SALMONELLA SPP. EN HECES, HISOPOS CLOACALES Y HUEVOS DE

GALLINAS PONEDORAS: GALLINAS PONEDORAS: ESTUDIO PRELIMINAR

AUTORES:

Cristina García BoverPablo Catalá GregoriJosé Miguel Soriano del CastilloAna Lorena Tudón GómezVictoria Benítez MiñanaLorena Andreu SerraIsaac Granero Villarroya

1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA

2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES

1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA

2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES

RIESGO PARA LA SALUD PÚBLICA: CAUSANTE DE TOXIINFECCIÓN ALIMENTARIA

Antecedentes y relevancia

Salmonella:2ª en nº de casos

Agentes causantes de toxiinfecciónalimentaria UE 2007 (EFSA, 2009)

Serotipos más frecuentes aisladosen humanos UE 2007 (EFSA, 2009)

2ª en nº de casos1ª en nº de brotes

Antecedentes y relevancia

Alimentos implicados en los brotes humanos de Salmonella, 2007 (EFSA, 2009)

Desconocido; 11,7 % Otros; 21,9%

El alimento másfrecuentemente

implicado en los brotes son los

HUEVOS Y OVOPRODUCTOS

N = 590

Productos de panadería; 13,7%

Huevos y derivados; 42%

Comidas preparadas; 5,9%

Carne de cerdo y derivados; 4,7%

OVOPRODUCTOS

Resumen datos salmonelosis en humana UE 2007 (EFSA, 2009):

• Salmonella ocupa el segundo puesto en nºde casos y el primero en número de brotes.

• 31,1 casos por 100.000 hab. de media en la UE.

Antecedentes y relevancia

• Disminución desde 2005.• Mayoría de los casos en niños de 0 a 4 años.• Pico estacional a finales de verano y otoño.• S. Enteritidis es el serotipo más frecuente aislado.• España es el país con mayor prevalencia en

gallinas ponedoras de la UE (27.1%).

Etiología

Enterobacteriaceae

Salmonella

Enterica Bongori

FAMILIA

GÉNERO

ESPECIEEnterica Bongori

Enterica Salamae DiarizonaeArizonae Houtenae Indica

+2500 serotipos

SUBESPECIE

SEROTIPO

Rodríguez Ferri, E. 2003

Enteritidis

Typhimurium

Programa Nacional:

Agentes zoonóticos a controlar en

gallinas ponedoras

Etiología

• Diversidad antigénica:O : H1 : H2

• Género + especie + subespecie + serotipo

Antígenos

somáticos

Antígenosflagelares

fase 2

Antígenosflagelares

fase 1

• Género + especie + subespecie + serotipo-Ej: Salmonella enterica enterica EnteritidisA nivel práctico: S. Enteritidis

Patogenia

Infecciones por Salmonella en aves

Sintomáticas Asintomáticas

Salmonella Gallinarum Salmonella Enteritidis

Sal

ud A

nim

al

Sal

ud P

úblic

a

Salmonella GallinarumSalmonella PullorumSalmonella arizonae

Salmonella EnteritidisSalmonella Typhimurium

Sal

ud A

nim

al

Sal

ud P

úblic

a

Específicas (aves)Inespecíficas

(aves, hombre)

Hoy en día son pocofrecuentes en la

avicultura industrial

AVES pueden ser

portadores asintomáticos

Salmonella en huevos

Contaminación verticalContaminación horizontal

Ambiente

Aparato reproductor

Interior del huevo

Cáscara

Interior del huevo

1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA

2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES

1.Relación entre resultados positivos a Salmonella en una explotación de gallinas ponedoras :

Objetivos

2. Caracterizar cepas aisladas:• Serotipado• Macrorestricción genómica utilizando la técnica de electroforesis en

campo pulsante (PFGE: Pulsed Field Gel Electroforesis).

1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA

2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES

Explotación avícola en estudio

• Explotación de 4 naves con una capacidad total de 150.000 gallinas ponedoras.

• Alojadas en jaulas de 12 animales en baterías de 6 alturas.

• Anexo II del RD 3/2002: Legislación vigente en • Anexo II del RD 3/2002: Legislación vigente en materia de bienestar animal.

• Mantenidos a 22ºC con una iluminación de 16h diarias.

• Vacunación: dos dosis de vacuna viva (S. Enteritidis; 2 y 8 semanas).

• Declarados positivos a S. Enteritidis las 24 semanas de edad en control oficial y autocontroles.

Toma de muestra

Seis huevos de 1 día desde

la fecha de puestapor jaula

Interior Exterior

Tres muestrasindividuales

de hisopos cloacales por jaula.

Una muestra colectiva de heces

de más de 150 gramos por jaula.

50 jaulas

TOTAL = 100 muestrasInterior Exterior

TOTAL = 150 muestrasTOTAL = 50 muestras

Aislamiento e identificación de Salmonella spp.MUESTRAS DE HECES, HISOPOS CLOACALES Y

HUEVOS EXTERIOR

HUEVOS INTERIOR

(ALIMENTOS)

ISO 6579:2002 Amd.1:2007

ISO 6579:2002. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella spp.

ISO 6579:2002/Amd. 1:2007. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Amendment 1: Annex D: Detection of Salmonella spp. in animal faeces and in environmental samples from the primary production stage.

ISO 6579:2002

Aislamiento e identificación de Salmonella spp.Cuatro etapas sucesivas:1. Preenriquecimiento en medio líquido no

selectivo.2. Enriquecimiento en medio selectivo:

3. Siembra e identificación.4. Confirmación de identidad.

Heces, hisopos cloacales y huevos exterior : MEDIO SEMISÓLIDO

Rappaport-Vassiliadis semisólido modificado MSRV

Huevos interior: MEDIO LÍQUIDO Caldo Muller-Kauffmann MKTTn

Caldo Rappaport-Vassiliadis con soja RVS

1. ANTECEDENTES Y RELEVANCIA

2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODOS3. MATERIAL Y MÉTODOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES

Salmonella spp. hisopos, heces y huevos

ESTADÍSTICA (Statgraphics)

• Existen diferenciassignificativas depositividad a Salmonella

spp. entre las matrices(p<0.05).

• Positividad:Heces>Hisopos y huevos ext.>>Huevos int.

Serotipado

Serotipado: conocer la fórmula antigénica, poner nombre propio (sólo subespecie enterica)

Serotipado dos hisopos cloaclales, tres heces y tres cloaclales, tres heces y tres huevos exterior :Salmonella entericasubespecie enterica serotipo Enteritidis

9, 12: g, m: -Antígenos Antígenos somáticos flagelares fase 1

Macrorrestricción

• Los patrones de bandas obtenidos con el enzima XbaI son iguales en todas las cepas estudiadas de

Comparación de fragmentos grandes (40 pb) de ADN genómico tras la digestión con una enzima de restricción

las cepas estudiadas de las diferentes matrices.

• Las cepas aisladas en todas las matrices comparten probablemente un origen común.

Perfiles de macrorestricción genómica de dos hisopos cloacales, tres heces y tres huevosinterior positivos a S. Enteritidis.

1. INTRODUCCIÓN2. OBJETIVOS3. MATERIAL Y MÉTODO4. RESULTADOS4. RESULTADOS5. CONCLUSIONES

Conclusiones

La detección cualitativade Salmonella spp. a altos niveles (92 %) en las heces de gallina ponedora, no implicó su presencia

Necesidad de evaluar cuantitativamente la presencia de Salmonella spp. en heces (autocontroles y controles oficiales) para establecer correlación real con la

Herramienta útil para conocer la epidemiología de Salmonella en el sector avícola

en el interior del huevo presencia del patógenos en el interior del huevo

Caracterización mediantemacrorrestricción genómicaPFGE de cepas aisladas

MUCHAS GRACIAS