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Presentacin de PowerPoint

28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder1INMUNOHISTOQUMICA

1HISTORIA28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder2

Albert Hewett Coons (June 28, 1912 September 30, 1978Desarroll tcnicas de inmunofluorescencia a principios del 1940.En las ciudades extranjeras, los visitantes tienen muchas horas solos. Se me ocurri que esta teora [de hipersensibilidad inmunolgica como la etiologa del ndulo de Aschoff nunca haba sido probado, y de hecho no puede ser probado sin la demostracin de anticuerpo o antgeno, preferiblemente ambos en las lesiones locales. consider que podra ser ms fcil encontrar el antgeno que el anticuerpo25 aos despus NAKANE, PIERCE Y AVRAMEUS, revolucionaron la tcnica, llegando a la INMUNOHISTOQUMICA como es hoy.INMUNOHISTOQUIMICA28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder3La inmunohistoqumica es una tcnica para la localizacin de molculas en los tejidos mediante el empleo de anticuerpos. Se basa en la gran especificidad y alta afinidad que tienen los anticuerpos para reconocer a molculas y unirse a ellas. Adems, la conjugacin o combinacin de los anticuerpos con enzimas o con sustancias fluorescentes permite detectar molculas presentes en el tejido.

IMPORTANCIA DE LA INMUNOHISTOQUIMICA28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder4Proporciona informaciones valiosas para la patologa, diagnostico, evolucin y tratamiento de las diferentes enfermedades.Metodo inmunofluorescenteLocalizacin de: virus, y antgenos bacterianos, anticuerpos en sitio de su formacin en las clulas plasmticas.Enfermedades degenerativas: glicogenosis, lipoidosis y amiloidosis Neoplasias: clulas cancerosas, su evolucin y comportamiento.En el carcinoma metastsico.-Tiene un gran nmero de fosfatasa cida..-Al iniciarse su tratamiento mdico, si es efectivo, la enzima va decreciendo.Podemos ir de esta manera controlando la evolucin de la enfermedad.ANTICUERPOS28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder5.-Cuando se emplean sueros purificados; nos referimos a anticuerpos policlonales.

.-Existe una tcnica que permite aislar y cultivar en el laboratorio (in vitro) de forma individualizada a cada uno de los clones de linfocitos B activados durante la respuesta inmune. Cada uno de esos cultivos producir un solo tipo de inmunoglobulina G que reconocer slo a uno de los determinantes antignicos. A estos se les denomina anticuerpos monoclonales ya que proceden de linfocitos que producen inmunoglobulinas idntica.28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder6

ANTICUERPOS POLICLONALESReaccionan con varios eptopos de un antgeno.Conejo.Cabra.Cerdo.Oveja.Caballo.

Inyeccin de 10-200 g de AgIntradrmicamente o subcutneoIntraperitoneal28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder7ANTICUERPO MONOCLONALESUn clon de clulas plasmticas.Ratones.Elevada homogeneidad.Sin Ac inespecficos.Fcil caracterizacin.Sin variabilidad.

Especificidad: El eptopo del antgeno debe ser nico.28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder8DIFERENCIAS DE ANTICUERPOS28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder9

ANTICUERPO MONOCLONAL28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder10La investigacin biomdica, la identificacin y aislamiento de protenas, activacin de enzimas y su conocimiento de la estructura molecular y morfognesis.Diagnstico: permite la deteccin de hormonas, vitaminas, citocinas; la monitorizacin de drogas, la deteccin de alrgenos, marcadores tumorales. Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores electrnicos pueden detectar tanto molculas orgnicas como inorgnicas como la contaminacin de metales pesados en alimentos y agua, deteccin de gases txicos, etcTratamiento: son capaces de destruir clulas, incluidas las tumorales, mediante distintos mecanismos. ANTICUERPO28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder11

CONJUGACIN28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder12Las inmunoglobulinas, aunque se unan a la molcula que queramos detectar, no son visibles con el microscopio por lo que la tendremos que conjugar (unirla) a otras molculas que nos den una seal visible. Estas molculas que aportan visibilidad a los anticuerpos suelen ser de dos tipos: molculas fluorescentes y enzimas. Las primeras se pueden observar con el microscopio de fluorescencia mientras que las segundas pueden convertir determinados sustratos solubles en productos insolubles y coloreados. La seal aparece all, donde est la sustancia fluorescente o la enzima, que es donde se ha unido la inmunoglubulina.CONJUGACION28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder13INMUNOHISTOQUIMICA CROMFORA( ANTICUERPO MARCADO CON UNA ENZIMA)PEROXIDASA Y LA FOSFATASA ALCALINA .-MICROSCOPIO OPTICO INMUNOHISTOQUIMICA INMUNOFLUORESCENTE(ANTICUERPO MARCADO CON UNA MOLCULA FLUORESCENTE) .-FLUORESCENA Y RODAMINA.-MICROSCOPIO PARA FLUORESCENCIA

MTODOS INMUNOHISTOQUMICOS28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder14METODO DIRECTOMETODO INDIRECTOMETODO ABCMTODO PAP MTODO DE LSAB O LABMTODO DE CSA MTODO DE POLMEROS

MTODOS INMUNOHISTOQUMICOS28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder15

.-MTODO DIRECTO.-MTODO ABC.-EL MTODO INDIRECTO

MTODO DE LA PEROXIDASA-ANTIPEROXIDASAEste mtodo usa un anticuerpo primario, un anticuerpo secundario y un anticuerpo producido en contra del conjugado con la enzima peroxidasa (complejo PAP). El anticuerpo secundario es producido en una especie animal diferente del anticuerpo primario, y del complejo peroxidasa-antiperoxidasa; El anticuerpo primario y el complejo peroxidasa-antiperoxidasa provienen de la misma especie animal. Consecuentemente, el anticuerpo secundario acta como puente o anticuerpo eslabon.

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28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder17MTODO EL COMPLEJO AVIDINA-BIOTINAEsta tcnica usa tres reactivos; un anticuerpo primario, y un anticuerpo secundario que esta qumicamente ligado a la vitamina biotina, y un complejo de la glicoprotena avidina que esta ligado a la biotina y peroxidasa. La avidina tiene la habilidad de ligarse con cuatro molculas de biotina, en forma no inmunolgica. Esta fuerte afinidad le da al mtodo una excelente sensibilidad.

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28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder20PASOS GENERALES28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder21



CASO CLINICO28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder24




Linfoma Anaplsico primario de piel CD30FACTORES DE CALIDAD28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder28

INMUNOFLUORESCENCIAConsiste en conjugar colorantes fluorescentes con anticuerpos, exponiendo despus este conjugado a los anticuerpos o antgenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de microorganismos o de clulas, o cultivo de tejidos en capa nica. Cuando la reaccin es positiva y se expone a la luz ultravioleta se producir fluorescencia observable bajo el microscopio de inmunofluorescencia. 28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder29LA FLUORESCENCIAEs una forma de luminiscencia entendindose sta ltima como la emisin de la luz que se produce a partir de una fuente de energa no trmica y bajo el efecto de una excitacin.La fluorescencia primaria o autofluorescencia es aquella que presenta determinadas sustancias de forma espontnea sin necesidad de ser modificadas; por ejemplo la lmina elstica de las arterias muestra autofluorescencia en determinadas condiciones).En los tejidos que no poseen esta propiedad se puede inducir la fluorescencia, llamndola fluorescencia secundaria, esto se puede hacer mediante tincin histoqumica con sustancias fluorescentes llamadas fluorocromos; uniendo a anticuerpos dirigidos a antigenos tisulares.

28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder30FLUOROCROMOS.

Son sustancias qumicas que tienen la propiedad de absorber fotones de alta energa procedente de la radiacin ultravioleta o del espectro visible. Ello provoca una redistribucin de los electrones de las molculas fluorescentes, puesta de manifiesto por la emisin de una radiacin luminosa de longitud de onda distinta aunque dentro del espectro visible.

Una ncleo de un linfocito marcado con diversos fluorocromos: DAPI (azul, tie el ADN; y secuencias especficas de dos pares de cromosomas, en verde y rojo (FISH).28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder31FLUOROCROMOSLos fluorocromos ms utilizados en las tcnicas de inmunofluorescencia son: Fluorescena: absorbe luz azul y emite fluorescencia verde manzana. Rodamina: absorbe luz verde y emite fluorescencia roja anaranjada.

28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder32FLUOROCROMOSLos fluorocromos pueden unirse de forma covalente a los anticuerpos sin alterar la capacidad de estos ltimos para unirse a sus correspondientes antgenos, por ello las fluorocromos ligados a anticuerpos especficos constituyen un medio til de visualizar los lugares donde reproduce la reaccin Antgeno Anticuerpo.


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28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder36VENTAJAS DESVENTAJASEs una tcnica rpida Baja sensibilidadEs reproducible Las reacciones no son permanentesPermite tinciones dobles Es necesario fotografiar las reacciones positivasAplicable en la microscopia confocal Requiere microscopio de fluorescencia(caro)No se necesitan realizar cultivos Debe ser realizado por personal muyespecializado.Se puede identificar microorganismos Los resultados no son 100% especficos especficos en un grupo mixto. (como toda tcnica serolgica).28/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder3728/04/2015Asencios Espinoza Jhon Wilder38

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