RECEPTORES DE ESTRÓGENOS y PROGESTERONAEN CARCINOMAS DE MAMA CANINOS.TÉCNICAS DE ESTUDIO Y VALOR PRONÓSTICO.

J. Martín de las Mulas,y. Millán, O. Rincón,

J. Ordás, F Javier Andrés.*

RESUMEN.

En este trabajo presentarnos los resultados de laestandarización de las técnicas de detección dereceptores de estrógenos y progesterona en tumores demama caninos, con el fin de analizar lahormonodependencia de dichos tumores. Además,hemos estudiado si la hormonodependencia de untumor guarda relación con la evolución post-quirúrgicade la enfermedad contabilizando el periodo libre deenfermedad. Las técnicas de detección utilizadas fueronde tipo inmunohistoquímico y el número de tumoresmalignos analizados de 21. Nuestros resultadosmuestran que se puede analizar la naturalezahormonodependiente de una neoplasia mamaria en lasmismas muestras en las que se realiza el diagnósticohistopatológico, que la mitad, aproximadamente, de lostumores malignos de la mama canina sonhormonodependientes, y que estos tumores tienenperiodos libres de enfermedad más largos que loshormono-independientes, y por tanto, mejorpronóstico.

Palabras clave: Mama; Carcinoma; Perra;Receptores; Estrógenos; Progesterona;Hormonodependencia; Inmunohistoquímica;Pronóstico.

INTRODUCCIÓN.Los turnares de mama son los segundos en elorden de frecuencias en la especie canina, afectan ahembras de edades medias y su comportamientobiológico es maligno en la mitad, aproximadamen-te, de los casos. El pronóstico de los tumores malig-nos es desfavorable, con una supervivencia mediapostquirúrgica de 8 a 12 meses, y, sin embargo, el

*Clínica Veterinaria THOR (Córdoba)Opto. de Anatomía y Anatomía

Patológica ComparadasFacultad de Veterinaria.Universidad de Córdoba.

ABSTRACT.

Results concerning the standardization of estrogen andprogesterone receptors detection techniques, as ameans to study the hormonodependence of caninemammary tumours, are presented. In addition, theprognostic value of hormondependence has beenevaluated by its association with the diasease freeperiodo Receptors detection techniques employed wereof the immunohistochemical type, and the number ofmalignant tumours analyzed was 21. Our results showthat the hormonodependence of canine marnmarytumours can be analyzed in the very same tissuesamples used for the histopathological diagnosis of theneoplasm. They also show that half of the tumoursstudied, approximately, are hormonedependent andthat these tumours have longer disease free periodsthan hormone-independent carcinomas and,accordingly, better prognosis.

Key words: Mammary gland; Carcinoma; Dog;Estrogen; Progesterone; Receptors;Hormonedependence; Immunohistochemicstry;Prognosis.

uso de tratamientos adyuvantes a la cirugía es muylimitado y no estandarizado (12).

El tratamiento endocrino post-quirúrgico, bien seaadministrando hormonas o antihormonas, o bienpor métodos ablativos, se utiliza de forma rutinariaen las mujeres con carcinomas de mama hormono-dependientes porque prolonga la supervivencia demodo significativo (incluso hasta 10 años) y alivia la

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sintomatología asociada a la enfermedad. Además,también es un hecho comprobado en la mujer quelos tumores que son hormonodependientes tienenmejor pronóstico (20).

Los carcinomas de mama hormonodependientesson aquéllos que contienen receptores de estrógenosy/o de progesterona (2,20). Algunos tumores de mamacaninos son tumores hormonodependientes (4, 13, 18,

21), pero los estudios realizadoshasta la fecha son muyescasos y limitadosal campo de la investigación,debi-do a que los métodos de análisis de receptores hor-monales (métodos bioquímicosde unión delllgando alreceptor) eran muy costosos, requerían muestras detejido especialmente preparadas para tal fin y, sobretodo, no eran de fácil acceso. Así, en España no serealizan estos análisis en ninguna Facultad deVeterinaria o Laboratorio de Análisis Clínicos. En laactualidad, los métodos bioquímicosestán siendo sus-tituidos por métodos inmunohistoquímicos que sebasan en la unión del receptor hormonal a un anti-cuerpo específico,y una de cuyasmayores ventajas esque se pueden aplicar sobre las mismas muestras detejido sobre las que se realizael diagnóstico anatomo-patológico de la neoplasia (14,19).En este trabajo presentamos los resultados de laestandarización de los métodos inmunohistoquí-micos de detección de receptores de estrógenos yprogesterona en tumores de mama caninos.Además, presentamos los resultados de un estu-dio piloto en el que hemos analizado si la presen-cia de receptores de estrógenos y/o progesteronaguarda relación con la evolución post-quirúrgicade la enfermedad.

MATERIAL Y MÉTODOS.Material.1.1. Procedencia y número de casos.

Para la realización de este trabajo hemos utilizado21 tumores malignos de mama que habían sidoremitidos al Laboratorio de Diagnóstico Histo-patológico de la Universidad de Córdoba entre losaños 1993 y 1998 por la Clínica Veterinaria Thory clasificados (9) como adenocarcinoma tubular sim-ple (n=3), adenocarcinoma tubular complejo (n=3),adenocarcinoma papilar quístico complejo (n=1),carcinoma sólido simple (n=6), carcinoma sólidocomplejo (n=2), tumor mixto maligno (n=l) ypatrón combinado (n=5). La raza y la edad de los21 animales, así como la localización de los tumo-res, aparecen reflejados en la Tabla I.

Métodos.

2.1. Procesado de las muestras.

Todas las muestras objeto de estudio fueron piezasde extirpación quirúrgica (tumorectomías, mastecto-mías simples o mastectomías en bloque) que habíansido fijadas en formol salino al 10% e incluidas enparafina.

2.2. Detección de receptores de estrógenos yreceptores de progesterona.

La técnica empleada fue la técnica inmunohistoquí-mica (lHQ)de la Aviclina-biotina-peroxidasa(ABC)deHsu y colaboradores (1981) modificada. El desarrollode la técnica tiene tres partes fundamentales:• Preparación de los cortes de tejido para el desa-rrollo de la reacción antígeno-anticuerpo (despa-rafinado, hidratación, inhibición de la peroxidasaendógena, desenmascaramiento antigénico ybloqueo de reacciones inespecíficas).• Desarrollo de la reacción antígeno-anticuerpomediante incubación de los cortes de tejido conlos anticuerpos anti-receptores de estrógenos yanti-receptores de progesterona durante 18horas a 4 grados centígrados.• Amplificación de la reacción antígeno-anticuerpopara su visualización en microscopía óptica.Los anticuerpos utilizados fueron comerciales ydesarrollados frente a antígenos humanos, por losque la estandarización de las técnicas IHQ incluía lademostración de que estos anticuerpos reconocíantambién antígenos caninos (controles positivos deespecie). Los controles positivos de especie (aqué-llos tejidos que contienen el antígeno que se deseadetectar con una técnica IHQ) utilizados fueronmuestras de útero canino procesadas de formaidéntica a los tumores, es decir, fijadas en formolsalino al 10% e incluidas en parafina, y el tejidomamario normal encontrado alrededor de los tumo-res. Además de los controles de especie, se utiliza-ron controles técnicos (aquéllos que prueban laespecificidad de la reacción antígeno-anticuerpo) ocontroles negativos: cortes de tejido de útero caninoen los que se sustituyó el anticuerpo específico porlíquido ascítico de ratón (para comprobar si éstereacciona de manera inespecifica con los tejidoscaninos objeto de estudio) y tampón fosfato (para:comprobar que la señal óptica obtenida no se debea reacciones indeseadas de los productos utilizadospara colorear la reacción antígeno-anticuerpo); ycortes de tejido de bazo y pulmón caninos (para

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comprobar que en estos tejidos que carecen de REy RP no había reacción).

2.3. Evaluación del valor pronóstico de las pre-sencia o ausencia de receptores hormonales.

La evaluación del valor pronóstico de la presenciade receptores de estrógenos y/o progesterona enlos tumores malignos de mama de perra se ha rea-lizado mediante estudios de correlación (prueba dela probabilidad exacta de Fisher) (23) entre la expre-sión de receptores hormonales y la evolución post-quirúrgica de los animales. La evolución postquirúr-gica se analizó mediante revisiones cada 3-4 meseshasta un máximo de 18 meses. En cada revisión seevaluaron la presencia o ausencia de recidivas(exploración clínica), la presencia o ausencia demetástasis (radiografía de tórax) y la muerte relacio-nada con la enfermedad neoplásica (evaluación clí-nica y necropsia). Los casos objeto de estudio sedividieron en tres grupos en función de su períodolibre de enfermedad (grupo 1=0-6 meses; grupo2=7-12 meses y grupo 3=13-18 meses) (Tabla I).Como control de la población objeto de estudio seevaluó la relación entre el grado histológicode malig-nidad de las neoplasias, que es un factor pronósticode valor probado (11), y la evolución postquirúrgica delos animales utilizandola misma prueba estadística.

RESULTADOSDetección de receptores deestrógenos y progesterona.1.1. Controles.

A. Controles positivos y negativos. en las mues-tras de útero (control positivo),el anticuerpo anti-receptores de estrágenos (anti-RE)reaccionó deforma intensa y uniforme con los núcleos de losleiomiocitosdel miometrio, con los núcleos de losfibroblastos del estroma endometrial y con lascélulas del epitelio glandular y del epitelio desuperficie del endometrio (Fig. 1). La reaccióncon el anticuerpo anti-receptores de progestero-na (anti-RP)fue similar,con la única excepción delas células epiteliales de la mucosa, que no reac-cionaron. El tejido mamario normal adyacente alos tumores también reaccionó con ambos anti-cuerpos en todos los casos en que se identificó(14 en los cortes con el anticuerpo anti-RE y 15en los casos con el anticuerpo anti-RP)(Fig.2).

En las muestras de útero en las que no se aplicaron

los anticuerpos específicos, y en las de bazo y pul-món (controles negativos) no se obtuvo inmunoreac-tividad con ninguno de los anticuerpos utilizados.

1.2 Tumores

A. Receptores de estrógenos: de los 21 casos estu-diados, 6 (28'5%) fueron positivos. Los produc-tos inmunoreactivos se observaron en los núcle-os de las células epiteliales y en la mayoría de loscasos, en las secreciones presentes en la luz delos túbulos neoplásicos (Fig. 3). La inmunoreac-ción se observó en la mayoría de las células neo-plásicas en el 10% de los casos, aproximada-mente, (Fig. 3) mientras que los restantespresentaban cantidades bajas (Fig. 4) o mediasde células positivas en porcentajes similares. Alanalizar la estirpe celular de los tumores, obser-vamos que ninguno de los 11 de tipo simplepresentaba RE, siendo todos los positivos ocomplejos (4) o mixtos (2).

B. Receptores de progesterona: de los 21casos estudiados, 9 (43%) fueron positivos. Losproductos inmunoreactivos se observaron en los'núcleos de las células epiteliales tumorales (Fig.5). La cantidad de células positivas en cadatumor fue baja en la mayoría de los casos (65%).Algunas células fusiformes y localizadas, por logeneral, cerca de los nidos de células epitelialestumorales (Fig. 5), fueron positivas en 5 de los21 casos (24%). Los tumores complejos y mix-tos presentaban RP (6 de 10) con mayor fre-cuencia que los simples (3 de 11).

C. Receptores de estrógenos y receptores deprogesterona: de los 21 tumores analizados,12 (57%) presentaban RE, RP o ambos. Deestos 12 casos, 3 eran simples y 9 complejos (7)

o mixtos (2). La relación entre estirpe celular yexpresión de receptores hormonales fue esta-dísticamente significativa (p = 0,01).

VALOR PRONÓSTICO DE LAHORMONODEPENDENC~EN LOS TUMORESMALIGNOS DE PERRA.

2.1.Control de la población objeto de estudio(relación entre el grado histológico de malig-nidad y la evolución postquirúrgica).

De los 21 tumores evaluados, 5 tuvieron un perio-do de evolución postquirúrgica corto, y 4 de estos

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Fig. 1. Útero canino (control positivo). En la imagen se observan numerososnúcleos de color marrón, tamto en el miometrio como en el estroma y el epitelioglandular del endometrio. El color marrón es el resultado del coloreadao de lareacción antigeno-anticuerpo, mientras que los núcleos azules son negativos.Anticuerpos anti-RE, técnica del ABC, 20X.

Fig. 3. Tumor mixto maligno grado 11(888/97). En la imagen se observa el com-ponente epitelial del tumor,de arquitectyura tubular, y con la mayoria de las célu-las neoplásicas positivas (núcleos marrones). Anticuerpo anti-RE, técnica del ABC40X.

Fig. 5. Adenocarcinoma tubular complejp grada I (Bll72/95). En la iamgen seobservaron tanto el elemento epitelial (tubular) como el miopepitelial (fascicular)de la neoplasia y en ambos hay algunos núcleos positivos (color marrón).Anticuerpo, técnica del ABC, 40X.

eran de grado III, mientras que 16 tuvieron períodosde evolución postquirúrgica medios y largos, y solo2 eran de grado III(p= 0.01) (Tabla TI).

Fig. 2. Lobulillomamario (control positivo). En la imagen se observa un lobulillomamamrio con algunas células epiteliales (núcleos redondeados) y mioepiteliales(núcleos alargados) positivos (núcleos de color marrón). Anticuerpos anti-RP, téc-nica del ABC, 20X.

Fig. 4. Adenocarcinoma túbulo-papilar complejo de grada I (B148/95). En laimagen se observa el componente epitelial de la neoplasia con algunas célulaspositivas (núcleos marrones). Anticuerpo anti-RE, técnica del ABC, 40X.

2.2. Valor pronóstico de la expresión de re-ceptores hormonales.

A. Relación entre la expresión de receptores deestrógenos y progesterona y el grado histológi-co de malignidad: Los 5 tumores de grado I pre-sentaban receptores hormonales (RE y/o RP),mientras que todos los tumores de grado IIIfue-ron RE(-)y RP(-) (Tabla III).

b) Relación entre la expresión de receptores deestrógenos y progesterona y el período libre deenfermedad: E157% de los tumores analizados pre-sentaban receptores hormonales (RE y/o RP) yelperiodo libre de enfermedad fue corto (6 meses) en1 caso, medio (12 meses) en 2 casos y largo (18meses) en 9 casos (p= 0'04) (Tabla IV).

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Corto

Tabla Il. Relación entre el grado histológico de malignidad y el periodo libre de enfermedad.

Medio Largo

Grada IGrado 2Grado 3

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Con receptores

Tabla III. Relación entre la expresión de receptores hormonales y el grado histológico de malignidad.

Sin receptores

Grada IGrado 2Grado 3

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Tabla IV. Relación la expresión de receptores hormonales y el periodo libre de enfermedad.

Con receptores Sin receptores

CortoMedioLargo

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DISCUSIÓN

Nuestros resultados demuestran, primero, que sepuede analizar la hormonodependencia de lostumores de mama caninos mediante la deteccióninmunohistoquímica de receptores de estrógenos yreceptores de progesterona en las mismas muestrasque sirven para hacer el diagnóstico histopatológicode la neoplasia, y segundo, que los tumores que sonhormonodependientes tienen periodos libres deenfermedad tras la cirugía más largos que los tumo-res que carecen de receptores. .Las técnicas inmunohistoquímicas son una impor-tante herramienta tan o en el diagnóstico anatomo-patológico como en los estudios de investigación,siendo la técnica del complejo avidina-biotina-pero-xidasa (ABC)una de las más utilizadas por su eleva-da sensibilidad, por la versatilidad del método (yaque se basa en la unión no inmunológica de la avi-dina a la biotina y, por tanto, puede aplicarse conindependencia de la especie), y por la gran cantidadde reactivos disponibles comercialmente, de mane-ra que la única variable a la hora de utlizarla es elanticuerpo específico frente al antígeno que sedesea buscar (10, 17). Cada día son más los anticuer-pos comerciales que se desarrollan frente a granvariedad de antígenos y la patología veterinaria seha visto beneficiada de este auge, al comprobarseque gran cantidad de anticuerpos desarrollados fren-te a antígenos humanos presentan reacciones cru-

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zadas con antígenos animales equivalentes (24). Ennuestro estudio, los dos anticuerpos utilizados reac-cionaron con los controles positivos de especie, taly como ya habían comprobado otros autores (3, 25)

que detectaron receptores hormonales en el mio-metrio y en los fíbroblastos del estroma endometrial,así como en las células epiteliales endometriales uti-lizando, como nosotros, anticuerpos desarrolladosfrente a antígenos humanos. Algunos antígenosprecisan métodos especiales de procesado de lasmuestras de tejido para poder ser detectados contécnicas IHQ (17), pero muchos de ellos se conservanbien en muestras procesadas rutinariamente, yentre ellos figuran los RE y los RP (3,6,8, 14, 16, 19, 25)

(Martín de las Mulas et al., 2000; Millán et al.,2000) tal y como hemos observado en este estudio.El 28,5% de los tumores malignos estudiados tení-an receptores de estrógenos. Algunos autores yahabían estudiado la presencia de RE en tumores demama caninos utilizando la técnica bioquímica delDCC (4,5,13,18,21). Sin embargo, se han publicadorecientemente tres estudios 3 estudios inmunohisto-químicos de detección de receptores de estrógenosen tumores de mama caninos, y las cifras obtenidascon estas técnicas son similares a las nuestras (6, 8,

16). Así, (8) encontraron que el 33.3% de los tumoresanalizados tenían RE, y (6) solo en el 10% de loscasos. La técnica del DCC se basa en la unión delligando (la hormona) al receptor, y se usa sobrehomogeneizados de tejido en los que no es posibledistinguir si el contenido en receptores corresponde

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a la masa tumoral o al tejido mamario normal cir-cundante o invadido, de manera que, en este tipo demuestras, si la mama normal contiene RE y eltumor no, la técnica bioquímica será un falso positi-vo (1). Una de las mayores ventajas de las técnicasinmunohistoquímicas con respecto a las bioquímicases que permiten identificar de manera precisa enqué estructuras tisulares hay receptores hormonalesy de este modo, detectar si están en tejido mamarioadyacente a las lesiones tumorales. Es posible quelas cifras tan altas publicadas por otros autores entumores caninos se deban al menos en parte, a laexistencia de falsos positivos. De hecho, nosotroshemos encontrado RE y RP en todas las muestrasde tejido glandular normal encontradas alrededor delos tumores.El 43% de los tumores malignos analizados pre-sentaban receptores de progesterona. En algunosestudios previos realizados con técnicas bioquímicaslas cifras fueron similares a las nuestras (18, 21, 22),

próximas al 50%, pero otros, como Martin et al(1984) encontraron que un 25% de los casos, apro-ximadamente, de los tumores malignos caninosexpresaban RP. Sin embargo, si estos autoreshubieran utilizado el mismo umbral de positividadque los anteriores (5 fmol/mg de proteína en vez de10 fmol/mg) su porcentaje de casos con RP seríadel 63%. Por último Donnay y colaboradoresencontraron que el 80%, al menos, de los tumoresmalignos de su serie expresaban RP, cifras quepodría incluir verdaderos y falsos positivos, tal ycomo hemos comentado anteriormente. El únicoestudio inmunohistoquímico realizado hasta la fechasobre 10 tumores malignos reveló que el 60% de loscasos tenían RP (6).

El 57% de los tumores analizadòs tenían recepto-res (RE y/o RP). Ahora bien, sólo el 15% de estostumores expresaban ambos receptores. Esta cifra esinferior a las publicadas en algunos estudios bioquí-micos, como el de Rutteman et al y el de Parodi etal, realizados con tumores caninos en los que obser-varon que el 40% de los casos expresaban ambosreceptores, pero más similar a la obtenida por

BIBLIOGRAFÍA.1. Baulieu E-E, Mester J. Steroid hormone receptors. En: De Graot L.J. (Ed):

Endocrinology VolI, ws. Saunders Company, Philadelphia, 1989: 16-39.2. Brooks SC y Singhakowinta A. Steroid hormones in breast cancer. En:

Braoks S.c., Singhakowinta A. (Ed): Special topies in endocrinology andmetabolism, 1982: 4: 29-67.

3. Dhaliwal GK, England GC, Noakes DE. Immunocytochemicallocalization ofoestrogen and progesterone receptors in !he uterus of !he normal bitchduring oestrus and metoestrus. J Reprod Fertil Supp/1997; 51: 167-176.

Martín et al (1984), que utilizando un umbral depositividad mayor que Rutteman et al (1988),encontraron que el 20% de los casos analizadoscontenían ambos receptores. Es posible que las téc-nicas inmunohistoquímicas solo sean sensibles, engeneral, para umbrales superiores a los 10 fmol/mgde proteína. El resto de los grupos, que incluye losRE (+) RP (-), los RE (-)RP (+) Y los RE (-) RP (-)representa en nuestra serie porcentajes similares alos publicados por Parodi et al (1984) en una seriede 144 tumores malignos caninos. Estos autoresson los únicos que han publicado, hasta la fecha, unestudio de este tipo pero con métodos bioquímicos.En cuanto al valor pronóstico de la expresión dereceptores hormonales observamos que los tumorescon receptores hormonales tienen periodos libresde enfermedad más largos, y por tanto tienen mejorpronóstico que los que carecen de receptores. Estehecho es ampliamente conocido en la mujer (2, 20) Ytambién ha sido comprobado en alguna serie detumores caninos pero utilizando métodos bioquími-cos (13, 22). La validez de nuestros resultados descan-sa, a su vez, en la comprobación, en la mismapoblación, de la relación directa que existe entre losgrados histológicos de malignidad más bajos y lospronósticos más favorables (11,15). De igual modo,hemos podido comprobar que los tumores simplesse asocian a periodos libres de enfermedad más cor-tos que los complejos y mixtos (7,15).En conclusión, nuestros resultados demuestran laaccesibilidad de los estudios de hormonodependen-cia en los tumores de mama caninos y su valorcomo indicador pronóstico favorable, y, sobre todo,proporcionan una herramienta básica para la reali-zación de ensayos clínicos de tratamiento endocrinopostquirúrgico.

AGRADECIMIENTOS

Trabajo financiado con el Proyecto PM98-0164de la DGESIC del MEe.

4. Donnay l., Rauis J., Verstegen J., Ectors F. Epidemiologie et hormono-dependance des tumeurs mammaires du chien. Ann Méd Vét 1989;133: 491-503.

5. Donnay I, Rauts J, Wouters-Ballman P, Receptors for oestrogen, progeste-rone and epidermal growih factors in normal and tumourous canine mam-mary tissues. J Rep Fert Supp11993; 47: 501-512.

6. Geraldes M, Gartner F, Schmitt F. Immunohistochemical study ofhormonal receptors and cell proliferation in normal canine mammary

&60

Receptores de estrógenos y progesterona en carcinomas de mama caninos. J. Martín delas Mulas. Cllnica Veterinaria de Pequeños Animales (Avepa) Vol. 20, n" 3, 2000.

glands and spontaneous mammary tumours. The Vet Record 2000;146:403-406.

7. Gilbertson SR, Kurzman ID, Zachrau RE, Hurvitz Al, Black MM. Caninemammary epithelial neoplasms: biologic implications of morphologic cha-racteristics assessed in 232 dogs. Vet Patho11983; 20: 127-142.

8. Graham JC, O'Keele DA, Gelberg HB. Immunohistochemical assay fordetecting estrogen receptors in cantne mammary tumors. Arn J Vet Res1999; 60: 627-630.

9. Hampe JF, Misdorp W. Tumours and dysplasias of the marnmary gland. En:World Health Organization (Ed): Intemational Histological Classificatíon ofTumours of Domestic Animals, Ginebra, 1974: 111-134.

10. Hsu SM, Raine L, Fanger H. The use of antíavidin antibody and avídín-bío-tin-peroxidase complex in irnrnunoperoxidase techniques. Arn J Clin Pathol1981; 75: 816-821.

11. Lagadic M, Estrada M. Tumeurs marnmaires de la chienne: critères du prog-nostic histologique et intérêt d'un gradtng. Rec Méd Vét 1990; 166: 1035-1042.

12. MacEwen EG, Withrow SJ. Tumors of the Mammary gland. En: WithrowS.J., MacEwen B.R. (Ed): Small Animal Clinical Oncology, W.B. SaundersCompany, Philadelphia, 1996: 356-372.

13. Martin PM, Cotard M, Mialot JP, Andre F. Raynaud J-P. Animal models forhormone-dependent human breast cancer. Relationship between steroidreceptor pro files in canine and feline mammary tumors and survival rate,Cancer Chemother Pharmacol1984; 12: 13-70.

14. Masood S, Supranee DEE, Jefrey D, Goldstein. ImmunocytochemicalAnalysis of Progesterone Receptors in Breast Cancer. Arn J Clinical Path1991; 96: 59-63.

15. Mísdorp W, Else RW, Hellmen E, Upscomb TP. Histological classífíceüon ofmarnmary tumors of the dog and the cat. Second series, volume VIT.ARP.Washington, D.C. 1.999.

16. Nieto A, Peña L, Pérez-Alenza MD, Sánchez MA, Rores JM, Castaño M.Immunohistologic detection of estrogen receptor alpha tn cantne marnmarytumors: clinical and pathologic associations and prognostic significance. VetPathol 2000; 37:239-247.

17. Palacin A. Técnicas inmunohistoquimicas. Aspectos teórico-practícos.ATOM SA (Ed), Barcelona, 1.984.

18. Parodi AL, Mialot J.P., Martin PM, Cotard M, Raynaud JP. Cantne and feli-ne mammary cancers as animal models for hormone-dependent human bre-ast tumors: Relationships between steroid receptor profiles and survival rates.Prog Cancer Res Ther 1984; 31: 357-365.

19. Pertschuk LP, Kim DS, Nayer K, Feldman JG, Eisenberg KB, Carter AC.Irnmunocytochemical estrogen and progestin receptor assays tn breast can-cer with monoclonal antibodies. Histpathologic, demographic, and bioche-mical correlations and relationship to endoctine response and survival.Cancer 1990; 66: 1663-1670.

20. Rosai J. Ackerman's Surgical Pathology. vol 2. 8th ed. Mosby, St Louis,1996: 1565-1660.

21. Rutteman GR, Misdorp W, Blankenstetn MA, Brown WE. Oestrogen (ER),and progestin receptors (PR) in marnmary tissue of the female dogodifferentreceptor profile in non-malignant and malignant states. Br J Cancer 1988;58: 594-599.

22. Sartin EA, Bames S, Kwapien RP, Wolle L.G. Estrogen and progesteronereceptor status of mammary carcinomas and correlation with c1inicaloutco-me in dogs. Arn J Vet Res 1992; 53: 2196-2200.

23. Siegel S. Non-parametric statistics for the behavioral sciences. BookCompany. McGraw-Hill. New York, 1956: 121-130.

24. Smith RA. Evaluation of cross-species reactivity of antíbodíes to human anti-gens in animal models using immunoperoxidase techniques. J Histotechnol1990, 13: 255-269.

25. Vermeirsch H, Simoens P, Lauwers H, Coryn M. lrnmunohistochemicaldetection of estrogen receptors tn the cantne utenus and their relation to sexsteroid hormonallevels. Theriogenology 1999; 51: 729-743.

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