Enzimo-Inmuno-Ensayo

Es la técnica mas utilizada en la actualidad para cuantificar casi

cualquier proteína soluble en la mayor parte de los fluidos

corporales o medios de cultivo en el laboratorio.

Es un inmunoensayo en medio liquido, donde uno

de los componentes (Ag o Ab) está adsorbido

sobre un plástico.

Múltiples Variantes

ELISA indirecto ELISA en sándwich

(Ag-Ab): Antígeno- Anticuerpo.

ELISA indirecto:

Es la modalidad a utilizar cuando lo que queremos es cuantificar anticuerpos

específicos en un suero.

El antígeno debe estar fijado en los pocillos de plásticos.

Sobre dichos pocillos se añadirá una dilución del suero del paciente en

estudio, lo que permite la unión de los anticuerpos presentes en el suero con

los antígenos de la placa.

Si hay anticuerpos, se producirá la reacción Ag-Ab en unos 15 a 60 min.

Se lavan muy bien los pocillos para retirar las proteínas no adheridas al

antígeno.

Consiste, en añadir anticuerpos anti-Ig humana conjugados a una enzima.

Si hubo anticuerpos en el suero del paciente, este segundo anticuerpo

quedara unido a ellos.

Se lava energéticamente para retirar las proteínas no adheridas al antígeno.

Se añade sustrato de la enzima conjugada con el segundo anticuerpo.

Se generara una sustancia colorada.

La intensidad del color será proporcional a la cantidad de anticuerpo que tenia el

paciente.

ELISA en sándwich

Cuando se va a cuantificar una proteína sérica (no un anticuerpo).

Cuantificar una Citocina; se pega al plástico

del pocillo un anticuerpo anti-citocina.

Se repite el mismo proceso que en el caso anterior, la única

diferencia es que al añadir el suero en estudio la reacción Ag-Ab se

producirá entre los anticuerpos fijados al plástico del pocillo y la

citocina presente en el suero.

Medición de Hormonas:

Progesterona, estrógenos, cortisol, insulina, testosterona,

gonadotropina coriónica humana, TSH.

Detección de antígenos tumorales:

Antígeno prostáticoAlfa-fetoproteína.

Antígeno del ovario

Antígeno carcinoembrionario.

Los resultados aportan elementos

diagnósticos, información de una

enfermedad y coadyuvan en la

planificación del tratamiento

VIH:

Sensibilidad: 90%

Especificad: 50%

Método Western:

Se realiza sobre los soportes sólidos (papeles de nylon) sobre los que

se han transferido e inmovilizado proteínas antigénicas previamente

separadas por electroforesis en geles de acrilamida.

La identificación de las proteínas a estudiar se realiza por

incubación de las membranas o soportes con anticuerpos específicos

marcados habitualmente con enzimas y posterior adición del sustrato

específico de dicha enzima, que producirá un viraje de color.

WESTERN BLOT

Negativo: significa que no se detectaron anticuerpos

específicos para el VIH. Sin embargo, no se descarta la

posibilidad de infección, así que debe practicarse

nuevamente cada tres meses, durante un año.

Positivo: se confirma la presencia del VIH.

Prueba confirmatoria, que se utiliza para hacer un segundo análisis a

la prueba de ELISA.

Radioinmunoensayo (RIA)

Es el inmunoensayo más sensible basado en el

marcaje radioactivo de anticuerpos o antígenos.

RIA competitivo

La sustancia a cuantificar en este caso compite con cantidades

radiactivas conocidas de esa misma sustancia para unirse con su

anticuerpo específico.

Cuanto menos antígeno-problema tengamos, mayor será la

cantidad de antígeno radioactivo unido al anticuerpo y viceversa.

Se medirá la radioactividad del antígeno marcado unido al

anticuerpo y la del antígeno marcado libre. Si el antígeno o anticuerpo se fijan a una superficie plástica será mas

sencilla la separación entre el isótopo libre y el unido al anticuerpo.

Inmunoprecipitación:

En un extracto celular se precipita la proteína de interés y tras la

electroforesis se revela mediante el uso de anticuerpo radioactivo.

Permite saber si un determinado tipo celular expresa dicha proteína de

modo basal o tras la inducción por algún estímulo.

Electroforesis: técnica mediante la cual se

separan las biomoléculas en disolución

cuando se ven sometidas a un campo

eléctrico.

Para tipificar los glóbulos rojos (GR) o eritrocitossuelen llevarse a cabo reacciones de aglutinación.

La hemaglutinación se usa para determinar el gruposanguíneo ABO de donadores de sangre yreceptores de transfusión.

Hemoaglutinación viral

Algunos virus son capaces de aglutinar eritrocitos de mamíferos o

aves, y esto puede utilizarse para caracterizar un virus desconocido, o

medir [Ac] en suero.Ejemplos :

Orthomyxovirus (Influenza), Paramyxovirus (Parotiditis), Parvovirus

Permite la identificaci6n, sobre muestras tisulares o citológicas, dedeterminantes antigénicos característicos de distintas líneas dediferenciación y función celular

El anticuerpo específico se une a una enzima que convierte unsustrato incoloro en un producto teñido in situ.

Este método es análogo a Elisa; la diferenciación enla detección yace principalmente en que en lainmunohistoquímica los productos teñidos soninsolubles y se precipitan en el sitio en donde seforman.

El anticuerpo se une de manera estable a suantígeno, lo que permite que el anticuerpo nounido se elimine mediante lavado meticuloso.

Peroxidasa de rábano picante

oxida el sustrato diaminobenzidina

produce un precipitado de color pardo

Fosfatasa alcalina

producir colorantes de color rojo o azul

sustancia común es el 5-bromo-4-cloro- 3-indolil

fosfato más nitroazul tetrazolio

Biometría hemática o citrometria hemática

hemoglobina: se mide en g/dl mujeres: 12.5 g/dlHombres:15.5 g/dl.

Hematocrito : se mide en % en mujeres:39-50%

Hombres:46-56%.

Globulos rojos:millones/ul mujeres:4.1-5.7 millones /ulHombres:5.0-6.3 millones/ ul

Serie roja

VGM (volumen globular medio) se mide en femtolitros o micras cubicas.

Mujeres:78-103 flHombres:83-98 fl

HCM (hemoglobina corpuscular media) se mide en pico gramos hb/GRx10

Valor normal :27-34 pg

CmHb (concentración media de hemoglobina): se mide en %

Varones: 32-34%Mujeres: 30-34%.

Coeficiente de variación del VGM (CV-VGM):se mide

en%. Valor normal: 12-15%.

Curvas de distribución de frecuencias del

VGM puede calcularse apartir de curvas de

distribución frecuencias del VGM.

Valor normal:91.4

Cuenta corregida de reticulocitos (CCR): se expresa % y se refiere ala proporción porcentual de células rojas inmaduras recientemente

imprevistas del nucleo que han sido emitidas ala sangre por la medula osea.se calcula

CCR=CR(%)X hematocrito del paciente / 45.CR: es la cuenta porcentual de reticulocitos en un extendido de sangre

periférica

Globulos blancos (GB): valor normal de 4000 a 12000/ul

Cuenta diferencial de glóbulos blancos pueden encontrarse

los siguientes tipos de leucocitos:

neutrofilos:40-85%Meta mielocitos: 0-2%

En banda: 0-11%Segmentados:40-74%

Eosinofilos:0-7%Basofilos:0-3%

Monocitos:1-13Linfocitos:12-46%

Otras células en sangre periférica como los plasmocitos se encuentran en algunas virosis como mononucleosis infecciosa ,rubeola,varicela,sarampion, y meningitis linfocítica benigna.Blastos o bastones de auer :es

muy sugestiva de leucemia aguda.

Serie blanca

Plaquetas:150000 a 500000/ul

Valores normales del volumen plaquetario: 8-12

/fl.

Serie trombocitica

Hemoglobina: valores por deba bajo de lo normal =anemiaValores arriba de los normal=policitemiaHematocrito=se diagnostica anemiaGlóbulos rojos: anemiaVGM:si la anemia es macrocitica o microcitica.HCM=se diagnostica hipocromía y normocromia CmHb=se diagnostica anemias y se valora la hemoglobina hematocrito y glóbulos rojosCV-VGM=se diagnostica anemias y talasemiasCurvas de distribución de frecuencias del VGM anemias anemia microcitica hipocromica.Neutrofilos por arriba de lo normal neutrofilia y por debajo de lo normal neutropenia Eosinofilos por arriba de lo normal esosinofilia y por debajo de lo normal eosinopeniaBasofilos por arriba de lo normal basofilia por debajo de lo normal basopenia.Monocitos= para diagnosticar leucemiasPlasmocitos=para diagnosticar virosis Blastos=para diagnosticar leucemia agudaValores de plaquetas por arriba de lo normal trombositosis y por debajo trombocitopeniaLinfocitos por arriba de lo normal linfocitosis y por debajo linfopenia

La Química sanguínea es una serie de pruebas quesuministra información al médico de las condicionesdel metabolismo en el cuerpo humano y ademáscomo funcionan ciertos órganos como el hígado ,elriñón etc.

Existen diversos parámetros de químicas sanguíneas de 5, 6, 12, 24 y la más

completa de 27 elementos.

Es un grupo de exámenes de sangre que suministran información acerca del

metabolismo del cuerpo

Se evalúan los electrolitos, es decir, los minerales que mantienen equilibradas las concentraciones de los distintos fluidos corporales y que son necesarios para ayudar a los músculos, el corazón y otros órganos a funcionar adecuadamente. Para evaluar la función renal y el azúcar en sangre, se analizan otras sustancias.

Se analizan diversas cantidades de elementos, según sea requerido por el médico. En una química sanguínea algunas sustancias son analizadas mediante el suero sanguíneo y entre otras cosas, se revisan electrolitos como el potasio, sodio, cloro etc.

En una Química sanguínea de seis elementos Incluye seis estudios en uno, es decir, con una sola muestra de sangre, recibe seis estudios diferentes: glucosa,urea,ácido úrico, creatinina, colesterol y triglicéridos.

El paciente, antes de practicarse el análisis, debe cumplir con los siguientes requisitos: Haber mantenido un ayuno mínimo de 12 horas previas a la toma y Suspender cualquier medicamento que este tomando.

GLUCOSA:Mide la cantidad de azúcar en la sangre. Valor normal 70- 109 mg/dL. Valor Alto >120mg/dLValores bajos > de 60 mg/dL:

Valor Alto: Puede indicar Diabetes,enfermedades renales, hipertiroidismo,pancreatitis aguda, tumores depáncreas

Valor Bajo: Puede indicar Hipoglicemia, exceso de insulina, hipotiroidismo.

UREA: Se hace para evaluar la función renal y ver el nivel de nitrógeno en la sangre. VALOR NORMAL: 6 -20 mg/dL. VALOR ALTO: 100 mg/dl Un valor alto Pueden deberse a deshidratación odeficiencia renal o cardiaca.

ACIDO URICO:Valor normal 3,4-7 mg/dLUn valor alto indica: Acidosis metabólica, diabetes, alcoholismo.Valores bajos indican poco consumo de purinas, síndrome de faconi.

COLESTEROL:El cuerpo necesita un poco de colesterol para funcionar adecuadamente; pero demasiado colesterol puede obstruir las arterias y llevar a cardiopatía. Valor normal: Menor de 170mg/dl.Valor Alto:Mayor de 200mg/dL

HDL:lipoproteína de alta densidad y también denominado colesterol "bueno".Valor normal: >55 mg/dl hombre y >65mg/dl mujer.

LDL:lipoproteína de baja densidad y también se le denomina colesterol "malo". Ellas transportan el colesterol ylostriglicéridos en la sangre a diversas partes del cuerpo.Valor normal: <130 mg/dl hombres y <70mg/dl mujeres, los valores mayores a esto Pueden indicar o deberse a

arterioesclerosis.

ALBUMINAEs la principal proteína delsuero y sus valores normales en g/100 ml están comprendidos entre:— 2,9 y 5,5 en recién nacidos.— 3,8 y 5,5 en niños.— 3,3 y 6,1 en hombres.— 2,7 y 5,6 en mujeres.

ALBUMINA:El examen de albúmina en suero mide la cantidad de esta proteína en la parte líquida y transparente de la sangre. Valor normal: 3.9 a 5.0 mg/dL. Sirve para descartar enfermedad hepática o renal. Valores anormales Pueden indicar hepatitis, cirrosis o ascitis.

FOSFATASA ALCALINA:Es una proteína que se encuentra en todos los tejidos corporales. Este examen se hace para diagnosticar enfermedad del hígado y del hueso o para ver si los tratamientos para dichas enfermedades están funcionando.

Valor normal 44 a 147 UI/L.

EGO (Examen General de Orina)

Consiste en una serie de exámenes efectuadossobre la orina, constituyendo uno de los métodosmás comunes de diagnóstico médico.

En el adulto normal , cerca de 1200mL de sangre recorren los riñones cada minuto ,el

glomérulo recibe este flujo sanguíneo a través de las arteriolas aferentes .

Una vez obtenido el ultrafiltrado pasa al espacio debowman y ahí a los túbulosrenales donde se lleva a cabola reabsorción y que secaracteriza por ser selectiva.

Para el análisis de la orina se prefiere la primera muestra de orina matinal.

ORINA

Color: Una orina normal es amarilla y transparente , otros colores indican una enfermedad.

Olor: En condiciones normales la orina presenta un olor característico.

Volumen: En condiciones Normales solo es influido por la ingesta de agua, el adulto puede orinar entre 600 a 1200mL por día.

PH: Es de 6, pero puede variar entre 4.5 a 8.

COLOR POSIBLE CAUSA

Pálido Orina diluida

Obscuro Fosfatos,uratos,Oxalatos y contaminación fecal.

Blanquecino Leucocituria,lipiduria y quiluria

Amarillo-Naranja Orina concentrada o presencia de bilirrubina

Amarillo-Verdoso Presencia de bilirrubina-Biliverdina

Rojizo Hemoglobina ,eritrocituria o contaminación menstrual.

Café-Negruzco Metahemoglobina ,Acido Homogentisico y melanina.

Glucosuría: Presencia de cantidadesdetectables de glucosa cuando losvalores de la glucosa en sangre superanla capacidad de reabsorción tubular,suele presentarse cundo se encuentrapor arriba de los 180 mg/dL.

Cetonas: La presencia de estassustancias en la orina se asocia adiabetes mellitus descontrolada.

Hematuria: Es la presencia de unnumero anormal de células sanguíneasen la orina.

Urobilinogeno: Deriva principalmentede la bilirrubina transformada poracción de bacterias intestinales .

Acido Úrico: Estos cristales se encuentranen orinas con un ph acido(5- 5.5) ypueden observarse en grandescantidades durante las quimioterapias yen el síndrome de lesch-nyhan.

Electrolitos en orina: La determinación decloro se encuentra relacionada con ladeterminación de sodio y está tieneutilidad en estados de retención hídrica .

Sirven para controlar la cantidad de agua en el

cuerpo y la ácidez.

Agua corporal

total=50%-60%

del peso

orgánico

Volumen Intracelular (40%

del peso)

Volumen Extracelular (20%

del peso)

Volumen

PlasmáticoVolumen

Intersticial

La concentración de solutos en

los líquidos corporales se conoce

como osmolalidad (mosm/kg)

En abundancia:

Na, HCO3 y Cl

En abundancia: K y

compuestos orgánicos

de fosfato.

Los solutos restringidos

a cada compartimiento

determina la osmolalidadTonicidad

La osmolalidad

plasmática normal oscila

entre 275 y 290

mosm/kg.

Para mantener un

equilibrio la ingesta de

agua y sodio debe

corresponder a su

excresiónIngesta

Sed,

disminución

del volumen

extracelular

Excreción

Hormona

antidiuretica,

embarazo.

Concentración normal

de Na= 135-145 mEq/L

Se asocia con la infusión o

retención en el espacio

extracelular de soluciones

isotónicas de glucosa,

manitol, sorbitol lo cual

ocasiona la expansión del

volumen extracelular

Con osmolalidad sérica

aumentada se debe al paso de

líquido libre del espacio

intracelular al extracelular, esto

ocurre en caso de

hiperglicemia.

Con osmolalidad sérica

disminuida o hipotónica

se divide en:

•Hipovolémica

•Normovolémica

•Hipervólemica

Sodio mayor: 145 mEq/L

Estimula la sed.

Hipovolémica

• Pérdida de

agua

mayormente

que de

sodio

Normovolémica

• Pérdida

exclusiva

de agua

Hipervolémica

• Ganancia

neta de

sodio.

1. Es el catión de mayor

concentración en el

líquido intracelular (150

mEq/L).

2. Líquido extracelular 3-5

mEq/L.

Corporal Total= 40-50 mEq/Kg

Equilibrio ácido-base

Niveles de Insulina

OsmolalidadConcentraci

ón de glucosa

Incremento en la

concentración sérica

mayor ( 5 MeQ/l)

Resulta por un aumento en la liberación de

potasio por las células hacia el espacio

extracelular o una disminución de su excresión.

Seudohipercaliemia Elevación artificial por el uso prolongado del torniquete en la punción venosa

HipercalemiaFenomenos de Redistribución

Acidosis metabolica, efecto de B

bloqueadores.

Hipercalemiaasociada a un aumento de

potasio

Secundaria a un aumento en la

ingesta o liberación de

potasio

Defectos en el eje renina-

angiotensina-aldosterona

Potasio menos

3.5 mEq/L

Incremento en la pérdida (renal o no

renal)

Distribución

a las células

(acidosis

metabólica,

respuesta a

la insulina)

Disminución

de la ingesta

1. Es el tercer ion más

abundante en el organismo.

2. 99% se encuentra en los

huesos y .03% en plasma

3. La concentración

plasmatica 8.5 y 10 mg/dl

4. 40% unido a la albumina y

60% difusible.

5. La concentración NORMAL

4.6 y 5.1 mg/dl

Efectos de la hormona paratiroideay vitamina

D3

Reabsorción renal

Ciclo de calcio

esquelético

Absorción intestinal

Generada por la entrada de calcio al líquido

extracelular proveniente de los huesos, la absorción

inestinal y la disminución de la depuracióm renal.

Asociado a enfermedades malginas: la fuente de

calcio se encuentra en los huesos secundaria a

metástasis óseas con cavidad osteolítica.

Otras causas: Intoxicación por vitamina D3,

hipertiroidismo, administración de litio.

1. Necesario medir el calcio libre

2. Más de .8mg/dl por cada 1g/dl por debajo 4g/dl en el nivel de albúmina

hipoparatiroidismo

Hipermagnesenia

Medicamentos antineoplásicos

Sindrome de lisis tumoral

Transfusión de sangre

Deficiencia de vitamina D

Insuficiencia renal

60% se encuentra en hueso

39% en el espacio intracelular

1% extracelular

Concentración sérica

NORMAL: 1.3 y 2.2 mEq/L

Insuficiencia Renal

Compuestos que incluyen

amgnesio

Hipermagnesemia

Hipomagnesemia

Mala absorción intestinal

DesnutriciónDiarreas

prolongadas

Aspiración gástrica

Diuresis osmótica

Diuréticos

Aminoglicósidos

Trastornos del alcoholismo

102 - 109 meq/L (102 - 109 mmol/L)

Se encuentra en mayor concentración en la sangre y en

el líquido extracelular.

La mayor parte del tiempo, las concentraciones de

cloruro correlacionan con las de sodio, aumentando y

disminuyendo al mismo tiempo.

Sin embargo, cuando hay un desequilbrio ácido-base, la

concentración de cloruro en la sangre puede cambiar

independientemente de la concentración de sodio ya que

el cloruro actúa como tampón; ayuda a mantener la

neutralidad eléctrica a nivel celular entrando y saliendo de

las células cuando se requiere.

Intoxicación con bromuro

Alcalosis respiratoria compensada

Acidosis tubular renal

Vómitos

Enfermedad de Addison

Succión gàstricaAlcalosis

Metabólica

Deshidratación

HiperaldosterismoSudoración excesiva

Quemaduras

BIBLIOGRAFIA

KENNETH MURPHY, P. T. (2008). Deteccion, medicion eidentificacion de anticuerpos, y su uso como instrumentos deinvestigacion. En P. T. KENNETH MURPHY, INMUNOLOGIA DEJANEWAY (págs. 751-753). mexico D.F: Mc Graw Hill.