Pruebas bio inmuno para determinacion de tsh t3 y t4

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PRUEBAS BIOQUIMICAS E INMUNOLÓGICAS EN LA EVALUACIÓN FUNCIONAL HORMONAL TIROIDEA Desarrollo metodológico y utilidad clínica de: Tirotropina humana (hTSH) Tiroxina Total (TT 4 ) y Triyodotironina total (TT 3 ) Tiroxina libre (FT 4 ) y Triyodotironina libre (FT 3 ) Tiroglobulina (Tg) Autoanticuerpos tiroideos Tiroperoxidasa (TPOAb) Tiroglobulina (TgAb) Receptor de hTSH (TRAb) REALIZADO POR: BR. OSKARINA LEON TOMADO DE: DE CATEDRA DE PATOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD DE LA HABANA, CUBA AÑO 2007, PATOLOGIA DE LA TIROIDES Y UTILIDAD CLINICA DE PRUEBAS

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PRUEBAS BIOQUIMICAS E INMUNOLÓGICAS EN LA EVALUACIÓN

FUNCIONAL HORMONAL TIROIDEA

Desarrollo metodológico y utilidad clínica de:

Tirotropina humana (hTSH) Tiroxina Total (TT4) y Triyodotironina total (TT3) Tiroxina libre (FT4) y Triyodotironina libre (FT3) Tiroglobulina (Tg) Autoanticuerpos tiroideos

• Tiroperoxidasa (TPOAb)• Tiroglobulina (TgAb)• Receptor de hTSH (TRAb)

REALIZADO POR: BR. OSKARINA LEON

TOMADO DE: DE CATEDRA DE PATOLOGIA

DE LA UNIVERSIDAD DE LA HABANA, CUBA AÑO 2007, PATOLOGIA DE LA TIROIDES Y UTILIDAD

CLINICA DE PRUEBAS

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GLANDULA TIROIDES

FORMA

ITSMO

LOBULOS LATERALES

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FISIOLOGIA TIROIDEA

EJE HIPOTALAMO HIPOFISIARIO TIROIDEO

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REGULACION HORMONAL

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COMPARACION T4-T3T4T4 T3T3

PRODUCCION DIARIA 70-90 ugPRODUCCION DIARIA 70-90 ug PRODUCCION DIARIA 15-30 ugPRODUCCION DIARIA 15-30 ug

LIBRE 0.05%LIBRE 0.05% LIBRE 0.4%LIBRE 0.4%

VM 7-8 DIASVM 7-8 DIAS VM 1-1.5 DIASVM 1-1.5 DIAS

POOL EXTRATIROIDEO 800-1000 POOL EXTRATIROIDEO 800-1000 pgrpgr

50pgr50pgr

PLASMA 4 pgr/Kg PLASMA 4 pgr/Kg

30% DE T4 EXTRATIROIDEO30% DE T4 EXTRATIROIDEO 6% DE T3 EXTRATIROIDEO6% DE T3 EXTRATIROIDEO

TEJIDOS 70%TEJIDOS 70% TEJIDOS 94%TEJIDOS 94%

MENOR AFINIDAD POR MENOR AFINIDAD POR PROTEINAS DE TRANSPORTE Y PROTEINAS DE TRANSPORTE Y MAYOR POR RECEPTORESMAYOR POR RECEPTORES

TASA METABOLIZACION DIA 10%TASA METABOLIZACION DIA 10% TASA METABOLIZACION DIA 75%TASA METABOLIZACION DIA 75%

AFINIDAD POR RECEPTOR 1AFINIDAD POR RECEPTOR 1 AFINIDAD POR RECEPTOR 10-20AFINIDAD POR RECEPTOR 10-20

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1980s: Ensayos inmunométricos (IMAs, “sandwich”, no 1980s: Ensayos inmunométricos (IMAs, “sandwich”, no competitivos)competitivos)

1984 : inmunorradiométricos (IRMAs)1984 : inmunorradiométricos (IRMAs)

inmunoenzimométricos (IEMAs)inmunoenzimométricos (IEMAs)

1989: inmunofluorimétricos (IFMAs)1989: inmunofluorimétricos (IFMAs)

inmunoluminométricos (ILMAs)inmunoluminométricos (ILMAs)• inmunoquimioluminométricos (ICMAs)inmunoquimioluminométricos (ICMAs)• inmunobioluminométrico (IBMAs)inmunobioluminométrico (IBMAs)• inmunoelectroquimioluminométricos (IECMAs)inmunoelectroquimioluminométricos (IECMAs)

ELISA ELISA

DETERMINACIÓN DE TIROTROPINA HUMANA EN SUERO

1960s:1960s: Radioinmunoensayo (RIA) 1ra Generación (SF: 1 - 2 Radioinmunoensayo (RIA) 1ra Generación (SF: 1 - 2 mUI/L)mUI/L)

DESARROLLO HISTORICO DE LOS METODOS

22da da Generación Generación SF: 0,1 – 0,2 mUI/LSF: 0,1 – 0,2 mUI/L

33rara Generación Generación (SF: 0,01- 0,02 mUI/L)(SF: 0,01- 0,02 mUI/L)

1965 1984 2000 Actualidad1965 1984 2000 Actualidad

AutomatizaciónAutomatización

RIAsRIAs IRMAs/IEMAsIRMAs/IEMAs IFMAs/ILMAs IFMAs/ILMAs ELISAELISA

IEMASIEMAS

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE hTSH UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE hTSH EN SUEROEN SUERO

Exclusión de enfermedad tiroideaExclusión de enfermedad tiroidea

Pesquisaje de disfunción tiroidea (SF Pesquisaje de disfunción tiroidea (SF ≤ 0,02 mUI/L)≤ 0,02 mUI/L)

• estados de disfunción tiroidea primariaestados de disfunción tiroidea primaria

• estados de disfunción tiroidea subclínica (prevalencia hipert estados de disfunción tiroidea subclínica (prevalencia hipert ~2 % /hipot~10 %)~2 % /hipot~10 %)

• población anciana (> 60 años)población anciana (> 60 años)• mujeres en edad fértil ( antes y durante el 1mujeres en edad fértil ( antes y durante el 1erer trimestre de la gestación) trimestre de la gestación)

Optimización de la terapia sustitutiva con Levotiroxina (L-TOptimización de la terapia sustitutiva con Levotiroxina (L-T44) hTSH: 0,5-2 mUI/L) hTSH: 0,5-2 mUI/L

Optimización de la terapia supresiva con Levotiroxina (L-T4) individualizadoOptimización de la terapia supresiva con Levotiroxina (L-T4) individualizado

Estados de hipersecreción de TSH (hTSH Estados de hipersecreción de TSH (hTSH ≈10 mUI/L / FT4/hipert. clínico)≈10 mUI/L / FT4/hipert. clínico)

Evaluación de la función tiroidea durante la gestaciónEvaluación de la función tiroidea durante la gestación

Diagnóstico de disfunción tiroidea inducida por amiodaronaDiagnóstico de disfunción tiroidea inducida por amiodarona

Confirmación del diagnóstico diferencial entre hipertiroidismo y hipertiroxinemiaConfirmación del diagnóstico diferencial entre hipertiroidismo y hipertiroxinemia

disalbuminemia familial (FDH)disalbuminemia familial (FDH)

Pacientes ambulatorios con eje hipotálamo/hipófisis/tiroides intactoPacientes ambulatorios con eje hipotálamo/hipófisis/tiroides intacto

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DETERMINACIÓN DE TIROXINA Y DETERMINACIÓN DE TIROXINA Y TRIYODOTIRONINA TOTALES EN SUEROTRIYODOTIRONINA TOTALES EN SUERO

DESARROLLO METODOLÓGICO E HISTORICO DESARROLLO METODOLÓGICO E HISTORICO

1950-1970: Yodo Unido a Proteína (PBI)1950-1970: Yodo Unido a Proteína (PBI)

1960s: Ensayos de Unión Competitiva a Proteína (CPB)1960s: Ensayos de Unión Competitiva a Proteína (CPB)

1970s: Radioinmunoensayo (RIA, ensayo competitivo)1970s: Radioinmunoensayo (RIA, ensayo competitivo)

Actualidad: Ensayos inmunométricos (IMAs, no isotópicos, Actualidad: Ensayos inmunométricos (IMAs, no isotópicos, automatizados)automatizados)

inmunoenzimométricos (IEMAs)inmunoenzimométricos (IEMAs)

inmunofluorimétricos (IFMAs)inmunofluorimétricos (IFMAs)

inmunoquimioluminométricos (ICMAs)inmunoquimioluminométricos (ICMAs)

espectrofotometría de masaespectrofotometría de masa

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UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE HORMONAS TIROIDEAS TOTALES HORMONAS TIROIDEAS TOTALES

Evaluación de la función tiroidea en situaciones clínicas donde NO se presenten Evaluación de la función tiroidea en situaciones clínicas donde NO se presenten anomalías relativas a los niveles circulantes y afinidad de las proteínas anomalías relativas a los niveles circulantes y afinidad de las proteínas transportadoras (TBG, TTR/TBPA, Albúmina) por las hormonas tiroideastransportadoras (TBG, TTR/TBPA, Albúmina) por las hormonas tiroideas

Evaluación de la función tiroidea en estados clínicos asociados con alteraciones Evaluación de la función tiroidea en estados clínicos asociados con alteraciones de los niveles circulantes las proteínas transportadoras y alteraciones moleculares de los niveles circulantes las proteínas transportadoras y alteraciones moleculares de las mismas, fundamentalmente la TBGde las mismas, fundamentalmente la TBG

Ensayos adjuntos a la determinación de un estimado del estado de las proteínas transportadoras (FT4 I/FT3I))

Evaluación de discordancia entreEvaluación de discordancia entre

las determinaciones de hTSH y FT4las determinaciones de hTSH y FT4 Evaluación de la función tiroidea enEvaluación de la función tiroidea en

pacientes severamente enfermospacientes severamente enfermos

hospitalizados en UCIhospitalizados en UCI

TT4TT4 TT3TT3 Diagnóstico del hipertiroidismo clínico, Diagnóstico del hipertiroidismo clínico, fundamentalmente la Tirotoxicosis –T3fundamentalmente la Tirotoxicosis –T3

EQUIVALENTE EXACTITUD DIAGNOSTICA TT4/TT3 VS FT4/FT3EQUIVALENTE EXACTITUD DIAGNOSTICA TT4/TT3 VS FT4/FT3

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DETERMINACIÓN DE TIROXINA Y DETERMINACIÓN DE TIROXINA Y TRIYODOTIRONINA LIBRES EN SUEROTRIYODOTIRONINA LIBRES EN SUERO

DESARROLLO METODOLÓGICODESARROLLO METODOLÓGICO

1950 – 1970: Métodos de Diálisis en Equilibrio Isotópico (DEI)1950 – 1970: Métodos de Diálisis en Equilibrio Isotópico (DEI)

1970-1975: Método directo de FT4 (DEI+ RIA FT4)1970-1975: Método directo de FT4 (DEI+ RIA FT4)

1985: Diálisis en Equilibrio/Ultrafiltración/Adsorción a resina1985: Diálisis en Equilibrio/Ultrafiltración/Adsorción a resina (dilución mínima) + T4 RIA sensible (picomoles T4)(dilución mínima) + T4 RIA sensible (picomoles T4)

MÉTODOS DIRECTOS DE REFERENCIAMÉTODOS DIRECTOS DE REFERENCIA

““ESTÁNDAR DE ORO”ESTÁNDAR DE ORO”

FUTURO: Ultrafiltración a 37FUTURO: Ultrafiltración a 37ºC + Espectrofotometría de masaºC + Espectrofotometría de masa (filtrado)(filtrado)

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DETERMINACIÓN DE TIROXINA Y DETERMINACIÓN DE TIROXINA Y TRIYODOTIRONINA LIBRES EN SUEROTRIYODOTIRONINA LIBRES EN SUERO

DESARROLLO METODOLÓGICODESARROLLO METODOLÓGICO

MÉTODOS INDIRECTOS DE ESTIMADOS DE FRACCIÓN LIBRE (FT4E y MÉTODOS INDIRECTOS DE ESTIMADOS DE FRACCIÓN LIBRE (FT4E y FT3E) FT3E)

Métodos de índice (FT4 I y FT3 I) de dos ensayos con separación Métodos de índice (FT4 I y FT3 I) de dos ensayos con separación físicafísica

Índice de FT4 por Diálisis Equilibrio Isotópico (DEI) x TT4 (PBI/RIA)Índice de FT4 por Diálisis Equilibrio Isotópico (DEI) x TT4 (PBI/RIA)

Medición de TT4 + TBG inmunoensayo) TT4/TBGMedición de TT4 + TBG inmunoensayo) TT4/TBG

Medición de TT4 o TT3 + Ensayo de Captación de T3 o T4 (THBR)Medición de TT4 o TT3 + Ensayo de Captación de T3 o T4 (THBR)

Ensayos de ligando sin separación físicaEnsayos de ligando sin separación física

RIA de dos etapasRIA de dos etapas

RIA de una etapa (análogo marcado)RIA de una etapa (análogo marcado)

Métodos inmunométricos (anticuerpo marcado, quimioluminiscencia)Métodos inmunométricos (anticuerpo marcado, quimioluminiscencia)

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UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE HORMONAS TIROIDEAS LIBRESHORMONAS TIROIDEAS LIBRES

Diagnóstico de disfunción tiroidea primaria clínica en pacientes Diagnóstico de disfunción tiroidea primaria clínica en pacientes

ambulatoriosambulatorios

Monitoreo del tratamiento en la fase aguda (< 3 meses) para elMonitoreo del tratamiento en la fase aguda (< 3 meses) para el

hipertiroidismo (ensayo óptimo) y en la fase crónica (> 3 meses,hipertiroidismo (ensayo óptimo) y en la fase crónica (> 3 meses,

ensayo adjunto)ensayo adjunto)

Exclusión de hipotiroidismo (hipotalámico o pituitario) como Exclusión de hipotiroidismo (hipotalámico o pituitario) como

ensayo óptimoensayo óptimo

Evaluación de la función tiroidea durante el embarazo y la terapiaEvaluación de la función tiroidea durante el embarazo y la terapia

estrogénicaestrogénica

MÉTODOS DE ESTIMADO DE LA FRACCIÓN LIBRE DE T4 MÉTODOS DE ESTIMADO DE LA FRACCIÓN LIBRE DE T4 (FT4E)(FT4E)

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UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE HORMONAS TIROIDEAS LIBRESHORMONAS TIROIDEAS LIBRES

MÉTODOS DE ESTIMADO DE LA FRACCIÓN LIBRE DE T3 MÉTODOS DE ESTIMADO DE LA FRACCIÓN LIBRE DE T3 (FT3E)(FT3E)

Indicador temprano de recurrencia del hipertiroidismo (BTD, ) después de Indicador temprano de recurrencia del hipertiroidismo (BTD, ) después de suspendida la terapia con drogas antitiroideassuspendida la terapia con drogas antitiroideas

TT3/TT4 puede ser usado para investigar el hipertiroidismo autoinmune/no TT3/TT4 puede ser usado para investigar el hipertiroidismo autoinmune/no autoinmune (> 0,024 molar sugiere estimulación tiroidea característica del BTD)autoinmune (> 0,024 molar sugiere estimulación tiroidea característica del BTD)

Monitoreo de la respuesta aguda al tratamiento de la tirotoxicosis por BTD Monitoreo de la respuesta aguda al tratamiento de la tirotoxicosis por BTD

Indicación de hipertiroidismo inducido por amiodarona ( o normal)Indicación de hipertiroidismo inducido por amiodarona ( o normal)

Bocio congénito (defecto en la organificación del yodo por defecto en TPO o Bocio congénito (defecto en la organificación del yodo por defecto en TPO o

defecto en la síntesis de Tiroglobulina) con defecto en la síntesis de Tiroglobulina) con [ T3][ T3]

Indicador de predicción de tirotoxicosis inducida por yodo en pacientes con Indicador de predicción de tirotoxicosis inducida por yodo en pacientes con

bocio multinodular de larga evolución ( bocio multinodular de larga evolución ( [ T3])[ T3])

FT3 + FT4 Diagnóstico de formas inusuales de hipertiroidismo FT3 + FT4 Diagnóstico de formas inusuales de hipertiroidismo y en ciertas condiciones raras:y en ciertas condiciones raras:

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UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE UTILIDAD CLÍNICA DE LAS DETERMINACIONES DE HORMONAS TIROIDEAS LIBRESHORMONAS TIROIDEAS LIBRES

MÉTODOS DE ESTIMADO DE LA FRACCIÓN LIBRE DE T3 MÉTODOS DE ESTIMADO DE LA FRACCIÓN LIBRE DE T3 (FT3E)(FT3E)

TumoresTumores pituitarios hipersecretores de TSH pituitarios hipersecretores de TSH ( ( [ T3])[ T3])

SíndromesSíndromes de resistencia a hormonas tiroideas que usualmente se presentan sin de resistencia a hormonas tiroideas que usualmente se presentan sin hipertiroidismo clínico ( hipertiroidismo clínico ( [T3])[T3])

Diagnóstico diferencial del hipertiroidismo subclínico (TSH / FT4 normal) de la Diagnóstico diferencial del hipertiroidismo subclínico (TSH / FT4 normal) de la tirotoxicosis por T3tirotoxicosis por T3

Estudios de deficiencia de yodo caracterizada por T4 /T3 Estudios de deficiencia de yodo caracterizada por T4 /T3

Establecimiento del grado de exceso de T3 durante la terapia supresiva con L-Establecimiento del grado de exceso de T3 durante la terapia supresiva con L-T4T4

Pacientes con bocio que viven en áreas con deficit de yodo deben realizarseles Pacientes con bocio que viven en áreas con deficit de yodo deben realizarseles determinaciones de FT3 en adición a la determinación de TSH para detectar la determinaciones de FT3 en adición a la determinación de TSH para detectar la tirotoxicosis por T3 causada por la autonomia tiroidea (focal o multifocal)tirotoxicosis por T3 causada por la autonomia tiroidea (focal o multifocal)

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LÍMITACIONES DE LAS DETERMINACIONES DE LÍMITACIONES DE LAS DETERMINACIONES DE HORMONAS TIROIDEAS LIBRESHORMONAS TIROIDEAS LIBRES

Alta variabilidad en la exactitud diagnóstica entre métodosAlta variabilidad en la exactitud diagnóstica entre métodos Pérdida de la exactitud diagnóstica en pacientes EUTIROIDEOS Pérdida de la exactitud diagnóstica en pacientes EUTIROIDEOS con anomalías extremas en la unión de las hormonas tiroideas a sus con anomalías extremas en la unión de las hormonas tiroideas a sus proteínas transportadoras (TBG, TTR/TBPA, albúmina)proteínas transportadoras (TBG, TTR/TBPA, albúmina)

Situaciones clínicas más frecuentesSituaciones clínicas más frecuentes Embarazo ( Embarazo ( [[TBGTBG]] [[AlbAlb])]) Niños prematuros < 28 s. (diagnóstico de hipotiroxinemia)Niños prematuros < 28 s. (diagnóstico de hipotiroxinemia) Anomalías genéticas de las proteínas de uniónAnomalías genéticas de las proteínas de unión

o TBG (exceso, 3:100 000; o defecto, 1:10 000 congénitos)TBG (exceso, 3:100 000; o defecto, 1:10 000 congénitos)o Albúmina (hipertiroxinemia-disalbuminemia-familiar, 1: 1000)Albúmina (hipertiroxinemia-disalbuminemia-familiar, 1: 1000)

Enfermedades No-tiroideas (NTI)Enfermedades No-tiroideas (NTI) Tirotoxicosis (FT3 no útil)Tirotoxicosis (FT3 no útil)

Situaciones preanalíticas y analíticasSituaciones preanalíticas y analíticas autoanticuerpos contra T4 y T3autoanticuerpos contra T4 y T3 drogas que interfieren en la unión de las hormonas tiroideas a sus drogas que interfieren en la unión de las hormonas tiroideas a sus proteínas transportadoras (fenitoina, carbamazepina, furoseamida, aspirina)proteínas transportadoras (fenitoina, carbamazepina, furoseamida, aspirina) pacientes tratados con heparinapacientes tratados con heparina

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DESARROLLO METODOLÓGICODESARROLLO METODOLÓGICO Radioinmunoensayo (RIA)Radioinmunoensayo (RIA)

Ensayos InmunorradiométricosEnsayos Inmunorradiométricoso Inmunorradiométricos (IRMA)Inmunorradiométricos (IRMA)o Inmunoenzimométricos (IEMA)Inmunoenzimométricos (IEMA)o Inmunofluorimétricos (IFMA)Inmunofluorimétricos (IFMA)o Inmunoquimioluminométricos (ICMA)Inmunoquimioluminométricos (ICMA)

Popularidad, dominio del mercado y automatizaciónPopularidad, dominio del mercado y automatización

RIAsRIAs IMAsIMAsNo isotópicosNo isotópicos

IRMAsIRMAs

RapidezRapidez Amplio rango dinámico de trabajoAmplio rango dinámico de trabajo Compuestos marcados más establesCompuestos marcados más estables

Interferencias por TgAbInterferencias por TgAbIMA > RIAIMA > RIA

TgAb TgAb - - TgAb TgAb ++

DETERMINACIÓN DE TIROGLOBULINA DETERMINACIÓN DE TIROGLOBULINA HUMANA (hTg)HUMANA (hTg)

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DETERMINACIÓN DE TIROGLOBULINA HUMANA DETERMINACIÓN DE TIROGLOBULINA HUMANA (hTg)(hTg)

PROBLEMAS ANALÍTICOS- METODOLÓGICOSPROBLEMAS ANALÍTICOS- METODOLÓGICOS Estandarización (matriz)Estandarización (matriz) SensibilidadSensibilidad PrecisiónPrecisión Efecto gancho (“Hook”)Efecto gancho (“Hook”) Interferencia TgAb (DTC 20 % vs Población 10 %, IMAs > RIAs) Interferencia TgAb (DTC 20 % vs Población 10 %, IMAs > RIAs)

MUY ALTA variabilidad MUY ALTA variabilidad entre métodos RIAs vs IMAsentre métodos RIAs vs IMAs

Reestandarización de los métodos con un IRP, CRM-457Reestandarización de los métodos con un IRP, CRM-457 Directivas internacionales para evaluar sensibilidad funcional (CV Directivas internacionales para evaluar sensibilidad funcional (CV 20%) y la imprecisión entre ensayos (<5 %) en 6 -12 meses (nueva 20%) y la imprecisión entre ensayos (<5 %) en 6 -12 meses (nueva determinación de muestras ya procesadas)determinación de muestras ya procesadas) Designación de diseños analíticos de dos etapas y ensayo de las Designación de diseños analíticos de dos etapas y ensayo de las muestras en dos condiciones (no diluida y diluida 1:10)muestras en dos condiciones (no diluida y diluida 1:10) No realización del ensayo de recobrado y si la discordancia entre No realización del ensayo de recobrado y si la discordancia entre RIA/IRMA RIA RIA/IRMA RIA ≥ 2 ug/L, IMA NO det. ≥ 2 ug/L, IMA NO det. (TgAb+: 100->1000 UI/ml)(TgAb+: 100->1000 UI/ml)

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Fig 7. Mean ± 2sd values for measuring 20 TgAb-negative normal sera by 10 different Tg methods. Method #1= Diagnostic Systems Laboratories, Webster, TX, USA; Method #2=University of Southern California RIA, Los Angeles, CA, USA; RIA #3= Kronus RIA, Boise ID, USA; Method #4= Endocrine Sciences RIA, Calabasas, CA, USA; Method #5=Nichols Institute Diagnostics ICMA, San Juan Capistrano, CA, USA; Method #6= Endocrine Sciences ICMA, Calabasas, CA, USA; Method #7=Sanofi Pasteur IRMA, Marnes-La-Coquette, France; Method #8=Kronus OptiQuant IRMA, Boise ID, USA; Method #9=Brahms DynoTest TgS IRMA, Berlin, Germany; Method #10=Diagnostic Products Immulite ICMA, Los Angeles, CA, USA. An asterisk denotes assays claiming CRM-457 standardization.

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE TgUTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE Tg

Masa de tejido tiroideo diferenciado presente Masa de tejido tiroideo diferenciado presente Inflamación o daño de la glándula tiroidea que causan liberación Inflamación o daño de la glándula tiroidea que causan liberación de Tgde Tg Grado de estimulación de la glándula por vía del TSH-RGrado de estimulación de la glándula por vía del TSH-R

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE TgUTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE Tg

CÁNCER DIFERENCIADO DE TIROIDES (DTC)CÁNCER DIFERENCIADO DE TIROIDES (DTC)

1g tejido tiroideo 1g tejido tiroideo normalnormal

RELACIÓN: masa tiroidea – Tg sérica – estado de TSH - pacienteRELACIÓN: masa tiroidea – Tg sérica – estado de TSH - paciente

≈≈ 11µg/Lµg/LTgTg

hTSH normalhTSH normal0,4 – 4 mUI/L0,4 – 4 mUI/L

Determinación de Tg en la fase preoperatorioDeterminación de Tg en la fase preoperatorio Determinación de Tg 1- 2 meses después de cirugíaDeterminación de Tg 1- 2 meses después de cirugía Determinación de Tg durante el monitoreo con L-T4/RxDeterminación de Tg durante el monitoreo con L-T4/Rx Determinación de Tg bajo la estimulación con hTSHDeterminación de Tg bajo la estimulación con hTSH

≤ ≤ 0,5µg/L0,5µg/LTgTg

hTSH < 0,1 hTSH < 0,1 mUI/L mUI/L suprimidasuprimida1g tejido tiroideo 1g tejido tiroideo

normalnormal

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE TgUTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE Tg

Pacientes con TgAb negativo (TgAb método sensible, inmunoensayos)Pacientes con TgAb negativo (TgAb método sensible, inmunoensayos) Un valor de Tg sérica en fase preoperatoria (tomado antes o > 15 d Un valor de Tg sérica en fase preoperatoria (tomado antes o > 15 d después de FNA) es útil para determinar la capacidad secretora de después de FNA) es útil para determinar la capacidad secretora de Tg del tumor Utilidad de la Tg como marcador tumoral post-Tg del tumor Utilidad de la Tg como marcador tumoral post-operatorio (especialmente tumores operatorio (especialmente tumores ≤ 2 cm con Tg preoperatorio ) ≤ 2 cm con Tg preoperatorio ) Fase post-operatoria (1-2 meses) la Tg refleja la efectividad de la Fase post-operatoria (1-2 meses) la Tg refleja la efectividad de la cirugía y de la supresión de TSH por tratamiento inmediato con cirugía y de la supresión de TSH por tratamiento inmediato con dosis supresivas de L-T4. Teniendo en cuenta que dosis supresivas de L-T4. Teniendo en cuenta que ~ 2gr de tejido ~ 2gr de tejido remanante (Tg < 2 µg/L, tiroidectomías totales y 10 remanante (Tg < 2 µg/L, tiroidectomías totales y 10 µg/L, µg/L, lobectomías; TSH lobectomías; TSH ≤ 0,1 mUI/L)≤ 0,1 mUI/L) NO hay un “intervalo de referencia”para pacientes con tiroidecto –NO hay un “intervalo de referencia”para pacientes con tiroidecto –mía total, los cuales no deben tener Tg detectable, aún si la TSH mía total, los cuales no deben tener Tg detectable, aún si la TSH Cuando Tg es Cuando Tg es detectabledetectable durante la terapia con L-T4 durante la terapia con L-T4 (TSH<0,1mUI/L), cambios en la masa tumoral deben ser evaluados (TSH<0,1mUI/L), cambios en la masa tumoral deben ser evaluados por por determinaciones seriadasdeterminaciones seriadas, sin suspender el tratamiento y sin , sin suspender el tratamiento y sin aplicar estimulación con hTSH recombinanteaplicar estimulación con hTSH recombinante

Page 24: Pruebas bio inmuno para determinacion de tsh t3 y t4

UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE TgUTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE TgPacientes con TgAb negativo (método sensible, inmunoensayos)Pacientes con TgAb negativo (método sensible, inmunoensayos) Cuando Tg es Cuando Tg es NONO detectabledetectable durante el tratamiento con L-T4 y durante el tratamiento con L-T4 y TgAb ausente (inmunoensayos sensibles), la determinación de Tg TgAb ausente (inmunoensayos sensibles), la determinación de Tg después de una estimulación con hTSH (preferiblemente por después de una estimulación con hTSH (preferiblemente por inyección intramuscular de hTSH recombinante) es inyección intramuscular de hTSH recombinante) es más sensiblemás sensible que que la determinación de Tg bajo supresión de TSH para detectar la determinación de Tg bajo supresión de TSH para detectar recurrencia o metástasis local (región cervical) del cáncerrecurrencia o metástasis local (región cervical) del cáncer Respuesta secretora de Tg a la estimulación con TSHr exógena Respuesta secretora de Tg a la estimulación con TSHr exógena (tejido normal o tumor bien diferenciado Tg est. >3 veces la Tg b, (tejido normal o tumor bien diferenciado Tg est. >3 veces la Tg b, pobre o no diferenciado Tg est. < 3 veces Tg basal (TSH <0,1mUI/L)pobre o no diferenciado Tg est. < 3 veces Tg basal (TSH <0,1mUI/L)

Pacientes con TgAb positivo (TgAb método sensible, inmunoensayos)Pacientes con TgAb positivo (TgAb método sensible, inmunoensayos) Típicamente muestran una respuesta moderada o no respuesta de Típicamente muestran una respuesta moderada o no respuesta de Tg sérica a la estimulación de TSHTg sérica a la estimulación de TSH Mediciones seriadasMediciones seriadas de TgAb (inmunoensayos sensibles) son de de TgAb (inmunoensayos sensibles) son de inestimable valor como un marcador tumoral indirecto de la inestimable valor como un marcador tumoral indirecto de la presencia y progreso del tejido tiroideo tumoralpresencia y progreso del tejido tiroideo tumoral

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VALORES ESPERADOS DE TG RELATIVOS A LA MASA VALORES ESPERADOS DE TG RELATIVOS A LA MASA DE TEJIDO TIROIDEO Y AL ESTADO DE HTSH SÉRICADE TEJIDO TIROIDEO Y AL ESTADO DE HTSH SÉRICA

Page 26: Pruebas bio inmuno para determinacion de tsh t3 y t4

DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)

AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROPEROXIDASA (TPOAb)AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROPEROXIDASA (TPOAb)

DESARROLLO METODOLÓGICODESARROLLO METODOLÓGICO

A.A. MÉTODOS CUALITATIVOSMÉTODOS CUALITATIVOS (Antígeno microsomal) (Antígeno microsomal) Fijación de complemento Fijación de complemento Hemaglutinación pasiva (Eritrocitos de carnero)Hemaglutinación pasiva (Eritrocitos de carnero) InmunofluorescenciaInmunofluorescencia

B.B. MÉTODOS CUANTITATIVOS (Autoantígeno TPO)MÉTODOS CUANTITATIVOS (Autoantígeno TPO) Radioinmunoensayo (RIA)Radioinmunoensayo (RIA) Ensayos inmunométricos (IMAs)Ensayos inmunométricos (IMAs)

o IRMAIRMAo EIMA EIMA o IFMA AutomatizaciónIFMA Automatizacióno ICMAICMA

TPO TPO nativanativa

TPOrTPOr

EEFFIICCIIEENNCCIIAA

MRC MRC 66/38766/387

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AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROPEROXIDASA (TPOAb)AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROPEROXIDASA (TPOAb)

LÍMITACIONES METODOLÓGICASLÍMITACIONES METODOLÓGICAS

alta variabilidad entre métodosalta variabilidad entre métodos(sensibilidad y especificidad)(sensibilidad y especificidad)

límites de detección de los ensayos límites de detección de los ensayos (<0,3 a > 20 UI/ml)(<0,3 a > 20 UI/ml)

o < 10 UI/ml Reportan valores no detectables en sujetos< 10 UI/ml Reportan valores no detectables en sujetos normales (TPOAb normales (TPOAb ++ patológico) patológico)

o > 10 UI/ml Reportan un rango normal (los niveles son > 10 UI/ml Reportan un rango normal (los niveles son normales o son problemas de inespecificidad)normales o son problemas de inespecificidad)

o principios metodológicosprincipios metodológicoso TPO (pureza e isoformas)TPO (pureza e isoformas)

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS CONTRA TPO (TPOAb)AUTOANTICUERPOS CONTRA TPO (TPOAb)

Diagnóstico de Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD, > 95 Diagnóstico de Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD, > 95 % Tiroiditis de Hashimoto, 70-85 % BTD): ensayo óptimo% Tiroiditis de Hashimoto, 70-85 % BTD): ensayo óptimo Factor de riesgo para Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD)Factor de riesgo para Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD) Factor de riesgo para hipotiroidismo durante la terapia con Factor de riesgo para hipotiroidismo durante la terapia con interferón alfa, interleucina 2 o litiointerferón alfa, interleucina 2 o litio Factor de riesgo para disfunción tiroidea durante la terapia con Factor de riesgo para disfunción tiroidea durante la terapia con amiodaronaamiodarona Factor de riesgo de hipotiroidismo autoinmune en población > 60 Factor de riesgo de hipotiroidismo autoinmune en población > 60 años (pesquisaje TSH+ TPOAb) años (pesquisaje TSH+ TPOAb) Factor de riesgo para hipotiroidismo en pacientes con Sindrome Factor de riesgo para hipotiroidismo en pacientes con Sindrome de Down (pesquisaje anual con TSH+TPOAb)de Down (pesquisaje anual con TSH+TPOAb) Factor de riesgo de disfunción tiroidea durante el embarazo Factor de riesgo de disfunción tiroidea durante el embarazo ( pesquisaje con TSH+TPOAb, 1( pesquisaje con TSH+TPOAb, 1erer trimestre) y predictor de la trimestre) y predictor de la tiroiditis posparto (1tiroiditis posparto (1erer-2-2dodo trimestre) trimestre) Factor de riesgo de abortos y promotor de fallos en la concepción Factor de riesgo de abortos y promotor de fallos en la concepción empleando técnicas de reproducción asistida (FIV) empleando técnicas de reproducción asistida (FIV)

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TPOAb como un factor de riesgo para Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD)

Page 30: Pruebas bio inmuno para determinacion de tsh t3 y t4

DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)

AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROGLOBULINA (TgAb)AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROGLOBULINA (TgAb)

DESARROLLO METODOLÓGICODESARROLLO METODOLÓGICO

A.A. MÉTODOS CUALITATIVOSMÉTODOS CUALITATIVOS Hemaglutinación pasiva (Eritrocitos de carnero)Hemaglutinación pasiva (Eritrocitos de carnero) InmunofluorescenciaInmunofluorescencia

B.B. MÉTODOS CUANTITATIVOS MÉTODOS CUANTITATIVOS Radioinmunoensayo (RIA)Radioinmunoensayo (RIA) Ensayos inmunométricos (IMAs)Ensayos inmunométricos (IMAs)

o IRMAIRMAo EIMA EIMA o IFMA AutomatizaciónIFMA Automatizacióno ICMAICMA

Page 31: Pruebas bio inmuno para determinacion de tsh t3 y t4

LÍMITACIONES METODOLÓGICASLÍMITACIONES METODOLÓGICAS Alta variabilidad entre métodos (sensibilidad y Alta variabilidad entre métodos (sensibilidad y especificidad) especificidad)

AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROGLOBULINA (TgAb)AUTOANTICUERPOS CONTRA TIROGLOBULINA (TgAb)

o Principios metodológicos Principios metodológicos o Estandarización Estandarización o Heterogeneidad de los TgAbHeterogeneidad de los TgAbo Interferencia por Tg circulanteInterferencia por Tg circulante

Variables límites de detección de los ensayos (<0,3 a > 20UI/ml)Variables límites de detección de los ensayos (<0,3 a > 20UI/ml)

o < 10 UI/ml < 10 UI/ml Sujetos normales < límite de detección del ensayoSujetos normales < límite de detección del ensayoo > 10 UI/ml Información de un intervalo de referencia> 10 UI/ml Información de un intervalo de referencia

¿¿Importancia clínica de los niveles bajos de TgAb?Importancia clínica de los niveles bajos de TgAb?

AnticuerposAnticuerpos““Naturales”Naturales”

Respuesta de anticuerpos por un Respuesta de anticuerpos por un incremento de la liberación del incremento de la liberación del antígeno (Tg) producto de un daño a antígeno (Tg) producto de un daño a la glándulala glándula

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS CONTRA Tg(TgAb)AUTOANTICUERPOS CONTRA Tg(TgAb)

Detección Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD) en pacientes Detección Enfermedad Tiroidea Autoinmune (AITD) en pacientes con bocio nodular que habitan en áreas con déficit de yodo. con bocio nodular que habitan en áreas con déficit de yodo.

Monitoreo de la terapia con yodo para el bocio endémicoMonitoreo de la terapia con yodo para el bocio endémico

CONDICIONES CLÍNICAS NO-NEOPLÁSICASCONDICIONES CLÍNICAS NO-NEOPLÁSICAS

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS CONTRA Tg(TgAb)DE AUTOANTICUERPOS CONTRA Tg(TgAb)

CÁNCER DIFERENCIADO DEL TIROIDES (células foliculares)CÁNCER DIFERENCIADO DEL TIROIDES (células foliculares)

TgAb debe ser realizado en cada muestra enviada al laboratorioTgAb debe ser realizado en cada muestra enviada al laboratorio

para la determinación de Tgpara la determinación de Tg

Determinaciones seriadas de TgAb es un indicador de la eficacia Determinaciones seriadas de TgAb es un indicador de la eficacia del tratamiento . Tienen valor pronóstico en el seguimiento y del tratamiento . Tienen valor pronóstico en el seguimiento y evaluación de la respuesta al tratamiento (recurrencia o no) en todos evaluación de la respuesta al tratamiento (recurrencia o no) en todos

los pacientes con carcinoma diferenciado del tiroides TgAb los pacientes con carcinoma diferenciado del tiroides TgAb ++

TgAb COMO ENSAYO ADJUNTO A LA DETERMINACIÓN DE TgAb COMO ENSAYO ADJUNTO A LA DETERMINACIÓN DE TgTg

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AUTOANTICUERPOS CONTRA El RECEPTOR DE hTSH AUTOANTICUERPOS CONTRA El RECEPTOR DE hTSH (TRAb)(TRAb)

DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)

DESARROLLO METODOLÓGICO DE TBIIDESARROLLO METODOLÓGICO DE TBII

Primera generación de ensayosPrimera generación de ensayos Ensayo de radioreceptor (RRA)Ensayo de radioreceptor (RRA)

Segunda generación de ensayosSegunda generación de ensayos

ELISA ELISA Ensayo de tubo recubiertoEnsayo de tubo recubierto Ensayo TBII no isotópicoEnsayo TBII no isotópico (quimioluminiscencia)(quimioluminiscencia) AUTOMATIZACIÓNAUTOMATIZACIÓN

S S EENNSSIIBBIILLIIDDAADD

98,8 %98,8 %

80 %80 %TSH-R porcinoTSH-R porcino

TSH-R humano TSH-R humano recombinanterecombinante

TSH-R adiposito de curielTSH-R adiposito de curiel

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DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)TIROIDEOS (TPO Ab, TgAb, TRAb)

AUTOANTICUERPOS CONTRA El RECEPTOR DE hTSH AUTOANTICUERPOS CONTRA El RECEPTOR DE hTSH (TRAb)(TRAb) DESARROLLO METODOLÓGICO DE TSAb/TSBAbDESARROLLO METODOLÓGICO DE TSAb/TSBAb

Bioensayos “in vitro” de 1Bioensayos “in vitro” de 1rara Generación Generación Cortes de tejido tiroideoCortes de tejido tiroideo Células tiroideas (cultivo primario monocapa, / AMPc)Células tiroideas (cultivo primario monocapa, / AMPc) Línea celular FRTL-5 (cultivo monocapa, / AMPc)Línea celular FRTL-5 (cultivo monocapa, / AMPc)

1989-19901989-1990 Clonamiento del TSH-R Clonamiento del TSH-R humano (células CHO)humano (células CHO)

hTSH-R rhTSH-R r

Bioensayos “in vitro” de 2Bioensayos “in vitro” de 2dada Generación Generación Células CHO expresando hTSH-Rr (monocapa, / AMPc)Células CHO expresando hTSH-Rr (monocapa, / AMPc) Células CHO doble transfección (hTSH-R/Luciferaza-Células CHO doble transfección (hTSH-R/Luciferaza-CRE, / luminiscencia) CRE, / luminiscencia)

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UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS CONTRA EL DE AUTOANTICUERPOS CONTRA EL

RECEPTOR DE hTSH (TRAb)RECEPTOR DE hTSH (TRAb)

Diagnóstico diferencial de hipertiroidismo de causa autoinmune o Diagnóstico diferencial de hipertiroidismo de causa autoinmune o no (tirotoxicosis facticia , tiroiditis sudaguda, tiroiditis posparto y no (tirotoxicosis facticia , tiroiditis sudaguda, tiroiditis posparto y bocio nodular tóxico}bocio nodular tóxico}

Factor predictivo de remisión clínica del BTD después de Factor predictivo de remisión clínica del BTD después de suspendida la terapia con ATSsuspendida la terapia con ATS

Predicción de riesgo de oftalmopatía (TAO) postratamiento con Predicción de riesgo de oftalmopatía (TAO) postratamiento con yodo radioactivo en pacientes con hipertiroidismo de causa yodo radioactivo en pacientes con hipertiroidismo de causa autoinmuneautoinmune

Page 37: Pruebas bio inmuno para determinacion de tsh t3 y t4

Predicción de disfunción tiroidea fetal y neonatal en niños de Predicción de disfunción tiroidea fetal y neonatal en niños de mujeres embarazadas con una historia anterior o presente de AITDmujeres embarazadas con una historia anterior o presente de AITD

UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN UTILIDAD CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS CONTRA EL DE AUTOANTICUERPOS CONTRA EL

RECEPTOR DE hTSH (TRAb)RECEPTOR DE hTSH (TRAb)

o TRAb en embarazadas eutiroideas por previo tratamiento con TRAb en embarazadas eutiroideas por previo tratamiento con ATS durante el 3ATS durante el 3erer trimestre sugiere ser riesgo de disfunción trimestre sugiere ser riesgo de disfunción tiroidea en el recién nacido (TSAb: hipertiroidismo neonatal, tiroidea en el recién nacido (TSAb: hipertiroidismo neonatal, TSBAb: hipotiroidismo neonatalTSBAb: hipotiroidismo neonatal

o TRAb/TSAb en mujeres embarazadas eutiroideas (L-T4) TRAb/TSAb en mujeres embarazadas eutiroideas (L-T4) quienes recibieron tratamiento con yodo radioactivo es indicativo quienes recibieron tratamiento con yodo radioactivo es indicativo de hipertiroidismo fetal (1de hipertiroidismo fetal (1er er trimestre) o neonatal (3trimestre) o neonatal (3er er trimestre)trimestre)

o Mujeres embarazadas en tratamiento con ATS para el BTD Mujeres embarazadas en tratamiento con ATS para el BTD deben ser analizadas por TRAb/TSAb/TSBAb en el 3deben ser analizadas por TRAb/TSAb/TSBAb en el 3erer trimestre trimestre del embarazo. TRAb/TSAb/TSBAb indica evaluación clínica y del embarazo. TRAb/TSAb/TSBAb indica evaluación clínica y bioquímica en el neonato al nacimiento (sangre del cordón bioquímica en el neonato al nacimiento (sangre del cordón umbilical y entre 4-7 días (sangre del talón del pie)umbilical y entre 4-7 días (sangre del talón del pie)