Tecnicas Respuesta Inmune

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  • UNIVERSIDAD DE LOS ANDESFACULTAD DE FARMACIA Y BIOANLISIS

    CATEDRA DE INMUNOLOGA

    Introduccin al Inmunodiagnstico.

    Csar Prez-Maldonado,PhD.2009.

  • Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

    INMUNIDAD

    Mecanismos de Defensa (Especficos / Inespecficos)

    CELULARES Linfocitos T

    HUMORALESSntesis de Anticuerpos. Linfocitos B.

    Destruccin / Inactivacin de agentes extraos (no-propio)

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    INFECCIN

    Respuesta

    DETECCION CUANTIFICACION

    Inmunodiagnstico

    Antgenos / Anticuerpos(liquidos biolgicos)

  • Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

    RESPUESTA INMUNE A LA INFECCIN

    Los linfocitos B sintetizan anticuerpos clase IgGIgG, IgMIgM, e IgAIgA en respuesta a la mayora de las infecciones.IgEIgE en reacciones alrgicas.

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    Tcnicas basadas en la reaccin antgeno-anticuerpo.

    De utilidad en la deteccin de antgenos o anticuerpos en diferentes muestras biolgicas (suero, saliva, lquidos biolgicos, tejidos, etc.)

    Permite evidenciar infecciones, respuestas inmunes y componentes biolgicos.

    DEFINICIN

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    La sensibilidad su capacidad para detectar los analitos en los casos estudiados.

    La especificidad permite asegurar que el resultado positivo de una prueba indica con precisin la presencia del analito en cuestin.

    Anticuerpos Monoclonales - Protenas Recombinantes

    ASPECTOS PRCTICOS

  • APLICACIN DEL INMUNODIAGNSTICO.

    Estudios del Sistema Inmune: Estudios del Sistema Inmune: - Salud.- Enfermedad.

    Aspectos a evaluar: Aspectos a evaluar:

    - Evaluacin del Sistema Inmune

    - Deteccin de Enfermedades Infecciosas.

    - Anlisis General en el Laboratorio.

    Hormonas, Drogas, Medicamentos, etc.

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  • * Desarrollo de Mtodos Diagnsticos.

    Aplicacin en otras reas especialidades.

    Bioanlisis Medicina Veterinaria Industria Farmacutica.

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  • Mtodos Mtodos directosdirectos

    Ponen de manifiesto la presencia del antgeno- Visualizacin directa- Deteccin de ciertos componentes

    Mtodos Mtodos indirectosindirectos

    Permiten detectar la presencia de ciertos productos derivados de la infeccin (Anticuerpos).

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    MTODOS DIAGNSTICOS

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    MTODOS DIAGNSTICOS

    Enfermedades infecciosas:

    Diagnstico directo: deteccin de antgenos. a) En enfermedades infecciosas: VHB. b) Para identificar microorganismos en el laboratorio.

    Diagnstico indirecto: deteccin de anticuerpos. a) Enfermedades infecciosas: VIH, VHC, CMV,sfilis. b) Determinacin del estado inmunitario de individuos y

    poblaciones. Conocer el porcentaje de personas de una poblacin expuesta a infecciones. (Herramienta epidemiolgica) .

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    APLICACIONES

    Como pruebas de tamizaje (cribado): En estudios poblacionales donde se desea investigar la existencia de probables

    infecciones (aguda o crnica) mediante la deteccin de anticuerpos. Las mas utilizadas en la actualidad son las tcnicas inmunoenzimticas.

    Determinacin del antgeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg) Bsqueda de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC) en bancos de

    sangre. Deteccin de anticuerpos contra el virus de la rubeola en mujeres no vacunadas.

    En el diagnstico clnico:

    Se utilizan como complemento de las pruebas de tamizaje. Cuando se sospecha de una determinada enfermedad infecciosa.

    Deben ser muy sensibles y especficas: aglutinacin con ltex, hemaglutinacin, inmunofluorescencia e

    inmunoenzimticas.

  • Pruebas Serolgicas.

    FACIL REALIZACION.FACIL REALIZACION.

    EVITAN PROCEDIMIENTOS INVASIVOS.EVITAN PROCEDIMIENTOS INVASIVOS.

    PERMITEN DETECTAR ANTIGENOS Y ANTICUERPOSPERMITEN DETECTAR ANTIGENOS Y ANTICUERPOS

    PERMITEN LA REALIZACION DE ESTUDIOS EPIDEMIOLGICOS DE PERMITEN LA REALIZACION DE ESTUDIOS EPIDEMIOLGICOS DE MANERA MS EFECTIVA.MANERA MS EFECTIVA.

    SON ALTAMENTE ESPECFICAS Y SENSIBLES.SON ALTAMENTE ESPECFICAS Y SENSIBLES.

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  • La clase IgM se producen nicamente en la respuestarespuesta primaria.primaria. (fase aguda(fase aguda)

    Su presencia se interpreta como exposicin-infeccin recienteexposicin-infeccin reciente, o activaactiva.

    Las IgM, no atraviesan la placente humana. Importantes en diagnstico de recin nacidos (infeccin fetalinfeccin fetal)

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    DIAGNSTICO INMUNOLGICO

  • Diagnstico Serolgico.

    Las clase Las clase IgG pueden permanecer -incluso a tasas elevadas- mucho pueden permanecer -incluso a tasas elevadas- mucho tiempo (aos) despus de que la infeccin est resuelta.tiempo (aos) despus de que la infeccin est resuelta.

    Contactos posteriores con Antgenos producen una respuesta de Acs clase Contactos posteriores con Antgenos producen una respuesta de Acs clase IgG (Respuesta Secundaria).IgG (Respuesta Secundaria).

    En el caso de microorganismos intracelulares puede persistir toda la vida.En el caso de microorganismos intracelulares puede persistir toda la vida. (Toxoplasmosis, Herpesvirus etc..). (Toxoplasmosis, Herpesvirus etc..).

    Memoria Inmunolgica : Respuesta ms inmediata y con mayor intensidad Memoria Inmunolgica : Respuesta ms inmediata y con mayor intensidad (RESPUESTA ANAMNESICA).(RESPUESTA ANAMNESICA).

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    Cnetica - IgG e IgMCnetica - IgG e IgM

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    Inmunizacin de un ratn para estimular la produccin de anticuerpos

    Linfocitos B se fusionan con clulas tumorales cultivadasHIBRIDOMA

    Clulas tumorales crecen en cultivos tisulares Linfocitos B

    aisladas de Bazo

    Produccin de anticuerpos por los hibridomas Separacin de clones de hibridoma

    productoras de anticuerpo Obtencin de anticuerpos monoclonales.

    Produccin de Anticuerpos Monoclonales

  • Pruebas Serolgicas.Fijacin del Complemento

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    AglutinacinPrticulas de Ltex Sensibilizadas con Anticuerpos

    Prticulas de Ltex Sensibilizadas - Muestra Aglutinacin.

  • Pruebas Serolgicas.Reaccin de Aglutinacin.

    Clulas completas- Bacterias- Protozoos- Eritrocitos

    Partculas inertes- Ltex- Bentonita- Gelatina

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  • Pruebas Serolgicas.Reaccin de Hemaglutinacin.

    Clulas completas- Eritrocitos

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    AntgenoAntcuerpo

    Fase Slida Muestra

    Mallas de Aglutinacin

    Eritrocitos

  • Pruebas Serolgicas.Reaccin de Hemaglutinacin.

    Clulas completas- Eritrocitos

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  • Pruebas Serolgicas.Reaccin de Precipitacin.

    Medio Semisolido- Antgeno o Anticuerpo difundido en medio

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  • Pruebas Serolgicas.Reaccin de Precipitacin.

    Medio Semisolido- Antgeno o Anticuerpo difundido en medio

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    Concentracin creciente de antigeno

    Prec

    ipita

    do fo

    rmad

    o

    Zona de exceso de Ac-Ag

    Zona de equivalencia

    Zona de exceso de Ac-Ag

  • Pruebas Serolgicas.Inmunofluorescencia.

    Conjugado Fluorescente- Antgeno o Anticuerpo marcado con Fluorocromo

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    Directa Indirecta

  • Pruebas Serolgicas.Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

    Conjugado Enzimtico- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima

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    E E E E E E

    S S S S S SE E E E E E

    E

    S

    AntigenoBuffer de bloqueoAnticuerpo

    Enzima acoplada con un anti-Ig

    Substrato

  • Pruebas Serolgicas.Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

    Conjugado Enzimtico- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima

    Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

    S S S S S SE E E E E E E E E E E E

    E

    S

    AntigenoBuffer de bloqueoAnticuerpo

    Enzima acoplada con un anticuerpo

    Substrato

  • Pruebas Serolgicas.Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

    (Auro-Dex Helicobacter pylori MultiTest)

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  • Gracias por su Gracias por su atencin atencin

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