TINCIN GRAM

Prof. Ernesto Torres

Biol.3105 @ 2014

TINCIONES: TRASFONDO

Tinciones

Sencilla Diferenciales

Gram Acid - Fast Cpsula Endoesporas

La tincin sencilla permite identificar morfologa,arreglo y tamao. Las tinciones diferenciales adems permiten identificar estructuras

o caractersticas particulares de la bacteria.

Tinte: compuesto orgnico que contiene un anillo de Benzeno, un cromforo y un auxocromo.

El anillo de Benzeno es el solvent incoloro

El cromforo es el agente qumico que le imparte el color al Benzeno

El auxocromo es el agente qumico que leimparte las propiedadesionizantes al cromgeno para que se adhiera a la estructura cellular.

Tipos de tintes:

Bsicos: Tienen carga positiva (catinicos). Se utilizan comunmente, pues tienen mayor afinidad hacia la membrane cellular. Azul Metileno

cidos: Tienen carga negative (aninicos). Se utilizan para ciertos tiposde tincin diferencial, pues la carga negative de la membrane bacterial repele a la mayora de los tintes cidos. cido Pcrico

TINCIONES: TRASFONDO

TINCIN GRAM

Tcnica desarrollada en 1884 por Hans Christian Gram (Bacterilogo)

Tincin diferencial que permite efectuar unaidentificacin preliminar morfolgica rpida y establecer una distincin tomando como referencia la composicin de la pared celular.

Es una tcnica econmica muy utilizada, en particular con muestras clnicas.

BACTERIAS GRAM + VS. GRAM -

La envoltura celular est presente solamente en las bacterias Gram(-)

La membrana externa

- Ausente en Gram +

- Presente solamente en Gram

- externa a la capa de peptidoglican

composicion de la membrana externa:

- bicapa de fosfolpidos

- lipopolisacridos (LPS)

- protenas y lipoprotenas (inmersas en la bicapa de fosfolpidos de la membrana externa)

Las lipoprotenas se anclan en la superficie prxima al peptidoglicn

- las protenas forman poros, lo cual permite el paso de molculas pequeas (permeabilidad de la membrana externa

BACTERIAS GRAM + VS. GRAM -

Los lipopolisacridos (LPS)

- se encuentran en la capa externa de fosfolpidos de la bicapa de la membrana externa

- constituyen aprox. 40% de la superficie celular total de bacterias Gram.

TINCIN GRAM: REACTIVOS

Yodo Gram (agente mordante): Aumenta la afinidad de la clulacon el Cristal Violeta.

Alcohol 95% (agentedecolorante): tiene una funcindoble:

Dehidratar las proteinas

Solvente de lpidos

En las bacterias G- el alcohol aumenta la porosidad de la pared celular al disolver los lpidos. Se hace ms facil la remocin del complejo CV-Y La fase de decoloracin es la ms

crtica del proceso

Los estndares clsicos para esta diferenciacin son: - Staphylococcus aureus (aureus = dorada)

- Escherichia coli (colon=intestino grueso)

S. aureus mayormente asociado con la piel y las membranas mucoides de vertebrados de animales de sangre caliente, pero, frecuentemente se aisla de productos alimentarios, polvo y agua.

E. Coli flora normal de la parte inferior del intestino de animales de sangre caliente.

TINCIN GRAM

Capuccino & Sherman (2014). Microbiology: A Lab. Manual. 10th ed. Pearson