Tema 3

CONCEPTE DE LINEALITAT

Continguts• Corbes de calibratge• Concepte d’absorció selectiva• Concepte de linealitat• Selecció de la longitud d’ona• Càlcul de la concentració d’una substància per

extrapolació• Exemple: determinació de l’àcid úric sèric• Procés de calibratge. Resum• Relació entre els resultats obtinguts i les possibles

patologies associades

Objectius específics

• Definir el concepte de linealitat entre dos paràmetres

• Confeccionar gràfics de calibrat i interpolar resultats

• Descriure com es prepara un “blanc”• Definir la utilitat d’un calibrador, estàndard o

patró• Identificar la relació entre els resultats i les

possibles patologies associades.

Corbes de calibratge• Espectrofotòmetre• Reactiu i mètode de la tècnica a calibrar• Mesurar les ≠ absorbàncies o les ≠ trasmitàncies per a les ≠ • Representació gràfica (A o T en l’eix y o ordenada i en l’eix x o abscissa)

• http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/2/2c/3D_coordinate_system.svg

Absorció selectiva

• En la zona de màxima absorció (banda A) hi ha una absorbància màxima per a una determinada

• Direm que la substància posseeix absorció selectiva per a la radiació que li correspon a aquella

Concepte de linealitat

• Gràfica amb valors d’absorbàncies (A) en ordenades i valors de concentració (c) en abscisses

• Diluïm progressivament el patró (estàndard o calibrador)

• Mesurem l’absorbància de cada dilució en la dins la banda A

• Obtindrem una recta (línia contínua) que demostra el compliment de la llei de Lambert-Beer

• Per a mostres molt concentrades, ens cal diluir-les..

• Si utilitzem una dins la banda B, obtindríem una corba i no compliríem la llei de L-B

Selecció de la • L’estructura química d’una molècula és la

responsable de que s’absorbeixi una radiació d’una determinada λ

• Hem de seleccionar λ dins la banda A• A vegades utilitzem radiacions diferents, per

exemple: Amàx (pic màxim) i altres equidistants als costats de la màxima (A1 i A2). Aleshores, utilitzarem per a calcular la concentració, l’anomenada Aco(absorbància corregida d’Allen)

Aco(absorbància corregida d’Allen)

Aco = Amàx - [(A1+A2)/2]

Així evitem interferències, però sempre hem de trobar-nos dins la linealitat

Càlcul de la [ ] d’una substància per extrapolació

• Material necessari:• Mostra (sèrum, plasma, orina, LCR,..)• Reactius (solucions i patró) • Mètode o tècnica• Espectrofotòmetre• Corbes: A/λ , A/c o T/c