Revelacion de Enzimas

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS

Y

BIOQUÍMICA

ASIGNATURA: BIOQUIMICA II

PRÁCTICA N º 3: REVELACIÓN DE ENZIMAS

ALUMNA:

- ROJAS RÉVOLO ROSARIO DIANA

CICLO: VII TURNO MAÑANA

DOCENTE: Q.F. JAVIER JACK CALDERÓN GÓMEZ

LIMA – PERÚ

2012

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica

PRÁCTICA Nº 2CINETICA ENZIMATICA

OBJETIVO:

Revelar las distintas clases de Enzimas (Antioxidantes) de los alimentos, que consumimos en nuestra dieta.

Revelar la Enzima de La Leche (Aldehídoxidasa)

Revelar la enzima Peroxidasa (actúa sobre peróxidos), los peróxidos a la larga producen radicales libres (cáncer)

REVELACIÓN DE ALDEHIDOXIDASA (EC 1.2.3.1):

- La Aldehidooxidasa es una Enzima Oxido Reductasa que trabaja con un FAD en primera instancia en su estado oxidado.

- Por Sistema de Aldehido Oxidasa en el organismo desdobla al aldehído convirtiéndolo en Peróxido (el cual produce radicales Libres), para que éste sea metabolizado dentro del organismo, ya que el aldehído es muy tóxico dentro del cuerpo.

- La aldehídoxidasa metaboliza aldehídos, estos aldehídos se forman de alimentos que producen fermentos.

- ALIMENTO ------ FERMENTO ------ ALDEHÍDO ------ (El Aldehído es más tóxico que un Peróxido) por eso cuando una persona bebe alcohol, su cuerpo produce Aldehídos, para desintoxicarse, debe tomar Leche ya que tiene la enzima (Aldehidooxidasa) que acelera el metabolismo del aldehído.

FINALIDAD DE LA VASELINAProducir una Capa en el Sistema que impida el ingreso de O2 en la reacción.La vaselina queda sobrenadando en la solución acuosa ya que el agua es más densa que la vaselina.

Si el O2 ingresa de por medio no se observa la reacción.



RESULTADOS:

REACCIÓN QUÍMICA:

VIVO

VITR

O

Reacción producida en Ausencia de O2

- El azul de Metileno ayuda al FADH2 a reoxidarse aceptando sus Hidrógenos, “Azul de Metileno” queda reducido.

- A.M. Oxidado: Color Azul- A.M. Reducido: Color Blanco- Es decir se formó A.M. en su forma “Leico” de color Blanco.


TUBO 1 TUBO 2

5 mL Leche+

1 ml H20 Dest.+

1mL Azul Metileno

+1 mL Vaselina

5 mL Leche (Enzima Aldehídoxidasa + H2O)

+1 ml Aldehído

(Rvo.Benzaldehído+H2O)+

1mL Azul Metileno(Desplaza al O2)

+1 mL Vaselina

BM 38 ºC hasta ver Reacción

1 2

Reacción (+)Decoloración de Azul a Blanco

REVELACIÓN DE LA PEROXIDASA (EC1.1.1.1.7)

RESULTADOS:TEST DE BENZIDINA: (Zumos) Reacción (+) para BENZIDINA: Verde Azulado

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 51 mL papa

+V gts. Benzidina

+II gtas H2O2

1 mL Betarraga+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Naranja+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Rabanito+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Nabo+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2


+++ + (-) ++ + +++

TUBO 6 TUBO 7 TUBO 8 TUBO 9 TUBO 10

1 mL Manzana+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Yacón+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Tomate+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Camote Amarillo

+V gts. Benzidina

+II gtas H2O2

1 mL Pepino+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2


++ +++ +++ +++ ++

TUBO 11 TUBO 12 TUBO 13

1 mL Camote Morado

+V gts. Benzidina

+II gtas H2O2

1 mL Fresa+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2

1 mL Kiwi+

V gts. Benzidina+

II gtas H2O2



1 2 3 4 5

6 7 8 9 1

1 1 1

+ (-) (-)


REACCIÓN QUÍMICA:

BENZIDINA:

La Benzidina trabaja con los zumos de la muestra- La Benzidina en la reacción se va a oxidar, es decir la enzima le va a arrancar H+ a la

benzidina, producto de ésta Oxidación se va a formar el Difenoquinoidiimina responsable del producto color verde azulado.

- En tanto que, los H+ que pierde la Benzidina son aceptados por el Peróxido (H 2O2), convirtiéndose en moléculas de H2O.

- Las Peroxidasas desdoblan peróxidos, convirtiéndolos constantemente en H20.

- El H20 que es menos tóxica para el organismo se metaboliza, he ahí el fundamento de consumo de Peroxidasas en nuestra dieta; porque los Peroxidos (H2O2) que a la larga forman radicales libres los cuales son dañinos para el organismo son contrarrestados y convertidos constantemente en H20.

PIROGALOL:El Pirogalol trabaja con los trozos de la muestra.

- En éste Sistema, ocurren simultáneamente las siguientes reacciones:1. Oxidación2. Reagrupación y3. Descarboxilación.

- Debido a éstas reacciones el Pirogalol producto de su oxidación se convierte en Purpurogalina ó Trioxibenzol –a-B-Tropalona responsable de la coloración parduzco amarillento en el pp sobre los trozos de la muestra.

- Además de la oxidación, se libera una molécula de CO2 (Descarboxilación) y como el Pirogalol pierde sus H+ producto de la oxidación, el Peróxido (H2O2) los acepta y se desdobla para formar H20.


Reacción (+)Rojo Grosella


REVELACIÓN DE UREASA:

- La Ureasa enzima presente en la Harina soya, pH de la Urea es ácido, por que proviene del ácido Úrico.

- La Ureasa rompe al sustrato producto de la hidrólisis, por ésta hidrólisis se va a formar un producto en forma de gas con pH alcalino (Amoniaco), el cual interacciona con la fenolftaleína produciendo un color rojo grosella.

Reacción (+) para UREASA: Rojo Grosella

REACCIÓN QUÍMICA:

UREASA:

En la reacción, la Urea producto de su Hidrólisis (por Ureasa y H20), desdobla a la Urea formando Amoniaco y CO2 ; el gas amoniaco interacciona con la fenolftaleína dando la coloración rojo grosella característico para los álcalis.


TUBO 12 mL Urea

+II gts Fenolftaleína

+0,25 gr. Harina

SoyaBM 38 ºC hasta ver

Reacción


TEST PIROGALOL: Reacción (+) para PIROGALOL: pp. Parduzco Amarillento

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5

Trozos de papa+

2 mL Pirogalol+

II gtas H2O2

Trozos de Rábano

+2 mL Pirogalol

+II gtas H2O2

Trozos de Betarraga

+2 mL Pirogalol

+II gtas H2O2

Trozos de Nabo +

2 mL Pirogalol+

II gtas H2O2

Trozos de Yacón+

2 mL Pirogalol+

II gtas H2O2


+++ +++ + +++ +++

TUBO 6 TUBO 7 TUBO 8 TUBO 9 TUBO 10Trozos de

Camote Amarillo+

2 mL Pirogalol+

II gtas H2O2

Trozos de Kiwi+

2 mL Pirogalol+

II gtas H2O2

Trozos de Pepino

+2 mL Pirogalol

+II gtas H2O2

Trozos de Camote Morado

+2 mL Pirogalol

+II gtas H2O2

Trozos de Tomate

+2 mL Pirogalol

+II gtas H2O2


+++ (-) +++ +++ ++

TUBO 11 TUBO 12

Trozos de Fresa+

2 mL Pirogalol+

II gtas H2O2

Trozos de Manzana

+2 mL Pirogalol

+II gtas H2O2


(-) +


1 2 3 4

5 6 7 8 9 1

1 1


OBSERVACIONES:- Las reacciones saldrán (+) si las enzimas se encontraran intactas, es decir que los

alimentos no se encuentren procesados ó crudos, ya que si estuvieran cocidos las enzimas se encontrarían desnaturalizadas.

- En la Revelación de Aldehidoxidasa el Azul de Metileno reemplaza a la actividad de O2.

- No todas las leches tienen ALDEHíDOXIDASA.

-

CONCLUSIONES:

- Por Sistema de Aldehido Oxidasa en el organismo desdobla al aldehído convirtiéndolo en Peróxido (el cual produce radicales Libres), para que éste sea metabolizado dentro del organismo, ya que el aldehído es muy tóxico dentro del cuerpo.

- Demostramos en el Laboratorio la actividad peroxidasa que presentan los alimentos de nuestra dieta.

- Las Peroxidasas desdoblan al Peróxido si entra en agua.

- Tenemos 02 Sistemas para diferencias Peroxidasa:

1. Benzidina2. Pirogalol

- Con el Pirogalol se puede diferenciar mejor que con benzidina por la proporción de precipitado que hay en cada sistema.

- En objetivo en ambos sistemas (Pirogalol y Benzidina) es que las Peroxidasas desdoblen peróxidos, convirtiéndolos constantemente en H20, ya que el Agua es menos tóxico que el peróxido en el Organismo.


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