
Características taxonómicas, morfológicas de Ehrlichia ............................... 6
Diagnóstico ....................................•............................................................ 13
Tratamiento de la Ehrlichiosis ..................................................................... 15
Garrapatas .............................................. , ................................................... 15
CAPÍTULO 111 ...•...•....•.•...•.••....•...•.••.•...•....•.........................••..•.•.•.•.•...•.•.•..•....... 19
MATERIALES Y MÉTODOS .......................................................................... 19
UBICACIÓN ................................................................................................ 19
MATERIALES ............................................................................................. 20
METODOLOGÍA ......................................................................................... 21
DETERMINACIÓN DE LA PREVALENCIA ................................................. 25
DISEÑO ESTADÍSTIC0 .............................................................................. 26
CAPÍTULO IV ........................................................................ , ........................... 26
RESULTADOS ............................................................................................... 26
CAPÍTULO V .............................................. · ....................................................... 31
DISCUSIÓN ................................................................................................... 31
CAPÍTULO VI .................................................................................................... 33
CONCLUSIONES ........................................................................................... 33
CAPÍTULO VIl ................................................................................................... 34
BIBLIOGRAFÍA .............................................................................................. 34
ANEXOS ........................................................................................................ 42
CAPÍTULO 1
INTRODUCCIÓN
Ehrlichia canis es una bacteria gramnegativa que causa la enfermedad
Ehrlichiosis, la misma que es transmitida por la mordedura de Rhipicephalus
sanguineus, mediante sus secreciones glandulares salivales contaminadas
(Roura, 2006), también se reportó un trabajo donde utilizaron ninfas de
Dermacentor variabilis criados en el laboratorio, las que fueron alimentadas con
canes infectados a Ehr/ichia canis, quedando demostrada la transmisión
experimental de Ehrlichia canis por Dermacentor variabilis (Johnson y col.,
1998).
Esta bacteria gramnegativa infecta leucocitos circulantes, donde se multiplican
dentro de las vacuolas fagocíticas, formando cúmulos de Ehrlichias que se
denominan, en conjunto, mórula (Brooks y col., 201 0).
En canes se han identificado especies de Ehrlichias parasitando monocitos,
granulocitos y plaquetas. La Ehrlichiosis es una enfermedad muy importante
puesto que al atacar las células antes indicadas, deprimen el sistema inmune,
trayendo como consecuencia: aplasia medular, aumento de la suseptibilidad
para infecciones con otros agentes secundarios, anemia, hemorragia, lesión
lenta del riñón que provoca muchas veces falla renal irreversible; todo esto
afecta la salud y la calidad de vida del canino (Vadillo y col., 2002; Tami, 2003):
También cobra importancia a nivel mundial la presencia del vector
Riphicepalus sanguineus el cual participa en la transmisión de la enfermedad
en canes y humanos. Este ectoparásito se ha reportado como transmisor de
2
Ehrlichiosis, Hepatozoonisis, Babesiosis, Anaplasmosis, Lyme, inclusive en
infecciones mixtas. La distribución mundial de Rhipicephalus sanguineus se
originó por la ausencia de medidas de control oportunas, transformándose en
un problema serio de higiene ambiental, sobre todo en zonas tropicales y
subtropicales.
Numerosos estudios evidencian la relación de la Ehrlichia con el vector
Rhipicephalus sanguineus; reportando en caninos, altas seroprevalencias en
distintas regiones del mundo; así, en la Florida (EEUU) se reporta 98%
(Bélanger y col., 2002); en Maracaibo (Venezuela) un 83.63% (Arranga, 1998),
y en Niteroi (Brazil) un 25% (Poubel, 2012). Estos estudios de seroprevalencias
sugieren que la Ehrlichiosis es bastante frecuente en el mundo y está tomando
vital importancia.
Así el Ministerio de Salud - Región La Libertad, nos reporta una población
canina estimada de 202 826 caninos en la provincia de Trujillo, la cual se
encuentra en probable riesgo a infección con Ehrlichia sp ...
En la provincia de Trujillo no se han encontrado reportes recientes de la
prevalencia de Ehrlichia sp. en caninos utilizando la técnica de Frotis
Sanguíneo, por lo que se decidió en el presente estudio aplicar dicha técnica,
con el objetivo de determinar la prevalencia de Ehrlichia sp. en caninos
positivos a garrapatas procedentes de la provincia de Trujillo mediante la
técnica Frotis Sanguíneo, coloreados con tinción Wright.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
./ Determinar la prevalencia de Ehrlichia sp. en sangre de caninos
infestados con garrapatas, procedentes de los distritos: Trujillo,
Laredo, Huanchaco, El Porvenir y Moche de la provincia de Trujillo,
región La Libertad, utilizando la técnica Frotis Sanguíneo.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
3
./ Determinar la prevalencia de Ehrlichia sp. en caninos infestados con
garrapatas, de la provincia de Trujillo- La Libertad .
./ Identificar la frecuencia de presentación de mórulas de Ehrlichia sp.
en el citoplasma de los leucocitos.
CAPÍTULO 11 .
MARCO TEÓRICO
1. Antecedentes
Durante la Guerra de Vietnam, la bacteria Ehrlichia sp. causó la muerte
de cientos de perros pertenecientes a las fuerzas armadas y fue
identificada por primera vez en el Instituto Pasteur (Argelia) en 1935
(Waner y Harrus, 2000).
Posteriormente, en 1945, Moshkovskii redenominó a este agente
patógeno con el nombre de Ehrlichia en honor al bacteriólogo alemán
Paul Ehrlich. En los años 40 se describen diversas infecciones por este
agente en África e India, en los años 50 en las Antillas Holandesas y a
partir de los años 60 se describe la enfermedad en Singapur, Vietnam,
Estados Unidos y Europa (Peczar y col., 1990; Harkess y col., 1991).
Ehrlichia sp. está presente sobre todo en países tropicales, pero es de
distribución mundial, por la presencia del vector Rhipicephalus
sanguineus (Vadillo y col., 2002).
A nivel mundial se han reportado seroprevalencias de Ehrlichia en
caninos, con los siguientes porcentajes: 42% en Zimbawe, 33% en
Egipto y 30% en Israel (Waner y Harrus, 2000).
En América se reportó casos positivos a Ehrlichia sp. en caninos: en
Estados Unidos (La Florida) un 97%, mediante serología (Bélanger y
S
col., 2002); en México un 30% (Mil, 2005), en Venezuela (Maracaibo)
un 83.63% (Arranga, 1987), en Brasil (NiterÓi) un 25% (Poubel, 2012).
En Perú en el distrito de Comas, provincia y departamento de Lima, se
reportó un 8.1% de casos positivos en caninos positivos a Ehrlichia sp.,
mediante Frotis Sanguíneo con coloración Wright, también se encontró
56.8% a Anaplasma spp., 10.8% a Babessia spp., también reportó
asociaciones de Ehrlichia canis con Anaplasma spp. en un 13.5% , y de
Basesia spp. con Anaplasma spp. en un 10.8% (Paredes, 1993).
En · la provincia de Trujillo, mediante la técnica Frotis Sanguíneo
utilizando coloración Giemsa, se reportó un 63.3% de casos de caninos
positivos a Ehrlichia sp. (Robles, 2008). También en la misma zona ·y
con canes se reportó un 60.47% de seroprevalencia a Ehrlichia canis
(Meléndez, 2006).
En la actualidad, a nivel mundial, la infección por esta bacteria es
considerada como una zoonosis de importancia médica ( Jawetz y col.,
1996; Marshall y col., 2012; Murray y col., 2005; Rosenthal y Pauller,
2007). Se reportaron, en Perú (Ancash) seroprevalencias de 9.2% de
Ehrlichiosis humana (Anaya y col., 2009). En Lima (Perú) se reportó en
propietarios de caninos un 14.2% mediante lnmunofluorescencia
Indirecta (Barrios, 2010), También se encontraron seroprevalencias en
Morí de 25%, Pampas 23%, Cochapata 3% y Santo Tomás 3% (Moro y
col., 2009). Así, en Trujillo, mediante la técnica Frotis Sanguíneo, se
determinó una prevalencia de 60% a Ehrlichiosis humana en pacientes
anémicos (Paredes, 2014) y en el distrito de Trujillo, se demostró una
frecuencia de 18.2% de casos positivos, en 110 personas (Horna, 2013).
' Mediante un formato de ELISA se empleó como antígeno la proteína
MAP2 recombinante. En este estudio se utilizaron 141 muestras de
suero de caninos positivos a E. canis, teniendo como resultado un 1 00
6
% de concordancia entre caninos infectados experimentalmente y,
caninos del grupo control, que fueron infectados con otras especies de
Ehrlichias 5.7% fueron positivos (AIIeman y col., 2001; Knowles y col.,
2003).
2. Características taxonómicas, moñológicas de Ehrlichia
2.1. Taxonomía
La clasificación taxonómica de este microorganismo está basada en el
análisis de la secuencia genética del 16S del ARN ribosomal, reforzado
por las características biológicas y antigénicas.
Superreino:
Reino
Phylum
Clase
Orden
:Bacteria
:Manera
: Proteobacteria
: Alphaproteobacteria
: Rickettsiales
Familia : Anaplasmataceae
Género : Ehrlichia
El género Ehrlichia, denominado así en honor al padre de
microbiología Paul Ehrlich, comprende las especies Ehrlichia
chaffensis, Ehrlichia ewinggi, Ehrlichia canis, Ehrlichia muris, Ehrlichia
ruminantium y Ehrlichia platys; caracterizadas por infectar a las células
mononucleares y granulocíticas, formando mórulas o inclusiones
intracitoplasmáticas; siendo su localización intracelular lo cual la
protege de la respuesta de anticuerpos del huésped (Murray y col.,
2005; Vadillo y col., 2002).
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2.2. Características moñológicas
Ehrlichia sp. es una bacteria gramnegativa (Jawetz y col.,2000), mide
entre 0.2 a 0.4 micras, está envuelta por dos membranas que carecen
de peptidoglucano y lipopolisacáridos, pero contiene glicoproteínas
(Walker y col., 2004).
Las mórulas en examen microscópico, se observan dentro del
citoplasma, son de color azulófilo, teniendo como tamaño un diámetro
entre 2 micras a 3 micras. La identificación de la mórula proporciona un
permanente registro de Ehrlichia sp. (Rikihisa, 1991; Ferreyra, 2003).
Las distintas especies de estos géneros comparten diversos antígenos
proteicos, como consecuencia de ello son frecuentes las reacciones
cruzadas en las pruebas serológicas de detección de anticuerpos.
Los cultivos se realizan en laboratorios de bioseguridad tipo 111 y
precisando para su crecimiento líneas celulares como las células
promielocíticas HL-60 y precursores mielomonocíticos (Paddock y
Childs, 2003).
2.3. Características tintoriales
Las tinciones utilizadas para la identificación de esta bacteria son del
tipo Romanowsky (Wright, Giemsa y tinciones rápidas modificadas),
estas resultan muy útiles porque son menos sensibles al pH de la
solución y son las que permiten en general una mejor valoración
morfológica del Frotis Sanguíneo (Gutierrez, 2008).
Estas tinciones contienen un colorante ácido (eosina) y otro básico
(azul de metileno) (Murray y col., 2005). La coloración Wright es la más
empleada y tiñe las bacterias de color púrpura a azul, lo que permite la
visualización de las características de las mórulas (Rikihisa, 1991 ). Las
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mórulas tiñen débilmente con el método de tinción Gram (Murray y col.,
2007).
3. Características Clínicas, Epidemiológicas y Patológicas de la
Ehrlichiosis
Ehrlichiosis es la enfermedad causada por bacterias del género Ehrlichia
sp., siendo transmitida por medio de las garrapatas y con síntomas
parecidos a otras enfermedades. También afecta a múltiples especies de
animales tales como perro, zorro, coyote, chacal, ciervos de cola blanca,
ratones de pies blancos, ardillas listadas, ratones de campo (Murray y col.,
2005). A nivel mundial es considerada como una zoonosis (Paredes, 2014;
Brooks y col., 2000).
Otros nombres con los cuales ha sido conocida la enfermedad son: Fiebre
Hemorrágica Canina; Enfermedad del Perro Rastreador; Tifus de la
garrapata canina, rickettsiosis canina; desorden hemorrágico de Nairobi,
fiebre canina Lahore y Pancitopenia Tropical Canina (Biood y Studdert,
1993).
3.1. Clasificación según la célula que infecta
3.1.1 Ehrlichiosis Monocítica Canina (EMC)
Esta enfermedad tiene como agentes etiológicos a Ehrlichia
chaffeensis, Ehr/ichia ruminantium y Ehrlichia canis (Quinn y col., 2008;
Romero y col., 2011 ); las que infectan a células mononucleares
(Monocitos y Linfocitos). Es transmitida a través de la mordedura de la
garrapata infectada (Murray y col., 2005; Cercenado y Cantón, 2007).
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Los signos de la EMC pueden incluir depresión, letargia, anorexia,
fiebre, linfoadenomegalia, esplenomegalia, pérdida moderada de peso,
depresión, tendencia al sangrado, epistaxis, petequias, equimosis en la
piel y/o ocasionalmente edema periférico en miembros superiores y
escroto. Siendo la trombocitopenia el hallazgo hematológico más
común (Ferreira, 2003).
La bacteria Ehrlichia canis esta confinada a las regiones tropicales y
subtropicales, afectando a todos los cánidos; esta relacionada con el
vector Rhipicepha/us sanguineus en el que desarrolla una transmisión
transestádica. Una vez infectado el can, se convierte en reservorio de
la bacteria (Romero y col., 2011 ).
En un trabajo de investigación, realizado en Venezuela, utilizando la
técnica Frotis Sanguíneo para encontrar casos positivos a mórulas; se
les extrajo el ADN, aplicando pruebas moleculares (Reacción en
Cadena de la Polimerasa) y se detectó el 33% de muestras de perros
con infección por Ehrlichia canis y 1 00% con Ehrlichia chaffeensis
(Gutiérrez y col., 2006).
En la fase aguda de la enfermedad se produce la replicación del
microorganismo en las células mononucleares, con diseminación
hematógena y vasculitis (Peczar y col., 1990).
La Ehrlichiosis crónica causada por E. canis puede desarrollarse en
cualquier raza canina; pero ciertas razas como el caso del Pastor
Alemán, pueden estar predispuestas (Schaer y col., 2006).
En la fase crónica se produce una respuesta inmune ineficaz, por parte
del hospedador conduciendo a pancitopenia relacionada con hipoplasia
de la médula ósea. Debido a la larga vida de los hematíes, la
trombocitopenia y la neutropenia aparecen generalmente antes de la
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anemia. La leucopenia y la pancitopenia son hallazgos menos
frecuentes que pueden aparecer más tarde en el curso de la
enfermedad (Schaer y col., 2006).
En 1996, se demostró que E. chaffeensis causa signos de enfermedad
en perros, indistinguible de la infección provocada por E. canis (Waner
y Harrus, 2000).
Ehrlichia ruminantium es el agente causal de la Ehrlichiosis de los
rumiantes, también llamada "enfermedad del corazón acuoso", debido
a que produce hidropericardio. Esta Ehrlichia infecta las células
endoteliales, células de la línea mieloblástica y células de la línea
monoblástica de los rumiantes. Su transmisión se realiza por medio de
garrapatas vectores del género Amb/yomma sp. La distribución de la
enfermedad ligada a la de su vector se ha limitado al continente
africano y algunas islas del Caribe, provocando una alta mortalidad en
los rumiantes (Romero y col., 2011; Kobashi y col., 2005).
3.1.2. La Ehrlichiosis Granulocítica Ca ni na (EGC)
La EGC es producida por Ehrlichia ewingii, Ehr/ichia muris,
Anap/asma phagocytophylum (AIIeman y Couto , 2008).
Ehrlichia ewingii infecta a los granulocitos como neutrófilos y más
raramente, eosinófilos. La garrapata vector es Amblyomma
americanum de distribución exclusiva en los Estados Unidos, por lo
que esta infestación se considera actualmente restringida a esta área,
aunque recientemente se ha observado la infestación natural por este
agente en otras especies de garrapatas como Rhipicephalus
sanguineus y Dermacentor variabilis en Oklahoma. Ademas, para la
identificación molecular de esta bacteria, esta en investigación
(Yabsley y col., 2011 ).
11
Ehrlichia muris se aisló en 1983 del bazo de un roedor salvaje en
Japón. Esta Ehrlichia ha sido aislada de la garrapata Haemaphysalis
flava siendo probable su papel como vector, habiéndose encontrado
hasta el momento en Japón y Corea. El poder patógeno de esta
bacteria se desconoce. La inoculación experimental de este agente en
perros, vía intravenosa, no produjo sintomatología, observándose tan
sólo una ligera y fugaz elevación del título de anticuerpos. Mediante
los controles serológicos se ha detectado la exposición a este agente
o a alguno similar en hombres, perros y otros animales (Thomas y
col., 2009).
3.2. Sintomatología
La Ehrlichiosis canina se inicia con un proceso agudo caracterizado por
depresión, anorexia, letargo, pérdida de peso y fiebre; seguido por una
etapa subaguda; manifestándose en la etapa crónica hemorragias,
linfadenopatías, esplenomegalia, poliartropatías y signos neurológicos
(Manual Merck, 2011 ).
La enfermedad tiene un periodo de incubación de diez a veinte días
seguido por fiebre variable, anorexia pérdida de peso, depresión y
debilidad. Algunos animales mueren en la fase aguda, pero la mayoría
entran al estado subclínico de duración variable. La etapa crónica o
final, comprende una duración de noventa días, presentando signos
clínicos de epistaxis, hemorragia generalizada e incluso insuficiencia
renal (Cauto y col., 2008).
•
12
3.3. Epidemiologia
La Ehrlichiosis, tiene como vector a la garrapata marrón del perro
(Rhipicephalus sanguineus), viéndose favorecida en las estaciones de
verano y primavera cuando la proliferación de vectores es mayor por la
presencia de tierra, humedad y temperaturas altas (Vadillo y col.,
2002), recomendándose en países de climas templados y tropicales un
programa de control para el vector (Jawetz y col., 2000; Cercenado y
col., 2007).
En las garrapatas la transmisión de Ehrlichia sp. es transestadial (Los
estados de ninfa y adulto son capaces de transmitir la enfermedad. En
estado de larva pueden adquirir la enfermedad y la mantienen hasta
.ninfa) (Waner y Harrus, 2000) y pueden sobrevivir como adultos 155 a
568 días sin alimentarse y transmitir la infección por 155 días después
de infectarse. Este fenómeno permite a las garrapatas sobrevivir
durante el invierno e infectar a los huéspedes hasta la primavera
siguiente (Waner y Harrus, 2000), éstas pueden transmitir el agente a
los perros suceptibles hasta por 5 meses (Quinn y col., 2008). Se han
encontrado perros con Ehrlichiosis que presentan infecciones
concomitantes con Bartonella sp., Babesia canis, Hepatozoon canis
(Romero y col., 2011 ).
3.4. Patogenia
La Ehrlichia en perros es transmitida por la mordedura de
Rhipicephalus sanguineus, mediante sus secreciones glandulares
salivales contaminadas (Roura, 2006).
Dentro del hospedero, Ehrlichia sp. busca su célula sanguínea
(leucocitos, monocitos y plaquetas), que depende de la especie, luego
se introduce por endocitosis siendo el mecanismo mediante el cual
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Ehrlichia ingresa; e inhibe la fusión fagosoma-lisosoma de células del
hospedero, porque no posee en la membrana peptidoglucano (Waner y
Harrus, 2000; Murray y col., 2005; Vadillo y col., 2002; Jawetz y col.,
1996). La Ehrlichia en el perro tiene un periodo de incubación de 1 a 3
semanas, presentando como características generales: fiebre,
depresión y anorexia, dependiendo del nivel de infectividad (Brooks y
col., 2000), luego lisa la célula, liberando las Ehrlichias que infectaran
más células.
En la garrapata, Ehrlichia se multiplica en el interior de los hemocitos,
en la pared del tracto digestivo (epitelio del intestino medio) y en las
células de las glándulas salivales. Al alimentarse, las garrapatas
introducen las bacterias a través de su saliva contaminada con
Ehrlichia sp. (Waner y Harrus, 2000)
4. Diagnóstico
El diagnóstico se inicia con la anamnesis, presentación clínica, hallazgos
patológicos al examen clínico y se confirma con la notificación de las.
pruebas de laboratorio (Cercenado y col., 2007; Walker y col., 2004).
Los propietarios pueden mencionar una infestación previa con garrapatas o
la visita reciente a un área endémica (Waner y Harrus, 2000).
Al examen clínico puede observarse epistaxis, hematuria, melena,
petequias y equimosis en la piel, causadas por la trombocitopenia.
Asimismo las señales variables de anorexia, depresión, pérdida de la
resistencia, rigidez y la resistencia para caminar, edema de las
extremidades o el escroto y tos con disnea (Cercenado y col., 2007).
El diagnóstico de laboratorio se inicia mediante hallazgos en extendidos de
sangre, coloreados con tinción Wright, siendo preferible que en la toma de
muestra provenga de un vaso o capilar auricular, observando inclusiones
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intracitoplasmáticas leucocitos, monocitos y plaquetas. Esta es
considerada una prueba confirmatoria para el diagnóstico de infección por
Ehrlichia sp. (Cauto y col., 2008). (Granados y Villaverde, 1996; Gutiérrez y
col., 1999; Jawetz y col., 1996). Las mórulas de E. ewingii y A.
phagocytophilum se ven rápidamente en los neutrófilos de sangre
periférica de los perros afectados. Sin embargo las mórulas de E. canis de
los linfocitos y monocitos de caninos se detectan raramente en sangre
periférica, y solo durante estadios tempranos de la infección. En el
hemograma se revela trombocitopenia, anemia (no regenerativa) y
leucopenia.
En la citología de aspiración se revela nódulos linfáticos reactivos,
frecuentemente, plasmocitosis marcada. También las mórulas de E. ewíngii
y E. equi pueden identificarse en los neutrófilos sinoviales de algunos
perros (Cowel y col., 2009).
El diagnóstico monitorizado del paciente con infección por E. canis se
puede complementar obteniendo muestras del suero con una prueba
comercializada para uso en clínica o con un examen de laboratorio por
inmunofluorescencia indirecta (IFI). No obstante estos test no diferencian
completamente los organismos rickettsiales y se pueden producir falsos
negativos basados en títulos IFI bajos. El análisis molecular (PCR) es el
medio más fiable para distinguir las infecciones entre especies de Ehrlichia
y Anaplasma. No obstante debido al bajo número de organismos
circulantes, con este medio todavía puede producirse falsos negativos de
Ehrlichiosis monocítica con muestras de sangre entera de perros con E.
canis. (Cowel y col., 2009). Así también teniendo como limitación su
elevado costo y su delicada manipulación (Méndez, 2004; Carrillo y col.,
2000).
15
5. Tratamiento de la Ehrlichiosis:
Los fármacos más empleados para el tratamiento de Ehrlichiosis canina;
son la doxiciclina, dipropionato de imidocarb y cloranfenicol.
Para el tratamiento durante las fases aguda y crónica, se emplea el
. fármaco doxiciclina; iniciando por vía endovenosa por dos o tres días,
luego se completa por vía oral por un periodo de 1 O días a 6 semanas,
dependiendo de la respuesta clínica. Se recomienda en dosis de 5mg a 1 O
mg por Kilo (Walker y col., 2004).
El tratamiento con Dipropionato de lmidocarb se puede emplear,
administrando inyecciones de 5 mg/Kg, vía Sub cutánea por un intervalo de
2 semanas( Manual Merck, 2011 ).
En perros menores a 6 meses de edad se recomienda el uso de
cloranfenicol a razón de 15-25 mg por Kilo, vía oral o intravenosa cada 8
horas, durante 2 semanas (Manual Merck, 2011 ); ya que la tetraciclina y la
Oxitetraciclina producen coloración amarillenta en los dientes en etapa de
erupción (Maddison y col., 2004)
6. Garrapatas
Las garrapatas son artrópodos del suborden lxodida que se dividen en tres
familias, dos de las cuales son: familia lxodidae (garrapatas duras) y
Argasidae (garrapatas blandas). En la familia lxodidae se observa la
porción anterior del cuerpo que incluye un escudo ("escudo dorsal") y un
capitulo orientado hacia adelante ("cabeza"), de donde proviene el termino,
"garrapata dura ". Éstos son ectoparásitos temporales obligados de
reptiles, aves o mamíferos y tienen un gran tamaño (al menos en el estado
adulto) resultando observables a simple vista (Cordero y Rojo, 1999).
16
6.1. Familia lxodidae
Incluye a las garrapatas duras cuyo calificativo alude a la dureza de
sus tegumentos, deriva de la presencia, en el dorso de su idiosoma, de
un escudo esclerificado que lo cubre totalmente en los machos y tan
solo en su región anterior en las hembras. Son también conocidos con
el nombre de ricinos por la semejanza que guardan algunas hembras
gravidas como las semillas del ricino (Koneman y col., 2008).
6.2. Morfología General
En el cuerpo se distinguen dos regiones bien diferentes: el gnatosoma,
constituido por el conjunto de sus piezas bucales, visibles dorsalmente
dada su posición apical, y el idiosoma, en el que el diferente desarrollo
del escudo dorsal en machos y hembras les confiere un notable
dimorfismo sexual (Koneman y col., 2008).
El gnatosoma, esta constituido por una pieza bucal, la base del
capitu/um, cuya articulación con el idiosoma le permite una notable
movilidad hacia la parte ventral del mismo, hasta poderse situar
formando un ángulo agudo con él. La forma de esta pieza varía en los
distintos grupos de la familia, siendo su contorno rectangular,
hexagonal o subtriangular. En sus ángulos inferiores puede presentar
unas apófisis más o menos acusadas, denominadas córnuas. En las
hembras la base del capitulum se distingue por la presencia, en su
cara dorsal (Koneman y col., 2008).
En el mismo gnotosoma, se implantan apicalmente las piezas bucales
típicas de los ácaros y de conformación muy peculiar en los ixódidos:
los quelíceros, los maxilipapos y el hipostoma. Los quelíceros, cuyo
dígito móvil o extremo está provisto de unos dentículos cortantes, se
sitúan dorsalmente. Los maxilipalpos son tetra-articulados. Sus artejos
17
segundo y tercero están excavados en su cara interna protegiendo, en
reposo, los quelíceros y el hipostoma. El cuarto es muy pequeño y se
halla situado en una toseta de la cara ventral del tercero, visible, por lo
tanto, tan solo cuando se observa por su cara ventral (Koneman y col.,
2008).
El hipostoma, o pieza ventral, se halla provisto de unas series de
dentrículos puntiagudos dirigidos hacia atrás que permiten una sólida y
tenaz fijación en la piel del hospedador (Koneman y col., 2008).
El idiosoma, tiene su tegumento endurecido por la presencia de un
escudo dorsal que en los machos cubre casi toda esta zona. En las
hembras, este escudo dorsal sólo cubre el tercio anterior del idiosoma
(Koneman y col., 2008).
6.3. Género Rhipicepalus sanguineus
Procedente de África y zonas templadas. Los ojos son planos, solo en
raras ocasiones hemisféricos. El escudo dorsal es liso, brillante y
unicolor, pardonegro, y las piezas bucales son cortas, el surco anal
bordea por ambos lados la abertura anal. Los palpos están
deprimidos dorsalmente y en la cara interior del primer artejo ·llevan
una dilatación en forma de placa, con 5 a 7 cedas finalmente
plumosas. Todos los segmentos de las patas son cilíndricos y
relativamente cortos, de color pardo-rojizo uniforme. La primera
cadera esta hendida, llevando dos fuertes apéndices. Los machos
poseen dos placas anales triangulares. Los estigmas tienen forma de
coma con la punta dirigida hacia atrás y hacia arriba (Borchert, 1964 ).
Se ha informado que, la garrapata marrón del perro también puede
transmitir la bacteria Rickettsia ricksettsii, causando "Fiebre de las
Montañas
18
Rocosas" (FMR) y posiblemente Anaplasma platys en los seres
humanos y caninos. En las regiones del sur de Europa, África y Asia,
la garrapata marrón del perro es el principal vector para Rickettsia
conorii, que es la bacteria responsable de la Fiebre Maculosa del
Mediterráneo en los seres humanos. R. sanguineus también se
reporta como vector para el parásito protozoario Hepatozoon canis, lo
que provoca hepatozoonosis canino en perros. Así como Babesia
canis (babesiosis canina) en perros. Bartonella hense/ae, la bacteria
que causa la enfermedad por arañazo de gato. También en trabajos
con exposición experimental se demostró que puede causar
Leishmaniasis en seres humanos (Paskewitz, 2013).
El diagnostico tradicionalmente se ha realizado mediante la
observación directa de las garrapatas sobre los animales: orejas,
cara, cuello, dorso, pliegues de la región perianal e inguinal, y en
ocasiones las patas (interdigitales ), son los lugares preferidos de
fijación (Cordero y Rojo, 1999).
CAPÍTULO 111
MATERIALES Y MÉTODOS
1. UBICACION
El presente trabajo de investigación, se realizó en el departamento La
Libertad, provincia de Trujillo, en los distritos: Trujillo, Laredo, Huanchaco,
El Porvenir y Moche.
En cuanto al procesamiento de las muestras del frotis sanguíneo se llevó
a cabo en el Laboratorio de Inmunología de la Universidad Nacional de
Trujillo, y la tipificación de garrapatas se realizó en el Laboratorio de
Inmunología Veterinaria de la Facultad de Ciencias Veterinaria de la
Universidad Nacional de Cajamarca, del distrito y provincia de Cajamarca.
La ciudad de Trujillo cuenta con las siguientes características geográficas
y meteorológicas 1 :
- Altitud
- Latitud Sur
- Longitud Oeste
- Temperatura media anual
- Precipitación pluvial anual
- Humedad relativa media anual
- Clima
1Estación Climatológica Ordinaria Trujillo- Laredo (SENAMHI-2013).
:65 m.s.n.m.
: 8° 06" 03""
: 78° 59" 05""
: 21.1 o
:25mm
:88%
: Semiseco-Cálido
20
2. MATERIALES.
2.1. Material Biológico.
Se trabajó con un total de 1 00 muestras de sangre de caninos (de
diferente sexo y edad), infestados con garrapatas (Rhypicephalus
sanguineus).
2.2. Material y Equipo de Laboratorio
Microscopio de luz incorporada.
Estéreomicroscopio2
Láminas porta objetos.
Colorante Wright 3.
Solución Buffer pH 7.24 •
Aceite de cedro.
Agua destilada.
Pipetas Pasteur.
Lancetas de Frank.
Pi zeta.
Papel toalla.
Caja porta láminas.
Guantes de diagnóstico.
Algodón.
Caja porta láminas.
Pinzas
Estilete
Frascos.
2 Karl Stemi DV con estactivo LCD 3
Distribuidora JAMPAR laboratorio Biolabtest cod.013010272. 4
Distribuidora JAMPAR laboratorio Biolabtest cod.013010240.
.21
3. METODOLOGÍA:
3 .. 1. Determinación del númfi!ró de muestras
Para la determinación del ·número de muestras requeridas se utilizó ün
muestreo simple al azar, con'un nivel de confianza dél 95% (ihrusfield
19~1f '
El tamaño múestreal se calculó mediante la siguiente fórmula. 5
' .. 2 . . · 1.96 .. P.(1-P)
N=· . . '
-----------------d2
N . • = Número de mues~ras requeridas .
1.96 ·:=Constante que equiv~le al nivel de.confianza de 95%
· d · · := Precisión deseada (1 O %) . . . . . .
P.· 7=. Prevalencia esperada (63.%)(Robles 2008)
N= · (1~962 :o.63.(1-0.63))/ o.t2
N= .. (0.896)1(0.01).
N= . 89.6
·N= • ·• . 90 muestras ..
5 L~ fór~ula utili~ada para~~ ta~~ño 'muestr~al es report~da por ThriJsfield,1991
22
3.2. Aplicación de la Encuesta.
Previa a la aplicación de la encuesta se explicó a los propietarios
sobre el trabajo y la importancia de realizarse un análisis de esta
enfermedad.
Se aplicó la encuesta (Ver Anexo 01) en la zona urbana de cinco
distritos de la provincia de Trujillo en el orden siguiente: Trujillo,
Laredo, Huanchaco, El Porvenir y Moche.
3.3. Selección de los caninos.
Se seleccionó 20 canes por distrito (Trujillo, Laredo, Huanchaco, El
Porvenir y Moche), cuyos propietarios manifestaron presencia de
garrapatas en sus mascotas, durante los tres últimos meses
previos a la toma de muestra. Para la selección de los perros no se
consideró raza, edad ni sexo.
3.4. Toma de la muestra.
La toma de muestra se realizó inmediatamente después de la
aplicación de la encuesta
Se sujetó adecuadamente el perro, colocándole un bozal a los muy
agresivos (Ver Anexo 02, Fotografía 01 ).
Se procedió a limpiar la cara ventral de la oreja con un algodón
humedecido con alcohol de 70° (Ver Anexo 02, Fotografía 02).
Se localizó un vaso sanguíneo visible del pabellón de la oreja y se
realizó la punción con una lanceta de Frank (Ver Anexo 02,
Fotografía 03).
Se tomó una gota de sangre en una lámina portaobjetos (Ver Anexo
02, Fotografía 04), preparando un frotis. Repitiéndose la toma de
23
muestra en una lámina testigo y rotulando cada lámina con el
nombre del can y las iniciales del Distrito.
Empleando algodón limpio se presionó, por unos segundos, en la
zona de la punción para favorecer la hemostasia.
3.5. Análisis de la muestra.
Se realizó el método de tinción Wright y la observación de la
lámina.
3.5.1. Método de Tinción Wright.
·Se colocó el frotis sobre un puente de tinción, en posición
horizontal.
• Se aplicó el colorante Wright en cantidad necesaria para que
cubra toda la muestra con una pipeta Pasteur y luego la misma
cantidad de Buffer fosfato pH 7 .2.
• Se realizó el viraje de la lámina de manera suave hasta que se
formó una capa brillante y se dejó por 5 minutos para que actué el
colorante.
• Finalmente se realizó el lavado de lámina coloreada, con agua
destilada y se dejó secar en posición vertical,
• Luego se realizó la observación en el microscopio de luz
incorporada a 400X y luego a 1 OOOX.
3.5.2. · Identificación de la mórula de Ehrlichia sp. en Frotis
Sanguíneo.
-La lámina con la extensión, se llevó al microscopio, observando
las diferentes células sanguíneas (glóbulos rojos, glóbulos
blancos).
24
-Para la identificación de Ehrlichia se tomó importancia en los
neutrófilos, linfocitos, monocitos y plaquetas, buscando la
presencia de cuerpos de inclusión o mórulas que se tiñen a color
azul basófilo, indicadores de infección por Ehrlichia sp. (Rikihisa
1991)
-Para realizar la lectura, se consideró revisar toda la lámina.
-Estas estructuras se identificaron por presentar agrupaciones
basófilas de color azul, claramente definidas en el citoplasma de
los leucocitos, llamadas mórulas, siendo compatibles con las
descritas por los diversos autores consultados (Koneman y col.,
2008; Rikihisa. 1991; Horna, 2014; Paredes, 2014; Schaer y col.,
2006; Roura, 2006; Couto y col., 2008; Waner y Harrus 2000;
Dumler y col., 1993).
3.6. Identificación de Garrapata (Ver anexo 03)
Habiendo revisado las características morfológicas documentadas
por Koneman en el año 2008.
Utilizando una pinza, se colocó las garrapatas (obtenidas de los
caninos infectados) en una placa petri, para luego ser observadas
en el estéreomicroscopio.
se pudo observar en las garrapatas hembras y machos la
presencia del capítulo orientado hacia adelante.
Las garrapatas hembras presentaron escudo dorsal pequeño y los
machos presentaron escudo dorsal que cubre las dos terceras
partes del idiosoma (Ver anexo 03. Fotografía 60, 07, 08,
09).Estas dos primeras características pertenecen a la familia
lxodidae
En el hipostoma se identificó los palpos cortos y anchos, las
garrapatas machos prsentaron festomes en los bordes posterior
del cuerpo (Ver anexo 03. Fotografía 12).
25
En la parte ventral de idiosoma se observó el surco anal que
rodea el ano por detrás. Lo que nos llevó a identificar las
características propias del género Rhipicephalus (Ver anexo 03.
Fotografía 13).
También se observó que las garrapatas presentaronen forma
hexagonal la base del capitulum.
Finalmente se identificó los ojos y su forma ligeramente convexos.
También se considero que el escudo y las patas fueron de
colorcolor café, las dos últimas característica que nos permitieron
identificar identificar la especie de Riphicephalus sanguineus (Ver
anexo 03. Fotografía 10,11, 12).
4. DETERMINACIÓN DE LA PREVALENCIA
En base al número de láminas positivas (Ver Anexo 04), se calculó la
prevalencia de Ehrlichiosis, aplicando la fórmula que se menciona en
Thrusfield ( 1991 ).
N= W casos positivos x 100
Total de población estudiada
P = (37 X100)/100
P= 37%
5. DISEÑO ESTADÍSTICO
El presente estudio es analítico descriptivo. Se utilizó una estadística
básica descriptiva, mediante tablas de frecuencia y figuras.
CAPÍTULO IV
RESULTADOS
Tabla 4.1. Prevalencia de Ehrlíchía sp., en caninos infestados con garrapatas,
a nivel de los Distritos de la provincia de Trujillo- La Libertad (Julio
Diciembre) 2013.
Población Casos Casos Distrito PREVALENCIA
Estudiada Negativos Positivos
No % NO %
: Trujillo 20 11 55 9 45
La red o 20 12 60 8 40
· Huanchaco 20 12 60 8 40
El Porvenir 20 13 65 7 35
Moche 20 15 75 5 25
No existe diferencia entre distritos (P>0.05- Chi cuadrado )(Ver Anexo 5).
Los resultados (Tabla 4.1 ), obtenidos de 1 00 muestras de sangre de
caninos analizados en los cinco distritos de la provincia de Trujillo, se
reporta mayor prevalencia en los distritos de Trujillo (un 45%), Laredo
(un 40%) y Huanchaco (un 40%).
27
Tabla 4.2. Prevalencia de Ehrlichia sp., en caninos infestados con garrapatas,
de la provincia de Trujillo- La Libertad (Julio- Diciembre) 2013.
Casos Casos Población negativos a Tasa de
estudiada positivos a
Ehrlichia Ehrlichia (No) sp. (N°)
sp. Prevalencia (No) (%)
100 37
1
63 37%
Los resultados (Tabla 4.2), obtenidos de 100 muestras de sangre de
caninos analizados en los cinco distritos de la provincia de Trujillo
La Libertad, se obtuvo una tasa de prevalencia de 37%.
28
Tabla 4.3. Número de casos positivos a Ehrlichia sp. Según el tipo de
célula infectada, en base a la presencia de mórulas, empleando la
técnica Frotis Sanguíneo de sangre periférica de caninos en
Trujillo- La Libertad (Julio- Diciembre) 2013.
N° casos % Frecuencia
Célula Sanguínea Positivos de presentación
Neutrófilo 24 65
Monocito 6 16
Monocito y neutrófilo 5 14
Plaqueta 2 5
TOTAL 37 100
En los resultados (Tabla 4.3), positivos identificados según el tipo
de célula sanguínea, se encontró mayor frecuencia presentación
en neutrófilos un 65% y monocitos un 16%.
29
Figura 1, figura 2 • y figura . 3 En la ·observación en el mícroscopio, ·de las.
células infectadas, se • puede apreciar inclusiones ligeramente
basófilas, producidas por Ehrlichia a nivel de citopiasma en
Monocitos, . Neutrófilos y Plaquetas, las que corresponden a ·las
mórulas identificadas en el presente estudio ..
( 1 1 f \ - -"-1 ,,
1
¡
·Fig 1 Mórula de. Ehrlichia sp. (flecha) en el citoplasma de un rnonocito, visto
:en un frotis sanguíneo. (Tindón . · . Wright, 1000X)
Fig 2 Mórula de Ehr/ichia sp. (Flecha) en el citoplasma de un neutrofilo, visto en un frotis sanguíneo. (Tinción Wright,
1000X)
Fig 3 Mórula de Ehrlichia sp. (Flecha) en el citoplasma de una plaqueta, visto en un frotis sanguíneo. (Tinción Wright,
·1000X)
30
CAPÍTULO V
DISCUSIÓN
Según la Tabla 4.1 , que nos muestra la prevalencia de Ehrlichia sp. en
caninos infestados con garrapatas, a nivel de los distritos de la provincia de
Trujillo- La Libertad (Julio- diciembre) 2013. Podemos notar que se obtuvo en
Trujillo 45% de prevalencia; en Laredo, 40%; en Huanchaco, 40%; en El
Porvenir, 35%; y en Moche, 25%; por lo tanto se evidencia la presencia de
Ehrlichia sp. en caninos infestados con garrapatas en los cinco distritos de
Trujillo donde se realizó el estudio; siendo los distritos de Trujillo, Laredo y
Huanchaco donde obtuvimos mayor cantidad de casos positivos. Estas
diferencias porcentuales podrían deberse a que en las ciudades de Trujillo
Laredo y Huanchaco, los caninos están expuestos a calles arenosas y parques
muy frecuentados por perros, además, de acuerdo a la prueba de Chi
cuadrado no se encontró significancia estadística entre distritos, lo cual se
concluye que la bacteria se encuentra causando infección en caninos de
cualquier distrito de Trujillo, con lo cual hemos identificado los focos infecciosos
para población estimada de 202 826 caninos, que nos reporta la Dirección
Regional Técnica de Salud Ambiental de Trujillo.
Según la Tabla 4.2, de un total de 100 muestras de sangre, de caninos
infestados con Rhipicephalus sanguineus, procedentes de la provincia de
Trujillo - La Libertad (Julio-Diciembre) 2013, evaluadas mediante el método
frotis sanguíneo y coloreados con tinción Wright; existen 37 caninos con
32
infección por Ehrlichia sp., siendo la Prevalencia encontrada de 0.37. Esta
proporción representa la probabilidad de que de aproximadamente 3 caninos
infestados con garrapatas, 1 es positivo a Ehr/ichia sp.. De tal manera en el
presente trabajo obtuvimos una Tasa de Prevalencia de 37%, la cual es mayor
que la reportada por Paredes, quien trabajó en el distrito de Comas, provincia
de Lima-Perú, considerando una población con características de anemia y
utilizó como prueba de diagnóstico la coloración Wright, y teniendo como
resultado un 8.1% de caso positivos a Ehrlichia y además reportó infección
concomitante de Ehrlichia sp. y Anaplasma spp. en un 13.5%. Esto puede
deberse a las diferentes condiciones climatológicas que existen entre Comas y
Trujillo, este último de clima más cálido, por ubicarse en la costa norte del
Perú, también podría deberse a que dicho estudio se realizó en 1993, cuando
esta enfermedad aún se encontraba poco difundida.
En la Tabla 4.3, según el tipo de célula infectada y en base a la presencia de
mórulas, empleando la técnica Frotis Sanguíneo de sangre periférica de
caninos en Trujillo- La Libertad (Julio- Diciembre) 2013; se evidencia que la
frecuencia de presentación para Ehrlichia sp. en un 65% es para neutrófilos,
16% para monocitos, 14% para monocitos con neutrófilos y 5 % para
plaquetas. Con este estudio se evidencia una posible existencia de más de un
tipo de especies de Ehrlichia, como lo mencionan Alternan y Cauto en la
clasificación de Ehrlichia sp. por el tipo de célula infectada; documento
publicado en el año 2008. Así también se reporta infecciones concomitantes
entre especies. De esta manera la presencia· de mórulas e'n un tipo particular
de leucocito es considerada una prueba confirmatoria para el diagnóstico de
Ehrlichia, sin embargo no puede identificar de manera concluyente la especie
que infecta, requiriendo pruebas moleculares, como método fiable, así lo
demostraron Carrillo y colaboradores en el año 2000, quienes estandarizaron y
validaron un formato de PCR para Ehrlichia en Colombia.
CAPÍTULO VI
CONCLUSIONES
Ejecutado el presente trabajo de investigación, se llegó a las siguientes
conclusiones:
La prevalencia de Ehrlichia sp, en caninos infestados con garrapatas
(Rhipicépalus sanguineus), en los distritos de Trujillo fue: 45% en
Trujillo; 40% en Laredo; 40% en Huanchaco; 35% en El Porvenir y 25%
en Moche.
Existe una prevalencia de Ehrlichia sp., en caninos infestados con
garrapatas (Rhipicépalus sanguineus), procedentes de la provincia de
Trujillo, analizadas mediante Frotis Sanguíneo y coloreados con tinción
Wright, es de 37 %.
Se evidencia una frecuencia de presentación a mórulas de Ehrlichia sp.
en el citoplasma de los leucocitos: 65% para neutrófilos, 16% para
monocitos, 14% para monocitos con neutrófilos y 5% para plaquetas.
CAPÍTULO VIl
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ANEXOS
Anexo 1. Encuesta:
"UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA"
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS
42
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA
"PREVALENCIA DE Ehrlichia sp., EN CANINOS INFESTADOS
CON GARRAPATAS (Rhipicephalus sanguineus), MEDIANTE
FROTIS SANGUÍNEO EN LA PROVINCIA DE TRUJILLO"
Fecha: ..................................... .
• DATOS DE LOS ANIMALES
NOMBRE ................................. RAZA ...................................... .
EDAD APROXIMADA ( ) Sexo ( )
DATOS DEL PROPIETARIO
NOMBRES Y APELLIDOS: ......................................................................... .
DOMICILIO: .............................. Teléfono: ..................................... .
PROVINCIA: Trujillo DISTRITO: .................... .
• EXPLORACIÓN FÍSICA
Observación del can
• LUGAR DONDE DESCANSAN O DUERMEN
Patio Azotea ( )
Calle
( )
( ) Especificar ........................... .
Anexo 02: Toma de muestras de sangre en caninos infestados con
garrapatas, de la provincia de Trujillo - La Libertad (Julio -
Diciembre) 2013.
Fotografla 01: SUjeción del can.
43
.....
Q.~ . 1 .... :-41_, _,
Fotografla 03: Punción en la zona ya elegida.
FcqiiL1a 04: Tama de una gola de~ unallir6• poltaalltaepara,.....el
44
Anexo 03: Identificación de Rhipicephalus sanguineus.
,;-- ..... ,....-'
Fotografía OS: Observación de garrapatas en el
Estéreomicroscopio para iniciar la identificación.
45
Fotografía 06: Vista dorsal de garrapata hembra, Se observa el escudo ("escudo dorsal") y un capitulo orientado hacia adelante ("cabeza"). Fotografía 07: Vista dorsal de garrapata hembra, La flecha indica el surco anal.
/
46
g
o
~
,~g
" -,
1
Fotografía 08:Vista dorsal de garrapata macho, indicando la presencia del escudo dorsal, capitulum, palpos e hipostoma
Fotografía 09: Vista ventral de garrapata macho, donde se observa el hipostoma y el capitulum.
o
Fotografía 10: Vista dorsal de garrapata macho donde se observa claramente la base hexagonal del Capitulum.
Fotoerafía 11: Vista ventral de earraoata macho.
o )
" ...¿ ¡
o
47
Fotografía 12: Vista dorsal de dos garrapatas machos, presentaron festones en el borde posterior del cuerpo.
Fotografía 13: Vista ventral de garrapata macho, donde se observa el surco anal definido como "media luna".
48
Anexo 04: Resultados obtenidos en el trabajo, por distrito.
RESULTADOS OBTENIDOS EN EL DISTRITO DE TRUJILLO. ~ o Cl) Cl) e: ~
Sexo Nombre ~ CASOS :e Cl) Cl)
~ ~ Cl) ~ o .::: ~
..Q .e: Cl) Cl) E o
-!l ~ ~ .~ ~ Q :g (1) ... :e - l: g, g, Cl) Cl) ca ~ o
# COD. F M Mascota Dirección Raza Edad ...... <::
61 TVBL 1 1 Luna prl San IgnacioN 20 Criollo 4años Casa 1
62 T 2 1 Peluza Agusto B Leguia 437 Criollo 2años Calle 1
63 T 3 1 Burro Calle Trujillo 544 Shihtzu Baños Calle 1
64 T 4 1 Manchas Calle Trujillo 547 Criollo 2años Patio 1
65 T 5 1 Achira Calle Trujillo 530 Shihtzu S años Patio 1
66 T 6 1 K o ka Calle Trujillo 540 Shihtzu 4años Patio 1
67 T 7 1 Peluchín Agusto B Leguia 436 Criollo 6años Calle 1
11 68 T 8 1 pu/garcito Calle Trujillo 542 Shihtzu años Calle 1
o 69 T 9 1 Luna Calle Trujillo 546 Shihtzu 2años Patio 1 -J 10 ~ Fido Calle Truji/lo579 Criollo años Calle 1 9 5 4 3 ro T # 1
Loli Calle Trujillo 566 Criollo S años Casa 1 e: 71 T 11 1
Negra Calle Trujillo 568 Criollo 3años Patio 72 T # 1 1
73 T # 1 Scot los Eucaliptos B Lt 1 Criollo 1 año Calle 1
74 T # 1 Bu bis los Eucaliptos B Lt 9 Criollo 2años Calle 1
75 T 15 1 Candy los Eucaliptos C Lt 1 Criollo 3años Calle 1
76 T # 1 Toby los Eucaliptos C Lt 4 Criollo 3años Casa 1
n T 17 1 Tedy los Eucaliptos C Lt 8 Criollo 4años Casa 1
78 T # 1 Oddy La Marina 382 Criollo 2años Patio 1
79 T # 1 Petiza Independencia Criollo 2años Patio 1
Psj San Mateo Mz 11 Lt 1.7 80 T # 1 Messi 21 Criollo años Calle 1
49
' RESULTADOS OBTENIDOS EN EL DISTRITO DE LAREDO. l o m m e o
Sexo Nombre ftS CASOS .::: c.J (/) rn m ~ ~ o m m m o :t:! CIJ ... "'C o o o .e ..c. - > > 0.. E (.) ., e CIJ :e ; ro
"'C ftS m Q) ~ .. m C) o J: o ftS lll.. CIJ m
C) z ftS ::S o _.
# COD. F M Mascota Dirección Raza Edad
41 l 1 1 Arnold Amapolas Mz F lt 7 Pitbull años Patio 1
42 l 2 1 Caralampio Amapolas Mz F lt 7 Schnauzer 3 años Calle 1
43 l 3 1 Luna JulianGarce Pequinés 6 años Calle 1
.. l 4 1 Bebe 28 de julio Coocker 7 años Calle 1 Miguel Moreno
.(5 l 5 1 No a 100 Criollo 3 años Calle 1
46 l 6 1 Chiquitín Miguel Moreno 116 Shihtzu 2 años Calle 1 Miguel Moreno
47 l 7 1 Peluchin 116 Pequines 2 años Calle 1
48 l 8 1 Fido Miguel MorenoSN Criollo 1.5 años Calle 1 Segundo
49 l 9 1 Brando carboneiMzNLt 15 Coocker 3 años Calle 1 o Segundo carboncl
e 50 l 8 1 Estrella MNLI5 Pequines 1.5 años Calle 1 w San Mateo Mz3Lt 8 2 6 0:: <( 51 l 11 1 Acuña 21 Criollo 2 años Calle 1 ...1 Cabezon 30 de noviembre Criollo 1 año Calle 52 l N 1 1
53 l • 1 Rambo 30 de noviembre Criollo 2 años Calle 1
54 l # 1 Mailo 30 de noviembre Criollo 2 años Calle 1 31 de noviembre
55 l # 1 Fido MI6LI4 Criollo 1.5años Calle 1 32 de noviembre M
56 l # 1 Pichirrilo 16LI4 ChowChow 2 años Calle 1 33 de noviembre 1
1
57 l # 1 Ca itas M16 Ll4 Criollo 3 años Calle 1 34 de noviembre
56 l N 1 Reyna M16LIO Criollo 2 años Calle 1 Prl Santa Catalina
59 l # 1 Samacul N 14 Criollo 4 años Calle 1
60 l # 1 Rober prl San Ignacio N 1 5 Pequines 4 años Calle 1
so
~ RESULTADOS OBTENIDOS EN EL DISTRITO DE HUANCHACO.
Sexo Nombre CASOS U) 111 111 o ... cu o !:: o ... 0:: # COD. Cl) o lfj lfj c. o .e .S::. ..... -cen o o E (,) U) ._e > > lfj - cu e F M Mascota Dirección Raza Edad ca ca .. ~
o·;:: ~ :E c;nU ·¡¡; >- X tn ·- lfj ::S lfj - ·-..J~ o Cl) ·¡¡; "C a.. z ~
1 H 1 1 Dipilo Av El Aeropuerto 160 Pitbull 1 año Patio 1
2 H 2 1 Chimuela Av El Aeropuerto 161 Criollo 3 años Patio 1
3 H 3 1 Peluchin HuanchaquitoMz 1 OLt 1 Shihtzu 6 años Calle 1
• H • 1 Donald HuanchaquitoMz IOLt 6 Criollo 6 años Calle 1
S H S 1 Locky HuanchaquitoMz 10Lt 6 Coocker 3 años Patio 1
6 H 6 1 Callejero Huanchaquito Criollo 6 años Calle 1
1 H 1 1 Pipa HuanchaquitoMz F Lt 8 Criollo 2 años Patio 1
o 8 H 8 1 Layo HuanchaquitoMz 12 Lt 4 Criollo 7 años Calle 1
o Doky HuanchaquitoMz 38 Lt 7 Criollo 5 años Calle 1 e( 9 H 9 1
::I: 10 H # 1 Osa HuanchaquitoMz 38 Lt 7 Criollo 3 años Casa 1 o 8 3 5 z 11 H 11 1 Lucky HuanchaquitoMz 38 Lt 8 Criollo 4 años Calle 1 e(
:::» 12 H # 1 Tonta HuanchaquitoMz 39 Lt 9 Criollo 8 años Calle 1 ::I:
13 H # 1 Tobi HuanchaquitoMz 39 Lt 14 Criollo 2 años Patio 1
14 H # 1 Tina San Mateo Mz 10 Lt 14 Cooker 1 año Patio 1
1S H 1S 1 Tobi San Mateo Mz 15 Lt 16 Criollo 10 años Calle 1
16 H ' 1 Canela San Mateo Mz 9 Lt 2 Criollo 5 años Calle 1
17 H 17 1 Orejon San Mateo Mz 16 Lt 1 Cooker 1 año casa 1
18 H # 1 Oso Huanchaco Criollo 1 año casa 1
19 H # 1 Peluche Huanchaco Pequines 4.5 años casa 1
20 H # 1 Kino Huanchaco Criollo 2años casa 1
51
RESULTADOS OBTENIDOS EN EL DISTRITO DE EL PORVENIR. 1
Sexo Nombre o
CASOS en en e o C'G > (/) u :e en en o en ~ 1:: Cl) en o
# COD. 'C ~ .e .S:::. 0:: E u t; Cl) en en ro
'C o o en Q) ~ i5 ... .~ > o :r:
C'G - ;:; en C) 'üi C'G C'G
C) o :::J o Cl) ..J D.. z F M Mascota Dirección Raza Edad
21 p 1 1 Keisi Manco Inca Wcimcrancr 11 meses casa 1
22 p 2 1 Perla Manco Inca Shihtzu 1 año casa 1
23 p 3 1 Pupis Manco Inca 962 Criollo 4 años Calle 1
24 p 4 1 Blanca Manco Inca 982 Criollo 12 años Calle 1 San AgustinMz
25 p 5 1 Blanca 6Lt22 Pequines 3 años Azotea 1 San AgustinMz
26 p 6 1 Chispa 5Lt21 Pequines 3 años Calle 1 SAN Martín
27 p 7 1 Bethoven 717 Criollo 2 años Calle 1
28 p 8 1 Lazi San Martín 724 Criollo S meses Calle 1 ~ - Scot Santa Isabel Criollo 1.5 años Patio 1 z 29 p 9 1
w Santa Isabel
> 30 p ' 1 Maycol 341 Criollo 2 años Calle 1 ~ Psj los olivos 7 4 3 o D.. 31 p 11 1 Chiquita 248 Criollo 2 años patio 1
..J Santa 1 sabe 1
w 32 p w 1 Negro 260 Criollo 1 año Calle 1
33 p # 1 Chato Los Incas 519 Criollo 4 años Calle 1 Psj los olivos
34 p ' 1 Peluche 248 Criollo 1 año Calle 1
35 p 15 1 Beethoveen Sta Jsabel272 Criollo 1 año Calle 1
36 p ' 1 Beethoveen Jr.Juan Carbajal Criollo 2 años Calle 1
37 p 17 1 maytaison FcodeZela 1780 Shihtzu 8 años Calle 1 Feo de Zela
38 p ' 1 Rico 1781 Criollo 4 años Calle 1
39 p ' 1 Max FcodeZela 1691 Fila 1.5 años Calle 1
40 p ' 1 N ala FcodeZela 1691 Fila 5 años Calle 1
52
RESULTADOS OBTENIDOS EN EL DISTRITO DE MOCHE. ~ o , , e o CG > , (.) :¡:::; (/)
o Sexo Nombre ,
CASOS ·¡¡; ~ o :t::: Cl) ... "C ~ .o .r::. ';¡ , , E (.)
a Cl) o o ro "C > >
, Q) :;E ... :¡:::; :¡:::; o J: CG ·¡¡; CG
, C) C) CG ::::1 o Cl) o
# COD. F M Mascota Dirección Raza Edad ...J Q. z Independencia
81 M 1 1 Negra 282 Criollo 2 años Patio 1 Independencia
82 M 2 1 Jasper 282 Criollo 3 años Patio 1 Independencia
83 M 3 1 Culto 282 Criollo 4años Patio 1 Independencia
84 M 4 1 Sheko 282 Criollo 3años Patio 1
85 M 5 1 Simbad Av Moche s/n Criollo 3 años Patio 1
86 M 6 1 Gatubela Av Moche s/n Criollo 3 años Patio 1
87 M 7 1 Negrita Av Moche s/n Criollo 4 años Patio 1
88 M 8 1 Zarquita Av Moche s/n Criollo 1 año Patio 1
89 M 9 1 Layla Av Moche s/n Criollo 8 meses Patio 1 Psj San Martín
91) M • 1 N e la 272EI Paraíso Críollo 1 año Calle 1 lilil Psj San Martín = u 91 M 11 1 Negro Lt 3 El Paraíso Criollo 2 años Calle 1 5 2 3 o Av Libertad ~ Loli 3941 ShihTzu 10 años Calle 1 92 M # 1
Av Libertad
93 M • 1 Paquita 3948 Criollo 7 años Calle 1 Av La Marina
94 M # 1 Negra MzA Lt12 Criollo 1 año Patio 1 Av La Marina
95 M 15 1 Oso MzALtl3 Criollo 4 meses Patio 1 Av La Marina
96 M # 1 Zeus MzALtl4 Chowchow 10 años Patio 1 Av
independencia
97 M 17 1 Brandown 687 Shetterlrlandez 3 años Patio 1 Independencia
98 M # 1 Bianca 292 Criollo 6 años Patio 1 Independencia
99 M # 1 Toby 282 Criollo 2años Patio 1 Independencia
100 M # 1 Pablo 282 Criollo 3 años Patio 1
53
Anexo 05: Prueba de Chi cuadrado por distritos de la provincia de Trujillo,
utilizando la prueba de Chi-Square.
Asymp. Sig. (2-
Value df sided)
Pearson Chi-Square 1 ,973a 4 0,741
Like lihood Ratio 2,033 4 0,730
N ofValid Cases 100
a. O cells (.0%) have expected count less than 5. The minimum expected count
is 7.40.
