SEMINARIO SEMANA N 15TERAPIA GENICA Y CELULAS MADRE

1. Cules son las 2 caractersticas ms importantes para reconocer una clula madre?Explquelas.

Las clulas madre se diferencian de otras clases de clulas del cuerpo. Toda clula madre sin importar su origen tiene tres caractersticas generales: son capaces de dividirse y de renovarse por perodos largos; son no especializadas; y pueden dar lugar a tipos especializados de clula.

Las clulas madre son capaces de dividirse y de renovarse por perodos largos. Contrariamente a las clulas musculares, a las clulas sanguneas o las neuronas las cuales normalmente no se dividen para dar clulas hijas-- las clulas madre pueden replicarse casi en forma indefinida. Cuando las clulas se replican muchas veces se denomina proliferacin. Una poblacin pequea de clulas madre que prolifera por muchos meses en el laboratorio puede producir millones de clulas. Si las clulas hijas continan siendo no especializadas como la clula madre inicial, las clulas hijas tambin sern capaces de auto renovarse a largo plazo al igual que las clulas madre de la cual se originaron. Los factores y las condiciones especficas que permiten que las clulas madre sigan siendo no especializadas son de primordial inters para los cientficos. A la comunidad cientfica le ha tomado muchos aos de investigacin y de errores sistemticos aprender a hacer crecer las clulas madre en el laboratorio sin que se diferencien espontneamente a diferentes tipos especficos de clulas. Por ejemplo, tom 20 aos aprender cmo hacer para que las clulas madre embrionarias humanas crecieran en el laboratorio siguiendo las condiciones del desarrollo de las clulas madre del ratn.

Las clulas madre son no especializadas. Una de las caractersticas fundamentales de una clula madre es que no tiene ninguna estructura de tejido especfica que le permita realizar funciones especializadas.Una clula madre no puede trabajar con sus clulas vecinas para bombear sangre a travs del cuerpo (como una clula del msculo del corazn); no puede llevar las molculas de oxgeno a travs de la circulacin sangunea (como una clula de la sangre); y no puede encender seales electroqumicas a otras clulas que permitan que el cuerpo se mueva o hable (como una neurona). Sin embargo, las clulas madre no especializadas pueden dar lugar a clulas especializadas, incluyendo las clulas del msculo del corazn, las clulas de la sangre, o las neuronas.

Las clulas madre pueden dar lugar a clulas especializadas. Cuando las clulas madre no especializadas dan lugar a las clulas especializadas, el proceso se llama diferenciacin". Los cientficos estn empezando a entender las seales interiores y exteriores de las clulas que accionan la diferenciacin de la clula madre. Las seales internas son controladas por los genes de una clula, que se entremezclan a travs de filamentos largos de ADN y llevan instrucciones codificadas y funciones para todas las estructuras de la clula. Las seales externas para la diferenciacin de la clula incluyen productos qumicos secretados por otras clulas, el contacto fsico con las clulas vecinas, y ciertas molculas del micro ambiente en el que se encuentran.

2. Cules son los tipos de clulas madre que existen (segn clasificacin: totipotentes, pluripotentes, multipotentes, unipotentes)?. Lasclulas madre totipotentespueden crecer y formar un organismo completo, tanto los componentes embrionarios (como por ejemplo, las trescapas embrionarias, el linaje germinal y lostejidosque darn lugar alsaco vitelino), como los extraembrionarios (como laplacenta). Es decir, pueden formar todos los tipos celulares. La clula madre totipotente por excelencia es elcigoto, formado cuando unvuloesfecundadopor unespermatozoide.

Lasclulas madre pluripotentesno pueden formar un organismo completo, pero s cualquier otro tipo de clula correspondiente a los tres linajes embrionarios (endodermo,ectodermoymesodermo), as como el germinal y el saco vitelino. Pueden, por tanto, formar linajes celulares. Se encuentran en distintas etapas deldesarrollo embrionario. Las clulas madre pluripotentes ms estudiadas son lasclulas madre embrionarias que se pueden aislar de la masa celular interna delblastocisto. En la actualidad se utilizan como modelo para estudiar el desarrollo embrionario y para entender cules son los mecanismos y las seales que permiten a una clula pluripotente llegar a formar cualquier clula plenamente diferenciada del organismo. Lasclulas madre germinalesson clulas madre embrionarias pluripotentes que se derivan de los esbozos gonadales del embrin. Estos esbozos gonadales se encuentran en una zona especfica del embrin denominada cresta gonadal, que dar lugar a losvulosyespermatozoides. Hoy se pueden manipular clulas humanas de adulto y generar clulas con pluripotencialidad inducida (iPS), que se ha visto poseen el mismo potencial de crecimiento y diferenciacin de las clulas madre embrionarias, e irn sustituyendo o ampliando con creces las posibilidades biotecnolgicas soadas para las embrionarias. El compromiso deShinya Yamanaka, diseador de esta tecnologa y ganador del premio nobel por su descubrimiento, en relacin con su uso hacia otros fines, es un ejemplo de la tica y la responsabilidad del investigador y supone asumir que la ciencia triunfa al servicio del hombre. Las ventajas tcnicas de las iPS son muchas, las ms importantes son: no inducen rechazo inmunolgico lo que abre la posibilidad de crear frmacos especficos para un paciente determinado; no requiere la utilizacin de vulos humanos, la tcnica es muy fcil de realizarse y su costo es reducido.

Lasclulas madre multipotentesson aquellas que slo pueden generar clulas de su misma capa o linaje de origen embrionario (por ejemplo: unaclula madre mesenquimaldemdula sea, al tener naturaleza mesodrmica, dar origen a clulas de esa capa comomiocitos,adipocitosuosteocitos, entre otras). Otro ejemplo son lasclulas madre hematopoyticas- clulas madre de la sangre que puede diferenciarse en los mltiples tipos celulares de la sangre.

Lasclulas madre unipotentes, tambin llamadasclulas progenitorasson clulas madre que tiene la capacidad de diferenciarse en slo un tipo de clulas.12Por ejemplo lasclulas madre musculares, tambin denominadas clulas satlite slo pueden diferenciarse en clulas musculares.

3. Cules son los tipos de clulas madre que existen (segn clasificacin por etapa del desarrollo: embrionaria y adulta)?

La clula madre por excelencia es el cigoto, formado cuando un vulo es fecundado por un espermatozoide. El cigoto es totipotente, es decir, puede dar lugar a todas las clulas del feto y a la parte embrionaria de la placenta.Conforme el embrin se va desarrollando, sus clulas van perdiendo esta propiedad (totipotencia) de forma progresiva, llegando a la fase de blstula o blastocisto en la que contiene clulas pluripotentes (clulas madre embrionarias) capaces de diferenciarse en cualquier clula del organismo salvo las de la parte embrionaria de la placenta. Conforme avanza el desarrollo embrionario se forman diferentes poblaciones de clulas madre con una potencialidad de regenerar tejidos cada vez ms restringida y que en la edad adulta se encuentran en "nichos" en algunos tejidos del organismo.Las clulas madre son clulas cuyo destino todava no se ha "decidido". Se pueden transformar en varios tipos de clulas diferentes, a travs de un proceso denominado "diferenciacin". En las fases iniciales del desarrollo humano, las clulas madre, en el embrin, son "diferentes" a todos los tipos de clulas existentes en el organismo -cerebro, huesos, corazn, msculos, piel,.....

Existen diferentes tipos de clulas madres, aunque las ms empleadas en biologa son las clulas madres embrionarias y las adultas: Clula madre embrionaria (pluripotentes): Se encuentran en la masa celular interna del blastocisto. El blastocisto est formado por una capa externa denominada trofoblasto, formada por unas 70 clulas, y una masa celular interna constituida por unas 30 clulas que son las clulas madres embrionarias que tienen la capacidad de diferenciarse en todos los tipos celulares que aparecen en el organismo adulto, dando lugar a los tejidos y rganos. En la actualidad se utilizan como modelo para estudiar el desarrollo embrionario y para entender cules son los mecanismos y las seales que permiten a una clula pluripotente llegar a formar cualquier clula plenamente diferenciada del organismo.

Clula madre germinales: Se trata de clulas madres embrionarias pluripotenciales que se derivan de los esbozos gonadales del embrin. Estos esbozos gonadales se encuentran en una zona especfica del embrin denominada cresta gonadal, que dar lugar a los vulos y espermatozoides. Tienen una capacidad de diferenciacin similar a las de las clulas madres embrionarias, pero su aislamiento resulta ms difcil. Clulas madres fetales: Estas clulas madres aparecen en tejidos y rganos fetales como sangre,hgado, pulmn y poseen caractersticas similares a sus homlogas en tejidos adultos,Aunque parecen mostrar mayor capacidad de expansin y diferenciacin. Su procedencia no est del todo clara. Podran tener origen embrionario o bien tratarse de nuevas oleadas de progenitores sin relacin con las clulas madres embrionarias. * Clula madre adulta: Son clulas no diferenciadas que se encuentran en tejidos y rganos adultos y que poseen la capacidad de diferenciarse para dar lugar a clulas adultas del tejido en el que se encuentran, por lo tanto se consideran clulas multipotenciales. En un individuo adulto se conocen hasta ahora alrededor de 20 tipos distintos de clulas madre, que son las encargadas de regenerar tejidos en continuo desgaste (como la piel o la sangre) o daados (como el hgado). Su capacidad es ms limitada para generar clulas especializadas. Las clulas madre hematopoyticas de mdula sea (encargadas de la formacin de la sangre) son las ms conocidas y empleadas en la clnica desde hace tiempo. En la misma mdula, aunque tambin en sangre del cordn umbilical, en sangre perifrica y en la grasa corporal se ha encontrado otro tipo de clula madre, denominada mesenquimal que puede diferenciarse en numerosos tipos de clulas de los tres derivados embrionarios (musculares, vasculares, nerviosas, hematopoyticas, seas, etc). Aunque an no se ha podido determinar su relevancia fisiolgica se estn realizando abundantes ensayos clnicos para sustituir tejidos daados (corazn) por derivados de estas clulas.

4. En la mdula sea existen una gran variedad de clulas madre. Describa las Hematopoyticas, Mesenquimales y VSEL.

Clulas madre hematopoyticas (HSC)

Estas clulas son poco frecuentes, que comprende slo 1 / de 10 000 a 1/100 000 de clulas sanguneas totales, y que parecen ser los ms verstiles en cruzar los lmites de linaje. CMH se pueden obtener de la mdula sea, sangre perifrica, cordn umbilical, y el hgado fetal. Durante el desarrollo hay flujo entre los sitios capaces de apoyarlos. En el adulto, este gira en torno a la mdula sea, con la mayora de las CMH trasplantados regresar a las cavidades de mdula sea dentro de un da. Recientemente se ha establecido que las integrinas como receptores VLA-4 y otra de adhesin tales como CD44 son esenciales en las clulas madre homing a la mdula sea. Los experimentos que implican apagar el receptor CXCR4 en las clulas madre de mdula sea muestran que es fundamental en este mecanismo. La quimiocina, factor derivado del estroma 1, es producida por la mdula sea y se une al receptor CXCR4, activando de este modo diversas molculas de adhesin celular a travs de sealizacin intracelular. Otro receptor se cree que participan en el proceso de homing y el injerto es c-kit, que permite a las HSC a adherirse al estroma a travs de la membrana factor de clulas madre enlazado. La migracin en la direccin opuesta se puede fomentar experimentalmente usando la colonia de granulocitos citocina factor estimulante (G-CSF). En la movilizacin de clulas madre de esta manera, Levesque et al establece que las proteasas derivadas de neutrfilos son capaces de escindir la molcula de adhesin predominante y las clulas madre de liberacin de su nicho. Uno de los pasos ms importantes en la evolucin de la investigacin con clulas madre fue el descubrimiento de que el sialomucin CD34 es un antgeno de superficie de las clulas hematopoyticas. Debido a que su expresin es downregulated como las clulas se vuelven ms maduro y ms diferenciado, CD34 se ha convertido en la caracterstica distintiva en el aislamiento, contando, y la manipulacin de clulas madre hematopoyticas. Su funcin, sin embargo, sigue siendo desconocido. Una advertencia reciente de esta historia ha sido la publicacin de varios estudios que sugieren que algunos HSC no expresan CD34.

Clulas madre mesenquimales (MSC)

Lasclulas madre mesenquimalestambin conocidas como clulas madre estromales o MSC (del ingls Mesenchymal Stem Cells o Mesenchymal Stromal Cells), son clulas multipotentes primitivas, con morfologa fibroblastoide, originadas a partir de la capa germinal mesodermal, con la capacidad de diferenciarse en diversos tipos de clulas, incluyendo osteocitos (clulas seas), condrocitos (clulas del cartlago), adipocitos (clulas grasas), mioblastos (precursores de clulas musculosas) cardiomiocitos (clulas del corazn), neuronas y astrocitos (Clulas gliales) tantoin vivocomoin vitro.En estudios recientes se ha sealado que las MSC pueden ser aisladas de muchos tejidos, adems de la mdula sea, incluyendo tejido adiposo, hgado, bazo, testculos, sangre menstrual, fluido amnitico, pncreas, periostio, membrana sinovial, msculo esqueltico, dermis, pericitos, hueso trabecular, cordn umbilical humano, pulmn, pulpa dental, e incluso de sangre perifrica, sugiriendo que las MSC son ampliamente distribuidas in vivo.27 28En los ltimos aos, el inters ha aumentado por las clulas madre mesenquimales aisladas de tejido adiposo (AT-MSC) dada su plasticidad de desarrollo y su potencial teraputico31, adems de que su obtencin es mucho menos invasiva que las realizada a partir de la mdula sea y se obtienen en mayor abundancia.En los ltimos aos se han descrito distintos marcadores de superfcie que han permitido identificar y aislar clulas MSC, tales como SH2, SH3, CD29, CD44, CD71, CD90 y CD10621. Las MSC no expresan antgenos de superficie tpicos de las HSC, como CD34, CD45 o CD14.A pesar de su probada multipotencialidad mesodrmica y de su habilidad para diferenciarse a neuroectodermo, las MSC no se diferencian a tejido derivado del endodermo y, por lo tanto, no se pueden considerar clulas madre pluripotenciales. Las MSC constituyen un modelo muy til en aplicaciones clnicas para un nmero de enfermedades, tanto en terapia regenerativa como en terapia gnica.

VSEL Estas clulas, denominadas clulas madre muy pequeas similares a las embrionarias (VSELs) en funcin de su tamao (7-8 micras), puede representar un tipo de clulas para uso en la reparacin cardaca. Son endgenas, autloga, sin modificar, y pluripotentes, contribuyendo as a combatir la brecha entre los adultos como de embriones fenotipos de clulas madre. Como las clulas del BLSC y VSEL estn presentes en prcticamente todos los tejidos adultos, incluyendo los pulmones, el cerebro, los riones, los msculos y el pncreas, Co- purificacin de las clulas del BLSC y VSEL con otras poblaciones de clulas madre adultas puede explicar la aparente pluripotencia de las poblaciones de clulas madre adultas. Son clulas muy pequeas, que tienen caractersticas fsicas muy parecidas a las encontradas normalmente en las clulas embrinicas, que son capaces de interactuar con un rgano especfico con el fin de reparar el tejido que ha sido daado o que est enfermo.

5. Qu es un marcador celular? Explicar brevemente la Protena verde fluorescente (GFP).

La habilidad de distinguir e identificar compartimentos subcelulares es fundamentalpara tener un mayor conocimiento de la estructura y funcin de los diferentes orgnulos celulares, su biognesis y el mantenimiento de las clulas, as como para definir las diferentes vas de transporte de proteinas, lpidos y otros compuestos en el interior celular.

El procedimiento patentado protege la sntesis y el uso de una serie de marcadores celulares fluorescentes estables, fciles de utilizar, no txicos y con buena penetracinin vivo.La patente describe lapreparacin y el uso del marcador fluorescenteC2-BDP que presenta unas caractersticas que proporcionan las siguientes ventajas frente a otros marcadores comercializados:

Alta permeabilidad y estabilidad: accede al interior celular ofreciendo lecturas desde los 15 minutos hasta varios das despus. Nula toxicidad celular: No altera la viabilidad ni el crecimiento celular. Sencillez de uso: por incubacin en el medio de cultivo. Amplia gama cromtica: permite la introduccin de diferentes fluorforos

Proteina verde fluorescente:

Laprotena verde fluorescente(oGFP, por sus siglas en ingls,greenfluorescentprotein) es unaprotenaproducida por lamedusaAequorea victoria, que emitebioluminiscenciaen la zona verde del espectro visible. El gen que codifica esta protena est aislado y se utiliza habitualmente enbiologa molecularcomomarcador.La estructura de la protena verde fluorescente se determin en 1996. Est constituida por 238aminocidos, que forman once cadenas beta, cuyo conjunto forma un cilindro, en el centro del cual se encuentra unahlice alfa.La GFP original de la medusa posee dos picos de excitacin: uno menor, a 475 nm, y uno mayor, a 395nm. Su pico de emisin est a 509 nm, en la zona verde del espectro.Las protenas fluorescentes, entre las cuales se encuentra la GFP, son muy verstiles y se utilizan en diversos campos como la microbiologa, ingeniera gentica y fisiologa. Permiten ver procesos previamente invisibles, como el desarrollo de neuronas, cmo se diseminan las clulas cancerosas, el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer, el crecimiento de bacterias patognicas, la proliferacin del virus del SIDA, entre otros.

6. Describa brevemente la tcnica de FISH

La tcnica de FISH permite la deteccin y localizacin de secuencias especficas de ADN sobre cromosomas, clulas o tejidos

Citogentica molecular (hibridacin "in situ" con fluorescencia) Las tcnicas de hibridacin in situ con fluorescencia (FISH) se basan en la hibridacin de una sonda de ADN marcada con una sustancia fluorescente sobre su secuencia complementaria del genoma, bien en la metafase cromosmica o en el ncleo en interfase. Las tcnicas de FISH vienen utilizndose desde los aos 8028, si bien no se han incorporado en todos los laboratorios de gentica como rutina. La alta sensibilidad y especificidad del FISH y la rapidez de los ensayos han hecho de esta tcnica una importante estrategia diagnstica con numerosas aplicaciones. Por otra parte, otras tcnicas derivadas del FISH han progresado hasta tal punto que hoy es posible utilizar simultneamente 24 sondas de pintado cromosmico, consiguiendo identificar cada cromosoma por su color. Entre las tcnicas derivadas del FISH convencional, cabe destacar, la hibridacin genmica comparada (CGH), de enorme utilidad en tumores slidos y el cariotipo multicolor (SKY-FISH y M-FISH). Todas ellas, constituyen una nueva disciplina a la que se ha denominado "citogentica molecular", que complementan, pero nunca excluyen al anlisis citogentico convencional (cariotipo de bandas G).

FISHconvencional

Los dos componentes principales de la tcnica de FISH convencional son la sonda de ADN marcada con fluorescencia y la secuencia diana en la muestra tumoral para la cual es especfica. Es muy importante destacar que no es una tcnica de bsqueda de nuevas alteraciones cromosmicas, sino que detecta nicamente aquello que buscamos. El resto del genoma permanece oculto. Podemos utilizar sondas de ADN de distintos tipos: centromricas (marcan nicamente las zonas centrmericas), de pintado cromosmico (marcan todo un cromosoma) o de secuencias especficas de locus ( marcan regiones cromosmicas de secuencia nica). Esta tcnica complementa perfectamente a la citogentica convencional en todas aquellas situaciones en las que no ha sido posible realizar un cariotipo: al disponer de metafases de poca calidad, o no haber obtenido metafases, o bien en los casos en los que las alteraciones cromosmicas asociadas a un diagnstico son crpticas no visibles en el cariotipo, como el caso de la t(12;21) en leucemia aguda linfoblstica infantil.

HIBRIDIZACIN IN SITU FLUORESCENTE (FISH)

La tcnica de Hibridizacin In Situ Fluorescente (FISH) consiste en la deteccin de secuencias de ADN con sondas marcadas con fluorescencia sobre cromosomas o ncleos celulares fijados sobre un portaobjetos, usando para ello un microscopio de fluorescencia y un sistema de captura y procesamiento de imgenes. La ventaja de la prueba radica en la rapidez de la misma (resultados entre 24 y 36 horas) al no necesitar cultivo de clulas, lo que reduce el nivel de ansiedad de los padres. Tras la hibridacin de las sondas con ncleos en interfase o en metafase es posible observar la presencia de ganancias, prdidas o fusiones entre genes. Esta metodologa se usa cada vez ms en el diagnstico de las hemopatas y tambin es de extraordinaria importancia en el estudio de las alteraciones cromosmicas en el lquido amnitico, vellosidades coriales, material de abortos espontneos y en sangre de individuos en los que se sospecha la existencia de una alteracin cromosmica.

7. Describa y grafiquebrevemente el estudio: Cell differentiation: Hepatocytes from non-hepatic adult stem cells Malcolm R. Alison, Richard Poulsom, Rosemary Jeffery, Amar P. Dhillon, Alberto Quaglia, Joe Jacob, Marco Novelli, Grant Prentice, Jill Williamson and Nicholas A. Wright Nature 406, 257 (20 July 2000) doi:10.1038/35018642.Las clulas madre son clulas indiferenciadas de larga vida que son capaces de muchas rondas de divisin. Aqu mostramos que las clulas de hgado humano adulto se pueden derivar de clulas madre de origen en la mdula sea o de circulacin fuera del hgado, aumentando la posibilidad de que las clulas madre-sistema de la sangre podran ser utilizadas clnicamente para generar hepatocitos para la sustitucin de tejido daado.

La presencia del cromosoma Y est indicado por un punto de color marrn clara , normalmente se encuentra en la periferia nuclear . una , los hepatocitos fueron identificados por sus grandes ncleos redondos y grnulos citoplasmticos y eran cromosoma Y - positivo en los controles masculinos . b , tambin se detect el cromosoma Y en los conductos biliares ( D ) en los controles masculinos. c , Un conducto biliar cromosoma Y - negativo rodeado de numerosas clulas inflamatorias Y- positivos en un hgado femenino trasplantados en varones . D , La inmunodeteccin de dos - positiva para el cromosoma Y las clulas (flechas) ubicados en una placa de hepatocitos delineado por citoqueratina - 8 inmunotincin ( rojo ) a partir de un paciente que haba recibido mdula sea masculina . e- g , la deteccin del cromosoma Y en los hgados trasplantados en receptores femeninos masculinos ; correos , dos hepatocitos cromosoma Y - positivos (flechas) en una placa de hepatocitos al borde de un sinusoide ( S ) , tenga en cuenta el punto de color marrn , lo que demuestra que el cromosoma Y es fcilmente distinguible de la nucleolo azul , f , g , secciones consecutivas de un grupo de cuatro ncleos de hepatocitos , que muestra F , uno de los hepatocitos del cromosoma - positiva (flecha , y la insercin con un aumento de 2 veces ) , y G , su citoqueratina - 8 inmunoreactividad . Las barras de escala , 10 mum

8. Describa y grafique brevemente el estudio Chimerism of the transplanted heart. De Quaini F, Urbanek K, Beltrami AP, Finato N, Beltrami CA, Nadal-Ginard B, Kajstura J, Leri A, Anversa P. N Engl J Med 2002 Jan 3;346(1):5-15.ANTECEDENTES:Los casos en que un paciente varn recibe un corazn de un donante femenino ofrecen una oportunidad inusual para probar si las clulas primitivas translocan desde el receptor al injerto y si las clulas con las caractersticas fenotpicas de los del receptor residen en ltima instancia, en el corazn de un donante . El cromosoma Y puede ser utilizado para detectar las clulas no diferenciadas migrados que expresan antgenos de clulas madre y para discriminar entre clulas primitivas derivados del destinatario y los derivados de la donante .MTODOS:Se examinaron muestras de las aurculas del destinatario y las aurculas y los ventrculos del injerto por fluorescencia de hibridacin in situ para determinar si los cromosomas Y estuvieron presentes en ocho corazones de donantes femeninos implantados en pacientes de sexo masculino . Tambin se investigaron las clulas primitivas que llevan cromosomas Y que expresan c-kit , MDR1 , y Sca - 1 .RESULTADOS:Los miocitos , arteriolas coronarias y vasos capilares que tenan un cromosoma Y hacen un 7 a 10 por ciento de aquellos en los corazones de donantes y fueron altamente proliferativo . En comparacin con los ventrculos de los corazones de control , los ventrculos de los corazones transplantados haban aumentado notablemente el nmero de clulas que fueron positivas para c- kit , MDR1 , o Sca - 1 . El nmero de clulas primitivas fue mayor en las aurculas de los anfitriones y las aurculas de los corazones de donantes que en los ventrculos de los corazones de donantes , y de 12 a 16 por ciento de estas clulas contena un cromosoma Y . Las clulas no diferenciadas fueron negativas para los marcadores de origen de la mdula sea . Se identificaron las clulas progenitoras que expresan MEF2 , GATA - 4 , y nestina (que identifican las clulas como miocitos ) y Flk1 (que identifica las clulas como las clulas endoteliales) .CONCLUSIONES:Nuestros resultados muestran un alto nivel de quimerismo cardiaco causado por la migracin de clulas primitivas del destinatario para el corazn injertado . Se identificaron las clulas madre putativos y las clulas progenitoras en el miocardio de control y en el aumento de los nmeros en los corazones trasplantados .

Corazones de pacientes varones que reciben corazones femeninos fueron estudiados por microscopa confocal al menos un ao despus del trasplante. Se us tincin de lectinaUlexeuropaeus (rojo) para identificar endotelio, e Y cromosoma hibridacin in situ fluorescente (verde) se utiliz para identificar clulas derivadas de fuentes extracardiacas. Los cardiomiocitos fueron visibles debido a la autofluorescencia de las miofibrillas. Tres clulas endoteliales dentro de un nico vnula son Y + (flechas). Un nico cardiomiocitos Y + se muestra (punta de flecha). Como se describe en el texto, el quimerismo endotelial era comn, mientras que el quimerismo de los cardiomiocitos era rara. Fotografa de E. Minami.

9. Describa y grafique brevemente el estudio: Allogeneic mesenchymal stem cells restore cardiac function in chronic ischemic cardiomyopathy via trilineage differentiating capacity PNAS 2009 106 (33) 14022-14027; doi:10.1073/pnas.0903201106, vol. 106 no. 33, p. 1402227.

El mecanismo (s) efectos reparadores cardacos subyacentes de clulas derivadas de la mdula sea-madre mesenquimales (MSC) siguen siendo muy controvertida.Aqu hemos probado la hiptesis de que las MSC regenerar el miocardio crnicamente infartado a travs de mecanismos que comprenden injerto a largo plazo y la diferenciacin trilinaje.Doce semanas despus de infarto de miocardio, cerdos hembra recibi inyecciones transendocrdica basados en catter de placebo (n = 4) o las MSC alognicas macho (200 millones de dlares, n = 6).Animales sometieron a imgenes por resonancia magntica cardiaca en serie, y en el destino de clulas in vivo se determin mediante la co-localizacin de (Y (POS)) clulas con marcadores de msculo cardiaco, vascular y linajes endoteliales Y-cromosoma.MSC implantadas en zonas de infarto y de frontera y diferenciarse en cardiomiocitos comprobado por co-localizacin con GATA-4, Nkx2.5, y actina alfa sarcomrica.Adems, Y (POS) MSC exhibieron msculo liso vascular y la diferenciacin de clulas endoteliales, lo que contribuye a la formacin de grandes y pequeos vasos.El tamao del infarto se redujo de 19,3 + / - 1,7% a 13,9 + / - 2,0% (P