Quimica Clinica
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Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTINA NO________ DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) INTRODUCCION La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas. La actividad serica de ALP ósea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos. También es fisiológico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima placentaria que en este periodo alcanza niveles máximos. Entre las patologías que afecta la actividad sérica de ALP se pueden citar: carcinomas metastáticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal. FUNDAMENTO La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, la velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividad enzimatica en la muestra. La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa. ALP + p-NFF PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8) Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT) y se utiliza para evaluar problemas hepáticos. Suele asociarse en la elevación de GGT excepto en problemas óseos donde solo se eleva la ALP. REACTIVO Buffer DEA : dietanolamina Sustrato pNFF MUESTRA Suero MATERIAL • Espectrofotómetro y cubetas • Baño maria • Agua destilada • Pipetas • Estandar de calibración • Reactivos de ALP
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Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTINA NO________
DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA(ALP)
INTRODUCCION
La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo Hidroliza los monoeacutesteres del aacutecido ortofosfoacuterico en medio alcalino En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas
La actividad serica de ALP oacutesea en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los nintildeos en edad de crecimiento llegando a triplicar los niveles del adulto debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos Tambieacuten es fisioloacutegico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo a expensad de la izoenzima placentaria que en este periodo alcanza niveles maacuteximos
Entre las patologiacuteas que afecta la actividad seacuterica de ALP se pueden citar carcinomas metastaacuteticos en higado y hueso colestasis biliar infarto al miocardio pulmonar o renal
FUNDAMENTO
La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato incoloro produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 98 la velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm es proporcional a la actividad enzimatica en la muestra
La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa
ALP + p-NFF PO4 + p-Nitrofenol (pH 98)
Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepaacuteticas (GOT GPT Bilirrubina GGT) y se utiliza para evaluar problemas hepaacuteticos Suele asociarse en la elevacioacuten de GGT excepto en problemas oacuteseos donde solo se eleva la ALP
REACTIVOBuffer DEA dietanolaminaSustrato pNFF
MUESTRASuero
MATERIALbull Espectrofotoacutemetro y cubetasbull Bantildeo mariabull Agua destiladabull Pipetasbull Estandar de calibracioacuten bull Reactivos de ALP
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PARAMETROSLongitud de onda 405nmTemperatura de reaccioacuten 25 30 o 37ordmCTiempo 3 minutosVol final de reaccioacuten 252mL
PROCEDIMIENTOColocar en cubeta a temperatura de Reaccion Sustrato reconstituido 25mLPreincubar unos minutos despueacutes agregarMuestra 20uL
bull Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm disparar cronoacutemetrobull Registrar absorbancias despueacutes de 12 y 3 minutos despueacutes de la primera lectura
bull Determinar la diferencia promedio de Absorbancia min (∆Amin) restando cada absorbancia y obteniendo el promedio
CALCULOSALP (UI) = ∆Amin x 6812
RESULTADOSALP= ______________ (UI)
VALORES DE REFERENCIAAdultos Nintildeos y adolescentes25ordmC = 40-190 UI hasta 40030ordmC = 45-213 UI hasta 45037ordmC = 65-300 UI hasta 645
CONCLUSIONES
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NO ____
DETERMINACION DE CREATININADEPURACION DE CREATININA
INTRODUCCION La determinacioacuten de niveles seacutericos de creatinina producto de la degradacioacuten de la creatina se utiliza como iacutendice de funcionalismo renal dado que su eliminacioacuten se efectuacutea a traveacutes del rintildeoacuten y casi exclusivamente por filtracioacuten
FUNDAMENTOLa creatinina reacciona con el picrato alcalino seguacuten la reaccioacuten de Jaffeacute para dar un cromoacutegeno rojizo La cantidad de cromoacutegeno que se forma bajo condiciones controladas es directamente proporcional a la concentracioacuten de creatinina en la muestra y se mide fotomeacutetricamente a 490-510nm La reaccioacuten de jaffeacute es una reaccioacuten no especiacutefica para creatinina pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reaccioacuten
MATERIAL REQUERIDObull Espectrofotoacutemetrobull Cubetas de lecturabull Material volumeacutetricobull Sistema de termostatizacion (20-30ordmC)bull Cronoacutemetro
PARAMETROSLongitud de onda 500nm (490-510)Temperatura 25ordmCAjuste a cero agua destilada
PROCEDIMIENTO
Pipetear en cubetas espectrofotomeacutetricas
Estandar Muestra
Reactivo de Trabajo 20mL 20mLEquilibrar a temperatura de trabajo y pipetear
Estandar 04mLMuestra 04mL
Mezclar inmediatamente y disparar el cronoacutemetroA los 30 seg exactos de incubacioacuten registrar las lecturas de Abs de S1 y M1A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2
CALCULOSSUEROCreatinina (mgL) = (M2-M1) x f f= 20mgL
S2-S1
ORINA DE 24 HORASCreatinina (g24h) = (M2 ndash M1) x f f= 0020gL x 50 x V
S2-S1
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Donde 50 es el valor de dilucioacuten y V= vol de diuresis en litros en 24h
DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA
DCE mlmin = creatinina en orina (g24h) x 694Creatinina en suero (mgL)
RESULTADOS
Creatinina en Suero ___________________mgLCreatinina en Orina ___________________g24hDCE ___________________mlmin
VALORES DE REFERENCIASuero 8-14mgLOrina 8-23 mgkg 24hDCE 80-140 mlmin
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTINA NO___
CLORO
FUNDAMENTOEl cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado
REACTIVO
Reactivo formado por tiocianato de mercurio nitrato de hierro y aacutecido nitrico Estandar Cloro
MUESTRASueroPlasma heparinizadoOrina
PARAMETROSLongitud de onda 480nmTemperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzAjustar a cero blanco de reactivo
PROCEDIMIENTOBlanco Estandar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLAgua destilada 10UlEstandar 10uLMuestra 10uLMezclar incubar 5 minutosLeer abosrbancias (densidad optica DO)Color final estable 1 hora
CALCULOMuestra DO x nEstandar DO
n= 100mEqL 100mmolL 335mgdL
RESULTADO
Cloro = ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIASuero o plasma orina 98-107 mEqL 110-250 mEq24h98-107 mmolL 3900-8870 mg24h348-380 mgdL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
TRIGLICERIDOS
PRINCIPIO DEL METODOLos trigliceacuteridos son grasas que suministran energiacutea a la ceacutelula al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre Una dieta alta en grasa eleva los trigliceacuteridos cirrosis hepatitis obstruccioacuten biliar pueden estar relacionadas con esta enfermedad
Los trigliceacuteridos son incubados con LPL liberan glicerol y aacutecidos grasos libres el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peroacutexido de Hidroacutegeno por GPO
Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracioacuten roja
MUESTRASuero o plasma
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ordmC o 15 a 20 ordmCAjustar el cero con agua destilada
Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatroacuten uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador de la muestra frente a blanco Color estable 30 min
CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg dLABS Patron
RESULTADOTrigliceacuteridos = ____________mgdL
VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mgdLMujeres 35 a 165 mg dL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PARAMETROSLongitud de onda 405nmTemperatura de reaccioacuten 25 30 o 37ordmCTiempo 3 minutosVol final de reaccioacuten 252mL
PROCEDIMIENTOColocar en cubeta a temperatura de Reaccion Sustrato reconstituido 25mLPreincubar unos minutos despueacutes agregarMuestra 20uL
bull Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm disparar cronoacutemetrobull Registrar absorbancias despueacutes de 12 y 3 minutos despueacutes de la primera lectura
bull Determinar la diferencia promedio de Absorbancia min (∆Amin) restando cada absorbancia y obteniendo el promedio
CALCULOSALP (UI) = ∆Amin x 6812
RESULTADOSALP= ______________ (UI)
VALORES DE REFERENCIAAdultos Nintildeos y adolescentes25ordmC = 40-190 UI hasta 40030ordmC = 45-213 UI hasta 45037ordmC = 65-300 UI hasta 645
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO ____
DETERMINACION DE CREATININADEPURACION DE CREATININA
INTRODUCCION La determinacioacuten de niveles seacutericos de creatinina producto de la degradacioacuten de la creatina se utiliza como iacutendice de funcionalismo renal dado que su eliminacioacuten se efectuacutea a traveacutes del rintildeoacuten y casi exclusivamente por filtracioacuten
FUNDAMENTOLa creatinina reacciona con el picrato alcalino seguacuten la reaccioacuten de Jaffeacute para dar un cromoacutegeno rojizo La cantidad de cromoacutegeno que se forma bajo condiciones controladas es directamente proporcional a la concentracioacuten de creatinina en la muestra y se mide fotomeacutetricamente a 490-510nm La reaccioacuten de jaffeacute es una reaccioacuten no especiacutefica para creatinina pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reaccioacuten
MATERIAL REQUERIDObull Espectrofotoacutemetrobull Cubetas de lecturabull Material volumeacutetricobull Sistema de termostatizacion (20-30ordmC)bull Cronoacutemetro
PARAMETROSLongitud de onda 500nm (490-510)Temperatura 25ordmCAjuste a cero agua destilada
PROCEDIMIENTO
Pipetear en cubetas espectrofotomeacutetricas
Estandar Muestra
Reactivo de Trabajo 20mL 20mLEquilibrar a temperatura de trabajo y pipetear
Estandar 04mLMuestra 04mL
Mezclar inmediatamente y disparar el cronoacutemetroA los 30 seg exactos de incubacioacuten registrar las lecturas de Abs de S1 y M1A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2
CALCULOSSUEROCreatinina (mgL) = (M2-M1) x f f= 20mgL
S2-S1
ORINA DE 24 HORASCreatinina (g24h) = (M2 ndash M1) x f f= 0020gL x 50 x V
S2-S1
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Donde 50 es el valor de dilucioacuten y V= vol de diuresis en litros en 24h
DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA
DCE mlmin = creatinina en orina (g24h) x 694Creatinina en suero (mgL)
RESULTADOS
Creatinina en Suero ___________________mgLCreatinina en Orina ___________________g24hDCE ___________________mlmin
VALORES DE REFERENCIASuero 8-14mgLOrina 8-23 mgkg 24hDCE 80-140 mlmin
CONCLUSION
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PRACTINA NO___
CLORO
FUNDAMENTOEl cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado
REACTIVO
Reactivo formado por tiocianato de mercurio nitrato de hierro y aacutecido nitrico Estandar Cloro
MUESTRASueroPlasma heparinizadoOrina
PARAMETROSLongitud de onda 480nmTemperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzAjustar a cero blanco de reactivo
PROCEDIMIENTOBlanco Estandar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLAgua destilada 10UlEstandar 10uLMuestra 10uLMezclar incubar 5 minutosLeer abosrbancias (densidad optica DO)Color final estable 1 hora
CALCULOMuestra DO x nEstandar DO
n= 100mEqL 100mmolL 335mgdL
RESULTADO
Cloro = ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIASuero o plasma orina 98-107 mEqL 110-250 mEq24h98-107 mmolL 3900-8870 mg24h348-380 mgdL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
TRIGLICERIDOS
PRINCIPIO DEL METODOLos trigliceacuteridos son grasas que suministran energiacutea a la ceacutelula al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre Una dieta alta en grasa eleva los trigliceacuteridos cirrosis hepatitis obstruccioacuten biliar pueden estar relacionadas con esta enfermedad
Los trigliceacuteridos son incubados con LPL liberan glicerol y aacutecidos grasos libres el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peroacutexido de Hidroacutegeno por GPO
Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracioacuten roja
MUESTRASuero o plasma
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ordmC o 15 a 20 ordmCAjustar el cero con agua destilada
Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatroacuten uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador de la muestra frente a blanco Color estable 30 min
CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg dLABS Patron
RESULTADOTrigliceacuteridos = ____________mgdL
VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mgdLMujeres 35 a 165 mg dL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTICA NO ____
DETERMINACION DE CREATININADEPURACION DE CREATININA
INTRODUCCION La determinacioacuten de niveles seacutericos de creatinina producto de la degradacioacuten de la creatina se utiliza como iacutendice de funcionalismo renal dado que su eliminacioacuten se efectuacutea a traveacutes del rintildeoacuten y casi exclusivamente por filtracioacuten
FUNDAMENTOLa creatinina reacciona con el picrato alcalino seguacuten la reaccioacuten de Jaffeacute para dar un cromoacutegeno rojizo La cantidad de cromoacutegeno que se forma bajo condiciones controladas es directamente proporcional a la concentracioacuten de creatinina en la muestra y se mide fotomeacutetricamente a 490-510nm La reaccioacuten de jaffeacute es una reaccioacuten no especiacutefica para creatinina pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reaccioacuten
MATERIAL REQUERIDObull Espectrofotoacutemetrobull Cubetas de lecturabull Material volumeacutetricobull Sistema de termostatizacion (20-30ordmC)bull Cronoacutemetro
PARAMETROSLongitud de onda 500nm (490-510)Temperatura 25ordmCAjuste a cero agua destilada
PROCEDIMIENTO
Pipetear en cubetas espectrofotomeacutetricas
Estandar Muestra
Reactivo de Trabajo 20mL 20mLEquilibrar a temperatura de trabajo y pipetear
Estandar 04mLMuestra 04mL
Mezclar inmediatamente y disparar el cronoacutemetroA los 30 seg exactos de incubacioacuten registrar las lecturas de Abs de S1 y M1A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2
CALCULOSSUEROCreatinina (mgL) = (M2-M1) x f f= 20mgL
S2-S1
ORINA DE 24 HORASCreatinina (g24h) = (M2 ndash M1) x f f= 0020gL x 50 x V
S2-S1
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Donde 50 es el valor de dilucioacuten y V= vol de diuresis en litros en 24h
DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA
DCE mlmin = creatinina en orina (g24h) x 694Creatinina en suero (mgL)
RESULTADOS
Creatinina en Suero ___________________mgLCreatinina en Orina ___________________g24hDCE ___________________mlmin
VALORES DE REFERENCIASuero 8-14mgLOrina 8-23 mgkg 24hDCE 80-140 mlmin
CONCLUSION
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PRACTINA NO___
CLORO
FUNDAMENTOEl cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado
REACTIVO
Reactivo formado por tiocianato de mercurio nitrato de hierro y aacutecido nitrico Estandar Cloro
MUESTRASueroPlasma heparinizadoOrina
PARAMETROSLongitud de onda 480nmTemperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzAjustar a cero blanco de reactivo
PROCEDIMIENTOBlanco Estandar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLAgua destilada 10UlEstandar 10uLMuestra 10uLMezclar incubar 5 minutosLeer abosrbancias (densidad optica DO)Color final estable 1 hora
CALCULOMuestra DO x nEstandar DO
n= 100mEqL 100mmolL 335mgdL
RESULTADO
Cloro = ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIASuero o plasma orina 98-107 mEqL 110-250 mEq24h98-107 mmolL 3900-8870 mg24h348-380 mgdL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
TRIGLICERIDOS
PRINCIPIO DEL METODOLos trigliceacuteridos son grasas que suministran energiacutea a la ceacutelula al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre Una dieta alta en grasa eleva los trigliceacuteridos cirrosis hepatitis obstruccioacuten biliar pueden estar relacionadas con esta enfermedad
Los trigliceacuteridos son incubados con LPL liberan glicerol y aacutecidos grasos libres el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peroacutexido de Hidroacutegeno por GPO
Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracioacuten roja
MUESTRASuero o plasma
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ordmC o 15 a 20 ordmCAjustar el cero con agua destilada
Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatroacuten uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador de la muestra frente a blanco Color estable 30 min
CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg dLABS Patron
RESULTADOTrigliceacuteridos = ____________mgdL
VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mgdLMujeres 35 a 165 mg dL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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Donde 50 es el valor de dilucioacuten y V= vol de diuresis en litros en 24h
DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA
DCE mlmin = creatinina en orina (g24h) x 694Creatinina en suero (mgL)
RESULTADOS
Creatinina en Suero ___________________mgLCreatinina en Orina ___________________g24hDCE ___________________mlmin
VALORES DE REFERENCIASuero 8-14mgLOrina 8-23 mgkg 24hDCE 80-140 mlmin
CONCLUSION
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PRACTINA NO___
CLORO
FUNDAMENTOEl cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado
REACTIVO
Reactivo formado por tiocianato de mercurio nitrato de hierro y aacutecido nitrico Estandar Cloro
MUESTRASueroPlasma heparinizadoOrina
PARAMETROSLongitud de onda 480nmTemperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzAjustar a cero blanco de reactivo
PROCEDIMIENTOBlanco Estandar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLAgua destilada 10UlEstandar 10uLMuestra 10uLMezclar incubar 5 minutosLeer abosrbancias (densidad optica DO)Color final estable 1 hora
CALCULOMuestra DO x nEstandar DO
n= 100mEqL 100mmolL 335mgdL
RESULTADO
Cloro = ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIASuero o plasma orina 98-107 mEqL 110-250 mEq24h98-107 mmolL 3900-8870 mg24h348-380 mgdL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
TRIGLICERIDOS
PRINCIPIO DEL METODOLos trigliceacuteridos son grasas que suministran energiacutea a la ceacutelula al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre Una dieta alta en grasa eleva los trigliceacuteridos cirrosis hepatitis obstruccioacuten biliar pueden estar relacionadas con esta enfermedad
Los trigliceacuteridos son incubados con LPL liberan glicerol y aacutecidos grasos libres el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peroacutexido de Hidroacutegeno por GPO
Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracioacuten roja
MUESTRASuero o plasma
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ordmC o 15 a 20 ordmCAjustar el cero con agua destilada
Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatroacuten uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador de la muestra frente a blanco Color estable 30 min
CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg dLABS Patron
RESULTADOTrigliceacuteridos = ____________mgdL
VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mgdLMujeres 35 a 165 mg dL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTINA NO___
CLORO
FUNDAMENTOEl cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado
REACTIVO
Reactivo formado por tiocianato de mercurio nitrato de hierro y aacutecido nitrico Estandar Cloro
MUESTRASueroPlasma heparinizadoOrina
PARAMETROSLongitud de onda 480nmTemperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzAjustar a cero blanco de reactivo
PROCEDIMIENTOBlanco Estandar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLAgua destilada 10UlEstandar 10uLMuestra 10uLMezclar incubar 5 minutosLeer abosrbancias (densidad optica DO)Color final estable 1 hora
CALCULOMuestra DO x nEstandar DO
n= 100mEqL 100mmolL 335mgdL
RESULTADO
Cloro = ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIASuero o plasma orina 98-107 mEqL 110-250 mEq24h98-107 mmolL 3900-8870 mg24h348-380 mgdL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
TRIGLICERIDOS
PRINCIPIO DEL METODOLos trigliceacuteridos son grasas que suministran energiacutea a la ceacutelula al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre Una dieta alta en grasa eleva los trigliceacuteridos cirrosis hepatitis obstruccioacuten biliar pueden estar relacionadas con esta enfermedad
Los trigliceacuteridos son incubados con LPL liberan glicerol y aacutecidos grasos libres el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peroacutexido de Hidroacutegeno por GPO
Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracioacuten roja
MUESTRASuero o plasma
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ordmC o 15 a 20 ordmCAjustar el cero con agua destilada
Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatroacuten uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador de la muestra frente a blanco Color estable 30 min
CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg dLABS Patron
RESULTADOTrigliceacuteridos = ____________mgdL
VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mgdLMujeres 35 a 165 mg dL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
TRIGLICERIDOS
PRINCIPIO DEL METODOLos trigliceacuteridos son grasas que suministran energiacutea a la ceacutelula al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre Una dieta alta en grasa eleva los trigliceacuteridos cirrosis hepatitis obstruccioacuten biliar pueden estar relacionadas con esta enfermedad
Los trigliceacuteridos son incubados con LPL liberan glicerol y aacutecidos grasos libres el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peroacutexido de Hidroacutegeno por GPO
Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracioacuten roja
MUESTRASuero o plasma
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ordmC o 15 a 20 ordmCAjustar el cero con agua destilada
Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatroacuten uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador de la muestra frente a blanco Color estable 30 min
CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg dLABS Patron
RESULTADOTrigliceacuteridos = ____________mgdL
VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mgdLMujeres 35 a 165 mg dL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____
COLESTEROL
Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accioacuten de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y aacutecidos grasos El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccioacuten se oxida por la accioacuten de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peroacutexido de hidroacutegeno Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el sistema cromoacutegeno (4-aminoantipirinafenol) en un compuesto de color rojo
PRECAUCIONESiexcltoxico El estandar coniene 2-mettoxietanol evitese la exposicioacuten nocivo por inhalacioacuten ingestioacuten o contacto con la piel Inflamable Puede perjudicar la fertilidad riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto
MUESTRASSueroPlasma heparinizado
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ordmCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo
Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL
Mezclar y tras una incubacioacuten de 5 min leer la densidad oacuteptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora
CALCULOSMuestra DO n = n= concentracioacuten de std 200mgdLEstandar DO 2gL
517mmolDL
RESULTADOCHOL= ___________mgdL
VALORES DE REFERENCIA150-260 mgdL15 ndash 26 gL387 ndash 671 mmolL
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTINA NO______BILIRRUBINA
Significado Cliacutenico
La bilirrubina es un compuesto de degradacioacuten de la Hemoglobina captada por el hiacutegado para su conjugacioacuten y excretada en la bilis Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia) La determinacioacuten de la bilirrubina seacuterica en nintildeos recien nacidos es de gran importancia ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucioacuten al sistema nervioso esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoliacutetica del recien nacido patologiacutea provocada por incompatibilidad materno-fetal se produce una destruccioacuten excesiva de gloacutebulos rojos
Fundamento del Meacutetodo
La bilirrubina reacciona con el aacutecido sulfaniacutelico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina) que se mide a 530nm La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso De manera que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra es necesario agregar benzoato de cafeiacutena al medio de reaccioacuten
Reactivosbull Desarrollador solucioacuten acuosa de Benzoato de cafeina 013molLbull Nitrito de Sodiobull Reactivo Sulfaniacutelicobull Bilirrubina STD (no provista)bull Agua destilada (no provista)
Muestrabull Suero o Plasma heparinizado Libre de hemolisis Estable 48 horas de 2 a 10ordmC la
accioacuten de la luz puede destruir en una hora el 50 de la bilirrubina es necesario proteger
Materialbull Espectrofotoacutemetrobull Pipetas y micropipetasbull Reloj
Condiciones de ReaccioacutenLongitud de Onda 530nm en espectrofotoacutemetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reaccioacuten 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 29mL
PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados
Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 25mL 25mLDesarrolador 25mLReactivo Sulfaniacutelico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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CALCULOS
Bilirrubina Total (mgL) = (T ndash B) x fBilirrubina Directa (D ndash B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total ndash Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina
RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mgLBilirrubina Indirecta ____________mgLBilirrubina Total ____________mgL
VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mgL Total hasta 10mgL
Recien NacidosA termino prematuros
Sangre de cordon 25mgL24 horas 60mgL 80mgL48 horas 75mgL 120mgL3 a 5 dias 120mgL 230mgL
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTICA NO______ELECTROLITOS EN SUERO
CALCIO
El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambieacuten se encuentra en la sangre y en la funcioacuten neuromuscular
INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo el incremento se debe al aumento de la reabsorcioacuten en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales
DECREMENTOHipocalemia
METODOArsenazo III
El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 675 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracioacuten de calcio en la muestra Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero plasma u orina
ReactivoEl reactivo esta listo para su uso
MuestraSuero plasma heparinizada u orina Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC y seis meses en congelacioacuten
PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 1020 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubacioacuten 1 min a 37ordmCConcentracioacuten STD 10mgdLBlanco Reactivo
PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados
BLANCO STD MUESTRA
Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estaacutendar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm
CALCULOSCalcio mgdL = ABS M ABS STD X (Concentracioacuten STD) =
RESULTADOCalcio = _______________mgdL
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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MAGNESIO
El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino proporcional a la concentracioacuten de Mg en la muestra
Es el segundo cation mas numeroso en el organismo
Niveles altos de Mg se hallan en uremia fallo renal o enfermedad de Addison
REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg
MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ordmC tambien puede utilizarse orina
PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta
Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10
CALCULOS
ABS M ABS P X 2 (CONC PAT) = mg dL de Mg
RESULTADO
Magnesio _______________mgdL
VALORES NORMALES
Suero o plasma 15 a 25 mg dLOrina 24 a 244 mg dL
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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FOSFORO
INTRODUCCION
El foacutesforo es esencial para la formacioacuten de tejido oseo y en el metabolismo energeacutetico celular Aprox El 85 se encuentra en hueso y dientes Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D hipertiroidismo desordenes renales mala absorcioacuten Niveles altos se atribuyen a la dieta metaacutestasis de huesos alcoholismo diarreas alteraciones de hiacutegado
FUNDAMENTO
Meacutetodo para deteccioacuten de foacutesforo inorgaacutenico El Pi reacciona en medio aacutecido con molibdato amoacutenico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo de intensidad proporcional a la concentracioacuten de Pi presente en la Muestra
REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina
PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta
Blanco Patroacuten MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatroacuten 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo
CALCULOSSueroABS M x 5 (conc P) = mgdLABS P
Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina 24h = mg24hABS P
RESULTADOFoacutesforo = _____________mgdLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNintildeos 4-7mgdLAdultos 25-5mgdL 04-13g24h
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PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NO____ALBUMINA
FUNDAMENTO
La albuacutemina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente aacutecido produciendo coloracioacuten amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracioacuten de la albuacutemina en la muestra
La albuacutemina es una proteiacutena plasmaacutetica importante producida por el hiacutegado sus niveles se alteran en enfermedades hepaacuteticas desnutricioacuten dermatitis
REACTIVOVerde bromocresol pH 42Patroacuten primario acuoso de albuacutemina
MUESTRASuero o plasma libre de hemoacutelisisEstable 1 mes a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ordmCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 1 hora
CALCULOSABS MX 5 (conc Patroacuten) = gdLABS P
RESULTADO
Albuacutemina = _______________gdL
VALORES NORMALES35 a 5 gdL
CONCLUSIONES
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTICA NO____PROTEIacuteNAS TOTALES
En medio alcalino las proteiacutenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre la intensidad es proporcional a la concentracioacuten de la proteiacutena total en la muestra
Las proteiacutenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte Se dividen en dos fracciones Albuacutemina y Globulina
Se deteccioacuten es util para deteccioacuten deHiperproteinemiaHipoproteinemia
REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal
MUESTRASuero o plasma heparinizado Estable un mes en nevera a 2-8ordmC
PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ordmC15-25ordmCAjustar a cero con agua destilada
PROCEDIMIENTOBlanco Patroacuten Muestra
Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar incubar 5 min a 37ordmC o 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia de Patroacuten y Muestra contra blanco color estable 30 min
CALCULOS
Abs M x 7 (conc P) = gdLAbs P
RESULTADOS
Proteinas Totales = ___________gdL
VALORES NORMALESAdultos 66-83 gdLRecien Nacidos 52-91 gdL
CONCLUSIONES
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PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NO__AST
ASPARTATO AMINOTRASMINASA
INTRODUCCION
La AST tiene una alta concentracioacuten en el muacutesculo cardiaco las ceacutelulas hepaacuteticas las ceacutelulas muacutesculo esqueleacutetico y en menores grados en otros tejidos Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepaacutetica se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT ALP y bilirrubina)
Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propoacutesito
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Acida sodica azida sodica
PARAMETROS
bull 340 nm longitud de onda bull 30-37degC bull Cubeta de 1 cm paso de luzbull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul
Mezclar uncubar un minuto medir cambio de densidad oacuteptica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS Un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334mn actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365mn actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOAST = _______________ UL
VALORES NORMALES 30degC hasta 30 UL37degC hasta 46 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA
INTRODUCCION
Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesioacuten hepaacutetica La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoaacutecido alanita y se encuentra en varios tejidos pero presenta concentraciones mayores en el hiacutegado Cualquier lesioacuten en el hiacutegado hace que se libere esta enzima a la sangre
MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2
Suero sin hemoacutelisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH
Azida sodica azida sodica PARAMETROS
bull 340nm longitud de ondabull 30-37degCbull Cubeta de 1 cm paso de luz bull Blanco agua destilada
PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo
Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul
Mezclar incubar un minuto medir cambio de densidad optica durante 3 min
Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL
Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL
Mezclar incubar 1 minuto y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica
CALCULOS un reactivo 2 reactivos
340nm actividad UL = cambio DO min x 1746 1905334nm actividad UL = cambio DO min x 1780 1942365nm actividad UL = cambio DO min x 3235 3529
RESULTADOSALT = __________________UL
VALORES NORMALES
30degC hasta 35 UL 37degC hasta 49 UL
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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PRACTICA NO_____LIPASA
FUNDAMENTO
La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber
La enzima se encuentra en la leche materna y seguacuten estudios bioquimicos es ideacutentica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreaacutetica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreaacutetico y llega a las glaacutendulas mamarias a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea
La lipasa gaacutestrica producida por las glaacutendulas gaacutestricas reduce los trigliceacuteridos u tipo de liacutepidos presentes en la leche a aacutecidos grasos y glicerol
REACTIVOS
bull Reactivo de trabajo bull Patron de lipasa
MUESTRA
bull Suero
PROCEDIMIENTO
1 Precalentar reactivo de trabajo a 37degC durante unos minutos 2 Pipetear a una cubeta
Reactivo de trabajo 750 ulMuestraPatron 15 ul
3 Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37degC poner el cronometro en marcha a los 3-5 minutos antildeadir
Reactivo C 250uLMezclar
4 leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5 Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales obtener incremento de
absorbencia por minuto promedio (∆Amin)
CALCULOS (∆Amin)MUESTRA X Concentracioacuten del patron = UL (∆Amin)PATRON
RESULTADOSLipasa = _________________UL
VALORES NORMALES 7-59 UL
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
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PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
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AMILASA
INTRODUCCION
La amilasa es una enzima que tiene la funcioacuten de dirigir el glicoacutegeno y el almidoacuten para formar azucares simples se produce principalmente en las glaacutendulas salivares ( glaacutendulas partidas) y en el paacutencreas Cuando una de estas glaacutendulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anaacutelisis de la amilasa serica
MUESTRA
bull Suero bull Plasma heparinizado bull Orina diluida una parte en dos de agua
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37deg CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada
30degC 37degCREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL
Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆Amin)
CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica min X 2715 a 30degC
Cambio Densidad Optica min X 4640 a 37degC
RESULTADOSAmilasa = _______________ UL
VALORES DE REFENCIAEn suero
bull lt67 UL a 30degC bull lt86 UL a 37degC
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
CONCLUSION
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
PRACTICA NOPRUEBAS SEROLOGICAS
PROTEINA C REACTIVA
Es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para la deteccioacuten cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente
La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos virales inflamacioacuten y neoplasias malignas El incremento se produce despueacutes de unas horas de desarrollarse inflamacioacuten alcanzando niveles de 300mgL en 12-24h
Reactivos Latex Suspensioacuten de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 en un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo 3 homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a
cada una de las gotas anteriores 4 mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitadorAglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de PCR igual o mayor a 6mgLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOSLa concentracioacuten de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula
6xTitulo de PCR = mgLVALORES DE REFERENCIAHasta 6mgL
RESULTADOAglutinacioacuten __________________
CONCLUSION
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
Quiacutemica Cliacutenica Manual de Praacutecticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermuacutedez Chaacutevez
Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
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FACTORES REUMATOIDES
PRINCIPIO DEL METODO
FR Latex es una tecnica de aglutinacioacuten en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra
Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G Su intereacutes cliacutenico es el diagnoacutestico de la Artritis Reumatoides aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen
ReactivosLatex suspensioacuten de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal
MuestraSuero fresco estable 7 dias a 2-8ordmC o 3 meses a -20 No hemolisadas ni lipeacutemicas
PROCEDIMIENTOCualitativo
1 Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente 2 En un portaobjetos depositar 50uL de M y una gota de los controles positivo y negativo En
circulos distintos 3 Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas
anteriores 4 Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo Con palillos
distintos 5 Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin
exceso
Semicuantitativo 1 realizar diluciones dobles de la muestra en solucioacuten salina 9gL2 proceder para cada dilucioacuten como la prueba cualitativa
LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscoacutepicamente presencia o ausencia de aglutinacioacuten inmediatamente al retirar el agitador
Aglutinacioacuten positiva indica una concentracioacuten de FR Latex igual o mayor a 8UImLEn el semicuantitativo se define el titulo como la dilucioacuten mayor que da resultado positivo
CALCULOS8 X TITULO DE FR = UImL
VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI mL
RESULTADOAglutinacioacuten _____________________
CONCLUSIOacuteN
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
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004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION
Los antiacutegenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19
Salmonella La reaccioacuten de Widal en un meacutetodo seroloacutegico usado comuacutenmente en el diagnoacutestico de las fiebres tifoideas enteacuterica y ondulante la reaccioacuten mide el tiacutetulo del suero contra una suspensioacuten de microorganismo conocidos La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos Hay tres especies cliacutenicamente importantes de Salmonella enteritidis choleraeauis y thyphi Tres siacutendromes principales resultan de la infeccioacuten por salmonella
1 gastroenteritis ( la forma maacutes comuacuten )2 fiebre tifoidea3 septicemia
Brucella En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella casi todas las infecciones humanas por Brucella se deben a B abortus B suis o B melitensis La brucelosis es una enfermedad aguda o croacutenica que se manifiesta principalmente por escalofriacuteos fiebre y debilidad ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de ldquofiebre ondulanterdquo de la enfermedad
Rickettsias Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigeacutenos idiotiacutepicos con Proteus ( OX-19 OX-2 OX-K) esta relacioacuten se usoacute en el diagnoacutestico de tifo Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequentildeos plemoacuterfos que funcionan como paraacutesitos intracelulares La inmunidad por lo general es de larga duracioacuten con algunas excepciones El tifus endeacutemico puede causar recaiacuteadas 10 o 20 antildeos despueacutes de la aparente recuperacioacuten (enfermedad de Grill Zinseer) La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaiacutedas
FUNDAMENTOEstas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especiacutefico El tiacutetulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad Para que los resultados tengan un valor diagnoacutestico el tiacutetulo de ellos debe aumentar
MUESTRASuero libre de hemolisis
REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella
PROCEDIMIENTOPuede efectuarse por medio de dos manerasMeacutetodo de aglutinacioacuten raacutepida en placa1 Anotar el antiacutegeno correspondiente en la placa de vidrio2 Depositar en cada cuadro 004ml de suero del paciente para cada uno de los antiacutegenos que se vayan a utiliza3 A cada gota de suero antildeadir una gota de cada antiacutegeno4 Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antiacutegeno5 Agitar suavemente la placa por rotacioacuten (120 rpm) durante 2 oacute 3 minutos6 Observar la aglutinacioacuten con ayuda de una laacutemparaCuando hay reaccioacuten positiva se repite la teacutecnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
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Mililitros de suero Dilucioacuten
008 120
004 140
002 180
001 1160
0005 1329
INTERPRETACIONReportar el resultado empleando la reciacuteproca de la dilucioacuten maacutes alta que presenta aglutinacioacuten
Grado de aglutinacioacutenbull 100 ++++ Sedimentacioacuten de los grumos y el sobrenadante clarobull 75 +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante clarobull 50 ++ sedimentacioacuten marcada y sobrenadante ligeramente clarobull Negativo Ninguna evidencia de aglutinacioacuten sobrenadante ideacutentico al control
RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________
CONCLUSION
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
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VDRLINTRODUCCION
La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una teacutecnica seroloacutegica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnoacutestico de siacutefilis y analizar la respuesta al tratamiento especiacutefico Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisioacuten sexual en grandes masas de poblacioacuten1-4
El Meacutedico de la Familia es el maacuteximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles por tanto entre sus funciones baacutesicas se encuentran la indicacioacuten y la interpretacioacuten a primera instancia de los resultados de eacutesta56
El VDRL es una teacutecnica de floculacioacuten que utiliza el antiacutegeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponeacutemicos inespeciacuteficos producidos por el individuo ante una infeccioacuten sifiliacutetica Se practica normalmente en laacutemina de cristal en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento) con una suspensioacuten fresca de antiacutegeno de cardiolipina esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacioacuten utilizando un microscopio de bajo aumento sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente
MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis
PROCEDIMIENTOEn un porta depositar una gota (50uL) de suero del paciente Antildeadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado
RESULTADOVDRL ____________________
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