19/10/2012

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Tecnologías para incrementar la eficiencia

reproductiva en ovinos tropicales

Ivette Rubio G. et al.

CEIEGT FMVZ UNAM

19 Octubre 2012

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Contenido

I. Introducción

II. Evaluación de la Salud Reproductiva del Semental

III. Sincronización

IV. Congelación de Semen

V. Inseminación Artificial

VI. Transferencia de Embriones

Desarrollo de biotecnologías reproductivas

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Preparación es la clave del ¡Éxito!

Animales

Nutrición

Salud

Facilidades

Personal

Partos

Empadre

Controlado Monta dirigida

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Evaluación de salud reproductiva

Examen físico general

Examen aparato reproductor

Evaluación de semen

Bagley C. 1997

Examen físico y aparato reproductor de sementales

Parámetro n Promedio Desviación estándar

Condición corporal (1-5)

Russel A. 1969

22 3.1 0.99

Circunferencia escrotal (cm)

22 32.1 2.76

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Evaluación del semen

Resumen evaluación de semen

Parámetro n Promedio Desv. std

Color/Densidad 22 cremoso -------

Volumen (ml) 22 0.8 0.39

Motilidad masa 22 3.4 0.85

Motilidad individual (%)

22 74.8 13.14

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Evaluación de salud reproductiva

Examen físico general

Examen aparato reproductor

Evaluación de semen

Bagley C. 1997

Examen físico y aparato reproductor de sementales

Parámetro n Promedio Desviación estándar

Condición corporal (1-5)

Russel A. 1969

22 3.1 0.99

Circunferencia escrotal (cm)

22 32.1 2.76

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Evaluación del semen

Resumen evaluación de semen

Parámetro n Promedio Desv. std

Color/Densidad 22 cremoso -------

Volumen (ml) 22 0.8 0.39

Motilidad masa 22 3.4 0.85

Motilidad individual (%)

22 74.8 13.14

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Consistencia o apariencia del semen

VALOR CONSISTENCIA Cantidad* Rango

5 Cremosa espesa 5.00 4.5-6.00

4 Cremosa 4.00 3.5-4.5

3 Cremosa tenue 3.00 2.5-3.5

2 Lechosa 2.00 1.5-2.5

1 Nebulosa 0.7 0.3-1.0

0 Clara (acuosa) Insignificante

*Número de espermatozoides (X109) por ml.

Nota:El semen lechoso, nebuloso o acuoso no debe usarse para IA

Motilidad en masa

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Motilidad individual y conteo espermático

Tinción Eosina/nigrosina para detectar espermatozoides vivos y muertos

En microscopio de luz

Espermatozoides muertos en tinción purpura (flechas),

Espermatozoides vivos son azul grisáceo.

Manchas purpura oscuras son gránulos de tinción

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Microscopía con luz fuorescente

Nota.2 flechas blancas muestran los mismos espermatozoides muertos de

la transparencia anterior

Espermatozoides vivos y muertos usando

microscopía fluorescente

Las fluorescencias rojas y doradas indican

Espermatozoides muertos, mientras que los vivos

mas fáciles de detectar que en la tinción purpura

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102 espermatozoides muertos

172 espermatozoides vivos

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Manejo semen fresco

Congelación de semen

Llenado de pajillas

Refrigeración (2 h)

• 5oC 2oC/3min

• Fase de equilibrio 45 – 60 min

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Características semen congelado

ID Semental

Volumen eyaculado

(ml)

Motilidad individual

(%)

Concentración espermática

No. de dosis

Volumen total (ml)

Volumen diluyente requerido

(ml)

9 – 8 2 80 8,448 x 106 84.48 21.12 17.12

6 – 10 3 80 14,256 x 106 142.5 35.64 29.64

50 – 10 1.7 85 8,539.9 x 106 85.39 21.34 17.94

Ineminación artificial

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Ventajas de la IA • Mejora genética ( uso de sementales probados,

introducción de otro genotipo).

• Fácil transporte de material genético.

• Aumento de la eficiencia reproductiva (de un

eyaculado se pueden obtener 20-35 dosis con

semen fresco diluido y aprox 10 para semen

congelado)

VENTAJAS IA

• Reducción de sementales en el rebaño (bajan costos manutención).

• Prevención de enfermedades.

• Utilización más adecuada de registros.

• Utilización de programas reproductivos.

• Facilidad de pruebas de progenie

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¿Desventajas IA? • Se necesita de personal

calificado y experto (es

desventaja?).

• Dependiendo del método

de sincronización la

experiencia del

inseminador se pueden

obtener resultados de

fertilidad bajos.

• Es un método costoso

cuando se realiza IA

intrauterina

• Se puede realizar la

técnica con semen fresco,

refrigerado y congelado

Factores a considerar

Anatomía (disposición del cervix).

Procesos de dilución-conservación del semen.

Vía de aplicación del semen.

Tipo de semen usado (fresco, refrigerado, congelado).

Tipo de presentación del semen (pellet o pajilla).

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ANATOMIA DEL CERVIX

• No tiene una forma en especifico siendo la más usual la llamada forma de “palomita de maíz”

• Diámetro aproximado de 1 cm, una consistencia dura (tejido conjuntivo rico en fibras colágenas).

• 6 a 7 “anillos” que en realidad son pliegues longitudinales y se inclinan caudalmente adquiriendo una forma sinuosa.

Cuerpo del útero

Cuernos uterinos

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• en hembras jóvenes y no gestantes se localiza en el piso de la pelvis y en hembras gestantes por lo general se localiza por delante del borde de la pelvis .

• El color del cérvix es rosáceo y solo adquiere una ligera coloración blanquecina cercano a la ovulación

Cervix en forma de

“palomita de maíz”

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• Cervix es una barrera inicial al ascenso de los spz.

• Por la disposición de los pliegues no pasa la pipeta de IA.

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• Se realiza la IA a tiempo fijo y en el menor tiempo ya que la viabilidad disminuye.

• Volumen por dosis 0.05 a 0.1 ml con por lo menos 100 millones de spz vivos.

Técnicas de IA

• Inseminación cervical.

• Inseminación transcervical.

• Inseminación intrauterina.

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IA cervical y

transcervical

• Se coloca a la hembra en un potro o una prensa de contención

Inseminación artificial transcervical

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Fosa cervical

Entrada cervical

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INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN

PEQUEÑOS RUMIANTES

Dpto de Reproducción FMVZ –UNAM

Técnicas de IA

• IA cervical

• IA transcervical

• IA intrauterina.

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INSEMINACIÓN INTRA UTERINA

• Inician en 1967 Salamon y Lighfoot depositaron el semen descongelado en útero por laparotomia.

• En 1982 Killen y Caffery realizaron las primera IA usando laparoscopia.

• Se requieren 40 millones de spz en 0.1ml

• Para realizar esta técnica se realiza un programa de sincronización de estros en la hembras.

• Dietadas de agua y alimento pro lo menos 12 hrs antes de la técnica.

• Se requiere equipo y personal capacitado.

• Se utiliza una anestesia disociativa (rompun-ketamina),0.01g/kg y 2.0mg/kg respectivamente.

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CAMILLAS PARA REALIZAR LA IA INTRAUTERINA

Se rasura y desinfecta el área anterior a la ubre

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Procedimiento quirúrgico

Corte de piel

Introducción aguja Veress

Colocación trocar-cánula

• Se introduce un gas a cavidad abdominal antes de introducir los trocar-cánula.

• El gas puede ser CO2 o aire filtrado para crear un pneumoperitoneo.

• se inclina a la oveja en un ángulo de 45° para que con posición y gas se Cree un espacio virtual y se desplacen las vísceras.

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Se visualiza el útero sin revisar ovarios

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Se procede a revisar la

vascularización y tono

uterino

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Se introduce el

aspic se

deposita la mitad de

la dosis

en cada cuerno

Se corrobora el libre

movimiento

de la aguja, se comprueba

que. no se forme una

protuberancia

Se retiran los instrumentos y se procede a sacar el aire

de cavidad y a suturar piel

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Implementación de Tecnologías Reproductivas en un Rebaño de Ovejas Pelibuey en el Trópico

Sincronización de estros

Objetivo General

Implementar la sincronización de estros y

la inseminación artificial en un rebaño de

ovejas Pelibuey en el trópico

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Objetivos Específicos

Evaluar estado reproductivo de las ovejas previo

a la sincronización.

Medir la respuesta a la sincronización.

Estimar la tasa de gestación de la técnica de I.A.

utilizando semen fresco y semen congelado.

Introducción

I.A. transcervical con semen congelado se obtienen bajos porcentajes de gestación debido al proceso de congelación del semen

(Donovan A. et al 2004)

Estructura del cérvix

(O’Hara L. et al 2010)

(Senger, 2003)

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Tratamientos para sincronizar

• Uso de Prostaglandina F2α o sus análogos para lisar el CL ( estro 48Hrs después de la aplicación)

• PG a todos los animales los que no entran repetir la dosis 11 días después.

Sincronización con progesterona y progestagenos

• Pueden utilizarse en cualquier etapa del ciclo estral

• Alta eficiencia • Baja Fertilidad

• Productos:

▫ Progesterona

▫ Norgestomet

▫ Acetato de Fluorogestona

▫ Acetato de Medroxiprogesterona

▫ Acetato de Melengestrol

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Productos

Introducción

Sincronización de celos

• I.A. a tiempo fijo

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Material y métodos

n= 50 ovejas Pelibuey

• multíparas: 2 - 7 años

Condición corporal 2.5 - 3.5

Peso promedio 40.93 kg

Asignación 2 grupos:

• n=25 semen fresco

• n=25 semen congelado

Material y métodos

Sincronización de estro

• Cronipres® CO

• 160 mg de progesterona por

dispositivo intravaginal

• eCG 100 UI (Folligon®)

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Pipeta de IA

I.A. Sistema RAMGO

www.tecnologiagenética.com Dr. Hidalgo M.A.

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Material y Métodos

Muestras de sangre

• Suero

• Concentraciones de progesterona (P4)

Radioinmunoensayo (RIA)

• COAT–A–COUNT® Progesterone, Siemens

• Laboratorio Endocrinología FMVZ, UNAM

Pulido A. et al. 1991

Protocolo de sincronización

muestra sangre

-21 -18 -15 -2 I.A. 7 9 13 17 21 25 35

Inserción Cronipres®CO

Retiro Cronipres®CO Aplicación 100 UI eCG

55-58 h post retiro

12 Días

Diagnóstico de gestación por Ultrasonido

Días

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Resultados

Concentraciones progesterona ≥ 1.0 ng/ml en 2 mediciones consecutivas

• Ciclicidad

Concentración de P4 sérica en ovejas Pelibuey previo a la sincronización

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

-21 -18 -15 -2

ng

/m

l

Días

Inserción dispositivo Cronipres®CO

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Respuesta a la sincronización

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

-21 -18 -15 -2 IA 7

ng

/ m

l

Días

ID 30-7

ID 213-9

Cronipres®CO

Resultados por tipo de semen

Ciclando previoa sincronización

Respuesta a lasincronización

Retorno a estro Tasa degestación

Semen Congelado

Semen Fresco

100%

76% 68%

80%

68%

20%

32%

n=25 n=25

n=19

n=17

n=20

n=17

n=5

n=8

Prueba X2 >0.333

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0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

7.00

8.00

9.00

-21 -18 -15 -2 IA 7 9 13 17 21 25

ng

/m

l

Días

Gestantes

Vacías

Concentración de P4 sérica en ovejas durante el programa reproductivo

Cronipres®CO

Resultados generales del programa reproductivo

Ciclando previo

a lasincronización

Respuesta a la

sincronización

Retorno a estro Tasa de

gestación

100%

72% 74%

26%

n= 50

n= 36 n= 37

n= 13

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Discusión

Respuesta a la sincronización

Autor Producto Raza Respuesta

(%)

Cuevas EA. et al. Crestar® Pelibuey 100

Hernández OJ. Esponja MPA Pelibuey 100

Ozyurtlu N. et al. CIDR® Rambouillet 90

Carballo E. et al. 2008 Cronipres Corriedale 100

CEIEGT Cronipres Pelibuey 72

Discusión

Porcentaje de gestación

Transcervical semen fresco

Transcervical semen

congelado

Laparoscopía semen

congelado

Carballo E. et al. 2008 (TF - 48H) 58 - -

Donovan A. et al. 2004 (TF - 57h) 70 44

Rivera R. 1997 (12h post celo) 74.5 - -

Hiwasa M. et al. 2009 (Celo) 5.5 0 72.2

Domínguez R.et al. 2007 (TF – 48h) 29.4 20 16.6

CEIEGT - 2012 (55-58h) 32 20 -

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Conclusiones

Implementación de la técnica de I.A. en

“El Cenzontle”.

Respuesta aceptable a la sincronización.

Tasa de gestación baja con semen congelado.

Revisión del uso del dispositivo “Ramgo”

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

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Objetivo de la transferencia de embriones

Aumentar la capacidad reproductora de

hembras de gran valor genético

Disminuye el intervalo generacional

Recuperación de hembras de elevado valor

genético (edad, accidentes)

Conservación de diversidad genética.

Animales en peligro de extinción

Intercambio de material Genético

APARTE DE LAS HEMBRAS SELECCIONAR

MACHOS GENETICAMENTE SUPERIORES

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TÉCNICA DE TRANSFERENCIA SE

REQUIERE: • Técnica compleja

• Se requiere personal muy calificado

• Buenas instalaciones (para los animales y laboratorio etc)

• Elevado costo ( hormonas, medicamentos, honorarios, equipo de trabajo etc)

Selección de animales

• DONADORA ▫ Merito genético

Pedigree Sin defectos genéticos Conformación superior Habilidad de transmitir

características Comportamiento

productivo y reproductivo Alta producción Sin distocias Sin problemas reproductivos

Otros 60d posparto Vacunada Condición corporal 3.5

• RECEPTORA ▫ Bajo mérito genético

▫ Fértiles

▫ 5-10 años de edad (depende

la especie)

▫ Buena condición corporal y talla

▫ Sanas

▫ Vacunadas

▫ Sin enfermedades abortivas

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Donadora

Genéticamente superior

Receptora

Genética “estandar”

Superovulacion y

sincronización

Del estro

Sincronización del estro

Aplicación eCG

Estros y servicio

Transferencia embriones

Y revisión de CL

Colecta de embriones

Estro

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TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

SUPEROVULACIÓN INSEMINACIÓN ARTIFICIAL o

MONTA NATURAL (DONADORA

OBTENCIÓN DE LOS EMBRIONES

(DONADORA)

Transferencia a la receptora

O congelamiento de los embriones

Laparoscopía en ovinos

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Diagnóstico de gestación por ultrasonografía

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Tecnologías para incrementar la eficiencia

reproductiva en ovinos tropicales

Ivette Rubio Gutiérrez

CEIEGT FMVZ UNAM

ivetterubio@gmail.com

Tel oficina: 232 3243941 ext. 120

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GRACIAS