TECNICAS DE COLORACIÓN

EDGAR FABIÁN SANDOVAL

ESTUDIO BACTERIOSCÓPICO


ESTUDIO BACTERIOSCÓPICO

Es el estudio realizado directamente a los microorganismos en el microscopio, del

cual se obtiene solo la forma y la agrupación.


MORFOLOGÍA BACTERIANA


TIPOS DE COLORACIÓN


• Técnica de coloración simple

(cuando se usa un solo colorante).

• Técnica de coloración múltiple

(combinación de dos o más colorantes):

– Técnicas de coloración diferenciales.– Técnicas de coloración especiales.



• Técnicas de coloración diferenciales

Se utilizan para diferenciar grandes grupos bacterianos.

– Gram.– Ziehl-Neelsen.




Gram

Ziehl-Neelsen


• Técnicas de coloración especiales.

Se utilizan para hacer visibles, de manera selectiva, algunas estructuras de la bacteria.

Para teñir microorganismos que con las técnicas normales no son visibles.




• Técnicas de coloración especiales.

– Coloración de Cápsulas.– Coloración de Flagelos.– Coloración de Esporas.– Coloración de Gránulos Metacromáticos.– Coloración en Relieve.


COLORACIÓN DE CÁPSULAS

• Método de Muir.

• Método de la tinta china.

• Método de Anthony.

• Método de Hiss.


COLORACIÓN DE CÁPSULAS

Tinta China


COLORACIÓN DE FLAGELOS

• Método de Gray.

• Coloración argéntica para

flagelos.


COLORACIÓN DE ESPORAS

• Método de Dorner.

• Método de Schaeffer-Fulton.


COLORACIÓN DE GRÁNULOS METACROMÁTICOS

• Coloración de Albert.

COLORACIÓN EN RELIEVE


¿Cuales son las desventajas de las técnicas de tinción?


DESVENTAJAS

• La principal desventaja es:

– No se conoce el GENERO ni la ESPECIE, solo su morfología.


TÉCNICA DE COLORACÓN DE GRAM


• Desarrollado por el médico danés Hans Christian Joachim Gram (1985).

• Divide a dos grandes grupos principales: GRAM POSITIVOS y GRAM NEGATIVOS.

TÉCNICA DE COLORACÓN DE GRAM


COMPOSICIÓN DE LA PARED BACTERIANA


• Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos teicoicos.

• Presenta lípidos que están en la superficie, unidos en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica.

• Ácido teicoico que está en la superficie y se une sólo a la capa de peptidoglicano. El ácido Teicoico es el responsable del determinante antigénico del organismo.

COMPOSICIÓN DE LA PARED BACTERIANA – GRAM +


COMPOSICIÓN DE LA PARED BACTERIANA – GRAM +


http://www.danival.org/bacteria/morfo/img/pared_gp.gif

COMPOSICIÓN DE LA PARED BACTERIANA – GRAM -

• Tiene una capa delgada de peptidoglicano (mureina).

• La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.

• Elevada cantidad de lípidos y no hay presencia de ácidos teicoicos.


COMPOSICIÓN DE LA PARED BACTERIANA – GRAM -


http://www.danival.org/bacteria/morfo/img/pared_gn.gif

TINCIÓN DE GRAM


TINCIÓN DE GRAM

• Frotis de bacterias.

1. El procedimiento se inicia fijando a la llama las bacterias extendidas en un portaobjetos.

2. Las mismas se tiñen con una solución del colorante básico cristal violeta.


3. El paso siguiente consiste en un tratamiento con solución de Lugol (iodo/ioduro de potasio). El yodo forma una laca con el cristal violeta, que es insoluble en agua y soluble en alcohol o acetona.

4. El preparado se trata después con alcohol o acetona.

TINCIÓN DE GRAM


TINCIÓN DE GRAM

5. Finalmente se procede a realizar una coloración de contraste (diferenciación) con otro colorante (safranina).

6. Como consecuencia de este tratamiento las bacterias que retienen el complejo colorante-yodo durante el paso 4 quedan azules y se denominan Gram positivas.


7. Las células que NO retienen el complejo colorante-yodo durante la decoloración, al tomar el colorante de contraste, quedan rojas y se denominan Gram negativas.

TINCIÓN DE GRAM


COLORANTES

• Cristal violeta.

• Lugol.

• Alcohol cetona.

• Safranina


TINCIÓN DE GRAM


TINCIÓN DE GRAM

Gram - Gram +


VENTAJAS DE LA TÉCNICA DE GRAM


VENTAJAS DE LA TÉCNICA DE GRAM

Te permite diferenciar dos grandes grupos: Gram – y Gram +

Identificar forma y agrupación de las bacterias

Permite elegir el medio de cultivo a utilizar

Iniciar antibioticoterapia


TECNICAS DE COLORACIÓN

Documents

Transcript of TECNICAS DE COLORACIÓN