Recombinación homóloga Recombinación sitio-específico Recombinación.
RECOMBINACIÓN GENÉTICA...
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Recombinación
El éxito de la transferencia horizontal de gene se basa en la habilidad de una bacteria de
integrar el DNA del donador a su genoma.
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Conjugación
Transformación
Transducción
Diploide parcial
Célula receptora
Integración
Replicación de DNA
donador. (plásmido)
No replicación del
DNA donador
Restricción del
DNA donador
Célula recombinante
Reproducción
Po
bla
ció
n d
e
reco
mb
ina
nte
s
est
ab
les
Reproducción
La célula receptora
se reproduce, el DNA
donador no
Re
com
bin
an
tes
n
o e
sta
ble
s
Destino del DNA donador durante la Transferencia Horizontal de Genes
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RECOMBINACIÓN GENÉTICA HOMÓLOGA
1. Muesca, escisión DNA
Generada por endonucleasa
2. Helicasa: DNA debe separarse de la otra
hebra
3. SSB: Enlace a proteína unión a hebra
sencilla
INVASIÓN HEBRA
4. Enlace a RecA
Facilita alineamiento con secuencia
Complementaria de DNA adyacente
(con el que se va a recombinar)
5. Intercambio de DNA homólogo
6. REGIONES HETERODÚPLEX
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Vía recBCD de
recombinación
homóloga
Parte I: Ruptura e
intercambio
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Micrografía
electrónica de una
forma chi (qui)
QUIASMA
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Via recBCD de
Recombinación
homóloga
Parte II: Migración
de hebra y
resolución
Fig. 22.5 f-h
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RECOMBINACIÓN GENÉTICA HETERÓLOGA
En procariotes ocurre por fragmentos de DNA homólogo
Célula dona un cromosoma (cromosoma donador ) a célula receptora
3 TIPOS
Transformación
Tranducción
Conjugación
DESPUÉS DEBE EXISTIR RECOMBINACIÓN HOMÓLOGA (INCORPORACIÓN)
Capacidad de desarrollo en medio particular
FENOTIPO DIFERENTE Resistencia a antimicrobianos
Requerimientos nutricionales específicos
Alto número de no recombinantes
Bajo número de recombinantes
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Transferencia horizontal
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RECOMBINACIÓN GENÉTICA
TRANSFORMACIÓN
DNA liberado por un μorg.
es tomado por otro
TRANSDUCCIÓN:
Transferencia de DNA donado
es mediado por virus
CONJUGACIÓN:
Transferencia por plásmidos
conjugativos
Implica contacto celula-celula
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transformación
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Transformación: Estrategias de captura de DNA
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TRANSFORMACIÓN
DNA libre se incorpora a célula receptora cambio genético
Natural entre algunas bacterias y Archaea
DNA largo naturalmente
Lisa en cond. Suaves
Fragmentos de 10 Kbp (1,000 nucleótidos, 10 genes)
Capta recombinación homóloga fácil Necesita células competentes
Células naturalmente competentes:
Acinetobacter, Azotobacter, Bacillus, Streptococcus, Haemophilus, Neisseria, Thermus
IMPORTANTE LA FASE EN LA QUE SE ENCUENTRA LA BACTERIA
No fácilmente competentes
E. coli y otras Gram -
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TRANSFORMACIÓN
1. DNA enlazado a superficie célula
receptora con Prot. Enlazadora
2. DNA entra como doble hebra Ó
Nucleasa degrada 1 hebra
3. Hebra sencilla DNA enlace a Prot.
competencia específica
(evita ataque nucleasas)
4. RecA
5. Recombinación homóloga
ANIMACIÓN
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TRANSDUCCIÓN
Emplea fagos bacterianos
DNA se transfiere de célula a célula
por fagos
2 TIPOS
TRANSDUCCIÓN GENERALIZADA
1. DNA huésped se integra a DNA viral
por completo
Cualquier gen del donador se
transfiere a receptor
2. Inicio ciclo lítico
DNA huésped VÍRIÓN TRANSDUCTIVO
3. INFECTA ↑virión normal
↓virión recombinante
4. RECOMBINACIÓN ANIMACIÓN
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TRANSDUCCIÓN ESPECIALIZADA
Baja frecuencia
Alta eficiencia transferencia
FAGO λ
Integra genoma fago a huésped
en sitio específico
Cerca de sitio hay enzimas que
usan galactosa (húesped)
DNA fago bajo control cromosoma
de la bacteria
INDUCCIÓN
DNA fago integración reversa
LIBERA
ANIMACIÓN
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Conjugación
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CONJUGACIÓN
Transferencia genética
Implica contacto celula-celula
Uso de plásmido conjugativo
Transfiere genes dentro del
plásmido Ó
genes de cromosoma
Célula donadora:
Contiene plásmido conjugativo
(plásmido F)
Célula receptora:
No posee plásmido conjugativo
Genes tra: Controlan proceso
conjugación
Pilis sexual F
Pilus F solo en células donadoras
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30+ genes
necesarios
para transferencia
replicación
elementos
IS
Transposon primitivo
Organización Genética de F
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Conjugación
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CONJUGACIÓN
Pili: Hace contacto con receptor
Contracción pilus
Estabilización contacto
Transferencia de DNA
ANIMACIÓN
ANIMACIÓN 2
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CONJUGACIÓN
Proteína FtsK Familia de DNA traslocasas
implicadas en la adquisicón
de genes externos durante
la conjugación.
Adquisición de genes
externos en formación de
esporas
Adquisición de genes
externos en división celular.
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PLÁSMIDO Hfr
Presente en E. coli
Plásmido F con Alta frecuencia recombinación
Episoma: Capaz de integrarse a cromosoma
Transposon
Se integran genes cromosoma a
plásmido
Sitios IS
PLASMIDO Hfr
Conjugación: Inicia transferencia en sitio oriT
Se pasa también parte cromosoma
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PLÁSMIDOS
Plásmido R: Resistencia a antibióticos
Codifican proteínas que degradan antibiótico
Codifican proteínas que evitan entrada
También pueden ser transposones
Plásmidos codifican toxinas:
Capacidad para adhesión / colonizar tejidos huésped
Generación toxinas
Plásmidos codifican bacteriocinas:
Proteínas que evitan desarrollo microorganismos
Menor espectro actividad que antibióticos
Actúan irrumpiendo membrana
Colisina: E. coli; Subtilisina: Bacillus subtilis
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PLÁSMIDOS SINTÉTICOS / ARTIFICIALES
Contienen genes que controlan su propia replicación
A veces conjugativos Pueden tener tra
Estables en el hospedero
Genes reporteros
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consecuencias
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DETECCIÓN RECOMBINANTES
Uso de medios con antibiótico
Medios que generan colonias
Coloridas
Receptor: Resistente a antibiótico
Auxótrofo para compuesto
(factor crecimiento)
Donador: Sensible a antibiótico
Protótrofo para compuesto
(factor crecimiento)
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Agar X-gal 5-(bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopiranosido)
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Aportaciones importantes en transferencia horizontal
Plásmido artificial: De los primeros fue el pBR322
Primer plásmido sintético desarrollado en su PhD.
Segundo en desarrollar insulina recombinante (por días ganado por laboratorio Ely-Lilly)
Desarrollado por Dr. Francisco Gonzalo Bolívar Zapata
QUÍMICO EGRESADO DE LA FACULTAD DE QUÍMICA
Investigador emérito UNAM, UAM
Investigador emérito del Sistema Nacional de Investigadores
Premio Príncipe de Asturias
Miembro del Colegio Nacional
Asesor de Ciencia y Tecnología de la Presidencia en su periodo actual
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Paco Bolívar
Es tan importante en la ciencia mexicana que aparece en libros de texto de educación básica editados por la SEP